Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2015-05-15T17:27:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Samantha Cardoso de Andrade.pdf: 971765 bytes, checksum: 4662dfa9a04def6c5dac0c94620ea8f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T17:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Samantha Cardoso de Andrade.pdf: 971765 bytes, checksum: 4662dfa9a04def6c5dac0c94620ea8f5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-07 / CNPq / Durante os anos demonstrou-se que a terapia com o laser de baixa potência pode interferir na taxa de proliferação celular como no caso dos fibroblastos, mioblastos, células mesenquimais, osteoblastos e outros, além de exercer efeitos sobre o metabolismo celular. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a dose-resposta do laser de As-Ga-Al no comprimento de onda de 660nm sobre a viabilidade celular e a produção de espécies reativas do nitrogênio em macrófagos em cultura. Foi utilizada a linhagem RAW 264.7 em meio de cultura DMEM e o experimento foi dividido em quatro grupos, o primeiro grupo foi composto por apenas células e meio de cultura, o segundo grupo por células mais o meio e a irradiação com laser, o terceiro grupo pelas células estimuladas com lipopolissacarídeo (LPS) e o quarto grupo pelas células estimuladas com LPS e irradiadas com o laser. As células foram irradiadas nas potências de 10, 50 e 100mw, nos tempos de 10, 30 e 60s, dando um total de 9 densidades de energia. Este estudo indicou que a LBP aumentou significativamente (p<0,001) a produção de óxido nítrico (NO) pelos macrófagos do tipo RAW 264.7, quando comparado com células não irradiadas, tanto em células estimuladas pelo LPS quanto na produção basal de NO (sem estimulação por LPS). A densidade de energia de 32J/cm² foi a que apresentou um maior aumento na produção de NO (p<0,011) e analisando, apenas, o tempo de irradiação não houve diferença estatisticamente significativa (p>0,05 diferença) em diferentes potências. Baseado nos achados do presente estudo é possível concluir que a irradiação com 660nm aumentou a produção de NO por macrófagos em cultura, quando comparado com células não estimuladas, sem afetar a viabilidade celular.

Orientadores: Fernanda Klein Marcondes, Pedro Duarte Novaes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-16T16:16:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guzzoni_Vinicius_M.pdf: 984751 bytes, checksum: ee30bc1a29a47fa0be69646bf0ecf92f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Os riscos à saúde decorrentes do consumo de esteróides anabólicos androgênicos constituem um problema de saúde pública. Em estudo anterior desenvolvido por nosso grupo de pesquisa, foi observado que o decanoato de nandrolona cancelou os efeitos vasculares adaptativos promovidos pelo treinamento físico resistido, em aorta torácica de ratos, sugerindo uma ação inibitória sobre a síntese de óxido nítrico. Visando elucidar os mecanismos envolvidos nestes efeitos, os objetivos do presente estudo foram: analisar a sensibilidade in vitro da aorta torácica ao efeito vasodilatador da acetilcolina (ACh), a espessura da parede vascular, a concentração tecidual de óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (EROx), em aorta torácica isolada de ratos Wistar divididos em 4 grupos experimentais: não-treinado + veículo; treinado + veículo; não-treinado + nandrolona; treinado + nandrolona. Após o período de adaptação, o treinamento físico resistido consistiu de sessões de saltos em meio líquido com sobrecarga de peso (4 séries, 10 repetições, 50-70% peso corporal, 5 dias por semana, 6 semanas). Dois dias após a última sessão de treinamento, os animais foram sacrificados por decapitação e a aorta torácica foi isolada para a obtenção de três anéis, os quais foram utilizados para obtenção da curva concentração-efeito à ACh in vitro, avaliação in vitro da produção de óxido nítrico (ON) e de espécies reativas de oxigênio (EROx), e para análise da espessura da camada média. Os dados foram analisados por ANOVA bifatorial seguido por Tukey considerando como nível de significância 5%. Animais treinados apresentaram aumento significativo na espessura da camada média da aorta torácica em relação aos respectivos grupos não-treinados. Anéis aórticos de ratos não treinados tratados com veículo ou nandrolona apresentaram relaxamento de 100% em resposta à ACh, enquanto em anéis isolados de ratos treinados tratados com veículo e nandrolona observou-se relaxamento de 79 e 51%, respectivamente. A aorta torácica de ratos treinados apresentaram menor produção de ON em relação a ratos não-treinados. A aorta isolada de ratos tratados com anabolizante apresentaram menor produção de ACh em relação ao tecido de ratos tratados com veículo. O treinamento reduziu a produção de EROx na aorta torácica de animais treinados tratados com veículo, em relação ao grupo não treinado, sem alteração em animais tratados com nandrolona. Os dados obtidos indicam que altas doses de nandrolona induziram disfunção endotelial em ratos submetidos a treinamento físico resistido. / Abstract: The risk-benefit of androgenic-anabolic steroid abuse in elite athletes has been of great corcern for researchers. Nandrolone decanoate was previously observed to inhibit the adaptative vascular effects in the thoracic aorta of rats under resistance training, probably due to an inhibitory effect on the nitric oxide synthesis. The aim of this in vitro study was to analyze the thoracic aorta sensibility to acetylcholine vasodilator effect, considering the vascular media layer thickness, the bioavailability of nitric oxide (NO) and the superoxide anion production in the thoracic aorta in Male Wistar rats, aged 2 months. Animals were assigned to four groups: non-trained animals treated with vehicle (NTV); non-trained animals treated with nandrolone (NTN); trained animals treated with vehicle (TV); and trained animals treated with nandrolone (TN). After the adaptation period, animals were submitted to resistance physical training consisting of jumps in liquid ambient with overload (4 sets, 10 repetitions, 30 second rest, 50-70% body weight-load, 5 days/week, 6 weeks). Two days after the last training session, the animals were killed by decapitation and the thoracic aorta was isolated. Thoracic aorta was divided into three parts and rings were removed from the middle third of the aorta of each animal to obtain concentration-effect curves for acetylcholine (ACh). Segments obtained from the part below the middle third were processed to evaluate the production of nitric oxide (NO) and oxygen reactive species (EROx). Data were analyzed using 2-way analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test, at a 5% significance level. A significant increase in the final body weight was observed in the four experimental groups, while a significant decrease was found in the final body weight for the groups treated with nandrolone. Trained animals showed a significant increase in the aorta middle layer thickness compared to non-trained groups. Aortas of the rats treated with nandrolone showed a decrease in vasodilator response compared to those of rats treated with vehicle. Isolated rings of non-trained rats treated with vehicle or nandrolone revealed 100% relaxation in response to ACh, while isolated rings of the trained rats treated with vehicle and nandrolone showed relaxation of 79 and 51%, respectively. Animals treated with nandrolone presented decreased production of NO compared to those treated with vehicle. The EROx production dropped in trained rats treated with vehicle but not in those treated with nandrolone. In conclusion, the physical training protocol used in this study caused morphological, functional, and metabolic adaptations in the aorta of the rats; supraphysiological doses of nandrolone potentiated and inhibited the responses triggered by intense physical training. / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia

Orientador: Heloísa Helena de Araújo Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T04:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pelaquini_EdmarHenrique_M.pdf: 18418086 bytes, checksum: fa003dada60c0eb4043e3908a67d256b (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito do tratamento com 1400W, inibidor seletivo da NOS induzível (iNOS), na adesão in vitro a VCAM-1 e ICAM-1 e na expressão das selectinas VLA-4, Mac-1 e LFA-1 nos eosinófilos da medula óssea e do sangue periférico. A produção das citocinas sintetizadas pelos linfócitos T, Th1 e Th2, também foi avaliada nos homogenatos dos pulmões. Verificamos que o conteúdo de eosinófilos estava aumentado nos pulmões dos camundongos não tratados (controles) a partir de 48h após o desafio com OVA. O tratamento dos camundongos alérgicos com 1400W causou redução no infiltrado de eosinófilos somente em 48h. O tratamento com 1400W aumentou a adesão in vitro dos eosinófilos obtidos da medula óssea a ICAM-1 em 24h-48h, enquanto que a adesividade a VCAM-1 estava diminuída em 48h. Nos eosinófilos do sangue, o 1400W diminuiu a adesão a VCAM-1 em 24h-48h. Na análise por citometria de fluxo não foram observadas alterações na expressão do CD11a sobre os eosinófilos da medula óssea ou do sangue periférico obtidos de ambos os grupos. Um aumento da expressão do CD11b nos eosinófilos da medula óssea dos controles foi verificada em 48h, enquanto que, neste período, CD11b e CD49d estavam diminuídas nos eosinófilos do sangue. O tratamento com 1400W aumentou a expressão do CD11b dos eosinófilos da medula óssea em 24h e 48h e provocou efeitos contrários nas células do sangue ao diminuir sua expressão em 24h e aumentar em 48h. Do mesmo modo, efeitos inversos do 1400W sobre a CD49d foram detectados no sangue quando reduziu sua expressão em 24h, aumentando-a em 48h. O desafio com OVA provocou em 24h aumento nos níveis de todas citocinas nos pulmões dos controles. Não foram observadas outras variações significativas nos níveis de IFN-y e TNF-a em nenhum dos grupos. A eotaxina mostrou pico de produção em 48h-72 horas nos animais controles, quando o tratamento com 1400W reduziu sua síntese nos pulmões. A IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 estavam aumentadas nos camundongos controles em 24h, sendo que picos de IL-4 e IL-13 foram detectados em 24h e 48h, respectivamente. Níveis elevados de IL-5 foram observados em 24-48h. O tratamento com 1400W reduziu os níveis de IL-4 no pulmão em 24h-48h após o desafio com OVA, assim como os de IL-5 em 48h e de IL-13 em 48h-72h. Somente em 72h o 1400W diminuiu o nível da IL-10 no pulmão. Em conclusão, nossos resultados sugerem que o envolvimento do NO na modulação da secreção de citocinas derivadas dos linfócitos Th2 e da eotaxina nos pulmões, bem como na expressão das moléculas de adesão nos eosinófilos da medula óssea e do sangue periférico, pode influenciar a migração celular para os pulmões dos camundongos alérgicos. O NO produz um efeito temporal na expressão/função do Mac-1, sugerindo ser esta a principal molécula de adesão envolvida no efluxo dos eosinófilos da medula óssea em 24h, enquanto o Mac-1 e o VLA-4 estão envolvidos na mobilização dos eosinófilos do sangue periférico para o pulmão em 48h após o desafio antigênico. / Abstract: The aim of this study was investigated the effectiveness of treatment with 1400W, a selective inhibitor of inducible NOS (iNOS) in in vitro adhesion to VCAM-1 and ICAM-1 and VLA-4, Mac-1 and LFA-1 expression in eosinophils from bone marrow and peripheral blood. The cytokines synthesized by T lymphocytes, Th1 and Th2 cells, was evaluated in lungs homogenates. As a result we found that the eosinophils were increased from 48h after OVA challenge in lungs of untreated mice (controls). Treatment of allergic mice with 1400W caused a reduction in eosinophils infiltration only after 48h. 1400W increased between 24-48h the in vitro adhesion of bone marrow eosinophils to ICAM-1, whereas adhesion to VCAM-1 was decreased after 48h. In the blood eosinophils, 1400W decreased adhesion to VCAM-1 between 24-48h. Flow cytometric analysis showed no significant changes in the expression of CD11a on bone marrow and peripheral blood eosinophils obtained from both groups. An increased expression of CD11b on bone marrow eosinophils of controls was observed after 48h, while on that period, CD11b and CD49d expression were reduced in blood eosinophils. In the bone marrow eosinophils, treatment with 1400W increased CD11b expression in both 24h and 48h, but in the blood cells caused adverse effects by decreasing expression after 24h and increase after 48h. Similarly, the opposite 1400W effect was detected in the blood cells when CD49d expression had been reduced after 24h and increased after 48h. The OVA challenge resulted in increasing the levels of all cytokines in the control lungs after 24h. There were no other significant variations in the IFN-y and TNF-a levels in both groups. In control animals, the eotaxin showed peak production between 48-72h, while 1400W treatment reduced its synthesis in the lungs. IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13 were increased in control mice after 24 hours, with peaks of IL-4 and IL-13 were detected after 24h and 48h, respectively. Elevated levels of IL-5 were observed between 24-48h. Treatment with 1400W reduced the levels of IL-4 in lung between 24h-48h after OVA challenge, as well as IL-5 in 48 hours and IL-13 in 48h-72h. Only after 72h 1400W decreased the level of IL-10 in the lung. In conclusion, our results suggest that the involvement of NO in modulating the secretion of cytokines derived from Th2 lymphocytes and eotaxin in the lungs, as well as in the adhesion molecules expression in bone marrow and peripheral blood eosinophils may influence cell migration to the lungs of allergic mice. NO produces a temporal effect on the expression / function of Mac-1, suggesting that the main adhesion molecule involved in the efflux of bone marrow eosinophils after 24h, while Mac-1 and VLA-4 were involved in the mobilization of peripheral blood eosinophils to the lungs in 48 h after antigen challenge. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Jose Geraldo P. Ferraz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T20:45:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camara_PaulaRubyadeSouza_D.pdf: 2256684 bytes, checksum: 9dc8fd88329e14f1e7a96cce313eb651 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A resistência reduzida da mucosa gástrica hipertensiva portal, perante os agentes lesivos, é observada frequentemente em pacientes portadores de cirrose hepática e hipertensão portal. Trata-se de complicação grave que predispõe ao desenvolvimento de hemorragia digestiva alta ou anemia, secundária à perda crônica sangüínea, resultando na necessidade de frequêntes transfusões sangüíneas. Os fatores que determinam a resistência diminuída da mucosa gástrica hipertensiva portal perante os agentes nocivos incluem uma complexa interação entre vários mediadores continuamente liberados durante o desenvolvimento da circulação hiperdinâmica na hipertensão portal. Os neurônios aferentes primários podem contribuir para esse fenômeno, uma vez que eles foram previamente implicados no desenvolvimento da hiperemia esplâncnica na hipertensão portal. O presente estudo teve como objetivo ivestigar a contribuição da inibição crônica do óxido nítrico, bem como a participação das prostaglandinas e endotelinas, na resistência reduzida da mucosa gástrica à lesão induzida pelo etanol 40% usando modelos experimetais em ratos. Modelos distintos de hipertensão portal (ligadura de ducto biliar comum e estenose calibrada de veia porta) foram realizados em ratos Sprague-Dawley. As lesões gástricas induzidas pelo etanol foram avaliadas utilizando o modelo ex vivo de câmara gástrica. A resposta microcirculatória da mucosa foi avaliada através de fluxometria por laser-Doppler usando o mesmo modelo ex vivo. O papel da inibição prolongada de óxido nítrico foi realizado através da adição de L-NAME à água de beber dos ratos controles e com hipertensão portal antes dos experimentos de câmara gástrica. Similarmente, a função das endotelinas e das prostaglandinas foi avaliada através da utilização de agonistas, antagonistas ou de inibidores. A participação de neurônios aferentes no desenvolvimento da circulação hiperdinâmica da hipertensão portal e sua repercussão sobre a resistência da mucosa gástrica ao etanol foi avaliada através do tratamento neonatal com capsaicina ou do uso de antagonista de taquicininas. A sinalização molecular para produção óxido nítrico, prostaglandinas e endotelinas, bem como o efeito da endotoxemia e o pH intragástrico foi também avaliado. Nossos resultados indicam que a hipertensão portal associada à disfunção hepática reduz a capacidade da mucosa gástrica de se defender contra a aplicação tópica de etanol. Esse fenômeno é influenciado pelo pH intragástrico, bem como pela presença de endotoxemia. Os resultados também indicam que os neurônios aferentes primários participam no desenvolvimento da circulação hiperdinâmica da hipertensão portal, afetando a capacidade de defesa da mucosa gástrica perante os agentes agressores. Nós concluímos que a capacidade de defesa da mucosa gástrica hipertensiva portal, avaliada nos modelos experimentais utilizados, é modulada pelos neurônios aferentes primários, e resulta de uma complexa interação entre o óxido nítrico liberado, prostaglandinas, endotelinas e o sistema nervoso entérico / Abstract: The reduced resistance of the portal hypertensive gastric mucosa is frequently observed in patients with liver cirrhosis associated with portal hypertension. It can predispose to upper gastrointestinal hemorrhage as well as anemia secondary to chronic blood loss. It is usually associated with the need of multiple blood transfusions. The mechanisms involved in the reduced resistance of the portal hypertensive gastric mucosa include a complex interaction between several vasoactive mediators continuously released during the development of the hyperdynamic circulation of portal hypertension. Primary afferent neurons may also contribute to this phenomenon, as they have been previously implicated in the development of the splanchnic hyperemia in portal hypertension. The objective of the present study was to investigate the role of chronic inhibition of nitric oxide, as well as prostaglandins and endothelins, in the reduced resistance of the gastric mucosa to ethanol (40%)-induced injury using an experimental rat model. Portal hypertension was induced by bile duct ligation or calibrated portal vein stenosis in male Sprague-Dawley rats. Ethanol-induced gastric damage was assessed using an ex vivo gastric chamber preparation. Gastric blood flow responses were measured using laser Doppler flowmetry using the ex vivo preparation as well. The role of chronic nitric oxide inhibition was achieved by adding L-NAME to drinking water of control and portal hypertensive rats prior to chamber experiments. Similarly, the function of endothelins and prostaglandins was investigated using agonists, antagonists or inhibitors. The participation of primary afferent neurons in both development of hyperkinetic circulation in portal hypertension and its contribution on gastric resistance to ethanol-induced injury were investigated by induction of cirrhosis by bile duct ligation in either capsaicin newborn or takikinin antagonist treated rats. The molecular signaling for generation of nitric oxide, prostaglandins and endothelins was studied using RT-PCR. The gastric prostaglandin synthetic capacity was assessed using ELISA in samples collected at the end of the different experiments. The impact of endotoxemia and intragastric pH on gastric resistance to ethanol-induced injury was also investigated. Our results indicated that induction of liver dysfunction and portal hypertension reduces the gastric resistance to topical application of ethanol. This is influenced by the intragastric pH, as well as by the presence of endotoxemia. This phenomenon is result of a complex interplay between the production and release of nitric oxide, prostaglandins and entothelins. In addition, primary afferent neurons participate in the development of the hyperdynamic circulation of portal hypertension, affecting the ability of the gastric mucosa to defend against injury. We conclude that gastric defence against topical application of ethanol in the presence of experimental portal hypertension is modulated by primary afferent neurons, and result of a complex interplay among the release of nitric oxide, prostaglandins, endothelins and the enteric nervous system / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Claudio Aparecido Casatti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T10:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Viscaino_SilviaAndreiaTesser_D.pdf: 2469627 bytes, checksum: 33207aa915fc45fcab040fd29693f443 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O óxido nítrico é um radical livre com atividade moduladora no sistema nervoso central. Nos últimos anos, inúmeros trabalhos têm relacionado o óxido nítrico com o mecanismo central da hiperalgesia durante processos inflamatórios desencadeados em órgãos-alvo. No presente estudo, foi analisada, por métodos imunohistoquímicos e de ensaio radiométrico (mensurada pela capacidade de conversão da L-arginina em L-citrulina triciadas), uma possível modulação das isoenzimas óxido nítrico sintases no subnúcleo caudal do núcleo espinal do nervo trigêmeo (Sp5C), durante artrite induzida por carragenina na articulação temporomandibular de rato. A análise imunohistoquímica revelou que o número de perfis neuronais nucleados que exibem imunorreatividade à enzima óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) é elevado nas lâminas superficiais do Sp5C e aumentou bilateralmente nos grupos com artrite aguda, crônica e crônica-agudizada quando comparado com seus respectivos grupos pseudo-operados, entretanto sem diferenças estatisticamente significantes. A análise imunohistoquímica restrita à população de neurônios nNOS ativados durante a artrite, detectados pela expressão da proteína Fos, também não revelou diferenças estatísticas. A expressão da isoenzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) não foi detectada no Sp5C. A atividade da isoenzima NOS Ca+2-dependente aumentou significantemente na fase crônica quando comparada com o seu respectivo grupo pseudo-operado (teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e post-test de Dunns, P<0,01), com o grupo da fase artrite aguda (P<0,01) e com o grupo da fase crônica-agudizada (P<0,05). A atividade da isoenzima NOS Ca+2-independente (iNOS) foi insignificante e permaneceu inalterada. Em síntese, os neurônios imunorreativos a nNOS posicionados nas lâminas superficiais do Sp5C do rato devem exercer um importante papel no processamento nociceptivo, em condições de normalidade. Na evolução da artrite, a alteração na atividade da NOS Ca+2-dependente demonstra uma possível influência do óxido nítrico no mecanismo nociceptivo central do Sp5C durante injúrias inflamatórias crônicas que acometem a articulação temporomandibular do rato / Abstract: Nitric oxide has been implicated in hyperalgesia modulation accompanying peripheral inflammation. In this study, we analyzed the effects of carrageenan-induced arthritis (CIA) in the unilateral temporomandibular joint (TMJ) on immunoreactivity and activity of the neuronal nitric oxide synthase (nNOS) in the caudal part of the rat spinal trigeminal nucleus (Sp5C) during the acute, chronic and chronic-active phases. In addition, double immunohistochemistry was used to verify Fos induction in nNOS neurons. The number of nNOS-like immunoreactive (nNOS-LI) neurons in the Sp5C was elevated and we observed a slight bilaterally increase in numbers of these neurons in the acute, chronic and chronic-active phases of CIA when compared to the respective sham groups, although the difference was less than statistically significant. A discrete percentage of nNOS-LI neurons expressed Fos immunoreactivity in all experimental groups. In addition, Ca2+-dependent NOS activity in the ipsilateral Sp5C was significantly higher (P<0.05) in the chronic phase than in the acute phase, chronic-active phase or in the sham group animals. In conclusion, since there was a large population of nNOS-LI neurons in the rat Sp5C, nitric oxide seems to play an important role in nociceptive processing under normal conditions. Furthermore, changes in Ca2+-dependent NOS activity in chronic arthritis show that NOS may play a role in the Sp5C central nociceptive mechanism during long-term TMJ arthritis / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-06T15:15:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Seabra_AmedeaBarozzi_D.pdf: 4765202 bytes, checksum: 40113b24d319fff86b3e9a746e7b21ad (MD5) Previous issue date: 2006 / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientador : Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_PauloCesarde_M.pdf: 1410344 bytes, checksum: fb7ff53c8bbb8bfdd8fae4f0fbb78124 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A insuficiência renal aguda é uma complicação freqüente em pacientes sépticos associada com uma alta taxa de mortalidade. Uma característica importante é um decréscimo na taxa de filtração glomerular, presentes em situações onde o fluxo sangüíneo precisa ser mantido. Prevalecendo a hipótese na qual a patogênese da insuficiência renal sugere uma liberação não controlada e inapropriada de vários mediadores inflamatórios. Na septicemia dominante, com ou sem choque séptico o tratamento proposto pode ser extremamente dificultado pelo déficit clínico. Esta bem claro que os antibióticos são freqüentemente inadequados em hospedeiros imunocomprometidos embora sejam mantidos como terapia inicial. Adicionalmente, o controle nutricional, da pressão arterial, e uma adequada administração de fluídos e de eletrólitos são críticos na manutenção de pacientes com septicemia. Um dos modelos de septicemia freqüentemente utilizado é o da ligadura e perfuração cecal em ratos. Este modelo é semelhante a sepse humana em vários aspectos importantes, tal como uma fase precoce da septicemia hiperdinâmica e hipermetabólica, seguido de uma fase tardia da septicemia hipodinâmica. O abscesso intra-abdominal causador desta condição e a desvitalização de tecidos, sendo também fontes comuns de septicemia em pacientes. Estudos recentes também sugerem o envolvimento do óxido nítrico (NO), gerado pela óxido nítrico sintase induzível (iNOS), na patogênese da insuficiência renal endotoxina-induzida. Vários estudos demonstram que administração a curto prazo de Nw-Nitro-L-Arginine Methyl Ester (L-NAME), um inibidor da óxido nítrico sintase (NOS), resulta em um aumenta imediato da pressão arterial em ratos, coelhos e cães. O aumento imediato da pressão arterial reflete principalmente em um aumento do tônus do músculo liso vascular, com uma consequente queda da NO sintase. Uma atividade aumentada do nervo simpático renal tem sido descrita após a inibição aguda da NO sintase, sugerindo que os mecanismos neurogênicos podem contribuir na elevação da pressão arterial. A administração de um adequado volume de fluído é importante para a resposta hiperdinâmica e também para a manutenção do controle do estado hemodinâmico após a ligadura e perfuração cecal (CLP) nos ratos. No presente estudo, 3 mililitros por 100 gramas de peso corporal de uma solução de NaCl 0,15M foram administrados via subcutânea imediatamente após CLP, como recomendado previamente. O presente estudo foi desenvolvido para comparar o comportamento da pressão arterial e da manipulação tubular renal de sódio em três grupos (grupo experimental versus controle, n=10 cada) de ratos Wistar-Hannover, masculinos, adultos (pesando entre 250-300g) as 3, 6, 12 e 18 horas após ligadura e perfuração cecal (CLP): Ratos: 1) CLP e sham-operados veículo-tratado, 2) CLP e sham-operados L-NAME-tratados, e 3) CLP e sham-operados 0,15M NaCl-tratados. Três séries de experimentos foram desempenhados entre 3 e 18 horas, uma vez que a maioria dos animais morreram depois de 24 horas após a CLP. A pressão arterial e a avaliação da função renal foram realizados às 3, 6, 12 e 18h após CLP em ratos conscientes através do método cauda-manguito e os testes da função renal realizados em gaiolas metabólica individuais através dos clearances renal de creatinina e lítio no 7º dia seguinte ao início da administração de L-NAME (60mg/kg/dia) e as 3, 6, 12 e 18h, e após administração de 3ml/100g de peso corporal de NaCl 0,15M sendo que a pressão arterial foi progressivamente aumentada de 127±3,5mmHg para 149±13,0mmHg (P<0.05%) no grupo sham-operado e a pressão arterial significativamente decresce para 96±8,0 mmHg, 18h depois da CLP. Assim, o desenvolvimento da hipotensão arterial foi significativamente lento e atenuado nos ratos sépticos L-NAME-tratados. Por volta do 7º dia de tratamento o aumento da pressão arterial foi acompanhado por uma queda não significativa do clearance de creatinina de 310±32µl/min/100g para 305±23µl/min/100g e sem alterações da fração de excreção urinária de sódio. No grupo CLP, o tratamento com L-NAME não preveniu a queda da filtração glomerular (de 294±25µl/min/100g para 185±16µl/min/100g), bem como uma rejeição proximal de sódio (de 43,7±4,4% para 53,0±3,3%) 18h após indução da septicemia. Sendo acompanhado de um aumento adicional na fração de excreção renal de potássio (de 0,15±0,04% para 0,31±0,03%) em ratos sham-operados e em ratos com septicemia, respectivamente, e uma elevação no proximal seguido por uma consecutiva queda da excreção pós-proximal do sódio comparado com a excreção urinária de sódio sem alterações no grupo sham-operado. A reposição com fluído foi realizada com o objetivo de melhorar a circulação sangüínea e a função renal em ratos sépticos. A administração de um volume adequado de fluido é importante para manutenção da estabilidade hemodinâmica após a CLP em ratos. Entretanto, no presente estudo, 3ml por 100g de peso corporal de solução de NaCl 0,15M administrada subcutâneamente não melhoraram significativamente a taxa de sobrevida e da função tubular renal. Nossos resultados sugerem que o fluído de ressuscitação promovem um decréscimo lento e atenuado da pressão arterial e da taxa de filtração glomerular, com base na compreensão corrente da fisiopatologia do balanço de fluídos, deveria ser assegurado liberação adequada da oxigenação do sangue, otimizando a pressão de perfusão e do volume circulante independentemente de um aumento adicional na reabsorção tubular de sódio nos segmentos dos néfrons. Pode-se recomendar a manutenção em níveis elevados a pressão venosa durante a administração do fluído de ressuscitação, visto que um fluído de ressuscitação adequado poderia sustentar a função renal, e revelar ser um bom resultado / Abstract: Acute renal failure is a frequent complication in septic patients associated with a high mortality rate. An important characteristic is a decrease in glomerular filtration rate, which is even present in situations where renal blood flow has been maintained. Prevailing hypothesis on the pathogenesis of renal failure suggest an inappropriate and uncontrolled release of various inflammatory mediators. Overwhelming sepsis, with or without septic shock, can be an extremely difficult clinical trouble to treat. Antibiotics clearly are a mainstay of therapy but are often inadequate in the immunocompromised host. Additionally, an adequate nutritional, pressure, fluid and electrolyte management is critical in the care of patients with sepsis. One such septicemia model that is frequently used is cecal ligation and puncture in rats. This model resembles human sepsis in several important aspects, such as an early phase of hyperdynamic, hypermetabolic sepsis followed by a late phase of hypodynamic sepsis. An intra-abdominal abscess causes the condition and devitalized tissue, which are common source of sepsis in-patients as well. Recent studies also suggest involvement of nitric oxide (NO), generated by inducible NO synthase (iNOS), in the pathogenesis of endotoxin-induced renal failure. Several studies have shown that the short-term administration of Nw-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), an inhibitor of nitric oxide (NO) synthesis results in a prompt increase in the arterial pressure of rats, rabbits, and dogs. The immediate increase in arterial pressure reflects principally an increased vascular smooth muscle tone as a consequence of decreased NO synthesis. Increases in sympathetic nerve activity have been described after acute inhibition of NO synthesis, suggesting that neurogenic mechanisms may contribute to the rise in arterial pressure. Administration of an adequate volume of fluid is important for the hyperdynamic response and to keep the hemodynamic steady state after cecal ligation and puncture (CLP) in rats. In the present study, 5 milliliters per 100 grams of body weight of 0.15M NaCl solution were administered via subcutaneous, immediately after CLP, as recommended previously. The present study was performed to compare blood pressure behavior and renal sodium handling in three groups (experimental versus control group, n=10 each) of adult male Wistar-Hannover rats (weighting between 200-250 g) at 3, 6, 12 and 18 hour after cecal ligation and puncture (CLP): 1) CLP and sham-operated vehicle-treated, 2) CLP and sham-operated L-NAME-treated, and 3) CLP and sham-operated 0.15M NaCl-treated rats. Three series of experiment were performed between 3 to 18 hours once most of animals died after 24 hours post CLP. Arterial blood pressure and renal function study were measured 3, 6, 12 and 18-h after CLP in conscious rats by tail-cuff method and whole kidney creatinine and lithium clearances. The arterial pressure and renal function tests were performed in individual metabolic cages 7 days after the beginning of L-NAME administration (60mg/kg/day) and 3, 6, 12 and 18-h after 5ml 0.15M NaCl administration, and progressively increased arterial pressure from 127±3.5 mmHg to 149±13.0 mmHg (P<0.05%) in the sham-operated group and a significant blood pressure decrease to 96±8.0 mmHg 18-h after CLP. So, the development of hypertension was significantly delayed and attenuated in septic L-NAME-treated rats. By the 7th day of treatment the increased blood pressure was accompanied by a non-significant fall in creatinine clearance from 310±32ml/min/100 g to 305±23ml/min/100 g and no change in fractional urinary sodium excretion. In CLP group the treatment with L-NAME did not prevent the glomerular filtration fall (from 294±25ml/min/100 g to 185±16ml/min/100 g), as well as the proximal sodium rejection (43.7±4.4 % to 53.0±3.3 %) 18-h post sepsis induction. This was accompanied by a striking additional increase in fractional renal potassium excretion from 0.15±0.04% to 0.31±0,03% in sham-operated and septic rats respectively and an enhanced proximal followed by consecutive fall post-proximal sodium excretion compared to no-changed urinary sodium excretion the sham-operated group. Fluid replacement was performed with the view of obtaining the amelioration of circulation and renal function in septic rats. Administration of an adequate volume of fluid is important for the hemodynamic stability after CLP in rats. However, in the present study, 5 ml per 100 g of body weight of 0.15M NaCl solution administered subcutaneously did not improved significantly the survival rate and renal tubular function. Our results suggest that fluid resuscitation delayed and attenuated the blood pressure and glomerular filtration rate decrease, based upon current understanding of the pathophysiology of fluid imbalance, should be to ensure adequate oxygen delivery by optimizing blood oxygenation, perfusion pressure, and circulation volume independently of an additional increase in tubule sodium reabsorption in the whole segments of nephrons. Maintenance of higher values in venous pressure during fluid resuscitation might be recommended because adequate fluid resuscitation could sustain the renal function, and result in good outcome / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Heitor Moreno Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T15:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bignotto_LeticiaMaria_D.pdf: 4410079 bytes, checksum: 7ffbe4d64936a2ee389b94806f248179 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Objetivos: Estudos epidemiológicos mostrando que o aumento do consumo de tomate ou seus derivados reduz o risco de doenças crônicas como câncer de próstata e doenças cardiovasculares. Esses efeitos benéficos do tomate geralmente são atribuídos ao licopeno, um carotenóide acíclico e com propriedade antioxidante. Este trabalho se propõe analisar o possível efeito protetor do pré-tratamento com licopeno em condições experimentais de hipertensão arterial e propõe ainda avaliar os efeitos do tratamento agudo e crônico com esse carotenóide em modelos de inflamação aguda local e sistêmica. Desta forma, pretende-se contribuir na avaliação da eficácia do consumo regular de alimentos ricos em licopeno na terapêutica e profilaxia associadas aos modelos experimentais deste trabalho. 1º. Avaliar o efeito do pré-tratamento com licopeno nas alterações cardiovasculares funcionais induzidas pela inibição crônica da síntese de óxido nítrico em ratos Wistar; 2º. Avaliar o tratamento com licopeno em modelos de inflamação aguda local (representado pelo modelo de edema da pata) e sistêmica (isquemia e reperfusão hepática e lesão térmica). Métodos: Na primeira etapa desse estudo foi realizado tratamento com licopeno nas doses de 5, 10, 50 ou 100 mg de licopeno/kg/dia por gavagem associados ou não com L-NAME (45 mg/Kg/dia) por gavagem, por 28 dias. Os parâmetros analisados foram peso corporal, pressão arterial média (PAM), débito cardíaco (DC) e resistência vascular periférica total (RVPT). Na segunda etapa, no modelo de edema da pata, foram empregados dois tipos de tratamento com licopeno: tratamento agudo (1 - 50 mg de licopeno/Kg administradas por via intraperitonial, 15 minutos antes da injeção de carragenina para indução de edema de pata) e tratamento crônico (25 ou 50 mg de licopeno/kg/dia, por gavagem, por 14 dias antes da injeção de carragenina). Nos modelos de Isquemia e reperfusão (I/R) hepática e lesão térmica (LT), foi realizado o pré-tratamento dos animais com licopeno 25 mg/Kg/dia por 14 dias e, posteriormente, submetidos a I/R ou à LT. Para o protocolo de I/R foram analisados os testes plasmáticos de alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e da gama-glutamil transferase (?GT). Já para lesão térmica foram analisadas as concentrações plasmáticas de ALT, AST, creatinina, uréia e amilase. Resultados: Os resultados obtidos na primeira etapa desse estudo mostraram que o licopeno, nas diferentes doses associadas à administração de L-NAME causou aumento significativo da PAM, RVPT e redução no DC. Os resultados obtidos na segunda etapa desse estudo nos mostraram que o licopeno, tanto no tratamento agudo quanto no tratamento crônico, inibiu significativamente a formação de edema na pata. O tratamento crônico por 14 dias de licopeno também reduziu a lesão hepática provocada pelos dois modelos de inflamação aguda sistêmica, entretanto, não reduziu o grau de lesão em outros tecidos. Conclusão: O tratamento crônico com licopeno, nas doses usadas, não preveniu as alterações cardiovasculares encontradas no modelo de inibição crônica da síntese de óxido nítrico por L-NAME. Tanto o tratamento agudo quanto o crônico de licopeno exibiram efeito antiinflamatório local, o tratamento crônico limitou o grau de lesão hepática em dois modelos de inflamação sistêmica / Abstract: Objectives: There is epidemiological data supporting the association between an increased consumption of tomatoes or its products and a reduced risk for developing chronic diseases such as prostate cancer and cardiovascular disease. These beneficial effects are generally attributed to the antioxidant properties of lycopene, an acyclic carotenoid with 11 linearly arranged conjugated double bonds. Hence, we evaluated the influence of lycopene in the prevention of haemodynamics alterations found in a hypertension model induced by chronic treatment with L-NAME and we also evaluated the anti-inflammatory effect of lycopene in experimental acute inflammation model. Methods: To evaluate the influence of lycopene in the prevention of haemodynamics alterations found in an endothelial dysfunction model induced by chronic treatment with L-NAME, lycopene was administered by gavage and the dosages were 5, 10, 50 or 100 mg of the lycopene/Kg/day, during 28 day. The analyzed parameters were body weight, tail-cuff blood pressure (TCP), mean arterial pressure (MAP), cardiac output (CO) and total peripheral vascular resistance (TPVR). To evaluate the effects of lycopene in local inflammation, a carrageenan induced paw edema model, lycopene was administered as an acute treatment (1, 10, 25 or 50 mg of the lycopene/Kg, intraperitonial (i.p.), 15 minutes before the carrageenan injection) and as a chronic treatment (25 or 50 mg of the lycopene/kg/day, gavage, during 14 days before the carrageenan injection. The evaluation of the liver ischemia-reperfusion and burn injury model, lycopene was administered chronically (25mg/Kg) during 14 days. Injury was assessed by measurement of the. In this model, lycopene was administered daily at two doses (25mg/kg and 50mg/kg) in the 14 days that preceded the experiments. After I/R process, it was measured serum levels of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase and gamma-glutamyl transferase. After burn injury experiment, it was measured aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, creatinine, urea and amilase. Results: The results obtained in the part of in this study showed that the chronic administration of L-NAME and chronic treatment with lycopene plus L-NAME induced to the significant increase of MAP, TPVR and reduction in CO. The second part, results showed that lycopene significantly inhibited rat paw edema formation at two doses (25 and 50 mg/Kg) in both acute and repeated administration. Repeated administration of lycopene also reduced liver injury induced by ischemia-reperfusion and by burn injury. Conclusion: The chronic treatment with lycopene did not prevent the functional cardiovascular alterations found in the model of chronic inhibition of the synthesis of nitric oxide by L-NAME. However, lycopene exhibits local anti-inflammatory activity in the carrageenan-induced paw edema model and attenuates liver injury induced by ischemia reperfusion and burn injury / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:36:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monica_FabiolaZakiaTaufic_D.pdf: 2654981 bytes, checksum: c328869077bc46f3d7418b53ed54d2aa (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A bexiga urinária recebe inervação autonômica simpática e parassimpática, que atuam conjuntamente para a manutenção do ciclo normal da micção; ou seja, para a fase de enchimento e de esvaziamento. O mediador primário para a contração muscular do músculo liso detrusor é a acetilcolina (Ach), sendo suas ações mediadas, principalmente, pelos receptores muscarínicos dos subtipos M2 e M3, cuja densidade é maior no corpo em comparação à base da bexiga. O músculo detrusor também é inervado por fibras NANC nitrérgicas, mas a função do NO neste tecido ainda não está bem definida. Com o objetivo de investigar se a inibição crônica do NO acarreta alterações funcionais, morfológicas e moleculares do músculo liso detrusor isolado da bexiga urinária de rato utilizamos ratos adultos machos WISTAR (200-350 g), tratados cronicamente L-NAME, na dose de 20 mg/rato/dia durante 7, 15 e 30 dias. Avaliamos os seguintes parâmetros: 1) Atividade da sintase de óxido nítrico (NOS) em bexiga urinária; 2) a dosagem de nitrito/nitrato (NOx) plasmáticos; 3) a resposta contrátil aos agentes carbacol (agonista muscarínico), cloreto de potássio (KCl), cloreto de cálcio (CaCl2) e à estimulação elétrica (1-32 Hz, 80 V, 10 segundos) assim como a resposta relaxante a agonistas beta (?)-adrenérgicos; a dosagem de fosfatos de inositol; 5) a determinação dos parâmetros de KD e Bmax, 6) análise histológica quantitativa das camadas do músculo liso detrusor e trígono. Fragmentos do músculo detrusor foram adaptados em câmaras para órgãos isolados, contendo solução de Krebs-Henseleit e, após o período de equilíbrio, realizamos curvas concentração efeito cumulativas ao carbacol (0,001-10 µM), isoproterenol, metaproterenol e BRL- 37-344 (0,0001-100 µM), ao CaCl2 (0,01-100 mM) e KCl (20-200 mM). Nossos dados mostraram que a inibição crônica de NO aumentou a potência (pEC50) ao carbacol nos períodos de 15 e 30 dias de tratamento com L-NAME, sendo esse aumento cinco vezes maior aos trinta dias de tratamento (6.82±0.06) comparando-se com o respectivo grupo controle (6.09±0.02). Não observamos alterações da resposta máxima (Emax). Este aumento da sensibilidade ao agonista muscarínico pode ser explicado, em parte, pelo aumento do acúmulo de fosfato de inositol, que foi seis vezes maior nos ratos tratados com LNAME por 30 dias em comparação ao respectivo grupo controle. Entretanto, nos ensaios de saturação, o número de receptores (Bmax) não se mostrou alterado, porém, observamos que o tratamento com L-NAME aumentou em, aproximadamente, duas vezes o valor da constante de afinidade (KD) aos receptores muscarínicos em relação ao grupo controle. Observamos que a resposta relaxante ao agonista ?3 (BRL 37-344) mostrou-se diminuída nos ratos tratados com L-NAME, sem alterações na reposta ao isoproterenol e metaproterenol. A análise histológica quantitativa da bexiga urinária revelou que a camada muscular do trígono dos ratos tratados com L-NAME estava 28 % mais espessa em relação à do grupo controle, sem alterações na camada do detrusor. Não foram vistas alterações nas contrações mediadas pelo CaCl2 e nem ao KCl em ambos os grupos. A estimulação elétrica (1-32 Hz, 80 V, duração estímulo 10 s) produziu contrações dependentes da frequência em ambos os grupos, sendo que na freqüência de 32 Hz obtivemos a resposta máxima. Entretanto, nos ratos tratados com L-NAME não foram observadas alterações nas amplitudes das contrações em relação ao respectivo grupo controle. A adição do antagonista purinérgico, suramin (100 µM), reduziu as amplitudes das contrações; porém, a resposta do grupo L-NAME não se alterou em relação ao grupo controle. Nossos dados mostram que a inibição crônica de NO levou à redução da resposta relaxante mediada por agonista ?3-adrenérgico e aumento da sensibilidade aos agonistas muscarínicos. As alterações observadas na resposta muscarínica é devido ao aumento do segundo mensageiro. Além disso, aventamos a hipótese que a hipersensibilidade do detrusor a agonistas muscarínicos pelo bloqueio crônico de NO passa ser secundária à hipertrofia do músculo liso trígono (mas não do trígono) e à deficiência do NO em nível de uretra, levando assim a um detrusor hiperativo / Abstract: The urinary bladder is innervated by parassimpathetic and sympathetic fibers, which both contribute to the maintenance of the normal micturition cycle: the voiding and filling phase. Acethylcholine (ACh) is the main neurotransmitter responsible for the detrusor smooth muscle contraction, acting mainly at the muscarinic M2 and M3 subtypes. The detrusor smooth muscle is also innervated by the non adrenergic non cholinergic (NANC) nitrergic fibers, although the exactly mechanism of nitric oxide (NO) in this region is not well established. The aim of the present study was to investigated the functional, morphological and biochemical alterations in isolated detrusor smooth muscle after chronic NO inhibition. Male Wistar rats received N - nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) for 7 to 30 days. The following assays were carried out: 1) NO synthase activity; 2) plasma nitrite and nitrate (NOx) measurement; 3) functional assays to muscarinic, b-adrenoceptor agonists, potassium chloride (KCl) calcium chrolide (CaCl2) and electrical field stimulation; 4) Measurements of [3H]-inositol phosphate; 5) [3H]QNB binding assay to determine the dissociation constant (KD) and the maximum specific binding (Bmax) and 6) bladder morphology. Detrusor smooth muscle strips were mounted in organ baths, containing Krebs-Henseliet at 37oC and aerated with 95% O2 and 5% CO2. Each tissue was connected to an isometric transducer. After the stabilization period concentration responses curves to carbacol (0.001-10 µM), isoproterenol, metaproterenol and BRL 37-344 (0.0001-100 µM), KCl (20-200 mM) and CaCl2 (0.01-100 mM) were carried out. Our data showed that chronic NO inhibition has increased the potency values for carbachol after 15 and 30 days of treatment, being this increase 5-fold higher at 30 days (6.82 ± 0.06) when compared to the control group (6.09 ± 0.09). This alterations in the sensitivity for carbachol could be explained, in part, by the 6-fold increase in [3H]-inositol phosphate in bladder from LNAME in comparison with the control group. Although no alterations on the Bmax values were seen, a 2-fold increase in the KD values was observed. At 30 days, detrusor smooth muscle relaxing responses to b3-adrenoceptor agonist BRL 34-377 was significantly reduced by L-NAME, whereas the relaxing responses to isoproterenol and metaproterenol were not modified. The constitutive NO synthase activity was reduced by 86% in bladder at 7-days L-NAME treatment, which was maintained up to 30 days. No morphological alterations in detrusor smooth muscle were found; however in the trigone smooth muscle, L-NAME treatment caused an increase, approximately 28%, in the thickness of the muscular layer. The amplitude of contraction induced by CaCl2 and KCl was not different in L-NAME treated group when compared to the control one. The contraction induced by electrical field stimulation (1-32 Hz, 80 V, 10 sec) was not different between the treated and non treated group; the addition of suramin, a non selective purinergic antagonist, significantly reduced the amplitude of contraction on both groups; however, no difference on the amplitude response between these groups was observed. Long-term NO-deficiency increases rat DSM contractile responses mediated by muscarinic agonist that are accompanied by significant enhancement in KD values for muscarinic receptors and [3H]-inositol phosphate accumulation in bladder. This supersensitivity for muscarinic agonists along with reductions of b3-adrenoceptormediated relaxations indicates that overactive DSM results from chronic NO deficiency. It is plausible to suggest that chronic NO deficiency at the level of trigone (and/or urethra) triggers a persistent contraction leading in turn to a DSM overactive / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Jose Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:28:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marroni_AlineSaldanha_M.pdf: 1836719 bytes, checksum: 5a5cf29a17694aeb363b6061e74f525c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é um gás solúvel com importantes papéis fisiológicos. Alterações na biodisponibilidade de NO contribuem para o desenvolvimento de vários estados fisiopatológicos, tais como hipertensão arterial, aterosclerose, doença coronariana e hipertensão pulmonar. A importância do NO no controle cardiovascular levou a estudos visando avaliar se polimorfismos do gene da eNOS estão associados com doenças cardiovasculares. Três polimorfismos de interesse clínico do gene da eNOS têm sido estudados: T ?786C na região promotora, 4a/4b no íntron 4 e Glu298Asp no éxon 7. Diversos estudos têm apresentado resultados contraditórios sobre a associação desses polimorfismos com doenças cardiovasculares. Demonstrou-se que numa população dos EUA, estes variantes genéticos apresentam acentuada diferença étnica em sua distribuição. Não se sabe se na população brasileira ocorrem essas mesmas diferenças étnicas na distribuição de variantes da eNOS observadas na população americana. O objetivo desse trabalho foi avaliar a freqüência desses polimorfismos em voluntários diferentes etnicamente (136 negros e 154 brancos) na população brasileira. Também foi estimada a frequência haplotípica e a associação entre os variantes genéticos. A amplificação do DNA genômico foi feita por Reação de Polimerase em Cadeia (PCR) e os genótipos foram determinados por eletroforese em gel de poliacrilamida. O variante Asp298 foi mais comum em brancos (32.8%) que em negros (15.1%)(P<0.004). De modo similar, o variante C-786 foi mais comum em brancos (41.9%) que em negros (19.5%)(P<0.0004). Já o variante 4a foi mais comum em negros (32%) que em brancos (17.9%)(P<0.003). O haplótipo mais comum em ambos grupos étnicos era aquele que combinava os variantes comuns. O segundo haplótipo mais comum em negros incluía o variante 4a e os variantes não polimórficos para os outros dois polimorfismos. Nos indivíduos brancos, entretanto, o segundo haplótipo mais comum incluía os variantes Asp298 e C-786 e o variante comum para o polimorfismo do íntron. Essa acentuada diferença é similar àquela demonstrada na população americana. Esses achados sugerem haver uma consistente diferença interétnica na distribuição desses variantes genéticos da eNOS em negros e brancos da população brasileira. Essas diferenças podem estar associadas às disparidades étnicas observadas com relação às doenças cardiovasculares e resposta a drogas / Abstract: Nitric oxide (NO) is a soluble gas with fundamental physiologic role. Alterations in NO bioavalability contribute to the development of many diseases such as hypertension, atherosclerosis, coronary artery disease and pulmonary hipertension. The pivotal role of NO in the regulation of the cardiovascular system has motivated studies to assess whether polymorphisms in the eNOs gene are associated with cardiovascular diseases. Three specific polymorphisms in the eNOS gene have been widely studied : T-786C in the promoter region, 4a/4b in intron 4 and Glu298Asp in exon 7. Several studies have associated inconsistently these polymorphisms with cardiovascular diseases. In an American population these variants show interethnic differences in their distribution. However, we don?t know whether there are the same differences in the brazilian population. To test this possibility, we examined the distribution of genetic variants in 136 black and 154 white subjects from a Brazilian population. We also estimated the haplotype frequency, and evaluated associations between these variants. The Asp298 variant was more common in in whites (32.8 %) than in blacks (15.1%)(P<0.004). Similarly, the C-786 variant was more common in whites (41.9%) than in blacks (19.5%)(P<0.0004). However, the 4a variant was more common in blacks (32.0%) than in whites (17.9%)(P<0.003). The most common predicted haplotype in both ethnic groups combined only wild type variants. While the second most common haplotype in blacks includes the variant 4a and the wild-type variants for the remaining polymorphisms, the second most common haplotype in whites includes the variants Asp298 and C-786 and the wild-type variant for polymorphism in intron 4. The marked interethnic differences that we found in Brazilians are very similar to that previously reported in Americans. These findings strongly suggest a consistent difference in the distribution of eNOS genetic variants in blacks compared with whites in brazilian population. These findings may explain in part the ethnic disparities in cardiovascular risk and response to drugs / Mestrado / Mestre em Farmacologia