Introdução: a cistite intersticial é doença crônica do trato urinário inferior cujos sintomas são: aumento da freqüência urinária, nictúria, dor pélvica ou perineal que piora com a repleção vesical e melhora com a micção. A etiopatogenia não é totalmente conhecida, mas há indícios de que os glicosaminoglicanos e proteoglicanos que revestem o urotélio vesical possam participar da sua gênese. A perda destes componentes protetores facilitaria o contato de íons e solutos presentes na urina com as porções mais profundas do urotélio desencadeando e perpetuando um processo inflamatório local. Para tentar entender seu metabolismo, investigamos o comportamento dos glicosaminoglicanos na urina e no tecido (biópsia do urotélio vesical) de pacientes portadoras de cistite intersticial e de incontinência urinária de esforço genuína. Casuística e métodos: o perfil e expressão gênica de glicosaminoglicanos no tecido, e o perfil dos glicosaminoglicanos da urina de 11 pacientes com cistite intersticial foram comparados aos de 11 pacientes com incontinência urinária de esforço. A análise estatística foi feita através de teste T e Anova, considerando significativos valores p<0,05. Resultados: verificamos que pacientes com cistite intersticial excretam menor concentração de glicosaminoglicanos na urina do que as portadoras de incontinência urinária de esforço (0,45 ± 0,11 x 0,62 ± 0,13 g/mg creatinina, p<0,05), porém sem redução do conteúdo de glicosaminoglicanos no urotélio. Na imunofluorescência o urotélio de pacientes com cistite intersticial mostrou maior marcação de TGF-beta, decorim (um proteoglicano de condroitim/dermatam sulfato), fibronectina e de ácido hialurônico. Foi identificada menor expressão gênica (PCR em tempo real) das sintases e uma hialuronidase do ácido hialurônico no urotélio das cistites intersticiais. Conclusão: a combinação desses resultados sugere que os glicosaminoglicanos podem estar relacionados ao processo contínuo de inflamação e remodelamento do urotélio disfuncional presente na cistite intersticial. O estudo da expressão gênica pode representar uma altenativa para o entendimento da doença. / Introduction: interstitial cystitis is a chronic disease of the lower urinary tract whose symptoms are: increased urinary frequency, nocturia, perineal or pelvic pain that worses with bladder filling and improves with urination. The pathogenesis is not fully known, but there is evidence that proteoglycans and glycosaminoglycans lining the bladder urothelium can participate in its genesis. The loss of these protective compounds facilitate the contact of ions and solutes in the urine with deeper portions of bladder wall triggering and perpetuating a local inflammatory process. We investigated GAG behavior in urine and tissue (biopsy of bladder urothelium) of patients with IC/PBS and genuine stress urinary incontinence (SUI) in an attempt to better understand its metabolism. Patients and Methods: gene expression and glycosaminoglycans profile in tissue, and glycosaminoglycans profile in urine of 11 patients with interstitial cystitis were compared to 11 patients with pure urinary stress incontinence. Statistical analysis were performed using t Student test and Anova, considering significant when p<0,05. Results: patients with interstitial cystitis excreted lower concentration of glycosaminoglycans in urine when compared to those with pure urinary stress incontinence (respectively 0.45 + 0.11 x 0.62 + 0.13 mg/mg creatinine, p< 0.05). However, there was no reduction of the content of glycosaminoglycans in the urothelium of both patients. The immunofluorescence study showed that patients with interstitial cystitis had a stronger staining of TGF-beta, decorin (a proteoglycan of chondroitin/dermatan sulfate), fibronectin and hyaluronic acid. We were able to indentify by real-time PCR lower gene expression of hyaluronic acid synthases and hyaluronidase in the urothelium of patients with interstitial cystitis. Conclusion: the results suggest that glycosaminoglycans may be related to the ongoing process of inflammation and remodeling of the dysfunctional urothelium that is present in the interstitial cystitis. The study of the gene expression may represent an alternative to understand the disease

Orientador: Hermes Pretel / Resumo: O objetivo desse estudo foi realizar a caracterização morfo-fisicoquimica e avaliar a resposta histopatológica e a biodegradação de AH indicados para preenchimento dérmico: DMC-Facial 12,5% (D12) e RennovaFill (RF) e aumento volumétrico de tecido: DMC-Facial 15% (D15) e RennovaLift (RL). A caracterização foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV), espéctroscopia dispersiva de raios X (EDX) e infra vermelha com transformada de Fourier (FT-IR) e reometria dinâmica oscilatória. Para avaliação da resposta histopatológica e da biodegradação foi implantado 0,1 mL de cada AH no plano sub-dérmico do dorso de 25 ratos Hostsman, aleatóriamente distribuidos em 5 grupos (n=5), de acordo com o tempo de implantação dos AH (7, 14, 30, 60 e 120 dias). Um examinador experiente (HP), calibrado e cego para os AHs utilizados analisou os cortes. Modelo loglinear e teste de quiquadrado (χ2) foram utilizados para avaliar a associação entre os AH e a intensidade da resposta histopatológica e biodegradação para p<0,05. A hipótese nula (H0) foi rejeitada pois tanto na caracterização morfo-fisicoquimica quanto na avaliação da resposta histopatológica e da biodegradação mostraram diferenças signficatica entre os Ahs testados. Pode-se concluir que: 1) AH com a mesma indicação clínica diferem tanto nas características morfo-fisicoquimica com na resposta inflamatória provocada e no padrão de biodegradação. 2) O nível de resposta histopatológica depende do AH utilizado. 3) Uma morfologia es... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The aim of this study was to perform the morpho-physicochemical characterization and to evaluate the histopathological response and biodegradation of AH indicated for dermal filling: DMC-Facial 12.5% (D12) and RennovaFill (RF) and tissue lifting: DMC-Facial 15% (D15) and RennovaLift (RL). The characterization was performed by scanning electron microscopy (SEM), X-ray dispersive (EDX) and Fourier transform infra red spectroscopy (FT-IR) and oscillatory dynamic rheometry. To evaluate the histopathological response and biodegradation, 0.1 mL of each HA was implanted in the dorsal subdermal plane of 25 male Hostsman rats, randomly distributed in 5 groups (n = 5), according to the time of implantation of AH: 7, 14, 30, 60 and 120 days). Slides were analyzed by a experienced examiner (HP), calibrated and blinded for the AH used. Loglinear model and chi-square statistical test (χ2) were used to evaluate the association between AH and the intensity of histopathological response and biodegradation for p <0.05. Results: The null hypothesis (H0) was rejected because both the morpho-physicochemically characterization and the histopathological analysis showed significant differences between the tested AHs. It can be concluded that: 1) AH with the same clinical indication differ in the morpho-physicochemical characteristics, in the inflammatory response and in the biodegradation pattern. 2) The level of histopathological response depends on the AH used. 3) A structural morphology characteristic of D12 and D15, formed by chambers separated by thin septa, with sharp and irregular borders, causes a greater inflammatory response, 4) All HA tested stimulated the fibroblast and collagen neoformation. 5)...(Complete abstract electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 255513.pdf: 785451 bytes, checksum: 1aef8be7f91aa2c82126438f348a284d (MD5)

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2009 / Bibliografia: f. 26-28 / O objetivo deste estudo foi avaliar histológica e histometricamente o reparo de defeitos ósseos criados em tíbias de coelhos preenchendo-os com gel de ácido hialurônico, osso bovino inorgânico e a combinação de ambos. Foram utilizados 16 coelhos albinos d / The aim of this study was to analyze bone repair in osseous defects filled with blood cloth (control), hyaluronic acid gel, deproteinized bovine bone mineral and the combination of them. It was used 16 rabbits in which were created 2 cavities of 4.1mm dia

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Introdução: A Hepatite Crônica Viral C tem curso altamente variável, sendo habitualmente assintomática. Os testes laboratoriais empregados não refletem com fidedignidade o estadiamento hepático. A biópsia hepática implica custos, riscos e dificuldade de repetição durante a evolução de hepatopatia crônica. Alguns marcadores séricos têm sido estudados como método alternativo para diagnóstico da fibrose hepática. Objetivos: Este estudo se propõe correlacionar o índice aspartato aminotransferase (AST)/alanino aminotransferase (ALT), os níveis séricos de gama-glutamiltransferase (GGT), a contagem de plaquetas, o índice APRI (quociente AST/plaquetas) e o ácido hialurônico (AH) ao estadiamento histológico (padrão-ouro) nos pacientes portadores de hepatite crônica viral C e avaliar a variação dos marcadores indiretos de fibrose pós-terapia antiviral. Casuística e métodos: Os 72 pacientes estudados foram divididos em dois grupos de acordo com o grau de fibrose (F) conforme os critérios de METAVIR (GI: F= 0, 1 e 2; n=48 e GII: F = 3 e 4; n=24). Foram dosadas no sangue periférico as concentrações de AH (por método imunofluorimétrico), de AST, ALT, GGT e plaquetas e a, partir desses valores foram calculados os índices AST/ALT e APRI. Os valores foram expressos com média ± desvio padrão, e na análise estatística foram utilizados os testes t de Student e correlação de Spearman. Nos casos em que as médias foram diferentes, foram construídas curvas ROC e estimadas a sensibilidade, a especificidade, VPP e VPN desses marcadores. Receberam tratamento com Interferon associado à Ribavirina 65 pacientes. Os indivíduos que completaram o tratamento foram submetidos à nova dosagem dos marcadores séricos 6 meses após o término da terapia antiviral, tendo sido utilizadas técnicas de análise de variância (ANOVA) para avaliação das medidas repetidas. Resultados: As dosagens séricas do AH foram significativamente mais elevadas no grupo com fibrose hepática avançada (GII 68,9±41,2ng/ml x GI 27,3±12,5 ng/ml) e se correlacionaram ao estadiamento hepático (p<0,01), com sensibilidade de 79,2% e especificidade de 85,4%. Os demais marcadores testados - GGT, plaquetas e índice APRI - também apresentaram diferença significativa entre os grupos com fibrose inicial e avançada, exceto o índice AST/ALT. A análise das áreas sob as curvas ROC (AUC) evidenciou que os marcadores que melhor se correlacionaram com o estágio de fibrose hepática foram o índice APRI e a dosagem sérica do ácido hialurônico - AUC (APRI) = 0,85 e AUC (AH) = 0,86. Até a avaliação final deste estudo, concluíram o tratamento 33 pacientes, sendo 19 com RVS e 14 NR. Na avaliação pós-tratamento a concentração sérica de GGT e o índice APRI apresentaram redução em ambos os grupos (respondedores e não respondedores), porém o AH apresentou redução com grau de significância estatística apenas nos pacientes com resposta virológica sustentada (p<0,05). Conclusões: Dos marcadores séricos avaliados, o índice APRI e o ácido hialurônico apresentaram maior valor preditivo no estadiamento dos pacientes portadores de hepatite crônica C, podendo representar uma alternativa à biópsia hepática. A concentração sérica do ácido hialurônico apresentou associação com a resposta virológica. / Introduction: The chronic hepatitis C (CHC) has highly variable course, being habitually assymptomatic. The used laboratorial tests do not reflect with fidedignity the assessment of hepatic fibrosis. The hepatic biopsy involves costs, risks and dificulty of repetition during the evolution of chronic hepatitis. Some serum markers have been studied as alternative method for diagnosis of the liver fibrosis. Objectives: This study proposes to correlate the index aspartate aminotransferase (AST)/alanine aminotransferase (ALT), the serum levels of gama-glutamyltransferase (GGT), platelet count, the index APRI (AST to platelet ratio index) and the hyaluronic acid (HA) to the histological assessment (the gold standard) in CHC patients and to assess the variation of indirect markers of fibrosis antiviral after therapy. Materials and methods: The 72 studied patients were divided-up into two groups according to the degree of fibrosis (F), using the METAVIR score (GI:F= 0, 1 and 2; n=48 / GII:F=3 and 4; n=24). The concentrations of AST, ALT, GGT, platelets and HA, were dosed in the blood peripherical (by means of immunefluorimetric method), and from these values the indexes AST/ALT and APRI were calculated. The values were expressed with mean±standard shunting and the statistic analysis were used the tests t of student and correlation of Spearman. In the cases which the means were differents, the curves ROC were constructed and calculated sensibility, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of these variables. 65 patients received treatment with Interferon associated to Ribavirina. The patients that have completed the treatment were submitted to new dosage of the serum markers six months after the ending of the antiviral therapy and we have used techniques of analysis of variance (ANOVA) for assessment of the repeated measures. Results: The levels of hyaluronic acid were significantly more raised in the group with advanced liver fibrosis (GII 68,9±41,2ng/ml x GI 27,3±12.5ng/ml) and correlated themselves to the assessment of hepatic fibrosis (p<0,01); sensibility, specificity, PPV and NPV were 79,2%, 85,4%, 73% and 89% respectively. The others markers tested - GGT, platelet count and index APRI - also have presented significant difference among the groups with initial and advanced fibrosis, except the index AST/ALT. The analysis of the areas under the ROC curves (AUC) evidenced that the markers which more have correlated themselves with the degree of liver fibrosis were the index APRI and HA levels - AUC (APRI) = 0,85 and AUC (HA) = 0,86. Until the final assessment of this study, 33 patients concluded the treatment (19 responders and 14 non-responders). Among the studied markers, the serum concentration of GGT and the index APRI have shown reduction in responders and non-responders, but just hyaluronic acid felt only complete responders (p<0,05). The serum markers haven`t presented association with the virological response. Conclusions: The index APRI and the hyaluronic acid have shown greater predictive value in the histological assessment of CHC patients and might be an alternative to liver biopsy. Serum hyaluronic acid measurement presented association with the virological response / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: avaliar comparativamente a concentração de ácido hialurônico na cobertura, ligamento e músculo de prega vocal normal de homens e mulheres, jovens e idosos. Método: Utilizou-se uma proteína de ligação ao ácido hialurônico (AH) obtida de cartilagem nasal bovina em um ensaio fluorimétrico. Placas de ELISA contendo a proteína de ligação adsorvida em sua superfície foram sequencialmente incubadas com: amostras de material da porção medial da cobertura, ligamento e músculo da prega vocal de 19 indivíduos jovens e 20 idosos, de ambos os sexos, proteína de ligação conjugada com biotina e estreptavidina ligada a európio. Após a liberação de európio em solução de enhancement, a fluorescência final foi mensurada com auxílio de um fluorímetro. Resultado: Comparação estatisticamente significante: (1) Maior concentração de AH na cobertura e no ligamento em relação ao músculo em toda a amostra; (2) Maior concentração de AH no ligamento em relação ao músculo nos jovens dos sexos masculino e feminino, considerando-se separadamente cada grupo. Dados sem significância estatística: (3) Maior concentração de AH no ligamento em relação às demais porções; (4) Maior quantidade de AH nas mulheres jovens na cobertura e menor no ligamento em comparação com homens jovens; (5) Queda nos valores de AH com o envelhecimento sendo mais pronunciada na cobertura no sexo feminino e em todas as porções no sexo masculino; (6) Diminuição dos valores de AH foi observada nos indivíduos idosos do sexo masculino, em todas as porções, mantendo a diferença entre os sexos na cobertura. Conclusão: Do estudo de concentração de ácido hialurônico em pregas vocais de jovens e idosos, podemos concluir que: há maior concentração de AH na cobertura e no ligamento em relação ao músculo em toda a amostra; é encontrada maior concentração de AH no ligamento em relação ao músculo nos jovens de ambos os sexos, considerando-se separadamente cada grupo. / Objective: to compare and evaluate hyaluronic acid (HA) concentration in the cover, vocal ligament, and vocal muscle of normal vocal folds, in young and elderly men and women. Method: A hyaluronic acid binding protein obtained from bovine nasal cartilage and determined by fluorometric assay was employed. ELISA plates coated with adsorbed binding protein were sequentially incubated with material samples from the middle portion of the cover, vocal ligament, and vocal muscle of 19 young subjects and 20 elderly ones, of both genders; biotin-conjugated binding protein; and streptavidin-europium conjugate. After europium release in an enhancement solution, final fluorescence was measured in a fluorometer. Results: Statistically significant comparisons: (1) Higher HA concentration in the cover and vocal ligament when compared to vocal muscle, in the whole sample; (2) Higher HA concentration in vocal ligament when compared to vocal muscle in young subjects of both genders, considering each group separately. Statistically non-significant data: (3) Higher HA concentration in vocal ligament when compared to the remaining portions; (4) Higher HA concentration in the cover of young women and lower concentration in vocal ligament when compared to young men; (5) HA value fall with aging, more prominent in the cover of women and in all portions of male subjects; (6) Lower HA concentration in elderly men, in all portions, keeping the difference between genders in the cover. Conclusion: From the hyaluronic acid concentration study in young and elderly subjects’ vocal fold we can conclude that there is a higher HA concentration in the cover and vocal ligament when compared to vocal muscle, in the whole sample; a higher HA concentration in vocal ligament when compared to vocal muscle in young subjects of both genders, considering each group separately. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-04-17T18:40:01Z No. of bitstreams: 1 2016_AntônioMiltonVieiraGomes.pdf: 3388910 bytes, checksum: 28c2639e6dd6374b37ddf0a5c1550cc5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-17T21:45:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AntônioMiltonVieiraGomes.pdf: 3388910 bytes, checksum: 28c2639e6dd6374b37ddf0a5c1550cc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T21:45:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AntônioMiltonVieiraGomes.pdf: 3388910 bytes, checksum: 28c2639e6dd6374b37ddf0a5c1550cc5 (MD5) / O ácido hialurônico (AH) é um biopolímero composto de repetições alternadas dos monossacarídeos Ácido Glucurônico e N-Acetil glucosamina, sendo presente em todos os vertebrados e em humanos principalmente na pele. O AH possui aspecto viscoso, ajuda no rejuvenescimento da pele quando aplicado em humanos e é uma molécula considerada segura na utilização em animais em geral, por estes motivos o AH é muito utilizado na indústria farmacêutica e médica. Atualmente o AH é produzido por bactérias, que em diferentes níveis, são patogênicas aos animais, o que dificulta o escalonamento desta tecnologia e eleva os custos de purificação o que torna o AH uma molécula de alto custo financeiro. Leveduras não são capazes de sintetizar AH, mas são fábricas perfeitas para a sua produção, uma vez que são consideradas seguras, mais adaptadas às condições industriais quando comparado a bactérias e possuem parcialmente a via da síntese do ácido AH, sendo capazes de sintetizar um de seus precursores, o açúcar N-Acetil Glucosamina. As enzimas HAS (Hyaluronic Acid Synthases) que sintetizam AH são proteínas que se acoplam à membrana das células formando novas cadeias de AH pela junção dos dois açúcares precursores. Todos os vertebrados possuem HAS semelhantes e classificadas como Classe I, enquanto que a bactéria patogênica Pasteurella multocida, possui uma HAS diferente classificada como classe II. A fim de observar o possível impacto na síntese de AH devido às diferenças entre HAS de classe I de classe II, estes foram inseridos na levedura Klyveromyces lactis concomitante com o gene hasB (UDP-Glicose Desidrogenase). Com o auxílio de um estudo que testou a eficiência de transformação de K. lactis por metodologias de choque térmico e de eletroporação, foram construídas 4 cepas recombinantes de K. lactis contendo as diferentes formas de HAS de modo a aumentar a produção de AH pela levedura. Após a construção das cepas recombinantes, um meio otimizado baseado nas necessidades de co-fatores e metabólitos principais utilizados na via de síntese de AH foi desenvolvido e utilizado nas cinéticas de crescimento de K. lactis. Também testada, a influência das fontes de carbono glicose, sacarose, lactose e galactose foram visualizadas durante o crescimento nas cepas produtoras de AH, uma vez que diferentes fontes de carbono afetam de maneira diferente a glicólise e consequentemente o metabolismo de AH na célula. Lactose e sacarose aumentaram a produção de AH nas células em relação a galactose e glicose devido a um abastecimento mútuo da via de síntese dos dois precursores do AH. Utilizando lactose como fonte de carbono, foi alcançada uma melhor produção de 0,39 g/L de AH, valor competitivo com os alcançados por outra única levedura produtora de AH, o que prova pela primeira vez que K. lactis é uma potencial candidata para otimização da produção deste biopolímero. / Hyaluronic acid (HA) is a biopolymer composed of alternating repeats of monosaccharides Glucuronic Acid and N-Acetyl glucosamine, being present in all vertebrates and humans mainly in the skin. The HA has a viscous appearance, is used in skin rejuvenation when applied in humans and is a safe molecule for application in animals in general, for these reasons HA is widely used in the pharmaceutical and medical industry. Currently, HA is produced by bacteria pathogenic to humans, and are difficult to scale due to technology and purification costs. Yeasts are perfect factories for HA production, since they are considered safe, more adapted to industrial conditions when compared to bacteria and have partially complete the synthesis route of HA, being able to synthesize one precursor, the UDP-N-Acetyl Glucosamine. HA is produced by HAS (Hyaluronic Acid Synthase) enzymes. HAS enzymes have transmembrane domains that couple to the membrane of the cells forming new chains of HA by the junction of the two precursor sugars located in the cytoplasm. All vertebrates have HAS classified as Class I, whereas the pathogenic bacterium Pasteurella multocida have a different HAS (pmHAS) classified as Class II. To observe the impact on HA synthesis due to the differences between Class I and Class II HAS, in this study the hasA genes were inserted into yeast Klyveromyces lactis concomitant with the hasB gene (UDP-Glucose Dehydrogenase). A total of 4 recombinant strains of K. lactis containing different isoforms of HAS were constructed to increase a production of HA by yeast. After the construction of the recombinant strains, an optimized medium to auxiliary the needs of cofactors and metabolites was used in the synthesis pathway of HA for the development and use of K. lactis in fermentations. Also tested, the influence of the sources of carbon glucose, sucrose, lactose and galactose were visualized in fermentation in the HA producing strains, since different carbon sources affect glycolysis differently and consequently the metabolism of HA in the cell. Lactose and sucrose increased HA production in cells relative to galactose and glucose due to a mutual supply of the synthesis pathway of the two HA precursors. Using lactose as a carbon source, it obtained a better yield of 0.39 g / L of HA, a competitive value with the finished results of another single HA -producing yeast, which proves for the first time that K. lactis is a potential candidate for optimization of the production of this biopolymer.

Resumo: Título: Efeito dos ácidos hialurônicos como condroprotetores em modelo experimental de osteoartrose. Introdução: O tratamento medicamentoso da osteoartrose tem obtido um avanço significativo nas últimas décadas. Medicações condroprotetoras como o ácido hialurônico são utilizadas em aplicações intra-articulares de modo crescente na prática médica. Entretanto, existem controvérsias relacionadas à utilização deste método de tratamento. Objetivo: Analisar os efeitos do ácido hialurônico de diferentes pesos moleculares em modelo experimental de osteoartrose em coelhos. Material e Métodos: 44 coelhos da raça California, machos, foram alocados de modo aleatório em três grupos (PR-S-P), sendo submetidos à ressecção do ligamento cruzado anterior do joelho direito. Decorridos três semanas do procedimento cirúrgico iniciaram-se as três injeções intra-articulares semanais de ácido hialurônico nativo (Polireumin®) grupo PR, ácido hialurônico de cadeia ramificada (Synvisc®) grupo S e soro fisiológico 0,9% grupo P. Todos os animais foram sacrificados após 12 semanas do ato cirúrgico e os platôs tibiais dos joelhos infiltrados foram dissecados. Cortes histológicos da cartilagem das áreas de apoio dos platôs tibiais foram coradas com Alcian Blue pH = 1.0, Alcian Blue pH = 2.5 e Azul de Toluidina para pesquisa da quantidade de proteoglicanos. A intensidade de coloração foi quantificada em um aparelho de microscopia Zeiss Imager.Z2 Metasystems e analisadas pelo software Metafer Msearch. Resultado: O efeito condoprotetor dos ácidos hialurônicos utilizados no estudo foi demonstrado quando comparados ao grupo controle, porém feita a comparação entre si, não houve diferença estatística significante quanto à condroproteção. Conclusão: Os ácidos hialurônicos testados obtiveram efeito condroprotetor, sem diferença estatística com relação aos diferentes pesos moleculares.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000431500-0.pdf: 1563957 bytes, checksum: 69f1b1753af9d037782b9078a3ce2f8f (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Tissue engineering, using pluripotent cells, biocompatible matrixes and growth factors, may play a major role in bone regeneration. Through living tissue biopsy, it is possible to obtain mesenchymal stem cells that, when expanded and cultivated in vitro, can generate several types of tissues. Thus, it is possible to present an alternative to bone grafts, since the amount of material collected is smaller when compared to conventional bone grafts. The present research aimed to find a better biocompatible matrix, evaluating, in vitro, the cytotoxicity of TEOSYAL® hyaluronic acid directly onto pre-osteoblastic lineage mouse cells denominated OFCOL II, in a quantitative and qualitative way. The following experimental groups have been formed: A) Cells + Hyaluronic Acid (HA) + Platelet Rich Plasma with thrombin (PRP) + Hydroxyapatite (HP); B) Cells + HA + PRP + HP; C) Cells + HA + HP; D) Cells + HP; E) Cells + HA; F) Cells + PRP with thrombin; G) Cells + PRP and H) Pure DMEM with 15% of Fetal Bovine Serum (FBS), used as a positive control. The OFCOL II cells were seeded 24 hours before the experiments and incubated at 37ºC with 5% CO2. After reaching the semi-confluence, the cells were exposed to the experimental groups for an additional period of 48 hours under the same temperature and humidity conditions. The cellular viability was evaluated through MTT test and compared to the positive control group H. The numerical values, obtained in absorbance, were subjected to statistical analysis of variance (ANOVA), complemented by TUKEY test, with significance level p < 0. 05 for comparison between all groups. As for comparisons between the control and each experimental group, the T test was used. In the cell morphology evaluation, it was used optical microscopy at magnification 100x. The results proved a decrease in cell viability in groups B (67% viability) and C (68% viability), differing from group D (99% viability). When comparing each experimental group to the positive control group, a statistical difference (p < 0. 05) was obtained for groups B, C and E. Therefore, through these results, it was observed a decrease in cellular viability in the groups with the presence of TEOSYAL® hyaluronic acid. The addition of PRP to hyaluronic acid improved cell viability since it was possible to obtain a survival rate of 79% (group A), although this stimulus was insufficient to enhance it. Regarding image analysis, morphological changes were found in experimental groups and control group. It is possible to conclude that the presence of TEOSYAL® hyaluronic acid exerted a decrease effect on the cell lineage OFCOL II viability. / A engenharia tecidual, dispondo de células, matrizes biocompatíveis e fatores de crescimento, pode exercer um grande papel na regeneração óssea. Através de biopsias de tecido vivo, pode-se obter células-tronco mesenquimais que, quando expandidas e cultivadas in vitro, são capazes de originar tecidos de diversos fenótipos. Desta maneira, é possível estabelecer uma alternativa aos enxertos ósseos, uma vez que a quantidade de material coletado é menor quando comparada aos enxertos ósseos convencionais. Essa pesquisa visou contribuir para a melhor escolha de uma matriz biocompatível, avaliando in vitro, de forma direta, a citotoxicidade do ácido hialurônico TEOSYAL® sobre as células da linhagem pré-osteoblástica de camundongos denominadas OFCOL II de forma quantitativa e qualitativa. Foram criados os seguintes grupos experimentais: A) células + Ácido hialurônico (AH) + Plasma rico em Plaquetas com Trombina (PRP) + Hidroxiapatita (HP); B) células + AH + PRP + HP; C) células + AH + HP; D) células + HP; E) células + AH; F) células + PRP com trombina; G) células + PRP e H) células + DMEM puro com 15% de soro bovino fetal, utilizado como controle. As células OFCOL II foram semeadas 24 horas antes dos experimentos e incubadas em estufa a 370C com 5% de CO2. Após atingirem a semi-confluência, as células foram expostas aos diferentes estímulos conforme o grupo experimental por um período adicional de 48 horas nas mesmas condições de temperatura e umidade.A viabilidade celular foi avaliada através do teste MTT e comparada ao grupo controle H. Os valores numéricos, obtidos através de absorbância, foram submetidos à análise estatística ANOVA, complementados por TUKEY, com nível de significância p < 0,05 para comparação entre todos os grupos. Já para as comparações entre cada grupo experimental e o controle foi utilizado o Teste T. Na avaliação da morfologia celular, foi utilizada a microscopia óptica em aumento de 100x e 200x. Os resultados encontrados comprovaram uma diminuição na viabilidade celular nos grupos B (67% de viabilidade) e C (68% de viabilidade), diferindo do grupo D (99% de viabilidade). Ao comparar cada grupo experimental ao grupo controle, foi obtida uma diferença estatística (p < 0,05) para os grupos B, C e E. Portanto, foi observado, através destes resultados, uma diminuição da viabilidade celular nos grupos com a presença do ácido hialurônico TEOSYAL®. A adição do PRP ao ácido hialurônico aumentou a 8 viabilidade celular, já que foi obtida uma viabilidade de 79% (grupo A), porém, insuficiente para potencializá-la. Nas imagens, foram encontradas diferenças morfológicas entre os grupos experimentais e o grupo controle. Pode-se concluir que a presença do ácido hialurônico TEOSYAL® causou diminuição na viabilidade da linhagem celular OFCOL II.

Submitted by Salete Maria Sartori (ssartori@pucrs.br) on 2012-03-29T17:22:27Z No. of bitstreams: 1 436389.pdf: 2880203 bytes, checksum: 70f9cf1f3dd05a4856e3878cc076250d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-29T17:22:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 436389.pdf: 2880203 bytes, checksum: 70f9cf1f3dd05a4856e3878cc076250d (MD5) / Os materiais de preenchimento são produtos injetáveis utilizados frequentemente na medicina estética com a intenção de atenuar as rugas da face e aumentar o volume dos lábios. Essa modalidade de tratamento, que muitas vezes substitui procedimentos cirúrgicos tradicionais, como a ritidoplastia, apresenta resultados estéticos satisfatórios, embora se saiba da possibilidade de alguns efeitos indesejados ocorrerem no local da implantação do produto ou mesmo à distância. A literatura odontológica relata inúmeros casos de lesões buco faciais decorrentes do uso de materiais de preenchimento, refletindo uma nova realidade na prática do cirurgião dentista. Nessa pesquisa, 2 dos materiais com finalidade estética mais utilizados por dermatologistas e cirurgiões plásticos foram injetados em línguas de ratos: polimetilmetacrilato 10% (n=16) e ácido hialurônico 20mg/mL (n=18), além de uma solução inerte para controle (n=16). Após 7, 60 e 90 dias, avaliaram-se as alterações locais clínicas e histológicas de cada produto. Foi verificada a intensidade da resposta inflamatória na área da injeção (hematoxilina e eosina), a quantidade de vasos sanguíneos neoformados e de macrófagos (imunoistoquímica) e a densidade de fibras colágenas (picrosírius). Nos mesmos tempos experimentais, a migração sistêmica das substâncias injetadas foi verificada por meio do exame microscópico de órgãos de metabolismo e excreção (fígado e rim) pela coloração de hematoxilina e eosina. Os resultados mostraram que os 2 materiais de preenchimento desencadearam, em maior ou menor grau, algum tipo de resposta inflamatória local. Na análise comparativa, constatou-se que o polimetilmetacrilato demonstrou casos de reação a corpo estranho, enquanto o ácido hialurônico apresentou características que sugerem biocompatibilidade. Essa pesquisa faz parte de um conjunto de experimentos vinculados ao uso de materiais de preenchimento facial com finalidade estética e reforça a necessidade do cirurgião dentista identificar e manejar as reações adversas que podem decorrer desse tipo de tratamento amplamente utilizado na atualidade. / Dermal fillers are injectable products commonly used in aesthetic medicine with the intention of alleviating face wrinkles and increasing lip volume. This type of treatment, which often replaces traditional surgical procedures such as rhytidectomies, provides satisfactory cosmetic results. It is known, however, that there is a risk of undesired effects at the site of injection of the product or even at a distance. Dental literature reports numerous cases of orofacial injuries caused by the use of dermal fillers, reflecting a new reality in dental surgeons' practice. In this research, 2 of the most commonly used materials for aesthetic purposes by dermatologists and plastic surgeons were injected in rat tongues: 10% polymethylmethacrylate (n=16) and 20mg/mL hyaluronic acid (n=18), compared to an inert solution for control (n=16). After 7, 60 and 90 days, local clinical and histological alterations of each product were analyzed. The following factors were verified: intensity of the inflammatory response in the injection area (hematoxylin and eosin), the amount of newly formed blood vessels and macrophages (immunohistochemistry) and the density of collagen fibers (picrosirius). At the same experimental times, systemic migration of injected substances was observed through microscopic examination of organs of metabolism and excretion (liver and kidney) stained by hematoxylin and eosin. Results showed that both filling materials triggered some kind of local inflammatory response to a greater or lesser degree. In the comparative analysis, it was found that polymethylmethacrylate showed cases of foreign body reaction, while hyaluronic acid demonstrated characteristics suggesting biocompatibility. This research is part of a set of experiments related to the use of facial dermal fillers for aesthetic purposes and it reinforces the need for dental surgeons to identify and manage adverse reactions which may result from such currently widely used treatment.