Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-23T12:26:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 716349 bytes, checksum: 491af184849bdcb2477fa46e3081a75f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-23T12:26:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 716349 bytes, checksum: 491af184849bdcb2477fa46e3081a75f (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os insetos respondem à infecção através da montagem de reações imunes do tipo celular e humoral. Os reguladores primários dessas respostas são células chamadas hemócitos, os quais medeiam importantes respostas celulares, incluindo a fagocitose, encapsulamento, nodulação, e também segregam fatores humorais, tais como opsoninas, fatores de melanização e peptídeos antimicrobianos. Os hemócitos circulam ao longo da hemocele (cavidade corporal do inseto) pelo fluxo rápido da hemolinfa (sangue), além disso, partes desses hemócitos também existem como células sésseis que estão associados aos tecidos. As larvas de Galleria mellonella são uma alternativa viável para os modelos tradicionais dos mamíferos para estudar a eficácia de drogas antimicrobianas e a patogênese de microrganismos in vivo. No entanto, apesar da sua importância como um modelo de infecção, aspectos biológicos sobre as células do sistema imunológico, tais como a densidade e dinâmica dos hemócitos das larvas são mal compreendidos. No presente trabalho, investigamos a resposta imune celular dos hemócitos circulantes das larvas de G. mellonella contra diferentes cepas da bactéria Gram-negativa Actinobacillus pleuropneumoniae: baixa virulência (780), alta virulência (1022), e cepas de referência do sorotipo 8 (R8). Os hemócitos foram classificados com base no seu tamanho, morfologia, coloração e seus papeis na resposta imune, incluindo cinco tipos: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos, e oenocitóides. Contagem total de hemócitos, contagem diferencial de hemócitos, atividade dos fagolisossomos, resposta autofágica, viabilidade celular, e a ativação da caspase-3 (como indicador de apoptose) foram determinados em hemócitos circulantes provenientes de larvas desafiadas e controle. Demostramos pela primeira vez no modelo de G. mellonella que os plasmatócitos e granulócitos ativam suas respostas autofágicas através da formação dos autofagossomos após o contato com A. pleuropneumoniae. Além disso, nossos dados demonstram que a imunidade celular do presente modelo de infecção muda dependendo do grau de virulência das cepas bacterianas. / Insects respond to infection by mounting cellular and humoral immune reactions. The primary regulators of these immune responses are cells called hemocytes, which mediate important cellular immune responses including phagocytosis, encapsulation, nodulation and also secrete immune factors such as opsonins, melanization factors and antimicrobial peptides. Hemocytes circulate through the hemocoel (body cavity) by the swift flow of hemolymph (blood), and part of these hemocytes population are sessile and are attached to tissues. Larvae of Galleria mellonella is a widely used factitious host as a viable alternative to traditional mammalian models to study the efficacy of antimicrobial drugs and the microbial pathogenesis in vivo. However, despite their importance as an infection model, biological aspects about the immune cells, such as density and hemocyte dynamic of larvae are poorly understood. In the present study, we investigated the cellular immune response of hemocytes from G. mellonella larvae against three strains of the gram-negative bacterium Actinobacillus pleuropneumoniae: low virulent (780), high virulent (1022), and the serotype 8 reference strain (R8). Five types of larval hemocytes, prohemocytes, plasmatocytes, granulocytes, oenocytoids, and spherulocytes, were distinguished according to size, morphology, detection by molecular probes, dye-staining properties, and their role in the immune response. Total hemocyte count, differential hemocyte count, lysosome activity, autophagic response, cell viability, and caspase-3 activation were determined in circulating hemocytes of naïve and infected larvae. Granulocytes and plasmatocytes were the major hemocyte types involved in the cellular defense against A. pleuropneumoniae; these hemocytes activated phagolysosome activities associated with an autophagic response against the bacteria. Moreover, our results showed that apoptosis in circulating hemocytes after exposure to virulent bacterial strains was related to an excessive autophagic cell death response induced by stress and subsequent caspase-3 activation.

Orientadores: José Murilo Robilotta Zeitune, Sandra Cecília Botelho Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T12:37:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roesler_BrunaMaria_D.pdf: 2549394 bytes, checksum: 8534c8dd497e83d0a6b58932dcf0c4cf (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O entendimento acerca da carcinogênese gástrica, que é um processo multifatorial, avançou consideravelmente nas últimas décadas, especialmente no que diz respeito ao papel do Helicobacter pylori no desenvolvimento das lesões pré-cancerosas e na neoplasia propriamente dita, tanto em seu estágio precoce quanto avançado. O H. pylori é uma bactéria gram-negativa, classificada como carcinógeno tipo I pela IARC e que possui um alto grau de diversidade genética, assim como importantes fatores de virulência, o que pode ser verificado através das diferentes cepas encontradas nas doenças do trato gastrointestinal. A determinação, portanto, das cepas mais virulentas, responsáveis, pelo menos teoricamente, pelo desenvolvimento das doenças gástricas mais graves, é de vital importância tanto para estudos epidemiológicos quanto para a determinação de quais são os pacientes com maior probabilidade de desenvolvimento do câncer gástrico, que permanece como um grave problema de saúde pública. No presente estudo foram comparadas cepas da bactéria prevalentes em amostras de tecido gástrico provenientes de pacientes com diagnóstico de adenocarcinoma gástrico distal do tipo intestinal precoce e avançado através do uso de técnicas de biologia molecular para avaliar diferentes regiões genômicas da bactéria: genes ureaseC, vacA (regiões s e m), cagA, cagT e dupA (regiões jhp0917 e jhp0918). Os resultados obtidos foram semelhantes tanto para os casos precoces quanto avançados da doença, porém, uma relação estatisticamente significativa foi encontrada entre o gene cagA e o adenocarcinoma avançado. Em geral, as cepas foram classificadas como vacA s1m1, cagA positivas, cagT positivas e dupA negativas, concluindo-se que cepas com o genótipo vacA s1m1 cagA positivo e cagT positivas podem ser consideradas mais virulentas. Além disso, conclui-se que o gene dupA, apesar de pouco presente nas amostras de câncer gástrico estudadas, não pode ser considerado um marcador exclusivo da úlcera duodenal, como descrito inicialmente / Abstract: The understanding of gastric carcinogenesis, that is a multifactorial process, has advanced considerably in recent decades, especially with regard to the role of Helicobacter pylori in the development of precancerous lesions and cancer, both in its early or advanced stage. H. pylori is a gram-negative bacteria, classified as a group I carcinogen by the IARC and it has a high degree of genetic diversity, as well as important virulence factors, which can be verified through the different strains present in gastrointestinal diseases. Therefore, determination of the most virulent strains, responsible, at least theoretically, for the development of the most severe diseases, as gastric adenocarcinoma, is of fundamental importance for epidemiological studies and for determination of the patients with high probability for development of the disease, which remains as a serious public health problem. In the present study they were compared strains of the bacteria prevalent in early and advanced gastric distal type intestinal adenocarcinoma through molecular biology techniques to evaluate different regions of bacterium genoma: urease C, vacA (regions s and m), cagA, cagT and dupA (jhp0917 and jhp0918 regions) genes. The results were similar for both early and advanced cases of the disease, however, a statistically significant relationship was found between the cagA gene and advanced adenocarcinoma. In general, the strains were classified as vacA s1m1, cagA positive, cagT positive and dupA negative, conducting that strains with the genotype vacA s1m1, cagA positive and cagT positive may be considered more virulent. Moreover, it is concluded that the dupA gene, although found in a little proportion of the gastric cancer H. pylori strains, can not be considered an exclusive marker for duodenal ulcer, as described earlier / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Enterococcus estão presentes no trato gastrointestinal (TGI) de animais vertebrados e invertebrados, os quais podem adquirir estas bactérias através de mecanismos de transferência horizontal e vertical de micro-organismos. Pesquisas recentes descreveram a presença de Enterococcus em lepidópteros, porém estudos com borboletas do gênero Heliconius são escassos. Este trabalho teve como objetivo, a partir de uma bacterioteca de 178 Enterococcus sp. previamente isolados de fezes de imaturos de Heliconius erato phyllis detectar a presença de genes de resistência e virulência por PCR; avaliar fenotipicamente os fatores de virulência e a produção de compostos com atividade antimicrobiana; e avaliar o perfil clonal das cepas pela técnica de PFGE. Dos 178 enterococos, 55 apresentavam resistência a eritromicina e 11 a norfloxacina e/ou ciprofloxacina, porém não foi detectado nenhum gene relacionado a estes fenótipos de resistência. Quanto aos fatores de virulência testados nos 178 enterococos, 63 isolados amplificaram para o gene esp, 12 para ace e 2 para gelE. Os genes agg e cylA não foram detectados. Na análise fenotípica dos fatores de virulência, os dois E. faecalis positivos para gelE também foram positivos para a degradação da gelatinase e 130 enterococos apresentaram capacidade de hidrolisar hemácias. Para investigar a produção de substância antagonista, foram selecionados 26 enterococos; destes, 15 apresentaram atividade contra a bactéria indicadora Listeria monocytogenes. Oitenta e seis isolados foram selecionados para avaliar a relação clonal por PFGE, e foi possível observar a partir do dendrograma que os enterococos no TGI dos imaturos têm origem alimentar e materna. Conclui-se que os enterococos provenientes de amostras fecais de imaturos de H. erato phyllis possuem poucos genes relacionados a mecanismos de virulência comuns na área clínica. É possível que os Enterococcus produtores de substância antagonista desempenhem um papel importante no equilíbrio das comunidades microbianas do TGI deste inseto, e que ocorra a transferência vertical de micro-organismos das fêmeas para a prole para a espécie H. erato phyllis. / Enterococcus is present in the gastrointestinal (GI) tract of vertebrates and invertebrates, which can acquire these bacteria through mechanisms of horizontal and vertical transfer of microrganisms. Recent research has described the presence of Enterococcus in Lepidoptera, but studies with butterflies of the genus Heliconius are scarce. This study had as objective, from a bacterioteca of 178 Enterococcus sp. previously isolated from fecal samples of immature Heliconius erato phyllis detect the presence of resistance and virulence genes by PCR; phenotypically assess the virulence factors and the production of compounds with antimicrobial activity; and to evaluate the clonal profile of the strains by PFGE. Of the 178 enterococci, 55 were resistant to erythromycin and 11 resistant to norfloxacin and/or ciprofloxacin, however was not detected any gene related to these resistance phenotypes. The virulence factors were tested in 178 enterococci, and 63 isolated amplified for the esp gene, 12 for ace and 2 for gelE. The agg and cylA genes were not detected. In the phenotypic analyzes, both E. faecalis positive to gelE gene were also positive for the degradation of gelatinase, and 130 enterococci showed ability to hydrolyze red blood cells. To investigate the production of antagonistic substance, 26 enterococci were selected and of these, 15 showed activity against the indicator bacteria Listeria monocytogenes. Eighty-six isolates were selected to evaluate the clonal profile by PFGE, and it was possible to observe in the dendrogram that the origin of the enterococci in GIT of immatures was the herbivory and maternal origin. It is concluded that the enterococci from fecal samples of immature H. erato phyllis possess few mechanisms of virulence-related genes, common in the clinical area. It is possible that the antagonistic substance-producing enterococci could play an important role in the equilibrium of the microbial communities of the GIT of this insect, and there is vertical transmission of enterococci from females to their offspring to the specie H. erato phyllis.

A dengue é a arbovirose (doença viral transmitida por artrópodes) mais difundida em países tropicais e subtropicais. Segundo a Organização Mundial da Saúde, estima-se que mais de 100 milhões de casos ocorrem anualmente em todo o mundo. Com base em testes sorológicos, os vírus da dengue são classificados em quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4). A infecção de humanos com qualquer um dos quatro sorotipos de dengue pode levar ao desenvolvimento de três formas clínicas principais; doença febril indiferenciada, febre clássica da dengue (FD) e dengue hemorrágica com ou sem choque (DHF/DSS). Trabalhos anteriores ao usarem a linhagem de camundongos C57black/6 obtiveram resultados como hemorragia intraperitoneal e injuria ao fígado dos animais infectados, portanto foi de interesse estudar como se desenvolve a infecção por DENV-1 nestes animais. Então o objetivo principal foi estudar a infecção pelo DENV-1 em camundongos C57BL/6 inoculados via intraperitoneal. Foi analisada a presença do vírus DENV-1 em diferentes órgãos cérebro, Baco, fígado e rim além do soro dos animais C57 Black/6 imunologicamente competentes, pois trabalhos realizados anteriormente por diversos grupos de pesquisa da área tem resultados controversos mostrando que a detecção posterior do DENV seria dependente de fatores como carga viral, tipo de animal infectado e principalmente da cepa viral utilizada. Como principais conclusões de nosso trabalho os animais C57BL/6 selvagem infectados com o DENV-1 mochisuki apresentaram carga viral detectável até o décimo sexto dia, alem de plaquetopenia, aumento do Hematócrito e dos níveis de IL-10, IFN- e TNF- a partir do sétimo dia de infecção. Portanto o animal C57BL/6 selvagem pode ser usado como modelo experimental para infecção com DENV. 8 / Dengue is the arbovirus (arthropod-borne viral disease) more widespread in tropical and subtropical countries. According to World Health Organization estimates that more than 100 million cases occur annually worldwide. Based on serologic tests of dengue viruses are classified into four antigenically distinct serotypes (DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4). The infection of humans with any of the four dengue serotypes can lead to the development of three main clinical forms, undifferentiated febrile illness, classic dengue fever (DF) and dengue hemorrhagic fever with or without shock (DHF / DSS). Previous work to use the strain of mice C57black / 6 obtained results as intraperitoneal hemorrhage and injury to the liver of infected animals, so it was of interest to study how it develops the DENV-1 infection in these animals. So the main objective was to study the DENV-1 infection in C57BL / 6 mice inoculated intraperitoneally. We analyzed the presence of DENV-1 in different organs brain, spleen, liver, kidney and serum from animals C57 Black/6 immunologically competent, as previous work by several research groups in the area is controversial results showing that the subsequent detection of DENV would depend on factors such as viral load, type of infected animals and especially the viral strain used. he main conclusions of our work, the C57BL / 6 infected with DENV-1 mochisuki had detectable viral load until the sixteenth day, in addition to thrombocytopenia, increased hematocrit and levels of IL-10, IFN- and TNF - from the seventh day of infection. So the animal C57BL / 6 wild can be used as an experimental model for infection with DENV

A dengue é a arbovirose (doença viral transmitida por artrópodes) mais difundida em países tropicais e subtropicais. Segundo a Organização Mundial da Saúde, estima-se que mais de 100 milhões de casos ocorrem anualmente em todo o mundo. Com base em testes sorológicos, os vírus da dengue são classificados em quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4). A infecção de humanos com qualquer um dos quatro sorotipos de dengue pode levar ao desenvolvimento de três formas clínicas principais; doença febril indiferenciada, febre clássica da dengue (FD) e dengue hemorrágica com ou sem choque (DHF/DSS). Trabalhos anteriores ao usarem a linhagem de camundongos C57black/6 obtiveram resultados como hemorragia intraperitoneal e injuria ao fígado dos animais infectados, portanto foi de interesse estudar como se desenvolve a infecção por DENV-1 nestes animais. Então o objetivo principal foi estudar a infecção pelo DENV-1 em camundongos C57BL/6 inoculados via intraperitoneal. Foi analisada a presença do vírus DENV-1 em diferentes órgãos cérebro, Baco, fígado e rim além do soro dos animais C57 Black/6 imunologicamente competentes, pois trabalhos realizados anteriormente por diversos grupos de pesquisa da área tem resultados controversos mostrando que a detecção posterior do DENV seria dependente de fatores como carga viral, tipo de animal infectado e principalmente da cepa viral utilizada. Como principais conclusões de nosso trabalho os animais C57BL/6 selvagem infectados com o DENV-1 mochisuki apresentaram carga viral detectável até o décimo sexto dia, alem de plaquetopenia, aumento do Hematócrito e dos níveis de IL-10, IFN- e TNF- a partir do sétimo dia de infecção. Portanto o animal C57BL/6 selvagem pode ser usado como modelo experimental para infecção com DENV. 8 / Dengue is the arbovirus (arthropod-borne viral disease) more widespread in tropical and subtropical countries. According to World Health Organization estimates that more than 100 million cases occur annually worldwide. Based on serologic tests of dengue viruses are classified into four antigenically distinct serotypes (DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4). The infection of humans with any of the four dengue serotypes can lead to the development of three main clinical forms, undifferentiated febrile illness, classic dengue fever (DF) and dengue hemorrhagic fever with or without shock (DHF / DSS). Previous work to use the strain of mice C57black / 6 obtained results as intraperitoneal hemorrhage and injury to the liver of infected animals, so it was of interest to study how it develops the DENV-1 infection in these animals. So the main objective was to study the DENV-1 infection in C57BL / 6 mice inoculated intraperitoneally. We analyzed the presence of DENV-1 in different organs brain, spleen, liver, kidney and serum from animals C57 Black/6 immunologically competent, as previous work by several research groups in the area is controversial results showing that the subsequent detection of DENV would depend on factors such as viral load, type of infected animals and especially the viral strain used. he main conclusions of our work, the C57BL / 6 infected with DENV-1 mochisuki had detectable viral load until the sixteenth day, in addition to thrombocytopenia, increased hematocrit and levels of IL-10, IFN- and TNF - from the seventh day of infection. So the animal C57BL / 6 wild can be used as an experimental model for infection with DENV

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-09Bitstream added on 2014-06-13T21:07:33Z : No. of bitstreams: 1 siqueira_ak_me_botfmvz.pdf: 464792 bytes, checksum: aae10b408540ec568f7000a9c01f5a54 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Escherichia coli e considerado o principal agente causal de infeccao de trato urinario (ITU) e piometra em caes. A patogenicidade das linhagens esta relacionada a presenca de adesinas e diferentes fatores de virulencia. Foram avaliadas alteracoes hematologicas e diferentes fatores de virulencia em 51 linhagens de E. coli isoladas de ITU, 52 de piometra e 55 de fezes de caes sem sinais entericos. A producao de ¿-hemolisina foi verificada em 26 (51,0%) das estirpes de ITU e em 20 (38,5%) de piometra. Exames hematologicos revelaram principalmente anemia, trombocitopenia e leucocitose por neutrofilia e monocitose nos caes com ITU e piometra. Os maiores indices de sensibilidade nas 158 estirpes foram observados para norfloxacina, ciprofloxacina e enrofloxacina em mais de 60% dos isolados. Os maiores indices de resistencia foram encontrados em 60% ou mais das estirpes com o uso de sulfametoxazole/trimetoprim. Linhagens resistentes a tres ou mais antimicrobianos foram constatadas em 24 (47,1%) de ITU, 7 (13,5%) de piometra e 4 (7,3%) das fezes, das quais respectivamente, 17 (33,3%), 1 (1,9%) e 3 (5,5%), com resistencia multipla a cinco ou mais drogas. fimH foi observado em mais de 90% dos isolados. papC foi detectado em 12 (23,5%) linhagens de ITU, 19 (36,5%) de piometra e 10 (18,2%) das fezes. papGI nao foi detectado, enquanto papGII foi observado em 3 (5,8%) isolados de piometra. papGIII foi expressado em 10 (19,6%) linhagens de ITU, 15 (28,8%) de piometra e 9 (16,4%) das fezes. sfaS foi encontrado em 22 (43,1%) de ITU, 24 (46,1%) de piometra e 19 (34,5%) das fezes. afa foi detectado em 1 (1,9%) linhagem de ITU e de piometra... / Escherichia coli is considered the more important microrganism in urinary tract infection (UTI) and pyometra in dogs. The pathogenicity of strains is associated with different adhesins and virulence factors. Haematological exams and different virulence factors was evaluated in 51 E. coli strains isolated from UTI, 52 from pyometra and 55 from feces of dogs without enteric signs. Alpha-haemolysin was verified in 26 (51.0%) strains from UTI and 20 (38.5%) from pyometra. Haematological exams revealed mainly anaemia, thrombocytopenia and leucocytosis by neutrophilia and monocitosis in dogs with UTI and pyometra. Norfloxacin, ciprofloxacin and enrofloxacin were the most-effective drugs (>60%) for 158 E. coli strains. High rates of E. coli resistance to antimicrobials were observed in 60% or more of strains using sulfametoxazole/trimetoprim. Multiple drug resistance for three or more antimicrobials was observed in 2 (47.1%) strains isolated from UTI, 7 (13.5%) from pyometra and 4 (7.3%) from feces. From these, 17 (33.3%), 1 (1.9%) and 3 (5.5%), respectively, showed multiple resistance to five or more drugs. fimH was observed in 90% or more of 158 isolates. papC was detected in 12 (23.5%) strains isolated from UTI, 19 (36.5%) from pyometra and 10 (18.2%) from feces. None strain expressed papGI, while papGII was observed in 3 (5.8%) strains of pyometra. papGIII was detected in 10(19.6%) strains of UTI, 15 (28.8%) from pyometra and 9 (16.4%) from feces. sfaS was observed in 22 (43.1%) strains of UTI, 24 (46.1%) of pyometra and 19 (34.5%) of feces. afa was identified in 1 (1.9%) strains isolated from UTI and pyometra...(Complete abstract, click electronic address below)

Orientador: Leila Trevisan Braz / Resumo: O míldio da alface, causado por Bremia lactucae, é uma das doenças mais importantes dessa cultura, causando inúmeros prejuízos. O surgimento de novas raças torna seu controle desafio constante para os melhoristas de alface, devido à necessidade de sempre buscar novos genes de resistência para o controle da doença. O objetivo deste trabalho foi monitorar as raças de B. lactucae presentes em regiões produtoras de alface do estado de São Paulo, no ano de 2014, e avaliar a sua distribuição no período de 2003 a 2014, a fim de dar suporte ao programa de melhoramento genético de alface da UNESP - FCAV. Amostras de folhas com sintomas de B. lactucae foram coletadas em regiões produtoras do estado de São Paulo, a partir das quais os esporângios foram multiplicados na cultivar Solaris, para então iniciar a fase de diferenciação das raças. A avaliação das diferenciadoras foi realizada quando houve esporulação na cultivar suscetível Green Towers, sendo atribuídos sinais +, (+), - e (-), de acordo com a esporulação observada. Já em relação à distribuição de B. lactucae no período de 2003 a 2014, foi realizado o levantamento da frequências das raças e dos fatores de virulência identificados nesse período. Em 2014, encontraram-se seis raças: SPBl:13, SPBl:14, SPBl:15, SPBl:16, Bl:21 e SPBl:01. No total, foram identificadas 17 raças no estado de São Paulo, entre 2003 e 2014, nos 33 municípios avaliados. A SPBl:01, ocorreu em 35% dos 514 isolados avaliados. Dos 19 fatores de virulência avalia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The downy mildew of lettuce caused by Bremia lactucae is one of the most important diseases of this crop, causing major damage during the winter season. The occurrence of new races is a constant challenge for lettuce breeders, due the need of always search for new resistance genes for genetic disease control. The aim of this study was to survey the B. lactucae races, in lettuce producing regions in Sao Paulo State in 2014, and its distribution from 2003 to 2014, to support the lettuce genetic breeding program of the UNESP - FCAV. Leaf samples containing symptoms of B. lactucae were collected from producing regions of Sao Paulo State, from which the sporangia were multiplied in Solaris cultivar, and thereafter it was started the stage of races differentiation. The assessment was performed when the differentiating susceptible cultivar Green Towers showed sporulation, being attributed the signs +, (+) - and (-), according to sporulation observed. To assess the distribution of B. lactucae from 2003 to 2014, it was performed a study of the frequency of the races and virulence factors identified in this period. In 2014, it was found six races - SPBl:13, SPBl:14, SPBl:15, SPBl:16, Bl:21 e SPBl:01. In total, 17 races were identified in Sao Paulo State between 2003 and 2014, in 33 municipalities assessed. The race SPBl:01 occurred in 35% of the 514 isolates tested. From the 19 virulence factors assessed, the ones that did not occur in the population of B. lactucae, in Sao Paulo state,... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Desde a primeira enzima ?-lactamase de espectro estendido (ESBL) detectada, na década de 1980, o número de diferentes enzimas ESBL têm aumentado exponencialmente. Houve também aumento no número de relatos de isolamento de bactérias resistentes presentes em alimentos de origem animal. O objetivo deste estudo foi avaliar enterobactérias de microbiota de frangos comerciais saudáveis, de granjas localizadas no interior do Estado de São Paulo (Brasil), quanto à resistência a antimicrobianos e ao potencial de virulência. Foram avaliadas todas as enterobactérias que apresentaram resistência à cefotaxima e/ou ceftazidima de 200 frangos comerciais para consumo humano. O teste de sensibilidade aos antimicrobianos foi realizado por disco de difusão para diferentes classes de antimicrobianos incluindo ?- lactâmicos e não ?-lactâmicos. Reação em cadeia da polimerase e sequenciamento foram utilizados para a pesquisa de genes codificadores de ESBL, ?-lactamases AmpC e determinantes de resistência às quinolonas mediada por plasmídeos (PMQR). A similaridade genética dos isolados foi caracterizada por eletroforese em campo pulsado (PFGE) e a localização cromossômica ou plasmideal de genes de resistência foi avaliada por I-Ceu IPFGE ou S1-PFGE. Além disso, experimentos de conjugação, tipagem de plasmídeos, investigação de filogenia e de virulência foram realizados. Em todas as amostras de cloaca coletadas foram identificados Enterobacteriaceae, incluindo Escherichia coli, Escherichia fergusonii, Klebsiella oxytoca e Klebsiella pneumoniae resistentes à cefotaxima e/ou ceftazidima. Salmonella sp não foi detectada. Foi encontrada ampla diversidade genômica entre todos os isolados classificados entre diferentes tipos de PFGE. Foram detectados diferentes genes codificadores de ?-lactamases, a maioria em diferentes plasmídeos, de diversos tamanhos, sendo alguns conjugativos, presentes em diferentes populações bacterianas. Foram identificados isolados de E. coli produtores de CTX-M-2, com inserção do gene blaCTX-M-2 no cromossomo bacteriano. Plasmídeo IncI (ST113/ST114) foi identificado carreando o gene blaCTX-M-8. Foram também encontrados os genes codificadores de ?- ii lactamase, blaCTX-M-2 e blaCTX-M-15, sendo carreados por plasmídeos. Foi identificado gene blaCMY-2 disseminado por plasmídeos de diferentes grupos de incompatibilidade, na população comensal de E. coli. Nos isolados que abrigavam gene PMQR, além das resistências às quinolonas, foi observado também resistência a outras importantes classes de antimicrobianos. Genes determinantes de PMQR abrigados em plasmídeos tipo ColE foram encontrados em E. coli, E. fergusonii, K. oxytoca e K. pneumoniae. Todas as aves comerciais de granjas localizadas no interior do Estado de São Paulo, incluídas nesse estudo, apresentaram isolados considerados multirresistentes a antimicrobianos e o trato intestinal destes frangos é reservatório dos genes de resistência em enterobactérias da microbiota normal. Além disso, alguns isolados demonstraram alto potencial de virulência, incluindo a capacidade de adesão e invasão em células epiteliais in vitro. / of commercial poultry in farms located at the countryside of São Paulo State (Brazil). All enterobacteria presenting cefotaxime and/or ceftazidime resistance from 200 commercial broiler chickens for human consumption were evaluated. Antimicrobial susceptibility testing was performed by disc diffusion for different classes of antimicrobials, including ?-lactams and non-?-lactams. The genes encoding ESBL, ampC ?-lactamases and determinants of plasmid mediated quinolone resistance (PMQR) were screened by polymerase chain reaction and sequencing. Genetic similarity of bacterial isolates was characterized by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and the location of the resistance genes in the chromosome or plasmids was evaluated by I-CeuI-PFGE or S1-PFGE. Additionally, experiments of conjugation, plasmid typing, phylogeny and virulence characterization were performed. Enterobacteriaceae were identified in all cloacal swab samples, including Escherichia coli, Escherichia fergusonii, Klebsiella oxytoca and Klebsiella pneumoniae resistant to cefotaxime and/or ceftazidime. Salmonella sp. was not detected. High genetic diversity was detected among all isolates, classified into diferent types of PFGE. Different genes coding for ?-lactamases were detected, harbored in diverse plasmids, of different sizes, some were conjugative and were present in different bacterial populations. E. coli isolates producing CTX-M-2 were identified, harbouring the blaCTX-M-2 gene inserted into the chromosome. IncI (ST113/ST114) plasmid was identified carrying the blaCTX-M-8 gene. The ?-lactamase coding genes, blaCTX-M-2 and blaCTX-M-15 were also found in plamids. The gene blaCMY-2 was found disseminated in different types of plasmid replicons in the commensal E. coli population. In isolates harbouring PMQR genes, in addition to the quinolones resistance, was observed resistance to other important antimicrobials classes was observed. PMQR determinant genes harbored in ColE-like plasmids were found in E. coli, E. fergusonii, K. oxytoca and K. pneumoniae. All commercial poultry from farms located at São Paulo State, evaluated in this study, carried isolates considered multidrug resistant and the intestinal tract of these chickens is reservoir of resistant genes blaCTX-M-2, blaCTX-M-8 and blaCTX-M-15 in enterobacteria from the normal microbiota. Moreover, some have demonstrated a high virulence potential, with adhesion and invasion capacity in epithelial cells cultured in vitro.

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Resumo: Escherichia coli é o principal agente de mastite clínica bovina de origem ambiental, caracterizado pela complexidade de fatores de virulência (FV). O patógeno causa sinais clínicos que variam desde alterações exclusivamente no leite (grau 1 ou leve), no quarto afetado (grau 2 ou moderado), até manifestações sistêmicas (grau 3 ou grave). No entanto, até o momento, não está estabelecido o perfil de genes deste patógeno relacionados à virulência em infecções mamárias em vacas, tampouco com a gravidade clínica dos casos. Neste cenário, o presente estudo investigou 18 genes associados com E. coli extraentérica (ExPEC), o perfil “in vitro” de motilidade swimming e swarming, e a sensibilidade/resistência aos antimicrobianos em 114 isolados de E. coli obtidos de vacas com mastite clínica com escores de gravidade 1 (45/114=39,5%), 2 (62/114=54,4%) e 3 (7/114=6,1%). Os principais genes codificadores de FV detectados foram de adesinas (fimH, 114/114=100%; ecpA, 73/114=64,0%; fimA, 36/114=31,6%), resistência ao soro (traT, 93/114=81,6%; ompT, 40/114=35,1%), sideróforos (irp2, 11/114=9,6%) e hemolisina (hlyA, 8/114=7%). Os isolados apresentaram 99,1% (113/114) de resistência in vitro a bacitracina e cloxacilina, 98,2% (112/114) a lincosamina e 54,4% (62/114) a eritromicina. Do total de isolados, 98,2% (n=112/114) foram multirresistentes pelo cálculo do índice de resistência múltipla aos antimicrobianos (IRMA). Não houve diferença estatística significante entre as medianas para motilidade ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Escherichia coli is the major pathogen involved in the etiology of bovine mastitis from the environment origin. This pathogen is characterized by a complexity of virulence factors (VF). Mammary infections by E. coli has shown a wide range of clinical signs causing changes in milk (score 1 or mild), quarters (score 2 or moderate), and systemic signs (score 3 or severe). Nevertheless, to date, the profile of the genes related to the virulence of this pathogen in mammary infections and the severity scores of the cases are not fully understood. In this scenario, a panel of 18 genes associated with extra-intestinal E. coli (ExPEC) were investigated, in addition to in vitro swimming and swarming motility profile, and antimicrobial susceptibility/resistance pattern among 114 E. coli strains isolated from cows with clinical mastitis showing severity scores 1 (45/114=39.5%), 2 (62/114=54.4%) and 3 (n=7/114=6.1%). The main genes related to VF harbored by isolates were adhesins (fimH, 114/114=100%; ecpA, 73/114=64.0%; fimA, 36/114=31.6%), serum resistance (traT, 93/114=81.6%; ompT, 40/114=35.1%), siderophores (irp2, 11/114=9.6%) and hemolysin (hlyA, 8/114=7%). Among studied isolates, 99.1% (113/114) showed in vitro resistance to bacitracin and cloxacillin, 98.2% (112/114) to lincosamin, and 54.4% (62/114) to erytromycin. Out of the total isolates, 98.2% (112/114) were considered multidrug resistant based on multiple antimicrobial resistance (MAR) index. No statistical difference was obs... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Streptococcus agalactiae, ou Estreptococo do Grupo B, é um microrganismo que encontrado na microbiota intestinal, vaginal e/ou geniturinária de 10-30% de mulheres saudáveis. A principal infecção causada por S. agalactiae é a sepse neonatal. O bebê pode adquirir o microrganismo durante o parto ao passar pelo canal vaginal, ou até mesmo durante a gestação, caso haja ascensão de S. agalactiae para o útero. Existem diversos fatores associados à infecção do feto por S. agalactiae quando a mãe é colonizada, tais como fator CAMP, cápsula de polissacarídeos, hialuronidase, β-citolisina/hemolisina e pili. Não existe consenso ou recomendação técnica sobre o tema no Brasil. Segundo o Caderno de Atenção Básica ao Pré-Natal, não existem estudos que levem à recomendação da antibioticoterapia intraparto. É necessário elucidar as características genotípicas de cepas de S. agalactiae isoladas no Brasil para alinhar as práticas clínicas às características fenotípicas do microrganismo. Desta forma, os objetivos deste projeto são: i) classificar cepas de S. agalactiae isoladas de gestantes e não gestantes quanto ao sorotipo capsular, por PCR Multiplex, ii) avaliar a presença e distribuição de fatores de virulência, por PCR e iii) avaliar o perfil de resistência antimicrobiana, pelo método de disco difusão e teste D. Os achados de virulência e resistência a antimicrobianos foram comparados com os sorotipos, gestação, localização geográfica e sítio de isolamento. Foram analisadas 292 cepas isoladas de gestantes e não gestantes em São Paulo, São José dos Campos e Rio de Janeiro. O sorotipo Ia foi o mais prevalente entre as cepas. Na cidade de São José dos Campos não houve diferença significativa entre a prevalência dos sorotipos Ia e V, sendo que o sorotipo V foi mais abundante do que nas cidades de São Paulo e Rio de Janeiro. O sorotipo II foi mais abundante em mulheres não gestantes do que gestantes. Não foram encontradas cepas resistentes à Penicilina e vancomicina; contudo a resistência a Cefepima, Eritromicina e Clindamicina ficou em torno de 22%. Foram encontradas diferenças entre os sorotipos quanto à resistência, genes de virulência e sítio de isolamento das cepas. Portanto essas diferenças podem se refletir no perfil epidemiológico da infecção por S. agalactiae quanto à localização geográfica também quanto à gestação. A incidência de sepse causada por S. agalactiae diminuiu muito nas últimas décadas, contudo o monitoramento constante é necessário para alinhar as práticas clínicas às características fenotípicas do microrganismo. / Streptococcus agalactiae, or Group B Streptococcus, is a microorganism found in intestinal, vaginal and/or genitourinary microbiota from about 10-30% of all healthy women. The main infection caused by S. agalactiae is neonatal sepsis. The baby can contract the infection during labor when passing through the vaginal canal, or even during pregnancy, if S. agalactiae ascends from the vaginal canal to the uterus. There are several factors associated to the infection of the fetus by S. agalactiae when the mother is colonized, such as the CAMP factor, polysaccharide capsule, hyaluronidase, β-cytolysin/hemolysin and pili. There is no consensus or technical recommendation regarding this theme in Brazil. According to the Brazilian guidelines to prenatal care, there is no research that justifies the implementation of intrapartum antibiotic therapy. There is a need to clarify genotype characteristics of S. agalactiae strains isolated in Brazil in order to align clinical practices to phenotypical characteristics of this microorganism. This way, the goals of this project are: i) to classify S. agalactiae strains isolated from pregnant and nonpregnant women according to their capsular serotype, using PCR Multiplex, ii) to evaluate the presence and distribution of virulence factors, using PCR and iii) to evaluate their antibiotic resistance profile, using disk-diffusion and D-zone tests. The findings regarding virulence and resistance were compared to serotypes, pregnancy, geographic localization and the site where the sample was isolated. A total of 292 strains from pregnant and nonpregnant women from the cities of São Paulo, São José dos Campos and Rio de Janeiro were analyzed. Serotype Ia was the most prevalent among the strains. In São José dos Campos there was no significate difference in the prevalence of serotypes Ia and V. Serotype V was the most abundant in São Paulo and Rio de Janeiro. Serotype II was most prevalent in nonpregnant women when compared to pregnant women. No resistance to Penicillin nor Vancomycin was found. However, resistance to Cefepime, Erythromycin or Clindamycin was found in around 22% of strains. There were differences among serotypes regarding resistance, virulence genes and site where the strain was isolated. Therefore these differences can reflect into the epidemiologic profile of S. agalactiae infection in regards to geographic localization and pregnancy. The incidence of sepsis caused by S. agalactiae has decrease in the last few decades, however constant monitoring is necessary in order to align clinical practice to the microorganisms phenotypical characteristics.