Orientadores: Fernando Ferreira Costa, Nicola Conran Zorzetto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T06:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Canalli_AndreiaAverci_D.pdf: 1313778 bytes, checksum: 1832f98c252279d3722a62951dcfc9c0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A hemoglobina S (HbS) é decorrente de uma mutação de ponto que ocasiona a troca do ácido glutâmico pela valina na cadeia polipeptídica da globina beta. A polimerização da HbS desoxigenada (pouco solúvel), torna as hemácias menos flexíveis e favorece a impactação das mesmas na microcirculação com subseqüente obstrução da luz do endotélio e vaso-oclusão, seguida de lesões a orgãos alvos, responsáveis pela morbi-mortalidade associada a essa doença. Numerosas evidências sugerem que outros fatores participem da fisiopatologia da vaso-oclusão e do processo inflamatório crônico característico da anema falciforme (AF). A redução da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) pode ser um fator que favoreça a vaso-oclusão, uma vez que ele é um gás vasodilatador e pode inibir a adesão leucocitária. Nesse contexto, os objetivos do presente trabalho foram avaliar as propriedades adesivas dos neutrófilos de pacientes com AF e investigar o papel da via de sinalização do NO e dos nucleotídeos cíclicos (AMPc e GMPc) nos processos de vaso oclusão na AF. Os neutrófilos de pacientes com AF apresentaram maior adesão in vitro para ambos ligantes, fibronectina (FN) e molécula de adesão intercelular (ICAM-1), quando comparados à adesão de neutrófilos de controles. A co-incubação dos neutrófilos de pacientes com AF com agentes doadores de NO, nitroprussiato de sódio (SNP), dietilamina NANOato (DEANO) e com estimulador da guanilato ciclase solúvel (GCs), BAY 412272, diminuíram significativamente o aumento da adesão dos neutrófilos à FN e ao ICAM-1. O oxidiazolo [4,3-a]quinoxalin-1-one, um inibidor da GCs, reverteu a inibição da adesão provocada pelo SNP e DEANO à FN, indicando que a sinalização ependente de GMPc participa desse mecanismo. Os níveis intracelulares de GMPc foram significativamente maiores nos neutrófilos de pacientes que fizeram uso de terapias com hidroxiurea (HU). Em concordância com esses resultados, a adesão dos neutrófilos à FN e ao ICAM-1 foi significativamente menor em pacientes com AF em uso de HU se comparada com os neutrófilos de pacientes com AF sem terapia com HU. Adicionalmente, a co-incubação dos neutrófilos de pacientes com AF com KT5720 (um inibidor de PKA) reduziu a adesão basal enquanto que a co-incubação das células com KT5823 (inibidor de PKG) não alterou a adesão dos neutrófilos à FN. O estímulo dos neutrófilos de pacientes com AF com interleucina 8 (IL-8) aumentou significativamente a adesão à FN e esse aumento na adesão foi reduzido pela KT5720. Esses dados indicam que a regulação da sinalização da via dependente de AMPc tem um importante papel na alteração das propriedades adesivas nos pacientes com AF. Tal alteração pode ter implicação na fisiopatologia da AF e tanto a via PKA dependente de AMPc pode representar um alvo terapêutico para reduzir a alteração na função leucocitária, como agentes que estimulam a via de NO dependente de GMPc podem ter efeitos benéficos na função leucocitária desses pacientes / Abstract: Increased leukocyte adhesion to vascular endothelium contributes to vaso-occlusion in sickle cell disease (SCD). Since nitric oxide (NO) bioavailability is decreased in SCD and NO may inhibit leukocyte adhesion, we determined whether stimulation of NO-signalling pathways can decrease the adhesive properties of neutrophils from SCD individuals (SCDneu). SCDneu presented greater adhesion, in vitro, to both fibronectin (FN) and ICAM-1 than control neutrophils; co-incubation of SCDneu with the NO-donor agents, sodium nitroprusside (SNP) and dietheylamine NONOate (DEANO), and the guanylate cyclase stimulator, BAY41-2272, all significantly diminished increased adhesion to FN/ICAM-1. Oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one, a guanylate cyclase inhibitor, reversed SNP/DEANO-diminished adhesion to FN, implicating cGMP-dependent signalling in this mechanism. Interestingly, intracellular cGMP was significantly higher in neutrophils from SCD individuals on hydroxyurea (SCDHUneu) and, accordingly, SCDHUneu adhesion to FN/ICAM-1 was significantly lower than that of SCDneu. In addition, co-incubation of SCDneu with KT5720 (an inhibitor of PKA), but not KT5823 (inhibitor of PKG), abrogated increased basal SCDneu adhesion. Stimulation of SCDneu with IL-8 also significantly augmented SCDneu adhesion to FN and this increase in adhesion was abolished by KT5720. Data indicate that up-regulated cAMP signalling plays a significant role in altered adhesive properties in SCDneu. Such alterations may have significant implications for the pathophysiology of the disease and the cAMP-PKA pathway may represent a therapeutic target for the abrogation of altered leukocyte function. Agents that stimulate the NO/cGMP-dependent pathway may have beneficial effects on leukocyte function if used in these individuals / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Ione Salgado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T11:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wulff_Alfredo_M.pdf: 2480773 bytes, checksum: f1cbea2506b80bbad1e739df2bd5c1c4 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi estudar os mecanismo s de síntese e de degradação do radical óxido nítrico (NO) pela mitocôndria vegetal, com ênfase à influência das NAD(P)H desidrogenases e da oxidase alternativa (AOX) nestes processos. Os experimentos foram realizados com mitocôndrias isoladas de células em cultura da planta modelo Arabidopsis thaliana. Inicialmente estabeleceu-se um protocolo para o isolamento e purificação de mitocôndrias, cuja integridade funcional foi determinada pelo controle respiratório, potencial elétrico de membrana e transporte eletroforético de cálcio. Os processos de síntese e de degradação de NO foram analisados monitorando-se o consumo de oxigênio e as concentrações de NO no meio de reação, com eletrodos específicos. Os resultados mostraram que o nitrito inibiu a respiração das mitocôndrias de A. thaliana em competição com o oxigênio do meio. Esta inibição foi revertida por cPTIO, um seqüestrador de NO. Quando a AOX foi inibida por n-propilgalato, o efeito inibitório do nitrito na respiração mitocondrial foi aumentado, enquanto que, na presença de myxothiazol, que previne a redução da citocromo c oxidase (COX), o nitrito não teve efeito na respiração. Os efeitos observados do nitrito no consumo de oxigênio sugeriram que NO foi sintetizado pelas mitocôndrias de A. thaliana através de uma atividade redutora de nitrito. Entretanto, a síntese de NO a partir de nitrito foi principalmente detectada em anaerobiose. Em altas concentrações de nitrito (1-5 mM), a produção de NO se mostrou praticamente insensível aos inibidores da cadeia respiratória, enquanto que, em concentrações menores de nitrito (100 -200 ?M) a COX, mas não a AOX, contribuiu para a síntese de NO. A exposição das mitocôndrias ao NO ou ao nitrito causou uma inibição transiente e menor no consumo de oxigênio quando NAD(P)H f oi utilizado como substrato respiratório, em relação ao succinato. Estas inibições foram potencializadas por superóxido dismutase, sugerindo um mecanismo de degradação de NO dependente de NAD(P)He de oxigênio pelas mitocôndrias de A. thaliana. O conjunto dos resultados mostra que o NO pode ser produzido pela mitocôndria de A. thaliana através de uma atividade redutora de nitrito e que as NAD(P)H desidrogenases e a AOX, além da COX, podem interferir nesta produção. Em aerobiose, a quantidade de NO produzido pode ser controlada pelas atividades de degradação das NAD(P)H desidrogenases e pela COX. A AOX contribui de maneira oposta, ajudando a manter a concentração de NO. Em anaerobiose a atividade redutora de nitrito é favorecida sendo o NO produzido nestas condições pela COX e também devido ao estado mais reduzido da cadeia respiratória. Ainda, em anaerobiose, os mecanismos de degradação de NO, dependentes de oxigênio, estão inibidos. Em conclusão, os resultados deste trabalho mostram a importância das proteínas alternativas da cadeia respiratória da mitocôndria para a homeostase do NO na planta / Abstract: The objective of this work was to study the mechanisms of synthesis and degradation of NO by plant mitochondria, with emphasis on the influence of the NAD(P)H dehydrogenases and the alternative oxidase (AOX) in these processes. The experiments were carried out with mitochondria isolated from cells in culture of the model plant Arabidopsis thaliana. Initially, a protocol for the isolation and purification of mitochondria was established, and their functional integrity was determined by respiratory control, electric membrane potential and electrophoretic calcium transport. The processes of synthesis and degradation of NO were analyzed by monitoring oxygen consumption and NO concentration in the reaction medium with specific electrodes. The results showed that nitrite inhibited respiration of A. thaliana mitochondria, in competition with oxygen in the medium. This inhibition was reversed by cPTIO, an NO scavenger. When AOX was inhibited by n-propylgalate, the inhibitory effect of nitrite in mitochondrial respiration was increased, whereas in the presence of myxothiazol, which prevents the reduction of cytochrome c oxidase (COX), nitrite had no effect on respirati on. The observed effects of nitrite in the oxygen consumption suggested that NO was synthes ized by A. Thaliana mitochondria through a nitrite reductase activity. Meanwhile, the synthesis of NO from nitrite was mainly detected under anaerobiosis. At high concentrations of nitrite (1-5 mM), the production of NO was virtually insensitive to inhibitors of the respiratory chain, while at lower concentrations of nitrite (100-200 ?M) COX, but not AOX, contributed for the synthesis of NO. The exposure of mitochondria to NO or nitrite caused a transient and lower inhibition in oxygen consumption when NAD(P)H was used as respiratory substrate, compared to succinate. These inhibitions were enhanced by superoxide dismutase, suggesting an NAD(P)H- and oxygendependent mechanism for NO degradation by mitochondria of A. thaliana. The overall results show that NO can be produced by A. thaliana mitochondria through a nitrite reductase activity and that NAD(P)H dehydrogenases and AOX, in addition to COX, can interfere in this production. In aerobiosis the amount of NO produced can be controlled by the degradation activities of NAD(P)H dehydrogenases and COX. The AOX has an opposite effect, keeping the concentration of NO. In anaerobiosis the nitrite reductase activity is favore d and NO is produced in these circumstances by COX, and also due the more reduced state of the respiratory chain. Additionally, in anaerobiosis, the oxygen -dependent mechanisms of NO degradation are inhibited. In conclusion, the results of this study show the importance of the alternative proteins of the mitochondrial respiratory chain for NO homeostasis in the plant / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Marta Helena Krieger, Regina Celia Spadari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T11:44:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caceres_VivianedeMenezes_M.pdf: 892273 bytes, checksum: 832dcecc572cc26759a9832b12d09b9e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os objetivos do presente estudo são investigar e comparar o efeito do nitrosotiol doador de NO (SNAC) e do doador de NO-/HNO (Sal de Angelis) na estrutura e função do miocárdio sob processo aterogênico precoce induzido pela dieta em camundongos com deleção gênica do receptor de LDL (LDLr-/-). Os dados obtidos possibilitam avaliar a eficácia destas espécies químicas, bem como os mecanismos de ação envolvidos nos efeitos preventivos promovidos pelo sistema NO/NOS e pela via HNO, na hipertrofia ventricular esquerda, neste modelo animal. O papel dos adrenoceptores beta no controle da função cardíaca destes camundongos LDLr-/- também foi avaliado. A deleção gênica do receptor de LDL resultou em déficit contrátil cardíaco, sem alteração na homogeneidade da população miocárdica de adrenoceptores ß1, mas quando associada à dieta hiperlipídica induziu participação de adrenoceptores ß2, com conseqüente alteração da sensibilidade aos efeitos inotrópico e cronotrópico da isoprenalina. O tratamento com SNAC e Sal de Angelis (SA) preveniu o aumento da sensibilidade à isoprenalina, provavelmente ao induzir o acoplamento dos adrenoceptores ß 2 com a proteína Gi. Além disso, o SA foi capaz de corrigir o déficit contrátil do miocárdio. Camundongos LDLr-/- também apresentaram hipertensão, a qual foi prevenida pelo tratamento com SNAC. Quando a deleção gênica estava associada à dieta hiperlipídica, os camundongos apresentaram hipertensão e hipertrofia ventricular esquerda. O SNAC e o SA previniram a hipertrofia, mas não a hipertensão. Concluímos que camundongos com deleção gênica do receptor de LDL, alimentados com dieta hiperlipídica são um modelo interessante de alterações cardíacas e hemodinâmicas, especialmente quando enfocamos alterações das respostas dos adrenoceptores beta adrenérgicos, e que compostos doadores de NO e seus congêneres podem se tornar uma alternativa para prevenir tais alterações / Abstract: The aim of this study is to analyze and to compare the effects of a nitrosothiol NO donnor (SNAC) and of a NO-/HNO donor (Angelis Salt, AS) on the structure and functioning of myocardium under atherogenic process induced by a hyperlipic diet in LDL receptor knockout mice (LDLr-/-). The role played by the ß adrenoceptor subtypes in the control of the cardiac function of LDLr-/- mice has also been analysed. LDLr-/- mice exhibited a contractile deficit in the myocardium, with no alteration in the response to isoprenaline, which is mediated by a homogeneous population of ß1 adrenoceptors. However, when it was associated with a hyperlipidic diet, ß2 adrenoceptors participate in the inotropic and chronotropic responses to isoprenaline, causing an alteration on tissue sensitivity to the agonist. LDLr-/- knockout mice treatment with SNAC or AS avoided the atria supersensitivity to isoprenaline by inducing ß2 adrenoceptors coupling to Gi protein. Moreover, AS but not SNAC was able to recover the atria contractile performance. LDLr-/- mice also presented hypertension that it was prevented by the SNAC treatment. Hypertension was accompanied by ventricular hypertrophy when the gene deletion was associated with a hyperlipidic diet. SNAC or AS treatment prevented the hypertrophy, but not the hypertension. We concluded that LDLr-/- mice fed with a hyperlipidic diet are useful models for the study of haemodynamic and cardiac diseases related to a hypercholesterolemic profile, mostly when the focus is to investigate the participation of the adrenoceptors in the involved processes, and that NO donnors or similar compounds may be an alternative tool to prevent such alterations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Paulo Cesar Rodrigues Palma, Cassio Luis Zanettini Riccetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T15:13:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souto_SophiaConsuelo_M.pdf: 4211847 bytes, checksum: 42d0aabe09e9a27f66e06e5f8b6d381f (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução: O sexo é parte do cotidiano das pessoas não estando limitado à concepção. Diversos fatores podem inibir a resposta sexual da mulher, tanto de forma transitória como prolongada. A resposta sexual sofre efeitos da: idade, tabaco, colesterol, hipertensão e diabetes. É uma condição multifatorial, com componentes anatômicos, fisiológicos, médicos, psicológicos e sociais. (Wyman JF; et al, 1987) O aumento do fluxo sanguíneo clitoridiano ocorre em decorrência do estímulo sexual, sendo parte da resposta sexual feminina. (Levin RJ, 1980) Sendo, portanto, uma boa forma de avaliar um método de tratamento para disfunção sexual feminina. O óxido nítrico (NO) e peptídeos vasoativos intestinais estão implicados no ingurgitamento de tecido clitoridiano após estimulação sexual. O NO constitui uma das menores e mais simples moléculas biossintetizadas, é um radical livre, gasoso, inorgânico, incolor, que possui sete elétrons do nitrogênio e oito do oxigênio, tendo um elétron de oxigênio desemparelhado. (Beckman JS & Koppenol WH, 1996) Objetivo Avaliar através do exame de ultra-sonografia Doppler se a aplicação tópica de um gel doador de óxido nítrico aumentaria o fluxo sanguíneo clitoridiano de mulheres normais. Materiais e Métodos No presente estudo, foram avaliadas vinte mulheres normais das quais passaram por exame de ultra-sonografia Doppler na artéria clitoridiana, comparando o fluxo sanguíneo normal e o fluxo sanguíneo com a utilização do gel doador de óxido nítrico. A analise hemodinâmíca constou de: velocidade sistólica de pico, velocidade diastólica e índice de resistência do vaso. Resultados: Na análise estatística verificou-se diferença significância para todos os parâmetros estudados (p < 0,05). A velocidade sistólíca mediana inicial foi de 104 e após aplicação do gel doador de óxido nítrico foi de 109 (p=0,002). A velocidade diastólica mediana inicial foi de 107 e após aplicação do gel passou a 106 (p=0,043) e a resistência mediana inicial foi de 105 e após aplicação do gel tornou-se 107 (p=0,005). Conclusão: Concluímos que a utilização tópica deste gel doador de óxido nítrico foi eficaz para aumentar o fluxo sanguíneo na região clitoridiana / Abstract: Introduction Sex is a part of the daily life of people and it is not just limited to conception. Different factors may inhibit female's sexual response, in a transitory or prolonged way. The sexual response is affected by age, tobacco, cholesterol, hypertension and diabetes. It is a multifactor condition, with anatomical, physiological, medical, psychological and social factors. (Wyman JF; et al, 1987) The increase of blood flow in the clitoris is due to sexual stimulation, being a part of the female's sexual response. (Levin RJ, 1980) That makes it a good way to asses a treatment for female sexual dysfunction. The nitric oxide (NO) and intestinal vase active peptides are involved in the ingurgitation of clitoridean tissue after sexual stimulation. The nitric oxide is one of the smallest and most simple biosynthesized molecules, and it is a gaseous, inorganic, colorless free radical, with seven electrons from nitrogen and eight from oxygen, and one oxygen electron is uneven. (Beckman JS & Koppenol WH, 1996) Objective Evaluate through the Doppler ultra-sound if the topic use of a nitric oxide donor gel would increase the blood flow in the clitoris of healthy women. Materials and method In this study we evaluated twenty healthy women who underwent ultrasound of the clitoris artery, comparing the normal blood flow and the flow with the use of the gel. The hemodynamic analysis considered: systolic peak speed, diastolic speed and vase resistance index. Results In the statistical analysis we found significant statistical differences in all the parameters measured (p < 0,05). The mean initial systolic speed was 104 and after the gel use it was 109 (p=0,002). The mean initial diastolic speed was 107 and with Abstract the gel it was 106 (p=0,043) and the mean initial resistance was 105 and after the use of the gel it was 107 (p=0,005). Conclusion The use of the topic gel proved to be effective to increase the blood flow in the area of the clitoris / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:38:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SouzaFilho_LuisGustavode1974-_M.pdf: 2079653 bytes, checksum: 497d01659ac0eed18bd9c81662ca0b59 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os inibidores das óxido nítrico sintases (NOS) são amplamente utilizados para avaliar a contribuição do NO na alergia pulmonar, mas os dados obtidos pela utilização de tais inibidores são controversos. Neste estudo, ensaios farmacológicos, bioquímicos e farmacocinéticos foram realizados para se avaliar os efeitos dos tratamentos agudo e crônico com o inibidor não seletivo da NOS, L-NAME, assim como do inibidor seletivo para NOS induzível (iNOS), aminoguanidina, sobre a inflamação das vias aéreas em camundongos BALB/c desafiados com ovalbumina (OVA). O tratamento crônico com L-NAME (50 e 150 mg/kg/dia, por três semanas) aumentou significativamente o número de eosinófilos no lavado broncoalveolar (LBA) de animais desafiados com ovalbumina (OVA; 0,19 ± 0,02 e 0,34 ± 0,03 x 106células/LBA, respectivamente; P<0,0001) em relação aos não tratados (0,13 ± 0,02 x 106 células/LBA). No parênquima pulmonar, o tratamento crônico com L-NAME (150 mg/kg/dia) também elevou significativamente o número de eosinófilos nos animais desafiados com OVA em relação aos animais não tratados (27,0 ± 5,1 e 18,2 ± 1,6 eosinófilos/brônquio, respectivamente; P<0,05). Contrariamente, os tratamentos agudo com L-NAME (50 mg/kg; gavagem 30 min antes do primeiro desafio com OVA) e crônico com aminoguanidina (20 mg/kg/dia, por três semanas) reduziram o número de eosinófilos no LBA (0,05 ± 0,01 e 0,04 ± 0,02 x 106 células/LBA, respectivamente; P<0,05) em relação ao controle. Os tratamentos agudo e crônico com L-NAME reduziram a atividade da NOS constitutiva (cNOS) no cérebro em relação aos animais não tratados (tratamento agudo: 5,8 ± 0,4 e 3,6 ± 0,2 pmol/min/mg de proteína; tratamento crônico: 5,7 ± 0,3 e 0,7 ± 0,2 pmol/min/mg de proteína, para controle e tratado, respectivamente; P<0,05). A atividade da NOS induzível (iNOS) pulmonar foi significativamente reduzida pelos tratamentos agudo com L-NAME e crônico com aminoguanidina (0,7 ± 0,05 e 0,04 ± 0,02 pmol/min/mg de proteína, respectivamente; P<0,05) em relação aos animais não tratados (1,2 ± 0,2 pmol/min/mg de proteína). Contudo, o tratamento crônico com L-NAME não afetou a atividade da iNOS pulmonar. Os níveis séricos de IgE mostraram-se elevados nos animais desafiados com OVA, mas não foram afetados por nenhum dos tratamentos. O tratamento crônico com aminoguanidina (mas não o tratamento crônico com L-NAME) reduziu os níveis elevados de eotaxina no LBA (3,4 ± 1,2 e 1,0 ± 0,5 pg/ml, para controle e tratado, respectivamente; P<0,05). As reduções dos níveis de NOx no LBA pelos tratamentos agudo com L-NAME e crônico com aminoguanidina (1,8 ± 0,4 e 0,6 ± 0,3 µM, respectivamente) foram maiores quando comparadas ao tratamento crônico com L-NAME (6,8 ± 0,6 µM) em relação aos animais não tratados (8,8 ± 0,8 µM). Os protocolos farmacocinéticos mostraram que o L-NAME não é biodisponível quando dado via oral. As concentrações séricas do metabólito do L-NAME, N?-nitro-L-arginina, diminuiram progressivamente de 30 min a 24 horas após a administração (72,0 a 32,1 ng/mL). No tratamento crônico com L-NAME, a concentração do N?-nitro-L-arginina (16,2 ng/mL) mostrou-se próxima do limite de detecção do método (10 ng/ml). Em conclusão, o tratamento crônico com L-NAME por três semanas produziu baixas concentrações séricas do N?-nitro-L-arginina, causando inibição preferencial da atividade da cNOS. Portanto, a potenciação do influxo de eosinófilos pelo tratamento crônico com L-NAME supostamente remove o NO protetor derivado da cNOS, com nenhuma interferência sobre o agravamento da inflamação devido ao NO oriundo da iNOS / Abstract: Nitric oxide synthase (NOS) inhibitors are largely used to evaluate the NO contribution to pulmonary allergy, but contrasting data have been obtained. In this study, pharmacological, biochemical and pharmacokinetic studies were performed to evaluate the effects of acute and chronic treatment of BALB/C mice with non-selective (L-NAME) and selective (aminoguanidine) NOS inhibitors in ovalbumin (OVA)-challenged mice. Long-term L-NAME treatment (50 and 150 mg/kg/day, three weeks) significantly increased the eosinophil number in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid (0.19 ± 0.02 and 0.34 ± 0.03 x 106 cells / BAL, respectively; P<0.0001) in comparison with non-treated animals (0.13 ± 0.02 x 106 cells / BAL). In the bronchiolar parenchyma, chronic L-NAME treatment (150 mg/kg/day) also increased the eosinophil number (18.2 ± 1.6 and 27.0 ± 5.1 eosinophils/bronchio, for treated and untreated, respectively; P<0.05). On the other hand, acute L-NAME (50 mg/kg, given by gavage 30 min prior to the first OVA challenge) and aminoguanidine (20 mg/kg/day, three weeks) rather reduced the eosinophil number (0.05 ± 0.0 and 0.04 ± 0.02 x 106 cells / BAL, respectively; P<0.05). Chronic and acute L-NAME treatments markedly reduced the constitutive NOS (cNOS) activity in brain (0.7 ± 0.2 and 3.6 ± 0.2 pmol/min/mg of protein, respectively; P<0.05) in comparison with untreated animals (5.7 ± 0.3 and 5.8 ± 0.4 pmol/min/mg of protein, respectively). The inducible pulmonary NOS (iNOS) activity was markedly reduced by acute L-NAME and aminoguanidine (0.7 ± 0.05 and 0.04 ± 0.02 pmol/min/mg of protein, respectively; P<0.05) compared with untreated animals (1.2 ± 0.2 pmol/min/mg of protein). In contrast, chronic L-NAME failed to affect the iNOS activity. The increased serum IgE levels seen in OVA-challenged animals were not affected by any treatment. Aminoguanidine (but not chronic L-NAME) restored the increased eotaxin levels in BAL (3.4 ± 1.2 and 1.0 ± 0.5 pg/ml; P<0.05). The NOx- levels in BAL fluid were reduced by both acute and chronic L-NAME, as well as by aminoguanidine (1.8 ± 0.4, 6.8 ± 0.6 and 0.6 ± 0.3 µM, respectively; P<0.05) compared with untreated animals (8.8 ± 0.8 µM); however, the reductions of NOx- levels by acute L-NAME and aminoguanidine were significantly higher than the chronic L-NAME treatment. The pharmacokinetic protocols showed that L-NAME per se is not bioavailable when given per os. The serum concentrations of its metabolite N?-nitro-L-arginine decreased from 30 min to 24 h (72.0 to 32.1 ng/mL) after acute L-NAME intake. In chronic treatment, N?-nitro-L-arginine concentration (16.2 ng/mL) was close to the detection limit (10 ng/mL). In conclusion, 3-week treatment with L-NAME yields low serum N?-nitro-L-arginine concentrations, causing a preferential inhibition of cNOS activity. Therefore, potentiation of eosinophil influx by chronic L-NAME reflects a removal of protective cNOS-derived NO, with no interference on the ongoing inflammation due to iNOS-derived NO / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Edson Arantes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:45:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lintomen_Leticia_D.pdf: 1121941 bytes, checksum: 2c92a8ddfce83c01ed6c71e524096e0b (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os eosinófilos participam da patogênese de várias doenças inflamatórias, incluindo infecções parasíticas e doenças alérgicas. Dentre as doenças alérgicas, a eosinofilia tem presença marcante na asma. Atualmente, a asma afeta 300 milhões de indivíduos no mundo, sendo considerada um problema de saúde pública mundial. A asma é uma doença inflamatória crônica que envolve interações entre fatores externos e genéticos, e tem como características principais a inflamação pulmonar e a hiperresponsividade brônquica. O recrutamento de eosinófilos para as vias aeríferas contribui para o caráter crônico da asma. A migração de eosinófilos para o tecido inflamado é um processo complexo, que é regulado por numerosos fatores, incluindo citocinas, quimiocinas, óxido nítrico (NO) e interações de moléculas de adesão. Estudos prévios investigaram as interações funcionais entre NO e CC-quimiocinas. Young e colaboradores (1999) mostraram que o número de eosinófilos no lavado broncoalveolar (LBA) de macacos desafiados está marcadamente aumentado 24 horas após o desafio, e que este aumento é acompanhado de altos níveis de NO no ar exalado e de eotaxina no LBA. Em pacientes com rinite, a eotaxina aumentou o número de eosinófilos no fluido do lavado nasal e também os níveis de NO nasal (Hanazawa et al., 1999). Em contraste, em modelos murinos de asma a inibição seletiva da NOS induzível resultou na redução da migração eosinofílica para os pulmões (Feder et al., 1997; Iijima et al., 2001), que estava associada com o aumento da expressão da CC-quimiocina proteína quimiotática para monócito-1 (MCP-1) no tecido pulmonar (Trifilieff et al., 2000). Além disso, NO (ou doadores de NO) também são capazes de inibir a produção de RANTES (Frank et al., 2000). O NO via formação de peroxinitrito (ONOO-) também pode reduzir a migração de eosinófilos induzida por eotaxina (Sato et al., 2000). Entretanto, o papel modulatório do NO nas funções do eosinófilo mediadas por CC-quimiocinas ainda permanece contraditório. Portanto, o presente trabalho investigou o efeito modulatório do NO na adesão aumentada, quimiotaxia e desgranulação do eosinófilo induzidas pelas Ccquimiocinas eotaxina e RANTES in vitro, e a expressão de VLA-4 e Mac-1 na superfície do eosinófilo. Nós realizamos ensaios funcionais (adesão e desgranulação), análise da expressão de moléculas de adesão por citometria de fluxo (VLA-4 e Mac-1) e a investigação de resíduos de tirosina nitrada para avaliar interações do NO com CC-quimiocinas em eosinófilos humanos. Os ensaios de MTT mostraram que as incubações de eosinófilos por 2, 3, ou 4 horas com eotaxina (10, 100 e 1000 ng/ml) ou RANTES (10, 100 e 1000 ng/ml) não afetam a viabilidade celular e, em determinadas condições, até promovem a ativação das células. Os resultados de adesão à fibronectina mostraram que a eotaxina (10, 100 e 1000 ng/ml) ou RANTES (10, 100 e 1000 ng/ml) não aumentam a adesão de eosinófilos em períodos de incubação de 2 e 3 horas. Entretanto, a incubação de eosinófilos por 4 horas com eotaxina ou RANTES aumentou significativamente a adesão à fibronectina. O L-NAME (0.1 mM), individualmente, aumentou significativamente a adesão de eosinófilos à fibronectina; porém a co-incubação de L-NAME com eotaxina (ou RANTES) não afetou a adesão observada com cada agente isoladamente. Além disso, a expressão de VLA-4 e de Mac-1 não foi modificada em nenhuma das condições experimentais testadas. Eotaxina e RANTES também não foram capazes de aumentar os níveis de GMPc nos eosinófilos, em condições onde o SNP (0.1 mM), usado como controle positivo, aumentou significativamente os níveis desse segundo mensageiro. Além disso, eosinófilos tratados com L-NAME, eotaxina e RANTES, individualmente, foram capazes de desgranular estas células, mas a co-incubação de LNAME com eotaxina (ou RANTES), não alterou esta resposta. Os resultados de quimiotaxia mostraram migração significativa de eosinófilos (tratados ou não com LNAME) em resposta à eotaxina ou RANTES. Os resultados obtidos de Western blotting para 3-nitrotirosina mostraram ausência de proteínas nitradas nos eosinófilos de indivíduos sadios ou asmáticos. No conjunto, nossos resultados mostram que, nas condições experimentais estabelecidas, o NO não modula adesão, migração e desgranulação em eosinófilos estimulados com eotaxina ou RANTES / Abstract: Eosinophils participate in the pathogenesis of many inflammatory diseases, including parasitic infections and allergic diseases. Of the allergic diseases, asthma is characterized by eosinophilia. Currently, asthma affects 300 million people in world, and is an important public health problem. Asthma is an inflammatory chronic disease that involves interactions between external and genetic factors, and has lung inflammation and bronchial hyperresponsiveness as major features. The recruitment of eosinophils into airways contributes to the asthma chronic character. The eosinophil migration to inflamed tissue is a complex process regulated by several factors, including cytokines, chemokines, nitric oxide (NO) and adhesion molecule interactions. Previous studies have investigated the functional interactions between NO and CC-chemokines. Young et al. (1999) showed that the number of eosinophils in the bronchoalveolar lavage (BAL) fluid of challenged monkeys is markedly increased at 24 h post-challenge, accompanied by higher levels of both exhaled NO and eotaxin in BAL fluid. In rhinitis patients, eotaxin increased the number of eosinophils in the nasal lavage fluid, and that was also accompanied by elevated nasal NO levels (Hanazawa et al., 1999). In contrast, in murine models of asthma, selective inhibition of inducible NOS resulted in a reduction in pulmonary eosinophil migration (Feder et al., 1997; Iijima et al., 2001), with an increased expression of the CC-chemokine monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) in the lung tissue (Trifilieff et al., 2000). Moreover, NO (or NO donors) have also been shown to inhibit the production of RANTES (Frank et al., 2000). Nitric oxide via peroxynitrite (ONOO-) formation is reported to reduce eotaxin-induced eosinophil migration (Sato et al., 2000). However, the modulatory role of NO in the CC-chemokines-mediated eosinophil functions is still not well understood. Therefore, the present study was designed to investigate the modulatory effect of NO in the enhanced eosinophil adhesion, chemotaxis and degranulation induced by the Ccchemokines eotaxin and RANTES in vitro, and the expression of VLA-4 and Mac-1 on the eosinophil surface. We therefore carried out functional assays (adhesion and degranulation), flow cytometry analysis of adhesion molecules (VLA-4 and Mac-1 expression) and investigation of tyrosine nitration to evaluate the interactions between NO and CC-chemokines in human eosinophils. MTT assays showed that incubation of eosinophils for 2, 3 or 4 hours with eotaxin (10, 100 and 1000 ng/ml) or RANTES (10, 100 and 1000 ng/ml) did not affect cellular viability and, in some conditions, even caused cellular activation. The results of adhesion to fibronectin showed that eotaxin (10, 100 and 1000 ng/ml) or RANTES (10, 100 and 1000 ng/ml) did not increase eosinophil adhesion at 2 or 3 hours of incubation. Nevertheless, the incubation of eosinophils for 4 hours with eotaxin or RANTES significantly increased adhesion to fibronectin. L-NAME (0.1 mM), alone, significantly increased eosinophil adhesion to fibronectin; however the co-incubation of L-NAME with eotaxin (or RANTES) did not affect the adhesion of each agent. Moreover, expression of VLA-4 and Mac-1 were not modified by any of the experimental conditions. Eotaxin and RANTES did not increase eosinophil cGMP levels under the same conditions in which SNP (0.1mM), used as a positive control, significantly increased the levels of this second messenger. Furthermore, eosinophils treated with L-NAME, eotaxin and RANTES, alone, demonstrated degranulation, however the co-incubation of eosinophils with L-NAME and eotaxin (or RANTES) did not alter this response. Chemotaxis assays showed a significant eosinophil (treated or not with L-NAME) migration in response to eotaxin or RANTES. Western blotting for 3-nitrotyrosine-3 showed a lack of nitrated proteins in eosinophils from healthy or asthmatic donors. Taken together, results show that, under the experimental conditions established, NO does not modulate adhesion, migration and degranulation in eotaxin or RANTES-stimulated eosinophils / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T20:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toque_HaroldoAlfredoFlores_D.pdf: 1734292 bytes, checksum: a664da49d6a032202e54c1490b0647dc (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O sildenafil, inibidor específico de PDE5, é utilizado no tratamento da disfunção erétil. Na procura de um inibidor mais potente e seletivo de PDE5, testamos vinte novos análogos do sildenafil (6a-v), caracterizados pela presença de um grupo sulfonil ou de um substituinte n'n'etilendiamina na posição do grupo metil da piperazina. Os objetivos deste trabalho foram: 1) Avaliar a atividade inibitória da PDE5 de plaquetas humanas; 2) Avaliar o efeito relaxante dos análogos do sildenafil em corpo cavernoso de coelho; 3) Avaliar o efeito relaxante dos análogos do sildenafil em anéis de aorta de coelho. Foi utilizado sangue de voluntários sadios para a atividade inibitória da PDE5 e coelhos New Zealand machos (2-3 kg) procedentes do CEMIB-UNICAMP para os estudos funcionais. Os animais foram anestesiados com uretana, o corpo cavernoso e a artéria aorta foram rapidamente removidos. O tecido cavernoso e anéis de aorta foram montados em banho para órgão isolado contendo solução de Krebs (37oC, 95% O2 / 5% CO2). Os tecidos foram ligados a transdutores isométricos conectados a um sistema PowerLab® de aquisição de dados. Nossos resultados mostraram que a atividade inibitória da PDE5 induzida pelos análogos do sildenafil em plaquetas humanas foi de maneira dependente da concentração. Os compostos 6m, 6n e 6q mostraram valores elevados de IC50 para inibir a PDE5 plaquetária, enquanto que os compostos 6a, 6b, 6d, 6g e 6p produziram inibição inferior a 50%. A potência inibitória (IC50) dos compostos 6c, 6e, 6f, 6h, 6i, 6l e 6o foi similar ao sildenafil (IC50: 0,05 µM) com valores variando entre 0,05 e 0,15 µM. Os análogos que derivaram da molécula n'n'etilendiamina (6r, 6s, 6t e 6v) mostraram uma boa atividade inibitória com valores entre 0,20-0,51 µM. Interessantemente, o composto 6u mostrou uma potência de 0,04 µM, o qual representou o menor valor obtido dos análogos do sildenafil. Nos estudos funcionais, todos os análogos do sildenafil, à exceção do análogo 6m, relaxaram preparações de corpo cavernoso de coelho de maneira dependente da concentração. Particularmente, o análogo 6f mostrou o melhor perfil farmacológico no relaxamento, com potência similar ao sildenafil, e pode servir de base para o desenvolvimento de novos inibidores de PDE5 para o tratamento da disfunção erétil. Além disso, nossos resultados mostraram que os análogos do sildenafil produzem relaxamento dependente da concentração em anéis de aorta de coelho com endotélio íntegro ou removido. Somente o análogo 6b e 6m apresentaram valores de potência inferiores quando comparados ao sildenafil em tecidos com endotélio íntegro. A remoção do endotélio ou a adição do LNAME ou do ODQ (inibidor da NO sintase e da guanilil ciclase solúvel, respectivamente) em tecidos com endotélio íntegro, provocou deslocamento à direita para o sildenafil e seus análogos, à exceção do 6r e 6u que não apresentaram diminuição da potência decorrente da inibição do NO, seja pela remoção do endotélio, pela inibição da NO sintase ou pela inibição da guanilil ciclase solúvel. Nossos dados também mostram que o 6r e 6u, em combinação com o BAY 41-2272, aumentam a potência evocada por estes análogos tanto em anéis de aorta com endotélio íntegro ou removido. O relaxamento evocado pelo sildenafil, 6r e 6u não envolve a participação de canais de potássio e de cálcio, nem envolve a formação de prostanóides. As respostas relaxantes destes dois análogos não foram alteradas em tecidos desprovidos de endotélio, mostrando-se independentes da via NO/GMPc. Isto sugere que estes dois análogos podem ser de particular interesse em patologias decorrentes de disfunção endotelial. / Abstract: Sildenafil, a cGMP-specific phosphodiesterase-5 (PDE5) inhibitor, is used for the treatment of erectile dysfunction. In the search for a potent and selective PDE5 inhibitor, new sildenafil analogues (6a-v), characterized by the presence on the sulphonyl group in the 5' position of novel N-4-substituted piperazines or ethylenediamine moiety, were synthesized. The aim of this work was 1) To evaluate the PDE5 inhibitory activity in human platelets; 2) To evaluate the relaxing effect of sildenafil analogues in rabbit corpus cavernosum; 3) To evaluate the relaxing effect of sildenafil analogues in rabbit isolated aorta. Blood from human volunteers were collected and used for PDE5 inhibitory activity and Male New Zealand rabbit (2-3 kg) for functional studies. The rabbits were anaesthetized with urethane and sacrificed. The cavernosal tissue and aortic rings were mounted in organ bath containing Krebs solution (37oC, 95% O2 / 5% CO2). Each tissue was connected to an isometric transducer which was connected to a data acquisition system Powerlab®. Our results showed that sildenafil and its analogues concentration-dependently inhibited PDE5 activity in human platelets. Compounds 6m, 6n and 6q showed higher values of IC50 to inhibit PDE5 of platelets, whereas compounds 6a, 6b, 6d, 6g and 6p did not reach 50% of inhibition. The inhibitory potency of PDE5 for 6c, 6e, 6f, 6h, 6i, 6l and 6o were similar with sildenafil (IC50: 0,05 µM) with values between 0,05-0,15 µM. Derived analogues from n'n' substitution showed great PDE5 inhibitory activity. Interesting, compound 6u exhibited greater IC50 value (0,04 µM). In functional studies, all sildenafil analogues with exception of 6m, relaxed concentration-dependently rabbit corpus cavernosum. Compound 6f exhibited great pEC50 value in corpus cavernosum and could be used as base for developing new PDE5 inhibitors. Moreover, our results showed that sildenafil analogues concentration-dependently relaxed both endothelium-intact and - denuded aortic rings with similar potency values of sildenafil. Compounds 6b and 6m showed lower values of potency when compared to sildenafil in endothelium intact. Endothelium denudation or addition of L-NAME or ODQ (NOS and sGC inhibitors, respectively) caused marked rightward shifts in the curve to sildenafil and its analogues, whereas the relaxation curves for 6r and 6u were not altered after endothelium removal or either by the NO synthase or sGC inhibition. Moreover, our data also suggest that compound 6r and 6u increased the potency values in combination with BAY 41-2272 in both intact and denuded endothelium. The relaxation evoked by sildenafil, 6r and 6u does not involve either calcium or potassium channels or prostanoids formation. The relaxing responses by these compounds were independent of NO/cGMP pathway, suggesting that these compounds may be used in several diseases involving endothelium dysfunction. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-02-01T16:49:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Maria de Lourdes Breseghelo - 2014.pdf: 1257515 bytes, checksum: 30aeeb0256b3eb5c586b4380a75aaf0c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-02T06:56:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Maria de Lourdes Breseghelo - 2014.pdf: 1257515 bytes, checksum: 30aeeb0256b3eb5c586b4380a75aaf0c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-02T06:56:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Maria de Lourdes Breseghelo - 2014.pdf: 1257515 bytes, checksum: 30aeeb0256b3eb5c586b4380a75aaf0c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-12-18 / Complete dentures represent the main treatment for total edentulism in the overall population. However this type of treatment can lead to the onset of physiological and functional alterations during the adaptative period after the installation of the denture. The objective of this work was to evaluate modifications in biochemical parameters (nitric oxide and cortisol levels) in complete denture user's saliva and verify its association with clinical parameters like levels of functional adaptation, trauma, salivary flux, and viscosity. Nineteen totally toothless patients in need of installation or substitution of dentures were selected and evaluated during the installation, adaptation and in the post-adaptation period. The protocol for making the complete dentures followed clinical and laboratory procedures. The nitric oxide concentration dosage was performed via the Griess reaction, where the measurement taken is the nitrite concentration, since nitric oxide is very unstable and rapidly transforms into nitrite. The points for construction of the calibration curve were made in triplicate using the nitrite concentration, which varied from 5 to 150 μM, wherein for each analyzed plate a new curve was built. The salivary cortisol concentration was performed using Salimetrics No. 1-3002 (single) enzymatic kit. A descriptive statistical analysis was done for representation of summary measures of the variables measured. Non-parametric tests (Friedman, Wilcoxon, Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests) were used for group comparison. Salivary nitric oxide levels were quantified for each evaluation period and correlated between themselves, showing statistically significant differences among them. The adaptative periods showed a decrease in nitric oxide levels between installation and post-installation. There were no significant differences in correlations between salivary nitric oxide concentrations and levels of functional adaptation, trauma, salivary flux and viscosity. The salivary cortisol levels were evaluated at two periods, in the post-adaptative and after some months of denture use, showing great variation at the first period and stabilization at the second. There was no significant difference when correlated to the levels of functional adaptation and trauma. It was concluded that the prosthetic treatment caused alterations in salivary nitric oxide and cortisol levels during adaptation to dentures however these levels came back to normal after that period. / Próteses totais convencionais representam o principal tratamento para o edentulismo total na população em geral. Entretanto este tratamento pode levar ao aparecimento de alterações fisiológicas e funcionais transitórias durante o período adaptativo após a instalação das próteses. O objetivo deste trabalho foi avaliar modificações em parâmetros bioquímicos (níveis de óxido nítrico e cortisol) na saliva de usuários de próteses e verificar sua associação com parâmetros clínicos como os níveis de adaptação funcional, traumatismos, fluxo salivar e viscosidade. Foram selecionados 19 pacientes desdentados totais com necessidade de instalação ou substituição de próteses os quais foram avaliados na instalação, durante a adaptação e no período pós-adaptativo. O protocolo para confecção de próteses totais seguiu os procedimentos clínicos e laboratoriais. A dosagem da concentração de óxido nítrico foi feita por meio da reação de Griess onde a medida realizada é a concentração de nitrito uma vez que o óxido nítrico é muito instável e logo se transforma em nitrito. Os pontos para a construção da curva de calibração foram feitos em triplicata utilizando-se concentrações de nitrito que variaram de 5 a 150 μM sendo que para cada placa analisada uma nova curva foi construída. A dosagem da concentração de cortisol salivar foi feita utilizando-se o kit enzimático No. 1-3002 (single) Salimetrics. Foi realizada análise estatística descritiva para representação das medidas de resumos das variáveis mensuradas. Testes não paramétricos (Testes de Friedman, Wilcoxon, Mann-Whitney e Kruskal-Wallis) foram utilizados para comparação entre grupos. Os níveis de óxido nítrico salivar foram quantificados para cada um dos períodos de avaliação e correlacionados entre si, mostrando diferenças estatisticamente significativas entre eles. Os períodos adaptativos mostraram uma queda nos níveis de óxido nítrico em relação à instalação e à pós-instalação. Não houve diferenças significativas nas correlações entre as concentrações de óxido nítrico salivar e os níveis de adaptação funcional, traumatismo, fluxo salivar e viscosidade. Os níveis de cortisol salivar foram avaliados em dois períodos, no pós-adaptativo e depois de alguns meses de uso da prótese, mostrando grande variação no primeiro e estabilização no segundo. Não houve diferença significativa quando correlacionado com níveis de adaptação funcional e traumatismos. Concluiu-se que o tratamento protético provocou alterações nos níveis de óxido nítrico e cortisol salivares durante a adaptação às próteses porem estes níveis voltaram aos normais após este período.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-12-16T10:18:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Cruvinel de Abreu - 2016.pdf: 9557097 bytes, checksum: 68075f9112c44b45bbb05a915e471610 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-16T16:48:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Cruvinel de Abreu - 2016.pdf: 9557097 bytes, checksum: 68075f9112c44b45bbb05a915e471610 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T16:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Cruvinel de Abreu - 2016.pdf: 9557097 bytes, checksum: 68075f9112c44b45bbb05a915e471610 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-16 / The main goal of asthma treatment is to achieve and maintain clinical control of the disease. The exhaled fraction nitric oxide (FeNO) level is considered a biomarker of airways inflammation and its important to conduct researches involving this measured and its relationship in evaluation of asthma control.Objective: To determine whether the FeNO level can be used to discriminate between patients with controlled, partially controlled and uncontrolled asthma. Materials and methods: The FeNO level and asthma control were evaluated in a retrospective and analytic cross– sectional study through data collected from asthmatic patients who were assessed by clinical history, asthma control, physical examination, spirometry, and FeNO level. Asthma control was determined by the criteria of the Global Initiative for Asthma, and classified as controlled asthma, partially controlled asthma, and uncontrolled asthma. The FeNO values were classified as low (<25 ppb) or intermediate/high (≥25 ppb), based on the American Thoracic Society recommendations. Results: The symptoms of 81 asthmatic patients were classified as controlled (34 [42%] patients), partially controlled (27 [33,3%] patients), and uncontrolled (20 [24.7%] patients). The FeNO level discriminated between the uncontrolled and controlled groups (p = 0,01) and between the uncontrolled and partially controlled groups (p = 0,01), but not between the controlled and partially controlled groups (p = 0,98). An FeNO level >30 ppb was associated with uncontrolled asthma (p < 0,01) with an area under the receiver operating characteristic curve of 0,78 (95% confidence interval, 0,65-0,89). Conclusions: The FeNO level aided the identification of uncontrolled asthma. This measurement may can be helpful in determining asthma control. / O principal objetivo do tratamento da asma é alcançar e manter o controle clínico da doença. A medida da Fração Exalada do Óxido Nítrico (FeNO) é considerada um biomarcador da inflamação das vias aéreas sendo de extrema importância a realização de pesquisas envolvendo essa medida e a avaliação do nível de controle da asma. Objetivo: Verificar se a medida da FeNO discrimina pacientes com asma controlada, parcialmente controlada e não controlada. Materiais e métodos: Realizou-se um estudo restrospectivo, transversal analítico por meio da coleta de dados de pacientes asmáticos que foram avaliados em relação a sua história clínica, nível de controle da asma, exame físico, espirometria e FeNO. O nível de controle da asma foi determinado conforme critério da Global Initiative for Asthma (GINA), classificados como controlados, parcialmente controlados e não controlados. Os valores da FeNO foram classificados em baixo ou intermediário/alto (baixo <25 ppb e intermediário/elevado ≥ 25 ppb), de acordo com as recomendações da American Thoracic Society (ATS). Resultados: Foram incluídos 81 pacientes asmáticos classificados em controlados 34 (42%), parcialmente controlados 27 (33,3%) e não controlados 20 (24,7%). A medida da FeNO discriminou o grupo não controlado dos grupos controlado (p = 0,01) e parcialmente controlado (p = 0,01), mas não discriminou os grupos controlado e parcialmente controlado (p = 0,98). FENO >30 estava associado a asma não controlada (p <0,01) com área sob a curva ROC de 0,78 (Intervalo de Confiança 95%, 0.65- 0.89).Conclusão: A FeNO foi capaz de identificar asmáticos não controlados. Isso sugere que sua medida pode ser útil na determinação do controle da asma

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-16T15:45:07Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniela Medeiros Lobo de Andrade - 2014.pdf: 1412697 bytes, checksum: 19e6d4fab16722ee831616d29065c6dc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-17T10:26:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniela Medeiros Lobo de Andrade - 2014.pdf: 1412697 bytes, checksum: 19e6d4fab16722ee831616d29065c6dc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-17T10:26:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniela Medeiros Lobo de Andrade - 2014.pdf: 1412697 bytes, checksum: 19e6d4fab16722ee831616d29065c6dc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The research and the use of medicinal plants as therapeutic agents has been increasing in recent years and the jabuticaba (Myrciaria cauliflora) has occupied a favorable place in this segment by presenting biological properties due to their high antioxidant activity due to the presence of phenolic compounds. The aim of this study was to investigate the phytochemical characterization of EHAJ, evaluate the antioxidant potential of HAEJ and evaluate the influence of HAEJ on hemodynamic parameters in rat (in vivo) and the mechanisms involved in variation in vascular tone caused by HAEJ in aortas isolated of rat (in vitro). The quantification of the phenolic compounds in HAEJ was performed by a method that is based on the complexation of phenolic compounds present in the solution of ferric chloride (FeCl3) as measured by a spectrophotometer and ellagic acid quantitation was performed by analysis high performance liquid chromatography (HPLC). The phytochemical characterization of HAEJ was evaluated considering only one methodologie (mass spectrometry - ESI-MS) and antioxidant activity of HAEJ was evaluated considering two different methodologies (DPPH and differential pulse voltammetry - DPV). To achieve the experimental protocols in vivo, were inserted with the animals anesthetized, catheters in the right femoral vein and artery, and flow probes around the aorta for infusion of EHAJ, check blood pressure, heart rate and aortic blood flow, respectively. Besides the pressure was checked the vasorelaxant effect of HEAJ in preparations of isolated rat aorta pre-contracted with vasopressor agents. The concentration of nitric oxide produced by the endothelial cells in the presence of HEAJ was also evaluated by flow cytometry. Intravenous infusion of HEAJ (0.12 to 0.96 mg / kg) produced dose-dependent increase in aortic blood flow hypotension. In isolated arteries pre-contracted with contractile agonist, HEAJ induced concentration-dependent relaxation which was potentiated in preparations with intact endothelium (E+) (120μg/ml) as compared with preparations devoid of endothelium (E-) (1.92 mg / mL). And preparations pretreated with L-NAME, ODQ and MDL-12,330A reduced the relaxation caused by HEAJ, whereas pretreatment with diclofenado, atropine and propranolol did not alter the activity of HEAJ. In E- preparations pretreated with TEA, 4-AP, glibenclamide and ODQ, relaxation caused by HEAJ was reduced, while the clotrimazole pretreatment with CPA and does not alter the activity of HEAJ. Furthermore, HEAJ was able to decrease phenylephrine and KCl induced contractions. These findings suggest that the hypotension associated with HEAJ induces vascular relaxation; also suggests the involvement of such pathways cGMP / sGC and cAMP / AC and finally the involvement of potassium channels and calcium channels, this relaxation. / A pesquisa e a utilização de plantas medicinais como agentes terapêuticos tem sido crescente nos últimos anos e a jabuticaba (Myrciaria cauliflora) tem ocupado um lugar favorável neste segmento por apresentar propriedades biológicas, devido a sua alta atividade antioxidante decorrente da presença de compostos fenólicos. O objetivo do presente estudo foi verificar a caracterização fitoquímica do extrato hidroalcoólico de jabuticaba (EHAJ), o potencial antioxidante, avaliar a influência do EHAJ sobre os parâmetros hemodinâmicos em ratos (in vivo) e os mecanismos envolvidos na variação do tônus vascular provocada pelo EHAJ, em aorta isolada de ratos (in vitro). A quantificação dos compostos fenólicos no EHAJ foi realizada através de um método que se baseia na complexação dos compostos fenólicos presentes na amostra, com a solução de cloreto férrico (FeCl3), medida por espectrofotômetro e a quantificação do ácido elágico foi realizada através da análise por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE ou HPLC). A caracterização fitoquímica do EHAJ foi avaliada considerando apenas uma metodologia (espectrometria de massa - ESI-EM) e a atividade antioxidante do EHAJ foi avaliada considerando duas metodologias diferentes (DPPH e voltametria de pulso diferencial - VPD). Para realização dos protocolos experimentais in vivo foram inseridos, com os animais anestesiados, cateteres na veia e artéria femural direita, além de sondas de fluxo em torno da aorta, para infusão do EHAJ, verificação da pressão arterial, frequência cardíaca e fluxo sanguíneo aórtico, respectivamente. Além da pressão foi verificado o efeito vasorrelaxante do EHAJ em preparações de aortas isoladas de ratos, pré-contraídas com agentes vasoconstritores. Foi avaliado também, por citometria de fluxo, o aumento da concentração de óxido nítrico produzido pelas células endoteliais, na presença do EHAJ. A infusão intravenosa do EHAJ (0,12 a 0,96mg/kg) produziu hipotensão dose-dependente e aumento do fluxo sanguíneo aórtico. Em artérias isoladas, pré contraídas com agonista contrátil, o EHAJ induziu relaxamento concentração-dependente, que foi potencializado em preparações com endotélio íntegro (E+) (120μg/ml) quando comparado com preparações desprovidas de endotélio (E-) (1,92mg/ml). Preparações E+ pré-tratados com L-NAME, ODQ e MDL-12,330A reduziram o relaxamento provocado pelo EHAJ, enquanto que o pré-tratamento com diclofenaco, atropina e propranolol, não alterou a atividade do EHAJ. Em preparações E- pré-tratados com TEA, 4-AP, glibenclamida e ODQ, o relaxamento provocado pelo EHAJ foi reduzido, enquanto que o pré-tratamento com clotrimazol e CPA, não alterou a atividade do EHAJ. Além disso, o EHAJ foi capaz de diminuir contrações induzidas por fenilefrina e KCl. Estes achados sugerem que o EHAJ induz hipotensão associada ao relaxamento vascular; sugere também a participação de vias como cGMP/sGC e cAMP/AC e por último o envolvimento de canais de potássio e canais de cálcio, neste relaxamento.