Al nacimiento, la transición feto-neonatal involucra importantes cambios cardiorrespiratorios, lo que permite una adaptación eficiente del sistema cardiopulmonar para mantener la vida del neonato. En el Alto Andino, un escenario de hipoxia hipobárica natural, esta transición se ve comprometida debido a la menor disponibilidad de oxígeno, pudiendo generar hipertensión arterial pulmonar del neonato y falla cardíaca derecha. Sin embargo, esta transición cardiopulmonar no ha sido bien caracterizada en la etapa neonatal bajo condiciones de hipoxia crónica. Es por ello, que este estudio tiene por objetivo caracterizar los cambios ecocardiográficos y hemodinámicos de corderos recién nacidos en un periodo de treinta días, tanto en normoxia como en hipoxia hipobárica, el cual permitió determinar por primera vez y de forma no invasiva, los cambios que caracterizan la transición cardiopulmonar de la vida fetal a la neonatal. Al momento de nacer, los ejemplares de tierras altas presentaron disfunción ventricular, caracterizada por una reducción de la fracción de eyección (~23%), engrosamiento gradual del septum interventricular y de la pared del ventriculo derecho (~40%). Además, la arteria pulmonar presentó aumentados índices de resistencia y la relación S/D en tierras altas. En resumen, este estudio ha permitido conocer la función y estructura cardiopulmonar del neonato, abriendo posibilidades predecir resultados con otras especies de interés médico veterinario, estableciendo nuevas metas en el diagnostico cardiológico temprano. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1151119

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T21:02:11Z : No. of bitstreams: 1 lorena_sers_dr_botfmvz.pdf: 632999 bytes, checksum: 35174e377fd65ef6483f2f8509b96974 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O uso de analgésicos em animais é justificado moral e cientificamente. Para tal, é necessário que os profissionais saibam reconhecer e tratar a dor de forma adequada em animais. Objetivou-se correlacionar diversos dados demográficos para obter o perfil do médico veterinário brasileiro de grandes e pequenos animais. O questionário da pesquisa foi composto por: dados pessoais, utilização de fármacos analgésicos, analgesia, conduta no alívio da dor, uso de analgésicos em diversos procedimentos de grandes e pequenos animais, avaliação da dor e atualizações. A estatística foi realizada pelo programa SAS for Windows versão 9.1.3 com estatística descritiva com análise de frequência. Para as comparações simples foi utilizado o teste de qui-quadrado (x2). Foram obtidos 1.298 questionários de pequenos animais e 713 de grandes. Mulheres e profissionais graduados havia menos de dez anos conferiram maiores escores de dor que homens e profissionais formados havia mais de dez anos, porém a duração do tratamento não diferiu entre os gêneros. Os opioides mais utilizados para a analgesia foram tramadol (79%) e morfina (50,5%), em cães e gatos, e butorfanol (43,4%) e tramadol (39%) em grandes animais. Os efeitos adversos mais reportados dos opioides em gatos foram depressão respiratória e excitação. Em cães os principais efeitos adversos assinalados foram depressão respiratória e êmese. Para grandes animais, as preocupações com o uso desses fármacos foram: risco de excitação e síndrome cólica equina. Mais de 50% dos veterinários não utilizava opioides em bovinos. Os anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) mais escolhidos para pequenos animais foram meloxicam (81%) e cetoprofeno (70,4%), e flunixin meglumine (83,2%) e cetoprofeno (67,6%) em grandes animais. Os efeitos... / The use of analgesics in animals is morally and scientifically justified. According to that, the professionals should know how to recognize and treat pain in animals. The aim of this study was to correlate the demographic data of the Brazilian veterinarians, with the use of analgesics, the factors that affected the decision on the use of analgesia, attitudes, knowledge and methods of obtaining information on the evaluation and treatment of pain in animals. The questionnaire was composed of demographics, personal data, use of analgesics in general and specific procedures, analgesia, attitudes in the assessment and relief of pain and types of information in the area. The descriptive statistics with frequency analysis was performed using SAS for Windows 9.1.3. Chi-square (x2) for simple comparisons test was used. Questionnaires were obtained from 1298 small and 713 large animal veterinarians. Women and veterinarians graduated for less than ten years attributed higher pain scores than men, and veterinarians graduated for over ten years, but the frequency and duration of analgesic treatment did not differ between gender. The most commonly used opioid for analgesia of small animals were tramadol (79%) and morphine (50.5%) for dogs and cats, and butorphanol (43.4%) and tramadol (39%) for large animals. The most important side effects of opioids in small animals were respiratory depression and excitement, for cats and emesis in dogs and excitement and colic syndrome in 4 horses. NSAIDs of choice for small animals were meloxicam (81%) and ketoprofen (70.4%) and for large animals, flunixin meglumine (83.2%) and ketoprofen (67.6%). Side effects of NSAIDs most frequently reported for all species were gastric changes and nephrotoxicity. The most important limiting factors for the use of NSAIDs and opiods were the side effects for horses and the cost for cattles. The cats received lower pain... (Complete abstract click electronic access below)

Estudaram-se as artérias cerebrais e cerebelares rostral, média e caudal na superfície do encéfalo de 30 Didelphis albiventris, 14 machos e 16 fêmeas, com o sistema arterial preenchido com Látex 603 pigmentado, e fixados em formol 20%. Sistematizaram-se as artérias e seus principais ramos, determinando a área territorial de irrigação, e as principais variações. A artéria cerebral rostral apresentou-se, à direita em 100% das peças e à esquerda esteve presente em 96,7% e ausente em 3,3% dos casos. Dividiu-se em ramo medial, tronco hemisférico rostral, e ramo lateral, artéria lateral do bulbo olfatório, presentes em 100% das amostras, bilateralmente. O tronco hemisférico rostral bifurcou-se em ramo rostral, artéria medial do bulbo olfatório, presente em todas as peças em ambos os antímeros, e ramo caudal, artéria inter-hemisférica rostral. Esta originou-se conforme o padrão em 90% dos casos à direita e em 86,7% à esquerda, nas amostras restantes teve origem de um ramo emitido pelo antímero oposto. A artéria cerebral média, presente em todos os casos nos dois antímeros, apresentou os seguintes ramos colaterais: ramos ventrorostrais presentes em 66,7% preparações; ramo ventrocaudal medial para o lobo piriforme, presente em 100% das amostras à direita e em 83,3% à esquerda; ramo ventrocaudal lateral para o lobo piriforme, presente em 100% das peças nos dois antímeros; Iº ramo hemisférico dorsolateral presente em 93,3% dos encéfalos à direita, e em 90% à esquerda; IIº ramo hemisférico dorsolateral presente em 36,6% das peças bilateralmente; ramo dorso-rostral presente à direita em 56,7% das amostras e à esquerda em 80% das preparações. A artéria cerebral média continua-se como ramo terminal em todos os casos, bilateralmente. A artéria cerebral caudal, presente bilateralmente em todas as peças, originou: ramo hemisférico tentorial em 83,3% dos casos à direita e em 80% à esquerda, este ramo originou-se da artéria comunicante caudal em 10% das peças nos dois antímeros ou ainda originou-se do tronco cerebral médio-rostral em 6,7% à direita e em 10% das preparações à esquerda; artéria tectal rostral à direita ímpar em 96,7% e dupla em 3,3% dos casos e à esquerda ímpar em 100% das peças. O ramo terminal da artéria cerebral caudal originou a artéria inter-hemisférica caudal em 93,3% das amostras à direita e em 86,7% à esquerda. A artéria cerebelar rostral originou-se como continuação natural do ramo terminal da artéria basilar em 93,3% dos casos, bilateralmente, percorrendo as faces rostral e dorsal dos hemisférios cerebelares , formando por sobre estes uma alça. Em 6,7% das amostras não formou uma alça. A artéria tectal caudal apresentou-se à direita ímpar em 83,3% e dupla em 16,7% das peças, à esquerda ímpar em 86,7%, dupla em 10% e ausente em 3,3% das amostras. A artéria cerebelar média à direita mostrou-se dupla em 70% e ímpar em 30% das peças, à esquerda, dupla em 56,7% e ímpar em 43,3% dos achados. A artéria cerebelar caudal apresentou-se à direita ímpar em 93,3% e dupla em 6,7% das peças e à esquerda ímpar em 86,7% e dupla em 13,3% das amostras.

Resumo: O procedimento de diálise peritoneal é um método de tratamento renal substitutivo muito utilizado na medicina humana. Os trabalhos experimentais em ratos ajudam a compreender as alterações que ocorrem no peritônio, testar novas soluções e aumentar o entendimento sobre os efeitos da diálise na membrana peritoneal. O objetivo deste trabalho foi introduzir o rato como modelo experimental de diálise peritoneal nesta instituição e estudar o efeito da concentração de glicose e da temperatura no peritônio. Foram utilizados ratos Wistar machos. Os ratos receberam injeção intraperitoneal diária por 30 dias com 10ml de fluidos de DP (GSC, glicose 4,25% temperatura ambiente; GSCA, glicose 4,25% aquecida; GSF, solução fisiológica temperatura ambiente; GSFA, solução fisiológica aquecida) e o grupo controle que não recebeu nenhum fluido. No final do experimento foi realizado lavado peritoneal para exame microbiológico e o sacrifício dos animais para colheita de amostras do peritônio para a histomorfologia e a contagem de mastócitos. Na contagem de mastócitos pode-se observar que os animais dos grupos GSC e GSFA apresentavam uma diferença significativa em relação aos animais do grupo controle. Na análise histomorfológica pode-se observar uma alteração significativa do peritônio entre os grupos GSC, GSCA e GSFA quando comparados com o grupo controle. Concluie-se neste estudo que o rato pode ser utilizado como modelo experimental de diálise peritoneal e que a concentração de glicose e a temperatura alteraram a histomorfologia e a contagem de mastócitos do peritônio. / Abstract: The procedure of the peritoneal dialysis is a method of substitutive renal treatment very used in human medicine. The experimental works in rat help to understand the alterations that happen in the peritoneum, to test new solutions and to increase the comprehension on the effects of the dialysis in the membrane peritoneal. The purpose of this work was to introduce the rat as an experimental model of peritoneal dialysis in this institution and to study the effect of the glucose concentration and temperature in the peritoneum. Male Wistar rats were used. The rats received daily intraperitoneal injection for 30 days with 10 ml of fluids the PD (GSC, glucose 4.25 % room temperature; GSCA, glucose 4.25 % heated up; GSF, physiological saline room temperature; GSFA, heated up physiological saline) and the group control that didn't receive any fluid. In the end of the experiment washed peritoneal was accomplished for microbiologic exam and the sacrifice of the animals for crop of samples of the peritoneum for the histomorphology and the mast cells counting. In the mast cells counting it can be observed that the animals of the groups GSC and GSFA presented a significant difference in relation to the animals of the group controls. In the histomorphologic analysis a significant alteration of the peritoneum can be observed among the groups GSC, GSCA and GSFA comparing with the group control. It follows that the rat can be used as experimental model of dialysis peritoneal and the glucose concentration and temperature altered the histomorphology and the mast cells counting in peritoneum. / Orientador: Sônia Regina Verde da Silva Franco / Coorientador: Jacqueline Costa Teixeira Caramori / Banca: Flávio Quaresma Moutinho / Banca: André Luis Balbi / Mestre

La evaluación electrocardiográfica continua (EEC), es una técnica diagnostica complementaria, no invasiva y de fácil instalación que, permite registrar el ritmo cardiaco de¡ caballo durante un periodo prolongado y bajo condiciones reales de esfuerzo. El caballo de carrera presenta una mayor variación en la frecuencía y ritmo cardiaco que otras especies domésticas. Al momento no se tiene evidencia concreta que dichas variaciones tengan efecto en el rendimiento deportivo de estos animales. El presente estudio tiene como objetivo describir los cambios electrocardiográficos ocurridos antes, durante y después de¡ ejercicio en equinos Pura Sangre de Carrera, en el Hipódromo de Monterrico, para lo cual se estudiaron 21 animales, de edades entre 3 y 5 años, y de ambos sexos, previamente sometidos a examen clíníco. El ritmo básico predominante fue el ritmo sinusal normal observado en 11 animales, mientras los cambios en el ritmo y los trastornos de la conducción estuvieron presentes en un total de 10 animales. Nuestros resultados mostraron una relación entre la presencia de arritmías cardiacas y el rendimiento deportivo de los equinos (p<0.05). Para nuestra población estudiada, la presencia de alteraciones en la frecuencia y ritmo cardiaco, detectados por la EEC, tiene una importante relación con el desempeño deportivo de los caballos de carrera. / -- The continued Ambulatory Electrocardiography (cAECG) is a complementary, non invasive and easy﷓installment diagnostic technique. It allows monitoring the horse heart rate during a long period and even under real effort conditions. The variation of heart frequency and rhythm of racing horses is higher than in other domestic species. At this time, there is no concrete evidence that such variations have an effect: on the sportive performance of these animals. The purpose of this study was to describe the electrocardiograph changes before, during and after the exercise of thoroughbred racing horses at the Monterrico racecourse, a total of twenty﷓one horses were enrolled. The horse’s ages were ranged from 3 to 5 years old. Both genders were included. A previous clinical examination was performed to each horse. The normal sinus rhetoric was predominant (52%). Rhythm changes and conduction disorders were identified in 48% of the animals. Our results showed a relationship between the presence of cardiac arrhythmia and the sportive performance of the horses (p<0,05). In the studied population, the presence of rhythm and frequency cardiac disorders, detected by cAECG, had an important relationship with the sportive performance of the racing horses. / Tesis

La evaluación electrocardiográfica continua (EEC), es una técnica diagnostica complementaria, no invasiva y de fácil instalación que, permite registrar el ritmo cardiaco de¡ caballo durante un periodo prolongado y bajo condiciones reales de esfuerzo. El caballo de carrera presenta una mayor variación en la frecuencía y ritmo cardiaco que otras especies domésticas. Al momento no se tiene evidencia concreta que dichas variaciones tengan efecto en el rendimiento deportivo de estos animales. El presente estudio tiene como objetivo describir los cambios electrocardiográficos ocurridos antes, durante y después de¡ ejercicio en equinos Pura Sangre de Carrera, en el Hipódromo de Monterrico, para lo cual se estudiaron 21 animales, de edades entre 3 y 5 años, y de ambos sexos, previamente sometidos a examen clíníco. El ritmo básico predominante fue el ritmo sinusal normal observado en 11 animales, mientras los cambios en el ritmo y los trastornos de la conducción estuvieron presentes en un total de 10 animales. Nuestros resultados mostraron una relación entre la presencia de arritmías cardiacas y el rendimiento deportivo de los equinos (p<0.05). Para nuestra población estudiada, la presencia de alteraciones en la frecuencia y ritmo cardiaco, detectados por la EEC, tiene una importante relación con el desempeño deportivo de los caballos de carrera. / The continued Ambulatory Electrocardiography (cAECG) is a complementary, non invasive and easy﷓installment diagnostic technique. It allows monitoring the horse heart rate during a long period and even under real effort conditions. The variation of heart frequency and rhythm of racing horses is higher than in other domestic species. At this time, there is no concrete evidence that such variations have an effect: on the sportive performance of these animals. The purpose of this study was to describe the electrocardiograph changes before, during and after the exercise of thoroughbred racing horses at the Monterrico racecourse, a total of twenty﷓one horses were enrolled. The horse’s ages were ranged from 3 to 5 years old. Both genders were included. A previous clinical examination was performed to each horse. The normal sinus rhetoric was predominant (52%). Rhythm changes and conduction disorders were identified in 48% of the animals. Our results showed a relationship between the presence of cardiac arrhythmia and the sportive performance of the horses (p<0,05). In the studied population, the presence of rhythm and frequency cardiac disorders, detected by cAECG, had an important relationship with the sportive performance of the racing horses.

Negli ultimi anni si è assistito ad un miglioramento della qualità di vita dei piccoli animali che, oltre ad aumentarne l'aspettativa di vita, ha determinato un aumento della frequenza di patologie associate all'età medio-avanzata, quali le patologie renali croniche. Il presente studio si fonda sulla necessità, sempre più sentita nella pratica clinica veterinaria, di poter fornire al proprietario del paziente affetto da CKD, una serie di parametri che, oltre a fungere da target terapeutico, possano aiutare a comprenderne la prognosi. Lo studio ha valutato una popolazione di cani affetti da CKD e ne ha seguito o ricostruito il follow-up, per tutto il periodo di sopravvivenza fino al momento dell’exitus. Di tali soggetti sono stati raccolti dati relativi ad anamnesi, esame clinico, misurazione della pressione arteriosa, diagnostica per immagini, esami ematochimici, analisi delle urine ed eventuale esame istologico renale. È stato possibile individuare alcuni importanti fattori prognostici per la sopravvivenza in pazienti con CKD. Oltre a fattori ben noti in letteratura, come ad esempio elevati valori di creatinina e fosforo, o la presenza di proteinuria, è stato possibile anche evidenziare il ruolo prognostico negativo di alcuni parametri meno noti, ed in particolare delle proteine di fase acuta positive e negative, e del rapporto albumina/globuline. Una possibile spiegazione del valore prognostico di tali parametri risiede nel ruolo prognostico negativo dell’infiammazione nel paziente con CKD: tale ruolo è stato suggerito e dimostrato nell’uomo e avrebbe alla base numerosi possibili meccanismi (sviluppo di anemia, complicazioni gastroenteriche, neoplasie, etc.), ma dati analoghi sono mancanti in medicina veterinaria. Una seconda possibile spiegazione risiede nel fatto che potenzialmente i livelli delle proteine di fase acuta possono essere influenzati dalla presenza di proteinuria nel paziente con CKD e di conseguenza potrebbero essere una conferma di come la proteinuria influenzi negativamente l'outcome. / In recent years there has been an improvement in the quality of life of small animals. In addition of increasing life expectancy, this has led to an increase in the frequency of diseases associated with elderly, such as chronic kidney disease. The present study is based on the need, in the veterinary practice, to be able to provide the owner of a patient with CKD some parameters which can help to understand the prognosis, besides being useful as a therapeutic target. The study evaluated a population of dogs with CKD and followed these dogs or rebuilt the follow-up, until the exitus. We collected data on medical history, clinical examination, blood pressure measurement, diagnostic imaging, blood tests, urinalysis and, when possible, renal histology. It was possible to identify important prognostic factors for survival in patients with CKD. The prognostic role of high levels of creatinine and phosphorus, or the presence of proteinuria is well known in the literature. It was also possible to emphasize the negative prognostic role of some less known parameters, such as acute phase proteins and albumin to globulin ratio. One possible explanation of the prognostic value of these parameters lies in the negative prognostic role of inflammation in patients with CKD: this role has been suggested and demonstrated in humans and has many possible underlying mechanisms (development of anemia, gastrointestinal complications, cancer, etc.), but similar data are missing in veterinary medicine. A second possible explanation lies in the fact that the levels of acute phase proteins may be influenced by the presence of proteinuria in the patient with CKD and therefore may be a confirmation of how proteinuria negatively affects the outcome.

Tesis por compendio de publicaciones / OBJETIVOS 1. Evaluar el uso de la alfa amilasa salivar como marcador de estrés usando técnicas tradicionales (ensayos enzimáticos) en humana, usando como modelo experimental a estudiantes de veterinaria que tenían que realizar una presentación oral de un trabajo en lengua extranjera. 2. Evaluar el uso de la alfa amilasa salivar como marcador de estrés usando técnicas tradicionales (ensayos enzimáticos) en cerdos. 3. Implementar nuevos enfoques para la medición de la alfa-amilasa en muestras de saliva de varias especies (incluidos los seres humanos) mediante la cuantificación directa de la cantidad de la alfa-amilasa salival en lugar de mediante la medición de su actividad 4. Detectar e identificar nuevos biomarcadores de estrés en la saliva mediante técnicas de proteómica. Una técnica avanzada que permite la separación e identificación de múltiples proteínas. METODOLOGÍA Esta tesis doctoral es un compendio de los siguientes artículos publicados: 1) Assessment of Stress Associated with an Oral Public Speech in Veterinary Students by Salivary Biomarkers. Tecles F, Fuentes-Rubio M, Tvarijonaviciute A, Martínez-Subiela S, Fatjó J, Cerón JJ. (2014) J Vet Med Educ. Jan 21:1-7. [Epub ahead of print]. 2) Validation of an automated method for salivary alpha-amylase measurements in pigs (Sus scrofa domesticus) and its application as a stress biomarker. Fuentes M, Tecles F, Gutiérrez A, Otal J, Martínez-Subiela S, Cerón JJ. (2011) J Vet Diagn Invest. Mar;23(2):282-7. 3) Porcine salivary analysis by two-dimensional gel electrophoresis in three acute stress models: a pilot study. Fuentes-Rubio M, Cerón J, de Torre C, Escribano D, Gutiérrez AM, Tecles F. (2014) Can J Vet Res. Apr;78(2):127-32. En el primer artículo, se midió el cortisol salival y la actividad alfa-amilasa para evaluar el estrés asociado con una presentación oral pública de los estudiantes de Patología Clínica Veterinaria. Se recogieron muestras de saliva antes y directamente después de la presentación oral de 5 minutos y a los 20 y 35 minutos después del comienzo de la misma. El cortisol alcanzó su punto máximo 20 minutos después del comienzo de la presentación, mientras que la alfa-amilasa salival alcanzó su máximo justo al final del discurso. No existió relación entre estos cambios y el nivel de estrés que se indica por el estudiante en un cuestionario, ni con el sexo del estudiante, o la calidad de la presentación. El objetivo del segundo estudio fue validar un método espectrofotométrico automatizado para la medición de alfa-amilasa salival en cerdos y evaluar su posible aplicación como biomarcador de estrés no invasivo . La validación analítica incluyó la precisión intra- e inter- ensayo, linealidad bajo dilución, y límite de detección. Además, para estudiar el posible uso de alfa- amilasa salival como marcador de estrés, 12 cerdos en crecimiento de 3-4 meses de edad fueron sometidos a estrés por inmovilización durante al menos 1 min, obteniéndose muestras de saliva en diferentes puntos de tiempo. Los resultados de la validación analítica indicaron que el método era preciso y capaz de medir la alfa-amilasa de una manera lineal. Los resultados obtenidos en la prueba de esfuerzo mostraron un aumento significativo en la actividad salival alfa amilasa. El propósito del artículo 3 fue estudiar los cambios en el proteoma salival de cerdos sanos en situaciones de estrés para identificar cualquier posible nuevo biomarcador salival de estrés. Tres grupos de animales fueron sometidos a 3 modelos de estrés: restricción seguido de muestreo simulado de sangre de la vena cava; transporte breve por carretera; restricción de movimiento en una jaula digestibilidad. La saliva se obtuvo de cada animal antes, 15 y 30 min después de la inducción de estrés. Las muestras de los animales que mostraron el mayor incremento en la concentración de cortisol salivar se agruparon y se realizó una electroforesis en geles bidimensionales. Se tiñeron con Coomassie Brilliant Blue R-250 para la detección de spots y seleccionarlos para su identificación mediante espectrometría de masas. Los análisis estadísticos demostraron que 2 proteínas tenían diferencias significativas en la expresión antes y después de la inducción de estrés y fueron identificadas como fragmentos de albúmina y proteína de unión odorizante. CONCLUSIONES 1. La actividad enzimática de la alfa amilasa salivar puede ser usada como biomarcador de estrés en estudiantes de Veterinaria tras someter a los individuos a una presentación pública oral. 2. La actividad enzimática de la alfa amilasa salivar puede ser usada como biomarcador de estrés en cerdos tras someter a los individuos a un protocolo de restricción de movimientos. 3. La concentración de alfa amilasa en saliva de humanos, cerdos, caballos y ovejas puede ser cuantificada mediante un ensayo de inmunofluorometría a tiempo resuelto. Este ensayo tiene una variación inter-individual baja y es más sensible que los ensayos enzimáticos para detectar estrés. 4. El proteoma salivar de los cerdos ha revelado diferencias entre animales en condiciones basales y bajo condiciones de estrés. Esto se reveló como una herramienta útil para buscar posibles nuevos biomarcadores de estrés in estos animales tales como la proteína de unión odorizante. / OBJECTIVES 1. To evaluate the use of salivary alpha-amylase as a marker of stress using traditional techniques (enzymatic assays) in human using a model in which veterinary students had to make an oral presentation in a foreing language. 2. To evaluate the use of salivary alpha-amylase as a marker of stress using traditional techniques (enzymatic assays) in pigs. 3. To implement new approaches for measuring alpha-amylase in saliva samples of several species (including human beings) by direct quantification of the amount of the salivary alpha-amylase instead of by measuring its activity (Article 3, Article 4, Article 5, Article 6). 4. To detect and identify new biomarkers of stress in saliva by proteomics. An advanced technique that allows separation and identification of multiple proteins. METHODOLOGY This PhD thesis is a compilation of the following published papers: 1) Assessment of Stress Associated with an Oral Public Speech in Veterinary Students by Salivary Biomarkers. Tecles F, Fuentes-Rubio M, Tvarijonaviciute A, Martínez-Subiela S, Fatjó J, Cerón JJ. (2014) J Vet Med Educ. Jan 21:1-7. [Epub ahead of print]. 2) Validation of an automated method for salivary alpha-amylase measurements in pigs (Sus scrofa domesticus) and its application as a stress biomarker. Fuentes M, Tecles F, Gutiérrez A, Otal J, Martínez-Subiela S, Cerón JJ. (2011) J Vet Diagn Invest. Mar;23(2):282-7. 3) Porcine salivary analysis by two-dimensional gel electrophoresis in three acute stress models: a pilot study. Fuentes-Rubio M, Cerón J, de Torre C, Escribano D, Gutiérrez AM, Tecles F. (2014) Can J Vet Res. Apr;78(2):127-32. In the first article, salivary cortisol and alpha-amylase activity were measured to assess stress associated with a public oral presentation in Veterinary Clinical Pathology students. Stimulated saliva samples were collected before and directly after a 5-minute oral presentation and at 20 and 35 minutes after the beginning of the presentation. Cortisol peaked 20 minutes after the beginning of the presentation, whereas salivary alpha-amylase (sAA) peaked at 5 minutes, just at the end of the speech. These changes were not related to the level of stress that was indicated by the student in a questionnaire, the student’s sex, or the quality of the presentation. The aim of the second study was to validate an automated spectrophotometric method for salivary alpha-amylase measurement in pigs and evaluate its possible application as a noninvasive stress biomarker. The analytical validation included intra- and interassay precision, linearity under dilution, and limit of detection. In addition, to study the possible use of salivary alpha-amylase as a possible stress marker, 12 crossbred growing pigs of 3-4 months of age were subjected to restraint stress by a nasal snare for at least 1 min, and saliva samples were obtained at different time points. The results of analytical validation indicated that the method was precise and able to measure alpha-amylase in a linear manner. The results obtained in the stress test showed a significant increase in salivary alpha-amylase activity. The purpose of the research of article 3 was to study changes in the salivary proteome of healthy pigs in stressful situations to identify any potential new salivary biomarker of stress. Three groups of animals were subjected to 3 stress models: snaring restraint followed by simulated sampling of vena cava blood; brief transport by road; and restriction of movement in a digestibility cage. Saliva was obtained from each animal before and 15 and 30 min after the induction of stress. The samples from the animals that showed the greatest increase in salivary cortisol concentration were pooled and run on 2-dimensional gels. Coomassie Brilliant Blue R-250 was used for spot detection and mass spectrometry for spot identification. Statistical analyses showed that 2 proteins had significant differences in expression before and after the induction of stress. These proteins were identified as odorant-binding protein and fragments of albumin. CONCLUSIONS 1. The enzymatic activity of salivary alpha-amylase can be used as biomarker of stress in Veterinary students after subjecting the individuals to a public oral presentation. 2. The enzymatic activity of salivary alpha-amylase can be used as biomarker of stress in pigs after subjecting the individuals to restraint of movement protocol. 3. Alpha-amylase concentration in saliva of humans, pigs, horses and sheep can be quantified by TR-IFMA This assay has a lower inter-individual variation and is more sensitive than enzymatic assays to detect stress. 4. Salivary proteome of pigs has revealed differences between animals in basal status and under stress conditions. It was shown as a useful tool to search possible new salivary biomarkers of stress in these animals such as odorant-binding protein.

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