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Efeitos de vírus sobre características agronômicas em vinhedos, incidência viral em matrizeiros e caracterização de isolados de vírus de videira, roseira e pessegueiro

NASCIMENTO, Monique Bezerra 27 February 2015 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-11-28T13:39:39Z No. of bitstreams: 1 Monique Bezerra Nascimento.pdf: 1822147 bytes, checksum: 8f2d6b8a88935d10d34decf26f6730b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T13:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monique Bezerra Nascimento.pdf: 1822147 bytes, checksum: 8f2d6b8a88935d10d34decf26f6730b3 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The grapevine (Vitis spp.) virus diseases affect severely the production, the quality of the grape and reduce the life of the vineyards. In Brazil, among them, the complexes of rugose wood caused by Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB) and Grapevine virus D (GVD) and the leafroll, caused by Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV) and Grapevine leafroll-associated virus -1 to -4, -4 strain 5 (GLRaV-1 to -4, -4 strain 5) are very important. The first part of the present work had the objectives of evaluating the effects of these viruses on agronomic traits, such as, fresh weight of the bunch, °Brix, weight of pruned branches, stem diameters of rootstock and canopy, in symptomatic and asymptomatic plants in Niagara Rosada and Merlot vineyards, and to survey commercial nurseries for GRSPaV, GVA, GVB, Grapevine fleck virus (GFkV) and GLRaV-3. All plants were indexed by real-time RT-PCR. Asymptomatic infected grapevines, however, were affected negatively by the viral infection, but to a lesser intensity in comparison with the symptomatic ones. The nurseries presented a high incidence of GRSPaV and GVA, being characterized as sources of inoculum for vineyards formed with these materials. The second part of the work aimed the molecular characterization of isolates of the following viruses: Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV), agent of rose mosaic (Rosa sp.), obtained from rose; GRSPaV, GVA and GLRaV-2, from symptomatic and asymptomatic grapevine plants. Despite the economic importance of PNRSV for stone fruit trees in Brazil, only peach isolates have been molecular characterized in Brazil, it was observed high percentages of identity, among the isolates GRSPaV, GVA and GLRaV-2, which made it difficult to explain the variation in symptom expression or their absence, based on the sequence differences. In this study, it was conducted, for the first time, the molecular characterization of the complete genes to the coat protein (CP) and movement protein (MP) of a Brazilian PNRSV isolate obtained from rose. The obtained results demonstrated the high importance of using virus-free propagative materials to achieve the highest agronomic potential of the grapevine cultivars and to reduce losses caused by these pathogens. / As viroses da videira (Vitis spp.) afetam severamente a produção, a qualidade da uva e diminuem a vida útil dos vinhedos. No Brasil, destacam-se, o complexo do lenho rugoso, causados por Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB) e Grapevine virus D (GVD), e o enrolamento das folhas, causado por Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV), Grapevine leafroll-associated virus -1 ao -4, -4 estirpe 5 (GLRaV-1 ao -4, -4 estirpe 5). A primeira parte do presente trabalho teve como objetivos avaliar os efeitos destes vírus sobre as variáveis agronômicas relacionadas ao vigor da planta, tais como, peso fresco do cacho, °Brix, peso de ramos podados, diâmetros do tronco do porta-enxerto e da copa, em plantas sintomáticas e assintomáticas em vinhedos das cultivares Niágara Rosada e Merlot, além do levantamento de vírus em matrizeiros comerciais para GRSPaV, GVA, GVB, Grapevine fleck virus (GFkV) e GLRaV-3. Todas as plantas foram indexadas por RT-PCR em tempo real. Videiras assintomáticas, porém infectadas, foram afetadas negativamente pela infecção viral, porém em menor intensidade, quando comparadas com as sintomáticas. Os matrizeiros testados apresentaram alta incidência de GRSPaV e GVA, ficando caracterizados como fontes de inóculo destes patógenos para vinhedos formados com esses materiais. Na segunda parte do trabalho, visou-se a caracterização molecular de isolados dos seguintes vírus: Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV), agente do mosaico da roseira (Rosa sp.), obtido da roseira; GRSPaV, GVA e GLRaV-2, de videiras sintomáticas e assintomáticas. Apesar da importância econômica do PNRSV para as fruteiras de caroço no Brasil, apenas isolados brasileiros, obtidos de pessegueiro, tinham sido caracterizados molecularmente. Dentro de cada espécie, os isolados de GRSPaV, GVA e GLRaV-2 demonstraram altas porcentagens de identidade, de modo que, as diferenças entre eles, dificilmente, explicariam as variações na expressão e ausência de sintomas. Neste estudo, foi realizada pela primeira vez a caracterização molecular dos genes completos da capa proteica (CP) e da proteína de movimento (MP) de um isolado brasileiro do PNRSV, obtido em roseira no Brasil. Os resultados obtidos demonstraram a utilização de material propagativo livre de vírus como opção para atingir o melhor potencial agronômico das cultivares de videira e reduzir perdas ocasionadas por estes patógenos.
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Termoterapia e controle biológico para manejo do cancro bacteriano em videira

CARVALHO, Francisco Conrado Queiroz 26 February 2016 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-12-01T13:10:00Z No. of bitstreams: 1 Francisco Conrado Queiroz Carvalho.pdf: 1495892 bytes, checksum: 4554af9eec8d39ab44f681710b62ea38 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-01T13:10:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francisco Conrado Queiroz Carvalho.pdf: 1495892 bytes, checksum: 4554af9eec8d39ab44f681710b62ea38 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Bacterial canker, caused by Xanthomonas campestris pv. viticola, has been responsible for significant economic losses on the grapevine crop in Brazilian states of Pernambuco and Bahia, located in the São Francisco river Valley. This work evaluated the effect of thermotherapy on cuttings of cultivars Isabel and Red Globe on the viability of plantlets and eradication of X. campestris pv. viticola, and the effect of combination of biological control agents (BCA) and thermotherapy on the pathogen eradication and disease severity reduction. The cuttings were treated at 50, 52 and 54°C during 30, 45 and 60 min, planted, and after 45 days the plantlets were analyzed for growth. The eradication of X. campestris pv. viticola was evaluated at 50 to 52°C and 45, 50 and 60 min by quantifying bacterial populations on cuttings before planting and epidemiological components of bacterial canker, 120 days after planting. Only the temperature of 54°C, mainly during 45 and 60 minutes, affected negatively leaf number, plant height, and length and volume of root system. The bacterial population was reduced in cuttings of both cultivars. No binomial temperature/time was able to eradicate X. campestris pv. viticola, but at 50 and 52°C during 45 to 60 min, canker symptoms on the branches were reduced from 65.5 to 95.9%. To evaluate the combined effect of BCA and thermotherapy, 23 BCA were sprayed on the leaves of 'Red Globe' and 24 h later the pathogen was inoculated. After 40 days, the incubation period and disease severity were evaluated. It was also determined the antibacterial activity of BCA to the pathogen, by testing for antibiotic production, detection of volatile substances, proteases and ammonia. Although not able to eradicate the pathogen, bacterial strains LCB 6, LCB 30, LCB 33, UNEB 27 and RAB 9 (108 CFU/mL), and yeast strains L7, L8 and LF (107 cel/mL) reduced bacterial canker, exhibiting at least one type of antibacterial activity. Two BCA (LCB 6 – Bacillus subtilis and LF - Saccharomyces cerevisiae) were combined with thermotherapy (50 and 52°C for 45, 50 and 60 min). The cuttings were subjected to thermotherapy, followed by immersion during two hours in the suspension of LCB 6 and LF, and the plantlets were sprayed weekly, through 15 weeks. The plantlets were evaluated 120 days after planting. No combination was able to eradicate X. campestris pv. viticola, but some of them reduced the disease severity on leaves and branches. The best results were obtained by combined use of LCB 6 –Bacillus subtilis and thermotherapy at 52°C during 45 min, which is recommended for the integrated management of bacterial canker of grapevine. / O cancro bacteriano, causado por Xanthomonas campestris pv. viticola, tem sido responsável por significativos prejuízos econômicos na cultura da videira no Submédio do Vale do São Francisco, estados de Pernambuco e Bahia, Brasil. Este trabalho avaliou o efeito da termoterapia em bacelos de videira das cultivares Isabel e Red Globe na viabilidade de mudas e na erradicação de X. campestris pv. viticola, e também a combinação de agentes de controle biológico (ACB) e termoterapia na erradicação do patógeno e na redução da severidade da doença. Os bacelos foram tratados a 50, 52 e 54°C nos tempos de 30, 45 e 60 min, plantados, e o crescimento das mudas avaliado após 45 dias. A erradicação de X. campestris pv. viticola foi determinada nas temperaturas 50 e 52°C e tempos de 45, 50 e 60 min, quantificando-se a população bacteriana nos bacelos antes do plantio e componentes epidemiológicos do cancro bacteriano, 120 dias após o plantio. Apenas a temperatura de 54°C, principalmente durante 45 e 60 min, interferiu negativamente no número de folhas, altura da planta, comprimento e volume do sistema radicular. A população bacteriana foi reduzida nos bacelos de ambas cultivares. Nenhum binômio temperatura/tempo foi capaz de erradicar X. campestris pv. viticola, mas os sintomas de cancros nos ramos foram reduzidos de 65,5 a 95,9% nos tratamentos a 50 e 52°C durante 45 e 60 min. No estudo do efeito combinado de biocontrole e termoterapia, 23 isolados de ACB foram pulverizados nas folhas de ‘Red Globe’, com inoculação do patógeno após 24 h. Após 40 dias, o período de incubação e a severidade da doença foram avaliados. Foi determinada a atividade antibacteriana dos ACB ao patógeno, detectando-se a produção de antibióticos, substâncias voláteis, proteases e amônia. Apesar de não serem capazes de erradicar o patógeno, cinco isolados de bactérias LCB 6, LCB 30, LCB 33, UNEB 27 e RAB 9 (108 UFC/mL), e três isolados de leveduras L7, L8 e LF (107 cel/mL) se destacaram na redução do cancro bacteriano, exibindo pelo menos um tipo de atividade antibacteriana. Dois isolados de ACB (LCB 6 – Bacillus subtilis e LF – Saccharomyces cerevisiae) foram combinados à termoterapia (50 e 52°C for 45, 50 e 60 min). Os bacelos submetidos aos tratamentos termoterápicos, foram imersos posteriormente, durante 2 h, na suspensão de LCB 6 e LF e as mudas foram pulverizadas semanalmente, por 15 semanas. As plântulas foram avaliadas 120 dias após o plantio. Nenhuma combinação foi capaz de erradicar X. campestris pv. viticola, mas reduções na severidade da doença nas folhas e ramos foram observadas, sendo os melhores resultados obtidos com o uso combinado do isolado da bactéria LCB 6 – Bacillus subtilis e termoterapia de 52°C durante 45 min, o qual é indicado para o manejo do cancro bacteriano.
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Formação de biofilme e análise bidimensional de proteínas de Xanthomonas campestris pv. viticola

GUERRA, Myrzânia de Lira 24 July 2015 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-24T15:08:49Z No. of bitstreams: 1 Myrzania de Lira Guerra.pdf: 1530658 bytes, checksum: 73ad27186e300f4bbcd6fd5b19977dd1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T15:08:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Myrzania de Lira Guerra.pdf: 1530658 bytes, checksum: 73ad27186e300f4bbcd6fd5b19977dd1 (MD5) Previous issue date: 2015-07-24 / Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) is the causal agent of grapevine bacterial canker. In the Submédio do Vale São Francisco in the northeast of Brazil, bacterial canker is one of the most important grapevine diseases, responsible for severe damage and representing a serious risk to Brazilian viticulture and wine production. The aims of this study were to: a) evaluate the ability of seven Xcv strains to adhere and form biofilms in vitro and to determine the influence of the culture medium and surfaces on biofilm formation, besides to study the biofilm architecture and swarming motility; and b) optimize a method of protein extraction for proteomic analysis of the Xcv, comparing the efficiency of four methods, based on the twodimensional gel electrophoresis profile (2D-PAGE). All the strains adhered to the wells of the polystyrene microtiter plate and formed biofilms in all liquid culture medium (nutrient brothdextrose- yeast extract, yeast extract-dextrose-calcium carbonate, KADO 523 and Luria-Bertani), though to different degrees (weak, moderate and strong). In glass tubes, only Xcv229 and Xcv158 strains formed biofilms. We identified Xcv229 as a strong biofilmproducing strain. Using confocal laser scanning microscopy (CLMS) only Xcv229 showed an initial matrix of biofilm structure after 24 h of growth. Scanning electron microscopy (SEM) images of strains Xcv229 and Xcv158 grown for 36 h on microtiter plates revealed typical biofilm architectures. Strain Xcv158 displayed a higher swarming motility than Xcv229, showing that in this case, biofilm formation is not motility-dependent. This is the first report of biofilm production by the bacterial plant pathogen Xcv. Trizol®, Phenol, Centrifugation and Lysis methods were tested and through quantitative and qualitative analysis, the most suitable method to obtain high-quality protein was selected. All methods enabled the extraction of a significant amount of proteins; nevertheless, the centrifugation method allowed obtaining the highest concentration of solubilized proteins. However, the analysis of the 2D-PAGE gel images revealed a larger number of spots in the lysis method when compared to the others. Taking into consideration the quality of the results and the practical advantages of the lysis method, this is recommended as the best option for total protein extraction of Xcv for proteomic studies. / Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) é o agente causal do cancro bacteriano da videira. No Submédio do Vale São Francisco, no nordeste do Brasil, o cancro bacteriano é uma das doenças mais importantes dessa cultura, sendo responsável por grandes prejuízos, o que representa um sério risco para a viticultura brasileira. Os objetivos deste estudo foram: a) avaliar a capacidade de sete isolados de Xcv para aderir e formar biofilmes in vitro e determinar a influência do meio de cultura e das superfícies na formação de biofilme, além de investigar a arquitetura do biofilme e motilidade swarming; e b) otimizar um protocolo para extração de proteínas para análise da proteômica de Xcv, comparando a eficiência de quatro métodos com base no perfil de eletroforese em gel bidimensional (2D-PAGE). Todos os isolados aderiram aos poços da placa de microtitulação de poliestireno e formaram biofilmes nos meios de cultura líquidos testados (caldo nutriente-dextrose-extrato de levedura, extrato de levedura-dextrose-carbonato de cálcio, KADO 523 e Luria-Bertani), em níveis fraco, moderado e forte. Em tubos de vidro, apenas os isolados Xcv229 e Xcv158 formaram biofilmes. Xcv229 foi considerado um forte produtor de biofilme. Na microscopia confocal a laser (MCL) apenas em Xcv229 visualizou-se a matriz inicial da estrutura do biofilme, após 24 h de crescimento. As imagens da microscopia eletrônica de varredura (MEV) de Xcv229 e Xcv158 crescidos durante 36 h em placas de microtitulação revelaram arquiteturas típicas de biofilme. O isolado Xcv158 apresentou uma maior motilidade swarming do que Xcv229, mostrando que, neste caso, a formação de biofilme é independente da motilidade. Este é o primeiro relato de produção de biofilme bacteriano pela fitobactéria Xcv. Os métodos Trizol®, fenol, centrifugação e lise foram analizados quantitativa e qualitativamente, para selecionar o mais adequado na obtenção de proteína de alta qualidade. Todos permitiram a extração de uma quantidade significativa de proteínas, no entanto, o método de centrifugação resultou numa maior concentração de proteínas solubilizadas. A análise das imagens do gel 2D-PAGE revelou um maior número de spots no método de lise, quando comparado com os outros. Levando-se em consideração a qualidade dos resultados e as vantagens práticas do método de lise, este é recomendado como a melhor opção para extração de proteínas totais de Xcv para estudos de proteômica.
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Variabilidade genética e desenvolvimento de ferramentas sorológicas e moleculares para identificação de vírus em videira

RADAELLI, Paula 09 March 2009 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-27T12:03:26Z No. of bitstreams: 1 Paula Radaelli.pdf: 1280329 bytes, checksum: 00e048f01119106e351e005b652d1b99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T12:03:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula Radaelli.pdf: 1280329 bytes, checksum: 00e048f01119106e351e005b652d1b99 (MD5) Previous issue date: 2009-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The vegetative propagation of the grapevine (Vitis spp.) facilitates the dissemination of pathogens, such as viruses, favoring the appearance of complex diseases, by accumulation of different virus species in the same plant. Among the diseases that affect the grapevine, those caused by viruses are the most difficult to control because the dissemination and the accumulation of viruses are favored by the transport and use of infected propagative material. Due to advanced studies with molecular biology, evidences suggest that some grapevine viruses, as Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) and Grapevine fanleaf virus (GFLV) frequently present polymorphic sequences, as well as mixing infections with other viruses, making difficult to define the biological properties of the different virus variants. Therefore, one objective of this work was to evaluate the variability of these three important viruses of grapevine using the molecular characterization of the coat protein (CP) gene. Fragments comprising the complete CP genes of RSPaV, GLRaV-2 and of GFLV isolates were amplifiedby RT-PCR, using primers for specific regions of each viral species, allowing the separation of the isolate groups by phylogenetic analyses of the sequences. The isolates of each viral species here studied were additionally detected by non-radioactive probes with digoxigenin, allowing unambiguous identification of infected samples, independently of the isolate used as template for probe synthesis. The methods of diagnosis of the grapevine virus diseases can be divided in three categories. The two traditional ones include the biological tests and the serologic diagnosis. Recently, the molecular methods of diagnosis have been developed, comprising the tests RT-PCR, IC-RT-PCR and real time RT-PCR. This last one is the most advanced technique of diagnose and quantification of nucleic acids, accomplishing amplifications in precisely way and with higher reproducibility, allowing the detention of more than one virus in a single reaction. Considering the difficulties to detect virus in grapevine, and the high cost of the diagnosis methods it was considered the production ofantisera against isolates of GLRaV-2 and Grapevine virus B (GVB), developed from CPs expressed in Escherichia coli and to test the possibility of using themfor detecting these two viruses in infected grapevines. The CP genes were amplified by RT-PCR, cloned, sequenced and later subcloned, where the recombinant plasmids were employed in the transformation of E. coli and in the expression of CPs. The proteins were purified, their identities confirmed by SDS-PAGE and Western blot and used for immunizing rabbit. The antisera produced against these proteins were capable to recognize corresponding recombinant proteins in Western blot and to detect GLRaV-2 and GVB in infected grapevines by indirect ELISA, as well as discriminating healthy and infected grapevines. Many viruses that infect grapevine occur in concentrations under the limit of detention of the diagnostic tests commonly used. Considering this fact, another objective of the present work was to detect important viruses of the genera Closterovirus (GLRaV-2) and Ampelovirus (Grapevine leafroll-associated virus 1 - GLRaV-1 and Grapevine leafroll-associated virus 3- GLRaV-3), family Closteroviridae, as well as the viruses of the genera Foveavirus (RSPaV) and Vitivirus (Grapevine virus A (GVA) and the GVB),family Flexiviridae, by real time RT-PCR (TaqMan®). For ampelovirus, with degenerate primers and specific probes GLRaV-1 and GLRaV-3 were detected in isolates and/or cultivars tested. For closterovirus with degenerate primers and specific probes GLRaV-2 was detected in all cultivars tested and in Nicotiana benthamiana. The members of the family Flexiviridae GVA, GVB and RSPaV were detected by multiplex RT-PCR (TaqMan®), demonstrating that RT-PCR TaqMan® is a fast method for molecular diagnosis, quantitative, reliable, sensitive and applicable for detecting more than one virus in the same reaction. / A videira (Vitis spp.), por ser propagada vegetativamente, facilita a disseminação de patógenos, como os vírus, favorecendo o aparecimento de doenças complexas, pelo acúmulo de diferentes espécies virais numa mesma planta. Entre as doenças que afetam a videira, as viroses são as mais difíceis de controlar, pois a disseminação e o acúmulo de vírus são favorecidos pelo transporte e emprego de material propagativo infectado. Devido a avançados estudos por meio da biologia molecular, evidências sugerem que alguns vírus em videira, como Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) e Grapevine fanleaf virus (GFLV) frequentemente apresentam muitas seqüências variáveis, bem como infecções mistas com outros vírus, dificultando a definição das propriedades biológicas das diferentes variantes deste vírus. Um dos objetivos do presente trabalho foiavaliar a variabilidade genética destes três importantes vírus da videira através da caracterização molecular do gene da proteína capsidial (CP). Foram amplificados fragmentos que compreendem os genes completos da CP de isolados de RSPaV, GLRaV-2 e de GFLV por RT-PCR, utilizando-se primers específicos para cada espécie viral, permitindo a separação em grupos dos isolados estudados por análise filogenética das seqüências obtidas. Os diferentes isolados das três espécies virais estudadas também foram detectados utilizando-se hibridização com sondas não radioativas, marcadas com digoxigenina, possibilitando identificar de forma inequívoca as amostras infectadas, independentemente dos isolados virais empregados para síntese das sondas. Os métodos de diagnóstico das viroses da videira podem ser divididos em três categorias. As duas tradicionais incluem os testes biológicos e o diagnóstico sorológico. Mais recentemente, desenvolveram-se os métodos de diagnóstico molecular, com os testes RT-PCR, IC-RT-PCR e RT-PCR em tempo real. Este último é o mais avançado para diagnose e quantificação deácidos nucléicos, pois realiza amplificações de maneira precisa e com maior reprodutibilidade, além de permitir a detecção de mais de um vírus em uma só reação. Devido às dificuldades em detectar vírus em videira, além do custo elevado dos métodos de diagnose, propôs-se a produção de antissorosespecíficos contra isolados de GLRaV-2 e Grapevine virus B (GVB), desenvolvidos a partir da proteína capsidial expressa em Escherichia coli, e testar seu possível uso para a detecção destes dois vírus, em videiras infectadas. Os genes das CPs foram amplificados via RT-PCR, clonados, seqüenciados e posteriormente subclonados, onde os plasmídeos recombinantes foram empregados na transformação de E. coli e na expressão das proteínas capsidiais. Estas foram purificadas, suas identidades confirmadas em SDS-PAGE e “Western blot”, utilizadas para imunizar coelho. Os antissoros produzidos contra estas proteínas foram capazes de reconhecer as proteínas recombinantes correspondentes em “Western blot” e detectar GLRaV-2 e GVB em tecidos infectados de videiras pelo ELISA indireto, bem como discriminar videiras sadias e infectadas. Muitos vírus que infectam a videira ocorrem em concentrações abaixo do limite de detecção dos testes diagnósticos comumente utilizados. Com isso, um outro objetivo deste trabalho foi detectar importantes vírus dos gêneros Closterovirus (GLRaV-2) eAmpelovirus (Grapevine leafroll-associated virus 1- GLRaV-1 e Grapevine leafroll-associated virus 3 - GLRaV-3), família Closteroviridae, bem como os vírus dos gêneros Foveavirus (RSPaV) e Vitivirus (Grapevine virus A (GVA) e GVB), família Flexiviridae, através de RT-PCR em tempo real (TaqMan®). Para ampelovírus, com primers degenerados e sondas específicas, foram detectados GLRaV-1 e GLRaV-3 nos isolados e /ou cultivares testados. Para closterovírus, com primers degenerados e sonda específica, detectou-se GLRaV-2 em todas as cultivares testadas e em Nicotiana benthamiana. Os membros da família Flexiviridae GVA, GVB e RSPaV foram detectados através de multiplex RT-PCR (TaqMan®), demonstrando-se assim, que a RT-PCR TaqMan® é um método de diagnóstico molecular rápido, quantitativo, confiável, sensível e capaz de detectar mais de um vírus na mesma reação.
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Qualidade da matéria orgânica e disponibilidade de cobre em solos de áreas de videira / Organic matter quality and copper availability in viticulture soil

Arend, Karine 29 March 2010 (has links)
In Brazil, the grape is produced in several regions, but in the South that the culture of the vine has great economic importance because it has suitable climatic conditions for growing this species. The application continues to Bordeaux mixture as a fungicide has caused a rise in copper in vineyard soils, especially in the copper layers of soil, causing an increased bioavailability and causing greater phytotoxicity to plants. The phytotoxicity of copper depends on the relative distribution between the chemical forms of metal, which are related to physical and chemical properties of each soil, and the soluble metal in free or complexed with organic matter (OM) present, more phytotoxic to the forms in the form of insoluble salts or associated with organic matter, oxides and clays present in the soil solid phase. Copper is toxic to a wide variety of edaphic organisms, affecting growth, morphology and metabolism of microorganisms, and thus adversely affect the characteristics of soil organic matter (SOM), since these microorganisms are responsible for degradation. Also, copper has the ability to form stable complexes with the MOS, protecting it from the humification process, because the complex formation prevents these macromolecules are able to participate in other chemical reactions and undergo changes in its structure. The overall purpose of the thesis was to evaluate the relationship between MOS and copper in soil, related to the chemical characteristics of SOM and bioavailability of copper. For the development of theory, surface samples (0-10 cm) of six soils were collected in areas of vine with a history of systematic application of heavy metals and nearby areas with native plants without copper in Serra Gaucha region of Brazil. Studies of adsorption and desorption were done to verify the retention capacity of copper in the soil, and were related to studies of fractionation of copper used to quantify and qualify the ways of metal retention in different soil components. Four soils were incubated in plastic bags, with the addition of different amounts of copper (0, 200, 400, 600 and 1.200 mg kg-1), were collected periodically for chemical analysis. Some samples of these soils were selected for the creation of chemical fractionation to study the chemical characteristics of humic substances. The results showed that soils under native forest have low copper content, from 77.2 to 84.7 mg kg-1, linked mainly in fractions more stable as the residual and MOS compared to soils with a vineyard with levels total of 674.2 to 1154.6 mg kg-1, distributed in all fractions of soil, but the retention in the more stable fractions decreased of 51.0 to 78.2% of appropriations. Studies of adsorption and desorption showed that the soils have high adsorption capacity and high hysteresis occurs due to the presence of sites with high affinity for copper. The incubation studies showed that the presence of this metal in high concentration affects the process of humification of the SOM, which explains the fact that humic substances from soils of vineyards have less aromaticity with greater presence of functional groups compared to soil under native forest. The availability of this element was changed after the incubation period and may be related to the content of the fraction of humic acid (CAH) in the soil and changes in soil pH. Plant growth was affected with the increase of copper content available and was directly proportional to the fraction of fulvic acid (CAF). / No Brasil a uva é produzida em várias regiões, principalmente na pequena propriedade, porém é no sul do país que a cultura da videira tem grande importância econômica, pois seu cultivo é feito para suprir a demanda das indústrias de sucos e vinhos que foram implantadas na região pelos descendentes de italianos. A aplicação continua de calda bordalesa como fungicida tem causado uma elevação nos teores de cobre em solos de vinhedo, principalmente nas camadas superficiais de solos, provocando maior disponibilidade do elemento e causando fitotoxidade às plantas. A fitotoxidade do cobre depende da distribuição relativa entre as formas químicas desse metal, as quais são relacionadas às propriedades físico-químicas de cada solo, sendo as formas solúveis do metal, forma livre ou complexada à matéria orgânica (MO), mais fitotóxicas em relação às formas insolúveis na forma de sais ou associados à MO, óxidos e argilas presentes na fase sólida do solo. No solo, o cobre é tóxico para uma grande variedade de organismos, afetando o crescimento, a morfologia e o metabolismo de microrganismos, e dessa forma, provocando alteração nas características da matéria orgânica do solo (MOS), uma vez que esses microrganismos são responsáveis pela sua degradação. Também, o cobre possui a capacidade de formar complexos estáveis com a MOS, protegendo-a do processo de humificação, pois a formação dos complexos impede que essas macromoléculas estejam aptas a participar de outras reações químicas e sofrer modificações em sua estrutura. Os objetivos da tese foram: a) caracterizar formas e determinar adsorção/dessorção de cobre em solos com e sem histórico de aplicação de calda bordalesa; b) extrair e analisar a qualidade de substâncias húmicas de solos incubados com diferentes teores de cobre; e c) estimar a disponibilidade do cobre às plantas em solos com aplicação de diferentes teores de cobre. Para o desenvolvimento da tese, amostras superficiais (0 10 cm) de seis solos foram coletadas em áreas de vinhedos com histórico de aplicação sistemática de calda bordalesa e de áreas próximas com mata nativa sem adição de cobre na Serra Gaúcha. Estudos de adsorção e dessorção foram feitos para verificar a capacidade máxima de retenção do cobre no solo, e foram relacionados com estudos de fracionamento do cobre utilizados para quantificar e qualificar as formas de retenção do metal em diferentes componentes do solo. Quatro solos foram incubados em sacos plásticos, com adição de diferentes quantidades de cobre (0, 200, 400, 600 e 1.200 mg kg-1), sendo coletados periodicamente para análises químicas. Algumas amostras desses solos foram selecionadas para a realização do fracionamento químico para o estudo das características químicas das substâncias húmicas. Os resultados mostraram que solos sob mata nativa possuem baixo teor de cobre, entre 77,2 a 84,7 mg kg-1, ligados principalmente nas frações mais estáveis como a residual e de MOS, em comparação a solos com cultivo de videira com teores totais entre 674,2 a 1.154,6 mg kg-1, distribuídos em todas as frações do solo, porém a retenção nas frações mais estáveis diminui para 51,0 a 78,2%. Os solos possuem alta capacidade de adsorção e ocorre alta histerese devido à presença de sítios com alta afinidade com o cobre. Os estudos de incubação sugerem que a presença desse metal em alta concentração afeta a processo de humificação da MOS, que explica o fato das substâncias húmicas de solos de vinhedo ter menor aromaticidade com maior presença de grupamentos funcionais comparadas às de solos sob mata nativa. A disponibilidade desse elemento foi alterada após o período de incubação e pode estar relacionada ao teor da fração de ácidos húmicos (CAH) presentes no solo e a variação de pH do solo. O desenvolvimento das plantas foi afetado com a elevação do teor de cobre disponível e teve relação diretamente proporcional com a fração de ácidos fúlvicos (CAF).
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Produtividade da videira itália no Vale Submédio do São Francisco sob adubação alternativa e coeficientes de demanda hídrica. / Productivity of the italy grapevine in the Submedia Valley of the São Francisco under alternative fertilization and water demand coefficients.

FERREIRA, Erivaldo Alves. 14 May 2018 (has links)
Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-05-14T19:37:32Z No. of bitstreams: 1 ERIVALDO ALVES FERREIRA - DISSERTAÇÃO PPGSA PROFISSIONAL 2014..pdf: 677272 bytes, checksum: c5d142ada24b2142e7d5406f5d757d92 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-14T19:37:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ERIVALDO ALVES FERREIRA - DISSERTAÇÃO PPGSA PROFISSIONAL 2014..pdf: 677272 bytes, checksum: c5d142ada24b2142e7d5406f5d757d92 (MD5) Previous issue date: 2014 / A viticultura reveste-se de especial importância econômica e social no Submédio do Vale do São Francisco, à medida que envolve um grande volume anual de negócios voltados para os mercados interno e externo. No entanto, devido às condições climáticas intrínsecas da região como baixas precipitações pluviométricas e uma elevada demanda evapotranspirativa, o fornecimento de água é indispensável par aos cultivos, assim como uma eficiente reposição de nutrientes aos solos, levando em contas as propriedades físico-químicas da matéria orgânica. O presente trabalho avaliou diferentes alternativas de adubação e demanda hídrica do cultivo da videira Itália (Vitis vinifera L.) no vale do submédio do São Francisco. O ciclo experimental foi realizado entre o período de agosto/2013 a janeiro de/2014. Foi realizada a interpolação de diferentes coeficientes de irrigação (75%, 100%, 125% e 150% do coeficiente de cultura recomendado) e diferentes adubações (100%, 75%, 50% e 25% da adubação mineral recomendada, acrescida de produto orgânico a base de ácidos húmicos e flúvicos), compondo assim um delineamento em parcelas subdivididas 4x4, com 3 repetições. Em função dos tratamentos descritos, foram avaliadas a produtividade por planta, qualidade dos frutos (tamanho das bagas, teor sólidos solúveis e acidez total) e variações fisiológicas na videira (conteúdo relativo da água). Em função dos diferentes fatores de multiplicação do coeficiente de cultura, o tratamento L3 obteve a maior produtividade. O tratamento L4 apresentou o menor valor de acidez. O tratamento L1 apresentou os menores valores de conteúdo relativo de água e peso médio de bagas. Em função das diferentes adubações, a AD3 apresentou maior produtividade. Nas variáveis acidez, teor de sólidos solúveis, conteúdo relativo de água nas folhas e peso de bagas não houve diferenças significativas quanto ao fator adubação. / Viticulture is of particular economic and social importance in the Lower Basin of the São Francisco Valley, as it involves a large annual turnover meant for the domestic and foreign markets. However, due to the intrinsic climatic conditions of the region as low rainfall and high evapotranspiration demand, the supply of water is essential to pair crops, as well as an efficient replenishment of nutrients to the soil, taking into account the physicochemical properties of matter organic. This project aims to evaluate different alternatives of fertilizer and water demand in Italy cultivation of the vine (Vitis vinifera I.) in the São Francisco Valley submedium. The experiment consisted of two cycles, the first of agosto/2013 de/2014 to January and the second in the march/2014 September 2014. Was performed different coefficients of irrigation (75%, 100%, 125% and 150% of the recommended ratio) and different fertilizer (100%, 75%, 50% and 25% of the recommended fertilizer product plus the basis of organic and humic acids Neossols), thus composing a split plot design with three replications. In the treatments described were evaluated productivity per plant, fruit quality (berry size, soluble solids content and total acidity), physiological variations on the vine (relative water content). The L4 treatment showed the lowest acidity. The L1 treatment had the lowest values of relative water content and average berry weight. The soluble solids content did not differ significantly with treatments. Due to different fertilization, the AD3 showed higher productivity. In the variable acidity, soluble solids content, relative water content in leaves and berry weight were no significant differences in fertilization factor.
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VENCEDORES E VENDEDORES: O USO DO MARKETING MULTINÍVEL COMO ESTRATÉGIA DE EXPANSÃO DE UMA IGREJA NEOPENTECOSTAL GOIANA. / Winners and sellers: the use of multilevel marketing as a strategy of expansion of a neo-pentecostal goiana church.

Carvalho, Guilherme Burjack de 20 February 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-07-27T13:48:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GUILHERME BURJACK DE CARVALHO.pdf: 1515265 bytes, checksum: c54277c32ef5395536b820feb12486ab (MD5) Previous issue date: 2014-02-20 / The Winners and sellers: the use of multilevel marketing as a strategy of expansion of a neo-pentecostal goiana aims to discuss strategies of multilevel marketing techniques Vine Church in cells to establish in the competitive religious market . The text was drawn from the theory of religious market , and you can then see how the market weaves webs that can be found in the doctrinal discourse of Vine Church . The importance of analyzing the doctrinal discourse that appropriates the concepts of market, it gives the possibility to understand the Pentecostal religious field can establish ownership , reframe new discursive practices in order to meet their ambitions . For this research we took as a basis the writings of Vine Church in comparison to cells and from the research of Miller (2011 ) over a multilevel marketing company . Thus the research is divided into three chapters . The first chapter discusses the historical premises of the Vine Church in cells , the second chapter of Theology Vine Church in cells and finally the third chapter will address the Vine Church and the use of multilevel marketing / A pesquisa vencedores e vendedores: o uso do marketing multinível como estratégia de expansão de uma igreja neopentecostal goiana tem por finalidade debater as estratégias de marketing multinível utilizadas pela Videira Igreja em Células para estabelecer no concorrido mercado religioso. O texto foi elaborado a partir da teoria do mercado religioso, sendo possível então perceber como as teias que o mercado tece podem ser encontradas no discurso doutrinário da Igreja Videira. A importância da análise do discurso doutrinário que apropria os conceitos de mercado, se dá pela possiblidade de compreender que o campo religioso neopentecostal consegue estabelecer, apropriar, resignificar novas práticas discursivas na finalidade de atender as suas ambições. Para a realização desta pesquisa tomou-se como base os escritos da Videira Igreja em Células e a comparação a partir da pesquisa de Monteiro (2011) sobre uma empresa de marketing multinível. Dessa forma a pesquisa se estrutura em três capítulos. O primeiro capítulo aborda os pressupostos históricos da Videira Igreja em Células; o segundo capítulo A teologia da Videira igreja em Células e por fim o terceiro capítulo, abordará a Igreja Videira e o uso do marketing multinível.
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Cancro bacteriano (Xanthomonas campestris pv. viticola) da videira (Vitis spp): métodos de preservação e crescimento de isolados;escala diagramática e reação de variedades de videira à doença

NASCIMENTO, Ana Rosa Peixoto 11 February 2005 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T11:44:06Z No. of bitstreams: 1 Ana Rosa Peixoto Nascimento.pdf: 846418 bytes, checksum: 7dd326913edffe1dc94410cf6178eac6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T11:44:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Rosa Peixoto Nascimento.pdf: 846418 bytes, checksum: 7dd326913edffe1dc94410cf6178eac6 (MD5) Previous issue date: 2005-02-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Submédio São Francisco is the main producting and exporting region of table grapes in Brazil, where the cultivated area with this fruit crop has been significantly expanded in the last years. However, the intensification of grape production, the use of susceptible cultivars, and the favorable environmental conditions of that region allowed the occurrence of disease and pest problems, with emphasis for the bacterial canker (Xanthomonas campestris pv. viticola - Xcv). Reported for the first time in Brazil, in plantations of the Submédio São Francisco in 1998, the canker is the most important bacterial disease of grapevine in that region. The present work aimed to study: methods of preservation and pathogen growth at different temperatures, pHs and NaCl concentrations; elaboration and validation of a diagramatic key for bacterial canker; and the reaction of grapevine varieties to the pathogen, based on the disease epidemiological components. The preservation methods: dried paper strips (DPS), periodic transfer (PT), sterile distiled water (SDW) and dried leaves (DL) were utilised for storing two Xcv strains during 12 months. The variables viability and pathogenicity were evaluatedmonthly and estimated by bacterial growth and area under disease incidence curve (AUDIC). Both the DPS and SDW methods maintained 100% of cell viability and showed higher AUDIC values during 11 months. PT did not permit growth at 30 days while DL allowed the pathogen isolation for 5 months. The influence of temperature (0, 5, 10, 15, 20, 25, 27, 28, 29, 30, 35, 40 and 45°C), pH (5.0; 5.5; 6.0; 6.5; 7.0; 7.5; 8.0; 8.5 and 9.0) and NaCl concentration (1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7%) on the growth of two Xcv strains was studied in NYD medium and evaluated in spectrophotometer. The minimum and maximum temperatures for Xcv growth were respectively 5 and 39°C, while the optimum growth was observed from 27 to 29°C. Xcv does not growth at 0 or 40°C. The optimum pH for Xcv growth ranged from 7.0 to 7.5. The pathogen growth declined from 3.0 % NaCl and was null at 6.0 %. Aiming to standardize methods to quantify bacterial canker severity a diagrammatic key was elaborated including the levels 2, 4, 8, 17, 34, 63 and 91% of diseased leaf area. To validate the diagrammatic key, 50 leaves with different levels of severity, previously measured by the softwareAutoCAD®, were evaluated by 10 raters with and without the use of the key. Two evaluations were performed with the key at 7-day intervals when different sequences of the same leaves were visually estimated by the same raters. The accuracy and precision of each rater were determined by simple linear regression between actual and estimated severity. Without the key, most of the raters overestimated disease severity. With the key raters obtained better levels of accuracy and precision; however, all tended to underestimate severity, with absolute errors concentrated around 10%. Raters showed good repeatability and high reproducibility of estimative by using the key compared to not using it. The reaction of 20 grapevine varieties, 13 scions and seven rootstocks, was evaluated in relation to disease resistance under greenhouse conditions. Plants were inoculated with a suspension of the strain Xcv1 (A570 = 108 CFU mL-1), incubated in a greenhouse and observed daily for epidemiological components of bacterial canker: incubation period (PI), incidence of leaves with symptoms (INC), incidence of leaves with canker (IFC), disease severity (SEV), progress rate of disease incidence (TPID), area under the disease severity progress curve (AACPSD). All varietieswere susceptible to the pathogen, although there were significant differences among them (P=0.05) for most of the analyzed variables. ‘Brasil’ showed the highest disease levels for all variables tested, while ‘Isabel’ and ‘Paulsen 1103’ presented the highest values of PI and the lowest values of INC, IFC, SEV, TPID and AACPSD, suggesting the potential of those varieties in programs of genetic breeding and integrated management of grapevine bacterial canker. The studied variables might be utilized in research including reaction of varieties to this disease. Considering all the epidemiological components, the analysis of the Euclidean distance by UPGMA allowed the separation of scion and rootstock varieties into three similarity groups each. / O Submédio São Francisco é o principal centro produtor e exportador de uvas de mesa do Brasil, onde a área plantada com esta cultura tem se expandido significativamente, nos últimos anos. No entanto, a intensificação do cultivo da videira, o plantio de variedades suscetíveis, além das condições climáticas prevalentes na região propiciam o surgimento de problemas fitossanitários, entre os quais se destaca o cancro bacteriano (Xanthomonas campestris pv. viticola - Xcv). Detectado pela primeira vez no Brasil, em parreirais do Submédio São Francisco, em 1998, o cancro é a doença bacteriana mais importante da videira na região. No presente trabalho foram estudados: métodos de preservação e o crescimento do patógeno em diferentes temperaturas, pHs e concentrações de NaCl; elaboração e validação de uma escala diagramática para cancro bacteriano; e reação de variedades de videira ao patógeno, baseada nos componentes epidemiológicos da doença. Os métodos dessecação em papel de filtro (DPF), repicagens periódicas (RP), água destilada esterilizada (ADE) e folhas herborizadas (FH) foramutilizados para preservar dois isolados de Xcv (Xcv1 e Unb1216) durante 12 meses. As variáveis viabilidade e patogenicidade foram avaliadas mensalmente e estimadas pela obtenção de crescimento bacteriano e área abaixo da curva de incidência da doença (AACID). Tanto o método DPF como ADE propiciaram viabilidade constante de 100 % durante 11 meses e os maiores valores de AACID. No método RP não se observou crescimento dos isolados aos 30 dias, enquanto que, em FH, Xcv foi isolada até cinco meses. Os efeitos da temperatura (0, 5, 10, 15, 20, 25, 27, 28, 29, 30, 35, 40 e 45°C), pH (5,0; 5,5; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5; 8,0; 8,5 e 9,0) e concentração de NaCl (1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7%) sobre o crescimento de dois isolados de Xcv em meio de cultura NYD foram estudados sendo que o crescimento foi avaliado em fotocolorímetro. As temperaturas mínima e máxima para o crescimento de Xcv foram respectivamente 5 e 39°C, enquanto que um crescimento ótimo foi observado no intervalo de 27 a 29°C. Xcv não cresce a 0 e 40°C. A faixa de pH ótima para o crescimento desta bactéria é de7,0 a 7,5. O crescimento de Xcv foi reduzido a partir de 3,0 % de NaCl, sendo o nível de 6,0 % letal para essa bactéria. Para padronizar métodos de quantificação da severidade do cancro bacteriano, foi elaborada uma escala diagramática com níveis de 2, 4, 8, 17, 34, 63 e 91% de área foliar lesionada. Navalidação da escala diagramática, 50 folhas com diferentes níveis de severidade da doença, mensurados previamente com o programa AutoCAD®, foram avaliadas por 10 pessoas sem e com a utilização da escala. Foram realizadas duas avaliações com utilização da escala com intervalo de sete dias, onde seqüências diferentes das mesmas folhas foram estimadas visualmente pelos mesmos avaliadores. A acurácia e a precisão de cada avaliador foram determinadas por regressão linear simples, entre a severidade real e a estimada. Sem a escala, a maioria dos avaliadores superestimou a severidade da doença. Com a escala, os avaliadores obtiveram melhores níveis de acurácia e precisão, embora tendessem a subestimar a severidade com erros absolutos concentrando-se na faixa de 10%. Os avaliadores apresentaram boa repetibilidade e elevada reprodutibilidade das estimativas com utilização da escala, o mesmo não sendo verificado sem a utilização desta. A reação de 20 variedades de videira, sendo 13 de copa e sete de porta-enxerto, foi avaliada quanto à resistência à doença, em casa de vegetação. As plantas foram inoculadas com a suspensão do isolado Xcv1 (A570 = 0,4 correspondente a108 UFC mL-1), incubadas em casa de vegetação e observadas diariamente quanto aos componentes epidemiológicos do cancro bacteriano: período de incubação (PI), incidência de folhas com sintomas (INC), incidência de folhas com cancro (IFC), severidade da doença (SEV), taxa de progresso da incidência da doença (TPID), área abaixo da curva de progresso da severidade da doença (AACPSD). Todas as variedades foram suscetíveis ao patógeno, embora diferindo significativamente entre si (P=0,05) para a maioria das variáveis analisadas. Em geral, ‘Brasil’ apresentou os maiores níveis de doença para todas as variáveis testadas, enquanto ‘Isabel’ e ‘Paulsen 1103’ destacaram-se ao propiciarem os maiores valores de PI e os menores valores de INC, IFC, SEV, TPID e AACPSD, indicando o potencial dessas para utilização em programas de melhoramento genético e de manejo integrado do cancro bacteriano da videira. As variáveis estudadas podem ser utilizadas em pesquisas envolvendo reação de variedades ao cancro bacteriano da videira. Quando considerado o conjunto doscomponenetes epidemiológicos, a análise da distância Euclidiana por UPGMA permitiu a separação das variedades de copa e porta-enxerto em três grupos de similaridade cada.
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Tratamento de bacelos, sobrevivência de Xanthomonas campestris pv. viticola em tesouras de raleio, desinfestação desta ferramenta e de água utilizada na produção de mudas de videira

NAUE, Carine Rosa 22 February 2013 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T13:25:13Z No. of bitstreams: 1 Carine Rosa Naue.pdf: 1778234 bytes, checksum: 87c8b0b79d12b0deec69551209abe1ed (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T13:25:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carine Rosa Naue.pdf: 1778234 bytes, checksum: 87c8b0b79d12b0deec69551209abe1ed (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / The introduction and spread of grapevine bacterial canker caused by Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) occurs, among other ways, through plantlets, grapevine cuttings and farming tools. This study aimed to: evaluate the effectiveness of treatments of cuttings to eradicate Xcv using thermotherapy, bactericides and sanitizers; prove the survival of Xcv into thinning shears; and select efficient sanitizers for disinfection of these tools and water used in the production of plantlets. In the first study, the Xcv isolates were tested for pathogenicity and "in vitro" sensitivity to bactericides and sanitizers (streptomycin+oxytetracycline, oxytetracycline+copper sulfate, kasugamycin and oxytetracycline; dodecyldimethyl ammonium chloride, sodium hypochlorite and benzalkonium chloride) at different concentrations. The eradication of Xcv on cuttings was tested in experiments with thermotherapy (50˚C for 30 and 40 min; 53˚C for 5 and 10 min); bactericides oxytetracycline+copper sulphate (150+2000, 165+2200, 180+2400 and 195+2600 mg L-1 of H2O) and oxytetracycline (600, 700, 800 and 900 mg L-1) and sanitizers dodecyldimethyl ammonium chloride (600, 1200, 1800, 2400, 3000 μl L-1) sodium hypochlorite (5000, 10000, 20000, 30000, 40000 μl L-1) and benzalkonium chloride (125, 167, 250, 334, 500 μl L-1). The bactericidal oxytetracycline and sanitizers dodecyldimethyl ammonium chloride and sodium hypochlorite provided the largest zones of inhibition, in vitro. However, it was not possible to recommend an efficient treatment of temperature/time, and concentrations of bactericides or sanitizers, among those tested, capable of eradicating Xcv of infected grapevine cuttings. In the second study, survival was evaluated 0-42 h after dipping the scissors in pathogen suspension. In vitro susceptibility test and initial selection in scissors were performed with the sanitizers dodecyldimethyl ammonium chloride (1200 μl L-1), sodium hypochlorite (20000 μl L-1), benzalkonium chloride (250 μl L-1), sodium dichloroisocyanurate (16.25 mg L-1), calcium hypochlorite (130 mg L-1), calcium oxychloride (97.5 mg L-1) and chlorine dioxide (25 μl L-1). To validate the efficiency of sanitizers for disinfection of scissors the first two products were tested at the same concentrations, and 50 cuts were sequentially made in vine leaves. The controls only with Xcv allow verifying the dissemination ability of Xcv from an inoculum source. The viability of the same sanitizers was studied 0-8 h after solution preparation. Disinfection of water contaminated with Xcv was tested with two bactericidal and three sanitizers. Xcv survived 24 h in thinning shears. Sodium hypochlorite (20000 μl L-1) and dodecyldimethyl ammonium chloride (1200 μl L-1) provided the greatest inhibition halos and disinfested scissors contaminated with Xcv. Solutions of these sanitizers remained viable for 8 h. Xcv was spread by contaminated thinning shears, on average, until the 24th cut. Disinfestation of the water contaminated with Xcv utilized in the plantlets production was obtained by dodecyldimethyl ammonium chloride (600 μl L-1), sodium hypochlorite (5000 μl L-1) and benzalkonium chloride (250 μl L-1). / A introdução e a disseminação do cancro bacteriano da videira causado por Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) ocorre, dentre outras formas, por meio de mudas, bacelos e ferramentas de cultivo. Este trabalho teve como objetivos: avaliar a eficiência dos tratamentos de bacelos de videira para erradicação de Xcv utilizando termoterapia, bactericidas e sanitizantes; comprovar a sobrevivência de Xcv em tesouras de raleio; e selecionar sanitizantes eficientes para a desinfestação destas ferramentas e da água utilizada na produção de mudas. No primeiro trabalho, os isolados de Xcv foram testados quando à patogenicidade e realizado o teste de sensibilidade “in vitro” a bactericidas e sanitizantes (oxitetraciclina+estreptomicina, oxitetraciclina+sulfato de cobre, casugamicina e oxitetraciclina; cloreto de dodecildimetil amônio, hipoclorito de sódio e cloreto de benzalcônio) em diferentes concentrações. A erradicação de Xcv em bacelos de videira foi testada em experimentos com termoterapia (50oC por 30 e 40 min; 53oC por 5 e 10 min); bactericidas [oxitetraciclina+sulfato de cobre (150+2000, 165+2200, 180+2400 e 195+2600 mg L-1 de H2O) e oxitetraciclina (600, 700, 800 e 900 mg L-1)]; e sanitizantes [cloreto de dodecildimetil amônio (600, 1200, 1800, 2400, 3000 μL L-1); hipoclorito de sódio (5000, 10000, 20000, 30000, 40000 μL L-1) e cloreto de benzalcônio (125, 167, 250, 334, 500 μL L-1)]. O bactericida oxitetraciclina e os sanitizantes cloreto de dodecildimetil amônio e hipoclorito de sódio proporcionaram os maiores halos de inibição, in vitro. No entanto, não foi possível recomendar um tratamento termoterápico, bactericida ou sanitizante, dentre os testados, capaz de erradicar Xcv de bacelos de videira infectados. No segundo trabalho, a sobrevivência foi avaliada de 0 a 42 h após imersão das tesouras em suspensão do patógeno. Teste de sensibilidade de Xcv in vitro e seleção inicial em tesouras foram realizados com os sanitizantes cloreto de dodecildimetil amônio (1200 μl L-1), hipoclorito de sódio (20000 μl L-1), cloreto de benzalcônio (250 μl L-1), dicloroisocianurato de sódio (16,25 mg L-1), hipoclorito de cálcio (130 mg L-1), oxicloreto de cálcio (97,5 mg L-1) e dióxido de cloro (25 μl L-1). Para validação da eficiência dos sanitizantes na desinfestação de tesouras, os dois primeiros produtos foram testados nas mesmas concentrações, sendo realizados 50 cortes sequenciais, em folhas de videira. A testemunha com Xcv permitiu verificar a capacidade de disseminação de Xcv a partir da fonte de inóculo. A viabilidade dos sanitizantes foi estudada de 0 a 8 h após o preparo das soluções. Para desinfestação de água contaminada com Xcv foram testados 2 bactericidas e três sanitizantes. Xcv sobreviveu 24 h em tesouras de raleio. Hipoclorito de sódio (20000 μl L-1) e cloreto de dodecildimetil amônio (1200 μl L-1) proporcionaram os maiores halos de inibição e desinfestaram tesouras contaminadas com Xcv. As soluções destes sanitizantes mantiveram-se viáveis por 8 h. Xcv foi disseminada por tesouras de raleio contaminadas, em média, até o 24o corte. A desinfestação da água contaminada com Xcv utilizada na produção de mudas foi obtida pelo uso de cloreto de dodecildimetil amônio (600 μl L-1), hipoclorito de sódio (5000 μl L-1) e cloreto de benzalcônio (250 μl L-1).
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Ferrugem da videira: preservação de urediniósporos de Phakopsora euvitis e fatores relacionados à infecção do hospedeiro / Grapevine rust: preservation of urediniospores and factors related to the infection of the host

Alves, Renan Fernandes 30 June 2015 (has links)
A ferrugem da videira, causada pelo fungo Phakopsora euvitis, é uma doença importante para a viticultura brasileira por causar desfolha precoce e, consequentemente, prejudicar a maturação dos frutos e comprometer as safras seguintes. Por ser um patógeno biotrófico, a preservação de urediniósporos para estudos com o patógeno, se faz em folhas do hospedeiro vivo. Em outras espécies de ferrugens é possível conservar os esporos em condições controladas por longos períodos de armazenamento. Outro ponto importante, para auxiliar na compreensão da epidemiologia do patossistema, está relacionado com as condições ambientais favoráveis na germinação de urediniósporos e na patogenicidade do fungo em folhas de videira. Com o objetivo de preservar o patógeno e determinar as condições ambientais favoráveis para a doença, foram avaliados: (1) O efeito da temperatura e desidratação na manutenção da viabilidade dos esporos; (2) O efeito da temperatura e do período de molhamento na germinação de urediniósporos e na patogenicidade em mudas de \"Niágara Rosada\" inoculadas. Os resultados obtidos mostraram que a desidratação dos esporos proporcionou maior viabilidade destes ao longo do tempo, para todas as condições de armazenamento testadas. A desidratação seguida pelo armazenamento a -80°C conseguiu manter os esporos viáveis, com uma alta porcentagem de germinação, por até 150 dias de armazenamento. Os urediniósporos armazenados no ambiente, independente do processo de desidratação, não conseguiram manter sua viabilidade por um período superior a 15 dias. A faixa de temperatura para germinação de urediniósporos foi ampla, entre 10 e 30°C, com um ótimo em 20°C. A expressão de sintomas em plantas inoculadas foi maior nas temperaturas de 25 e 30°C. O período de molhamento mínimo estimado pelo modelo monomolecular foi de 7 horas para as plantas mantidas a 15 °C e 5 horas para as plantas mantidas a 20, 25 e 30 °C. Para períodos acima de 6 horas de molhamento, a maior severidade da doença ocorreu na temperatura de 30 °C. Não ocorreu sintomas em plantas inoculadas e mantidas a 35°C em nenhum dos períodos de molhamento testados. O período de latência da ferrugem foi de 7 dias para plantas inoculadas e mantidas a 25 e 30°C, estendendo-se para 13 dias quando as plantas foram mantidas a 15°C. / Grapevine rust, caused by Phakopsora euvitis, is an important disease in brazilian viticulture, causing early defoliation and jeopardizing the maturation of fruits and the following crop season. P. euvitis is a biotrophic pathogen, and for research purpose, uredospores are kept through inoculation in grapevine plants. In other species of rust, it is possible to preserve spore under controlled conditions for long periods of storage. Understand the favorable environmental conditions for uredospores germination and the pathogenicity of the fungus on grapevine leaves are important for the understanding of the pathosystem epidemiology. In order to preserve the pathogen and determine the favorable conditions for the disease were evaluated: (1) The effect of temperature and dehydration in maintaining the viability of the spores; (2) The effect of temperature and wetness period on uredospores germination and pathogenicity in \'Niágara Rosada\' inoculated plants. The results showed that spore dehydration maintained high viability, for all the tested storage conditions. Dehydration followed by storage at -80°C kept viable spores, with a high percentage of germination, for 150 days of storage. The uredospores stored in the environment, independent of the dehydration process, could not maintain their viability for a period exceeding 15 days. The temperature range for uredospores germination varied from 10 to 30°C, with an optimal at 20°C. The expression of symptoms in inoculated plants was higher at 25°C and 30°C temperatures. The minimum wetness period estimated by the monomolecular model was 7 hours for plants kept at 15 °C and 5 hours for plants kept at 20, 25 and 30 ºC. For wetness periods up to 6 hours, the highest disease severity occurred at 30 °C. There were no symptoms on inoculated plants maintained at 35°C in any of the tested wetness periods. The rust latency period was 7 days for inoculated plants kept at 25 and 30°C extending for 13 days when the plants were kept at 15°C.

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