Os scaffolds produzidos por electrospinning (ES) são ferramentas bastante atrativas para a engenharia de tecidos (ET). Mimetizando fisicamente a matriz extracelular natural, esses scaffolds atuam como suportes para o desenvolvimento celular. Contudo, uma ocupação celular uniforme nesses scaffolds permanece sendo um problema a ser resolvido. Neste trabalho, células-tronco foram integradas a scaffolds de PLGA ainda durante a sua produção com o objetivo de se obter uma melhor distribuição celular por toda a estrutura do biomaterial. Para a obtenção desses scaffolds contendo células-tronco (SCCT), as técnicas de ES e bio-electrospraying (BES) foram associadas. Os SCCT foram caracterizados quanto a suas propriedades físico-químicas e biológicas. As fibras produzidas apresentaram-se lisas, bem distribuídas e com características mecânicas e de degradação adequadas a diferentes aplicações na ET. As células integradas aos SCCT mantiveram-se viáveis e foram capazes de se proliferar dentro dessa estrutura ao longo do período de cultivo. Cortes histológicos dos SCCT demonstraram que as células estavam bem distribuídas em toda a arquitetura do biomaterial. Esses resultados sugerem que a associação do ES e BES é uma técnica interessante para a produção de scaffolds tridimensionais integrados a células, tornando-se uma alternativa viável para uso na engenharia de tecidos. / Scaffolds produced by electrospinning (ES) are very attractive tools for tissue engineering (TE). These scaffolds act by mimicking physically the native extracellular matrix as carriers for cell growth. However, a uniform cell occupation of scaffolds remains a problem to be solved. In this study, stem cells were integrated into the PLGA scaffolds during their production in order to obtain better cell distribution throughout the biomaterial structure. The ES and bio-electrospraying (BES) techniques were associated to obtain these scaffolds containing stem cells (SCCT). The SCCT were characterized by their physicochemical and biological properties. Smooth and well distributed fibers, with suitable mechanical and degradation characteristics were obtained which allows different applications in TE. The cells incorporated onto SCCT remained viable and are capable of proliferating in this structure during cell culture. The cells were well distributed throughout the biomaterial architecture as observed in histological sections of SCCT. These results suggest that association between ES and BES is an interesting technique to produce 3D cell integrated scaffolds, making it a viable alternative for tissue engineering.

As células-tronco mesenquimais (MSC) foram originalmente isoladas da medula óssea, mas populações semelhantes foram isoladas do tecido adiposo e outros tecidos. A diferenciação das células-tronco derivadas do tecido adiposo (do inglês adipose derived stem cells; ADAS) para células neurais foram realizadas por vários grupos. Um aspecto muito importante relacionado com as células-tronco é a manutenção da integridade genômica durante o processo de diferenciação. Acredita-se que a manutenção da estabilidade genética por meio dos mecanismos de reparação do DNA devem ser particularmente rigorosos em células-tronco adultas, onde qualquer alteração genética pode comprometer a estabilidade genética e a funcionalidade destas células. O objetivo deste estudo foi observar a viabilidade e a integridade genética das células ADAS tratadas com o meio de indução neural, por meio do teste cometa, teste de micronúcleo e teste de viabilidade celular. Além disso, foi analisada a expressão de algumas proteínas relacionadas com a sinalização de danos no DNA, remodelagem de cromatina e proliferação. Os resultados obtidos no presente estudo claramente indicaram que o meio de indução neural pode ser genotóxico para as ADAS. O teste cometa revelou que a indução neural aumenta o índice e a freqüência de danos no DNA. A indução de micronúcleos não foi observada nas mesmas condições, indicando que o meio de indução neural não causa danos clastogênicos. Ao considerar a expressão de MCM3, TIP60, telomerase e a variação na expressão de marcadores neurais, o método de indução neural usada in vitro pode encaminhar a célula a uma transformação tumoral. Estes resultados alertam para a importância dos estudos relacionados com aos protocolos atualmente usados na diferenciação in vitro de células-tronco para fins terapêuticos. / Mesenchymal stem cells (MSC) were originally isolated from the bone marrow, although similar populations have been isolated from adipose and other tissues. The differentiation of ADAS (adipose derived stem cells) to neuronal cells has been accomplished by several groups. One important aspect related to stem cells is the maintenance of genomic integrity during the differentiation process. In this sense, the maintenance of genomic stability by DNA repair mechanisms in adult stem cells should be particularly stringent, where any genetic alteration can compromise the genomic stability and functionality of cell. Thus, the aim of this study was to observe the viability and integrity of ADAS cells treated with neural induction medium by using the comet, micronucleus, and cell viability assays. Moreover, the expression of some proteins and genes related to DNA damage signalling, chromatin remodeling, and cell proliferation was analyzed. The data obtained from the present study clearly indicate that the neuronal medium can be genotoxic to ADAS cells. Our results reveal that neuronal induction increases the damage frequency and damage index observed by comet assay. The induction of micronuclei was not observed for the same assay conditions, indicating that the neuronal induction medium does not cause chromosome loss and breakage. Considering the expression of MCM3, TIP60, telomerase and neuronal marker, it can be speculated that the neural induction conditions used in this work can drives ADAS cells to tumor transformation. These results call for the necessity of new studies related to in vitro stem cell differentiation protocols for therapeutical purposes.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-09-15T12:07:07Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL - Laila Santos.pdf: 1181121 bytes, checksum: e32024523f6adf49c8e62c9f4931db47 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-09-19T17:47:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL - Laila Santos.pdf: 1181121 bytes, checksum: e32024523f6adf49c8e62c9f4931db47 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T17:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL - Laila Santos.pdf: 1181121 bytes, checksum: e32024523f6adf49c8e62c9f4931db47 (MD5) / Fabesb / O Laser é fotobiomodulador celular consagrado que vem despertando o interesse da sua utilização na proliferação e diferenciação de células-tronco. Verificou-se a influência da fototerapia Laser (λ660nm, 40mW, 6J/cm²,  0,04cm2, CW, Twin Flex Evolution, MMoptics®, São Carlos, SP) na imunomarcação com o marcador de células-tronco CD49 no tecido adiposo de ratos submetidos a dieta hiperlípidica. Quarenta e oito ratos Wistar albinus, desmamados foram divididos em dois grupos experimentais: Dieta Padrão (DP) e Dieta Hiperlipídica (DH), alimentados com suas respectivas rações por 20 semanas. Em seguida, os ratos foram submetidos à anestesia geral para confecção de feridas cutâneas dorsais, excisionais, padronizadas em 1cm². Os grupos foram subdivididos em DPC e DHC sem tratamento adicional e DPL e DHL irradiados pelo protocolo supracitado, imediatamente após o ato cirúrgico e a cada 48 horas durante 7 ou 14 dias. Os ratos foram mortos por aprofundamento anestésico, os espécimes processados pela técnica de imunohistoquímica e avaliados por microscopia de luz. O grupo DPC apresentou anticorpos marcados com intensidade de moderada a intensa, enquanto no grupo DHC prevaleceu a coloração fraca para o tempo de 14 dias. O protocolo de irradiação empregado não teve influência sobre o marcador CD49 quando comparados os grupos controle e irradiados sob o mesmo período de tempo; no entanto, quando comparados os grupos DHL em 7 e 14 dias, o marcador apresentou aumento na intensidade da imunomarcação em relação ao tempo, suscitando a hipótese da influência da luz laser sobre células-tronco adipoderivadas recrutadas para o processo de reparo tecidual.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Jurídicas. Programa de Pós-Graduação em Direito / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:06:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Esta dissertação é dedicada ao estudo das técnicas de manipulação de embriões humanos, seus aspectos éticos e sua relação com o Direito, tendo em vista o valor primordial da dignidade da pessoa humana. O objetivo deste trabalho é demonstrar que a manipulação de embriões somente é aceitável quando realizada dentro dos limites estritos do respeito ao ser humano, mesmo que o ser humano em questão esteja ainda na fase embrionária do seu desenvolvimento. O trabalho analisa o desenvolvimento do embrião humano desde o momento da fecundação e tece considerações sobre sua vida e o seu pertencimento à espécie. Analisa as diversas destinações possíveis para um embrião concebido in vitro, desde a implantação no ventre materno até a utilização como insumo em pesquisas de células-tronco e clonagem. Questiona a possibilidade ética de tais pesquisas, após discorrer sobre a individualidade e sobre o eventual reconhecimento do embrião como pessoa. Avalia a possibilidade de utilização das técnicas citadas, face ao valor primordial da dignidade humana. Apresenta instrumentos internacionais de direitos humanos relevantes para o tema e descreve a forma pela qual o ordenamento de determinados países aborda os procedimentos técnicos apresentados. Avalia o ordenamento jurídico brasileiro, sob a ótica da dignidade humana. Verifica que, apesar de insuficiente, a legislação brasileira não é indiferente aos temas aqui tratados, embora nem sempre adote a opção considerada mais adequada à proteção do ser humano. Por fim, tece considerações sobre uma regulamentação possível e concorde com o valor fundamental da dignidade humana. Quanto à metodologia, a abordagem se deu conforme o método indutivo, no procedimento utilizou-se o método monográfico e, quanto às técnicas, adotou-se a pesquisa bibliográfica e documental, em fontes primárias e secundárias.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:06:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295105.pdf: 2193083 bytes, checksum: 9a0cebe808795e41f914d26e96e95c19 (MD5) / Células tronco são células com capacidade de auto renovação, e de diferenciação em diversos tipos celulares. Nos últimos anos, muitos estudos têm se dedicado à identificação de células tronco em tecidos adultos como modo de desenvolver estratégias para regeneração e reparo tecidual. A crista neural é uma estrutura embrionária de vertebrados, originada na parte dorsal do tubo neural em fechamento, durante o processo de neurulação. Estas células possuem uma característica migratória, que é iniciada com o fechamento do tubo neural, e são distribuídas pelo embrião contribuindo para o desenvolvimento de vários tecidos. O folículo piloso é uma estrutura exclusiva de mamíferos, e é considerado um anexo do tecido epitelial. Esta estrutura possui uma composição complexa, que inclui glândula sebácea, a saliência do bulge, eixo do cabelo (que se projeta externamente da epiderme), e a papila dermal. Assim como outros tecidos adultos o folículo piloso dispõe de células tronco residentes, presentes no bulge, que é um discreto microambiente, também conhecido como saliência do folículo piloso. As células tronco epidermais encontradas no bulge são identificadas principalmente pela expressão das citoqueratinas 15 e 19 (KRT 15 e 19). Em contrapartida, também são encontradas no bulge, células que apresentam as citoqueratinas 5 e 14 (KRT15 e 14), que caracterizam células no estágio final de diferenciação da linhagem epidermal. Com isso, nosso trabalho focou em analisar o folículo piloso de vibrissas de camundongos como potencial nicho de células tronco com características epidermais e de crista neural, avaliando diferentes condições de cultivo. Utilizamos camundongos com idade entre 8 e 10 semanas, dos quais eram isoladas as vibrissas, o folículo piloso dissecado, e o bulge cultivado como explante. As culturas de explante do bulge eram realizadas em placas de 24 poços sobre colágeno tipo I. Após 7 ou 14 dias estas eram fixadas para realização de imunoflorescência indireta ou extração de mRNA e realização do RT-PCR. Os marcadores celulares testados foram KRT14, P75, Nestina e TRP2. . Avaliamos a ação dos meios simples, simples com EE e complexo, além de verificar os efeitos da adição do morfógeno sonic headhog (SHH, 10nM e 100nm) ao meio complexo e também medimos o halo de migração/crescimento em volta do explante. Observamos que as células iniciam sua migração do explante para a placa de cultura por volta do 4o dia de cultivo e representam uma população heterogênea com grandes variações nas mesmas condições testadas. Estas células apresentam características epidermais (TRP2 e KRT14, marcadores de melanócitos e queratinócitos, respectivamente) e também de crista neural (Nestina e P75). A expressão dos marcadores de crista neural foi mais expressiva nas culturas de 14 dias. O meio complexo também se mostrou mais eficiente que os demais, em relação a migração das células KRT14 do folículo piloso para a placa de cultura e diferenciação para queratinócitos. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o folículo piloso corresponde a um nicho com populações de células progenitoras com características epidermais e de crista neural e com importante potencial terapêutico e biotecnológico. / Stem cells are cells with self-renewal ability and differentiation into various cellular types. In recent years, many studies have been dedicated to the identification of stem cells in adult tissues as a way to develop strategies for regeneration and tissue repair. The neural crest is an embryonic structure of vertebrates, originated at the dorsal neural tube closure, during the process of neurulation. These cells have a migratory feature, which starts with the closure of the neural tube, and are distributed by embryo contributing to the development of various tissues. The hair follicle is a unique structure to mammals, and is considered an attachment of epidermal tissue. This structure has a complex composition, which includes sebaceous gland, the bulge salience, the hair shaft (that falls outside of the epidermis), and the dermal papilla. As well as other adult tissues has the follicle stem cells residents in the bulge, which is a discreet microenviroment, also known as salience of the follicle. The epidermal stem cells found in the bulge are identified mainly by the expression of cytoqueratins 15 and 19 (KRT 15 and 19). In contrast, are also found in the bulge, cells that have the cytokeratins 5 and 14 (KRT15 and 14), that characterize cells in the final stage of epidermal lineage. With this, our work focused on analyzing the follicle pits of mice as potential stem cell niche with epidermal features and neural crest, evaluating different cultivation conditions. We use mice aged between 8 and 10 weeks of which were isolated from the whiskers, the follicle dissected, and the bulge cultivated as explants. Explants cultures of the bulge were realized in 24 wells plate dishes, on type I collagen. After 7 or 14 days these cultures were fixed for achievement of indirect immunofluorescence or mRNA extraction and realization of RT-PCR. This cells markers was tested were KRT14, P75, Nestin and TRP2. . Evaluate the action simple medium, simple medium with EE and complex medium, and check the effects of addition of morfogen sonic headhog (SHH, 10nM to 100nm) in the complex medium and also measure the migration/border around the explants growth. We note that the cells start their migration from explants culture card around the day 4 of cultivation and represent a heterogeneous population with large variations in the same conditions tested. These cells presents epidermal characteristics (TRP2 and KRT14, markers of melanocytes and keratinocytes, respectively) and also of neural crest (Nestina and P75). The expression of neural crest markers was more expressive with 14 days. The complex also proved more efficient than the other, in relation to the cells migration KRT14 follicle to the culture and differentiation to keratinocytes. Together, our results show that the follicle is a niche with populations of progenitor cells with epidermal characteristics and neural crest and important potential therapeutic biotechnology.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T12:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 266109.pdf: 1004980 bytes, checksum: 9b51fee0c166e06e13dcfd825cba87ea (MD5)

LUNA, A. M. P. T. Avaliação da mucosite oral pacientes submetidos a transplante de células tronco hematopoiéticas e sua associação com parâmetros hematológicos e microbiológicos. 2016. 84 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T11:47:08Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_amptluna.pdf: 1914874 bytes, checksum: 9fe6f09d1c97a8d8961dfcc9b9eeae14 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T11:47:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_amptluna.pdf: 1914874 bytes, checksum: 9fe6f09d1c97a8d8961dfcc9b9eeae14 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T11:47:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_amptluna.pdf: 1914874 bytes, checksum: 9fe6f09d1c97a8d8961dfcc9b9eeae14 (MD5) Previous issue date: 2016-07-26 / HSCT is the intravenous infusion of hematopoietic stem cells with the purpose to recover or renew the production of blood cells and the immune function in patients with malignant hematological disorders. Oral mucositis is one of the most frequent side effects of anticancer therapy. This work aimed to evaluate the hematological and microbiological parameters, therapeutic regimen and incidence of oral mucositis (OM) in patients submitted to HSCT. The study is longitudinal, conducted from December 2014 to October 2015. We evaluated 15 patients with hematologic malignancies indicated for HSCT. Blood samples were collected for accomplishment of the serology for EBV, CMV and HSV patients; we also performed evaluation and odontological adequacy before the conditioning regimen. After performing the transplant, the patients were clinically evaluated for identification of alterations in the oral mucosa, such as mucositis and opportunistic infections and subjective evaluation of pain in the days D+3, D+6, D+9 and D+10. The most widely used drug in protocols of chemotherapy was melphalan, corresponding to 80% (n=12). When evaluating the incidence of oral amendments it was found that, from the total of the sample (n=15), 93.3% of the patients had at least one episode of OM, considering all evaluated days, being the grade I the most prevalent, 48.0% (n=36). The highest number associated with intensity of the pain was 7.0 (seven). Thirteen patients (86.7%) showed no reactive IgM levels of HSV, and in none of them were identified IgM for EBV and CMV. 93.3% (n=14) patients were positive for IgG for both EBV and CMV. Only three patients (20%) had candidiasis. As to the hematological profile, there was a significant increase in the number of patients exhibiting hematocrit below 30.0% (p <0.005), platelets menor que 50.000/mm³) (p = 0.011) and leukocytes (p = 0.013). However, only patients who had less than 2,000 leukocytes (p=0.044) showed OM in the D+10 (100%), being the frequency 15.9 higher in these patients. There was no association between OM with the type of basis disease, with the treatment regimen used for conditioning or with other hematological parameters evaluated. We conclude that the patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation present high incidence of episodes of OM, but no association with fungal and viral infections. OM showed strong relationship to leukopenia, being grade I the most prevalent, portraying the possible contribution of the buccal adequacy. / O Transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) consiste na infusão intravenosa de células progenitoras hematopoiéticas com o objetivo de recuperar ou renovar a produção de células sanguíneas e a função imune em pacientes com desordens malignas hematológicas. A mucosite oral (MO) é um dos efeitos secundários mais frequentes da terapia antineoplásica. Este trabalho teve como objetivo avaliar os parâmetros hematológicos, microbiológicos, esquema terapêutico e incidência de MO em pacientes submetidos a TCTH. O estudo é do tipo longitudinal, realizado no período de dezembro de 2014 a outubro de 2015. Foram avaliados 15 pacientes portadores de neoplasias hematológicas indicados para o TCTH. Foram coletadas amostras de sangue para realização de hemograma completo e sorologia para Vírus Epstein-Baar (EBV),Citomegalovírus (CMV) e Vírus Herpes Simples (HSV), dos pacientes, como também realizado avaliação odontológica das doenças cárie e periodontal utilizando os índices de CPO-D e índice de placa visível (IPV) antes do transplante. Após a realização do transplante os pacientes foram avaliados clinicamente para identificação de alterações da mucosa bucal, tais como mucosite e infecções oportunistas e avaliação subjetiva de dor, nos dias D+3, D+6, D+9 e D+10. O fármaco mais utilizado nos protocolos de quimioterapia foi o melfalano correspondendo a 80% (n=12). Ao se avaliar a incidência das alterações orais verificou-se que do total da amostra (n=15), 93,3% dos pacientes apresentaram pelo menos um episódio de MO considerando todos os dias avaliados, sendo o grau I o mais prevalente, 48,0%(n=36). Os pacientes apresentaram dor no D+3 e D+10. Treze pacientes (86,7%) não apresentaram níveis reativos de IgM para HSV e, em nenhum deles foi identificada IgM para EBV e CMV. 93,3% (n=14) pacientes foram reagentes para IgG tanto para EBV como para CMV. Somente três pacientes (20%) apresentaram candidíase. Quanto ao perfil hematológico, houve aumento significante do número de pacientes exibindo hematócrito abaixo de 30,0% (p<0,005), plaquetas menor que 50.000/mm³ (p=0,011) e leucócitos menor que 2.000/mm³ (p=0,145). No entanto, somente os pacientes que se encontravam com menos de 2.000 leucócitos (p=0,044) apresentaram MO no D+10 (100%), sendo a frequência 15,9 maior nesses pacientes. Não foi encontrada associação entre MO com o tipo da doença base, com o esquema terapêutico utilizado para o condicionamento nem com os demais parâmetros hematológicos avaliados. Conclui-se que os pacientes submetidos a transplante de células tronco hematopoiéticas apresentam alta incidência de episódios de MO, porém sem associação com infecções fúngicas e virais. A MO mostrou forte relação com a leucopenia, sendo o grau I mais prevalente, retratando a possível contribuição da adequação bucal.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-16T03:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349284.pdf: 2437951 bytes, checksum: a8b91ae71bb317e19028fb574bf1734d (MD5) Previous issue date: 2017 / Uma grande vertente de estudos da biotecnologia é a utilização das células estromais mesenquimais (CEM) para terapias regenerativas. Entretanto, o sucesso da terapia celular com CEM é dependente da sua fonte de obtenção, da qualidade e da eficiência destas células, sendo uma das mais importantes, o tecido adiposo (TA) subcutâneo. Este tecido é de fácil obtenção, comumente obtido de excedentes descartáveis de procedimentos cirúrgicos amplamente realizados no mundo. No entanto, a grande maioria das pesquisas com CEM do TA (CEM-TA) são de origem do tronco e membros, sendo o TA facial pouco explorado com fonte destas células. O TA apresenta diversas distinções de acordo com sua deposição anatômica: origem embrionária, tipos, distribuição, funções e constituição tecidual. Estas diferenças podem influenciar nas características e eficiência terapêutica das CEM-TA. Tendo em vista estes aspectos, o presente trabalho buscou caracterizar comparativamente o perfil fenotípico e o potencial de diferenciação de células obtidas do TA facial e do abdominal humano. Também foi analisada a integridade celular visando investigar a segurança da sua aplicação terapêutica. Para isto, as CEM foram isoladas do TA facial e do abdominal humano, e suas características morfológicas e fenotípicas mesenquimais, bem como o potencial de diferenciação celular foram analisadas. Os resultados mostraram que ambas as CEM-TA apresentam morfologia fusiforme, aderência ao plástico e presença de marcadores específicos de células mesenquimais, porém, com algumas diferenças. As CEM-TA da face apresentaram maior expressão do marcador CD105 que as de abdômen, além de maior potencialidade para gerar osteócitos enquanto as CEM-TA do abdômen foram mais precoces no processo de gerar adipócitos. Após esta caracterização comparativa, foram avaliados o potencial de viabilidade/proliferação, de migração e a capacidade de formar colônias (Colony-forming unit-fibroblasts-CFU-F, do inglês). Os resultados mostraram que ambas as CEM-TA são equiparadas no potencial de viabilidade e de migração celular, mas diferem na capacidade de proliferação e no potencial de formar CFU-F. As CEM-TA da face foram mais proliferativas e mostraram maior eficiência para formar CFU-F do que as CEM-TA obtidas do abdômen. Por fim, foram avaliadas a senescência e integridade genética. Os resultados mostraram que ambas as CEM-TA foram equiparadas em todas as análises, entretanto, em passagens mais altas (p23-28) as células obtidas do abdômen demonstraram maior instabilidade nuclear do que as CEM-TA da face durante a expansão celular. Em conclusão, o presente trabalho isolou CEM do TA facial e do abdominal humano. A origem do TA influenciou nas propriedades das células, mas ambas são equiparadamente promissoras para terapias regenerativas. Por fim, o TA facial é uma fonte alternativa de CEM tanto ou mais eficiente do que o TA abdominal humano. / Abstract : A major theme of biotechnological studies is the use of mesenchymal stromal cells (MSCs) for regenerative therapies. However, the tissue source is fundamental for the success of cell therapy with MSCs as well as their quality and efficiency. A well-known source of these cells is the subcutaneous adipose tissue (AT) which is easy to obtain and is a large reservoir of MSCs. Most studies obtain MSCs from AT (denominated in this study as MSC-AT) originated from trunk and members. AT has several differences depending on its anatomical location and embryonic origin, its types, distribution, functions and tissue constitution that might influence the characteristics and therapeutic efficiency. Therefore, the present study aimed to compare and characterize the phenotypic profile and potential cell differentiation of human facial and abdominal MSC-AT. Cellular integrity was also assessed to ensure safety of therapeutic applications. MSCs were isolated from facial and abdominal AT disposal after plastic surgeries and patient agrément. After cultured their morphological and phenotypical characteristics were analyzed, as well as the cell differentiation potential. Both facial and abdominal MSC-AT showed fusiform morphology, adhesion to plastic and mesenchymal markers. Facial MSC-AT showed a higher expression of CD105 marker and ostegenic potential than abdominal MSC-AT, in addition abdominal MSC-AT displayed premature adipogenic potential. Both facial and abdominal MSC-AT exhibited equivalent viability and cell migration potential, but were different in proliferation capacity and fibroblastoid colony forming units (CFU-F) potential. Facial MSC-AT were more proliferative and showed higher CFU-F efficiency than abdominal cells. However, in higher passages (p23-28), abdominal MSC-AT demonstrated higher nuclear instability than facial cells. In summary, the present study isolated MSCs from both facial and abdominal human AT, the origin of AT influenced some cell properties and facial AT is an important alternative source of MSCs.

Durante as duas últimas décadas ocorreram progressos substanciais a respeito do entendimento da patofisiologia da cicatrização de feridas, e novas terapias têm sido desenvolvidas. Contudo, acelerar o processo de reparo continua sendo um desafio no campo da cirurgia plástica reconstrutiva. Tratamentos inovadores para melhorar a cicatrização e a regeneração cutânea são necessários e é nesse âmbito que as pesquisas com as células-troncos mesenquimais (MSCs) vêm ganhando espaço na última década. As MSCs foram estudadas em diversas áreas no que diz respeito ao seu efeito sobre a cicatrização de lesões e suas aplicações clínicas. O uso de MSCs, em feridas agudas ou crônicas, resultam em uma aceleração no processo cicatricial, em decorrência do impacto benéfico que elas trazem para todas as fases da cicatrização (inflamatória, proliferativa e remodelamento). O momento da aplicação das MSCs nas feridas e o número ideal de aplicações ainda não são bem conhecidos; alguns autores citam em sua metodologia o seu uso, mas dificilmente eles justificam ou concluem sobre as aplicações. Nessas condições, o presente trabalho visa apresentar os resultados da aplicação de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (ADSCs), em duas fases consecutivas da cicatrização – uma delas na fase inflamatória e outra na proliferativa. Além disso, irá indicar em qual dessas duas fases a aplicação de ADSCs é mais eficaz. Paralelamente a isso, definir se duas doses são mais eficientes do que apenas uma para promover a cicatrização durante sete dias de observação. Para tanto, os resultados foram divididos em dois artigos. O primeiro compara o momento da aplicação das células, ao passo que o segundo compara a eficiência de duas doses em relação a uma, ambos em um período de avaliação de sete dias. Portanto, no primeiro artigo o objetivo foi avaliar a ação das ADSCs no tratamento de feridas cutâneas agudas a fim de entender se o momento da aplicação das células resulta em diferença na cicatrização nos primeiros sete dias de lesão. As células-tronco foram isoladas de tecido adiposos de camundongos C57Bl/6 GFP+. Para tanto, foram utilizados 49 camundongos C57Bl/6 divididos em quatro grupos: Grupo I (GI/controle; n= 14); Grupo II (GII; n= 14): ADSCs injetadas ao no d0; Grupo III (GIII; n= 14): ADSCs injetadas no 3° dia após a indução da lesão (d3) e Grupo IV (GIV; n= 7): ADSCs injetadas no 5° dia após a indução da lesão (d5). As avaliações clínicas ocorreram nos dias 0, 3, 5 e 7 e as histopatológicas nos dias 5 e 7. Na metodologia proposta podemos observar que, em apenas sete dias de avaliação, o uso de ADSCs aumenta a vascularização, a formação de tecido de granulação, a colagenização e incrementa o número de folículos pilosos. Além disso, o momento da aplicação das células não repercutiu diferenças significativas na fase inflamatória e proliferativa do processo de cicatrização de feridas cutâneas. Contudo, os diferentes momentos de aplicação das ADSCs resultaram em efeitos benéficos para aspectos importantes dos mecanismos da cicatrização como a presença de tecido de granulação, a proliferação vascular, a colagenização e a presença de folículos pilosos, porém distintos. Assim, a escolha do momento de aplicação dependerá da necessidade de cada paciente e da intenção do médico quando estudos clínicos forem realizados. No segundo artigo o objetivo foi avaliar a ação das ADSCs no tratamento de feridas cutâneas agudas a fim de entender se duas aplicações consecutivas de células promovem a cicatrização nos primeiros sete dias de lesão. Para o experimento foram utilizados 49 camundongos C57Bl/6 divididos em quatro grupos: (G0/controle; n = 14); (G1D; n = 14): ADSCs injetadas no d0; Grupo 3D (G3D; n = 14): ADSCs injetadas no d0 e no d3; Grupo 5D (G5D; n = 7): ADSCs injetadas no d0 e no d5. As avaliações clínicas ocorreram nos dias 0, 3, 5 e 7 e as histopatológicas nos dias 5 e 7. Nesse estudo pode-se observar que o uso de duas doses de ADSCs aumenta a proliferação celular e vascular e uma aplicação incrementa o número de folículos pilosos em apenas sete dias de avaliação. Assim, é possível concluir que utilizar duas doses é mais eficiente do que uma quando avaliamos os sete primeiros dias de cicatrização. Além disso, não há diferença no momento de aplicação da segunda dose de ADSCs quando em um período de observação de 7d. / During the last two decades, there has been substantial progress regarding the understanding of the pathophysiology of wound healing, and new therapies were developed. However, in the field of reconstructive plastic surgery acceleration the repair process remains a challenge. It is necessary innovative treatments to improve healing and skin regeneration. In this context that research on mesenchymal stem cell (MSCs) have been gaining ground in the last decade in the field of reconstructive plastic surgery. MSCs studies in different areas with respect to their effect on the healing of injuries and their clinical applications. The use of MSCs in acute or chronic wounds, result in an acceleration of the healing process, due to the beneficial impact they bring to all stages of healing (inflammatory, proliferative and remodeling). The time of application of MSCs in the wounds and the ideal number of doses is still not very clear, and although some authors cite in their methodology use, they hardly justify or conclude about the applications. Under these conditions, the results of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (ADSCs) applied in two consecutive stages of healing - one in the inflammatory phase and another in proliferative. Also, indicate which of these two phases ADSCs of the application is more efficient. Parallel to this, determine whether two doses are more effective in promoting healing of a seven-day observation period. Therefore, the results were divided into two articles. The first compares the time of application of the cells, and the second article compares the efficiency of two doses instead one, both in seven days evaluation period. Therefore, the results were divided into two articles. The first compares the time of application of the cells, and the second article compares the efficiency of two doses instead one, both in seven days evaluation period. Therefore, in the first article we evaluated the action of ADSCs in the treatment of acute wounds in order to understand if the time of application of the cells results in difference in healing the first seven days of injury. The stem cells were isolated from adipose tissue of C57BL / 6 mice GFP +. Thus, we used 49 mice C57BL / 6 divided into four groups: Group I (GI / control, n = 14); Group II (GII; n = 14): ADSCs injected to the d0; Group III (GIII; n = 14): ADSCs injected on the 3rd day after the induction of injury (d3) and Group IV (GIV; n = 7): ADSCs injected on day 5 after induction of skin defect (d5). Clinical evaluations were performed on days 0, 3, 5 and 7 and the histopathology on days 5 and 7. In the proposed methodology, can be seen that the use of ADSCs increased vascularization, formation of granulation tissue, collagen deposition and increases the number of hair follicles in just seven days of evaluation. In addition, the time of application of the cells did not affect significant differences in the inflammatory and the proliferative phase of wound healing skin. However, the use of different periods ADSCs resulting in beneficial effects on important aspects of wound healing mechanisms. Such as the presence of granulation tissue, vascular proliferation, collagen deposition and the presence of hair follicles; but distinct. So, choose the time of application will depend on the needs of each patient and the doctor's intention. In the second article, we evaluated the action of ADSCs in the treatment of acute wounds in order to understand if two consecutive applications of cells promote healing in the first seven days of injury. For the experiment were used 49 C57BL / 6 mice divided into four groups: (G0 / control; n = 14); (G1D, n = 14): injected into the ADSCs d0; 3D Group (G3D; n = 14): ADSCs injected into the d0 and d3; 5D group (G5d; n = 7): ADSCs injected on d0 and d5. Clinical evaluations were performed on days 0, 3, 5 and 7 and the histopathology on days 5 and 7. In this study, it can be seen that the use of two doses of ADSCs enhances cell proliferation and vascular application and increases the number of follicles hair in just seven days of evaluation. Thus, we conclude that use two doses is more efficient than when evaluating the first seven days of healing. In addition, there is no difference in the time of the second treatment of ADSCs when an observation period of 7d.

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Resumo: O tumor venéreo transmissível (TVT) canino é uma neoplasia transplantável, considerada um alo-enxerto. Entretanto, pouco se sabe a respeito da origem e processo de cacinogênese. Atualmente, postula-se que alguns tumores originem-se de células iniciadoras tumorais, classicamente descritas nas leucemias mielóide humanas. As características intrínsecas do TVT fornecem indícios de uma possível participação de células iniciadores tumorais no processo de carcinogênese nesse tumor. Foi realizado estudo de fenotipagem do TVT canino para avaliar a marcação das proteínas CD44, CD133, CD90 e CD34, comumente associadas ao potencial iniciador tumoral. Para tanto utilizou-se a citometria de fluxo, imuno-histoquímica e RTq-PCR. Foram analisados também as frações de crescimento pelo Ki-67) e o número de células em apoptose pela caspase-3 clivada. Trinta e oito amostras de TVT foram obtidas de pacientes sem tratamento quimioterápico prévio. As amostras foram classificadas em plasmocitóide ou mistas, de acordo com o subtipo citológico; as células positivas na citometria de fluxo foram representadas em termos percentuais para os marcadores CD44, CD34, CD90 e CD133; a fração de crescimento foi representada pela técnica do H-Score; a quantidade de células apoptóticas foi representada pelo somatório de células positivas para a caspase-3 clivada; as imuno-marcações das proteínas CD44 e CD34 foram representadas por escores semi-quantitativos baseados na intensidade e percentual de células positivas;... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a transplantable neoplasia considered an allograft. Information about the origin and carcinogenesis process is scarcely known. Currently, some neoplasms are believed to arise from a tumor-initiating cell (TIC's) classically described in human myeloid leukemia. TVT intrinsic characteristics provide evidence of a possible TIC's participation in carcinogenesis process of this malignancy. Thus, a phenotyping study of CTVT was conducted to assess the immunophenotyping properties of the proteins CD44, CD133, CD90 and CD34, already known to be associated to tumor initiator potential. The use of flow cytometry and immunohistochemistry contributed to this purpose. In addition, growth fractions and cells undergoing apoptosis were examined by Ki-67 and caspase-3 cleaved, respectively. Thirty-eight samples were chosen from patients having no previous chemotherapy and cytological diagnosis of CTVT. Samples were classified into plasmacytoid or mixed according to cytological subtype. Positive cells in the flow cytometry were expressed in percentage for the markers CD44, CD34, CD90 and CD133. H-score technique helped to represent growth fractions. Apoptotic cell quantity was calculated by summing positive cells. Immunohistochemical marking of CD44 and CD34 proteins were determined by semiquantitative scores based on the intensity and percentage of positive cells. Moreover, specimens were divided into resistant and non-resistant groups and com... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor