Órgãos provenientes de doadores em morte encefálica (ME) apresentam piores desfechos nos receptores transplantados quando comparados a órgãos de doadores vivos, relacionados ou não relacionados. A lesão desses órgãos dá-se pelos processos relacionados à sua retirada e estocagem e também pela intensa atividade inflamatória presente na ME. Os efeitos dessa inflamação, com aumento da expressão de citocinas, já foram comprovados em rins, fígado, pulmão, coração e pâncreas. A maioria dos estudos avaliou os níveis de citocinas após ter sido estabelecido o diagnóstico de ME ou durante a cirurgia de retirada de órgãos para transplante. Porém, acredita-se que a intensa liberação de catecolaminas que ocorre no momento da instalação da ME possa relacionar-se com elevação precoce desses marcadores. Os pacientes em ME frequentemente apresentam outros insultos que podem desencadear resposta inflamatória sistêmica, como ventilação mecânica, choque hemorrágico, parada cardíaca e sepse. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar o nível de inflamação, por meio de dosagem plasmática de citocinas, entre pacientes em ME e pacientes criticamente doentes, com ou sem sepse, além de avaliar o comportamento das citocinas ao longo do tempo. Demonstramos que a ME está associada a um maior nível de inflamação do que a induzida pela doença crítica e a um nível semelhante à inflamação induzida pela sepse. Mesmo excluindo da análise os pacientes em ME que apresentavam sepse, os achados não se modificaram, corroborando com a hipótese de que a ME, per se, desencadeia uma resposta inflamatória sistêmica. / Grafts from brain death (BD) donors in have worse outcomes as compared to grafts from living donors, even HLA-unmatched living donors. Besides the injuries related to organ retrieval and transplantation procedure, organs are also exposed to the intense systemic inflammatory response that occurs in BD. The deleterious effects of inflammation, with upregulation of cytokine expression, have already been documented in kidney, liver, lung, heart and pancreas. Most of these studies evaluated cytokine levels after BD confirmation or before organ retrieval. However, it is possible that the massive catecholamine release present at the time of BD installation might lead to a precocious cytokine increase. Moreover, brain-dead patients frequently suffer from other injuries that might also trigger an inflammatory cascade, such as mechanical ventilation, hemorrhagic shock, cardiac arrest and sepsis. Therefore, the purpose of this study was to compare, by means of plasmatic cytokines measurement, the level of inflammation in braindead patients and in critically ill patients, septic and non-septic, and to evaluate plasmatic cytokine kinetics in BD. We demonstrated that BD is associated with a higher level of inflammation than that induced by critical illness, which was similar to the induced by sepsis. Even when brain-dead patients with sepsis were excluded from the analysis, the results remain, corroborating the hypothesis that BD itself triggers a systemic inflammatory response.

Em étudiant loeuvre de Gilles Deleuze, cest impossible dignorer linfluence dAntonin Artaud et de lidée de Cruauté dans le dèvelopement de sa philosophie. Ansi on peut se demander Quelle est limportance de Antonin Artaud et du Théâtre de la Cruauté dans la constituition de la Philosophie Contemporaine?. La présente dissertation nose pas répondre à cette question dans tute as complexité. Elle est plus modeste dans sa prétention, elle a comme but tracer quelques lignes capables de nous orienter dans nos relations complexes entre la pensée de Artaud et la Philosophie, entre le Théâtre de la Cruauté et le Théâtre Philosophique. Ainsi, nous partons de lidée dune Métaphisique de la Cruauté, comme elle nous est présenté par Camille Dumoulié, pour une Métaphisique Cruelle, une métaphisique qui est elle-même une experimentation. Penser la cruauté comme un théâtre métaphisique met en crise le Sisteme de la Representation: oeuvre de la pensée contemporaine. De cette façon, comprendre la Philosophie et lArt Contemporain, rendent Antonin Artaud une traverse obligatoire. / Ao entrarmos em contato com a obra de Gilles Deleuze, não podemos ignorar a influência de Antonin Artaud e da idéia de Crueldade no desenvolvimento de sua filosofia. Assim, cabe a pergunta: Qual é a importância de Antonin Artaud e do Teatro da Crueldade na constituição da Filosofia Contemporânea? A presente dissertação não pretende responder esta pergunta em toda sua complexidade, a sua pretensão é mais modesta, ela visa traçar algumas linhas que possam nos orientar nas relações complexas entre o pensamento de Artaud e a Filosofia, entre o Teatro da Crueldade e o Teatro Filosófico. Assim, partimos da idéia de uma Metafísica da Crueldade, tal como nos é apresentada por Camille Dumoulié, para uma Metafísica Cruel, uma metafísica que já é ela mesma uma experimentação. Pensar a crueldade como um teatro metafísico põe em crise o Sistema da Representação: tarefa do pensamento contemporâneo. Dessa forma, compreender a Filosofia e a Arte Contemporâneas torna Antonin Artaud uma passagem obrigatória.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-04-17T15:50:19Z No. of bitstreams: 1 2011_JoseFelipeWarmilingSpricigo.pdf: 776198 bytes, checksum: 7dc5f032a4e8d4be9695b31ffaede77b (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-04-20T15:27:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JoseFelipeWarmilingSpricigo.pdf: 776198 bytes, checksum: 7dc5f032a4e8d4be9695b31ffaede77b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-20T15:27:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JoseFelipeWarmilingSpricigo.pdf: 776198 bytes, checksum: 7dc5f032a4e8d4be9695b31ffaede77b (MD5) / A vitrificaçào com cryotop surgiu como uma opçào promissora para a criopreservaçào de ovócitos, por minimizar efeitos negativos e melhorar as taxas de sobrevivência. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da vitrificaçào em diferentes momentos da maturação in vitro (MTV), quanto às características morfológieas, funcionais e moleculares, em ovócitos bovinos. Foram utilizados complexos-cumulus-ovócitos (CCOs) obtidos de ovários de abatedouio. Paia os experimentos 1 e 2, os ovócitos foram distribuídos em 4 grupos: controle (GC), não vitrificado; 0 hora vitrificado (VO); S horas vitrificado (VS) e 22 horas vitrificado (V22). Todos os grupos vitrificados foram desvitrifícados e retornaram para a MrV até completar 24 horas. Para a avaliação da cromatina, CCOs foram desnudados, fixados e corados com lacmoide. Para a taxa de fecundação, ovócitos foram submetidos à fecundação in vitro (FIV), e após 18 horas de co-cultivo com os espermatozóides foram fixados e corados com lacmoide. O desenvolvimento embrionário foi avaliado, pelas taxas de clivagem e blastocistos em D2. D7 e D8, após a inseminação (pi). Para análise estatística foi empregado o teste Qui-quadrado (P<0,05). Quanto ao experimento 3. primeiramente foi quantificada a expressão de genes ligados à apoptose (Caspase-3 e P-53) e ao controle epigenético (HDAC 2, Dnmt-1 e SUV39H1) em ovócitos maturados m vitro por : 0 (GCO), 8 (GC E), 22 (GC22) e 24 horas (GC24). Posteriormente, foi avaliado o efeito da vitrificaçào em diferentes momentos da MIV (0, 8 e 22 horas) na expressão desses mesmos genes. Para isso ovócitos de todos os grupos vitrifícados e do controle foram coletados ás 24 horas de MIV. A avaliação da expressão gênica. foi realizada por qPCR e os dados analisados por ANOVA one-way. (P<0,0S). A capacidade do ovócito de atingir Mil, após a maturação, clival e se desenvolver até blastocisto foi superior no grupo controle (P<0,05) comparado aos grupos vitrifícados. não havendo diferenças significativas entre estes (P>0.05). Já a taxa de fecundação, apesar de ser superior no grupo controle (P<0.05) o grupo VO apresentou a menor porcentagem de ovócitos fecundados e maior de ovócitos degenerados (P<0,05). comparado aos demais grupos. Quanto ao perfil de expressão gêmea em ovócitos durante a MIV. foi observado que os níveis de transcritos do gene Caspase-3 estavam aumentados (P<0,05). nos grupos GC22 e GC24. comparados á GCO e GCS, também foi observado um aumento (P<0.05) da expressão do gene Dnmt-1. nos grupos GC8. GC22 e GC24 comparados ao GCO. Entretanto, não foi observada alteração na abundância dos transcritos em nenhum dos grupos submetidos à vitnficação (P>0,0:j), comparados ao CG24. Conclui-se que. apesar dos baixos resultados, a vitnficação pode ser empregada para a conservação de ovócitos bovinos, independente do momento da MIV. Os níveis de transcritos avaliados nào foram alterados em resposta à vitrificaçào. Entretanto, foi constatado um aumento na expressão da Caspase-3 e Dnmt-1, durante a MIV. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Vitrification by cryorop method has emerged as a promising option for oocytes cryopreservation, by minimizing negative effects and improving survival rates. The aim of this research was to evaluate the effect of vitrification at different tunes point during in vitro maturation (TVM) on functional, morphological and molecular characteristics of bovine oocytes. For all the experiments cumulus-oocytes-complexes (COCs) were obtained from slaughterhouse ovaries. In first and second experiments, oocytes were distributed into 4 groups: control non-vitrified(C&); 0 hour vitrified (VO); 8 hours vitrified (VS) and 22 hours vitrified (V22). In all groups oocytes were vitrified and wanned, and then returned to incubator until 24 hours of IVM. For chromatin evaluation, COCs were denuded, fixed and stained with lacmoid. To evaluate fertilization rates, oocytes, were fixed and stained with lacmoid 18 hours after in vitro insemination (pi). Embryonic development was accessed by cleavage and blastocyst rates at D2. D7 and D8 (pi). Data were analyzed by Chi-square test (P <0.05). A third experiment was designed to evaluated inRNA expression of apoptosis (Caspase-3 and P-53) and epigenetic control related genes (HDAC 2, SUV39H1 and Dnmtl).First gene expression was quantified at different time points during oocyte IVM: 0 (CGO). 8 (CG 8), 22 (CG22) and 24 hours (CG24). Then, the effect of vitrification at different moments of IVM (0, 8 and 22 hours) on genes expression was studies. Gene expression was performed by qPCR and data were analyzed by one-way ANOVA (P <0.05).. The ability of the oocyte to reach Mil after maturation, to cleave and to develop to blastocyst w:as higher in CG (P <0.05), compared to vitrified groups, which did not differ among them (P:: 0.05). For fertilization rates, CG also presented superior results compared to all vitrified groups (P <0 05). However, when vitrified groups were compared. VO had the lowest rate of fertilized oocytes and higher rate degenerated oocytes than the other groups (P <0.05). Gene expression profile in oocytes during IVM, showed that mRNA levels of Caspase-3 were increased (P <0.05) in both CG22 and C&24 compared to CGO and CGE. An increase in Dnnit-1 gene expression was also observed (P <0.05) in CGS, CG22 and CG24 compared to CGO. No difference in mRNA relative abundance was observed in any of the vitnficated group (P> 0.05), compared to CG24. hi conclusion, despite the poor results, vitrification can be used to preserve bovine oocytes , regardless to IVM time. Transcript levels of the studied genes were not affected by vitrification procedure. However, an increase in mRNA levels of Caspase-3 and Dntnt-1 genes was observed during IVM, suggesting transcription processes during this period.

As vacinas de DNA têm sido utilizadas para a indução de imunidade contra antígenos virais e bacterianos. A aplicação de modelos experimentais tem sido explorada visando a indução de tolerância imunológica através da expressão de genes cujos produtos podem modular o sistema imune para um estado de não responsividade. A terapia gênica oferece a possibilidade de manipulação do sistema imune do receptor, através de um sistema de administração de genes específicos sob condições pré-definidas. Sua eficácia depende dos níveis de expressão e da natureza do antígeno, da via de administração assim como de sua distribuição nos tecidos (a qual às vezes depende do promotor utilizado). Porém, sua aplicação clínica é limitada em parte devido aos baixos níveis de expressão obtidos in vivo. A VP22 é uma proteína do tegumento do vírus Herpes simples tipo 1, que tem a propriedade de fazer tráfego intercelular. Estudos recentes têm demonstrado a alta eficiência desta molécula no transporte de proteínas heterólogas como VP22-p53, VP22-β galactosidase e VP22-proteína verde fluorescente. Para a indução de tolerância imunológica, tem sido demonstrado que a persistência do antígeno, pelo menos por algum período, é muito importante. Moléculas do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) têm sido utilizadas para induzir tolerância a nível central ou periférico, em diferentes protocolos. Dentre estas, as moléculas da classe I do camundongo, Kb, têm sido utilizadas com sucesso. O objetivo desse trabalho foi de construir duas vacinas recombinantes: pVP22::Kb e pCIneo::Kb. A primeira contém dois genes clonados na mesma pauta de leitura: a cadeia pesada de classe I Kb e VP22. O cDNA que codifica para o Kb foi obtido pela extração de RNA total de baço de um camundongo C57BL/6 (haplótipo H-2b) seguido de transcrição reversa. Este produto foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase. Esta molécula também foi obtida pela amplificação direta do gene Kb previamente clonado no sítio EcoR I do plasmídeo pBluescriptIISK (Stratagene®). Ambos os produtos de PCR foram subclonados com extremidades cegas no plasmídeo pCRBluntII (Invitrogen®). Foram obtidos dezenove plasmídeos recombinantes, denominados pCRBluntII::Kb, e um deles foi escolhido e digerido com as enzimas de restrição Spe I e Xba I e defosforilado com a enzima fosfatase alcalina (CIAP). O fragmento digerido foi clonado nos plasmídeos pVP22-myc/His (Invitrogen®) e pCIneo (Promega®) previamente digeridos com a enzima Xba I. Os novos plasmídeos pVP22::Kb e pCIneo::Kb foram utilizados para transfectar a linhagem celular eucariótica CHO. A expressão do mRNA para o Kb foi confirmada pela transcrição reversa e PCR e a expressão da proteína por imunofluorescência e citometria de fluxo.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:40:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412369-Texto+Completo-0.pdf: 943831 bytes, checksum: b3768e97bb6334c890b97438c7e5114e (MD5) Previous issue date: 2009 / Owing to the evolution of studies on organizational competences and their incorporation into the reality of companies, further reflections and investigations on the subject seem necessary. Also, the core proposition of discussions has shifted from a static and theoretical perspective, which is focused on the definition of concepts and classifications, to a dynamic and applied viewpoint, which highlights the process of formation and development of organizational competences. Aiming at contributing with such discussions, an in-depth analysis of the different existing frameworks has been conducted and the results presented in this paper. The main objective of the present study is to analyze the process of formation and development of organizational competences in an institution of the public sector. The case study with exploratory approach has been the chosen method, and the data collection gathering comprised two stages of interviews, document analysis and direct observation. In order to perform an evolutionary development analysis of the competences of the organization, sequential study periods with longitudinal research characteristics were defined. The study was carried out at the Regional Electoral Court of the State of Rio Grande do Sul, a public institution with the Brazilian Judicial Power. The results of this research point out which are the three main organizational competences within the institution, as well as their formation and development elements. Furthermore, the interrelationships between such elements and the competences have also been identified, which has enabled a detailed mapping of how those competences have formed and developed over time. Finally, a process representative framework has been devised from the mapping and the theoretical studies combined. / A evolução dos estudos sobre competências organizacionais e sua incorporação na realidade das organizações vem demandando novas reflexões acerca do tema. Neste sentido, o foco das discussões vem se transformando de uma perspectiva estática e teórica, direcionada à definição de conceitos e classificações, para uma perspectiva dinâmica e aplicada, onde o foco maior é no processo de formação e desenvolvimento de competências organizacionais. Visando a contribuir para o aprofundamento dessas discussões, nesta dissertação, procurou-se realizar um levantamento aprofundado acerca de diferentes frameworks existentes sobre o assunto, o qual contribuiu para a base teórica do trabalho. O objetivo principal deste trabalho foi analisar o processo de formação e desenvolvimento de competências organizacionais em uma instituição do setor público. Como método escolheuse o estudo de caso com abordagem exploratória e a coleta de dados realizou-se em duas etapas compostas de entrevistas, análise de documentos e observação direta. A pesquisa teve um caráter longitudinal, sendo definidos períodos de estudo seqüenciais para uma análise evolucional do desenvolvimento das competências da organização. O estudo foi realizado no Tribunal Regional Eleitoral do Rio Grande do Sul, instituição pública, ligada ao Poder Judiciário brasileiro. Os resultados da pesquisa apontaram as três principais competências organizacionais da instituição, bem como demonstraram quais os elementos que às compõem ou que fazem parte do seu processo de desenvolvimento. Além disso, foi possível identificar os inter-relacionamentos entre estes elementos e as competências, o que permitiu o mapeamento detalhado de como se formaram e se desenvolveram estas competências ao longo do tempo.A partir deste mapeamento, em conjunto com a fundamentação teórica, originou-se um framework representativo do processo.

Em étudiant loeuvre de Gilles Deleuze, cest impossible dignorer linfluence dAntonin Artaud et de lidée de Cruauté dans le dèvelopement de sa philosophie. Ansi on peut se demander Quelle est limportance de Antonin Artaud et du Théâtre de la Cruauté dans la constituition de la Philosophie Contemporaine?. La présente dissertation nose pas répondre à cette question dans tute as complexité. Elle est plus modeste dans sa prétention, elle a comme but tracer quelques lignes capables de nous orienter dans nos relations complexes entre la pensée de Artaud et la Philosophie, entre le Théâtre de la Cruauté et le Théâtre Philosophique. Ainsi, nous partons de lidée dune Métaphisique de la Cruauté, comme elle nous est présenté par Camille Dumoulié, pour une Métaphisique Cruelle, une métaphisique qui est elle-même une experimentation. Penser la cruauté comme un théâtre métaphisique met en crise le Sisteme de la Representation: oeuvre de la pensée contemporaine. De cette façon, comprendre la Philosophie et lArt Contemporain, rendent Antonin Artaud une traverse obligatoire. / Ao entrarmos em contato com a obra de Gilles Deleuze, não podemos ignorar a influência de Antonin Artaud e da idéia de Crueldade no desenvolvimento de sua filosofia. Assim, cabe a pergunta: Qual é a importância de Antonin Artaud e do Teatro da Crueldade na constituição da Filosofia Contemporânea? A presente dissertação não pretende responder esta pergunta em toda sua complexidade, a sua pretensão é mais modesta, ela visa traçar algumas linhas que possam nos orientar nas relações complexas entre o pensamento de Artaud e a Filosofia, entre o Teatro da Crueldade e o Teatro Filosófico. Assim, partimos da idéia de uma Metafísica da Crueldade, tal como nos é apresentada por Camille Dumoulié, para uma Metafísica Cruel, uma metafísica que já é ela mesma uma experimentação. Pensar a crueldade como um teatro metafísico põe em crise o Sistema da Representação: tarefa do pensamento contemporâneo. Dessa forma, compreender a Filosofia e a Arte Contemporâneas torna Antonin Artaud uma passagem obrigatória.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-03T17:45:20Z No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-12T12:51:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-12T12:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Estudos relacionados à criopreservação de germoplasma de raças localmente adaptadas, visam disponibilizar esse material com custo reduzido e maior variabilidade genética. O objetivo desse estudo foi testar protocolos de criopreservação do sêmen que resultassem em um produto de melhor qualidade. Para cada experimento, foram coletados quatro ejaculados de quatro suínos localmente adaptados, com intervalos de 5 a 7 dias. No primeiro experimento foram testados três curvas de congelação: 0h, 2h e 4h de estabilização em BTS após coleta à temperatura de 22-24°C. Foi observado que a estabilização por duas horas resultou em melhor qualidade de sêmen pós congelação (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (14,3±6,3%C vs 29,7±6,1A vs 22,9±8,2B, respectivamente) e percentual de células com membrana celular e acrossoma íntegros (9,6±4,2%B vs 17,5±4,7A vs 12,9±6,8A). No segundo experimento, foram testados protocolos utilizando diluentes de 2% e 3% de glicerol no volume final, sem e com (quinze minutos) estabilização pré congelação. Os resultados obtidos com diluente de congelação contendo 3% do volume final de glicerol, estabilizados por quinze minutos foram superiores (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (28,1±5,5B vs 31,8±5,0AB vs 29,1±4,9B vs 37,9±5,4A) e percentual de células com membrana celular e acrossomal íntegras (15,1±5,0C vs 18,4±5,7BC vs 19,8±6,4B vs 25,1±5,3A). Os protocolos cujo sêmen foi submetido à estabilização em BTS por duas horas e com concentração final de glicerol a 3% resultaram em sêmen de melhor qualidade ao final do processo de criopreservação. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Studies related to germplasm cryopreservation of locally adapted breeds, aim to eventually reduce cost and gain genetic variability. The aim of this study was to test sperm cryopreservation protocols that could lead to greater quality results after the cryopreservation process. Four ejaculates were collected by intervals of 5-7 days, from four national swine. The first experiment tested three freezing curves: after collected, semen were equilibrated for 0h, 2h and 4h in BTS at a temperature of 22-24 ° C. It was noted that the two hour equilibration resulted in greater semen quality after freezing (P> 0.05) for total motility (14.3±6.3%C vs 29.7±6.1A vs 22.9±8.18B, respectively) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (9.6±4.2%B vs 17.5±4.7A vs 12.9±6.8A). The second experiment tested protocols using liquid storages with 2% and 3% of glycerol in the final volume, with and without fifteen minutes of pre freezing equilibration. The results obtained with the liquid storage that contained 3% of glycerol in the final volume, equilibrated for fifteen minutes, were superior (P> 0.05) for total motility (28.1±5.5B vs 31.8±5.0AB vs 29.1±4.9B vs 37.9±5.4A) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (15.1±5.0C vs 18.4±5.7BC vs 19.8±6.4B vs 25.1±5.3A). Protocols in which semen were submitted to a two hour equilibration in BTS and a final glycerol concentration of 3%, resulted in greater semen quality by the end of the cryopreservation process.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-13T00:25:54Z No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-13T12:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-13T12:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / O objetivo desse trabalho foi definir as características populacionais, morfológicas e ultraestruturais de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) e comparar o efeito das técnicas de criopreservação de congelamento lento (CL) e vitrificação (V) de tecido ovariano de cadela sobre a morfologia dos FOPA. A média da estimativa da população de FOPA de cadelas foi de 48541±18366, onde 94,25% eram primordiais (45145±16076), 4,92% primários (2358±1253) e 0,83% secundários (397±351). A média de diâmetro do folículo, ovócito e núcleo do ovócito e número de células da granulosa de folículos primordiais foram 27,5±4,2μm, 21,7±2,7μm e 11,3±1,6μm e 6,0±1,8 respectivamente. Para folículos primários foram, respectivamente, 42,6±12,5μm, 27,8±7,5μm, 13,7±2,6μm e 15,0±7,0. Para folículos secundários, foi 101,6±62,9μm para diâmetro do folículo, 48,0±12,6μm para diâmetro do ovócito, 18,7±4,2μm para diâmetro do núcleo do ovócito e 61,5±63,5 células da granulosa. A porcentagem total de FOPA morfologicamente normais foi de 93,66±6,81% para o grupo controle, 86,16±11,05% para o CL e 68,14±12,75% para a V. Para folículos primordiais a porcentagem de FOPA normais foi 96,69±4,72% no controle, 89,51±10,39% no CL e 75,32±9,23% na V. Para folículos primários e secundários os valores foram, respectivamente, 94,80±6,91% e 87,62±17,12% para o controle, 86,8±12,15% e 76,35±26,34% para CL e 61,53±14,78 e 52,25±22,13% para a V. Não houve diferença significativa na porcentagem de FOPA morfologicamente normais entre o CL e o grupo controle. Já na V essa porcentagem foi significativamente inferior aos outros 2 grupos (P<0,05). A ultraestrutura de folículos pré-antrais de cadela mostrou ser semelhante à descrita para outras espécies. Após criopreservação por CL os folículos apresentaram danos ultraestruturais, enquanto após vitrificação os folículos primordiais e primários estavam bem preservados. No entanto, os folículos secundários foram muito danificados em ambos os tratamentos. Em conclusão, este trabalho descreveu as características morfométricas, ultraestruturais e populacionais dos FOPA de cadela. A vitrificação foi mais eficiente em preservar a ultraestrutura dos folículos primordiais e primários que o congelamento lento. Os dois métodos de criopreservação testados apresentam resultados promissores, mas ainda precisam de aperfeiçoamento, especialmente em relação à preservação de folículos secundários. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to define the population, morphological and ultrastructural characteristics of bitch preantral follicles (PAF) and to compare the effects of two cryopreservation techniques - slow freezing (SF) and vitrification (V) - of bitches ovarian tissue on the morphology of PAF. The average population of PAF was 48,541 ± 18,366, where 94.25% were primordial (45145 ± 16076), 4.92% primary (2358 ± 1253) and 0.83% secondary (397 ± 351). The average diameter of the follicle, oocyte and the oocyte nucleus and the number of granulosa cells for primordial follicles were 27.5 ± 4.2μm, 21.7 ± 2.7μm, 11.3 ± 1.6μm and 6.0 ± 1.8, respectively. For primary follicles the values were, respectively, 42.6 ± 12.5μm, 27.8 ± 7.5μm, 13.7 ± 2.6μm and 15.0 ± 7.0. For secondary follicles follicle diameter was 101.6 ± 62.9μm, oocyte diameter was 48.0 ± 12.6μm, nucleus diameter was 18.7 ± 4.2μm, and the number of granulosa cells was 61.5 ± 63.5. The overall percentage of morphologically normal PAF was 93.66 ± 6.81% for the control group, 86.16 ± 11.05% for SF and 68.14 ± 12.75% for V. The percentage of normal primordial follicles was 96.69 ± 4.72% in control, 89.51 ± 10.39% in SF and 75.32 ± 9.23% in V. For primary and secondary follicles values were respectively 94.80 ± 6.91% and 87.62 ± 17.12% for control, 86.8 ± 12.15% and 76.35 ± 26.34% for SF and 61.53 ± 14.78 and 52.25 ± 22.13% for V. There was no significant difference on the percentage of normal PAF among SF and the control. However, V presented a significantly lower percentage of normal PAF than the other two groups (P<0.05). The ultrastructure of bitch PAF was similar to that described for other species. After, SF follicles presented ultrastructural damage, while after V, primordial and primary follicles were well preserved. Secondary follicles, however, suffered many damages in both cryopreservation techniques. In conclusion, this work described the morphometric and ultrastructural characteristics and the population of bitch PAF. Vitrification was more effective in preserving the ultrastructure of primordial and primary follicles than slow freezing. Both methods are promising, but need improvement, especially concerning secondary follicles preservation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-16T17:26:26Z No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-27T13:29:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-27T13:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) Previous issue date: 2007 / O transplante de ilhotas pode ser uma opção para o tratamento do Diabetes do tipo I em função do aumento do controle metabólico e da qualidade de vida do paciente transplantado. As maiores limitações para a aplicação dessa técnica em larga escala são o alto número de ilhotas necessárias para a obtenção de um bom funcionamento do transplante e a deteriorização de ilhotas, causados por dano isquêmico por preservação a frio. Aqui propomos o uso de nova tecnologia denominada TAT- PTD como transportador de moléculas terapêuticas para o interior de ilhotas e pâncreas com a intenção de prevenir morte de ilhotas, aumentando, assim, o número e a qualidade das ilhotas para transplante de pacientes diabéticos. Resultados da Parte I: Construímos uma proteína de fusão composta por Heme oxigenase -1 (HO1) e o domínio de transdução protéica TAT- PTD (TAT) um peptídeo viral com 11 aminoácidos provenientes do vírus da imunodeficiência humana (HIV) e com capacidade de penetrar em membrana plasmática. A transdução de TAT-PTD-HO1 em células produtoras de insulina protege contra a ação citotóxica de TNF-α. A transdução de TAT-HO1 para o interior de células produtoras de insulina não danifica a fisiologia de ilhotas como foi mostrado quando estas são transplantadas em camundongos imunodeficientes e com Diabetes quimicamente induzida. Finalmente, mostramos que transdução de ilhotas com a proteína de fusão melhora a viabilidade de ilhotas em cultura. Essa abordagem pode ter um impacto positivo no aumento da disponibilidade de ilhotas para transplante. Resultados da Parte II: A produção de proteínas de fusão ligadas a TAT-PTD pode ser obtida em larga escala e eficientemente com a expressão protéica em E. coli. No entanto, a contaminação com endotoxina representa um problema para a aplicação dessas proteínas in vitro e in vivo. Desenvolvemos várias proteínas de fusão ligadas a TAT que têm aplicação terapêuticas em ilhotas. Apresentamos aqui um novo método para a eficiente remoção de endotoxina de soluções protéicas usando tubos de polipropileno em combinação com tratamento em pH ácido, mantendo a atividade biológica da proteína com bom rendimento protéico. Resultados da Parte III: Para poder detectar possíveis moléculas que possam ser citoprotetoras e que possam ser associadas à tecnologia de TAT-PTD, estabelecemos um modelo de isquemia a frio em pâncreas de ratos. Isso nos permitiu estudar a modulação de vias ativadas por sinal de stress que levam ao impedimento da recuperação da qualidade e função de ilhotas. Observamos que JNK e p38 são proteínas kinase ativadas por stress (SAPK) que estão presentes por causa de dano causado por isquemia pancreática e isolamento de ilhotas. Um experimento preliminar usando TAT-D-JNKi, inibidor de JNK, tentou prevenir dano causado pela ativação de JNK. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Islet transplantation can become a therapeutic option for the treatment of Type I Diabetes due to increased metabolic control and quality of life for transplanted patients. The major limitations for widespread application of this technique are, high number of islets needed to attain good function after transplantation and islet deterioration caused by pancreatic injury through cold ischemia storage. We here propose the use of a new technology using TAT-PTD as a transporter of therapeutic molecules into islets/pancreas with the attempt to prevent islet cell death and increase islet number/quality for transplantation of diabetic patients. Results from Part I: We have generated a fusion protein composed of HO-1 and TAT protein transduction domain (TAT/PTD), an 11-aa cell penetrating peptide from the human immunodeficiency virus TAT protein. Transduction of TAT/PTD–HO-1 to insulin producing cells protects against TNF-a-mediated cytotoxicity. TAT/PTD–HO-1 transduction to islets does not impair islet physiology, as assessed by reversion of chemically induced diabetes in immunodeficient mice. Finally, we report that transduction of HO- 1 fusion protein into islets improves islet viability in culture. This approach might have a positive impact on the availability of islets for transplantation. Results from Part II: While production of TAT-PTD-bound protein can be efficiently attained by E. coli protein replication, contamination with endotoxin represents a major hindrance for application of these proteins in the context of in vitro and in vivo testing. We have developed several TAT-attached proteins that have therapeutic cytoprotection applications on islet. Here we present a novel method for efficient removal of endotoxin from proteins in polypropylene tubes in combination with acidic pH treatment that does not interfere with biological activity of the protein and has good protein recovery. Results from part III: In order to identify possible molecular targets for islet cell cytoprotection by TAT-PTD technology, we have established a rat pancreas cold ischemia model and readout systems allowing for the study of the modulation of stress-activated cellular pathways leading to impairment of islet cell recovery and quality. We have observed that JNK and p38 stress activated protein kinases (SAPKs) are activated as a result of pancreas ischemia and islet isolation. A preliminary experiment was done using TAT-D-JNK inhibitor to try to prevent or reduce islet damage caused by activation of this SAPK pathway using this stringent model system.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, Departamento de Ciências Fisiológicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-02-10T13:51:22Z No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-10T14:09:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-10T14:09:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / No Brasil, todas as espécies de felinos selvagens estão sob risco de extinção. Desta forma, técnicas de reprodução assistida aplicáveis a tais espécies são recursos valiosos para a conservação das mesmas. O gato doméstico (Felis catus) tem sido um excelente modelo experimental para estudos que visem aplicação em felinos selvagens. O presente trabalho teve como objetivos testar o efeito de diferentes protocolos de criopreservação, além da eficácia do autotransplante ovariano em manter a viabilidade e retomar o desenvolvimento de folículos pré-antrais inclusos em ovários de gatas domésticas. Um teste de criopreservação foi realizado comparando a eficácia de etilenoglicol (EG), dimetilsulfóxido (DMSO) e a associação de ambos (EG+DMSO) na preservação de folículos a aovarianos após descongelamento (1 Etapa). Na 2 Etapa do experimento, cinco gatas foram submetidas à cirurgia de ovariohisterectomia bilateral. Os animais tiveram seis fragmentos de ovário fresco transplantados para o tecido subcutâneo da região dorsal do pescoço.Foram realizadas cinco biopsias (7, 14, 28, 49 e 63 dias). O tecido ovariano foi fixado em Carnoy, processado para histologia clássica e analisado por microscopia de luz. Durante o período de transplante, foram realizadas análises ultrassonográficas para acompanhar o desenvolvimento do tecido ovariano. Na Etapa 1, a criopreservação com DMSO a 1,5 M mostrou-se mais eficaz. Durante as avaliações ultrassonográficas, foi possível identificar a presença de círculos hipoecóicos com diâmetro aproximado de 1 mm, nos animais 3,4 e 5. Tais estruturas correspondiam a folículos antrais. Nas biopsias , foi possível identificar folículos em todos os estágios do desenvolvimento. As porcentagens médias (±DP) de folículos morfologicamente normais encontrados nos fragmentos referentes às biopsias , realizadas nos dias 7, 14, 28, 49 e 63 pós-transplante, foram, respectivamente, 44,36±30,56, 46,95±13,97, 51,41±14,38, 54,80±36,47 e 37,70±31,11. A maioria dos folículos primordiais foi classificada como normal. Nas biopsias dos dias 7 e 14, houve grande concentração de folículos com o citoplasma do ovócito muito acidófilo e com ausência de núcleo (degeneração tipo 1). A partir do dia 14, muitos apresentaram-se com células da granulosa justapostas, que cobriam o local do ovócito, que estava ausente nestas estruturas (degeneração tipo 2). Em conclusão, é possível manter a morfologia folicular após criopreservação de tecido ovariano felino com DMSO a 1,5 M. Também é mantida a viabilidade e funcionalidade de tecido ovariano felino fresco após autotransplante. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, all wild felids species are endangered. This way, assisted reproduction techniques are a valuable resource to keep these species against extinction. The domestic cat (Felis catus) has been an excellent experimental model for studying new techniques to apply to wild felids. The aim of this work was to test different protocols of cryopreservation and the capacity of ovarian autotransplantation to keep the viability and resume preantral follicle development in domestic cats. The cryopreservation test was performed to compare ethylene glycol (EG), dimethyl sulfoxide (DMSO) and the association of both (EG+DMSO) in the preservation of preantral follicles included st nd in ovarian tissue (1 stage). In the 2 stage of the experiment, five cats were submitted to bilateral ovarian hysterectomy. In these animals, six fragments of fresh ovary were immediately transplanted to the subcutaneous tissue of the dorsal neck Five biopsies were performed after 7, 14, 28, 49 and 63 days of transplantation. The ovarian tissue was fixed in Carnoy, processed for classical histology and analysed under light microscopy. During the transplantation period, the ovarian tissue development and localization was monitored by ultrassonographic analysis. In the Stage 1 of the experiment, the cryopreservation with DMSO 1,5 M showed to be more efficient. During the ultrassonographic evaluation it was possible to identify the presence of hypoechoic circles with approximately 2 mm of diameter in the transplanted tissue of animals 3, 4 and 5. These structures corresponded to antral follicles. In the biopsies it was possible to identify follicles in all developmental stages. The mean (±SD) percentages of morphologically normal follicles found in the biopsies at days 7, 14, 28, 49 and 63 post-transplantation were respectively 44.36±30.56, 46.95±13.97, 51.41±14.38, 54.80±36.47 e 37.70±31.11. The majority of the primordial follicles were classified as normal. At days 7 and 14 biopsies there was a great number of follicles with acidophilic cytoplasm and with absent of nucleus (Type 1 degeneration). From day 14 on, a lot of follicles showed juxtaposed granulosa cells covering the place where the oocyte should be (Type 2 degeneration). Both these follicles were classified as degenerated. In conclusion, it is possible to keep the morphology of ovarian follicles after cryopreservation with DMSO 1,5 M. It is possible to keep the viability and function of fresh feline ovarian tissue after autotransplantation.