Orientadores: Marcelo Ganzarolli de Oliveira, Lício Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-19T04:20:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_GabrielaFreitasPereirade_D.pdf: 2358320 bytes, checksum: 5cf57adeef1d3cfe0789e7a9320c4569 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: No presente estudo foram investigadas as ações fisiológicas associadas ao óxido nítrico (NO), obtidas topicamente na mucosa gástrica e sistemicamente nas administrações orais de dois S-nitrosotióis (RSNOs) doadores de NO, S-nitrosoglutationa (GSNO) e S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) em modelos animais. A aplicação tópica ex-vivo de soluções de RSNOs na mucosa gástrica de ratos Sprague-Dawley levou ao aumento dose-dependente do fluxo sanguíneo gástrico (FSG), medido por fluxometria por laser-Doppler, com FSG máximo c.a. 5 x maior do que os obtidos pela aplicação de soluções equimolares de nitrito ou nitrato. A administração oral de soluções de GSNO e SNAC se refletiu em aumentos tempo e dose-dependentes do nível plasmático de nitrito+nitrato em camundongos Swiss. A administração de SNAC na doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) induzida em camundongos ob/ob ou Swiss não levou a alterações significativas na histologia hepática ou no padrão de aumento de massa dos animais. O acompanhamento cinético da estabilidade de soluções aquosas de GSNO e SNAC em função do pH e a identificação de seus produtos de decomposição, permitiram demonstrar que esses RSNOs se decompõem predominantemente através de mecanismos de hidrólise catalisada por ácido ou base com meias vidas máximas em torno do pH fisiológico. Observou-se que camundongos Swiss submetidos à dieta hiperlipídica apresentam um perfil heterogêneo de ganho de massa, que permite estabelecer uma correlação tempo-dependente da propensão e da resistência à obesidade com alterações nas expressões de neuropeptídios hipotalâmicos e na resistência à insulina e intolerância à glicose / Abstract: In the present study, the nitric oxide (NO)-associated physiological actions obtained topically on the gastric mucosa and systemically in oral administrations of two NO donors-S-nitrosothiols (RSNOs), S-nitrosoglutathione (GSNO) and S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC) were investigated in animal models. The topical ex vivo administration of RSNOs solutions on the gastric mucosa of Sprague-Dawley rats led to a dose-dependent increase in the gastric blood flow (GBF), measured by laser-Doppler flowmetry, with maximum GBF value c.a. 5 x higher than those obtained by equimolar applications of nitrite and nitrate solutions. The oral administration of GSNO and SNAC solutions was reflected in a time and dose-dependent increases in the plasma nitrite+nitrate level in Swiss mice. SNAC administration on non alcoholic fatty liver disease (NAFLD) induced in ob/ob or Swiss mice did not lead to significant changes in liver histology or in the mass gain pattern of the animals. The kinetic monitoring of the stability of aqueous GSNO and SNAC solutions as a function of pH and the identification of their decomposition products allowed to demonstrate that these RSNOs decay predominantly through mechanisms of acid or base-catalyzed hydrolysis, with maximum half-lives around the physiological pH. It was observed that Swiss mice fed a high-fat diet show an heterogeneous mass gain profile, which allows establishing a time-dependent correlation of obesity propensity and resistance with changes in the expressions of hypothalamic neuropeptides and in insulin resistance and glucose tolerance / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientador: Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T02:54:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilio_CarlaAparecida_D.pdf: 7009820 bytes, checksum: 20e3b071e5deb361ebcb1af96dff15a6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Porque as alterações dependentes de idade no sistema imune inato são pouco estudadas, no presente trabalho comparamos macrófagos de camundongos BALB/c jovens (8 semanas de idade) e velhos (72 semanas de idade) quanto às atividade de iNOS e de arginase, bem como a produção de citocinas. Avaliações iniciais realizadas em macrófagos peritoneais (M?P) naïve ou elicitados de camundongos BALB/c jovens mostraram níveis detectáveis de atividade arginase mesmo na ausência de estímulos indutores. Apenas IL-4 induziu aumento da atividade arginase nessas células, enquanto LPS e induziram atividade iNOS. O LPS inibiu a atividade de arginase induzida por IL-4 em e em macrófagos derivados de medula óssea (M?MO). A IL-4 inibiu a produção de NO em M?P naïve e em M?MO, mas não teve efeito em M?P elicitados. A fagocitose de zimosan ou de linfócitos apoptóticos, mas não de Leishmania major, resultou em aumento da atividade arginase em macrófagos elicitados e apenas a fagocitose de zimosan induziu aumento da atividade arginase nos macrófagos naïve. A fagocitose de quaisquer das partículas testadas resultou em aumento de atividade arginase quando IL4 foi adicionada em dose sub-ótima às culturas de M?P; a adição de dose sub-ótima de IFN-? resultou em aumento de atividade arginase apenas em M?P de BALB/c elicitados que fagocitaram Leishmania major. Comparativamente, M?P de camundongos C57BL/6 mostraram atividade arginase muito mais reduzida que os camundongos BALB/c após a fagocitose de qualquer das partículas testadas. A fagocitose de zimosan ou de linfócitos apoptóticos, mas não de L. major, induziu a atividade arginase em M?P elicitados de C57Bl/6 e a adição de IFN-? elevou de modo significativo a atividade arginase nessas células. Da mesma forma que em BALB/c, os M?P de C57BL/6 não mostraram atividade iNOS após a fagocitose de qualquer das partículas testadas, na presença ou ausência de estímulos inflamatórios. Nossos resultados mostram ainda que o envelhecimento altera algumas das atividades de macrófagos de camundongos BALB/c. Nesse sentido, verificamos que M?P de camundongos jovens apresentaram atividade iNOS e arginase mais elevadas do que M?P de camundongos idosos. M?MO de camundongos jovens ou velhos não diferiram significativamente na atividade iNOS, mas a atividade arginase foi mais elevada nos M?MO de animais velhos. A expressão da arginase induzida por IL-4 foi mais elevada em M?P naïve de animais jovens do que de velhos, mas foi igualmente elevada em M?P elicitados e M?MO de camundongos jovens e velhos. Não se observou diferença na expressão de iNOS induzida por IFN-? em M?P ou M?MO de BALB/c jovens ou velhos. A produção de IL-1? induzida por LPS foi mais elevada em macrófagos elicitados de camundongos velhos e a de TNF-? foi mais elevada nos macrófagos elicitados de camundongos jovens. A estimulação de M?MO com LPS resultou apenas em produção de TNF-?, cujos níveis foram mais elevados nas células de camundongos velhos. Nossos resultados apontam diferenças dependentes da idade em macrófagos teciduais e diferenciados in vitro. Com relação aos macrófagos teciduais, as alterações mais notáveis dependentes da idade foram a redução da produção de TNF-? e da atividade de iNOS. Tendo em vista a importância desses dois mediadores para a eficiente eliminação de patógenos, a sua redução em macrófagos de camundongos velhos pode contribuir para a maior susceptibilidade às infecções na velhice / Abstract: Given that the age-dependent changes in the innate immune system are poorly studied in the present study we investigated the activity of iNOS and arginase, as well as cytokine production in macrophages from BALB/c young (8 weeks old ) and old (72 weeks old). Initial assessments carried out on peritoneal macrophages (PM?) or elicited from naive BALB/c mice showed that these young phagocytes have detectable levels of arginase activity, even in the absence of inducing stimuli. Only IL-4 induced increased arginase activity in these cells, while LPS and IFN-? induced iNOS activity. LPS inhibited the arginase activity induced by IL-4 in PM? and macrophages derived from bone marrow (BMM?). IL-4 inhibited NO production in naïve PM? and BMM? in MO, but had no effect on M?P elicited. Phagocytosis of zymosan or apoptotic lymphocytes, but not from Leishmania major, resulting in increased arginase activity in elicited macrophages and only the phagocytosis of zymosan induced an increase in arginase activity in naïve macrophages. Phagocytosis of any of the tested particles resulted in an increase in arginase activity when IL4 was added to sub-optimal dose to cultures of PM?, the addition of sub-optimal dose of IFN-? resulted in increased arginase activity only in PM? of BALB/c elicited that phagocytized Leishmania major. Comparatively, PM? of C57BL/6 showed arginase activity much lower than the BALB/c after the phagocytosis of any of the tested particles. Phagocytosis of zymosan or apoptotic lymphocytes, but not L. major, induced arginase activity in PM? elicited from C57BL/6 and the addition of IFN-? significantly increased arginase activity in these cells. Just as in BALB/c, PM? C57BL/6 iNOS showed no activity after phagocytosis of any particles tested either in the presence or absence of inflammatory stimuli. Our results also show that aging alters some of the activities of macrophages from BALB/c. Similarly, we found that PM? of young mice showed activities iNOS and arginase higher than PM? of old mice. BMM? of young and old mice did not differ significantly in iNOS activity, but arginase activity was higher in BMM? in older animals. The expression of arginase-induced IL-4 was higher in PM? of naïve young mice, but was also high in M?P elicited AND BMM? of young and old mice. No difference was observed in the expression of iNOS induced by IFN-? in both PM? and BMM? of BALB/c young and old. The production of IL-1 ? induced by LPS was higher in elicited macrophages from aged mice and TNF-? was higher in elicited macrophages from young mice. Stimulation of BMM? with LPS only resulted in production of TNF-?, whose levels were higher in cells of aged mice. Our results suggest age-dependent differences in tissue macrophages and differentiated in vitro. With respect to tissue macrophages, the most notable changes were the age-dependent reduction of and activity of iNOS. Given the importance of these two mediators in the efficient elimination of pathogens, the reduction in macrophages of aged mice may explain the increased susceptibility to infections in old age / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Dora Maria Grassi Kassisse / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T22:17:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conceicao-Vertamatti_AnaGabriela_M.pdf: 7309475 bytes, checksum: 5e1d39b92988f9d6403190c0681c65b0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Por apresentar basicamente fórmulas, o resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T23:06:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franchin_Marcelo_M.pdf: 1716627 bytes, checksum: 9d137d15b27856e3799f2681ac713d50 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-inflamatória e antinociceptiva do extrato etanólico de geoprópolis (EEGP) de Melipona scutellaris e frações químicas, bem como possíveis mecanismos de ação. Além disso, caracterizar quimicamente o EEGP e frações bioativas. Para avaliação da atividade anti-inflamatória foram aplicados os ensaios de recrutamento de neutrófilos na cavidade peritoneal, microscopia intravital e edema de pata induzido por carragenina. A via do óxido nítrico (NO) foi avaliada através da administração de inibidores desta via, além da avaliação da expressão das moléculas de adesão intercelular tipo 1 (ICAM-1) e quantificação de nitritos. A análise química do EEGP e fração bioativa foram realizadas pelos métodos de cromatografia gasosa com espectrometria de massas (CG/EM) e cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR). Para avaliação da atividade antinociceptiva, foram aplicados os ensaios de contorções abdominais induzida por ácido acético, teste da formalina, hipernocicepção inflamatória mecânica induzida por carragenina e quantificação das citocinas IL-1 ? e TNF-?. A composição química do EEGP e frações bioativas foram avaliadas pela quantificação de fenóis e flavonóides totais. Conforme os resultados nos ensaios anti-inflamatórios, foi verificado que o EEGP e sua fração aquosa diminuíram a migração de neutrófilos na cavidade peritoneal induzido por carragenina, como também diminuíram a interação dos leucócitos (rolamento e adesão) com as células endoteliais. A administração de inibidores da via do NO suprimiu a atividade inibitória do EEGP e da fração aquosa sobre a migração de neutrófilos. A expressão de ICAM-1 apresentou-se diminuída, e os níveis de nitritos aumentados após o tratamento com EEGP e fração aquosa. No modelo de edema de pata induzido por carragenina, o EEGP e a fração aquosa apresentaram atividade anti-edematogênica. Nenhum padrão de ácido fenólico ou flavonóide, comumente encontrado em amostra de própolis de Apis mellifera, pôde ser detectado nas amostras de EEGP e da fração aquosa pelas técnicas de CG/EM e CLAE-FR. Nos ensaios de atividade antinociceptiva foi verificado que o EEGP e as frações hexânica e aquosa diminuíram o número de contorções abdominais induzida por ácido acético. No teste da formalina, o EEGP e a fração aquosa inibiram ambas as fases (neurogênica e inflamatória), e a fração hexânica apenas a fase neurogênica. Foi evidenciada atividade do EEGP e fração aquosa na hipernocicepção inflamatória mecânica induzida por carragenina, como também foi constatado níveis diminuídos de IL-1? e TNF-?. Para as amostras de EEGP e frações hexânica e aquosa foi verificada a presença de compostos fenólicos e ausência de flavonóides. Estes resultados indicam que as frações bioativas encontradas possuem substâncias promissoras como novos agentes terapêuticos para o controle da inflamação e dor / Abstract: The aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory and antinociceptive geopropolis of ethanolic extract (EEGP) of Melipona scutellaris and fractions, as well as a possible mechanism of actions. In addition, to characterize chemically EEGP and bioactive fractions. To evaluate the anti-inflammatory activity we used the recruitment of neutrophils into the peritoneal cavity, intravital microscopy and paw edema induced by carrageenan. The pathway of nitric oxide (NO) was demonstrated by administration of antagonists of this pathway, but also evaluated by the expression of intercellular adhesion molecule type 1 (ICAM-1) and quantification of nitrites. Reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) were used the phytochemical analyses. The tests used to evaluate the antinociceptive activity were abdominal contortions induced by acetic acid, formalin test, carrageenan-induced mechanical inflammatory hypernociception and quantification of IL-1 ? and TNF-?. The quantification of total phenols and flavonoids was also determined in the EEGP and the bioactive fractions. In the anti-inflammatory tests the EEGP and the aqueous fraction decreased the neutrophil migration into the peritoneal cavity induced by carrageenan and also decreased the interaction of leukocytes (rolling and adhesion) with endothelial cells. The route of administration of inhibitors of NO abolished the inhibitory activity of the aqueous fraction and EEGP on neutrophil migration. The expression of ICAM-1 was reduced and nitrite levels increased after treatment with EEGP and aqueous fraction. In the paw edema induced by carrageenan, both EEGP and aqueous fraction showed anti-edema activity. No standards of flavonoid or phenolic acid commonly found in a sample of propolis of Apis mellifera could be detected in any samples of aqueous fraction or EEGP by GC/MS and RP-HPLC techniques. In tests to evaluate the antinociceptive activity was determined that EEGP, hexane and aqueous fractions decreased the number of abdominal constrictions induced by acetic acid. In the formalin test, the aqueous fraction and EEGP inhibited both phases (neurogenic and inflammatory), and the hexane fraction only neurogenic phase. The EEGP and the aqueous fraction showed activity in the carrageenan-induced mechanical inflammatory hypernociception model, as also observed decreased levels of IL-1? and TNF-?. The EEGP, hexane and aqueous fractions was verified the presence of phenolic compounds and absence of flavonoids. These results indicate that the bioactive fractions in the present study showed substances that could be promising new therapeutic agents to control inflammation and pain / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T23:41:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_PamelaSouza_D.pdf: 5992583 bytes, checksum: 3716a34b13abd491b9628f4a0ae11453 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A hipertensão é um fator de risco bem estabelecido para doenças cardiovasculares. Embora existam muitas classes de drogas disponíveis, os inibidores da Enzima Conversora de Angiotensina (iECA) são uma das classes mais amplamente utilizadas. O efeito anti-hipertensivo dos iECA envolve a vasodilatação e a melhora da função endotelial através da inibição da ECA, levando a uma diminuição da formação de angiotensina II (ang II) e aumento dos níveis de bradicinina. A diminuição da pressão arterial promovida pelo iECA é explicada, ao menos em parte, pelo aumento da formação de óxido nítrico (NO) proporcionado pela bradicinina e diminuição do estresse oxidativo e vasoconstrição induzidos pela ang II. Apesar de vários estudos com modelos animais e in vitro evidenciarem que o tratamento com iECA promove aumento da biodisponibilidade de NO em nível tecidual, não existe consenso entre os estudos clínicos que buscam associação dos níveis circulantes dos metabólitos estáveis de NO com a resposta anti-hipertensiva a essa classe de drogas. Além disso, evidências crescentes indicam que os efeitos de drogas que aumentam a biodisponibilidade de NO são modulados por polimorfismos no gene da síntase endotelial do óxido nítrico (eNOS) e do receptor tipo 2 de bradicinina (BDKRB2). Assim, os objetivos do nosso estudo foram: 1) Identificar possíveis associações entre o tratamento com enalapril e mudanças em marcadores relevantes relacionados ao estresse oxidativo e a formação de óxido nítrico e 2) investigar se polimorfismos genéticos/haplótipos nos genes da eNOS e do BDKRB2 afetam a resposta anti-hipertensiva ao enalapril. Para atingir nosso primeiro objetivo, dezoito pacientes hipertensos foram tratados com enalapril por 60 dias e dezoito voluntários normotensos foram seguidos pelo mesmo período de tempo. Amostras de sangue venoso foram coletadas antes do início do tratamento e após 30/60 dias de tratamento com enalapril. As concentrações de NOx (nitrito + nitrato) no plasma foram medidas usando reação de Griess. As concentrações de nitrito no plasma e no sangue total foram determinadas por quimioluminescência. Já as concentrações das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e de 8-isoprostano no plasma foram determinadas por método fluorimétrico e ELISA, respectivamente. O tratamento com enalapril diminuiu a pressão arterial nos pacientes hipertensos. No entanto, não encontramos mudanças estatisticamente significativas nas concentrações de NOx plasmático e nitrito medidos no plasma e sangue total nem em marcadores de estresse oxidativo em indivíduos normotensos ou pacientes hipertensos tratados com enalapril. Adicionalmente, para atingirmos o segundo objetivo proposto, nós avaliamos cento e seis pacientes hipertensos tratados com enalapril por 60 dias. A diferença entre a pressão arterial média (PAM) antes e após o tratamento anti-hipertensivo foi definida como ?PAM. Os pacientes foram agrupados como respondedores pobres (RP) ou respondedores bons (RB) quando ?PAM foi menor ou maior que a mediana, respectivamente. O DNA genômico foi extraído a partir do sangue total e amostras foram então genotipadas para os polimorfismos da eNOS através de reação de PCR seguida por eletroforese para o polimorfismo 4b/4a e por PCR em tempo real para os polimorfismos T -786C e G894T. As frequências dos haplótipos da eNOS foram estimadas pelo programa PHASE. Os polimorfismos C-58T e BE1 +9/-9 e os haplótipos do gene BDKRB2 foram determinados por reação de PCR seguida por sequenciamento. Os genótipos TC/CC e o alelo C para o polimorfismo T-786C no gene da eNOS foram mais frequentes entre os RB quando comparado aos RP. Adicionalmente, o genótipo TT para o polimorfismo C-58T no gene do BDKRB2 foi mais frequente em RP quando comparado ao grupo dos RB. Não foram encontradas outras diferenças significativas nos demais genótipos avaliados nem nos haplótipos. Esses achados nos sugerem que o polimorfismo T-786C no gene da eNOS e C-58T no gene do BDKRB2 afetam a resposta anti-hipertensiva ao enalapril / Abstract: Hypertension is an established risk factor in cardiovascular diseases. Although there are many available drugs, angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi) are one of the most widely used drug class. The antihypertensive effects of ACEi involve vasodilation and improved endothelial function resulting from ACE inhibition, which lowers angiotensin II formation and increases bradykinin levels. The effect of blood pressure lowering of ACEi are explained, at least in part, by enhanced bradykinin-dependent nitric oxide (NO) formation and decreased angiotensin II-induced oxidative stress and vasoconstriction. Although previous studies in animal models or in vitro showed that ACEi increase NO bioavailability at tissue levels, there aren't consensus regarding clinical studies involving circulating concentrations of NO metabolites in responsiveness to antihypertensive therapy. Moreover, there is growing evidence indicating that the effects of drugs that improve NO bioavailability are modulated by polymorphisms of endothelial nitric oxide syntase (eNOS) and bradykinin type 2 receptor (BDKRB2) gene. Thus, the objectives of this study were: 1) to identify possible associations between the treatment with enalapril and changes in relevant markers of oxidative stress and NO formation and 2) to investigate if polymorphisms (or haplotypes) of eNOS and BDKRB2 genes affect the antihypertensive response to enalapril. To achieve our first goal, untreated hypertensive patients were treated with enalapril for 60 days and eighteen normotensive healthy controls were followed for the same period. Venous blood samples were collected at baseline and after 30/60 days of treatment with enalapril. Plasma NOx (nitrites+nitrates) concentrations were determined by using the Griess reaction. Plasma nitrite and whole blood nitrite concentrations were determined by using an ozone-based chemiluminescence assay. Plasma thiobarbituric acid-reactive species (TBARS) and 8- isoprostane concentrations were determined by a fluorimetric method and by ELISA, respectively. The treatment with enalapril decreased blood pressure in hypertensive patients. However, we didn't find significant changes in plasma NOx, nitrite, whole blood nitrite, and in the levels of markers of oxidative stress in both normotensive controls and hypertensive patients treated with enalapril. Moreover, to achieve our second goal, we evaluated one hundred and six hypertensive patients treated with enalapril for 60 days. The difference between the mean arterial pressure (MAP) before and after the antihypertensive treatment was defined as ?MAP. The patients were classified as poor responders (PR) or good responders (GR) when their ?MAP were below or above the median value, respectively. Genomic DNA was extracted from whole blood, and then the genotypes for eNOS were determined by PCR followed by electrophoresis for 4b/4a polymorphism and by real time PCR for T-786C and G894T polymorphisms. The eNOS haplotype frequencies were determined by the programs PHASE. The C-58T and BE1 +9/-9 polymorphisms of BDKRB2 gene and their haplotypes were determined using PCR amplification, followed by DNA sequencing. The TC/CC genotypes and the C allele for the T-786C polymorphism of eNOS gene were more frequent in GR, compared with PR patients. Furthermore, the TT genotype for the C-58T polymorphism of BDKRB2 gene were more frequent in PR when compared with GR. No other significant differences in genotypes or haplotypes were found. These findings suggest to us that both T-786C polymorphism of eNOS gene and C-58T polymorphism of BDKRB2 gene affect the antihypertensive response to enalapril / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Orientador: José Eduadro Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:18:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sertorio_JonasTadeuCau_D.pdf: 15317741 bytes, checksum: 8f9e412dcb5f88fa28c13ad829f48faa (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O óxido nítrico (NO) exerce um importante papel durante as alterações hemodinâmicas que normalmente acompanham uma gravidez sadia (GS). Entretanto, em mulheres com pré-eclâmpsia (PE), uma síndrome caracterizada por hipertensão e proteinúria, a vasodilatação da circulação sistêmica materna está comprometida. Isso possivelmente ocorre devido a uma menor biodisponibilidade de NO, a qual resulta de uma menor produção e uma maior degradação do NO. Como a hemoglobina livre no plasma sequestra o NO pela rápida reação de dioxigenação, o que pode comprometer a eficiência do processo de vasodilatação mediado pela via do NO/guanilato ciclase, formulamos a hipótese de que pacientes com PE, quando comparadas com grávidas sadias, apresentariam concentrações aumentadas de hemoglobina livre no plasma, o que resultaria em maior degradação (consumo) do NO e menor biodisponibilidade de NO. Além disso, também formulamos a hipótese de que os diferentes fenótipos da haptoglobina (Hp) podem modular a biodisponibilidade de NO ao influenciar o consumo de NO na PE. A haptoglobina é uma proteína polimórfica (Hp1-1, Hp2-1 e Hp2-2) que se liga à hemoglobina para formar um complexo (Hb-Hp) que é removido da circulação, prevenindo o consumo de NO e o estresse oxidativo induzido pela hemoglobina. Os produtos do gene da haptoglobina apresentam diferentes propriedades bioquímicas e biofísicas, o que pode influenciar a taxa de eliminação (clearance) do complexo Hb-Hp. Para avaliar a biodisponibilidade de NO, foram analisadas as concentrações de nitrito no plasma e no sangue total em um analisador de NO. O consumo de NO foi determinado no plasma através do método de quimiluminescência. As concentrações de hemoglobina plasmática e haptoglobina foram analisadas com kits de imunoensaio enzimático (ELISA). Os genótipos da haptoglobina foram determinados pela Reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR). Encontramos concentrações reduzidas de nitrito no plasma e no sangue total de grávidas com PE comparado com grávidas sadias. As amostras de plasma de grávidas com PE consumiram mais NO e apresentaram maiores concentrações de hemoglobina livre do que as amostras de grávidas sadias. Além disso, verificamos que há correlação positiva entre as concentrações de hemoglobina plasmática e o consumo de NO, correlação negativa entre o consumo de NO e as concentrações de nitrito plasmático e no sangue total e, por fim, correlação negativa entre as concentrações de hemoglobina livre plasmática e as concentrações de nitrito no plasma e no sangue total. Esses dados sugerem que níveis aumentados de Hb livre resultam em consumo de NO aumentado e baixo biodisponibilidade de NO em pacientes com PE, quando comparados com grávidas sadias. Não encontramos diferenças nas frequências dos genótipos da haptoglobina entre grávidas com PE e GS. Em grávidas sadias, os genótipos da haptoglobina não apresentaram efeitos nos níveis de hemoglobina livre, no consumo de NO e nas concentrações de nitrito plasmático. Entretanto, pacientes com PE e genótipos Hp2-1 e Hp2-2 apresentaram níveis aumentados de hemoglobina livre (heme), consumo de NO elevado e concentrações reduzidas de nitrito quando comparados com pacientes com PE e genótipo Hp1-1. Esses achados indicam que apesar de o genótipo da haptoglobina não afetar o risco de se desenvolver PE, o genótipo Hp1-1 possivelmente exerce um papel de proteção na PE ao reduzir o sequestro de NO, enquanto que os genótipos Hp2-1 e Hp2-2 podem agravar a PE ao reduzir a biodisponibilidade de NO / Abstract: Nitric oxide (NO) plays an important role in the hemodynamic changes found during normal pregnancy (NP). However, preeclampsia (PE), a syndrome characterized by hypertension and proteinuria, is associated with impaired vasodilatation of the maternal systemic circulation, possibly due to decreased NO bioavailability resulting of lower NO production and increased NO degradation. Since cell-free hemoglobin scavenges NO through a high speed dioxygenation reaction, thus compromising the efficiency of the NO/soluble guanylyl cyclase pathway to elicit vasodilatory activity, we hypothesized that higher plasma hemoglobin concentrations exist in patients with preeclampsia compared with normal pregnant women, and the higher plasma hemoglobin concentrations could lead to increased NO consumption and lower NO bioavailability in preeclamptic patients. Moreover, we hypothesized that haptoglobin (Hp) phenotypes might modulate NO bioavailability by influencing NO consumption in preeclampsia. Haptoglobin is a polymorphic protein (Hp1-1, Hp2-1 and Hp2- 2) that binds hemoglobin to form a complex that is removed from circulation, thus preventing Hb-driven oxidative stress and NO scavenging. Hp protein products differ in biochemical and biophysical properties, which reflects on the Hb-Hp complex clearance rate. To assess NO bioavailability, we measured plasma and whole blood nitrite concentrations using an ozone-based chemiluminescence assay. A NO consumption assay was used to measure NO consumption. Plasma hemoglobin and haptoglobin concentrations were assessed with a commercial immunoassay (ELISA). Haptoglobin genotypes were determined using Real Time Polymerase Chain Reaction. We found lower whole blood and plasma nitrite concentrations in preeclamptic patients compared with normal pregnant women. Plasma samples from preeclamptic women consumed more NO and had higher plasma Hb levels than those found in normal pregnant women. We found significant positive correlations between plasma Hb and plasma NO consumption, negative correlations between plasma NO consumption and whole blood and plasma nitrite concentrations, and negative correlations between plasma Hb and whole blood and plasma nitrite concentrations. These findings suggest that increased plasma Hb levels lead to xiv increased NO consumption and lower NO bioavailability in preeclamptic patients compared with healthy pregnant women. Furthermore, we found no differences in Hp genotype frequencies between preeclamptic and NP groups. Haptoglobin genotypes had no effects on plasma heme levels, NO consumption and plasma nitrite in normal pregnant women. However, in preeclampsia, Hp2-1 and Hp2-2 were associated with higher plasma heme levels, increased NO consumption, and lower plasma nitrite compared with Hp1-1. These findings indicate that although haptoglobin genotype does not affect the risk of preeclampsia, Hp1-1 genotype may exert a protective role in preeclampsia by reducing NO scavenging, whereas Hp2-1 and Hp2-2 may further aggravate preeclampsia by reducing NO bioavailability / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T00:44:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silverio_CamilaBitencourtMendes_M.pdf: 1655028 bytes, checksum: e42d500e98127c5551d4f94269778bcd (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O BAY 60-2770 constitui-se um novo ativador da guanilil ciclase solúvel (GCs) independente de óxido nítrico (NO). Há relatos de que ativadores da GCs independente de NO podem reativar esta enzima, mesmo em seu estado heme-oxidada, condição encontrada em doenças vasculares. Neste trabalho, temos por hipótese que a oxidação do grupamento heme da GCs pelo ODQ leva à potencialização dos efeitos antiplaquetários in vitro do BAY 60-2770. Foram utilizadas plaquetas humanas purificadas de voluntários sadios. Realizamos ensaios de agregação e de adesão plaquetária, bem como análise da ativação da integrina plaquetária, ?IIb?3, por citometria de fluxo. Realizamos Também ensaios de Western blotting para a quantificação protéica das subunidades ?1 e ?1 da GCs. Os níveis intracelulares de Ca2+ foram quantificados por fluorimetria, utilizando-se o fluoróforo FluoFort. O BAY 60-2770 (0,001 - 10 ?M) produziu inibição significativa da agregação plaquetária induzida pelo colágeno (2 ?g/mL) ou trombina (0,1 U/mL), sendo este efeito marcantemente potencializado pelo inibidor da GCs, ODQ (10 ?M). Em placas recobertas pelo fibrinogênio, o BAY 60-2770 (0,1 - 10 ?M) inibiu significativamente a adesão plaquetária, sendo esta inibição também potencializada pelo ODQ (10 ?M). O BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M) aumentou os níveis de GMPc e reduziu a mobilização de Ca2+, e ambos os efeitos foram potencializados pelo ODQ. O análogo permeável do GMPc, 8-Bromo-GMPc (8-Br-GMPc; 100 ?M), inibiu a agregação plaquetária e os níveis de Ca2+ de maneira ODQ-resistente. Os níveis de AMPc não foram alterados pelo BAY 60-2770. O colágeno (2 ?g/mL) e trombina (0,1 U/mL) ativaram a integrina ?IIb?3. Este efeito foi inibido pelo BAY 60-2770 (0,01 - 10 ?M), e potencializado pelo ODQ. Os efeitos antiplaquetários do nitroprussiato de sódio (SNP) foram totalmente revertidos pelo ODQ. O tratamento com ODQ (10 ?M) reduziu significativamente os níveis protéicos das subunidades ?1 e ?1 da GCs, os quais foram prevenidos pelo tratamento com BAY 60-2770. Os efeitos inibitórios do BAY 60-2770 sobre a agregação e adesão plaquetária, mobilização intracelular de Ca2+ e ativação da integrina ?IIb?3 foram todos potencializados em condições de heme-oxidação. O BAY 60-2770 impediu a diminuição dos níveis protéicos da GCs produzida por ODQ. Assim, o BAY 60-2770 pode ser de grande interesse terapêutico em doenças cardiovasculares associadas às complicações tromboembólicas / Abstract: Nitric oxide-independent soluble guanylyl cyclase (sGC) activators reactivate the haem-oxidized enzyme in vascular diseases. This study was undertaken to investigate the anti-platelet mechanisms of the haem-independent sGC activator BAY 60-2770 in human washed platelets. The hypothesis that sGC oxidation potentiates the anti-platelet activities of BAY 60-2770 has been tested. Human washed platelet aggregation and adhesion assays, as well as flow cytometry for ?IIb?3 integrin activation and Western blot for ?1 and ?1 sGC subunits were performed. Intracellular calcium levels were monitored in platelets loaded with a fluorogenic calcium-binding dye (FluoForte). BAY 60-2770 (0.001-10 ?M) produced significant inhibition of collagen (2 ?g/ml)- and thrombin (0.1 U/ml)-induced platelet aggregation that was markedly potentiated by the sGC inhibitor ODQ (10 ?M). In fibrinogen-coated plates, BAY 60-2770 (0.1 - 10 ?M) significantly inhibited platelet adhesion, an effect potentiated by ODQ. BAY 60-2770 (0.01 - 10 ?M) increased the cGMP levels and reduced the intracellular Ca2+ levels, both of which were potentiated by ODQ. The cell-permeable cGMP analogue 8-Br-cGMP (100 ?M) inhibited platelet aggregation and Ca2+ levels in an ODQ-insensitive manner. The cAMP levels remained unchanged by BAY 60-2770. Collagen- and thrombin-induced ?IIb?3 activation was markedly inhibited by BAY 60-2770 that was further inhibited by ODQ. The effects of sodium nitroprusside (3 ?M) were all prevented by ODQ. Incubation with ODQ (10 ?M) significantly reduced the protein levels of ?1 and ?1 sGC subunits, which were prevented by BAY 60-2770. The inhibitory effects of BAY 60-2770 on aggregation, adhesion, intracellular Ca2+ levels and ?IIb?3 activation are all potentiated in haem-oxidizing conditions. BAY 60-2770 prevents ODQ-induced decrease in sGC protein levels. BAY 60-2770 could be of therapeutic interest in cardiovascular diseases associated with thrombotic complications / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Orientador: Ione Salgado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T06:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosFilho_PlinioRodriguesdos_D.pdf: 1637587 bytes, checksum: 89bdaa896ffa24aac0e2f5b00b8ece3a (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A nitrato redutase (NR) corresponde ao primeiro passo na assimilação do nitrato em plantas. Recentemente, essa enzima tem sido também relacionada à síntese de óxido nítrico (NO). Entre várias ações sinalizadoras para as plantas, o NO promove o acúmulo de fenilpropanóides pela ativação da expressão de enzimas iniciais dessa via. Contudo, uma correlação entre metabolismo de nitrogênio, emissão de NO e acúmulo de fenilpropanóides não foi estabelecida. Por isso, neste trabalho foi analisado o efeito do suprimento de nitrato e da deficiência na NR sobre a síntese de aminoácidos, a emissão de NO e o metabolismo de fenilpropanóides em diferentes tecidos de Arabidopis thaliana selvagem e mutante duplo deficiente para a NR (nia1 nia2). Análises cromatográficas mostraram que a mutante é deficiente na síntese de sinapoil malato (SM), fenilpropanóide predominante nas folhas, resultando no acúmulo de seu precursor sinapoil glicose (SG) e derivados de kaempferol. Essa deficiência não foi causada pela baixa assimilação do nitrato, já que a recuperação do conteúdo de aminoácidos na mutante não alterou seu perfil metabólico. Porém, a maior disponibilidade de nitrato aumentou a atividade da NR, a emissão de NO e os níveis de SM e diminuiu os níveis de SG, nos dois genótipos. O cultivo in vitro da mutante na presença de malato afetou a produção de SM de maneira dose-dependente, enquanto substâncias doadoras de NO causaram apenas um pequeno aumento em SG. Porém, a combinação malato/doador de NO promoveu a recuperação de SM ao nível da selvagem. Esse efeito sinergístico do NO com o malato também ocorreu quando as folhas da mutante foram infiltradas com esses compostos. Além disso, a atividade da enzima sinapoil glicose:malato sinapoil transferase (SMT) foi menor na mutante e a adição de NO aumentou a síntese de SM. Ainda, as folhas da mutante foram incapazes de acumular antocianinas sinapoiladas ao nível da selvagem quando submetidas a um estresse luminoso. Nos botões florais apenas derivados de kaempeferol e quercetina foram identificados e não houve diferença entre selvagem e mutante. Nas raízes não foram identificados fenilpropanóides, provavelmente porque esses compostos só são acumulados nesse órgão na presença de luz. Em relação ao acúmulo de aminoácidos, as folhas do mutante apresentaram níveis reduzidos de todos os aminoácidos parecendo atuar como fonte desses compostos para os botões florais, que não apresentaram nenhuma diferença em relação à selvagem. A glutamina recuperou os níveis de aminoácidos nas folhas, mas não causou diferença nos botões florais. Nas raízes, não houve diferença no conteúdo de aminoácidos entre selvagem e mutante, quando cultivadas no solo, mas in vitro, a mutante foi deficiente, provavelmente pela limitação de nutrientes nessa condição. Esses resultados indicam que o metabolismo dos ésteres de ácido sinápico nas folhas, controlado por aciltransferases dependentes de sinapoil glicose, está comprometido no mutante nia1 nia2 e sugere um potencial papel sinalizador para o NO na ativação dessas aciltransferases. Ainda, o efeito da deficiência na NR nos níveis de aminoácidos parece alterar as relações de fonte e dreno na planta e a folha foi o órgão mais afetado / Abstract: The nitrate reductase (NR) is the first step in nitrate assimilation in plants. Recently, this enzyme has also been related to the synthesis of nitric oxide (NO). Among various signaling actions for plants, NO promotes the accumulation of phenylpropanoids by activating the expression of the initial enzymes of this pathway. However, a correlation between nitrogen metabolism, NO emission and accumulation of phenylpropanoids has not been established. Therefore, this work analyzed the effect of nitrate supply and NR deficiency on the synthesis of amino acids, emission of NO and phenylpropanoid metabolism in different tissues of wild type and NR double-deficient (nia1 nia2) Arabidopsis thaliana plants. Chromatographic analysis showed that the mutant is deficient in the synthesis of sinapoylmalate (SM), the major phenylpropanoid in the leaves, resulting in accumulation of its precursor sinapoylglucose (SG) and kaempferol derivatives. This deficiency was not caused by the low nitrate assimilation, since the recovery of the amino acid content in the mutant did not change its metabolic profile. In contrast, an increased supply of nitrate enhanced NR activity and NO production, and increased SM and decreased SG levels in both genotypes. The in vitro cultivation of mutant in the presence of malate affected the production of SM in a dose-dependent manner, whereas NO donors caused only a slight increase in SG. However, the combination of malate/NO donor promoted the recovery of SM at the level of wild type plants. The synergistic effect of NO with malate in the recovery of SM also occurred when the mutant leaves were infiltrated with these compounds. Furthermore, sinapoylglucose:malate sinapoyltransferase (SMT) activity was reduced in the mutant, and the addition of NO increased SM synthesis. Additionally, mutant leaves were unable to accumulate sinapoylated anthocyanins at the level of wild type when exposed to light stress. In the flower buds just kaempeferol and quercetin derivatives were identified and there was no difference between wild type and mutant. In the roots, phenylpropanoids were not identified, probably because these compounds are accumulated in this organ only in the presence of light. Regarding the accumulation of amino acids, the mutant leaves showed reduced levels of all amino acids and appeared to act as a source of these compounds to the flower buds that showed no difference from the wild plant. Glutamine recovered the amino acid levels in leaves, but caused no difference in flower buds. In the roots, there was no difference in the amino acid content between wild type and mutant, when grown in soil, but in vitro, the mutant was deficient, probably due to nutrient limitation in this condition. These results indicate that hydroxycinnamate ester metabolism in leaves, controlled by the sinapoylglucose-dependent sinapoyltransferases, is compromised in nia1 nia2 mutant and suggests a potential signaling role for NO in the activation of these acyltransferases. Additionally, the effect of NR deficiency in the levels of amino acids appears to alter the relationship of source and sink in the plant and the leaf is the most affected organ / Doutorado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Texto em Português e Inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T01:17:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mansur_ThiagodeOliveiraSantos_M.pdf: 2436576 bytes, checksum: 758101c18ea505521a064b2102236380 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A migrânea é uma cefaléia primária episódica com incidência mundial de 10% e alto impacto socioeconômico, afetando predominantemente as mulheres. Em 30% dos casos, as crises de migrânea são acompanhadas por sintomas neurológicos focais que caracterizam o fenômeno da aura. A fisiopatologia da migrânea continua sob investigação. Todavia, acredita-se tratar de um distúrbio neurovascular no qual a ativação de fibras aferentes do sistema trigeminovascular (TGVS) e a consequente liberação de óxido nítrico (NO) levariam à vasodilatação e neurotransmissão da dor durante a crise de migrânea. A formação de NO é atribuída à atividade de três isoformas de NO sintases (NOS): endotelial, neuronal e induzível, respectivamente eNOS, nNOS e iNOS e os genes que codificam tais enzimas exibem polimorfismos. Dessa forma, acredita-se que tais polimorfismos poderiam estar envolvidos na susceptibilidade à migrânea. No presente trabalho foi testada a hipótese de que dois polimorfismos clinicamente importantes no gene da iNOS: C-1026A (rs2779249) e G2087A (rs2297518) bem como a combinação de seus alelos em haplótipos estariam associados com a susceptibilidade à migrânea com e sem aura. Para tanto, foram estudadas 142 mulheres saudáveis (grupo controle) e 200 mulheres com migrânea, subdivididas em dois grupos: 148 pacientes com migrânea sem aura e 52 pacientes com migrânea com aura. Os genótipos e alelos foram determinados por PCR em tempo real utilizando o ensaio Taqman®. Os haplótipos foram inferidos através do programa PHASE versão 2.1. Os principais resultados do presente estudo indicam que o haplótipo H4, que combina o alelo A para os polimorfismos mencionados, pode estar associado à migrânea com aura enquanto o polimorfismo G2087A e o haplótipo H4 podem afetar a suscetibilidade à aura em pacientes com migrânea. Tais achados podem ter implicações terapêuticas ao se analisar os efeitos de possíveis inibidores seletivos da iNOS na população com esse perfil genotípico / Abstract: Migraine is an episodic primary headache with worldwide incidence of 10% and high socioeconomic impact affecting mainly women. In 30% of cases, migraine attacks are followed by focal neurological symptoms that characterize the aura phenomenon. The migraine pathophysiology continues under investigation, although it is believed to consist of a neurovascular disorder in which the activation of afferent fibers of the trigeminovascular system (TGVS), leads to an nitric oxide (NO) release which, would be responsible for vasodilation and pain during migraine attacks. The formation of NO is attributed to the activity of three isoforms of NO synthases (NOS): endothelial (eNOS), neuronal (nNOS) and inducible (iNOS), and the genes that codify these enzymes exhibit polymorphisms. Thus, it is believed that these polymorphisms could be involved in the susceptibility to migraine. In this study, we tested the hypothesis that two clinically important iNOS gene polymorphisms: C-1026A (rs2779249) and G2087A (rs2297518), as well as the combination of their alleles in haplotypes, would be associated with migraine with or without aura. Therefore, we studied 142 healthy women (control group) and 200 women with migraine, who were subdivided into two groups: 148 with migraine without aura and 52 with migraine with aura. Genotypes and alleles were determined by real-time PCR, using the Taqman® assay. Haplotypes were inferred by the PHASE program (version 2.1). The main results of the present study indicate that H4 haplotype, which combines the A allele for both polymorphisms may be associated with migraine with aura, while G2087A polymorphism and H4 haplotype may affect the susceptibility to aura in patients with migraine. These findings may have therapeutic implications when analyzing the possible selective inhibitor effects of iNOS on the population with this genotype profile / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3022_1.pdf: 923230 bytes, checksum: e6aaeca86f3c9729d34fac2b95714e22 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O exercício físico e a suplementação de aminoácidos durante o desenvolvimento são fatores que podem promover mudanças em longo prazo na eletrofisiologia do cérebro. Esta dissertação originou o artigo intitulado como Differential effects of physical exercise and L-arginine on cortical spreading depression in developing rats, atualmente submetido para a publicação, e que está apresentado às páginas 25 - 45. O objetivo foi verificar o efeito da administração de L-arginina e do exercício físico durante o período crítico de desenvolvimento do cérebro sobre a depressão alastrante cortical (DAC). Ratos machos Wistar receberam por gavagem 300mg/kg/dia de L-arginina (grupo Ar, n = 40) ou 300mg/kg/dia de L-Histidina (grupo Histidina, n = 07) ou água destilada (veículo, grupo Ag, n = 40) durante 7-35 dias pós-natal. A partir do 15º ao 35º dia de vida, metade dos animais na condição supracitada realizaram exercício físico em esteira durante 20 minutos, em 5 seções semanais (grupos ArE e AgE). A outra metade foi colocada na esteira por igual período, no entanto com a mesma desligada (animais não exercitados, grupos ArnE e AgnE) para comparação. Quando os animais atingiram 35-45 dias (grupos jovens) ou 90- 120 dias de idade (adultos), a DAC foi registrada durante 4 horas em dois pontos corticais parietais do hemisfério direito. A velocidade de propagação (mm/min) foi calculada medindo-se o tempo gasto para uma onda de DAC atravessar a distância entre os eletrodos. Os ratos ArE tiveram aumento do peso corporal, mas não no peso do cérebro, na idade adulta em comparação com ArnE (P <0,05). Nas duas faixas de idades, jovens e adultos, a L-arginina aumentou, enquanto que o exercício diminuiu as velocidades de propagação da DAC. Os animais L-Histidina apresentaram valores de propagação de DAC (3.54+ 0.14mm/min) semelhantes aos animais AgnE . A média±d.p. das velocidades foram: nos grupos de jovens, 3,80±0,45 e 4,47±0,47, respectivamente, para ArE e ArnE, e 3,57±0,34 e 3,86±0,32, para AgE eAgnE; nos grupos de adultos, 3,85±0,38 e 4,59±0,36 para a ArE e ArnE, respectivamente, e 3,03±0,20 e 3,40±0,16 para a AgE eAgnE. Conclui-se que as ações da suplementação com L-arginina e o do exercício físico sobre a DAC são diferentes e que não interagem entre si na dose usada neste trabalho. Provavelmente, eles dependem de mudanças de plasticidade associada aos tratamentos durante o desenvolvimento cerebral