Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-19T16:59:50Z No. of bitstreams: 1 2015_GlauraReginadeCastroeCaldoLima.pdf: 1664353 bytes, checksum: a38771b7bd1a21307624ecb077902878 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-02-28T11:08:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_GlauraReginadeCastroeCaldoLima.pdf: 1664353 bytes, checksum: a38771b7bd1a21307624ecb077902878 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-28T11:08:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_GlauraReginadeCastroeCaldoLima.pdf: 1664353 bytes, checksum: a38771b7bd1a21307624ecb077902878 (MD5) / A tuberculose (TB) continua sendo uma das principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, necessitando a TB multirresistente de medidas para ser evitada por ser uma ameaça para o mundo. Determinar se a terapia com quatro drogas em dose fixa combinada (4-DFC) é mais eficaz e mais segura que aquela com drogas separadas (DS) para o tratamento de tuberculose pulmonar na literatura e avaliar a resistência aos tuberculostáticos de primeira linha nos isolados do Complexo Mycobacterium tuberculosis no Distrito Federal foram os objetivos deste trabalho. Para analisar o novo tratamento para TB pulmonar foi realizada uma revisão sistemática com meta-análise dos estudos encontrados e para avaliar a resistência aos tuberculostáticos de primeira linha foi realizado um estudo transversal descritivo no LACEN-DF com cepas coletadas no período de 2001 a 2013 que comparou os perfis de sensibilidade antes e após a introdução do novo tratamento para TB. No período de 2011 a 2013 foi comparado um método tradicional de detecção de resistência (SIRE BACTEC MGIT 960®) com um teste molecular (Genotype MTBDRplus®), capaz de detectar as principais mutações nos genes associados à resistência à rifampicina e à isoniazida. As taxas de resistência secundária aos tuberculostáticos de primeira linha no período de 2001 a 2013 foram de 4,8% à isoniazida, 1,3% à rifampicina e 4,7% à estreptomicina. As taxas de MDR-TB, XDR-TB e de outras resistências foram de 7,7%, 0,7% e 0,7%, respectivamente. Comparando o período de 2001-2003 com 2011-2013 pôde-se observar uma tendência de diminuição da multirresistência e uma elevação da monorresistência aos tuberculostáticos de primeira linha nos períodos analisados. A taxa de multirresistência secundária caiu após a introdução do novo tratamento, permitindo ao paciente maior chance de cura com a utilização de medicamentos menos tóxicos e de menor custo para o Estado. A monorresistência à estreptomicina aumentou, indicando uma possível reativação endógena por cepas anteriores à década de 1980. As mutações encontradas no gene rpoB, responsável pela resistência à rifampicina, se localizavam no códon 531, enquanto as associadas à resistência à isoniazida, no códon 315 do gene KatG e no códon 15 do gene inhA. A acurácia do teste GenoType MTBDRplus® no DF para a detecção da resistência à rifampicina e à isoniazida foi confirmada quando comparada ao teste de sensibilidade convencional com menor tempo de resposta na detecção de resistência aos fármacos. Em decorrência dos resultados encontrados neste trabalho o ensaio GenoType MTBDRplus® foi incluído na rotina do LACEN-DF para o diagnóstico precoce da TB e controle de sua multidroga resistência no DF, trazendo assim benefícios substanciais para o diagnóstico rápido da TB e do seu perfil de resistência. / Tuberculosis (TB) continues to be a major cause of morbidity and mortality worldwide and the multi-drug resistant TB is a threat to the world and needs measures to be avoided. To evaluate whether the four-drug therapy in fixed dose combination (4-FDC) is more effective and safer than the separate drugs (SD) therapy for the treatment of pulmonary TB in the literature and determine the resistance to first-line antituberculosis drugs in isolates of Mycobacterium tuberculosis in the Federal District were the objectives of this work. A systematic review with meta-analysis of studies found was conducted to analyze the new treatment for pulmonary TB, and to evaluate the resistance to first-line tuberculostatic drugs in isolates of Mycobacterium tuberculosis complex in Federal District of Brazil a crosssection descriptive study was undertaken in LACEN-DF in isolates collected from 2001 to 2013. A comparison of the sensitivity profiles before and after the introduction of the fixeddose combination treatment for tuberculosis. From 2011 to 2013 (sensitivity tests using the SIRE BACTEC MGIT 960® system were compared with a molecular one using Genotype MTBDRplus®, capable to detect the main mutations of genes associated to resistance to rifampicine and to isoniazide. The secondary resistance rates to first-line antituberculosis drugs in the period 2001-2013 were 4.8% to isoniazid, 1.3% to rifampicin and 4.7% to streptomycin. The rates of MDR-TB, XDR-TB and other resistances were 7.7%, 0.7% and 0.7%, respectively. Comparing the period 2001-2003 with 2011-2013, a tendency of decrease in multidrug resistance was observed, with an increase of monoresistance to first-line antituberculosis drugs in the analyzed periods. The rate of secondary multi-resistance has fallen after the introduction of the new treatment, which gives patients higher chance of healing taking less toxic drugs that are cheaper for the government. The mono-resistance to streptomicine increased, indicating a possible endogenous reactivation by isolates before 1980 decade. The mutations found in the rpoB gene, responsible for resistance to rifampicin, were located at codon 531 and those responsible for resistance to isoniazid in the katG gene at codon 315 and in the inhA gene at codon 15. The accuracy of GenoType MTBDRplus® in DF for detecting the resistance to rifampicine and to isoniazide was confirmed when compared with the conventional sensitivity test with less response time for detecting the resistance. According to results found in this work the GenoType MTBDRplus® essays was included in the routine of LACEN-DF for the early diagnose and control of multidrugresistant tuberculosis in Federal District, producing substantial benefits for the fast diagnosis confirmation and its resistance profile.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-19Bitstream added on 2014-06-13T18:20:28Z : No. of bitstreams: 1 ishikawa_llw_me_botfm.pdf: 1871630 bytes, checksum: fb1dab693391631364f9e4a0c12161d6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Not available

Made available in DSpace on 2015-06-16T02:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000470526-Texto+Parcial-0.pdf: 532172 bytes, checksum: 2b16e26659f3d053651daae2f5b308b8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Objective: in this study, the trends in incidence of tuberculosis (TB) were evaluated using data from DATASUS that include all TB data available in the national system for the period between 2001 and 2012.Methods: this study is a retrospective analysis of data from DATASUS. Data were obtained from the database DATASUS through the Health Information section. Code "tuberculosis" was used to select key data on the results of the study, from 2001 to 2012. There were two selected age groups: children and adolescents aged 0-19 years and adults over 20. It was estimated the annual incidence per 100 000, which was calculated dividing the number of cases per population estimate of the age groups, obtained from the Brazilian PNAD and Census 2010 for all years studied, respectively, and multiplying the result by 100,000.Results: incidence rates showed a reduction when analyzed in the group of adults. However, no significant reduction was observed in the group of children and adolescents. Also, when we conduct regional comparisons, the north and the state of Rio Grande do Sul have shown high incidence rates. Conclusions: it would be important to improve policies for diagnosis and treatment of pediatric patients. The northern, Rio de Janeiro and the RS should be considered priority areas in fighting against TB in Brazil. / Objetivo: neste estudo, foram avaliadas as tendências de incidência de tuberculose (TB) no Brasil, utilizando dados do DATASUS, que incluem todas as notificações de TB disponíveis no conjunto de dados nacional durante o período entre 2001 e 2012. Além disso, foram avaliadas as taxas de incidência em diferentes grupos etários e regiões do país.Método: o presente estudo é uma análise retrospectiva dos dados do DATASUS, processamento de dados do Sistema Único de Saúde. As informações foram obtidas a partir do banco de dados do DATASUS através da seção de Informação em Saúde. O código de "tuberculose" foi utilizado para selecionar os principais dados sobre os resultados do estudo, no período entre 2001 a 2012. Os dois grupos etários selecionados foram: crianças e adolescentes com idades entre 0-19 anos e adultos com mais de 20. Foi estimada a incidência anual por 100 mil, que foi calculada dividindo-se o número de casos por estimativa da população dos grupos etários, obtidos a partir da PNAD e Censo Brasileiro de 2010 para todos os anos estudados, respectivamente, e multiplicando o resultado por 100. 000.Resultados: as taxas de incidência apresentaram uma redução expressiva quando analisados no grupo de adultos. Porem, não foi observado redução na mesma proporção no grupo de crianças e adolescentes. Além disso, quando realizamos comparações regionais, a região norte, sudeste e o estado do Rio Grande do Sul apresentam as maiores taxas de incidência. Conclusões: é importante intensificar as políticas para diagnóstico e tratamento de tuberculose da faixa etária pediátrica no Brasil. As regiões norte, Rio de Janeiro e o RS devem ser consideradas regiões prioritárias no combate a TB no país.

Made available in DSpace on 2018-05-15T12:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000488741-Texto+Confidencial-0.pdf: 518467 bytes, checksum: 6b3f9cef41c040a006dbe7ebf3fd0fe3 (MD5) Previous issue date: 2017

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Gustavo Pompermaier Garlet / Banca: Ramon Kaneno / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Mestre

Made available in DSpace on 2014-11-12T01:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462290-Texto+Completo-0.pdf: 2133615 bytes, checksum: 5c5628b9cc5fd71ee1dcc7d68f182c36 (MD5) Previous issue date: 2014 / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis. The increasing number of infected patients among immune compromised populations and emergence of drug-resistant strains has created urgent need of new strategies to treat TB. Understanding relevant pathways (as the purine salvage) will reveal details of M. tuberculosis that might be used to develop new strategies to combat this pathogen. Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT) is an enzyme from the purine phosphoribosyltransferase (PRTase) family and catalyzes the conversion of hypoxanthine or guanine and 5-phosphoribosyl-α-1-pyrophosphate (PRPP) to inosine 5’-monophosphate (IMP) or guanosine 5’-monophosphate (GMP), and pyrophosphate (PPi). Here we describe the mode of action of M. tuberculosis HGPRT (MtHGPRT) through kinetic and thermodynamical analysis. Experiments were also performed to determine the oligomeric state in solution, pH, temperature and solvent isotope effects. These data allows us to compare MtHGPRT to homologues from other species and look for similarities and differences in its mechanism and constants. We hope the experiments presented here will contribute to the understanding of this pathogen purine salvage pathway. / A Tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis. O aumento de pacientes infectados entre a população imunocomprometida e a emergência de cepas resistentes a drogas criam uma necessidade de novas estratégias para tartar a TB. Entender como funcionam as vias metabólicas relevantes, como a via de salvamento de purinas, poderá revelar detalhes do M. tuberculosis que poderão ser úteis para o desenvolvimento de novas estratégias de combate a este patógeno. A hipoxantina-guanina fosforribosiltransferase (HGPRT) é uma enzima da familia das purina fosforribosiltransferases (PRTase) e catalisa a conversão de hipoxantina ou guanina e 5-fosforribosilpirofosfato-α-1-pirofosfato (PRPP) em inosina 5’-monofosfato (IMP) ou guanosina 5’-monofosfato (GMP) respectivamente, com a liberação de pirofosfato inorgânico (PPi). Aqui nós descrevemos o modo de ação da HGPRT de M. tuberculosis (MtHGPRT) através de análises cinéticas e termodinâmicas. Também foram realizados experimentos para determinar o estado oligomérico da enzima em solução e os efeitos de pH, temperatura e efeitos isotópicos do solvente. Esses dados nos permitem comparar a MtHGPRT com homólogos de outras espécies e procurar por similaridades e diferenças nos seu mecanismo e constantes. Nós esperamos que os experimentos apresentados aqui contribuam para o entendimento da via de salvamento de purinas desse patógeno.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000410668-Texto+Completo-0.pdf: 610134 bytes, checksum: 96d58c78aa5915846ec6c97a8caffdcb (MD5) Previous issue date: 2009 / The Tuberculosis (TB) is considered a threat to global public health; according to the World Health Organization, nearly two million people die annually due to this disease. One of the most importat features of this pathogen is its ability to persist in host tissues for a long period in a state of latency, also known as persistence. The importance of the state of latency to the bacillus survival has been an attractive factor towards the development of works to characterize in greater detail this phase of infection by M. tuberculosis. An understanding of the mode of action and the role of pyrimidine salvage pathway enzymes in M. tuberculosis could reveal new targets for the rational design of potent and selective anti-TB agents capable of, hopefully, preventing progression and reactivation of the disease. Cytidine deaminase (CDA; EC 3. 5. 4. 5), an evolutionarily conserved enzyme of the pyrimidine salvage pathway, catalyzes the hydrolytic deamination of cytidine and 2’-deoxycytidine to form uridine and 2’-deoxyuridine, respectively. The probable CDA gene (cdd, Rv3315c) from M. tuberculosis H37Rv was cloned, sequenced, and expressed in Escherichia coli BL21(DE3) cells. The purification protocol of recombinant M. tuberculosis CDA (MtCDA) yielded 35 mg of homogeneous protein from 10 g of cells. Mass spectrometry, N-terminal amino acid sequencing, and gel filtration chromatography confirmed the predicted molecular mass, identity, and oligomeric state of MtCDA, which was estimated to be 52. 99 kDa. These results and the ones for multiple sequence alignment suggest that MtCDA is a homotetramer in solution. Steady-state kinetic measurements yielded the following parameters: KM and kcat values of, respectively, 1004 μM and 4. 8 s-1 for cytidine, and 1059 μM and 3. 5 s-1 for 2'-deoxycytidine. The pH dependence of kcat and kcat/KM for cytidine indicates that the protonation of a single ionizable group with pKa value of 4. 3 abolishes activity, and protonation of a group with pKa value of 4. 7 reduces substrate binding. Crystals of CDA were obtained using the hanging-drop vapour-diffusion method. The demonstration that the Rv3315c locus encodes a protein having CDA activity in M. tuberculosis is the first step to understand the role of this gene product and should help the design of anti-TB agents and vaccines. / A tuberculose (TB) é considerada uma ameaça à saúde pública mundial; segundo a Organização Mundial da Saúde, cerca de dois milhões de pessoas morrem anualmente em conseqüência desta doença. Uma das características mais importantes do patógeno causador da TB é a sua capacidade de persistir nos tecidos do hospedeiro por um longo período em um estado de latência, também conhecido como persistência. A importância do estado de latência à sobrevivência do bacilo tem sido um atrativo fator para o desenvolvimento de trabalhos que caracterizem com maior profundidade esta fase da infecção por M. tuberculosis. O entendimento do modo de ação e o papel das enzimas da rota de salvamento de pirimidinas em M. tuberculosis poderia revelar novos alvos para o desenho racional de agentes anti-TB potentes e seletivos capazes de, se possível, prevenir a progressão e a reativação da doença. A citidina deaminase (CDA, EC 3. 5. 4. 5), uma enzima evolutivamente conservada da rota de salvamento das pirimidinas, catalisa a deaminacao hidrolítica de citidina e 2’-desoxicitidina para formar uridina e 2’-desoxiuridina, respectivamente. O provável gene da CDA (cdd, Rv3315c) de M. tuberculosis foi clonado, seqüenciado e expresso em células de Escherichia coli BL21(DE3). O protocolo de purificação da CDA recombinante de M. tuberculosis (MtCDA) produziu 35 mg de proteína homogênea a partir de 10 g de células. A análise de espectrometria de massas, seqüenciamento N-terminal e cromatografia por gel filtração confirmaram a massa molecular prevista, a identidade e o estado oligomérico de MtCDA, que foi estimada em 52,99 kDA. Estes resultados e os de alinhamento múltiplo de seqüências sugere que MtCDA é um homotetrâmero em solução. Medidas de cinética em estado estacionário da CDA geraram os seguintes parâmetros: valores de KM e kcat de, respectivamente, 1004 μM e 4,8 s-1 para citidina, e 1059 μM e 3,5 s-1 para 2'- desoxicitidina. A dependência dos valores de kcat e kcat/KM em função do pH para citidina indicam que a protonação de um único grupo ionizável com valor de pKa de 4,3 elimina a atividade, e a protonação de um grupo com pKa de 4,7 reduz a ligação ao substrato. Foram obtidos cristais de CDA utilizando o método de difusão de vapor em gota pendente. A demonstração de que o locus Rv3315c codifica uma proteína com atividade CDA em M. tuberculosis é o primeiro passo para entender o papel do produto deste gene e deverá ajudar no desenho de agentes anti-TB e vacinas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-22Bitstream added on 2014-06-13T21:00:20Z : No. of bitstreams: 1 napoli_aer_me_botfm.pdf: 474132 bytes, checksum: df43d3911da8558972612a5180b6d614 (MD5) / Fundação de Ensino e Pesquisa em Ciências da Saúde (FEPECS) / A tuberculose (TB) permanece como a enfermidade infecciosa que mais dano tem causado à espécie humana ao longo de toda a sua história. O objetivo deste estudo transversal foi conhecer o perfil epidemiológico da tuberculose urogenital no Distrito Federal, Brasil, no período de nove anos. Foi realizado estudo descritivo de todos os pacientes diagnosticados com tuberculose urogenital no período de 2001 a 2009, notificados pelo Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) e residentes no Distrito Federal. Dos 44 casos estudados, a faixa etária de maior acometimento foi entre 41 a 60 anos (59,1%), sexo feminino (68,2%). Quanto à escolaridade, observou-se grau superior em 40,9% dos casos e médio em 18,2%. A renda familiar foi superior a cinco salários mínimos em 47,7% dos casos. Em 65,9% dos casos havia história de contato com tuberculose e 88,6% dos pacientes apresentavam teste tuberculínico reator. O estudo concluiu que o perfil epidemiológico da tuberculose urogenital no Distrito Federal, Brasil, não está diretamente relacionado às condições socioeconômicas e culturais precárias, conforme a literatura indica / Tuberculosis (TB) remains the infectious disease that has caused more damage to the human race throughout its history. The objective of this survey was to know the epidemiological profile of urogenital tract tuberculosis in Distrito Federal, Brazil, in the period of nine years. Descriptive study was conducted of all patients diagnosed with urogenital tuberculosis in the period 2001 to 2009, reported by the Information System for Notifiable Diseases (SINAN) and resident in Distrito Federal. Of 44 cases studied, the major age range was between 41 to 60 years (59.1%) and female (68.2%). As for education, higher degree was observed in 40.9% of the cases and high school, in 18.2%. Family income was more than five minimum wages in 47.7% of the cases. In 65.9% of the cases there was a history of contact with tuberculosis patients and 88.6% of the patients had tuberculin skin test reactor. The study concluded that the epidemiological profile of urogenital tuberculosis in Distrito Federal, Brazil, is not directly related to the precarious socioeconomic and cultural conditions, according to the literature indicates

Introdução: O tratamento da tuberculose (TB) geralmente é realizado de forma empírica, baseado nos achados clínicos e radiológicos. O raio-x (RX) do tórax tem boa sensibilidade, mas uma baixa especificidade para o diagnóstico de tuberculose. O Xpert MTB/RIF está sendo usado cada vez mais em diversos países como teste inicial para diagnóstico de TB.O objetivo deste estudo foi de avaliar a associação dos achados radiológicos com o teste Xpert MTB/RIF em pacientes com suspeita de TB pulmonar. Métodos: Estudo transversal com pacientes de um ambulatório de TB. Foram realizados testes de baciloscopia no escarro, Xpert MTB/RIF e RX de tórax em pacientes com suspeita de TB pulmonar. Resultados: Durante o período do estudo, 312 pacientes preencheram os critérios de inclusão e incluídos na análise. Dentre os pacientes com Xpert MTB/RIF positivo, os padrões radiológicos foram classificados como típico de TB, compatível com TB e normal em 78 (70,3%), 31 (27,9%) e 2 (1,8%) dos pacientes, respectivamente. Os RX de tórax foram considerados típico de TB, compatível com TB e normal em 20 (10,0%), 25 (12,4%) e 152 (75,6%) dos pacientes, respectivamente, em casos Xpert MTB/RIF negativos. Conclusões: Foi encontrada uma associação entre os padrões radiológicos e os resultados do Xpert MTB/RIF em pacientes com suspeita de tuberculose pulmonar. O RX de tórax ainda é uma ferramenta diagnóstica útil e sensível, mas o seu papel nos algoritmos diagnósticos em lugares onde o Xpert MTB/RIF está disponível requer uma discussão mais aprofundada. / Background: Tuberculosis (TB) treatment is often carried out empirically, based on clinical and radiological findings. Chest X-ray (CXR) has good sensitivity but poor specificity in TB diagnosis. Xpert MTB/RIF is increasingly used in many countries as the initial diagnostic test for TB. The aim of the present study was to evaluate the association of radiological findings with the Xpert MTB/RIF test in patients with suspected pulmonary TB. Methods: Cross-sectional study in an outpatient TB clinic. Sputum AFB smear, culture, Xpert MTB/RIF and CXR were collected in patients with suspected pulmonary TB. Results: During the study period, 312 patients met the inclusion criteria and were included in the analysis. Among Xpert MTB/RIF positive cases, the radiographic patterns were classified as typical of TB, compatible of TB, and normal in 78 (70.3%), 31 (27.9%), and 2 (1.8%) patients, respectively. CXRs were classified as typical of TB, compatible of TB, and normal in 20 (10.0%), 25 (12.4%), and 152 (75.6%) patients, respectively, in Xpert MTB/RIF negative cases. Conclusions: We found an association between radiographic patterns and Xpert MTB/RIF results in patients with suspected pulmonary TB. CXR is still a useful and sensitive diagnostic tool, but its place at the diagnostic algorithms in the context of Xpert MTB/RIF availability warrants further discussion.