As deficiências da proteína trifuncional mitocondrial (MTP) e da desidrogenase de acil-CoA de cadeia longa hidroxilada (LCHAD) são defeitos hereditários da β-oxidação de ácidos graxos. Pacientes afetados por essas deficiências apresentam acúmulo de 3-hidroxiácidos de cadeia longa, como os ácidos 3-hidroxidodecanóico (3HDA), 3-hidroxitetradecanóico (3HTA) e 3-hidroxipalmítico (3HPA) em tecidos e líquidos biológicos. A apresentação clínica é caracterizada por encefalopatia com coma, letargia, convulsão, retardo mental e hipotonia, além de disfunção hepática, cardiomiopatia, fraqueza muscular e retinopatia. Considerando que a fisiopatologia dos sintomas neurológicos dessas doenças ainda não está bem estabelecida e que tem sido levantada a hipótese de que os ácidos graxos acumulados nessas doenças possam exercer efeitos tóxicos, o presente trabalho se propôs a investigar os efeitos in vitro dos ácidos 3HDA, 3HTA e 3HPA sobre parâmetros de estresse oxidativo e da homeostase mitocondrial em cérebro de ratos de 30 dias de vida. Inicialmente, observamos que o 3HDA, 3HTA e 3HPA induziram um aumento na peroxidação lipídica evidenciado por um aumento nos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS). Os ácidos 3HTA e 3HPA também causaram dano oxidativo proteico, visto que aumentaram o conteúdo de carbonilas e diminuíram o conteúdo de grupamentos sulfidrila. Além disso, 3HTA e 3HPA diminuíram os níveis de glutationa reduzida (GSH), o principal antioxidante não-enzimático presente no cérebro, sem no entanto, alterar a produção de nitratos e nitritos. O ácido 3HTA apresentou o efeito mais pronunciado nos parâmetros testados e a adição dos antioxidantes e sequestradores de radicais livres trolox e deferoxamina (DFO) foram capazes de prevenir parcialmente o dano oxidativo lipídico, ao passo que DFO preveniu totalmente a redução dos níveis de GSH. Além disso, os ácidos 3HDA, 3HTA e 3HPA aumentaram o estado 4 da respiração mitocondrial e diminuíram os valores do índice de controle respiratório. 3HTA e 3HPA também diminuíram o potencial de membrana e o conteúdo de equivalentes reduzidos de NAD(P)H na matriz mitocondrial, sugerindo um efeito desacoplador da fosforilação oxidativa. Além disso, o 3HTA diminuiu o estado 3 da respiração e a razão ADP/O quando utilizado glutamato/malato como substrato, mas não quando utilizado piruvato/malato ou sucinato como substratos, sugerindo que o transporte de glutamato e/ou sua oxidação possam estar sendo inibidos pela presença deste ácido. Nossos resultados sugerem que os ácidos graxos acumulados na deficiências da LCHAD e MTP induzem estresse oxidativo e comprometem a homeostase mitocondrial, mecanismos que potencialmente podem estar envolvidos no dano neurológico apresentado pelos pacientes afetados por essas deficiências. / Mitochondrial trifunctional protein (MTP) and isolated long-chain 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase (LCHAD) deficiencies are inborn errors of metabolism of fatty acid oxidation. Affected patients present blood and tissue accumulation of the 3-hydroxy fatty acids, such as 3-hydroxydodecanoic (3HDA), 3-hydroxytetradecanoic (3HTA) and 3-hydroxypalmitic (3HPA) acids. Clinical presentation is characterized by a encephalopathic crises with coma, lethargy, seizures, mental retardation and hypotonia, besides hepatic disfunction, cardiomiopathy and muscle weakness and retinopathy. Considering that the pathophisiology of the neurological damage found in LCHAD/MTP-deficient patients is not yet clear, and it has been proposed that accumulating fatty acids could present toxic effects, the aim of the present work was to investigate the in vitro effects of 3HDA, 3HTA and 3HPA on oxidative stress parameters and on mitochondrial homeostasis in 30-day-old rat brain. It was first verified that 3HDA, 3HTA and 3HPA significantly induced lipid peroxidation, as determined by increased thiobarbituric acid-reactive substances levels. In addition, carbonyl formation was significantly increased by 3HTA and 3HPA, whereas sulfhydryl content was decreased, which indicates that these fatty acids elicit protein oxidative damage. 3HTA and 3HPA also diminished the reduced glutathione (GSH) levels, the main brain non-enzymatic antioxidant defense, without affecting nitrate and nitrite production. Finally, we observed that 3HTA elicited the most pronounced effects on the tested parameters and the addition of antioxidants and free radical scavengers trolox and deferoxamine (DFO) were able to partially prevent lipid oxidative damage, whereas DFO fully prevented the reduction on GSH levels induced by this fatty acid. We also found that 3HDA, 3HTA and 3HPA markedly increased state 4 respiration and diminished the respiratory control ratio. 3HTA and 3HPA also diminished the mitochondrial membrane potential and the matrix NAD(P)H levels, suggesting an uncoupler effect of oxidative fosforilation . In addition, 3HTA decreased state 3 of respiration and ADP/O ratio, when used glutamate/malate as substrates, but not when piruvate/malate or succinate were used as substrates, suggesting that glutamate transport and/or oxidation could be inhibited by this fatty acid. Taken together, these results suggest that the fatty acids accumulating in LCHAD/MTP induce oxidative stress and impair mitochondrial homeostasis, mechanisms that potentially may be involved on the neurological damage found in affected patientes.

Os efeitos de EPA e DHA sobre a função de neutrófilos foram comparados. Para isso, foram realizados experimentos em neutrófilos isolados de ratos. Foram analisadas células com a membrana plasmática íntegra e fragmentação de DNA com o intuito de determinar as concentrações não tóxicas de EPA e DHA. Aumento da produção de peróxido de hidrogênio ocorreu a partir de concentrações menores de DHA (50 <font face=\"Symbol\">mM comparado com 100 <font face=\"Symbol\">mM de EPA). Já para a produção de ânion superóxido, EPA estimulou em doses menores (12.5 <font face=\"Symbol\">mM e o DHA em 100 <font face=\"Symbol\">mM). Ambos AGs aumentaram a síntese e liberação das citocinas CINC-2 e TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 e não modificaram a produção de IL1-<font face=\"Symbol\">b e óxido nítrico após incubação das células por 18 horas. Somente DHA elevou a capacidade fagocitária e a atividade fungicida dos neutrófilos. EPA e DHA apresentaram efeitos distintos na produção de citocinas, fagocitose e atividade fungicida dos neutrófilos. Já na produção das EROS, EPA e DHA apresentaram efeitos similares, embora em concentrações diferentes. / The effects of eicosapentaenoic (EPA) and docosahexaenoic (DHA) on neutrophil function were compared. For this purpose, experiments were performed in isolated rat neutrophils. Cells with intact plasma membrane and DNA fragmentation were analyzed in order to determine the non-toxic concentrations of EPA and DHA. Production of H2O2 was increased in lower concentrations of DHA (50 <font face=\"Symbol\">mM compared to 100 <font face=\"Symbol\">mM of EPA). For production of O2 -, EPA stimulated at lower doses (12.5 <font face=\"Symbol\">mM compared to 100 <font face=\"Symbol\">mM of DHA). Both FAs increased synthesis and release of cytokines, CINC-2 and TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, and did not change the production of IL-1<font face=\"Symbol\">b and nitric oxide after incubation of the cells for 18 hours. Only DHA increased the phagocytic capacity and fungicidal activity of neutrophils. These FAs showed distinct effects on cytokine production, phagocytosis capacity and fungicidal activity by neutrophils. For production of ROS, both EPA and DHA had similar actions, although at different concentrations.

A lipotoxicidade está altamente relacionada ao desenvolvimento de alterações metabólicas, que constituem os principais fatores de risco para o desenvolvimento de doenças crônicas não transmissíveis e suas complicações, tais como as doenças cardiovasculares (DCV) e doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). Estudos apontam que o consumo de alimentos funcionais e nutracêuticos podem contribuir para a redução ou prevenção de alterações ocasionadas por estas doenças. No cerrado brasileiro, está presente uma árvore conhecida popularmente como barueiro (Dipteryx alata Vog.), cujos frutos e sementes fazem parte da culinária local. O óleo obtido desta semente tem sido popularmente utilizado tanto na culinária como na medicina popular e preventiva. Embora exista alguns relatos de estudos envolvendo respostas metabólicas frente a ingestão de amêndoas de baru em modelos animal e humano, há carência de informações científicas a respeito dos efeitos biológicos do óleo extraído dessas amêndoas. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da ingestão do óleo extraído da semente do baru sobre marcadores de risco cardiovascular, morfologia de órgãos bem como as funções renal e hepática de ratos normais e dislipidêmicos. As sementes foram obtidas de frutos de baru coletados ao acaso, em Januária, Minas Gerais, Brasil, durante o mês de agosto de 2014. O óleo foi obtido por prensagem mecânica, utilizando-se 12 toneladas de força em prensa hidráulica. A análise do óleo por cromatografia gasosa (CG-MS) forneceu o perfil de ácidos graxos (AG) semelhante ao relatado por outros estudos, demonstrando a presença significativa de AG insaturados, sendo o AG monoinsaturado oleico o de maior quantidade, e em menor concentração AG saturados, sendo os ácidos palmítico e lignocérico em maior quantidade. Ratos machos Wistar (400 ± 25g) foram divididos em quatro grupos: controle (1), óleo de baru (2), dislipidêmico (3) e dislipidêmico+óleo de baru (4). Os grupos 1 e 2 receberam água (10 mL/Kg) e óleo de baru (1 g/Kg), respectivamente; os grupos 3 e 4 foram tratados com emulsão rica em colesterol (10 mL/Kg), o último recebeu também óleo de baru (1 g/Kg), durante 15 semanas. Os animais foram pesados semanalmente e o consumo de água e ração foi quantificado durante todo o tratamento. Ao término do tratamento, os animais foram anestesiados e as amostras foram coletadas para determinação dos parâmetros: bioquímicos, peroxidação lipídica (PL) e morfologia hepática. Os resultados obtidos demonstraram que a administração da emulsão rica em lipídios foi capaz de induzir alterações metabólicas nos grupos 3 e 4, como dislipidemia e esteatose, bem como aumentou os valores de malonaldeído (MDA) na aorta dos animais do grupo 3, no ensaio de PL. O tratamento com o óleo de baru apresentou efeitos benéficos, como a diminuição dos valores de MDA na aorta dos animais dos grupos 2 e 4, proteção dos fígados dos animais do grupo 4, bem como não foi capaz de alterar a função renal dos animais. Os resultados obtidos são relevantes, demonstrando a segurança da utilização racional do óleo, uma vez que este é utilizado na medicina popular e preventiva assim como na culinária nacional. / Lipotoxicity is highly related to the development of metabolic disorders, which are the main risk factors for the development of chronic diseases and their complications, such as cardiovascular disease (CVD) and nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Studies indicate that the consumption of functional foods and nutraceuticals may contribute to the reduction or prevention of alterations caused by these diseases. In the Brazilian cerrado, this is a known popularly as tree barueiro (Dipteryx alata Vog.), whose fruits and seeds are part of the local cuisine. The oil from this seed has been popularly used both in cooking and in folk and preventive medicine. Although there are some reports of studies involving metabolic responses front intake baru almonds into animal models and human, there is a lack of scientific information about the biological effects of oil extracted from these kernels. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of extracted oil intake baru seed on cardiovascular risk markers, morphology organs as well as renal and hepatic functions of normal and dyslipidemic mice. The seeds were obtained from fruits baru collected at random in Januária, Minas Gerais, Brazil, during the month of August 2014. The oil was obtained by mechanical pressing, using 12 tons of force on hydraulic press. Oil analysis by gas chromatography (GC-MS) showed the profile of fatty acids (FA) similar to that reported in other studies demonstrating the significant presence of unsaturated FA, monounsaturated FA oleic in greater quantity, and a lesser concentration of saturated FA, palmitic and lignoceric acids in greater quantity. Male Wistar rats (400 ± 25g) were divided into four groups: control (1), baru oil (2), dyslipidemia (3) and dyslipidemic Baru + oil (4). Groups 1 and 2 received water (10 ml / kg) and Baru oil (1g / kg), respectively; groups 3 and 4 were treated with cholesterol-rich emulsion (10 ml / kg), the latter also received Baru oil (1g / kg) for 15 weeks. Animals were weighed weekly and the consumption of water and feed were quantified throughout the treatment. After treatment, the animals were anesthetized and samples were collected for determination of parameters: biochemical, lipid peroxidation (LP) and liver morphology. The results showed that administration of rich emulsion lipids was able to induce metabolic changes in groups 3 and 4 as hyperlipidemia and fatty liver as well as increased malondialdehyde levels (MDA) in the aorta of animals of group 3, the test PL. Treatment with Baru oil showed beneficial effects, such as reduction of the MDA levels in the aorta of the animals of groups 2 and 4, to protect the livers of animals in group 4, and was not able to alter renal function of animals. The results obtained are relevant, demonstrating the safety of rational utilization of oil, since this is used in folk and preventive medicine as well in domestic cooking. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Tendo em vista a possibilidade de que a adição de ácidos graxos ao meio de cultivo embrionário aumente a sobrevivência ao congelamento, a proposta deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de quatro ácidos graxos isoladamente ao meio de cultivo, dois do grupo ômega 6 (ácido linoléico e ácido linoléico conjugado) e dois do grupo ômega 3 (ácido eicosapentaenóico e ácido docosahexaenóico), na produção de embriões, no número de células, na quantidade de lipídeos, na taxa de re-expansão da blastocele após 48 horas de cultivos pós-descongelamento, na taxa de eclosão pósdescongelamento e na taxa de gestação. Para tal, os oócitos bovinos colhidos de ovários de vacas abatidas foram maturados, fecundados e cultivados in vitro em atmosfera de 5% CO2 em ar, à 38,8°C e máxima umidade. No cultivo, foi adicionado isoladamente um destes ácidos graxos, e foram avaliadas a taxa de clivagem, e a produção de embriões no sétimo e oitavo dia de cultivo. No sétimo dia, os blastocistos expandidos foram congelados com 1,5M de etileno glicol. Eles permaneceram nesta solução por 9 minutos antes de serem envasados e seguirem para a maquina de congelamento numa taxa de resfriamento de 0,5°C/minuto até chegarem à temperatura de -32°C. Dos embriões que foram congelados, alguns seguiram para o descongelamento e voltaram para o cultivo in vitro para avaliação da reexpansão e taxa de eclosão pós-descongelamento. Outros foram transferidos para receptoras sincronizadas para avaliação da taxa de gestação. Outros grupos de embriões permaneceram até o oitavo dia de cultivo e foram corados com Hoechst 33342 para contagem dos núcleos, e corados com Nile Red para avaliação do conteúdo total de lipídeos. Em geral, a adição isolada de ácidos graxos do grupo ômega 6 (CLA e LA) na produção in vitro de embriões bovinos aumentou a taxa de sobrevivência ao congelamento (criotolerância), no entanto, não houve um aumento no número de células, nem diferença no conteúdo total de lipídeos nos embriões analisados. A taxa de gestação também não diferiu estatisticamente entre os grupos testados in vivo, porém foi observado um aumento de 200% na taxa de gestação dos embriões cultivados na presença de CLA. Novos estudos devem ser desenvolvidos para comprovar o efeito do aumento da criotolerância e melhorias nas taxas de gestações dos embriões, além de estudos da composição de lipídeos nos embriões e membranas. / In the view of the possibility that the addition of fatty acids in the embryo growing medium increase the survival rate after cryopreservation, this study was proposed to evaluate the effect of the addition of four fatty acids in culture medium, two of the omega 6 group (linoleic acid and conjugated linoleic acid) and two of the omega 3 group (eicosapentainoic acid and docosahexaenoic acid), in the rate of production of blastocysts, blastocyst cell number, blastocyst amount of lipids , re-expansion of blastocele rate after 48 hours of culture post-thaw, post-thaw hatching rate and pregnancy rate. The oocytes obtained by punction of slaughterhouse cows were matured in vitro, fertilized in vitro and cultured in vitro in an atmosphere of 5% CO2 in air, to 38,8°C and maximum moisture. Fatty acids were supplemented individually and cleavage rate and production of embryos in the seventh and eighth days of culture were assessed. On seventh day, the expanded blastocysts were frozen with 1.5M of ethylene glycol. They remained in this solution for nine minutes before introduction in a straw followed and then in a freezing machine with a chilling rate of 0,5°C/minute until temperature of -32°C. Frozen embryos were then divide in two groups: one was thawed and returned to in vitro culture in other to assess the reexpansion and post-hatching rate, and other was transferred to synchronized recipients to assess the pregnancy rate. Another unfreezed group of embryos were stained with Hoechst 33342 for counting the nuclei, or stained with Nile Red to estimate the lipids contents. In general, the addition of fatty acids omega 6 group (LA and CLA) increased the survival rate to the freezing (cryotolerancy), however, there was no increase in the number of cells, or difference in the lipids contents. In the CLA treated embryos, the pregnancy rate of the freezed embryos did not differ from groups tested in vivo, but there was a 200% increase in the pregnancy rate. Further studies should be developed to prove the improvements in the rates of pregnancies of omega 6 treated embryos, besides a study of the composition of lipids of embryos and membranes should be conducted.

As sementes do cacaueiro (Theobroma cacao L.) constituem a única fonte de manteiga de cacau, matéria prima fundamental para as indústrias de chocolates e confeitos, farmacêutica e cosmética. Cerca de 50 % do peso seco das sementes é composto por gordura, caracterizada pelo alto nível de estearato (30-37%), em combinação com palmitato (24-31%) e de oleato (33-39%), conferindo-lhe uma composição triglicerídica única, responsável pelas suas propriedades de fusão, com aplicações específicas e especiais. Apesar dos genes que codificam as enzimas da via metabólica de biossíntese de ácidos graxos e triglicerídeos em plantas serem conhecidos, os mecanismos moleculares pelos quais as plantas controlam a produção de estearato e que diferenciam as plantas acumuladoras de estearato de todas as demais não estão claramente definidos. O objetivo deste trabalho foi analisar a composição de ácidos graxos nos frutos de Theobroma cacao e a expressão temporal de genes relacionados à via metabólica de ácidos graxos e triglicerídeos durante o desenvolvimento de sementes de T. cacao, com ênfase na acumulação de estearato. Em paralelo, foram eleitos os genes referências mais estáveis para os estudos em embriões e diversos tecidos de Theobroma cacao. Empregando-se a técnica de reação quantitativa da amplificação em cadeia de transcritos reversos de RNA (RT-qPCR), foram analisadas a expressão dos genes codificadores da proteína carregadora de acil A, B e C, \'beta\'-cetoacil-ACP sintase II, \'delta\'9estearoil-ACP desaturase A e B, Acil-ACP tioesterase A, acil-ACP tioesterase B, acil-CoA sintetase A e B e da proteína oleosina. Quando se estudou de expressão gênica apenas nos embriões de T. cacao, os três genes mais estáveis foram proteína ribossomal L35, proteína carregadora de acil A e gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase. Quando se considerou diversos tecidos de plantas de Theobroma cacao, os melhores genes para a normalização dos valores de expressão foram os codificadores da proteína ribossomal L35, proteína carregadora de acil B e gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase. A acumulação de transcritos da \'delta\'9estearoil-ACP desaturase foi relacionada ao aumento do ácido oleico. O aumento na quantidade deste ácido acontece pela ação conjunta da \'delta\'9estearoil-ACP desaturase, e acil-ACP tioesterase A, a qual mostra maiores níveis de transcritos entre 90 e 140 DAP com pico aos 100 DAP. O aumento de ácidos esteárico estaria relacionado com a ação conjunta e com transcrição temporalmente coordenada dos genes das enzimas \'beta\' -cetoacil-ACP sintase II, Acil-ACP tioesterase A e Acil-ACP tioesterase B. Transcritos da enzima \'beta\' -cetoacil-ACP sintase II apresenta pico aos 100 DAP, possivelmente com acúmulo máximo de substratos 18:0-ACP, que poderiam ser hidrolizado preferencialmente pela enzima acil-ACP tioesterase A, ou acil-ACP tioesterase B, O intervalo entre o pico de acúmulo de trasncritos entre \'beta\'-cetoacil-ACP sintase II (100 DAP) e Acil-ACP tioesterase A e \'delta\'9estearoil-ACP desaturase (110 DAP) sugere que poderia ocorrer um acúmulo de estearato resultante da ação dessas enzimas. Esses resultados corroboram o modelo de acumulação de estearato proposto por Silva (2005) / Cacao seeds (Theobroma cacao L.) are unique sources of cocoa butter, fundamental raw material for the chocolate, confectionary, cosmetic and pharmaceutical industries. Around 50% of the seed dry weight represents fat, characterized by the high levels of stearate (30-37%), in combination of palmitate (24-31%) and oleate (33-39%), giving a unique triacylglycerol compostion, responsible for the melting profile for special and specific applications. Despite the fact that genes encoding enzymes of the fatty acid and triglyceride biosynthetic pathway of plants are known, the mechanisms to control the accumulation of high levels of stearate, that differ from other species, are not clearly defined. The objective of this work was to analyse the composition of fatty acids and the expression of genes associated with fatty acid and triglyceride biosynthetic pathway during the development of cacao pods, with emphasis with stearate accumulation. In parallel, the establishment of stable reference genes to investigate gene expression in developing embryos and other cacao tissues were investigated. Using the quantitative amplification of reversed transcripts (RT-qPCR), the expresion of genes coding for the acyl-carrier protein A, B and C; \'beta\'-ketoacyl-ACP sinthase II; \'delta\'9stearoyl-ACP desaturase A and B; Acyl-ACP thioesterase A; Acyl-ACP thioesterase B; Acyl-CoA sintethase A and B; and oleosin. When gene expression was conductd only in developing cacao embryos, the three most stable genes were the ribosomal protein L35, acyl-carrier protein A and glyceraldehide 3-phosphate dehydrogenase. When various tissues were considered, the best reference genes for gene expression normalization were those encoding for the ribosomal protein L35, acyl carrier protein B and glyceraldehide 3-phosphate dehydrogenase. The accumulation of \'delta\'9stearoyl-ACP desaturase transcripts could be associated with the accumulation of oleate, together with the increase of acyl-ACP thioesterase A, with increased relative levels of transcripts between 90 and 140 DAP, peaking at 100 DAP. The increase in stearate might result from the joint activity of the \'delta\'9stearoyl-ACP desaturase and acyl-ACP thioesterase A, which presented higher accumulation of transcripts between 90 and 140 DAP, with peak at 110 DAP. The increase in stearate would associated with the joint and temporal coordinated expression of genes encoding \'beta\'-ketoacyl-ACP synthase II, and Acyl-ACP thioesterase A and B. Transcripts of the enzyme \'beta\'-ketoacyl-ACP synthase II peaked at 100 DAP, possibly with the maximum accumulation of substrates 18:0-ACP, that would be preferentially hydrolzyed by the enzyme acyl-ACP thioesterase A, or acyl-ACP thioesterase B, The gap between the peak in transcript accumulation between \'beta\'-ketoacyl-ACP synthase II (100 DAP) and acyl-ACP thioesterase A and \'delta\'9stearoyl-ACP desaturase (110 DAP) could lead to the accumulation of stearate. These results corroborated the model proposed by Silva (2005)

O trabalho teve por objetivo o desenvolvimento de bases gordurosas para margarinas utilizando o método de modificação por interesterificação, como alternativa ao processo de hidrogenação parcial, que forma isômeros trans. / The aim of the study was to develop soft margarines by using intertesterification, as an alternative of hydrogenation, which forms trans isomers.

A NADPH oxidase participa da secreção de insulina estimulada pela glicose e da produção de superóxido nas ilhotas pancreáticas. Nesse estudo, avaliamos o efeito do ácido palmítico na produção de superóxido e secreção de insulina por ilhotas pancreáticas de ratas e linhagem INS-1E. O palmitato aumentou a produção de superóxido por mecanismo dependente da ativação da PKC e da NADPH oxidase e da oxidação do ácido graxo. O ácido graxo causou a translocação da p47PHOX para a membrana plasmática, processo indicativo da ativação do complexo enzimático. A exposição de ilhotas ao palmitato causou o aumento do conteúdo proteico da p47PHOX e do RNA mensageiro da p22PHOX, gp91PHOX, p47PHOX, pró-insulina e do GPR40. A estimulação da secreção de insulina pelo ácido graxo na presença de alta glicose foi reduzida através do inibidor da NADPH oxidase e também pela inibição da expressão do GPR40 por RNA de interferência. A atividade da NADPH oxidase e a sinalização via GPR40 são mecanismos envolvidos no controle da secreção de insulina estimulada pelo palmitato. / The NADPH oxidase complex is involved in the glucose-stimulated insulin secretion and the superoxide production in pancreatic islets. In this study, we examined the effect of palmitic acid on superoxide production and insulin secretion by rat pancreatic islets and INS-1E cells. Palmitate increased superoxide production in a process dependent on the activation of PKC, NADPH oxidase and fatty acid oxidation. In fact, palmitate caused p47PHOX translocation to the plasma membrane. Exposure to palmitate for 1 h up-regulated the protein content of p47PHOX and the mRNA levels of p22PHOX, gp91PHOX, p47PHOX, proinsulin and the GPR40. Fatty acid stimulation of insulin secretion in the presence of a high glucose concentration was reduced by the inhibition of NADPH oxidase activity and by the inhibition of GPR40 expression by a small interference RNA. In conclusion, NADPH oxidase is an important source of palmitate-induced superoxide production in beta cells. The NADPH oxidase activity and GPR40 signaling are involved in the control of insulin secretion by palmitate.

A criopreservação de sêmen é de fundamental importância para a expansão das técnicas reprodutivas como a inseminação artificial, a transferência de embriões e a fecundação in vitro, entretanto é responsável pelo estresse oxidativo da célula espermática. Para incrementar a sobrevivência celular após a congelação, a membrana plasmática deve ter adequada fluidez que é garantida pelos ácidos graxos poliinsaturados e suporte de defesa antioxidante para proteger contra a peroxidação lipídica. No intuito de tornar os espermatozoides mais resistentes à criopreservação, 48 touros da raça Nelore foram confinados (três animais por baia) e designados a quatro tratamentos de acordo com a adição de gordura protegida da degradação ruminal e/ou antioxidantes à dieta. Aos primeiros 30 dias, todos os touros receberam a mesma dieta de adaptação (bagaço de cana, polpa cítrica, farelo de glúten de milho, ureia e sal mineral). Posteriormente, durante 75 dias, a mesma dieta foi oferecida, diferindo na adição de: G) Gordura protegida da degradação ruminal (rica em ácido linoleico, Megalac-E®, 1,5% na MS; n = 12); A) antioxidante (fonte de vitamina C e selênio, EconomasE®, 3g/cabeça/dia; n = 12; GA), Megalac-E® e EconomasE® (n = 12) ou C) controle (n = 12). Colheitas e congelação de sêmen foram realizadas ao 0, 15, 30, 45, 55, 65 e 75 dias. Os dados foram analisados como medidas repetidas pelo Glimmix do SAS. O peso corporal e o perímetro escrotal não diferiram entre os tratamentos (P = 0,37). A atividade da glutationa peroxidase no plasma sanguíneo e seminal foi maior para as dietas contendo antioxidantes, especialmente aos 75 dias. O volume, turbilhonamento, vigor, porcentagem de cabeças aglutinadas do sêmen fresco, foram similares entre os grupos. Entretanto, dietas contendo gordura reduziram o número total de espermatozoides (P = 0,07) e a porcentagem de espermatozoides normais (P = 0,09). A peroxidação lipídica e a cinética espermática do sêmen descongelado foram similares entre as dietas experimentais. Por outro lado, dietas não contendo gordura aumentaram a porcentagem de espermatozoides com membrana plasmática (MP) íntegra e membrana acrossomal (MA) não reagida (62,2 ± 2,87 vs 53,3 ± 2,87%; P < 0,05). Além disso, dietas sem antioxidantes provocaram aumento no número de células espermáticas com MP lesada e MA reagida. Aos 65 dias de suplementação, espermatozoides de touros alimentados com dietas com gordura apresentaram maior estabilidade da MP, em relação aos outros tratamentos (60,4 ± 2,62 vs 52,7 ± 2,62%; P = 0,05), porém, aumentou o número de espermatozoides mortos (P = 0,10). O potencial mitocondrial espermático não foi afetado pelos tratamentos. Conclui-se que, apesar da viabilidade espermática pré-congelação não ter sido afetada pelas dietas experimentais, efeito benéfico aos espermatozoides após criopreservação foi encontrado quando suplementou-se touros com dietas contendo antioxidantes, em relação a dietas contendo gordura. / Cryopreservation of semen is of fundamental importance to the expansion of reproductive techniques such as artificial insemination, embryo transfer and in vitro fertilization, however, it is responsible for the oxidative stress of the sperm cell. To enhance cell survival after freezing, the plasma membrane has to have sufficient fluidity that is guaranteed by polyunsaturated fatty acids and antioxidant defense to protect against lipid peroxidation. In order to make the sperm more resistant to cryopreservation, 48 Nelore bulls were confined (three animals per pen) and assigned to four treatments according to the addition of rumen protected fat and/or antioxidants to the diet. During 30 days, all bulls were fed the same adaptation diet (sugar cane bagasse, citrus pulp, corn gluten meal, urea and mineral salt). Thereafter, for 75 days, the same diet was offered, differing in the addition of: F) fat protected from rumen degradation (rich in linoleic acid; Megalac-E®, 1.5% DM, n = 12); A) Antioxidant (a source of vitamin C and selenium, EconomasE®, 3g/head/day, n = 12); FA) Megalac-E® and EconomasE ® (n = 12); or C) control group (n = 12). Semen collection and freezing were performed seven times: 0, 15, 30, 45, 55, 65 and 75 days of offering experimental diet period. Data were analyzed by repeated measures of GLIMMIX of SAS. Body weight and scrotal circumference did not differ between treatments (P = 0.37). The glutathione peroxidase activity in blood and seminal plasma was higher for diets containing antioxidants, especially at 75 days. The volume, mass motility, vigor, numbers of agglutinated spermatozoa in fresh semen were similar between groups. However, fat-containing diets reduced the total number of sperm (P = 0.07) and the percentage of normal spermatozoa (P = 0.09). Lipid peroxidation and the kinetics of thawed sperm were similar among diets. Moreover, diets not containing fat increased the percentage of intact sperm plasma membrane (PM) and unreacted acrosomal membrane (62.2 ± 2.87 vs 53.3 ± 2.87%, P < 0.05). In addition, diets without antioxidants caused an increase in the number of sperm cells with damaged PM and with Induction of sperm acrosome reaction. After 65 days of supplementation, sperm of bulls fed diets with fat had higher stability of the PM, compared to other treatments (60.4 ± 2.62 vs. 52.7 ± 2.62%, P = 0.05), however there was an increase the number of dead sperm (P = 0.10). The mitochondrial potential of spermatozoa was not affected by treatments. It is concluded that despite tha fact that the pre-freezing sperm viability was not affected by the experimental diets, beneficial effect to the sperm cells after cryopreservation was found when bulls were supplemented with diets containing antioxidants, compared to diets containing fat.

Orientador: Silvia Helena Venturoli Perri / Coorientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Felipe Perecin / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Caliê Castilho / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da suplementação do meio de cultivo com ácido linoleico e/ou catalase, em meio sem a adição de SFB, cultivados em atmosfera de baixa tensão de oxigênio sobre o desenvolvimento, qualidade e criotolerância de embriões bovinos. Em um grupo foi feita a suplementação com 100 μM de ácido linoleico (LA); 100UI de catalase (CAT) em um segundo, no terceiro grupo foram feitas as 2 suplementações (CAT+LA) e um quarto grupo sem suplementação (CONTROLE), durante todo o período de cultivo em atmosfera de 5%CO2, 7%O2 e 88%N2 em BAGS. As taxas de clivagem não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Porém as taxas de produção de embriões em D7 e D8 diferiram (P<0,05), sendo que o controle obteve melhor resultado perante os 3 tratamentos e o grupo CAT+LA gerou a menor taxa de produção (30,7; 22,4; 19,8; 12,4%). Observou-se um atraso no desenvolvimento, sendo os blastocistos expandidos somente encontrados no D8. Na avaliação do conteúdo total de lipídios, houve uma redução significativa (P<0,05) nos 3 grupos tratados em relação ao controle. A medida dos níveis intracelulares de ROS não foi afetada nos 4 grupos (P>0,05). A quantidade de células totais foi significativamente menor (P<0,05) no grupo CAT+LA, e o grupo CAT foi o que apresentou maior porcentagem de células apoptóticas. Em relação à taxa de re-expansão às 24 horas (P<0,05), o grupo controle (50%) e o CAT (67,2%) apresentaram menores taxas que os grupos LA (71,7%) e o CAT+LA (76,7%). Às 48 horas, o grupo controle apresentou a menor taxa (35,7%), seguido pelo grupo CAT (47,5%). Já o grupo LA (56,5%) diferiu estatisticamente do controle mas não dos grupos CAT (47,5%) e CAT+LA (76,7%). O grupo CAT+LA diferiu estatisticamente dos grupos controle e CAT. Com base nestes resultados, embriões tratados com LA ou CAT+LA no cultivo in vitro, na ausêncio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The most commonly recommended way to obtain more resistant in vitro embryos during the cryopreservation process is to change these embryos, whether through removal of fetal bovine serum (FBS), addition of different supplements to the culture medium or changes in oxygen tension in the production process. The objective of this study was to assess the effects of supplementation of the culture medium with linoleic acid and/or catalase in medium without the addition of FBS, in low tension oxygen atmosphere on development, quality and cryotolerance of bovine embryos. In one group, the medium was supplemented with 100 μm of linoleic acid (LA); the second was supplemented with 100UI of catalase (CAT), a third group was supplemented with both, CAT+LA and a fourth group received no supplementation (control), during the entire culture period in an atmosphere of 5% CO2, 7% O2 and N2 88% in BAGS. Cleavage rates did not differ (P>0.05) between groups (72.7; 74.1; 72.1; and 72.0%, respectively). However, embryo production rates in D7 and D8 were different (P<0.05), where the control had the highest blastocyst rate of the treatments and the CAT+LA group presented the lowest rate of production (30.7; 22.4; 19.8; 12.4%). Expanded blastocysts were only foundon D8, indicating a delay in development. There was a significant reduction (P<0.05) of total lipids in the 3 treated groups when compared to the control group. There was no difference in the intracellular levels of ROS between the 4 groups (P>0.05).Total cell number was significantly lower (P<0.05) in the CAT+ LA and the CAT group showed the highest percentage of apoptotic cells. Considering the re-expansion rates in 24 hours (P<0.05), the control group (50%) and the CAT group (67.2%) presented lower rates than the LA group (71.7%) and CAT+LA group (76.7%). At 48 hours, the control group showed the worst rate (35.7%) followed by the CAT group (47.5%)...(Complete abstract eletronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000417269-Texto+Completo-0.pdf: 7052589 bytes, checksum: b8a2e5d51c24356d22c269d755b3d73d (MD5) Previous issue date: 2009 / According to Mandelbaum, 2003, healing involves many events and situations, requiring basic knowledge of different fields. Thus, multidisciplinary action is needed for the lesion to heal well. Tissue repair occurs in two ways: by the regeneration of functional activity of the tissue or by healing. This research is an experimental study aiming at comparing the effects of 2% papain, AGE and saline solution when used in circular skin lesions 2cm in diameter, with full thickness on the dorsum of EPM-I Wistar rats. Twelve male rats were used, divided into three groups: C1 (AGE group), C2 (control group) and C3 (papain group), all of them submitted to daily dressing changes after cleaning with bidistilled water solution. Based on the results obtained, we found that the product AGE, during the seven-day period, did not favor fibroblast expression, which can be explained by the intense adherence of cotton gauze to the lesion bed, thus impairing the histological material analyzed by immunohistochemistry. During the same phase, as regards collagen, we observed that treatment with 2% papain was at its lowest peak when compared to the other treatments, which can be attributed to its potentially sulfidric effect, thus wearing down the collagen fibers. According to the statistical method used, ANOVA, it was found that there was no significant difference between the treatments proposed in this research. / Conforme Mandelbaum, 2003 a cicatrização envolve muitos eventos e situações, exigindo conhecimento básico de diversas áreas, portanto uma atuação multidisciplinar se faz necessária para uma boa evolução da lesão. O reparo do tecido se dá através de duas formas: pela regeneração da atividade funcional do tecido ou pela cicatrização. Esta pesquisa trata-se de um estudo experimental tendo por finalidade comparar os efeitos da papaína 2%, AGE e soro fisiológico quando utilizados em lesões cutâneas circulares com dimensionamento de dois centímetros de diâmetro e espessura total no dorso de ratos da linhagem EPM-I Wistar. Utilizou-se doze ratos machos divididos em três grupos: C1 (grupo AGE), C2 (grupo controle) e C3 (grupo papaína), todos submetidos a trocas diárias de curativos após limpeza com solução de água bidestilada. Com base nos resultados obtidos verificamos que o produto AGE, durante o período de sete dias, não favoreceu a expressão de fibroblastos, o que pode ser explicado pela intensa aderência da gaze de algodão no leito da lesão, prejudicando, assim, o material histológico analisado por imunoistoquímica. Nesta mesma fase, em relação ao colágeno, observamos que o tratamento com papaína 2% apresentou seu menor pico quando comparado aos outros tratamentos, o que pode ser atribuído a seu efeito potencialmente sulfídrico, realizando assim um desgaste nas fibras colágenas. Conforme o método estatístico utilizado, ANOVA, constatou-se não haver diferença significativa entre os tratamentos propostos nesta pesquisa.