Em trabalhos anteriores nós apresentamos um sensor sólido de óxido nítrico (NO) preparado pelo método sol-gel utilizando como aprisionadores complexos de Fe 2+ -DETC. Neste trabalho, reportamos o efeito de alguns surfactantes (CTAB-catiônico, SDS-aniônico, Triton X100-neutro e o plurônico F127) sobre o sensor. A ressonância paramagnética eletrônica (RPE) foi usada para quantificar o número de moléculas de NO-Fe 2+ -DETC. A presença dos surfactantes aumenta a resistência mecânica dos sensores sólidos, sendo mais pronunciada nos sensores contendo CTAB e Triton. Sem os surfactantes não há sinal do complexo NO-Fe 2+ - DETC. O tempo de secagem foi otimizado para 30 min. O sinal mais intenso foi obtido com os sensores contendo os surfactantes a 12 mM. Os surfactantes de um modo geral aumentam a quantidade de NO aprisionado. A difusão do NO foi estimada através do tempo de aprisionamento do NO sendo maior na presença do F127 e SDS. A saturação do sinal de NO nos sensores acontece em 10 min. Uma maior mobilidade dos complexos NO-Fe 2+ -DETC foi encontrada nos sensores contendo SDS e F127 e foi estimada pela forma de linha. Para os sensores no estado sólido o limite de detecção foi de 2 µM utilizando o F127 como aditivo, para o SDS, CTAB e Triton o limite foi de 6 µM, 8 µM e 10 µM respectivamente. Na solução coloidal a menor quantidade detectada foi de 0,1µM também com o F127. A sensibilidade dos sensores aumenta em pelo menos 5 vezes nos sensores sólidos preparados com o F127 em detrimento aos demais e pode ser melhorada utilizando surfactantes mistos. / In previous work we present a solid sensor for nitric oxide (NO) prepared by sol-gel method using the trapped complex of Fe 2+ -DETC. In this work, we report the effect of some surfactants (CTAB, cationic, anionic, SDS, Triton-X100 and neutral pluronic F127) on the sensor. The electron paramagnetic resonance (EPR) was used to quantify the number of molecules of NO-Fe 2+ -DETC. The use of surfactant increases the mechanical strength of solid sensors, being more pronounced in sensors containing CTAB and Triton. Without the surfactant no EPR signal of the complex NO-Fe 2+ -DETC was observed. The drying time was optimized to 30 min. The strongest EPR signal was obtained with the sensors containing the surfactant to 12 mM. The surfactants in general increase the amount of NO trapped. The diffusion of NO was estimated by the time of trapping of the NO that it was higher in the presence of F127 and SDS. The signal saturation of the NO sensors occurs in 10 min. A higher mobility of the complex NO-Fe 2+ -DETC was found in sensors containing SDS and F127 and was estimated by lineshapes. For the solid state sensors the detection limit was 2 µM using the F127 as additive and for the SDS, CTAB and Triton the limit was 6 µM, 8 µM and 10 µM respectively. In the colloidal solution the least amount detected was 0.1 µM also with the F127. The sensitivity of the sensors increases at least 5 times in the solid sensors prepared with the F127 in detriment to the other and can be improved by using mixed surfactants.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2018-07-11T18:21:10Z No. of bitstreams: 2 Tese - Regiane Aparecida dos Santos Soares Barreto - 2012.pdf: 1979060 bytes, checksum: f226ca1585716026976eeb862007c9d6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-12T11:16:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Regiane Aparecida dos Santos Soares Barreto - 2012.pdf: 1979060 bytes, checksum: f226ca1585716026976eeb862007c9d6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T11:16:18Z (GMT). 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Among the salivary substances used as biological stress markers we can mention Cortisol and NO that exert influence in several physiological processes of the human organism. The research is characterized as a longitudinal descriptive observational study. Male teachers were selected, totaling 20 participants. The choice of the volunteers was characterized by a non-probabilistic convenience sample, after previous survey of the profile, filling in an identification form, following inclusion and exclusion criteria. The study contemplated the use of the following instruments: Stress Perception Scale and saliva collection. Participants responded to the Cohen and Williamson (1988) validated in Brazil by Reis, Hino and Ricardo-Añes (2010), which he called BPSS-10. The scale was always applied before each day of saliva collection, totalizing 3 scale submissions during the year. The collection of saliva was carried out in a period of one academic year, being made in three specific moments (March, July, December). At each moment three collections of each volunteer were performed on a given day: in the morning, in the fasting; In the lunch interval and at the end of the day, totaled 180 samples. The flasks were kept under refrigeration at -20oC for further saliva analysis. Salimetrics® kit was used to quantify the salivary salivary cortisol by means of an immunoenzymatic assay (EIA), using the kit: High Sensitivity Salivary Cortisol EIA kit (Salimetrics, State College, USA). ), Followed by the protocol determined by the manufacturer. The nitric oxide dosage was performed by indirect measurement of the nitrite formation analyzed by the Griess colorimetric method. The Molecular Probes® Kit (Invitrogen, USA) was used, which contains all reagents required for dosing, including nitrite standards. The data were analyzed by means of descriptive and inferential statistics, considering statistical significance when p <0.05, using the program GrapahPad Prism version 5.00 for Windows and the Microsoft Office Excel program, version 2010. Statistical analysis involved a test of Shapiro-Wilk normality, paired t-test, one-way ANOVA and Bonferroni's post hoc test. The research participants are male teachers with a few years of experience 8.53 ± 7.9 and a mean age of 32 ± 8.22 years. They work with a high workload (46.7 ± 12.6) in at least two schools and half work under a temporary contract. The volunteers surveyed presented a moderate stress level of 16.46 ± 5.36 at the beginning of the school year, 17.53 ± 6.56 at the end of the year, with a marked fall in the holiday period (10.76 ± 5, 64). These data confirm that factors such as the number of schools that work, hours worked, labor situation, among others, can influence the level of teacher stress. The levels of cortisol and salivary NO were presented in crude form and by means of Area Under the Curve (AUC). The mean concentration of salivary cortisol in each period of the day shows that subjects follow a circadian rhythm with high values in the morning, decreasing 5 hours later in all periods of the school year. Regarding the cortisol values obtained through the AUCg the data show that the teachers present a mean cortisol concentration of 1,145μg / dl ± 0,450 at the beginning and 1,031μg / dl ± 0.374 at the end of the school year, decreasing during the vacation period (0.916μg / dl ± 0.341). The data presented do not show a significant relationship (p = 0.7906) between the levels of perceived stress and salivary cortisol during the school year. The results suggest that the teachers, during the vacation period, might not perceive the physiological reactions of stress, so these reactions were not identified by the BPSS-10 used. The NO values presented in AUCg at the three collection moments during the school year did not reveal a significant difference, according to analysis of variance (p = 0.7910). The positive correlation (p = 0.0324) observed between nitric oxide and cortisol levels in the present study reveals that NO may be a biological marker used as a parameter for assessing stress levels. Future studies are needed to confirm the relationship analyzed between NO and salivary cortisol. Therefore, it is important to review methodological aspects, such as the small number of participants. / O presente estudo analisou as associações entre os níveis de cortisol e de óxido nítrico (NO) salivar como indicadores de resposta ao estresse e sua associação com o nível de estresse percebido de professores do sexo masculino da Rede Pública Estadual de Educação Básica. Há inúmeras possibilidades de estudar os níveis de estresse, uma dessas possibilidades é através da saliva. Estudos revelam que a saliva tem um imenso potencial em apontar indicadores de doenças e, portanto, possibilitar tratamento. Assim, situações de estresse podem ser identificadas com análise dos componentes salivares de pessoas submetidas a determinadas condições, seja de trabalho, atividade física ou até mesmo situações emocionais. Dentre as substâncias salivares utilizadas como marcadores biológicos de estresse podemos citar o Cortisol e o NO que exercem influência em vários processos fisiológicos do organismo humano. A pesquisa é caracterizada como estudo observacional descritivo longitudinal. Foram selecionados professores do sexo masculino totalizando 20 participantes. A escolha dos voluntários caracterizou-se por amostra de conveniência não probabilística realizada após levantamento prévio do perfil, com preenchimento de formulário de identificação, seguindo critérios de inclusão e exclusão. O estudo contemplou a utilização dos seguintes instrumentos: Escala de Percepção de Estresse e coleta de saliva. Os participantes responderam à Escala de Percepção de Estresse-10 (PSS-10) de Cohen e Williamson (1988), validado no Brasil por Reis, Hino e Ricardo-Añes (2010) ao qual denominou BPSS-10. A escala foi aplicada sempre antes de cada dia de coleta de saliva, totalizando 3 submissões de escala durante o ano. A coleta de saliva foi realizada no período de um ano letivo, sendo feita em três momentos específico (março, julho, dezembro). Em cada momento foram realizadas três coletas de cada voluntário em um determinado dia: pela manhã, em jejum; no intervalo do almoço e no final do dia, totalizamdo 180 amostras. Os frascos foram mantidos em refrigeração a -20oC, para posterior análise da saliva. Para a dosagem do cortisol salivar utilizou-se o kit da Salimetrics®, que permite a sua quantificação na saliva, por meio de ensaio imunoenzimático (EIA), por meio do kit: High Sensitivity Salivary Cortisol EIA kit (Salimetrics, State College, USA), seguindo-se o protocolo determinado pelo fabricante. A dosagem do óxido nítrico foi realizada por medida indireta da formação de nitrito analisada pelo método colorimétrico de Griess. Empregou-se o kit da Molecular Probes® (Invitrogen, USA), o qual contém todos os reagentes necessários para a dosagem, inclusive os padrões de nitrito. Os dados foram analisados por meio de estatística descritiva e inferencial, considerando significância estatística quando p<0.05, empregando-se o programa GrapahPad Prism versão 5,00 for Windows e o –programa Microsoft Office Excel, versão 2010. Na análise estatística envolveu teste de normalidade Shapiro-Wilk, teste t pareado, análise de variância (ANOVA) one way e teste “post hoc” de Bonferroni. Os participantes da pesquisa são professores do sexo masculino que possuem poucos anos de experiência 8,53±7,9 e uma média de idade de 32±8,22 anos. Atuam com uma elevada carga horária (46,7±12,6), em pelo menos duas escolas e a metade trabalha em regime de contrato temporário. Os voluntários pesquisados apresentam um nível moderado de estresse de 16,46±5,36 no início do ano letivo, 17,53±6,56 no final do ano, com uma queda acentuada no período de férias (10,76±5,64). Esses dados confirmam que fatores como o número de escolas que atuam, carga horária trabalhada, situação trabalhista, dentre outros, podem influenciar o nível de estresse percebido pelos docentes. Os níveis de cortisol e de NO salivar foram apresentados em forma bruta e por meio de Área Sob a Curva (AUC - Area Under Curve). A concentração média de cortisol salivar em cada período do dia mostra que os sujeitos seguem um ritmo circadiano com valores elevados no período matutino, decaindo 5 horas depois em todos os períodos do ano letivo. Em relação aos valores de cortisol obtidos por meio da AUCg os dados mostram que os professores apresentam uma concentração média de cortisol de 1,145μg/dl±0,450 no início e 1,031μg/dl ±0,374 no final do ano letivo, decaindo no período de férias (0,916μg/dl ±0,341). Os dados apresentados não mostram uma relação significativa (p=0,7906) entre os níveis de estresse percebido e cortisol salivar ao longo do ano letivo. Esse resultado sugere que os professores, durante o período de férias, podem não perceber as reações fisiológicas do estresse, pelo que essas reações não foram identificadas pelo BPSS-10 utilizado. Os valores de NO apresentados em AUCg nos três momentos de coleta durante o ano letivo, não mostrou diferença significativa, conforme análise de variância (p=0.7910). A correlação positiva (p = 0,0324) observada entre os níveis de óxido nítrico e cortisol no presente estudo revelam que o NO pode ser um marcador biológico utilizado como parâmetro para avaliar os níveis de estresse. Futuros estudos são necessários para confirmar a relação analisada entre o NO e o cortisol salivar. Para tanto, é importante rever aspectos metodológicos, como o pequeno número de participantes.

Introdução: Há crescentes evidências que sinalizam o papel do estresse crônico como desencadeante e mesmo perpetuador de crises asmáticas, bem como a importância do parênquima pulmonar na piora funcional da asma. Objetivos: Deste modo, consideramos relevante avaliar em cobaias com inflamação alérgica crônica pulmonar como o estresse físico repetido, induzido pela natação forçada, modula a responsividade do parênquima pulmonar, ainfiltração eosinofílica, ativação da via de estresse oxidativo e o remodelamento, bem como o papel da ativação de enzima óxido nítrico sintase induzida nestas respostas. Métodos: Os animais receberam inalações duas vezes por semana durante quatro semanas com doses crescentes de ovoalbumina ou solução fisiológica Após 24 horas da quarta inalação os animais foram separadas em dois grupos onde metade destes animais foi submetido ao protocolo de natação forçada por dez dias com intervalo de dois dias, para a indução do estresse, enquanto a outra metade dos animais permaneceu sem a indução de estresse. Para avaliar a participação da ativação de iNOS nesta resposta as cobaias foram novamente divididas em grupos, onde parte foi tratada com 1400-W (inibidor específico de iNOS, 2mg/kg ip/dia/4 dias) ou veículo no mesmo período, iniciando 30 minutos antes da sétima inalação. Para avaliação das repercussões comportamentais da indução de estresse os animais foram submetidos ao teste de campo aberto, sendo obtidos os seguintes parâmetros: distância percorrida, velocidade média total, tempo de movimentação total. Foi também coletada uma amostra de sangue no dia da realização da mecânica pulmonar para a dosagem do cortisol. Após 72h da sétima inalação, os animais foram anestesiados, exsanguinados e fatias de tecido pulmonar periférico foram retiradas e suspensas em banho orgânico de Krebs, e a resistência (Rt) e elastância (Et) do tecido pulmonar periférico foram avaliadas em condição basal e após desafio com ovoalbumina (1%). Foi também obtida a medida de histerisividade. Após a realização da mecânica oscilatória, as mesmas fatias de tecido pulmonar periférico foram submetidas à avaliação histopatológica. Resultados: Nos animais submetidos a natação forçada foi observado um aumento no peso da adrenal, no cortisol sérico, na distância percorrida e no tempo de movimentação em campo aberto o que demonstrou que a natação forçada foi eficaz como indutor de estresse. Os animais expostos às inalações com ovalbumina apresentaram valores maiores de porcentagem de aumento da resistência e da elastância tecidual após desafio com ovoalbumina (p<0.05). Os animais expostos às inalações com ovalbumina e submetidos a estresse induzido por natação forçada apresentaram um aumento da resistência e elastância teciduais (p<0,05), enquanto que o tratamento com 1400W reverteu esse aumento tanto nos animais sensibilizados quantos nos sensibilizados submetidos a estresse. Houve aumento do número de eosinófilos (P<0.05), de células iNOS positivas (P<0,05), da deposição de fibras colágenas (P<0,05), no conteúdo de actina (P<0,05) e de 8-epi-PGF2a (P<0,05) no septo alveolar. Nos animais sensibilizados e submetidos ao estresse houve aumento todos os parâmetros morfológicos descritos anteriormente (P<0,05) exceto pelo depósito de fibras colágenas. A administração de 1400W reduziu todos estes parâmetros funcionais e morfológicos (P<0,05) com exceção do conteúdo de actina no septo alveolar, da infiltração eosinofílica e dos níveis de cortisol sérico. Conclusões: Neste modelo experimental, o bloqueio específico da iNOS atenuou a constrição, a inflamação eosinofílica, a expressão de iNOS, o remodelamento no parênquima pulmonar tanto nos animais apenas sensibilizados quanto nos animais sensibilizados e submetidos ao estresse. Estas alterações podem estar relacionadas aos efeitos da ativação da óxido nítrico sintase induzida na modulação da via do estresse oxidativo, sinalizada pelos efeitos na produção de isoprostano 8. O presente estudo sugere que a inibição específica da iNOS pode amplificar as estratégias terapêuticas utilizadas na abordagem de doenças inflamatórias crônicas pulmonares / Introduction: There is growing evidence to indicate the role of chronic stress even perpetuating as triggering asthma attacks and the importance of functional lung parenchyma in worsening of asthmatic responses. Objective: We considered relevant to evaluate in guinea pigs with chronic allergic pulmonary inflammation if repeated physical stress, induced by forced swimming, modulates the responsiveness of the distal lung parenchyma, eosinophilic infiltration, oxidative stress pathway activation and extracellular matrix remodeling as well as the role of the activation of induced nitric oxide synthase in these responses. Methods: The animals received inhalations twice a week for four weeks with increasing doses of ovalbumin or normal saline. After 24 hours of the fourth inhalation, the animals were separated into two groups where half of these animals were subjected to the protocol of forced swimming for ten days with an interval two days, while the other half of the animals remained without stress induction. In order to evaluate the involvement of iNOS activation in this response, guinea pigs were again divided in two groups, one part of them were treated with 1400W (specific inhibitor of iNOS, 2mg/kg ip/day/4 days) or vehicle in the same period, starting 30 minutes before the seventh inhalation. To evaluate the behavioral impact of stress induction, the animals were subjected to open field test, and we obtained the following parameters: distance traveled, average speed, total time of handling. It was also collected a blood sample on the day of pulmonary mechanics to measure cortisol. After 72h of the seventh inhalation, animals were anesthetized, and exsanguinated and slices of peripheral lung tissue were removed, suspended in a Krebs bath, and resistance (Rt) and elastance (Et) of peripheral lung tissue were evaluated either at baseline condition and after oavalbumin challenge (1%). It was also measured the histerisivity. After the end of the mechanical oscillatory evaluation, the same slices of peripheral lung tissue were submited to histopathological analysis. Results: We observed that animals submitted to forced swimming had an increase in adrenal weight, in the serum cortisol, in the distance and time of movement in the open field, showing that forced swimming was effective as stressor. The animals exposed to inhalations with ovalbumin and submited to stress induced by forced swimming had an increase in pulmonary tissue resistance and elastance (p <0.05), had an increased in the number of eosinophils (P <0.05), iNOS positive cells (P <0.05), actin (P <0.05) and 8-epi-PGF2a content (P <0.05) in alveolar septum compared to ovalbumin exposed animals (OVA group). Treatment with 1400W reversed this response in sensitized animals submitted or not to stress induction (P <0.05) There was no difference in the collagen deposition. Administration of 1400W for sensitized and stressed animals reduced all these functional and morphological parameters (P <0.05) except for the actin content of the alveolar septum, eosinophilic infiltration and cortisol levels. Conclusions: In this experimental model, the specific iNOS inhibition attenuated the constriction, the eosinophilic inflammation, the iNOS expression, the lung parenchyma remodeling in animals sensitized and submitted or not to stress induction. These changes may be related to the effects of inducible nitric oxide activation in the modulation of oxidative stress pathway. This study suggests that specific inhibition may amplify the therapeutic strategies to chronic inflammatory lung diseases

A fisiopatologia do choque séptico caracteriza-se por uma produção excessiva de mediadores inflamatórios, dentre eles o óxido nítrico (NO), conduzindo a uma hipotensão prolongada associada a um aumento inicial de vasopressina (AVP) e uma diminuição na fase tardia. A ketamina é um anestésico com propriedades cardioestimulatórias e anti-inflamatórias. O presente trabalho testou a hipótese de que a ketamina, através de suas propriedades anti-inflamatórias no choque séptico, teria uma ação inibitória sobre a síntese do óxido nítrico, favorecendo a liberação de AVP e preservando a função cardiovascular. O choque endotoxêmico foi induzido através de uma injeção i.v. de 1,5 mg/kg de lipopolissacarídeo (LPS) em ratos Wistar adultos machos. Após a injeção de LPS, um grupo de animais foi tratado com ketamina (10 mg/kg) e o grupo controle recebeu salina. A administração de LPS produziu uma queda significativa da pressão arterial média (PAM) (p<0,01) associada a um aumento da freqüência cardíaca (FC) (p<0,01). Essas alterações foram acompanhadas por uma elevação significativa nas concentrações plasmáticas de AVP após duas horas (p<0,01), seguida de queda nas próximas horas, e por uma elevação nas concentrações de NO plasmático (p<0,01). Quando o LPS foi combinado à administração i.v. de ketamina, observou-se uma atenuação da hipotensão (p<0,01) e uma potencialização na liberação de AVP (p<0,01) pelo LPS. No entanto, a produção de NO após a adminstração da ketamina não mostrou diferença em relação ao LPS, indicando não ser esta a via utilizada pela ketamina. Para verificar o papel da ativação simpática na preservação da função cardiovascular pela ketamina no choque endotoxêmico, utilizou-se um inibidor simpático central, a moxonidina (MOXO). O pré-tratamento i.v. com MOXO (50 µg /Kg) atenuou significativamente o aumento da FC produzido pela ketamina (p < 0,05) apenas na segunda e quarta horas, porém com ação não significativa sobre a PAM. Estes dados sugerem um efeito cardioestimulatório da ketamina no choque séptico principalmente por uma potencialização na liberação da AVP e esta parece não se dar pela via do NO / The pathophysiology of septic shock is characterized by excessive production of inflammatory mediators, including nitric oxide (NO), leading to a prolonged hypotension associated with an initial increase of vasopressin (AVP) and a late phase decrease. Ketamine is an anesthetic with cardiostimulatory and anti- inflammatory properties. The present study tested the hypothesis that ketamine, through its anti-inflammatory properties in septic shock, have an inhibitory effect on the synthesis of nitric oxide, promoting the release of AVP and preserving cardiovascular function. Endotoxemic shock was induced by an iv injection of 1.5 mg / kg lipopolysaccharide (LPS) in adult male Wistar rats. After LPS injection, a group of animals was treated with ketamine (10 mg / kg) and the control group received saline. The LPS administration produced a significant decrease in mean arterial pressure (MAP) (p <0.01) associated with an increase in heart rate (HR) (p <0,01). These changes were accompanied by significant increases in plasma AVP after two hours (p <0.01), followed by fall in the coming hours, and plasma NO increasing (p <0.01). When LPS was combined with iv ketamine administration, there was an attenuation of hypotension (p <0.01) and an enhancement in the release of AVP (p <0.01) by LPS. However, the production of NO after ketamine adminstration showed no difference compared to LPS, indicating this is not the route used by ketamine. To verify the role of sympathetic activation in ketamine\'s preservation of cardiovascular function in endotoxemic shock, used a central sympathetic inhibitor, moxonidine (moxo). Pretreatment with moxo iv (50 µg / kg) significantly attenuated the increase in HR produced by ketamine (p <0.05) only in the second and fourth hour, but with no significant action on the MAP. These data suggest that the cardiostimulatory effect of ketamine in septic shock primarily occurs by potentiation of AVP release, and this does not seem to give the NO pathway

Guzmania monostachia é uma bromélia tanque epífita C3-CAM facultativa, constituindo-se em um modelo muito interessante para estudar a sinalização que ocorre na transição da fotossíntese C3 para CAM. Baseado em resultados obtidos pelo Laboratório de Fisiologia Vegetal do IBUSP, constatou-se que a mudança em questão se dá de forma diferente ao longo do comprimento das folhas dessa espécie, sendo muito mais pronunciada na região apical do que na basal. Outra pesquisa, desenvolvida anteriormente no mesmo laboratório, sugere fortemente que na indução ao CAM, em plantas jovens de abacaxizeiro C3, o óxido nítrico (NO) e o ácido abscísico (ABA) atuam como mediadores dessa resposta. Levando em conta esses fatos, o presente trabalho visou caracterizar a participação do NO e do ABA como sinalizadores do CAM em uma bromélia que é reconhecidamente C3-CAM facultativa na natureza. Além disso, suas folhas apresentam diferentes níveis de expressão do CAM ao longo do comprimento, podendo, assim, constituir-se em um ótimo modelo para estudos de sinalização. Também se buscou, nesta pesquisa,saber se seria possível reduzir o modelo de estudo para folhas destacadas, não necessitando empregar a planta inteira nos experimentais. Após a comparação da fotossíntese entre folhas pertencentes a plantas inteiras e folhas destacadas, concluiu-se que é viável trabalhar com as folhas isoladas.Essas foram induzidas ao CAM por déficit hídrico, proporcionado por uma solução de polietilenoglicol (PEG) na concentração de 30%. O acúmulo noturno de acidez e a atividade das enzimas fosfoenolpiruvato carboxilase (PEPC) e malato desidrogenase (MDH) em três porções foliares (porção basal, mediana e apical) foram usadas para caracterizar o grau de expressão do CAM. O conteúdo d\'água (expresso em porcentagem)foi usado como um indicativo da perda d\'água pelo tecido foliar.A participação do NO no processo de indução ao CAM foi avaliado por meio de dosagens por quimioluminescência, espectrofluorimetria e localização in situ por microscopia de fluorescência. Também foi usado um doador desse radical livre, o nitroprissiato de sódio (SNP). O ABA foi quantificado pela técnica de cromatografia a gás acoplada a espectrômetro de massas (GC-MS). As folhas mudaram seu metabolismo fotossintético de C3 para CAM no sexto dia de incubação com PEG (segundo o acúmulo noturno de ácidos e a atividade da enzima PEPC), mas a primeira queda detectável no teor d\'água ocorreu logo nas 12 primeiras horas, aumentando até 24ª hora. Nos dias seguintes (até o 7º), o menor teor de água foi encontrado na região basal da folha, enquanto que o CAM se expressou com maior intensidade na porção apical, sugerindo a existência de uma sinalização da redução hídrica entre a parte basal e a apical da folha. De fato, foram detectados maiores quantidades de ABA, em resposta ao déficit hídrico imposto pelo PEG, ao longo de todo o comprimento foliar, com maior quantidade na região apical. Teores significativamente maiores de NO foram detectados por espectrofluorimetria nos últimos três dias de experimento, apenas na região apical. A citolocalização do NO corroborou a quantificação por espectrofluorimetria, mostrando um aumento a partir do sexto dia nos ápices foliares. Conclui-se, portanto, que tanto o NO quanto o ABA parecem participar da sinalização do CAM. Possivelmente, o ABA desempenha um papel decisivo quanto à sinalização da diminuição do teor d\'água, devido ao seu aumento em todo o comprimento da folha,enquanto que o NO parece atuar como um mensageiro secundário, importante à indução do CAM na porção apical foliar. / Guzmania monostachia is a C3-CAM facultative epiphyte tank bromeliad and a very promising model to study the C3 to CAM transition. Results obtained on the Laboratory of Plant Physiology on IBUSP showed that this transition occurs differently along the leaf blade o this species, as it is much stronger on the apical portion of the leaf, when compared to the basal one. Another research, from the same group, strongly suggests that on the induction of CAM in young pineapple plants is mediated by abscisic acid (ABA) and nitric oxide (NO). Based on both of these results, this work intends to characterize the role of NO and ABA in CAM signaling, using as a model of study a species which is generally accepted to be a facultative CAM on natural conditions. Besides that, G. Monostachia shows different degrees of CAM along the leaf blade, which makes an interesting model of it for signaling studies. It was also attempted to use detached leaves as a valid model of study for this species. Since no remarkable differences were detected between an experiment performed with whole plants or detached leaves alone, it was chosen to carry over the work using only detached leaves. The induction of CAM was performed by drought, using a 30% polyethyleneglycol (PEG) solution. The nocturnal acid accumulation and the activity of phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) and malate dehydrogenase (MDH) enzymes were measured in three portions of the leaf (basal, middle and apical). The water amount was indicative of the water loss on foliar tissues. NO participation was assessed through chemioluminescence, spectrofluorimetry and in situ localization by fluorescence microscopy. A NO donor was also used. ABA was quantified by gas chromatography associated with mass spectrometry (GC-MS). The leaves changed the photosynthetic metabolism from C3 to CAM on the sixth day after the beginning of PEG exposure (as stated by the nocturnal acid accumulation and PEPC activity), but the decrease in water amount values started soon, after 12 hours of exposure, and stabilizing after 24 hours. The major loss of water percentage was detected on the basal portion, persisting until the seventh day, while on the apical portion, after two days the control and PEG-treated leaves remained similar. Since the C3-CAM change occurred in the apical portion, it is possible to suggest a signal transport from the base to the apex of the leaf in response to water loss. Indeed, the ABA levels remained higher with the water loss along the whole leaf, but with greater intensity on the apical portion. Higher NO levels were also detected on PEG-treated leaves, but only on the apical portion. The in situ localization of NO corroborates the spectrofluorimetry, showing an increase on the sixth day after PEG exposure on the leaf apex. In conclusion, both NO and ABA seem to participate on the signaling of CAM. Possibly, ABA plays a decisive role on indicating drought, because it increases on the whole leaf subjected to PEG, while NO is, maybe, a secondary signal, specific to processes that occur only on the apical portion, such as the CAM induction.

A óxido nítrico sintase induzível (iNOS) é uma enzima responsável pela síntese do óxido nítrico, envolvido na regulação de vários processos fisiológicos, com destaque para relevantes efeitos sobre o tecido ósseo. Entretanto, o papel da iNOS no reparo ósseo alveolar permanece pouco conhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar o papel da iNOS no processo de reparo ósseo alveolar pósexodontia em condições homeostáticas (controle) e infecciosas em camundongos. Para isso, foram utilizados animais das linhagens WT (C57Bl/6) e iNOSKO, divididos em 2 grupos, condição homeostática (exodontia do incisivo superior direito) e alveolite experimental (induzida pela inoculação de uma suspensão de cultura bacteriana), e analisados de acordo com os diferentes períodos experimentais (0, 7, 14 e 21 dias pós-exodontia), através da análise histomorfométrica e molecular. Na análise histomorfométrica, avaliou-se a densidade de volume das estruturas referentes ao coágulo sanguíneo, tecido conjuntivo e tecido ósseo. Na análise molecular, quantificou-se a expressão de mRNA codificando genes de marcadores do metabolismo ósseo; marcadores de osteoclastos; citocinas e quimiocinas, através de reações de RealTimePCR. A expressão de iNOS esteve presente durante todo o processo de reparo ósseo alveolar nos camundongos C57Bl/6, porém de maneira mais expressiva no período de 7 dias pós-exodontia, e se mostrou aumentada pela indução de alveolite. A análise histomorfométrica demonstrou discretas alterações no processo de reparo ósseo alveolar, na ausência de iNOS, tanto em condições homeostáticas quanto infecciosas. Em condições homeostáticas, a ausência de iNOS não impactou de forma significativa o processo de reparo ósseo alveolar pósexodontia, mas se mostrou associada à modulação de vasos sanguíneos. Já em condições infecciosas, a ausência de iNOS se mostrou associada à modulação de células inflamatórias, osteoblastos e osteoclastos. De forma geral, conclui-se que embora a enzima iNOS module certos aspectos do processo de reparo ósseo alveolar de forma pontual, sua ausência não interferiu de forma significativa nesse processo. / The inducible nitric oxide synthase (iNOS) is an enzyme responsible for the synthesis of nitric oxide, a reactive molecule involved in the regulation of several physiological processes, highlighting relevant effects on bone tissue. However, the role of iNOS in alveolar bone repair remains unknown. The aim of this study was to characterize the role of iNOS in alveolar bone healing process after dental extraction in homeostatic and infectious conditions in mice. With this aim, WT (C57Bl/6) and iNOSKO mice strains were divided into 2 groups, homeostatic condition (extraction of the upper right incisor) and experimental alveolitis (induced by inoculation of a suspension of bacterial culture), and analyzed according to the different experimental periods (0, 7, 14 and 21 days post-extraction), through molecular and histomorphometric analysis. In histomorphometric analysis, the volume density of structures related to blood clot, tissue and bone were evaluated. The molecular analysis quantified the expression of mRNA encoding genes of defined as bone metabolism markers; osteoclast markers, as well cytokines and chemokines through RealTimePCR reactions. The expression of iNOS was detected during the all process of the alveolar bone repair in C57Bl/6 mice, with an expression peak at 7 days post-extraction time point, and was significantly enhanced by alveolitis induction. Histomorphometric analysis showed small changes in alveolar bone repair process in the absence of iNOS, in both homeostatic as infectious conditions. Under homeostatic conditions, the absence of iNOS did not impact significantly the process of alveolar bone healing after dental extraction, but it was associated with modulation of blood vessels formation. In the infectious conditions scenario, the absence of iNOS was associated with modulation of inflammatory cells, osteoblasts and osteoclasts counts. In general, it is concluded that even the enzyme iNOS module some aspects of alveolar bone repair in a particular and punctual manner, their absence does not interfere significantly in the overall outcome of alveolar bone repair process.

A destruição crônica do aparelho de inserção periodontal devido a uma intensa resposta inflamatória a bactérias conduz a uma condição clínica conhecida como doença periodontal. A inflamação periodontal geralmente provoca úlceras superficiais no sulco gengival, onde os capilares sanguíneos estão expostos a bactérias. Patógenos periodontais, assim como seus produtos podem ser translocados e liberados do sulco gengival para a corrente sanguínea e, portanto, ter efeitos periféricos. A bolsa periodontal é também importante reservatório de mediadores inflamatórios que podem atingir a corrente sanguínea. Diversos estudos avaliam a relação entre a doença periodontal e as doenças cardiovasculares. Sabe-se que muitas doenças cardiovasculares têm início em desordens vasculares, principalmente na camada endotelial dos vasos sanguíneos de grande condutância. Assim, o foco deste estudo foi investigar a reatividade vascular de aortas de animais com periodontite. Tanto a contração para a norepinefrina quanto o relaxamento para a acetilcolina estão diminuídos em animais com periodontite, mas os mecanismos para estes efeitos são diferentes. A diminuição da resposta contrátil à norepinefrina parece estar associada a um aumento da produção de óxido nítrico através da isoforma induzível da óxido nítrico sintase e a diminuição da resposta relaxante à acetilcolina parece estar associada a produção de prostanóides principalmente derivados da isoforma do tipo II da enzima ciclooxigenase. / The chronic destruction of the periodontal attachment apparatus due to an intense inflammatory response to bacteria leads to a condition known as periodontal disease. The periodontal inflammation usually causes superficial ulcers in the gingival sulcus, where blood capillaries are exposed to bacteria. Periodontal pathogens, as well as their products can be translocated and released into the gingival sulcus, subsequently into the bloodstream and thus have peripheral effects. The periodontal pocket is also an important reservoir of inflammatory mediators that can reach the bloodstream. Several studies have evaluated the relationship between periodontal disease and cardiovascular disease. It is known that many cardiac diseases begin as vascular disorders, especially in the endothelial layer of blood vessels of large conductance. Thus, the focus of this study was to investigate the vascular reactivity of aortas from animals with periodontitis. Both norepinephrine-mediated contraction and acetylcholine-mediated relaxation are decreased in animals with periodontitis, but the mechanisms are different for these responsess. The contraction appears to be associated with increased production of nitric oxide by inducible isoform of nitric oxide synthase and relaxation with prostanoids primarily derived type II isoform of the enzyme cyclooxygenase.

O objetivo deste trabalho foi investigar alterações comportamentais produzidas por etanol (ET) e estresse crônico imprevisível (ECI) em camundongos adolescentes (ADL) e adultos (AD), estudando a participação da enzima nNOS. Em camundongos AD também estudamos a atividade da nNOS via receptor NMDA na sensibilização cruzada entre estresse por imobilização (EI) e ET, utilizando dizocilpina (DZP) como pré-tratamento. Os resultados demonstraram haver sensibilização cruzada entre ECI e ET, tanto nos ADL quanto nos AD. Houve aumento da atividade da nNOS em hipocampo (HP) e córtex frontal (CF) de AD submetidos ao ECI. ET atenuou este efeito. A sensibilização cruzada em ADL aumentou atividade da nNOS em CF. O pré-tratamento com 7-nitroindazol inibiu sensibilização cruzada entre ECI e ET em ADL e AD, sinalizando a participação da nNOS. DZP potencializou sensibilização cruzada entre EI e ET e diminuiu a atividade da nNOS em HP e CF de animais submetidos ao EI. ECI e EI induzem sensibilização comportamental ao ET e nNOS participa na sensibilização cruzada entre ECI/EI e ET. / The objective of this work was to investigate behavioral alterations produced by ethanol (ET) and chronic unpredictable stress (CUS) in adolescent (ADL) and adult (AD) mice, studying the nNOS enzyme activity. In AD mice was also studied the nNOS activity through the NMDA receptor in the cross-sensitization between immobilization stress (IS) and ET, by using dizocilpine (DZP) as a pretreatment. The results demonstrate cross-sensitization between CUS and ET in the ADL and AD mice. There was an increase in the nNOS activity in hippocampus (HP) and frontal cortex (FC) of AD submitted to CUS. This effect was attenuated by ET. The cross-sensitization in ADL increased the nNOS activity in FC. The 7-nitroindazole pretreatment inhibit cross-sensitization between CUS and ET in ADL and AD, signaling the nNOS participation. DZP potentiates cross-sensitization between IS and ET and decreased the nNOS activity in HP and FC of animals submitted to IS. CUS and IS induce behavioral sensitization to the ET and nNOS participate in the cross-sensitization between CUS/IS and ET.

A disfunção erétil (DE) tem sido associada com doenças cardiovasculares (CVD), as quais se caracterizam por níveis elevados de citocinas pró-inflamatórias, tais como o fator de necrose tumoral a (TNF-a). Este estudo testa a hipótese de que o TNF-a altera a reatividade do corpo cavernoso (CC), favorecendo a disfunção erétil. O CC de animais infundidos com TNF-a apresentou: 1) diminuição do relaxamento mediado por nervos não-adrenérgicos não-colinérgicos (NANC); 2) aumento das contrações mediadas por nervos simpáticos; 3) diminuição da expressão gênica da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS) e neuronal (nNOS). O CC de animais nocaute do TNF-a apresentou aumento no relaxamento dependente do endotélio, no relaxamento mediado por nervos NANC e na expressão da eNOS e nNOS. As contrações mediadas por nervos simpáticos estão diminuídas no CC destes animais. Em conjunto, o presente trabalho demonstra que o TNF-a exerce um papel em detrimento da função erétil. A redução desta citocina pode fornecer uma estratégia alternativa no tratamento da DE. / Erectile dysfunction (ED) has been linked to cardiovascular diseases (CVD), which are associated with endothelial dysfunction and increased levels of pro-inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor-alpha (TNF-a). We hypothesized that TNF-a impairs corpus cavernosum (CC) reactivity, which favors ED. The CC of TNF-a-infused animals displayed: 1) decreased non-adrenergic non-cholinergic (NANC)-mediated relaxation; 2) increased sympathetic nerve-mediated contraction; 3) decreased endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) gene expression. The CC of TNF-a knockout animals displayed increased endothelium-dependent and NANC-mediated relaxation as well as increased eNOS and nNOS expression. Contractile responses mediated by sympathetic nerves were decreased in the CC of TNF-a knockout animals. In summary, the present study shows that TNF-a plays a detrimental role in erectile function. Strategies that aim to reduce the levels of this cytokine may represent an alternative approach for ED treatment.

A obesidade pode mudar as características das células endoteliais e musculares lisas (CMLVs). Reatividade e genes inflamatórios e de marcadores de fenótipo de CMLVs foram avaliados em artérias mesentéricas de resistência (AMRs) e de aorta de camundongos alimentados com dieta hiperlipídica (OB). RNAm para citocinas pró-inflamatórias e IL-10 foi aumentado em AMRs e aorta de OB. O relaxamento não foi alterado, mas a contração foi reduzida em AMRs e aorta de OB. AMRs apresentaram redução global da contração e a aorta apresentou redução específica para agonista adrenérgico. Maior modulação negativa por NO e prostanoides vasodilatadores foi observada em aorta, mas não em AMRs. RNAm para marcador do fenótipo sintético foi aumentado em AMRs de OB. Esses resultados mostram que as células endoteliais e as CMLVs de AMRs e aorta respondem diferentemente à obesidade. Inflamação e mecanismo de contrarregulação são induzidos em AMRs e aorta, que impediria a disfunção endotelial, mas não a mudança fenotípica das CMLVs em AMRs, que então, comprometeria sua capacidade contrátil. / Obesity may change the vascular endothelial cells and smooth muscle cells (VSMC) characteristics. Vascular reactivity and inflammatory and phenotypic markers for VSMC gene expression in resistance mesenteric arteries (RMA) and aorta from mice fed with high fat diet (OB). Pro-inflammatory cytokines mRNA and IL-10 were elevated in OB\'s RMA and aorta. The relaxation wasnt altered, however a reduction in contractility was observed in OB\'s RMA and aorta. A global reduction in contractility was observed in RMA and aorta demonstrated a specific reduction to adrenergic agonist. Higher negative modulation by NO and vasodilator prostanoids were seen only in aorta. Phenotypic markers mRNA were elevated in OB\'s RMA. The results shows that endothelial cells and VSMC from RMA and aorta respond differently to obesity. Inflammation and counter regulatory mechanisms are induced in RMA and aorta of which would prevent endothelial dysfunction but not VSMC phenotypic changing from RMA, compromising the contractile ability.