O câncer cervical representa a terceira causa de morte por câncer em mulheres e está associado a infecções persistentes pelo Vírus do Papiloma Humano (HPV) em mais de 99% dos casos. Evidências sólidas mostram que a expansão de Células Mielóides Supressoras (MDSC) e fatores solúveis como a interleucina IL-10 são importantes mediadores da evasão tumoral à resposta imunológica contra tumores, que limita a eficácia de imunoterapias. Dada a importância epidemiológica dos tumores induzidos por HPV e a necessidade eminente do desenvolvimento de imunoterapias ativas contra essas lesões, desenvolvemos durante os últimos 12 anos, uma estratégia vacinal terapêutica baseada em DNA. Esta vacina codifica a proteína E7 do HPV-16 fusionada à glicoproteína D (gD) do Vírus Herpes Simplex do tipo 1 (HSV-1), denominada pgDE7h. O presente trabalho propôs a investigação de estratégias que restringem a imunossupressão, baseadas em um plasmídeo que codifica o receptor solúvel da citocina IL-10 (pIL10R) e da quimioterapia com gencitabina, na potencialização da vacina pgDE7h para controlar o crescimento de tumores que expressam as proteínas E6 e E7 do HPV-16 em modelo murino (células TC-1). Foi possível observar um atraso no crescimento do tumoral a partir da combinação da vacina com o pIL-10R. Adicionalmente, a utilização da eletroporação como método de entrega dos plasmídeos aumentou a proteção terapêutica para 90% e 60% quando os animais foram imunizados 5 ou 14 dias após o desafio, respectivamente. A combinação dos plasmídeos foi ainda capaz de elevar o número de linfócitos T CD8+ E7-específicos ativados, encontrados sistemicamente e no sítio tumoral. No consócio da imunização com a pgDE7h à gencitabina, foi possível observar um efeito sinérgico dessa associação, que aumentou a proteção antitumoral de 20% para 100% de animais livres de tumor, concomitante ao controle da expansão de populações imunossupressoras no baço. Além disso, a quimioimunoterapia administrada até 14 dias após o desafio com as células tumorais mostrou-se protetora em modelo de recidivas, simuladas por meio de transplantes subsequentes de células tumorais. Na busca de um protocolo vacinal com maior viabilidade clínica, combinamos a coadministração dos plasmídeos pgDE7h e pIL- 10R com o tratamento com gencitabina. Esta combinação terapêutica mostrou-se mais eficiente, onde se observou um aumento robusto da ativação de linfócitos T CD8+ E7-espefíficos, com regressão completa de tumores pré-estabelecidos. Em suma, esses resultados evidenciam que a associação de abordagens terapêuticas pode superar barreiras imunológicas presentes no ambiente tumoral e aumentar as chances de sucesso clínico do tratamento proposto. / Cervical cancer represents the third cause of cancer death among women, which is associated with persistent Human Papilloma Virus (HPV) infection in more than 99% of cases. Solid evidences show that the expansion of Myeloid-derived Suppressor Cells (MDSC) and soluble factors, such as IL-10, are important mediators of immune evasion mechanisms expressed by tumor cells, that limits the efficacy of immunotherapeutic approaches. Given the epidemiological importance of HPVinduced tumors and the crucial importance of developing active immunotherapies against neoplasias, during the past 12 years, we have been developing a DNA-based therapeutic vaccine strategy encoding the HPV-16 E7 protein fused to the Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1) glycoprotein D (gD), named pgDE7h. This work aimed to investigate the potential role of immunossupression restriction using a plasmid encoding the soluble IL-10 receptor (pIL10R) and the chemotherapeutic drug gemcitabine to enhance in enhancing the pgDE7h vaccine potency in the control of tumors expressing HPV-16 E6 and E7 proteins in a murine model (TC-1 cells). It was possible to observe a tumor growth delay after combining the vaccine with pIL-10R. Additionally, the use of electroporation as a plasmid delivery method provided a therapeutic protection of 90% and 60% when the animals were immunized 5 or 14 days after challenge, respectively. The combination of plasmids was also capable to increase substantially the numbers of activatedE7-specific CD8+ T lymphocytes both systemically and at the tumor site. When pgDE7h immunization was combined to chemotherapy, we observed a synergistic effect, which increased the antitumor protection from 20% to 100% and promoted the control of immunosuppressive cell populations in the spleen. It was possible to maintain the high antitumour protective effects of the chemo-immunotherapy when the animals were immunized 14 days after tumor cell challenge and tumor relapses after subsequent challenges with tumor cells. To search a vaccine protocol with greater applicability in a clinical setting, we combined co-administration of pgDE7h and pIL-10R and gemcitabine treatment. Our data showed that the combined treatment induced a robust increase in the activation of CD8+ T lymphocytes and a complete regression of pre-established tumors. All together, these results show that the combination of therapeutic approaches can overcome immunological barriers present in the tumor environment and increase the chances of clinical success of the propose therapeutic treatment.

Uma vacina liofilizada, em comparação a uma líquida, possui inúmeras vantagens, tais como: a melhora na estabilidade do produto às variações de temperatura aumentando sua vida de prateleira, possibilitando uma melhor logística do produto aos locais onde o acesso à rede refrigerada é difícil. O presente trabalho visou investigar as estratégias do processo para a conservação da potência da vacina rábica de uso veterinário por liofilização. O material testado foi a vacina rábica inativada (VRI). Ao total foram testados 13 excipientes com três concentrações diferentes. O processo de triagem utilizado para a escolha das melhores formulações (VRI + excipiente) foi liofilização em microplacas próprias para cultivo celular adaptadas ao liofilizador, sendo posteriormente verificada a preservação da antigenicidade da vacina por meio do teste de ELISA. A análise estatística foi realizada no programa SPSS® v.17, aplicando análise de regressão para dados categóricos. A arginina 0,5%, o PEG 3350 0,5%, a sacarose 2%, a maltose 1% e a trealose 1% foram os que deram melhores resultados, um alto \"score\" de antigenicidade em comparação à vacina liofilizada sem adição de excipientes. A temperatura de colapso da VRI e de suas diversas formulações foi determinada por meio de um microscópio acoplado a um módulo de liofilização. A análise térmica foi realizada em Calorimetria Exploratória Diferencial (Differential Scanning Calorimetry - DSC). Realizou-se os seguintes testes para avaliação da VRI liofilizada em frasco ampola: microscopia eletrônica de varredura (MEV) para análise da estrutura da pastilha e o antibody-binding test (ABT) - Teste de ligação do anticorpo modificado para determinação da potência da VRI e suas formulações. A umidade residual da VRI com PEG3350 0,5% liofilizada foi determinada em temperatura constante de 100ºC resultou em 1,60%. A pastilha da vacina rábica + PEG 3350 0,5% liofilizada em frasco ampola apresentou a elegância farmacêutica esperada de um produto liofilizado. / A lyophilized vaccine, compared to a liquid form, has many advantages, such as the improvement in product stability to changes in temperature by increasing its shelf life, allowing better logistics for product to locations where access to chill is difficult to achieve. This work has investigated the strategies of the process for the conservation of the potency of rabies vaccine for veterinary use by lyophilization. The material tested is an inactivated rabies vaccine (VRI). Altogether 13 excipients were tested with three different concentrations. The screening process used to choose best formulation (s) (VRI + excipient) was lyophilization in microplates suitable for cell culture adapted to the lyophilizer, and subsequently verified the preservation of the antigenicity of the vaccine through the ELISA test. Statistical analysis was performed using SPSS® v.17, applying regression analysis for categorical data. Arginine 0.5%, PEG 3350 0.5%, Sucrose 2%, Maltose 1% and Trehalose 1% were those that gave better results, a high score of antigenicity compared to the lyophilized vaccine with no added excipients. The temperature of collapse of VRI and its various formulations was determined using a microscope coupled to a module of lyophilization. Thermal analysis was performed in Differential Scanning Calorimetry (DSC). The following tests were used for evaluation of freeze-dried VRI: Scanning electron microscopy (SEM), Antibody-binding test (ABT). The residual moisture of lyophilized samples were determined in the moisture analyzer at constant temperature of 100 °C and resulted in 1.60%. The cake of lyophilized rabies vaccine + 0.5% PEG 3350 in vial showed the pharmaceutical elegance expected of a lyophilized product.

Introdução: Desde 1999, o serviço público de saúde tem promovido a vacinação anual de idosos contra a gripe no país. Poucos estudos avaliaram a efetividade da intervenção focalizando especificamente sua contribuição para a redução da mortalidade atribuível aos surtos de gripe. Objetivos: O presente estudo teve como propósito comparar a mortalidade por gripe e pneumonia de idosos (65 anos ou mais) antes e depois do início da vacinação nas regiões Nordeste e Sul do Brasil, e comparar os resultados obtidos para cada região, procurando referenciar hipóteses relativas às diferentes condições climáticas e condições socioeconômicas. Métodos: Dados oficiais de população e de mortalidade por gripe e pneumonia foram levantados junto às agências governamentais (Fundação IBGE e DATASUS) responsáveis pelo gerenciamento dessas informações. Foram estimados coeficientes semanais de mortalidade com ajuste por diferenças na distribuição por sexo e por idade. Para a identificação de surtos de gripe e a estimação da mortalidade especificamente atribuível a esses surtos, foi utilizado o modelo de Serfling. As taxas foram estudadas para os períodos 1999-2009 (em que a vacinação foi realizada) e 1996-1998 (em que a vacinação não foi realizada). Foram descritas e analisadas a magnitude das taxas em cada período, sua possível redução associada à vacinação e a ocorrência de variação sazonal. Os indicadores resultantes da comparação entre os dois períodos foram objeto de análise comparativa entre as regiões Nordeste e Sul. Resultados: Durante o período de vacinação, a média anual do número de períodos com excesso de mortalidade foi reduzida em 32,8 por cento na região Sul; em 4,5 por cento na região Nordeste. Na região Sul, a duração média de tais períodos foi reduzida em 66,2 por cento e a mortalidade por semana foi reduzida em 43,9 por cento . Na região Nordeste; a duração média de tais períodos aumentou 22,2 por cento e a mortalidade atribuível à influenza por semanaaumentou 140,2 por cento . Conclusão: O presente estudo reforça a hipótese de quea vacinação contra gripe em idosos foi efetiva para a região Sul, mas nãopara a região Nordeste do Brasil. A inadequação entre o período do ano em que a vacinação é realizada e a variação sazonal da mortalidade por gripe epneumonia na região Nordeste são apontadas como possíveis fatores que teriam contribuído para esse achado / Introdução: Desde 1999, o serviço público de saúde tem promovido a vacinação anual de idosos contra a gripe no país. Poucos estudos avaliaram a efetividade da intervenção focalizando especificamente sua contribuição para a redução da mortalidade atribuível aos surtos de gripe. Objetivos: O presente estudo teve como propósito comparar a mortalidade por gripe e pneumonia de idosos (65 anos ou mais) antes e depois do início da vacinação nas regiões Nordeste e Sul do Brasil, e comparar os resultados obtidos para cada região, procurando referenciar hipóteses relativas às diferentes condições climáticas e condições socioeconômicas. Métodos: Dados oficiais de população e de mortalidade por gripe e pneumonia foram levantados junto às agências governamentais (Fundação IBGE e DATASUS) responsáveis pelo gerenciamento dessas informações. Foram estimados coeficientes semanais de mortalidade com ajuste por diferenças na distribuição por sexo e por idade. Para a identificação de surtos de gripe e a estimação da mortalidade especificamente atribuível a esses surtos, foi utilizado o modelo de Serfling. As taxas foram estudadas para os períodos 1999-2009 (em que a vacinação foi realizada) e 1996-1998 (em que a vacinação não foi realizada). Foram descritas e analisadas a magnitude das taxas em cada período, sua possível redução associada à vacinação e a ocorrência de variação sazonal. Os indicadores resultantes da comparação entre os dois períodos foram objeto de análise comparativa entre as regiões Nordeste e Sul. Resultados: Durante o período de vacinação, a média anual do número de períodos com excesso de mortalidade foi reduzida em 32,8 por cento na região Sul; em 4,5 por cento na região Nordeste. Na região Sul, a duração média de tais períodos foi reduzida em 66,2 por cento e a mortalidade por semana foi reduzida em 43,9 por cento . Na região Nordeste; a duração média de tais períodos aumentou 22,2 por cento e a mortalidade atribuível à influenza por semanaaumentou 140,2 por cento . Conclusão: O presente estudo reforça a hipótese de quea vacinação contra gripe em idosos foi efetiva para a região Sul, mas nãopara a região Nordeste do Brasil. A inadequação entre o período do ano em que a vacinação é realizada e a variação sazonal da mortalidade por gripe epneumonia na região Nordeste são apontadas como possíveis fatores que teriam contribuído para esse achado

Objetivo: Estimar o impacto da vacina conjugada contra o meningococo C (VCMC), na incidência e mortalidade, nas coortes de nascidos com e sem indicação de vacinação, no município de São Paulo (MSP); e estimar a efetividade direta da VCMC segundo esquema do Programa Nacional de Imunização. Métodos: O impacto foi avaliado por estudo descritivo, abrangendo casos de doença meningocócica (DM) notificados ao MSP, de 1998 a 2012. A definição de caso é a adotada pelo Ministério da Saúde. Descreveu-se o comportamento da DM no MSP para todo período e analisou-se a tendência da incidência e mortalidade da DM global e por faixa etária de 2008 a 2012, utilizando o modelo de Poisson. O impacto da VCMC foi analisado por meio das razões de taxas de incidência e mortalidade nos períodos anterior e posterior a introdução da VCMC. Estimou-se a fração prevenida na população (FPP) para mensurar o impacto, comparando-se taxas de incidência e mortalidade globais da DM, por faixa etária e sorogrupo C, de 2012 com as de 2009. Para estimativa da efetividade da VCMC utilizou-se estudo de caso-controle de base populacional, com quatro controles para cada caso, pareado pela área de residência dos casos. Casos e controles foram selecionados entre nascidos a partir de janeiro/2009. Casos eram aqueles com DM pelo sorogrupo C confirmado por cultura e/ou reação em cadeia de polimerase em tempo real, de 2011 a 2013, internados em hospitais do MSP, notificados à vigilância do município. Controles foram selecionados entre crianças residentes na vizinhança dos casos, sem história de DM. A efetividade da vacina foi estimada pela fórmula (1-odds ratio para vacinação). As odds ratios (OR) não ajustadas e ajustadas e respectivos intervalos de confiança (IC95 por cento ) foram estimados por regressão 11 logística condicional múltipla. A associação entre ser vacinado com VCMC e a variável dependente, DM pelo sorogrupo C, foi mensurada pela estimativa da OR após ajuste para potenciais confundidores. Resultados: O impacto da VCMC na incidência da DM por todos os sorogrupos, mensurado pela FPP foi de 62,7 por cento , 69,6 por cento e 61,4 por cento para, respectivamente menores um, um e dois anos; na DM pelo sorogrupo C de 81,6 por cento e 67,9 por cento para menores de dois anos e de dois a três anos. Houve impacto na taxa de mortalidade global da DM medido pela FPP de 86,2 por cento e 77,8 por cento respectivamente para menores de dois anos e de dois a três anos e na mortalidade da DM pelo sorogrupo C a FPP foi de 84,2 por cento para menores de quatro anos. A efetividade da VCMC foi de 97,7 por cento (IC95 por cento :99,6 por cento -89,6 por cento ) ajustada para idade, número de pessoas no quarto da criança e renda familiar. Conclusões: A estratégia brasileira com a VCMC resultou em elevado impacto nas coortes de nascidos com indicação de vacinação, mais acentuado nas taxas de mortalidade, sugerindo que a vacina confere não só proteção para a doença, mas também para formas mais graves. A VCMC foi altamente efetiva na faixa etária alvo. / Objective: To assess the impact of meningococcal C conjugate vaccine (MCCV), to estimate incidence and mortality rates of meningococcal disease (MD) in birth cohorts recommended and not recommended for vaccination and to measure direct vaccine effectiveness of the National Vaccination Program immunization schedule. Methods: We assessed the impact of MCCV in a descriptive study including cases of MD reported in the city of Sao Paulo, Brazil, from 1998 to 2012. We used the standard case definition recommended by the Brazilian Ministry of Health for MD reporting. We assessed changes in the disease epidemiology in the city for the entire study period and estimated incidence and mortality rates of MD (overall and by age group) from 2008 to 2012 using Poisson regression models. We conducted an impact analysis of MCCV by comparing incidence and mortality rates of MD before and after vaccine introduction. We also estimated the population prevented fraction (PPF) by comparing incidence and mortality rates of MD between 2009 and 2012 in the entire population and by age group and serogroup C. To measure vaccine effectiveness, we carried out a population-based case-control study matched for area of residence with a 4-to-1 ratio of controls to cases. Cases and controls were selected among children born from January 2009. Cases were those children admitted to the citys hospitals who were diagnosed with MD serogroup C (MDC) confirmed by culture and/or real-time polymerase chain reaction and reported to the surveillance system from 2011 to 2013. Controls were selected among children with no history of MD from neighboring areas of cases. We calculated vaccine effectiveness using the formula (1 odds ratio [OR] for 13 vaccination) and estimated crude and adjusted ORs and related 95 per cent confidence intervals (95 per cent CI) by conditional multiple logistic regression. We assessed the association between MCCV vaccination and MDC the dependent variable by estimating OR after adjustment for the potential confounders. Results: There was an impact of MCCV on the incidence of MD in all serogroups, the PPF among children under age one, age one, and age two were 62.7 per cent , 69.6 per cent , and 61.4 per cent , respectively; and in serogroup C, the PPF in children under age two and age two to three were 81.6 per cent and 67.9 per cent . There was also an impact on the overall mortality rate of MD, the PPF in children under age two and age two to three were 86.2 per cent and 77.8 per cent ; and on mortality of MDC, the PPF was 84.2 per cent in children under age four. MCCV effectiveness in children was 97.7 per cent (95 per cent CI 99.6 per cent 89.6 per cent ) after adjusting for age, number of persons per room, and household income. Conclusions: The MCCV strategy implemented in Brazil had a high impact on birth cohorts recommended for vaccination. This impact was more pronounced on mortality rates, which suggests that, in addition to preventing disease, MCCV can prevent more severe forms of MD. MCCV proved highly effective in the age groups targeted.

A esporotricose é uma doença crônica que envolve o tecido subcutâneo afetando seres humanos e animais, causada pelo fungo termodimórfico Sporothrix spp.. A esporotricose é endêmica na América latina, principalmente no Brasil que teve o maior surto zoonótico já registrado, ocorrendo na cidade do Rio de Janeiro. A espécie Sporothrix brasiliensis é a mais diagnosticada no surto e a mais virulenta entre as especies de Sporothrix spp., causando formas mais graves da doença. A esporotricose em gatos é endêmica, fatal e um dos principais fatores pelo alto número de casos no Rio de Janeiro. O tratamento é longo e não vem sendo o suficiente para conter o número de casos da doença. Uma vacina contra a esporotricose poderia mudar esse paradigma no Brasil. O presente trabalho obteve o proteoma da cepa S. brasiliensis 5110 por meio de uma eletroforese 2D, e caracterizou e identificou as possíveis proteínas imunogênicas do fungo por espectrometria de massa. Por meio de programas de predição, foi avaliado e sintetizado 7 sequências de aminoácidos,das proteínas identificadas com maiores chances de se acoplar a molécula MHC de classe II. Apenas 3 foram capazes de induzir proliferação in vitro, os peptídeos ZR3, ZR4 e ZR8, que foram utilizados como vacina na esporotricose subcutânea e avaliados sua eficácia por meio da carga fúngica, diâmetro das lesões, perfil celular e níveis de citocinas. Neste trabalho concluímos que o peptídeo ZR8 foi o melhor candidato à vacina na esporotricose, pois foi capaz de diminuir o diâmetro das lesões, aumentar os níveis de citocinas protetoras (IFN-γ, IL-17A e IL-1β) e aumentar o número de células TCD4+ e CD3-/CD19+, sendo assim induzindo uma resposta imunológica protetora na esporotricose subcutânea. / Sporotrichosis is a chronic disease, which involves the subcutaneous tissue affecting humans and animals caused by the thermodymorphic fungus Sporothrix spp. Sporotrichosis is endemic in Latin America, mainly in Brazil that had the largest zoonotic outbreak ever recorded, occurring in the city of Rio de Janeiro. The Sporothrix brasiliensis is the species more diagnosed in the outbreak and most virulent, causing severe forms of the disease. Sporotrichosis in cats is endemic, fatal and the main factors due to the high number of cases of the disease in Rio de Janeiro. The treatment is long, and has not been enough to contain the number of cases of sporotrichosis. A vaccine against sporotrichosis could change this paradigm in Brazil. The present work obtained the proteome of S. brasiliensis 5110 strain by 2D electrophoresis, and characterized and identified possible immunogenic proteins by mass spectrometry. By prediction programs were evaluated and synthesized 7 peptide sequence from antigenic proteins that have the highest chances of coupling to the MHC class II molecule. From these 7 peptides only 3 were able to induce proliferation in vitro, called ZR3, ZR4 and ZR8 peptides, that were used as a vaccine in subcutaneous sporotrichosis and evaluated their efficacy through fungal load, lesion diameter, cell profile and cytokine levels. We conclude that ZR8 peptide was the best candidate for sporotrichosis vaccine, since it was able to decrease the lesion diameter, increase the levels of protective cytokines (IFN-γ, IL-17A and IL-1β) and increase the number of CD4+ T cells and CD3-/CD19+ inducing a protective immune response in subcutaneous sporotrichosis.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-25T12:58:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177092 bytes, checksum: 246c209ae17c914f543ab3f722afaf0d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T12:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177092 bytes, checksum: 246c209ae17c914f543ab3f722afaf0d (MD5) Previous issue date: 2018-02-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença de Chagas é causada pelo protozoário intracelular obrigatório Trypanosoma cruzi, e transmitido a humanos e animais vertebrados através do contato de uma solução de continuidade da pele com fezes de insetos triatomíneos infectados. Atualmente, a doença afeta aproximadamente 16 milhões de pessoas em todo o mundo. Somente duas drogas estão disponíveis no mercado para o tratamento de doentes: Benzonidazol e Nifurtimox, no entanto estas apresentam diversos efeitos colaterais, são contra-indicadas a pacientes imunossuprimidos e são eficientes apenas na fase aguda da doença. Levando-se em consideração a eficácia limitada e toxicidade das drogas disponíveis, o desenvolvimento de uma estratégia de vacinação representa uma alternativa para o controle desta doença. Neste sentido, nosso objetivo foi avaliar a resposta imune induzida pela vacinação utilizando a estratégia vacinal “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi, em camundongos BALB/c. Os resultados indicaram que a imunização com o “prime-boost”, induziu produção de níveis semelhantes tanto de IgG1 quanto de IgG2a, e embora o grupo imunizado com três doses da rNTPDase-1 tenha produzido níveis mais elevados de anticorpos precocemente, quando a avaliação foi feita 15 dias após a última imunização, verificamos que esses níveis eram semelhantes para ambos os grupos imunizados, sendo observada produção mista desses isótipos. Também foi observado, para o grupo ”prime-boost ”, aumento significativo na produção de citocina Th1 (TNF-α) e da quimiocina MCP-1. Avaliando o perfil de células T, verificamos que os animais vacinados seguindo esse mesmo protocolo apresentaram um aumento significativo na frequência de linfócitos T CD8 (CD3 + CD8 + ), além de aumentar de forma significativa o percentual de células T CD4 e CD8 com fenótipo de memória (CD44 high CD62L), quando comparado ao grupo que recebeu três doses da rNTPDase-1 e também o grupo inoculado somente com PBS (controle). Após o desafio, observamos que a imunização tanto com a rNTPDase-1 quando com o “prime- boost” foram eficazes em reduzir a carga parasitária presente no tecido cardíaco dos animais vacinados em comparação ao grupo controle, no entanto a carga parasitária presente no grupo “prime-boost” era inferior quando comparada ao grupo imunizado somente com a rNTPDase-1. A imunização utilizando esses dois protocolos, também resultou em 100% da sobrevivência quando comparados ao grupo controle, onde 50% dos animais haviam morrido durante o período experimental. Diante dos dados observados, sugerimos que a imunização seguindo a estratégia vacinal “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi, além de induzir polarização da resposta imune para o tipo Th1, também resultou em melhora na proteção. Sendo assim, imunização seguindo a estratégia vacinal “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi pode ser vista como promissora no controle da doença de Chagas. / Chagas disease is caused by the required intracellular protozoan Trypanosoma cruzi, transmitted to humans and vertebrates animals through of contacto of a continuity solution skin with feces of infected triatomine insects. The disease currently affects approximately 16 million people worldwide. Only two drugs are commercially available for the treatment of patients, such as Benzonidazole and Nifurtimox, however, they have several side effects, are not indicated in immunosuppressed patients and are efficient only in the acute phase of the disease. Due to the limited efficacy and toxicity of the available drugs, the development of a vaccination strategy represents an alternative for the control of this disease. In this regard, our objective was to study the immune response induced by the vaccination using “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi, in mice BALB/c. Our results indicated that immunization with prime-boost induced production of similar levels of IgG1 and IgG2a, and although the group immunized with rNTPDase-1 produced higher levels of antibodies at the immunization intervals when the evaluation was done 15 days later the last immunization, we check that these levels were similar for both immunized, being observed mixed production of these isotypes. We also observed a significant increase in the production of Th1 cytokine (TNF-α) and chemokine MCP-1 in the prime-boost group, and the T-cell profile showed that the animals vaccinated following the same protocol had a significant increase in the frequency of CD8 T lymphocytes (CD3 + CD8 + ), in addition to significantly increasing the percentage of CD4 and CD8 T cells with memory phenotype (CD44 high CD62L) when compared to the rNTPDase-1 group and also the group inoculated only with PBS (control). After the challenge, we observed that immunization with NTPDase-1 was effective in reducing the level of parasite present in the cardiac tissue of the vaccinated animals compared to the control group, however the parasite level present in the prime-boost group was lower when compared to the group immunized only with rNTPDase-1. Immunization using these two protocols also resulted in 100% survival when compared to the control group, where 50% of the animals died during the experimental period. The observed data, suggest that immunization following “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 of T. cruzi strategy, induced polarization of the Th1-type immune response, also resulted in improved protection. Thus, immunization following the this strategy can be seen as promising in the control of Chagas' disease.

Introdução: Desde 1999, o serviço público de saúde tem promovido a vacinação anual de idosos contra a gripe no país. Poucos estudos avaliaram a efetividade da intervenção focalizando especificamente sua contribuição para a redução da mortalidade atribuível aos surtos de gripe. Objetivos: O presente estudo teve como propósito comparar a mortalidade por gripe e pneumonia de idosos (65 anos ou mais) antes e depois do início da vacinação nas regiões Nordeste e Sul do Brasil, e comparar os resultados obtidos para cada região, procurando referenciar hipóteses relativas às diferentes condições climáticas e condições socioeconômicas. Métodos: Dados oficiais de população e de mortalidade por gripe e pneumonia foram levantados junto às agências governamentais (Fundação IBGE e DATASUS) responsáveis pelo gerenciamento dessas informações. Foram estimados coeficientes semanais de mortalidade com ajuste por diferenças na distribuição por sexo e por idade. Para a identificação de surtos de gripe e a estimação da mortalidade especificamente atribuível a esses surtos, foi utilizado o modelo de Serfling. As taxas foram estudadas para os períodos 1999-2009 (em que a vacinação foi realizada) e 1996-1998 (em que a vacinação não foi realizada). Foram descritas e analisadas a magnitude das taxas em cada período, sua possível redução associada à vacinação e a ocorrência de variação sazonal. Os indicadores resultantes da comparação entre os dois períodos foram objeto de análise comparativa entre as regiões Nordeste e Sul. Resultados: Durante o período de vacinação, a média anual do número de períodos com excesso de mortalidade foi reduzida em 32,8 por cento na região Sul; em 4,5 por cento na região Nordeste. Na região Sul, a duração média de tais períodos foi reduzida em 66,2 por cento e a mortalidade por semana foi reduzida em 43,9 por cento . Na região Nordeste; a duração média de tais períodos aumentou 22,2 por cento e a mortalidade atribuível à influenza por semanaaumentou 140,2 por cento . Conclusão: O presente estudo reforça a hipótese de quea vacinação contra gripe em idosos foi efetiva para a região Sul, mas nãopara a região Nordeste do Brasil. A inadequação entre o período do ano em que a vacinação é realizada e a variação sazonal da mortalidade por gripe epneumonia na região Nordeste são apontadas como possíveis fatores que teriam contribuído para esse achado / Introdução: Desde 1999, o serviço público de saúde tem promovido a vacinação anual de idosos contra a gripe no país. Poucos estudos avaliaram a efetividade da intervenção focalizando especificamente sua contribuição para a redução da mortalidade atribuível aos surtos de gripe. Objetivos: O presente estudo teve como propósito comparar a mortalidade por gripe e pneumonia de idosos (65 anos ou mais) antes e depois do início da vacinação nas regiões Nordeste e Sul do Brasil, e comparar os resultados obtidos para cada região, procurando referenciar hipóteses relativas às diferentes condições climáticas e condições socioeconômicas. Métodos: Dados oficiais de população e de mortalidade por gripe e pneumonia foram levantados junto às agências governamentais (Fundação IBGE e DATASUS) responsáveis pelo gerenciamento dessas informações. Foram estimados coeficientes semanais de mortalidade com ajuste por diferenças na distribuição por sexo e por idade. Para a identificação de surtos de gripe e a estimação da mortalidade especificamente atribuível a esses surtos, foi utilizado o modelo de Serfling. As taxas foram estudadas para os períodos 1999-2009 (em que a vacinação foi realizada) e 1996-1998 (em que a vacinação não foi realizada). Foram descritas e analisadas a magnitude das taxas em cada período, sua possível redução associada à vacinação e a ocorrência de variação sazonal. Os indicadores resultantes da comparação entre os dois períodos foram objeto de análise comparativa entre as regiões Nordeste e Sul. Resultados: Durante o período de vacinação, a média anual do número de períodos com excesso de mortalidade foi reduzida em 32,8 por cento na região Sul; em 4,5 por cento na região Nordeste. Na região Sul, a duração média de tais períodos foi reduzida em 66,2 por cento e a mortalidade por semana foi reduzida em 43,9 por cento . Na região Nordeste; a duração média de tais períodos aumentou 22,2 por cento e a mortalidade atribuível à influenza por semanaaumentou 140,2 por cento . Conclusão: O presente estudo reforça a hipótese de quea vacinação contra gripe em idosos foi efetiva para a região Sul, mas nãopara a região Nordeste do Brasil. A inadequação entre o período do ano em que a vacinação é realizada e a variação sazonal da mortalidade por gripe epneumonia na região Nordeste são apontadas como possíveis fatores que teriam contribuído para esse achado

A piodermite bacteriana afeta cães de todas as idades, podendo ser recorrente por toda a vida. O principal agente etiológico é o Staphylococcus pseudintermedius, que é um micro-organismo saprófita da pele, agindo como oportunista frente a alguma fragilidade na barreira imunológica. A imunização dos cães através de uma vacina eficaz tem sido um desafio, pois a vacina comercial atualmente utilizada em clínicas veterinárias é de uso terapêutico e não tem caráter preventivo. Um dos problemas da vacina de uso terapêutico para piodermite é a dependência de um bom diagnóstico diferencial em relação a outras doenças de pele ou sistêmicas que tem como sequelas a erupção cutânea. Os animais que recebem a vacina terapêutica e não a preventiva são os que já apresentam problemas de pele reincidentes e são tratados concomitantemente com antibióticos. O objetivo do presente trabalho é desenvolver um antígeno vacinal com possibilidade de aplicação por via intradérmica de modo a tratar preventivamente a piodermite canina causada por Staphylococcus spp:. A via de administração intradérmica tem como finalidade estimular uma resposta imune sistêmica, principalmente por ativação das células dendríticas da derme, de modo a estimular estas células apresentadoras de antígeno no local onde ocorrem as infecções piodérmicas. Os resultados apresentados neste trabalho demonstraram que a inoculação intradérmica foram estatisticamente igual, quando comparada com a inoculação intraperitoneal, no que se refere à inibição por anticorpos: da atividade hemolítica, da atividade da catalase, da atividade da coagulase e da atividade citotóxica, bem como na reação antígeno-anticorpo determinado por ensaio imunoenzimático. Este trabalho também demonstra que a melhor formulação do antígeno estafilocóccico foi preparado a partir de sobrenadante de cultura diafiltrado por filtração tangencial com \"cut off\" de 5.000 Da. Outras preparações utilizando somente células bacterianas ou associação de sobrenadante com células bacterianas, apesar de produzirem antigenicidade, apresentaram títulos inferiores do que quando empregado somente sobrenadante de cultura diafiltrado. / The bacterial pyoderma affects dogs of all ages and can be recurrent for a lifetime. The main etiologic agent is Staphylococcus pseudintermedius, which is a saprophytic organism of the skin, acting as an opportunistic opposite to some weakness in the immune barrier. The immunization of dogs through an effective vaccine has been a challenge, since currently it has been used commercially in veterinary clinics is therapeutic and has a preventive character. One of the problems of the therapeutic use of the vaccine for pyoderma is dependent on a good differential diagnosis in relation to other skin diseases or systemic consequences which is the rash, so treatment often does not reach its goal. Animals receiving this vaccine are those who already have skin problems again and are receiving concomitant antibiotics. The objective of this study is to develop a vaccine antigen with the possibility of implementing a preventive treatment for canine pyoderma caused by Staphylococcus spp: through pre-clinical studies, for use in young and adults, preferably before they develop any type of skin disorder primary or secondary. The administration route is intradermal, stimulating an immune response primarily by dendritic cells to become a barrier to microorganisms, as well as systemic, by the production of antibodies, to last for at least one year until needed in the body booster vaccination. The results presented here demonstrated that the intradermal inoculation was statistically equivalent when compared to intraperitoneal inoculation with regard to inhibition by antibody: of the hemolytic activity, catalase activity, the coagulase activity and cytotoxic activity, as well as antigen-antibody reaction determined by enzyme immunoassay. This work also demonstrates that the best estafilococcico antigen formulation was prepared from the culture supernatant diafiltered by tangential filtration with \"cut off\" of 5,000 Da. Other preparations using only the bacterial cells or the association of supernatant with bacterial cells, although producing antigenicity, showed lower titles than when used dialyzed culture supernatant alone.

Influenza, também conhecida como gripe, é uma doença infecciosa viral que acomete um grande número de indivíduos anualmente, sendo responsável por um elevado número de internações e óbitos. O agente etiológico é o Myxovirus influenzae, vírus envelopado, de RNA de fita simples e polaridade negativa. A vacinação é a forma mais eficaz de se prevenir a infecção pelo vírus, no entanto, a capacidade produtiva dessa vacina não é suficiente para a vacinação da totalidade da população mundial, principalmente em casos de pandemia. Esse projeto teve por objetivo desenvolver uma vacina influenza (fragmentada e inativada) adjuvada, visando aumentar a capacidade produtiva dessa vacina no Instituto Butantan, que hoje é estimada em aproximadamente 40 milhões de doses por campanha. A utilização de adjuvantes na formulação da vacina influenza é capaz de produzir a mesma resposta imunológica protetora contra esse vírus, utilizando uma quantidade menor dos antígenos vacinais, aumentando a capacidade de produção da vacina em até quatro vezes. Foram estudadas 23 formulações adjuvantes utilizando o esqualeno como referência (formulação similar ao MF59®, adjuvante desenvolvido pela Novartis), vitaminas lipossolúveis (vitaminas A, D e E), vitamina B2 (vitamina hidrossolúvel), MPLA (monofosforil lipídio A, produzido pelo Instituto Butantan como subproduto da vacina pertussis low) e gel de hidróxido de alumínio. Para tanto, foram avaliadas a resposta imune conferida a camundongos BALB/c após imunização com diferentes formulações de vacina influenza (fragmentada e inativada) adjuvada e a existência, ou não, de toxicidade induzida pelas formulações vacinais estudadas. As formulações vacinais mais promissoras farão parte das formulações candidatas para realizações de ensaios clínicos. Os animais foram imunizados por via intraperitoneal com as formulações vacinais e foram colhidas amostras de sangue para ensaios sorológicos (inibição de hemaglutinação e ELISA) e células esplênicas para avaliação celular (dosagem de citocinas por citometria de fluxo: IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17 TNF-α e INF-γ). Além disso, em um dos experimentos avaliou-se a formação de memória imunológica contra influenza, parâmetro importante em se pensando em uma vacina. Os três primeiros experimentos foram uma triagem a partir da qual selecionaram-se as melhores formulações que foram testadas no último experimento. Nele foram avaliados além da indução de resposta imune a toxicidade e a memória imunológica. Todas as 23 formulações estudadas induziram resposta minimamente protetora nos animais, com exceção da formulação contendo apenas MPLA como adjuvante. As formulações que se mostraram mais promissoras continham além do gel de AI(OH)3 MPLA de B. pertussis ou vitamina B2. Isso sem considerar o tocoferol (vitamina E), que embora tenha apresentado bons resultados acabou preterido em decorrência de sua potencial relação com casos de narcolepsia descritos na literatura. O teste de memória foi capaz de demonstrar que essas formulações produzem resposta de memória imunológica duradoura. Assim, tem-se resultados promissores para novos estudos pré-clínicos e clínicos com a vacina influenza (fragmentada e inativada) sazonal (trivalente). / Influenza, also known as flu, is a viral infectious disease that infects a large number of people annually, being responsible by large morbidity and mortality rates. The etiologic agent is the Myxovirus influenzae, an enveloped virus with single-stranded RNA and negative polarity. Vaccination is the best way to prevent the virus infection; however, the production capacity of this vaccine is not sufficient to vaccinate the entire world population, especially in cases of pandemics. This project aimed to develop an adjuvanted influenza vaccine (split and inactivated), increasing the productive capacity of this vaccine in Instituto Butantan, which is estimated in approximately 40 million of doses by campaign. Influenza vaccines formulated with adjuvants can produce the same protective immunological response against the virus using less amount of antigen increasing the production capacity of this vaccine up to four times. Twenty-three adjuvants containing fat-soluble vitamins (vitamins A, D and E), vitamin B2 (water-soluble vitamin), MPLA (monophosphoryl lipid A, produced by Instituto Butantan as a byproduct of pertussis low vaccine production) and aluminum hydroxide gel were studied. An adjuvant similar to MF59® (Novartis adjuvant) containing squalene was used as control. The immune response elicited in BALB/c mice after immunization with the different formulations of the influenza vaccine and the existence or not of toxicity induced by the vaccines formulations were studied. The most promising formulation will be part of the candidate formulations of clinicai trials. The animais received the vaccine formulations intraperitoneally and at specific days blood samples were taken to serological tests (hemagglutination inhibition and ELISA). At the end, they were euthanized to collect the spleens and splenic cells were cultivated to evaluate cytokines by flow cytometry: IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17 TNF-α and INF-γ. Furthermore, in one experiment the immunological memory against influenza was evaluated, an important parameter to vaccines. The most promising formulations contained besides to alum either B. pertussis MPLA or B2 vitamin. Tocopherol (vitamin E) presented good results too, however it has a potential relationship with reported cases of narcolepsy. The memory test was able to demonstrate that these formulations induced long lasting immune memory response. Thus, these are promising results for new pre-clinical and clinical trials with seasonal trivalent influenza vaccine (split and inactivated).

Os óleos vegetais são matérias primas de fontes renováveis. São metabolizáveis, biodegradáveis, de fácil disponibilidade e baixo custo. A necessidade de adjuvantes vacinais seguros e que possam modular a resposta imunológica Th1/Th2, favorece a busca por novas substâncias que assim se comportem. Este trabalho tem o objetivo de avaliar e identificar óleo vegetal capaz de mimetizar ação adjuvante dos óleos minerais comercialmente usados e modular a resposta imune. Foram realizados testes de toxicidade aguda in vivo, testes de formação de emulsões, de estabilidade, de qualidade e, por fim, de imunogenicidade com formulações com o vírus rábico. Algumas formulações derivadas dos óleos de girassol, canola e buriti se mostraram não tóxicas, estáveis e de boa qualidade. Os grupos de camundongos inoculados com estas formulações obtiveram respostas imunológicas que apoiam sua capacidade adjuvante, não diferenciando significativamente (p<0,05) dos resultados do óleo mineral comercial. Concluiu-se que é possível elaborar emulsões estáveis não tóxicas a partir de óleos vegetais para sua utilização como veículos e adjuvantes vacinais. Formulações vacinais em forma de emulsões de óleos vegetais, compostas na sua maior parte pelos óleos de girassol e de canola possuem potência e atividade adjuvante semelhantes e tão eficientes quanto aos do óleo mineral. Os óleos vegetais devem estar em seu estado bruto ou semirrefinado, sem a adição de antioxidantes e conservantes. Por último, parece haver uma tendência de equilíbrio de resposta Th1/Th2 para as formulações com óleos vegetais. / Vegetable oils are renewable raw materials. These substances are metabolizable, biodegradable, of easy availability and low cost. The need for safe vaccine adjuvants that can modulate the Th1/Th2 immune response drives the search for new substances with similar behavior. This study aims to evaluate and identify a vegetable oil able to mimic the adjuvant action of the mineral oils used commercially, and modulate the immune response. There were performed tests of in vivo acute toxicity, emulsion formation, stability, quality and immunogenicity with formulations with rabies virus. Some formulations derived from the sunflower, canola and buriti oils proved to be non-toxic, stable and of good quality. Groups of mice inoculated with these formulations had immune responses supporting their adjuvant capacity, not differing significantly (p <0.05) from the results of the commercial mineral oil. It was concluded that it is possible to prepare stable non-toxic emulsions from vegetable oils to be used as vaccine adjuvants and vehicles. Vaccine formulations as emulsions from vegetable oil, composed mostly by the oils of sunflower and canola had adjuvant activity and potency similar to and as effective as the mineral oil. The vegetable oils should be in its raw state or semi refined, without the addition of antioxidants and preservatives. Finally, there seems to be a tendency to balance Th1/Th2 response by formulations with vegetable oils.