O pré e pós-condicionamento isquêmico são fenômenos cardioprotetores que limitam o dano tecidual no infarto agudo do miocárdio. Seus efeitos benéficos ocorrem através da ativação de complexas vias sinalizadoras intracelulares, que têm a inibição da formação do poro de transição de permeabilidade mitocondrial como efetor final comum. A presença de fatores de risco, como a hipercolesterolemia, pode interferir nos resultados finais quando se lança mão de tais medidas cardioprotetoras. Entretanto, há na literatura achados contraditórios que não mostram interferência do colesterol elevado sobre a cardioproteção do pré-condicionamento isquêmico. No pós-condicionamento isquêmico, mais recentemente descrito, as primeiras evidências também mostram resultados conflitantes, que carecem de mais estudos. A baixa disponibilidade do óxido nítrico presente na hipercolesterolemia está associada a níveis elevados de dimetilarginina assimétrica, um inibidor da óxido nítrico sintetase, e pode ser o responsável por abolir os benefícios de ambas as medidas cardioprotetoras aqui estudadas. Procuramos, neste trabalho, avaliar a influência da hipercolesterolemia sobre o pré e pós-condicionamento isquêmico, e correlacionar os níveis de colesterol total e dimetilarginina assimétrica com o tamanho do infarto do miocárdio experimental em ratos anestesiados. Nós encontramos um maior tamanho do infarto nos animais hipercolesterolêmicos apesar do uso destas medidas cardioprotetoras. / Ischemic pre and postconditioning are cardioprotective phenomena that limit heart tissue damage in acute myocardial infarction. Its beneficial effects occur through the activation of complex intracellular signaling pathways, which have the inhibition of the formation of the mitochondria permeability transition pore as common final effector. The presence of risk factors such as hypercholesterolemia may interfere with final results when it makes use of such cardioprotective measures. However, there are contradictory findings in the literature which show no interference of high cholesterol on cardioprotection of ischemic preconditioning. In ischemic postconditioning, more recently described, the initial evidences also shows conflicting results, which require further studies. The low availability of nitric oxide present in hypercholesterolemia is associated with high levels of asymmetric dimethylarginine, an inhibitor of nitric oxide synthase, and may be responsible for removing the benefits of both cardioprotective measures studied here. The objective of our study was to assess the effect of hypercholesterolemia on ischemic pre and postconditioning and correlate the levels of total cholesterol and asymmetric dimethylarginine with the size of experimental myocardial infarction in anesthetized rats. We found a larger myocardial infarction in the hypercholesterolemic animals despite the use of these cardioprotective measures.

Orientador: Jose Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T10:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_ValeriaAguiar_M.pdf: 805920 bytes, checksum: c5cb3b29d51ba614d7c97314f653959b (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A síndrome metabólica (MetS) consiste em um conjunto de fatores de risco para doenças cardiovasculares. O óxido nítrico (NO) exerce papel fundamental na manutenção da homeostase cardiovascular. Portanto, a avaliação da biodisponibilidade do NO é de grande interesse clínico, pois possibilita a avaliação clínica da função vascular. A hipótese deste estudo é que o exercício aeróbio regular aumente a produção de NO em indivíduos com MetS. Para abordar esta questão, foram estudados 48 indivíduos sedentários, dos quais 20 indivíduos eram saudáveis (controles) e 28 pacientes com MetS. Dezoito pacientes com MetS foram submetidos a um período de 3 meses de exercício. Medimos as concentrações de nitrito no sangue total e no plasma, pelo método de quimioluminescência, em todos os participantes e depois do exercício no grupo com MetS. Além disso, avaliamos a concentração plasmática de guanosina monofosfato cíclica (GMPc), um segundo mensageiro, e dimetilarginina assimétrica (ADMA), um inibidor endógeno da óxido nítrico sintase, utilizando ensaios imunoenzimáticos comerciais. Para avaliar o estresse oxidativo, medimos as concentrações de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS) utilizando método fluorimétrico. Os resultados revelaram que o exercício não produziu alterações significativas nas concentrações plasmáticas de nitrito nos pacientes com MetS, mas as concentrações de nitrito no sangue total aumentaram significativamente após o exercício no grupo com MetS. Também neste grupo, observou-se que, a concentração de GMPc aumentou significativamente após o exercício, mas a concentração de ADMA e TBA-RS diminuíram. Nossos resultados sugerem que o exercício aeróbio aumenta a produção de NO em pacientes com MetS proporcionando efeitos benéficos ao sistema cardiovascular. / Abstract: The metabolic syndrome (MetS) denotes a clustering of cardiovascular risk factors. The nitric oxide (NO) is plays a pivotal role in the maintenance of cardiovascular homeostasis. The measurement of nitric oxide (NO) bioavailability is of great clinical interest in the assessment of vascular health. We hypothesized that regular aerobic exercise training increase NO production in individuals with MetS. To address this issue, we studied 48 sedentary individuals, 20 healthy subjects (controls) and 28 patients with MetS. Eighteen of those with MetS were subjected to a 3 months of exercise training. We measured by ozone-based chemiluminescence the whole blood and plasma nitrite concentration in all participants, including before and after training in MetS group. In addition, we assessed the plasma concentration of cyclic guanosine monophosphate (cGMP), a second messenger of NO, and asymmetrical dimethylarginine (ADMA), an endogenous nitric oxide synthase inhibitor, using commercial enzyme immunoassay. To evaluate oxidative stress we measured thiobarbituric acid reactive substances (TBA-RS) concentrations using fluorometric method. The results revealed that exercise training produced no significant changes in plasma nitrite concentrations in patients with MetS, but the whole blood nitrite concentrations significantly increased after training in MetS group. Also in this group we observed that, the cGMP concentration significantly increased but the concentration of ADMA, and TBA-RS decreased. Our findings suggest that aerobic exercise increases NO production in patients with metabolic syndrome providing beneficial effects on cardiovascular system. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2016-08-16T15:20:59Z No. of bitstreams: 1 barbarabrunamunizfiqueiredo.pdf: 1234783 bytes, checksum: b2e6590135c597d4befcbab1e5b68fe1 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-08-17T13:05:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barbarabrunamunizfiqueiredo.pdf: 1234783 bytes, checksum: b2e6590135c597d4befcbab1e5b68fe1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T13:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barbarabrunamunizfiqueiredo.pdf: 1234783 bytes, checksum: b2e6590135c597d4befcbab1e5b68fe1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A tuberculose (TB) é a segunda maior causa de morte por doença infecciosa no mundo. O Mycobacterium bovis é um dos causadores de TB que se dispersa quando o indivíduo infectado tosse ou espirra liberando gotículas contendo as micobactérias. As micobactérias têm preferência por tecidos bem oxigenados pelo pulmão onde irão desenvolver a infecção e ativação do sistema imunológico. Um dos primeiros tipos celulares envolvidos na tentativa de controle da infecção são os macrófagos residentes que irão fagocitar as micobactérias e produzir espécies reativas nitrogênio e oxigênio na tentativa de destruir o patógeno além de produzir citocinas que irão auxiliar na ativação da resposta imune adquirida. O tratamento da TB é feito através do uso de antibióticos, mas no período pré-antibióticos, a vitamina D (1,25(OH)2D3) era utilizada como forma de tratamento. A vitamina D é um hormônio esteroide que já se mostrou capaz de afetar a resposta imunológica a doenças infecciosas como a TB por meio da produção de catalecidina. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da vitamina D na atividade microbicida de macrófagos infectados com as linhagens atenuada (BCG) e selvagem (ATCC19274) de M. bovis. Foram utilizadas células da linhagem RAW 264.7 infectadas com as linhagens BCG e ATCC19274, tratadas com 1nM, 10nM e 100nM da forma ativa de vitamina D (1,25(OH)2D3). O teste de viabilidade celular demonstrou que as concentrações de 1,25(OH)2D3 utilizadas não são tóxicas para as células. Através da técnica de ELISA observamos que a 1,25(OH)2D3 tende a diminuir a produção das citocinas IL-6 e IL10. A contagem dos bacilos fagocitados realizada após coloração por Ziehl-Neelsen demonstrou que há diminuição na carga bacilar de forma proporcional ao aumento da concentração de 1,25(OH)2D3 corroborando com a diminuição da viabilidade das bactérias determinada pela contagem de CFU em lisado celular. Em relação à dosagem de óxido nítrico (NO), foi observado aumento proporcional à concentração de 1,25(OH)2D3. Em conclusão, esses dados sugerem que a diminuição na carga bacilar e menor número de CFU no lisado celular possa ser consequência do tratamento com 1,25(OH)2D3 que afeta algum mecanismo microbicida dos macrófagos, e que este mecanismo afetado pela 1,25(OH)2D3 possa ser a produção de óxido nítrico. / Tuberculosis (TB) is the second leading cause of death from infectious disease worldwide. The Mycobacterium bovis is one of the TB causing agent that disperses when the infected person coughs or sneezes releasing droplets containing mycobacteria. This mycobacteria have a preference for tissues well oxygenated such as lungs where they will develop the infection, initiating the immune response. One of the first cell types involved in controlling the infection are the resident macrophages which will phagocytose mycobacteria and within the phagosome, producing reactive species nitrogen and oxygen in an attempt to destroy the pathogen, in addition to cytokines production, which construct the acquired immune response. TB treatment is done by the use of antibiotics, but in the pre-antibiotic period, vitamin D was used as a treatment. Vitamin D is a steroid hormone that has been shown to affect the immune response to infectious diseases such as TB by catalecidina production. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of vitamin D in the microbicidal activity of macrophages infected with the attenuated (BCG) and virulent (ATCC19274) strains of M. bovis. For this study were used cell line RAW 264.7 infected with the BCG strains and ATCC19274, treated with 1nM, 10nM and 100nM of the active form of vitamin D. The cell viability test showed that the concentrations used are non-toxic. Through ELISA we observed that vitamin D tends to decrease the production of IL-6 and IL-10 cytokines. The bacilli count after Ziehl-Neelsen staining demonstrated that there is a reduction in bacterial load in proportion to the concentration of vitamin D, confirming the reduction of viability of bacteria determined by counting CFU. The dosage of nitric oxide (NO) showed increased proportional to the concentration of vitamin D. We can conclude that a reduction in bacterial load and CFU count may be a result of treatment with vitamin D that affects some microbicidal mechanism of macrophage, and that this mechanism affected by vitamin D may be nitric oxide production.

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:48:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_FabioHenriqueda_D.pdf: 1675795 bytes, checksum: d2c520651641831b55ef2e2707792e5f (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A prevalência da disfunção erétil (DE) aumenta progressivamente com o envelhecimento, sendo 29% em homens de meia-idade (40-49 anos). O aumento do estresse oxidativo tem sido apontado como uma das principais causas das complicações vasculares decorrentes do envelhecimento, podendo contribuir para a DE na meia-idade. Uma das principais consequências do aumento do estresse oxidativo é a inativação do óxido nítrico (NO) pelas altas concentrações de ânion superóxido (O2-). O NO pode reagir com o O2-, produzindo peroxinitrito (ONOO-), reduzindo assim a biodisponibilidade de NO e o relaxamento dos corpos cavernosos. Assim, propusemos a hipótese que o aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) nos corpos cavernosos dos ratos de meia-idade (CCRM) contribui para a DE nesta faixa etária. Para tanto, utilizamos ratos jovens (3,5 meses) e de meia-idade (10 meses). Na primeira etapa, estudamos o papel do estresse oxidativo sobre os mecanismos relaxantes de CCRM. A pressão intracavernosa (in vivo) foi significativamente menor nos ratos de meia-idade. Os relaxamentos produzidos pela acetilcolina (ACh; 10 nM ¿ 10 mM), nitroprussiato de sódio (SNP; 10 nM ¿ 10 mM), sildenafil (1 nM ¿ 10 µM), BAY 41-2272 (1 nM ¿ 10 µM) e estimulação elétrica (EFS; 8 ¿ 32 Hz) foram significativamente menores nos CCRM, sendo estes prevenidos pela pré-incubação com apocinina (100 µM) ou superóxido dismutase (SOD; 75 U/ml). O tratamento crônico com apocinina (85 mg/rato/dia, por 4 semanas) também preveniu a redução dos relaxamentos induzidos pela ACh, SNP e EFS em CCRM, sem modificar as respostas nos ratos jovens. O relaxamento induzido pelo 8-Br-GMPc (10 nM ¿ 300 µM) permaneceu inalterado nos CCRM. Os níveis de GMPc basais e estimulados pelo SNP ou BAY 41-2272 foram significantemente menores nos CCRM em comparação com o grupo jovem, sendo restaurados pela apocinina ou SOD. A expressão protéica da nNOS, fosfo-eNOS (Ser-1177) e GCs (subunidades ?1 e ?1) foi significativamente menor nos CCRM, mas nenhuma mudança foi observada para a expressão protéica da eNOS total e fosfo-eNOS (Thr-495). A expressão do RNAm da gp91phox foi maior nos CCRM. A expressão do RNAm da SOD-1 foi similar entre o grupo jovem e de meia-idade. Os níveis basais de ERO foram 64% maiores nos CCRM em comparação com o grupo jovem. Na segunda etapa do nosso estudo, estudamos o papel do estresse oxidativo sobre os mecanismos contráteis dos CCRM. As respostas contráteis induzidas pela EFS (4 ¿ 32 Hz) foram significativamente maiores nos CCRM, as quais foram acompanhadas por um aumento de 2 vezes na expressão protéica da tirosina hidroxilase. As respostas contráteis induzidas pela fenilefrina também foram maiores nos CCRM. O tratamento crônico com apocinina (85 mg/rato/dia, por 4 semanas) restaurou o aumento da contração induzida pela fenilefrina e EFS, assim como a expressão protéica para tirosina hidroxilase e GCs (subunidade ?1 e ?1) nos CCRM. Em suma, nossos resultados mostram que a DE em ratos de meia-idade está associada à redução da biodisponibilidade do NO devido o aumento da expressão do RNAm da gp91phox e redução da expressão protéica da nNOS e fosfo-eNOS (Ser-1177). A DE na meia-idade também está ligada a aumento da expressão da tirosina hidroxilase e da resposta contrátil. A redução da expressão da GCs (subunidades ?1 e ?1) também parece participar da DE em ratos de meia-idade. O tratamento crônico com apocinina reverteu os efeitos deletérios das ERO em ratos meia-idade, melhorando assim a função erétil. Portanto, a diminuição do estresse oxidativo no tecido erétil por terapias antioxidantes pode ser uma boa estratégia farmacológica para o tratamento da DE em estágios iniciais de impotência sexual masculina / Abstract: The prevalence of erectile dysfunction increases progressively with age, being 29% in middle-aged men (40- to 49-year-old men). The increased oxidative stress has been implicated as a major cause of ED-associated vascular complications as and may contribute to ED in middle age. One major consequence of the increased oxidative stress is the inactivation of nitric oxide (NO) by high concentrations of superoxide anion (O2-). The NO can react with O2-, producing peroxynitrite (ONOO-), thus reducing the NO bioavailability and the corpus cavernosum relaxation. Thus, we hypothesized that increases in reactive-oxygen species (ROS) production in corpus cavernosum of middle-aged rats (CCMR) contributes to ED in this age group. Therefore, we used young (3.5-month) and middle-aged (10-month) rats. We first studied the role of stress oxidative on the relaxant mechanisms of CCMR. The ICP was significantly reduced in middle-aged rats. The relaxations induced by acetylcholine (ACh; 10 nM ¿ 10 mM), sodium nitroprusside (SNP; 10 nM ¿ 10 mM), sildenafil (1 nM ¿ 10 µM), BAY 41-2272 (1 nM ¿ 10 µM) and electrical field-stimulation (EFS; 8 ¿ 32 Hz) were significantly decreased in CCMR, all of which prevented by pre-incubation with apocynin (100 µM) or superoxide dismutase (SOD; 75 U/ml). The treatment chronic with apocynin (85 mg/rat/day, 4 weeks) also prevented the reduction of relaxations induced by ACh, SNP and EFS in CCMR, without changing the response in the young rats. Relaxation induced by 8-Br-GMPc (10 nM ¿ 300 µM) remained unchanged. Basal levels of cGMP and stimulated with SNP or BAY 41-2272 were significantly lower in CCMR in comparison with young group, which were restored by apocynin or SOD. Protein expression of nNOS, phosphorylated eNOS (p-eNOS) (Ser-1177) and sGC (?1 and ?1 subunits) was reduced in CCMR, but no changes were observed in the protein expression for total eNOS and p-eNOS (Thr-495). The mRNA expression for the gp91phox was higher in CCMR. The mRNA expression for the SOD-1 was similar between young and middle-aged groups. Basal levels of ROS were 64% higher in the middle-aged in comparison with young group. In a second part, we studied the role of stress oxidative on the contractile mechanisms of CCMR. Contractile responses elicited by EFS (4-32 Hz) were significantly greater in CCMR, which were accompanied by a 2.0-fold higher protein expression of tyrosine hydroxylase. The contractile responses induced by phenylephrine were also greater in middle-aged group. The treatment chronic with apocynin (85 mg/rat/day, 4 weeks) restored the increase of contraction induced by phenylephrine and EFS, as well as the protein expression of tyrosine hydroxylase and sGC (?1 and ?1 subunits) in CCMR. In conclusion, our data shows that ED seen in middle-aged rats is associated with decreased NO bioavailability due to upregulation of mRNA expression for gp91phox and downregulation of nNOS e p-eNOS (Ser-1177). The ED in middle aged is also associated with increased protein expression of tyrosine hydroxylase and contractile responses. Downregulation of GCs (?1 and ?1 subunits) in cavernosal also appears to participate to ED in middle-aged rats. The treatment chronic with apocynin reverted the deleterious effects of ROS in middle-aged rats, thus ameliorating the erectile function. Therefore, decrease of oxidative stress in erectile tissue by antioxidant therapies may be a good pharmacological approach to treat ED at early stages of the male impotence / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T12:07:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcilli_RaphaelHenriqueMarques_M.pdf: 7897278 bytes, checksum: 7868f663066dcea221688ac8dc901af2 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Condições fisiológicas associadas à diminuição do nível de óxido nítrico (NO) na vasculatura, como na síndrome de Raynaud e na angiopatia diabética, têm estimulado o desenvolvimento de novos biomateriais capazes de liberar NO topicamente. Neste trabalho efetuamos a modificação do poli(álcool vinílico), PVA, pela sua reticulação química através da esterificação com o ácido mercaptosuccínico. Esta reação permitiu a moldagem de filmes de PVA sulfidrilados (PVA-SH). A calorimetria diferencial de varredura e a difratometria de raios X mostraram que a reação de reticulação suprimiu a cristalização do PVA, levando a um material sem poros, com uma distribuição homogênea de grupos sulfidrila(-SH). Os grupos hidroxila remanescentes na rede de PVA-SH conferiram hidrofilicidade parcial ao material, associada a um grau de intumescimento de 80 a 120 % em meio aquoso. Os filmes de PVA-SH, foram submetidos a uma reação de S-nitrosação dos grupos ¿SH produzindo um PVA contendo grupos S-nitrosotióis (PVA-SNO). Medidas amperométricas e por quimiluminescência mostraram que os filmes de PVA-SNO contém ca. 6 nmols de NO/mg de filme e são capazes de liberar NO espontaneamente após imersão em meio fisiológico. A fluxometria por laser Doppler, usada para medir o fluxo sanguíneo na microcirculação dérmica, permite verificar que a aplicação tópica dos filmes de PVA-SNO hidratados sobre a pele saudável leva a um aumento dependente da dose e do tempo de mais de 5 vezes no fluxo sanguíneo basal em menos de 10 min de aplicação com uma ação prolongada de mais de 4 h durante a aplicação contínua. Estes resultados mostram que os filmes de PVA-SNO podem representar um novo material com potencial para o tratamento tópico no tratamento de desordens microvasculares da pele / Abstract: Pathological conditions associated with the impairment of nitric oxide (NO) production in the vasculature, like Raynaud¿s syndrome and diabetic angiopathy, have stimulated the development of new biomaterials capable of delivering NO topically. In this work, we have modified poly(vinyl-alcohol) (PVA) by chemically crosslinking it via esterification with mercaptosuccinic acid. This reaction allowed the casting of sulfhydrylated PVA (PVA-SH) films. Differential scanning calorimetry and X-ray diffractometry showed that the crosslinking reaction suppressed the crystallization of PVA, leading to a non-porous material with a homogeneous distribution of -SH groups. The remaining hydroxyl groups in the PVA-SH network confered partial hydrophylicity to the material, associated with a swelling degree of 80 to 120 % in aqueous medium. The PVA-SH films were subjected to an S-nitrosation reaction of the SH groups yielding a PVA containing S-nitrosothiol groups (PVA-SNO). Amperometric and chemiluminescence measurements showed that the PVA-SNO films contain ca. 6 nmol NO/mg of film and are capable of releasing NO spontaneously after immersion in physiological medium. Laser Doppler-flowmetry, used to assess the blood flow in the dermal microcirculation, showed that the topical application of hydrated PVA-SNO films on the health skin leads to a dose and time dependent increase of more than 5-fold in the dermal baseline blood flow in less than 10 min with a prolonged action of more than 4 h during continuous application. These results show that the PVA-SNO films may represent a new material with potential for the topical treatment of microvascular skin disorders / Mestrado / Físico-Química / Mestre em Química

Orientadores: Carlos Arturo Levi D'Ancona, Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T22:31:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miyaoka_Ricardo_D.pdf: 38810158 bytes, checksum: a73083863b9c18c44630b11b53472286 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: A terapia medicamentosa expulsiva no tratamento da calculose ureteral visa abreviar o tempo para eliminação espontânea do cálculo e evitar a necessidade de uma intervenção cirúrgica. As terapêuticas atuais baseiam-se essencialmente em bloqueadores de canais de cálcio e bloqueadores alfa-adrenérgicos, mas têm eficácia questionável, conforme demonstram estudos clínicos mais recentes e com alto nível de evidência. Assim, faz-se necessária a investigação persistente de novos agentes para este fim. Objetivos: Descrever modelo padronizado de contratilidade ureteral in vitro com segmentos isolados de ureter humano a fim de avaliar o relaxamento provocado pelo estimulador da guanilato ciclase solúvel BAY 41-2272; avaliar o envolvimento da via do NO-GMPc-PDE5 e dos canais de potássio e urotélio neste processo; avaliar a expressão das enzimas guanilato ciclase solúvel (GCs), óxido nítrico sintase (NOS) e fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) no ureter por meio de imunohistoquímica. Materiais e Métodos: Segmentos de ureter distal de 17 doadores falecidos de múltiplos órgãos de ambos sexos (24 ¿ 65 anos de idade, média 40 ± 3.2 anos; homens 2:1 mulheres) foram utilizados. A contratilidade ureteral foi avaliada em banho de solução de Krebs e o tecido pré-contraído com KCl 80nM . Os valores de potência foram determinados como o log negativo da concentração molar para induzir 50% do relaxamento máximo nos espécimes pré-contraídos com KCl. O teste não-pareado T de Student foi usado para as comparações. Resultados: O BAY 41-2272 produziu relaxamento em ureter isolado em tecidos pré-contraídos com KCl (80 mM) com valores de potência (pEC50) e relaxamento máximo (Emax) de 5,82 ± 0,12 (n=8) e 84 ± 5%, respectivamente. A adição do inibidor da sintase de óxido nítrico (L-NAME, 100 ?M, n=6) ou da guanilato ciclase solúvel (ODQ, 10 ?M, n=6) reduziu em, 21 e 44% (P<0,05) a Emax, respectivamente, sem alteração dos valores de pEC50. A pré-incubação do inibidor da PDE5, sildenafil (100 nM) potencializou (pEC50: 6,39 ± 0,10, n=8, P<0,05) o relaxamento induzido pelo BAY 41-2272 em comparação à curva controle. A adição dos bloqueadores inespecíficos de canais de potássio (glibenclamida) ou ATP-dependentes (tetraetilamônio ¿ TEA) e a ausência de urotélio não interferiram nos parâmetro farmacológicos do BAY 41-2272. A imunorreatividade mostrou a presença da eNOS no endotélio de estruturas vasculares do ureter e nNOS no urotélio, estruturas nervosas e, fracamente, na musculatura lisa. A GCs é expressa tanto no urotélio como na musculatura lisa. A PDE5 é expressa, exclusivamente, na musculatura lisa. Conclusão: O BAY 41-2272 provoca relaxamento em segmentos ureterais humanos pré-contraídos com KCl em modelo in vitro de forma concentração-dependente, essencialmente pela ativação da guanilato ciclase presente no músculo liso, e não no urotélio, apesar de um mecanismo GMPc-independente poder estar envolvido. Esta nova classe farmacológica pode ter papel no tratamento clínico de cálculos ureterais obstrutivos / Abstract: Introduction: Medical expulsive therapy in the treatment of ureteral calculi aims to reduce the timeframe for spontaneous stone expulsion avoiding an unwanted surgical intervention. Current clinical therapy is essentially based upon the use of calcium channel blockers and alpha-adrenergic antagonists which have been recently shown to offer questionable efficacy according to well-designed recent clinical trials with a high level of evidence. As such, it is necessary to continue the pursuit for new agents that could abbreviate the time for ureteral stone expulsion. Objectives: To report on a standardized ureteral contractility in vitro model with isolated human ureter segments in order to characterize the relaxation induced by soluble guanylate cyclase stimulator BAY 41-2272; to assess the involvement of NO-cGMP-PDE5 pathway and potassium channels in ureteral relaxation; to assess the immunohystochemical expression of endothelial (eNOS) and neuronal NO synthase (nNOS), soluble guanylate cyclase (sGC) and type 5 phosphodiesterase (IPDE5) in human ureter. Materials and Methods: Distal ureteral segments harvested from 17 multiple organs deceased donors (age 24-65; mean 40 ± 3.2; men/women ratio 2:1) were used. Ureteral contractility was assessed with segments immersed into Kreb¿s solution after being pre contracted with 80mM KCl. BAY 41-2272 induced ureteral relaxation in KCl pre contracted isolated segments with pEC50 and Emax of 5,82 ± 0,12 (n=8) and 84 ± 5%, respectively. Addition of a NOS inhibitor (L-NAME, 100 ?M, n=6) or soluble guanylate cyclase (ODQ, 10 ?M, n=6) led to a reduction of 21% and 44% in Emax values (P<0,05), respectively. pEC50 values remained unaltered. PDE5 inhibitor sildenafil (100 n M) enhanced (pEC50: 6,39 ± 0,10, n=8, P<0,05) the relaxing effect provoked by BAY 41-2272 compared with control curve. Neither unspecific potassium channel blockers glibenclamide nor ATP-dependent potassium channel blocker tetraethylammonium (TEA) nor ureteral urothelium removal influenced the relaxation response by BAY 41-2272. Immunochemistry markers showed eNOS expression in ureteral vascular endothelium, nNOS in urothelium, nerve structures and with less intensity in smooth muscle. Soluble guanylate cyclase was present in urothelium and smooth muscle; and PDE5 was only expressed in ureteral smooth muscle. Conclusions: BAY 41-2272 relaxes human isolated ureter segments in a concentration-dependent manner, mainly by activating the sGC enzyme in smooth muscle cells rather than in the urothelium, although a cyclic guanosine monophosphate-independent mechanism may exist. This pharmacological class may have a role in treating ureteral obstructive calculi / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutor em Ciências da Cirurgia

Orientador: Aníbal Eugênio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:12:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_ViniciusVercesiAlmadaNogueira_M.pdf: 1353533 bytes, checksum: b60bd544902662a56e45ea9cf1e14b01 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Além de essencial na respiração celular, a mitocôndria é considerada uma organela de papel fundamental em processos de sinalização e morte celular. A geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) e de espécies reativas de nitrogênio (ERNs) pela mitocôndria podem ser consequência destes processos de sinalização tanto em condições fisiológicas quanto em patologias, tais como a dislipidemia e câncer. A transição de permeabilidade mitocondrial (TPM) é um tipo de permeabilização não-seletiva da membrana mitocôndrial interna que permite a passagem de moléculas de até 1,5 KDa, causando dissipação do potencial eletroquímico de H+ e inchamento da organela. O termo transição é usado porque a permeabilização pode ser parcialmente revertida, logo após o inicio do processo, pela adição de quelantes de Ca2+ como o EGTA, por exemplo, ou redutores tiólicos. A oxidação de grupamentos tiólicos promove a TPM. Os experimentos apresentados nesta tese indicam o composto 2-(4-Carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-l-oxyl-3-oxide (cPTIO) caracteriza-se como um inibidor da TPM. As pequenas alterações observadas em relação à respiração e fosforilação oxidativa não se correlacionam com a abertura do PTP, pelo menos com base na literatura corrente. Em outras palavras, a presença de cPTIO diminuiu os níveis de NOo mitocondrial e desviou a reação deste composto com o ânion superóxido diminuindo a produção de peroxinitrito, provável indutor de abertura do PTP nestas condições experimentais / Abstract: In addition to be the site of cellular respiration, the mitochondrion has important role in cell signaling for cell physiology and death. The generation of reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS) by the mitochondrion can participate in cellular signaling both in physiological and pathological conditions, such as dyslipidemia and cancer. The Mitochondrial Permeability Transition (MPT) is a non-selective inner membrane permeabilization that enables free passage of molecules up to 1.5 kDa, dissipating the H+ electrochemical gradient and the organelle's swelling. The term transition is applied because the permeabilization can be partially reverted, right after the beginning of the process, by chelating extramitochondrial Ca2+ with EGTA, for example, or by using thiol reducers. The oxidation of membrane protein thiols leads to MPT. The experiments shown in this thesis indicate that the compound 2-(4-Carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-l-oxyl-3-oxide (cPTIO) has proven to be a strong inhibitor agent of the MPT. The small changes observed in relation to respiration and oxidative phosphorylation did not correlate with the opening of PTP, at least on the basis of the current literature. In other words, the presence of cPTIO decreased levels of NOo and mitochondrial diverted reaction of this compound with superoxide anion decreasing production of peroxynitrite, likely inducing PTP opening under these experimental conditions / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T11:05:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calmasini_FabianoBeraldi_M.pdf: 937196 bytes, checksum: e7b4d280e06537641c107fb45b2ceb67 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A próstata é densamente inervada pelo sistema nervoso autônomo simpático, parassimpático e não-adrenérgico não-colinérgico (NANC) os quais atuam sinergicamente para o correto funcionamento deste órgão. O principal representante da inervação NANC é o óxido nítrico (NO), porém sua função na próstata ainda não está bem definida. Sendo assim, o presente trabalho utilizou o modelo de inibição crônica da NO sintase (NOS) com L-NAME para avaliar possíveis alterações funcionais, morfológicas e bioquímicas da musculatura lisa prostática (MLP) em ratos adultos Wistar (200-250 g). Os ratos foram tratados por 4 semanas com L-NAME na dose de 20 mg/kg/dia através de ingesta hídrica. Especificamente, realizamos os seguintes experimentos na próstata dos ratos controles e tratados com L-NAME: 1) curvas concentração-efeito in vitro à fenilefrina (agonista ?1-adrenérgico) e ao carbacol (agonista muscarínico não seletivo), na presença e ausência do inibidor seletivo da rho-quinase Y27632 (1 uM), e curvas concentração-efeito ao agonista purinérgico, ?,?-metileno ATP, e à estimulação elétrica (contração neurogênica); 2) curvas concentração-efeito a agentes relaxantes como nitroprussiato de sódio (doador de NO), Y27632 (inibidor da rho-quinase) e isoproterenol (agonista ?-adrenérgico); 3) determinação dos níveis de AMPc e GMPc; e 4) análise histomorfométrica. A próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME apresentou aumento em seu peso relativo, alterações histomorfométricas caracterizadas como aumento na área epitelial e na muscular lisa e diminuição no índice de contorno dos ácinos. A contração da MLP induzida pela fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e estímulo elétrico foi maior nos animais tratados cronicamente com L-NAME em relação aos animais controle. A incubação in vitro com o inibidor da rho-quinase, Y27632, restaurou ao nível controle as contrações aumentadas induzidas pela fenilefrina e carbacol no grupo L-NAME. O relaxamento da MLP nos animais do grupo L-NAME produzido pelo isoproterenol foi significativamente menor comparado ao grupo controle. Não houve diferença para o relaxamento induzido pelo SNP e Y27632 entre os grupos. Os níveis de AMPc e GMPc na próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME foram significativamente menores em relação aos animais do grupo controle. O tratamento com L-NAME não alterou os níveis das espécies reativas de oxigênio. Em suma, nossos dados mostram que a inibição crônica de NO leva a alterações funcionais in vitro da MLP caracterizadas por aumento na resposta contrátil à fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e ao estímulo elétrico, além de redução no relaxamento ?-adrenérgico. A inibição da via da rho-quinase in vitro restaurou os padrões contráteis para os agonistas adrenérgicos e colinérgicos. A deficiência crônica de NO gera alterações funcionais, bioquímicas e morfológicas em próstata de ratos com participação da via da rho-quinase nesse processo / Abstract: The prostate is densely innervated by the sympathetic and parasympathetic as well as non-adrenergic non-cholinergic (NANC) autonomic innervation that act synergistically for its correct functioning. The main NANC mediator is nitric oxide (NO), but the role of this mediator in the regulation of prostate smooth muscle (PSM) is not well established. Thus, the present study used the model of chronic NOS inhibition with L-NAME to evaluate the functional, morphological and biochemical alterations in PSM of Wistar adult male rats (200-250 g). Rats were treated with L-NAME (20 mg/kg/day) for 4 weeks in the drinking water. Specifically, we performed the following experiments in prostates from control and L-NAME-treated rats: 1) in vitro concentration-response curves to phenylephrine (?1-adrenergic agonist) and carbachol (non-selective muscarinic agonist) in the presence and absence of the selective rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) and concentration-response curves to the purinergic agonist ?-?-methylene-ATP, as well as electrical stimulation (neurogenic contraction); 2) in vitro concentration-response curves to the relaxing agents sodium nitroprusside (NO donor), Y27632 (rho-kinase inhibitor) and isoproterenol (non-selective ?-adrenergic receptor agonist); 3) determination of cAMP and cGMP levels, and 4) histomorphometric analysis. The relative weight of the prostate from L-NAME-treated rats was greater than control animals. Histomorphometric changes characterized by an increase in epithelial acini and smooth muscle area, as well as by a decrease in luminal contour índex were found in L-NAME treated rats. The phenylephrine and carbachol-induced prostate contractions were higher in L-NAME compared with control group. Prior incubation of PSM with the rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) significantly inhibited the enhanced carbachol- and phenylephrine-induced PSM contractions in L-NAME group, restoring the Emax to control levels. The PSM contractions induced by ?,?-methylene ATP and electrical field stimulation were also greater in L-NAME compared with control group. The PSM-induced relaxations in response to SNP remained unaltered, whereas isoproterenol-induced relaxations were lower in L-NAME compared with control group. The cAMP and cGMP levels in prostate homogenate were lower in L-NAME compared with control group. No difference was found in reactive oxygen species levels. In summary, our data showed that chronic NO inhibition led to in vitro functional changes in PSM characterized by increased contractile response to phenylephrine, carbachol, ?-?-methylene-ATP and electrical-field stimulation, accompanied by reduction of ?-adrenergic-induced relaxation. The in vitro inhibition of rho-kinase pathway restored the contractile pathway for the adrenergic and cholinergic agonists. The chronic NO-deficiency generates functional, biochemical and morphological changes in rat prostate with involvement of the rho-kinase pathway in this process / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T22:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_ThiagoQuinagliaAraujoCosta_D.pdf: 1420649 bytes, checksum: e60823c9257fdc54d91d49f992550d11 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Objetivo: A falha no controle da pressão arterial (PA), apesar do uso de três ou mais antihipertensivos caracteriza hipertensão arterial resistente (HAR). A disfunção endotelial está intrinsecamente associada a esta condição e inibidores da fosfodiesterase 5 (iPDE5)-inibindo a degradação de GMP cíclico (GMPc)-reduzem a PA em pacientes com HAR. A administração aguda de iPDE5 poderia melhorar parâmetros hemodinâmicos, endoteliais e de função diastólica do ventrículo esquerdo (FDVE) em pacientes com HAR e o polimorfismo T-786C da sintase de óxido nítrico (NO) endotelial (eNOS) modularia essas respostas. Métodos: Os pacientes (n = 26) foram dispostos em três grupos de acordo com o genótipo da eNOS T-786C: CC (n = 8), a CT (n = 9) e TT (n = 9). Doses crescentes de sildenafil oral (37,5, 50 e 100 mg) e placebo (em datas separadas por pelo menos 2 semanas) foram administradas a intervalos de 30 minutos, enquanto parâmetros hemodinâmicos (não invasivos e contínuos) foram obtidos. Também foram determinados: FDVE; vasodilatação mediada por fluxo (VMF); e nitrito e GMPc plasmáticos ao início e término do protocolo. Resultados: PA média (PAM) e resistência periférica total (RPT) diminuíram no grupo total (n=26) após o sildenafil (84,17 ± 21,04-75 ± 17,21 mmHg, 1149 ± 459,7-1,037 dyn.s/cm-5 ± 340, respectivamente; p<0,05). Similarmente, o sildenafil melhorou a FDVE (volume atrial esquerdo: 25 ± 5,8-20 ± 4,4; Tempo de relaxamento isovolumétrico: 104 ± 19,33-88 ± 15,22; E/e'septal: 9,7 ± 3,8-7,9 ± 2,9; E/e' lateral: 7,7 ± 3,4-6,4 ± 3,2; p<0,05). Os grupos TT e TC obtiveram redução sustentada da RPT ao longo do protocolo. No CC, os valores da RPT retornaram aos basais após as doses. Não houve alterações significativas da VMF, nitrito e GMPc após a administração do sildenafil. Conclusão: A administração aguda de iPDE5 melhora o perfil hemodinâmico e função diastólica em HAR e o polimorfismo T-786C da eNOS modula a resposta hemodinâmica, mas não a FDVE / Abstract: Purpose: Failure to control blood pressure (BP) despite the use of three or more drugs characterizes resistant hypertension (RHTN). Impaired endothelial function is associated to this condition and phosphodiesterase-5 inhibitors (PDE5i)-inhibiting cGMP breakdown-reduce BP in RHTN patients. We hypothesized that acute administration of PDE5i could ameliorate hemodynamic, endothelial parameters and left ventricular diastolic function (LVDF) in RHTN patients and that the T-786C nitric oxide (NO) endothelial synthase (eNOS) polymorphism could modulate these responses. Methods: Subjects (n= 26) were arranged into three groups: CC (n= 8), TC (n= 9) and TT (n= 9) according to T-786C eNOS genotype. Increasing doses of oral sildenafil (37.5, 50 and 100 mg) and placebo (in protocols at least 2 weeks apart) were given at 30 minute intervals while continuous non-invasive hemodynamic measures were assessed. LVDF, Flow Mediated Dilation (FMD), plasma nitrite and cGMP were also determined. Results: Mean arterial pressure (MAP) and total peripheral resistance (RPT) decreased in all patients (84.17 ± 21.04 to 75 ± 17.21 mmHg; 1149 ± 459.7 to 1037 ± 340 dyn.s/cm-5, respectively; p<0.05). Likewise, sildenafil improved LVDF parameters (Left atrial volume: 25 ± 5.8 to 20 ± 4.4; Isovolumetric relaxation time: 104 ± 19.33 to 88 ± 15.22; E/e' septal: 9.7 ± 3.8 to 7.9 ± 2.9; E/e' lateral: 7.7 ± 3.4 to 6.4 ± 3.2; p<0.05). While TT and TC genotype groups sustained RPT reduction during the increasing sildenafil doses, CC group failed to sustain the RPT drop, by the end of the protocol. No statistical changes were found in FMD, nitrite and cGMP after PDE5i administration. Conclusion: Our data suggest PDE5i acutely improves hemodynamic profile and diastolic function in RHTN, also T-786C eNOS polymorphism modulates the hemodynamic response, but not diastolic function / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_FabioHenriqueda_M.pdf: 928654 bytes, checksum: 7b8e558bfec3bcbb3386e2a22c892123 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A prevalência de obesidade vem aumentando a cada ano, sendo um dos principais problemas de saúde pública. A obesidade é considerada importante fator de risco para o surgimento de resistência à insulina, dislipidemia, diabetes tipo 2 e hipertensão arterial. Estes fatores podem atuar de maneira sinérgica no desenvolvimento da disfunção erétil. Entretanto, até o momento, poucos estudos procuraram avaliar os mecanismos envolvidos na disfunção erétil causada pela obesidade. Por isso, utilizando o modelo de obesidade induzida por dieta hiperlipídica em camundongos, o presente trabalho procurou caracterizar a disfunção erétil nestes animais. Para tanto, utilizamos experimentos funcionais in vivo e in vitro, assim como ensaios bioquímicos e morfológicos. Especificamente, realizamos os seguintes experimentos nos corpos cavernosos dos camundongos controles e tratados com dieta hiperlipídica por 10 semanas: 1) curvas concentração-efeito in vitro a agentes relaxantes dependente (acetilcolina) e doador de óxido nítrico (nitroprussiato de sódio), assim como à estimulação elétrica (relaxamento nitrérgico); 2) curvas concentração-efeito in vitro a agentes contráteis como fenilefrina (agonista 'alfa' 1-adrenérgico) e endotelina-1, assim como a estimulação elétrica (contração neurogênica); 3) medida da pressão intracavernosa in vivo; 4) determinação dos níveis de GMPc; e 5) análise histomorfométrica. Os animais tratados com dieta hiperlipídica apresentaram aumento do peso corporal, da gordura epididimal, dos níveis séricos de colesterol total e LDL, e resistência à insulina. Os animais tratados com dieta hiperlipídica apresentaram redução da pressão intracavernosa (in vivo). Os relaxamentos nitrérgico e dependente de endotélio foram menores nos corpos cavernosos dos camundongos obesos. Por outro lado, as respostas contrateis induzidas pela fenilefrina, endotelina-1 e estimulação elétrica foram maiores nestes animais. Os níveis de GMPc nos corpos cavernosos dos animais tratados com dieta hiperlipídica foram significantemente menores do que nos tecidos de animais controles. Os corpos cavernosos dos animais tratados com dieta hiperlipídica não sofreram alterações histomorfométricas. Para investigar o efeito da resistência à insulina na função erétil, tratamos os animais com o sensibilizador de insulina, metformina, por 14 dias (300 mg/Kg/dia). O tratamento com metformina restaurou o relaxamento nitrérgico, o relaxa- mento dependente de endotélio, e o aumento da resposta contrátil à fenilefrina dos corpos cavernosos dos animais tratados com dieta hiperlipídica, sem alterar o peso corporal e a gordura epididimal. Em suma, nossos resultados mostram que o tratamento com dieta hiperlipídica por 10 semanas causa redução da pressão intracavernosa, assim como do relaxamento nitrérgico e dependente de endotélio e, concomitantemente, aumento da resposta contrátil in vitro. O tratamento com metformina reverteu a sensibilidade à insulina e o quadro de disfunção erétil, sugerindo que a disfunção erétil nos camundongos tratados com dieta hiperlipídica é resultante da resistência à insulina associada à obesidade / Abstract: The prevalence of obesity is increasing every year, and a becoming a major public health problem. Obesity is considered an important risk factor for development of insulin resistance, dyslipidemia, diabetes mellitus type 2 and arterial hypertension. These are risk factors that act synergistically in the development of erectile dysfunction. However, so far few studies have investigated the mechanisms involved in erectile dysfunction caused by obesity. Therefore, using a model of obesity induced high-fat diet in mice, the present study searched to characterize erectile dysfunction in these animals. Thus, we used functional experiments in vivo and in vitro, biochemical and morphological test. Specifically, the following experiments were performed in corpus cavernosum of control and high-fat fed mice. 1) concentration response curves in vitro to relaxing agents endothelium-dependent (acetylcholine) and NO donor (sodium nitroprusside), as well as to electrical-field stimulation (EFS) (nitrergic relaxations); 2) Concentration-response curves in vitro to the contractile agents phenylephrine ('alfa'-1 adrenergic receptor agonist) and endothelin-1, as well as to EFS (neurogenic contraction; 3) measurement of intracavernous pressure in vivo; 4) determination of cGMP levels; 5) hystomorfometric measurement. Mice treated with high-fat diet showed increased body weight, epididimal fat, total choles-terol and LDL, and insulin resistance. The corpus cavernosum of high-fat fed mice showed impaired intracavernous pressure. The endothelial and nitrergic relaxations were lower in corpus cavernosum of high-fat fed mice. Moreover, the contractile responses induced by phenylephrine, endothelin-1 and electrical stimulation were increase in this animals. The cGMP levels were lower in corpus cavernosum of high-fat fed mice in comparison with control mice. There were no morphological alterations in erectile tissue of mice treated with high-fat diet. To investigate the effect of insulin resistance in erectile function, we treated the animals with insulin sensitizer, metformin, for 14 days (300 mg /kg/day). Metformin treatment restored the impaired endothelium-dependent and nitrergic relaxations, and the enhanced contractile response to phenylephrine in the corpus cavernosum of high-fat fed mice, without affecting the body weight and epididymal fat. In conclusion, our data shows that treatment with high-fat diet for 10 weeks reduces the intracavernous pressure, as well as the endothelial and nitrergic cavernosal relaxations. Concomitantly, this treatment increases the contractile responses, in vitro. Metformin treatment restored the insulin sensitivity and the erectile dysfunction, suggesting that erectile dysfunction in high-fat fed mice is the result of insulin resistance associated with obesity. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia