Doctor en Biotecnología Molecular / El sistema renina-angiotensina (SRA) consiste en una serie de péptidos que circulan por el torrente sanguíneo, señalizando a través de varios receptores de membrana acoplados a una proteína G. Dentro de éstos, el receptor AT2 (AT2R) es uno de los más importantes dado que se encarga de apagar las señales intracelulares encendidas por otros receptores del SRA. Esta acción la ejecuta mediante la activación de proteínas fosfatasas que desfosforilan sustratos proteicos río abajo de estos receptores, impidiendo de esta manera su sobreactivación. Aunque el SRA se describió inicialmente como un regulador de la presión arterial, actualmente se sabe que también participa en el desarrollo de diversas enfermedades, entre ellas el cáncer. Durante el desarrollo de esta enfermedad, algunos receptores del SRA promueven la adquisición del fenotipo cancerígeno, mientras que el AT2R antagoniza estos efectos, impidiendo su avance. Sin embargo, en la etapa de metástasis aún se desconocen los mecanismos moleculares por los cuales AT2R podría inhibir dicho proceso. Nuestros estudios previos han identificado una nueva vía promotora de la migración, invasión y metástasis compuesta por las proteínas caveolina-1, Rab5 y Rac-1 (vía CAV1/Rab5/Rac-1). Esta vía promueve metástasis en el cáncer de mama, colon y melanoma. Su activación ocurre cuando el primer componente de la vía, CAV1 es fosforilada en Y14 (p-Y14-CAV1), lo cual promueve la activación secuencial de las GTPasas río abajo Rab5 y Rac-1 y que en última instancia promueven la migración celular. Diversas investigaciones sugieren que la fosforilación de CAV1 en Y14 podría estar controlada por la actividad del AT2R. Considerando que el AT2R actúa activando fosfatasas, se postuló en esta tesis que este receptor inhibe la migración, invasión y metástasis dependiente de la vía CAV1/Rab5/Rac-1, promoviendo la desfosforilación de CAV1 en Y14 mediante la activación de alguna proteína fosfatasa. Todos estos antecedentes permiten formular la siguiente hipótesis de trabajo: “La activación del AT2R inhibe la vía de señalización CAV1/Rab5/Rac-1, disminuyendo la migración, invasión y potencial metastásico de células tumorales de melanoma murino B16F10 y de mama MDA-MB-231. Para probar esta hipótesis se utilizaron las líneas celulares de cáncer de melanoma B16F10 y de mama MDA-MB-231, dado que ellas si bien utilizan la vía CAV1/Rab5/Rac-1 para migrar, difieren en la expresión del AT2R, convirtiéndolas en buenos modelos para estudiar su efecto sobre esta vía transduccional. Estas células se estimularon con el agonista específico del AT2R CGP42112, de origen sintético, para evaluar sus efectos sobre la migración, invasión y metástasis. Los resultados obtenidos en este trabajo muestran que: • De las células estudiadas, solo las de cáncer de melanoma expresan el AT2R. • La activación del AT2R con CGP42112 inhibió la migración y metástasis de las células de cáncer de melanoma, mientras que solo disminuyó la migración de células de cáncer de mama cuando se sobreexpresó el AT2R. • Este efecto anti-migratorio en el modelo de melanoma se atribuyó a la inhibición de la vía CAV1/Rab5/Rac-1 debido a que la activación del AT2R disminuyó los niveles de pY14-CAV1 y, consecuentemente, los niveles Rab5 y Rac-1 activos. • Finalmente la disminución de los niveles de pY14-CAV1 generado por la estimulación del AT2R con el agonista específico se puede explicar por el aumento en la actividad de PTP1B, fosfatasa responsable de la desfosforilación de este residuo. Se concluye que AT2R inhibe la migración de células tumorales de melanoma mediante la inhibición de la vía CAV1/Rab5/Rac-1. / The renin-angiotensin system (RAS) includes several peptides that circulate in the bloodstream and signal through G protein coupled receptors. The AT2 receptor (AT2R) plays a key role for such peptides because its activation quenches intracellular signaling and does so by activing phosphatases. Although the RAS was initially described as a regulator of blood pressure, it has recently implicated in the development of noncomunicable chronic diseases like cancer. While some RAS receptors promote acquisition of the transformed phenotype, AT2R it is thought to predominantly antagonize such effects. However, the molecular mechanisms of AT2R participation in meastasis have not yet been defined. Studies from our research group have identified a new pathway that promotes migration, invasion and metastasis. This pathway involves the proteins Caveolin-1 (CAV1), Rab5 and Rac-1 (via CAV1/Rab5/Rac-1) and has been shown to promote metastasis in melanoma, breast and colon cancer cells. Activation of this pathway is triggered by CAV1 phosphorylation Y14 (pY14-CAV1), which then promotes the sequential activation of the downstream GTPases Rab5 and Rac-1 to promote cell migration and invasion Some reports suggest that CAV1 phosphorylation on Y14 may be modulated by the activity of AT2R. Considering that AT2R works activating

Com objetivo de avaliar a eficácia da criocirurgia no tratamento de neoplasias de pele e/ou partes moles de cães e gatos, foram utilizados 40 animais, 27 cães e 13 gatos de raças e idades variadas encaminhados ao Serviço de Cirurgia de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Foram tratadas 57 lesões utilizando-se o nitrogênio líquido por meio da técnica do spray, destas 17 (29,83%) foram caracterizadas como neoplasia epitelial benigna, 22 (38,60%) neoplasia epitelial maligna, 4 (7,01%) neoplasia mesenquimal benigna, 10 (17,54%) neoplasia mesenquimal maligna, 3 (5,27%) não neoplásicos e 1 (1,75%) não caracterizado. Houve remissão total de 49 (85,96%) lesões em 32 (80%) animais. Diante destes resultados pode-se concluir que a criocirurgia foi eficaz no tratamento de tumores de pele e/ou partes moles de cães e gatos. / With the aim to evaluate the effectiveness of cryosurgery in the treatment of skin and soft tissue neoplasias of the dogs and cats it was used 40 animals, 27 dogs and 13 cats of differents ages and breeds referred to the Surgery Service of Small Animals of the Veterinary Hospital of the University of São Paulo. Fifty seven lesions were treated with the spray technique using liquid nitrogen. 17 (29,83%) were benign epithelial lesions, 22 (38,60%) malignant epithelial lesions, 4 (7,01%) benign mesenchymal lesions, 10 (17,54%) malignant mesenchymal lesions, 3 (5,27%) not neoplasia, 1 (1,75%) not characterized. There was total remission of the 49 (85,96%) lesions in 32 (80%) animals. It was concluded that the cryosurgery was effective to treat skin and/or soft tissue tumor of the dogs and cats.

As neoplasias são doenças comumente vistas em algumas espécies de aves, porém, no Brasil, não existem trabalhos publicados sobre casuística e classificação destes processos nas mesmas. Com o aumento da criação de aves como animais de companhia, torna-se importante o aprimoramento do conhecimento na área. Este estudo, realizado de forma retrospectiva englobando os anos de 2000 a 2004 e prospectiva nos anos de 2005 e 2006 no Ambulatório de Aves do Hospital Veterinário, e no Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, teve como objetivos estudar a freqüência e a prevalência com que ocorrem os processos neoplásicos em aves, e realizar avaliação destes através da histopatologia e imunoistoquímica, comparando com os achados de literatura. Os resultados concordaram em parte com os achados em literatura sendo o periquito-australiano a ave com a maior prevalência e o lipoma sendo a neoplasia de maior ocorrência. Indica-se o uso da imunoistoquímica, porém, deve-se aprimorar estudos histopatológicos e investir em diagnóstico para o melhor conhecimento da biologia tumoral, desenvolvendo-se mais pesquisas na área. / Neoplastic diseases are generally seen in some avian species, nevertheless, in Brazil, there are no reports regarding cause and classification of these diseases in birds. As keeping birds as pets is increasing, it is important to upgrade knowledge in this area. This report, made retrospectively in 2000 to 2004 and prospectively in 2005 and 2006 in the Avian Clinic of Veterinary Teaching Hospital, Department of Pathology, School Veterinary Medicine of University of São Paulo, has the objectives of studying the frequency and prevalence of neoplastic diseases in birds, and evaluating them by histopathology and immunohistochemistry, comparing results with literature. The results agree in part with those found in literature, the budgerigar is the most prevalent specie and lipoma as the most common neoplasm. The use of immunohistochemistry is indicated, but more studies regarding histopathology and investment are necessary in diagnosis and research in tumoral biology, developing more researches in this area.

As raízes de Pfaffia paniculata (Ginseng brasileiro) são comercialmente encontradas como cápsulas contendo as raízes pulverizadas, misturadas ou não ao extrato etanólico destas raízes. Estas raízes são popularmente recomendadas para vários propósitos, e têm sido utilizadas na terapia contra o câncer pela medicina popular. Os principais componentes encontrados nestas raízes já isolados incluem o ácido pfáffico e os pfaffosideos A, C, D, E e F; estes componentes inibiram o crescimento de células do melanoma B-16, demonstrado em um outro estudo. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos dos extratos etanólico, butanólico ou aquoso das raízes de Pfaffia paniculata sobre o crescimento das linhagens tumorais de células mamárias humanas MCF-7 e SKBR-3, utilizando método colorimétrico (cristal violeta) e quantificação das células que incorporaram bromodeoxiuridina (BrdU). A coloração por laranja de acridina/brometo de etídeo foi utilizada para avaliar morte celular, e as alterações subcelulares foram avaliadas por microscopia eletrônica. O extrato butanolico apresentou efeitos citotóxicos nas linhagens MCF-7 e SKBR-3. Morte celular foi observada pelo tratamento com o extrato butanólico por 1 h; alterações morfológicas foram observadas com 500µg/mL deste extrato, após 24 h de tratamento. Após o tratamento por 48 h com o extrato butanólico nesta mesma concentração, foi observado degeneração de componentes citoplasmáticos e alterações morfológicas sugestivas de morte celular. O tratamento com 1000µg/mL deste extrato levou a profundas alterações citoplasmáticas e nucleares, incompatíveis com a viabilidade celular. O tratamento com o extrato etanólico não causou efeitos significantes no crescimento das células MCF-7 e SKBR-3; o extrato aquoso, por outro lado, estimulou o crescimento das células MCF-7, após o tratamento por 1 h. Estes resultados indicam efeitos citotóxicos exercidos pelo extrato butanólico das raízes de Pfaffia paniculata em linhagens celulares de tumor de mama humano / The roots of Pfaffia paniculata (Brazilian ginseng) are commercially available as capsules containing the powdered roots, mixed or not with the ethanolic extract of the roots. These roots have been populary recommended for many purposes, and have also been used on cancer therapy by folk medicine. The main components found in these roots that have already been isolated include pfaffic acid and pfaffosides A, C, D, E and F; these components inhibited the growth of melanoma B-16 cells, as shown in another study. The aim of this study was to investigate the effects of ethanolic, butanolic or aqueous extract of the roots of Pfaffia paniculata on the growth of human breast tumor cell lines MCF-7 and SKBR-3, using a colorimetric method (crystal violet) and quantification of bromodeoxiuridine (BrdU) positive cells. Acridine orange/ethidium bromide staining was utilized to evaluate cell death, and subcellular alteration was evaluated by electron microscopy. The butanolic extract presented cytotoxic effects in MCF-7 and SKBR-3 cell lines. Cell death was observed following treatment with the butanolic extract for 1 h; morphologic alterations were observed with 500µg/mL of this extract, after 24 and 48 h of treatment. Following treatment for 48 h with the butanolic extract with this same concentration, degeneration of cytoplasmic components and morphological alterations suggestive of cell death were observed. Treatment with 1000µg/mL of this extract lead to profound cytoplasmic and nuclear alterations, incompatible with cell viability. The treatment with ethanolic extract didn´t lead to significant effects on the growth of MCF-7 and SKBR-3 cells; the aqueous extract, on the other hand, stimulated the growth of MCF-7 cells, following treatment for 1 hour. These results point to cytotoxic effects exerted by the butanolic extract from the roots of Pfaffia paniculata on human breast tumor cell lines

A lacuna existente na compreensão das repercussões do câncer de mama feminino para casais que vivenciaram esse processo motivou a realização deste estudo, que objetivou compreender os sentidos para o câncer de mama feminino entre casais que permaneceram unidos na vivência dessa enfermidade, por meio do referencial teórico do construcionismo social. Os dados foram coletados numa amostra de sete casais entrevistados separadamente, em entrevistas semi-estruturadas com a utilização do diário de campo. A partir disso, foram identificadas três grandes temáticas referentes aos sentidos do câncer e da conjugalidade. Os sentidos do câncer foram agrupados no item vivência da doença, que contém os temas: confirmação da doença e fase do tratamento, esta subdividida nos seguintes sub-temas: a) ficando mais em casa; b) conversando omitindo a doença; c) transportando as esposas; d) cuidado fornecido por outras mulheres; e) realização do serviço doméstico: terceirizado; f) sexualidade: afastamento. E os sentidos da conjugalidade foram agrupados na temática ser marido e ser esposa. Essas temáticas emergiram dos discursos dos entrevistados ancorados na história do câncer e na moral do modelo de conjugalidade tradicional. O câncer foi associado a uma doença com sentidos de provação e morte, que despertou nos participantes sentimentos de revolta e ansiedade e a relação com Deus. Além disso, o compromisso assumido no casamento e a não revelação dos sentimentos mais íntimos experimentados por eles em relação ao câncer de mama, possibilitou a manutenção do laço conjugal em meio à experiência dolorosa da doença. Diante disso, sugere-se a relevância da assistência interdisciplinar com o intuito de desconstruir a negatividade associada ao câncer, bem como a reflexão sobre a relevância do discurso religioso como ferramenta do cuidado assistencial a essa população. / The existent gap in the comprehension of repercussions of the feminine breast cancer for couples that lived this process motivated the accomplishment of this study, which aimed to understand the meanings for the feminine breast cancer among couples that stayed united in living of this illness, through the social construction theory. The data were collected in a sample of seven couples interviewed separately, in semi-structured interviews with the use of field notes. From this, were identified three thematic related to the meanings of cancer and related to couples\' life. The meanings of cancer were gathered in disease living item that has these themes: disease confirmation and phase of treatment. The phase of treatment was subdivided in the following sub-themes: a) staying more at home; b) talking omitting the disease; c) transporting the wives; d) care supplied by other women; e) accomplishment of the domestic service: servant; f) sexuality: stand back. And the meanings of couples\' life were gathered at the thematic to be husband and to be wife. These thematic emerged of the interviewees\' speeches anchored in the history of cancer and in the moral of traditional couples\' life model. The cancer was associated it a disease with meanings of probation and death, that emerged in the participants feelings of revolt and anxiety in relation with God. Besides, the commitment assumed in the marriage and the non revelation of the most intimate feelings experienced by them in relation to breast cancer, it made possible the maintenance of the matrimonial bow amid the painful experience of the disease. Before this, it is suggested the importance of interdisciplinary assistance with the intention to construct different meanings than negativity of cancer, as well as the reflection of the importance of the religious discourse as a tool in the care of this population.

O câncer colorretal (CCR) é uma das maiores causas de óbito no mundo industrializado, com uma incidência anual de 800.000 casos novos, o que significa 8,5% de todos os novos e 12% das mortes relacionadas a essa doença. No Brasil, excluindo-se os cânceres de pele não melanoma, o CCR é o quarto mais freqüente entre os homens e o terceiro entre as mulheres. O risco de desenvolver CCR é de aproximadamente 5% a 6% na população ocidental. Existem evidências epidemiológicas de redução do CCR em 60% -90% quando a colonoscopia com polipectomia é usada preventivamente A colonoscopia ainda é o melhor método para o diagnóstico precoce do CCR e das lesões precursoras. Contudo existem falhas de detecção não desprezíveis. O objetivo deste estudo foi comparar o resultado do exame detalhado da mucosa do cólon e do reto através da colonoscopia convencional, da cromoendoscopia e do NBI, na detecção de lesões elevadas, deprimidas e planas em pacientes submetidos ao exame sem antecedentes pessoais e ou familiares. Entre janeiro de 2007 e outubro de 2009 foram selecionados 181 pacientes divididos aleatoriamente em três grupos: A: 48 pacientes, controle; B: 29 pacientes, NBI; C: 104 pacientes, cromoscopia difusa. Pode-se observar que dos 181 pacientes examinados 38 (21%) não apresentavam lesões. Os 143 pacientes com lesão, apresentaram um número médio de 2,65 lesões, com mínimo de 1 e máximo de 7 lesões. Nos total dos 181 pacientes e no conjunto dos 143 pacientes com lesões não foi observada diferença estatisticamente significante entre os três grupos A, B e C para a idade, o tempo reto-ceco e o tempo ceco-reto, enquanto que para a altura, peso e conseqüente IMC houve variação estatística. O tamanho médio das 379 lesões encontradas nos 143 pacientes, avaliado pelo seu diâmetro foi de 5,45 ± 2,84 mm, sem variação estatística entre os grupos, entre os hemicólons e entre os hemicólons nos grupos. Os tamanhos das lesões foram reunidos em três intervalos distintos: até 5 mm (76,30%), de 6 a 10 mm (19,50%) e de 11 a 20 mm (4,20%). Do total de 379 lesões, 203 (53,6%) mostraram-se neoplásicas e 176 (46,4%) não neoplásicas. O tamanho médio das 203 lesões neoplásicas foi de 5,96 mm, e das 176 não neoplásicas, 4,87 mm. As lesões neoplásicas mostraram-se maiores que as não neoplásicas, com significância estatística. Nos grupos não houve variação significante entre neoplasia e não neoplasia, mas diferença significante entre o tamanho das neoplasias e não neoplasias. Não houve diferença estatística entre os tamanhos das lesões nos dois hemicólons, mas com diferença significante entre os tamanhos das lesões neoplásicas e não neoplásicas. O mesmo se observa quando os segmentos do cólon são analisados individualmente. Os dois segmentos que apresentaram diferença significante, especificamente, quanto ao tamanho das lesões neoplásicas e não neoplásicos foram o sigmóide e o transverso. Nota-se que todas as lesões subpediculadas e as lesões plano-elevadas com depressão central eram neoplásicas. As lesões planas e neoplásicas são proporcionalmente mais visíveis no hemicólon direito nos grupos B (85,7%) e C (67,9%), sem diferença estatística. As hipóteses diagnósticas das lesões feitas durante o exame colonoscópico foram comparadas com os resultados histopatológicos. Pode-se observar que no grupo A sensibilidade de 82,7%, especificidade de 59%, com taxa de concordância de 72,5 %, considerada regular, no grupo B sensibilidade de 92,3%, especificidade de 61,9%, com concordância de 78,7 %, regular e no C sensibilidade de 88,8%, especificidade de 79,3%, taxa de concordância de 84,2%, considerada boa. Proporcionalmente o grupo C tem maior número de pacientes com três ou mais lesões e três ou mais lesões neoplásicas, mas sem valor estatístico. Conclui-se que não houve diferença estatística entre os 181 pacientes examinados e os 143 pacientes com lesões, quanto aos dados gerais, não houve diferenças significativas quanto ao número relativo, ao tipo e ao tamanho das lesões. As lesões neoplásicas apresentam-se maiores quando comparadas às não-neoplásicas, com significância estatística. A concordância entre a hipótese diagnóstica colonoscópica e a histologia é maior no grupo da cromoscopia / Colorectal cancer (CRC) is one of the largest causes of death on the industrialized world. Its annual incidence of 800.000 new cases means 8,5% of all the new ones and 12% of deaths related to this disease. In Brazil, excluding the non-melanoma skin-cancers, CRC is the fourth more frequent among men and the third one among women. The risk for developping CRC is approximately of 5 to 6% on the Western population. There are epidemiological evidences for reducing CRC on 60-90% when colonoscopy with polypectomy is used preventively. Colonoscopy is still the best method both for the early dyagnosis of CRC and precursor lesions. However, there are non-contemptible failures on the detection. This paper purpose was comparing the result of colon and rectum mucous membrane detailed test through conventional colonoscopy, chromoendoscopy and NBI, on the detection of augmented, depressed and flat lesions in patients submitted to it without any personal or familiar antecedents. Between January 2007 and October 2009 181 patients were selected randomically and divided into 3 groups: A: 48 control patients; B: 29 patients, NBI; C: 104 patients, diffuse chromoscopy. It is observed that, from the 181 examined patients, 38 (21%) didnt present lesions. The 143 patients with lesion, presented an average number of 2,65 lesions, with a minimum of 1 and a maximum of 7 lesions. On the total of the 181 patients and on the whole of the 143 patients with lesions it was not observed any statistically significant difference among the three groups A, B and C as for Age, the Rectum-Cecum Time and the Cecum-Rectum Time, while there was a statistical variation for Height, Weight and consequent bmi. The average size of the 379 lesions found on the 143 patients, assessed by its diameter was of 5,45 mm (2.14 in.) + 2,84 mm (1,11 in), without any statistical variation among the groups, among the hemicolons and among the hemicolons in the groups. The size of the lesions were gathered into three distinct intervals: up to 5 mm [1.9 in.] (76,30%), from 6 mm [2.3 in.] to 10 mm [3.9 in] (19,50%) and from 11 to 20 mm [4.3 to 7.8 in] (4,20%). From the total of 379 lesions, 203 (53,6%) revealed themselves neoplastic and 176 (46,4%) non-neoplastic. The average size of the 203 neoplastic lesions was of 5,96 mm (2.34 in.), and of the 176 non-neoplastic ones, 4,87 mm [12,36 in]. Neoplastic lesions have shown larger than the non-neoplastic ones, with a stastistical significance. On the groups there is any significant variation between neoplasia and non-neoplasia, but a significant difference between the neoplasias and non-neoplasias size. There was any statistical difference among the lesion size on both hemicolons, however, a significant difference among the sizes of neoplastic and non-neoplastic ones. The same is observed when colon segments were analyzed individually. The two segments that have presented significant lesions, specifically on what concerns the size of neoplastic and non-neoplastic ones were the Sigmoid and the Transverse. It is observed that all the subpediculated lesions and the flat-augmented ones with a central depression were neoplastics. The flat and neoplastic lesions are proportionally more visible on the right hemicolon at groups B (85,7%) and C (67,9%), without any statistical difference. The diagnostic hypotheses of the lesions grown during the colonoscopic test were compared to the histopathological results. On control group (A) it is observed a 82,7% sensibility, a 59% specificity with a concordance rate of 72,5%, considered regular. On group B it is observed a 92,3% sensibility, a 61,9% specificity, with a regular concordance rate of 78,7%. On group C it is observed a 88,8% sensibility, a 79,3% specificity, a 84,2% concordance rate, considered good. Proportionally group C has a larger number of patients with 3 or more lesions and or more neoplastic lesions, but with no statistical value. On what concerns general data, it is concluded that there wasnt any statistical difference among the 181 patients examined and the 143 ones presenting lesions as for the relative number, the type and size of the lesions. Neoplastic lesions appear to be larger when compared to non-neoplastic ones, with a statistical significance. The concordance between the colonoscopic diagnostic hypothesis and the histology is larger on chromoscopy group

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Tesis para optar al grado de Doctora en Bioquímica / El cáncer corresponde a la segunda causa de muerte en Chile y el mundo, pero los pacientes con cáncer no mueren debido al crecimiento del tumor primario, sino a la diseminación de las células tumorales y posterior colonización de éstas en nuevos órganos o metástasis. En términos generales, el cáncer es la consecuencia de un proceso multifactorial que lleva a la transformación progresiva de células normales en células altamente malignas. La amplia variedad de fenotipos del cáncer se debe a la manifestación de alteraciones esenciales en la fisiología celular, las que colectivamente dictaminan el crecimiento maligno. Dos de las características adquiridas por las células tumorales en las que se enfocará esta tesis son; la invasión de tejidos y metástasis y la reprogramación del metabolismo energético. Caveolina-1 es una proteína integral de membrana a la que se le ha atribuido un rol dual en la progresión tumoral, actuando como supresor de tumores, ya que la disminución de la expresión de caveolina-1 es suficiente para revertir el fenotipo transformado, o como promotor de metástasis en estadios tardíos del cáncer, donde la expresión de caveolina-1 aumenta sin revertir el fenotipo maligno y se correlaciona con un aumento en la migración celular y metástasis, multiresistencia a drogas y una mala prognosis para el paciente. Ambos roles de caveolina-1 se ven afectados por la presencia de la glicoproteína Ecadherina, la cual potencia su acción supresora de tumores y suprime la habilidad de caveolina-1 para promover metástasis in vivo. Sin embargo, el mecanismo por el cual E-cadherina suprime la habilidad de caveolina-1 para promover la metástasis no ha sido estudiado. La habilidad de caveolina-1 para promover un aumento en la migración en células metastásicas se relaciona con un aumento en la activación de Rab-5 y Rac-1. Ya que la reprogramación del metabolismo energético de las células, suple tanto las necesidades bioenergéticas como biosintéticas de las células cancerígenas para sostener una proliferación aumentada y una rápida migración e invasión celular, en este proyecto se caracterizó el fenotipo metabólico de las células metastásicas que expresan o no, caveolina-1 y estudiamos cómo la expresión de E-cadherina afecta el metabolismo. Caveolina-1 sufre modificaciones post-traduccionales que participan en su función intracelular, como la fosforilación en el residuo de tirosina 14 (Y14), mediada por las proteínas tirosina quinasas no receptoras Src, Fyn y Abl en respuesta a varios estímulos como. En células metastásicas de cáncer de mama, se observan altos niveles de expresión de caveolina-1 y un alto grado de fosforilación de ésta en Y14, lo que promueve un aumento en la migración celular por un aumento en el recambio de la adhesiones focales, polarización, velocidad persistencia y direccionalidad de la migración. Todas estas funciones de caveolina-1 son bloqueadas por la inhibición de la fosforilación de caveolina- 1 en Y14 tanto de manera farmacológica como por la utilización de una caveolina-1 que no es fosforilable (Y14F). Por lo tanto, el rol promotor de metástasis de caveolina-1, dependería de su fosforilación en Y14. La fosfatasa PTPN14 co-inmunoprecipita con caveolina-1 en presencia de E-cadherina y PTPN14 en células de melanoma murino e induce una disminución en la migración, formación de colonias y crecimiento independiente de anclaje de células de cáncer de colon. Estos antecedentes nos llevaron a proponer la siguiente hipótesis: En presencia de E-cadherina se recluta a la fosfatasa PTPN14 al complejo multiproteíco formado con caveolina-1 lo que reduce la habilidad promotora de migración y metástasis de caveolina-1 por la disminución de la fosforilación de ésta en tirosina 14. El objetivo principal de esta tesis es determinar el efecto de la co-expresión de caveolina-1 y E-cadherina sobre la fosforilación en tirosina de caveolina-1 (Y14) y β-catenina (Y654) y la migración e invasión celular en células cancerígenas. Para abordar la hipótesis de trabajo se plantearon los siguientes objetivos específicos: (1) Determinar el efecto de la co-expresión de caveolina-1 y E-cadherina sobre los niveles de fosforilación en tirosina 14 de caveolina-1 y en tirosina 654 de β-catenina y la migración e invasión celular; (2) Estudiar la participación de Src en la fosforilación en tirosina 14 de caveolina-1 y en tirosina 654 de β-catenina en presencia y ausencia de E-cadherina; (3) Determinar si los complejos proteicos formados con caveolina-1 en presencia de E-cadherina contienen PTPN14, la que contribuye a la desfosforilación de caveolina-1 en tirosina 14; (4) Determinar el efecto de la co-expresión de caveolina-1 y E-cadherina sobre la activación de Rab-5 y Rac-1; (5) Caracterización de los cambios metabólicos inducidos por la expresión caveolina-1 y la variación de éstos por la co-expresión con Ecadherina. Para el desarrollo de los objetivos mencionados se utilizaron líneas celulares metastásicas en las que se co-expresan caveolina-1 y E-cadherina. Se realizó ensayos de Western de blot, luego de ensayos de multiherida para determinar los niveles de fosforilación de caveolina-1 en Y14 y β-catenina en Y654, ensayos de migración por transwell, ensayos de invasión, ensayos de precipitación por afinidad para determinar la actividad de Rab-5 y Rac1 en células que expresan caveolina-1 en presencia o en ausencia de E-cadherina. Además, se caracterizaron los complejos multiproteícos formados por caveolina-1, mediante ensayos de inmunoprecipitación y espectrometría de masa en células que expresan o no E-cadherina y se caracterizó el fenotipo metabólico de células que expresan o no caveolina-1, estudiando cómo cambia éste en presencia de E-cadherina. En resumen en esta tesis se buscó dilucidar el mecanismo mediante el cual Ecadherina reduce la habilidad promotora de migración, invasión y metástasis de caveolina-1 en células de cáncer metastásicas. En este trabajo mostramos que la expresión de E-cadherina inhibe el aumento en la migración, invasión y metástasis inducido por caveolina-1 por la disminución de la fosforilación de caveolina-1 en Y14, además, de bloquear la activación del eje Rab-5/Rac1. La fosfatasa PTPN14 co-inmunoprecipitó con caveolina-1 en presencia de E-cadherina y su expresión fue capaz de inhibir el rol promotor de migración, invasión y metástasis de caveolina-1. Finalmente mostramos que la expresión y fosforilación de caveolina-1 induce un switch metabólico a un fenotipo glicolítico aeróbico por el bloqueo del complejo mitocondrial IV, generando cambios en el metaboloma de las células metastásicas congruentes con este switch metabólico. La expresión de Ecadherina bloquea el cambio metabólico inducido por caveolina-1 llevando a las células a un metabolismo quiescente / Cancer is the second leading cause of death in Chile and in the world. Cancer patients do not die due to the primary tumor growth, but rather due to the spread of the cancer cells from the primary tumor and subsequent colonization of new organs, a process known as metastasis. In general terms, cancer is the result of a multifactorial process that leads to the progressive transformation of normal cells into highly malignant cells. The wide variety of cancer phenotypes is due to alterations in cell physiology that collectively lead to the malignant cell behavior. Two of the characteristics acquired by tumor cells, on which this thesis will focus, are tissue invasion, as well as metastasis and reprogramming of energy metabolism. Caveolin-1 is a membrane protein that has been attributed a dual role in cancer progression, acting at early stages as a tumor suppressor given that augmenting the expression of caveolin-1 is sufficient to reverse the transformed phenotype, or as a promoter of metastasis in late stages of cancer, where enhanced expression of caveolin-1 favors the malignant phenotype and correlates with an increase in cell migration and metastasis, multidrug resistance and poor prognosis of the patients. Both roles of caveolin-1 are affected by the presence of the glycoprotein E-cadherin, which enhances caveolin-1 function as a tumor suppressor and suppresses the ability of caveolin-1 to promote metastasis in vivo. However, the precise mechanism by which E-cadherin suppresses the malignant traits of caveolin-1 is unknown. The ability of caveolin-1 to promote migration of metastatic cells is associated with increased activation of Rab-5 and Rac-1. Bearing in mind that the reprogramming of energy metabolism in cancer cells, is required to supplement both the both the bioenergetic and biosynthetic needs of these cells to sustain increased proliferation, rapid migration and cell invasion, this thesis also evaluated the metabolism of metastatic cells expressing or not caveolin-1 and how this was affected by the expression of E-cadherin. Caveolin-1 is subjected to posttranslational modifications relevant to protein function, such as phosphorylation on tyrosine 14 (Y14), by the non-receptors protein tyrosine kinases non-receptor Src, Fyn and Abl. This may occur in response to a large variety of different stimulus. In metastatic breast cancer cells, high levels of caveolin-1 expression and phosphorylation on Y14 are observed and associated with increased cell migration by promoting focal adhesion turnover, polarization, persistence, speed and directionality of migration. All these functions of caveolin-1 are blocked by inhibition of caveolin- 1 phosphorylation on Y14 either pharmacologically or by introducing a nonphosphorylatable caveolin-1 (Y14F) mutation. Therefore, the metastasis promoting role of caveolin-1 depends on Y14 phosphorylation. The PTPN14 phosphatase co-immunoprecipitated with caveolin-1 in the presence of Ecadherin and PTPN14 in murine melanoma cells and decreased migration, colony formation and anchorage-independent growth of colon cancer cells. These results available in the literature led us to propose that in the presence of E-cadherin PTPN14 is recruited to the multiprotein complex including caveolin-1 to reduce Y14 phosphorylation, cell migration and metastasis induced by caveolin-1. The main objective of this thesis was to determine the effect of co-expression of caveolin-1 and E-cadherin on tyrosine phosphorylation of caveolin-1 (Y14) and β-catenin (Y654), as well as migration and invasion in cancer cells. To address the working hypothesis the following specific objectives were evaluated: (1) To determine the effect of the co-expression of caveolin-1 and E-cadherin on the levels of tyrosine phosphorylation 14 of caveolin-1 and on tyrosine 654 of β catenin and migration and cell invasion; (2) To study participation of Src in the phosphorylation of the tyrosine 14 of caveolin-1 and on tyrosine β-catenin 654 in the presence and absence of E-cadherin; (3) To determine whether the protein complexes formed with caveolin-1 in the presence of E-cadherin contain PTPN14, and if this phosphatase contributes to dephosphorylation of tyrosine 14 of caveolin-1; (4) To determine the effect of coexpression of caveolin-1 and E-cadherin on the activation of Rab-5 and Rac-1; (5) To characterization of the metabolic changes induced by caveolin-1 expression and the effect of the co-expression with E-cadherin on cell metabolism. To address these objectives metastatic cell lines that co-expressed caveolin-1 and E-cadherin were used. Multiple wounding assays and Western blot analysis was used to determine the phosphorylation levels of caveolin-1 on Y14 and β-catenin on Y654 moreover migration assays, invasion assays, affinity precipitation assays were employed to determine the activity of Rab-5 and Rac1 in cells expressing caveolin-1 in the presence or absence of E-cadherin. Furthermore, protein composition the analysis of the multiprotein complex formed by caveolin-1 and E-cadherin was evaluated following immunoprecipitation assays by mass spectrometry analysis. The metabolic phenotype of cells expressing or not caveolin-1 was characterized using Seahorse extracellular analyzer and metabolic changes in presence of Ecadherin were determined. In summary, this thesis sought to elucidate the mechanism by which E-cadherin reduces the ability of caveolin-1 to promote migration, invasion and metastasis as well as metabolic reprograming of metastatic cancer cells. In this study, we show that the expression of E-cadherin prevented caveolin-1- enhanced migration, invasion and metastasis by reducing caveolin-1 phosphorylation on Y14 and, as a consequence, blocking of the activation of the Rab-5/Rac-1 signaling axis. The PTPN14 phosphatase co-immunoprecipitated with caveolin-1 in the presence of E-cadherin and overexpression or this phosphatase was sufficient to prevent the migration, invasion and metastasis promoting role of caveolin-1, even in the absence of E-cadherin. Finally we show that the expression caveolin-1 induced a metabolic switch to an aerobic glycolytic phenotype, likely by blocking the mitochondrial complex IV. These effects coincided in metastatic melanoma cells with changes in the metabolome. Moreover, the expression of E-cadherin blocked the metabolic changes induced by caveolin-1 leading to a quiescent metabolic phenotype in metastatic cells / Conicyt-FONDAP; Fondecyt ; Anillo ACT / 31 de diciembre de 2018

O presente estudo teve como objetivo compreender os sentidos da experiência da radioterapia oncológica para o paciente e o familiar cuidador, e integrá-los em significados socialmente construídos, por meio da análise etnográfica interpretativa. Para isso tomou-se apoio no referencial teórico da antropologia interpretativa de Clifford Geertz, da corrente da antropologia médica e do método da etnografia em centros urbanos. Foi uma pesquisa com abordagem metodológica qualitativa, realizada no Centro Regional de Oncologia em um município do sul do Brasil. Participaram do estudo 20 informantes, sendo 10 pacientes e 10 familiares cuidadores, que freqüentaram o serviço no período de março a agosto de 2007. Para a coleta de dados foram realizadas observações participantes e entrevistas semi-estruturadas no domicílio dos informantes, durante o período da radioterapia e trinta dias após o seu término; também foram elaborados os genograma e ecomapa para a contextualização dos informantes. A análise dos dados apoiou-se nos pressupostos analíticos de Hammersley e Atkinson, dentre outros autores. Foram identificados os códigos que apontaram o sentido da experiência para os informantes e que, posteriormente, serviram de guia para as unidades de sentidos e a construção dos núcleos de significados: \"Do adoecer por câncer à radioterapia - uma trajetória construída\"; \"A experiência da radioterapia: remédio e veneno\" e \"As teias da sobrevivência oncológica\". No primeiro núcleo, abordo os sentidos atribuídos para a trajetória do diagnóstico do câncer e o seu sentido impactante de morte, a via crucis pelo serviço de saúde público e as decisões terapêuticas, além da incorporação da identidade da pessoa como paciente oncológico, com o apoio das redes sociais, como a família, os amigos e a religião. O segundo tema versa sobre a entrada dos informantes no mundo da radioterapia, que se revelou como um momento desgastante, angustiante e sofrido; porém, também teve o sentido de um combate, uma vez que os pacientes submeteram-se à terapêutica com a visão de um remédio-veneno, poderoso e capaz de aniquilar o câncer e possibilitar a cura. No terceiro tema, abordei o tecer da teia para os informantes se ajustarem à nova vida e ao surgimento da nova identidade: a de sobrevivente do câncer. Nessa nova identidade, eles retomaram as atividades diárias e planejaram o futuro com esperança, apesar de uma sombra de incerteza em relação à cura. Finalizei com a consideração de que o significado da experiência da radioterapia oncológica para esse grupo de pessoas, da classe popular, significou a necessidade de submeter-se a uma terapêutica com uma característica de remédio-veneno que causa temor, mas que é necessária, se a perspectiva de vida é a cura ou mesmo a sobrevivência ao câncer. / The study aimed at understanding the senses of the experience of the radiotherapy oncologyc for the patient and the relative caretaker, and to integrate them in meant socially built, through the analysis interpretative ethnographic. For that was taken support in the theoretical referential of Clifford Geertz\'s interpretative anthropology, of the current of the medical anthropology and of the method of the ethnography in urban centers. It was a research with qualitative methodological approach, accomplished in the Regional Center of Oncology and Radiotherapy in a municipal district of the south of Brazil. Took part of the study 20 informers, being 10 patient and 10 family caretakers, which frequented the service in the period of March to August of 2007. For the collection of data, participant observations and semi-structured interviews were accomplished in the home of the informers, during the period of the radiotherapy and thirty days after the end of the treatment, and also elaborated genogram and ecomap for the contextualization of the informers. The analysis of the data was supported on the analytical presuppositions of Hammersley and Atkinson, among other authors. It was identified the codes that pointed the sense of the experience for the informers and that, later, they served as guide for the units of senses and the construction of the meanings nucleus: \"Of getting sick for cancer to the radiotherapy - a trajectory built\"; \"The experience of the radiotherapy: medicine and poison\" and \"The webs of the survival oncologic\". In the first nucleus, were approached the senses attributed for the trajectory of the diagnosis of the cancer and its sense of impact of death, the via crucis for the public service of health and the therapeutic decisions, besides the incorporation of the person\'s identity as a oncological patient with the support of the social nets, as the family, the friends and the religion. The second turns on the entrance of the informers in the world of the radiotherapy, that was revealed as a moment stressful, distressing and suffered; however, it also had the sense of a combat, once the patients underwent the therapeutics with the vision of a medicine-poison, powerful and capable of to annihilate the cancer and to make possible the cure. In the third theme, it was approached weaving of the web for the informers if they adjust to the new life and the appearance of the new identity: the one who survivor to the cancer. In that new identity, they retook the daily activities and they planned the future with hope, in spite of an uncertainty shadow in relation to the cure. It was concluded with the consideration that the meaning of the experience of the radiotherapy for that group of people, of the popular class, meant the need to submit to a therapy with a characteristic medicine-poison that causes fear, but that is necessary, if the life perspective is the cure or even the survival to the cancer.

Estudo exploratório, descritivo, com abordagem qualitativa, que teve como objetivo analisar a influência de um núcleo de reabilitação para mastectomizadas na vida das mulheres que o frequentam e identificar quais tipos de mudanças ocorreram em suas vidas. Participaram 13 mulheres com idade entre 49 e 82 anos, que frequentavam o grupo de reabilitação há no mínimo três meses. Os dados foram obtidos por meio de entrevistas, com perguntas abertas. Procurou-se identificar unidades temáticas pela Análise de Conteúdo, nas seguintes categorias: 1. Deparando-se com uma nova realidade; 2. Encontrando uma forma de enfrentamento da nova realidade; 3. Mudando comportamentos e maneiras de pensar. Os resultados mostraram que após terem sido encaminhadas ao serviço de reabilitação, as mulheres começaram a entender que havia uma forma de enfrentar, com um pouco menos de sofrimento, a dura realidade de ter câncer de mama, uma doença estigmatizante, que lhes gerava dúvidas e medos em relação ao presente e ao futuro. A frequência ao serviço de reabilitação fez com que elas se descobrissem como membros do grupo e acolhidas, tanto pelas outras mulheres como pelos profissionais; sentiram nestes últimos uma verdadeira preocupação em atender todas as suas necessidades físicas, emocionais e psicossociais. Compartilharam experiências, compreenderam a importância de dividir seus problemas com o grupo, conseguiram pedir e oferecer ajuda. Encontraram um grupo de \"iguais\", e sentiram-se à vontade para compartilhar experiências, criar novas amizades e até mesmo uma \"nova família\". Conseguiram ressocializar-se. Reconheceram-se mais fortes para enfrentar o câncer, sentiram que podiam melhorar e que podiam e deviam participar de sua reabilitação, chegando a modificar comportamentos e maneiras de pensar sobre a doença e suas consequências, sobre as pessoas e sobre si mesmas. Reconheceram o serviço de reabilitação, ou seja, o grupo de mulheres e profissionais, como o grande responsável pelas mudanças positivas que ocorreram em suas vidas; conseguiram lidar melhor até mesmo com as questões da própria finitude e manifestaram a apropriação do senso crítico, quando propuseram, ainda que de forma discreta, algumas sugestões para aprimoramentos na assistência oferecida pelo serviço. O serviço de reabilitação é o lugar onde encontram ânimo para seguir a vida, com segurança para rir e chorar, falar e calar, ouvir e ser ouvida, sem reprimendas. Consideram um privilégio poder desfrutar de tudo o que serviço oferece, inclusive atividades de lazer e sem gastos financeiros. Fazer parte desse grupo significou para as participantes deste estudo um presente de Deus, a chance de vislumbrar uma nova vida. / Exploratory, descriptive, qualitative approach, which aimed to examine the influence of a full mastectomy rehabilitation group in women who lives attend it and identify what kinds of changes in their lives. Participants included 13 women aged between 49 and 82 years who attended the rehabilitation group for at least three months. Data were obtained through interviews with open questions. We sought to identify thematic units through content analysis, the following categories: 1. finding a new reality, 2. finding a way to face the new reality; 3. changing behavior and way of thinking.The results showed that after being sent to rehabilitation services, women began to understand that there was a way to deal with a little less suffering, the harsh reality of having breast cancer, a stigmatizing disease, they generated questions and fears about the present and the future. Attendance at the rehabilitation service meant that they were discovered as members of the group and accepted by both other women and professionals, experienced in the last a genuine concern to meet all their physical, emotional and psychosocial factors. Shared experiences, understood the importance of sharing their problems with the group, could ask for and offer help. They found a group of \"equal\" and felt free to share experiences, new friendships and even a \"new family\". They managed to re-socialize. Acknowledged to be stronger to cope with cancer, they felt they could improve and that could and should participate in them rehabilitation, getting to change behaviors and ways of thinking about disease and its consequences, about people and about themselves. Acknowledged the service of rehabilitation, the group of women and professionals, as largely responsible for the positive changes occurring in their lives got better even with the issues of their own finitude and expressed the appropriation of critical sense, when they proposed , albeit discreetly, some suggestions for improvements on the care offered. The rehabilitation service is the place where they find the courage to follow the life safely to laugh and cry, talk, listen and be heard without reprimand. They consider it a privilege to enjoy all that service offers, including leisure activities and no financial expenditure. Being part of this group has meant to the participants in this study a godsend chance to glimpse a new life.