Estudamos indução da atividade de MMP pelo peptídeo da laminina a1 AG73 em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico. CAC2 cultivadas em laminina-111 com AG73 geraram espaços pseudocísticos. Inibidor de MMP diminuiu tais espaços, sugerindo ação de MMPs. CAC2 crescidas sobre AG73 mostraram aumento dose-dependente de MMP9. RNAi para MMP9 diminuiu remodelação em cultura 3D. Buscamos receptores de AG73 ligados à atividade de MMP9. CAC2 crescidas sobre AG73 exibiram colocalização de sindecan-1 e integrina b1. RNAi para sindecan-1 ou para integrina b1 geraram, isolados, redução na adesão a AG73 e nas atividades de remodelação e de protease. Duplo RNAi estudou a cooperação entre os receptores e promoveu diminuição na adesão a AG73 e na atividade de MMP. Distinção de receptores foi feita por cromatografia de afinidade e espectrometria de massa, através de colunas de afinidade com AG73 acoplado, que resultou em possíveis receptores, como integrinas b1 e aV. Sugerimos que AG73 regula adesão e secreção de MMP em células CAC2 através de sindecan-1 e integrina b1. / We studied induction of MMP activity by b1-laminin peptide AG73 in adenoid cystic carcinoma cell line (CAC2). Cells grown inside AG73-enriched laminin-111 exhibited pseudocystics spaces. MMP inhibitor decreased those spaces, suggesting MMPs action. Cells grown on AG73 showed a dose-dependent increase of MMP9 secretion. MMP9 siRNAi decreased remodeling in 3D culture. We searched for AG73 receptors regulating MMP9 activity. CAC2 grown on AG73 exhibited colocalization of syndecan-1 and b1 integrin. Syndecan-1 siRNA or siRNA b1 integrin showed reduction in adhesion to AG73 and in remodeling and protease activities. Double-knockdown explored syndecan-1 and 1 integrin cooperation and showed decrease in adhesion to AG73 and in MMP activity. Receptors characterization was made by affinity chromatography followed by mass spectrometry through AG73-affinity columns and showed putative receptors, like b1 and aV integrins. We suggest that AG73 peptide regulates adhesion and MMP secretion in CAC2 cells through syndecan-1 and b1 integrin.

O objetivo deste trabalho foi avaliar as propriedades físicas e adesivas do esmalte dental após radioterapia e colagem de bráquetes ortodônticos metálicos e cerâmicos. O estudo foi dividido em duas etapas. Na primeira, foram utilizados 10 molares permanentes humanos hígidos, que foram seccionados em fragmentos de esmalte de 1 mm² e divididos entre grupo irradiado e não irradiado, de forma pareada. O grupo irradiado foi submetido à radiação ionizante, com uma dose total de 60 Gy, 2 Gy/dia, durante seis semanas, com intervalo de dois dias entre às semana. Os fragmentos de esmalte dental foram submetidos a teste mecânicos de microcisalhamento para verificar se a radioterapia alterou a resistência coesiva do esmalte dental irradiado. A segunda etapa deste estudo utilizou-se de 90 pré-molares humanos hígidos e devidamente preparados, divididos em seis grupos/subgrupos (n=15): G1 - dentes não irradiados e não envelhecidos; G2 - dentes não irradiados e envelhecidos; G3 - dentes irradiados e envelhecidos; Subgrupos: bráquetes metálicos (M) e bráquetes cerâmicos (C). Os grupos G2 e G3 foram submetidos à envelhecimento artificial acelerado por meio de termociclagem, simulando o período aproximado de 1 a 2 anos, tempo esse indicado para o início de tratamento ortodôntico em pacientes pós radioterapia. Em seguida, os grupos G2 e G3 foram submetidos à radioterapia, conforme descrito. Finalizado o ciclo radioterápico, os bráquetes foram colados no esmalte dental dos espécimes com compósito Transbond XT, sendo o bráquete metálico Morelli e cerâmico Radiance. Após 24 horas, os corpos de prova foram submetidos à teste mecânico de cisalhamento e a superfície do esmalte avaliada em microscopia confocal de varredura à laser (MCVL) avaliando o índice de remanescente adesivo (IRA) e modo de fratura. Em seguida, quatro corpos de prova que apresentaram fratura do tipo coesiva de cada grupo/subgrupos foram devidamente preparados e a interface compósito/esmalte avaliada em MCVL e microscopia eletrônica de varredura. Os fragmentos de esmalte dental submetidos à radiação apresentaram menores valores de resistência ao cisalhamento do que o esmalte dental não irradiado (p<0,05). Levando em consideração a interação dos fatores dos espécimes submetidos ao teste de cisalhamento, os grupo/subgrupos submetidos à radiação e colados bráquetes cerâmicos, apresentaram menores valores de resistência. Os grupos não submetidos à irradiação, G1-M e G2-M, apresentaram com maior frequência IRA escore 0 (sem compósito na superfície), enquanto, os grupos G1-C, G2-C, G3-M e G3-C apresentaram mais de 50% de compósito aderido à superfície Quanto ao modo de fratura, os grupos controle apresentaram em sua maioria os tipos de fratura adesiva (Ad) e coesiva resina (CR), independente do tipo de bráquete Os bráquetes metálicos colados em esmalte dental submetidos à irradiação apresentaram fratura do tipo mista coesiva resina/adesiva (CR/Ad), enquanto os bráquetes cerâmicos resultaram em fraturas coesiva resina (CR) e coesiva resina/adesiva (CR/Ad). Nas imagens obtidas da região de interface compósito/esmalte, observou-se que os tags de resina foram mais extensos no esmalte dental irradiado, circundando os prismas de esmalte. Assim, conclui-se que a radiação diminuiu a resistência coesiva do esmalte dental e que os espécimes submetidos à radioterapia apresentaram maior falha adesiva entre bráquete/compósito e tags de resina mais extensos e profundos quando comparados ao grupo controle / The objective of this study was to evaluate the physical and adhesive properties of the enamel after radiotherapy and bonding of metal and ceramic orthodontic brackets. The study was divided into two stages. In the first one, 10 human permanent molars, which were cut into fragments of enamel 1 mm² and divided between irradiated and non-irradiated group, in a paired form. The irradiated group was subjected to ionizing radiation, with a total dose of 60 Gy, 2 Gy / day for six weeks, with an interval of two days between the weeks. The enamel fragments were subjected to mechanical testing to verify that microshear radiotherapy changed cohesive strength of the irradiated enamel. In The second phase of this study, was used 90 healthy and properly prepared human premolars,divided into six groups / subgroups (n = 15): G1 - non-irradiated teeth and not aged; G2 teeth unirradiated and aged; G3 - irradiated and aged teeth; Subgroups: metallic brackets (M) and ceramic brackets (C). G2 and G3 were subjected to accelerated artificial aging by thermal cycling, simulating period of approximately 1 to 2 years, this time indicated for the beginning of orthodontic treatment in post radiotherapy patients. Then the G2 and G3 groups underwent radiotherapy as described. After the radiotherapy cycle, the brackets were bonded on the enamel specimens with Transbond XT, and the metallic and Morelli ceramic bracket Radiance. After 24 hours, the specimens were subjected to mechanical shear test and evaluated the enamel surface in confocal laser scanning microscopy (CLSM) evaluating the adhesive remnant index (ARI) and fracture mode. Then four specimens showed that the cohesive fracture type were properly prepared for each group / subgroup and the composite interface / enamel evaluated CLSM and scanning electron microscopy. Fragments enamel subjected to radiation had significantly lower shear strength than the non-irradiated enamel (p <0.05). Considering the interaction of the factors of the specimens subjected to shear stress, the group / subgroup undergoing radiation and bonded ceramic brackets showed lower resistance values. The two groups were subjected to irradiation, G1 and G2-M-M, showed more IRA frequency scores of 0 (no composite surface), while the C-G1, G2, C, G3 and G3-M-C groups had more 50% of adhesive left on the surface Concerning the fracture mode, the control groups showed mostly the types of adhesive fracture (Ad) and cohesive resin (CR), regardless of the bracket\'s metal brackets bonded submitted to enamel irradiation, that showed mixed type of cohesive resin / adhesive (CR / Ad) fracture, while ceramic brackets resulted in cohesive fractures resin (CR) and cohesive resin / adhesive (CR / Ad). In images obtained from the composite region / enamel interface, it was observed that the resin tags were more extensive in the irradiated tooth enamel surrounding the enamel prisms. Thus, it is concluded that radiation decreased the tensile strength of the enamel and the specimens treated with radiotherapy had higher adhesive failure between bracket / composite and tags of more extensive and deep resin, compared to the control group

Introdução: O ameloblastoma é uma neoplasia odontogênica invasiva localmente e de grande significado clínico. Este estudo avaliou o tratamento do ameloblastoma comparando dois métodos terapêuticos: curetagem e curetagem seguida de crioterapia. Método: análise retrospectiva de 53 pacientes portadores de ameloblastoma tratados no Serviço de Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Facial do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo entre 1997 e 2006. Dados demográficos, clínicos, radiográficos e histopatológicos foram analisados. Análise estatística foi realizada para avaliar diferenças na ocorrência de recidiva entre os dois tipos de tratamento conservador e outras variáveis referentes ao tumor. Resultados: 25 pacientes eram homens e 28 mulheres, com idade média de 27,1 anos. A mandíbula foi afetada em 49 casos (92,5%). Radiograficamente, a imagem mais comum foi a multilocular (67,3%). O tamanho radiográfico médio das lesões foi de 62 mm (5 a 115 mm). Os padrões histopatológicos predominantes foram o folicular e o plexiforme com 17 casos (32,1%) cada, seguido pelo misto com 11 casos (20,8%). Ameloblastoma unicístico representou 11,3% da amostra com seis casos. O tratamento consistiu de curetagem seguida de crioterapia em 30 casos (56,6%), curetagem em 18 (33,9%), mandibulectomia segmentar em quatro (7,6%) e ressecção de partes moles em um (1,9%). Não houve diferença estatística no índice de recidiva entre as duas formas de tratamento conservador. Localização, tipo histopatológico, aspecto radiográfico e histórico de tratamento prévio do tumor não tiveram relação com índice de recidiva. Deiscência foi a complicação mais freqüente em ambos os tratamentos. Fratura patológica da mandíbula e formação de seqüestro ósseo foram complicações associadas predominantemente com a crioterapia, quando comparadas à curetagem. Conclusão: A taxa de recidiva do ameloblastoma tratado por curetagem (5,5%) e curetagem seguida de crioterapia (10%) foi baixa em comparação com a maioria dos estudos da literatura. Recidivas diagnosticadas e tratadas em tempo oportuno não representaram insucesso do tratamento. / Introduction: The ameloblastoma is a locally aggressive odontogenic neoplasm with important clinical implications. This study evaluated the effectiveness of ameloblastoma treatment comparing two therapeutic methods: curettage and curettage followed by cryotherapy. Method: Retrospective review of fifty three patients with ameloblastoma from the Service of Maxillofacial Surgery and Traumatology of the Clinics Hospital, Faculty of Medicine, São Paulo University, from 1997 to 2006. The demographics aspects, clinics, radiographics and histologic types of the lesions were analysed. Additionally, the results and the postoperative complications related to both treatment modalities were also evaluated. Statistical analysis to observe the difference in the local recurrence rate and clinical variations between the two techniques was performed. Results: Eighteen patients (33.9%) were treated with curettage, 30 (56.6%) with curettage following by cryotherapy, segmentar mandibulectomy in four (7.6%) and ressection of soft parts in one (1.9%). Of the 53 patients, twenty five were female and twenty eight were male, with a mean age of 27.1 years. The mandible was the most affected site (92.5%). Radiographically, the most common aspect was multilocular image (67.3%) with a medium size of 62 mm. Follicular and plexiform ameloblastoma were the most common histological type (32.1%, each), followed by mixed of two or more histological types (20.8%) and unicystic type (11.3%). No statistical difference was revealed concerning the local recurrence rates. In addition, the site of occurrence, histologic types, radiographics aspects or previous history of ameloblastoma treatment did not show any correlation with local recurrence. Dehiscence was the complication more frequent of the both treatments. Pathological jaw fractures and formation of bony kidnapping were the complications predominantly associated with curettage following by cryotherapy. Conclusion: The recurrence rate of the ameloblastomas treated by curettage (5.5%) and curettage following by cryotherapy (10%) was low in comparison with most of the studies of the literature. Recurrences diagnosed and treated in opportune time did not represent failure of the treatment.

INTRODUÇÃO: A utilização das técnicas minimamente invasivas vem se difundindo principalmente após o desenvolvimento da técnica robótica, principalmente em patologias com alta incidência como a neoplasia da próstata. Apesar da cirurgia minimamente invasiva aparentemente proporcionar menor dor no pós-operatório, ainda assim alguns pacientes necessitam opióides que possuem efeitos colaterais indesejáveis. O uso de medicações adjuvantes durante o intraoperatório, como a Dexmedetomidina (DEX) pode diminuir o seu uso pelo efeito poupador de opióides e analgésico. OBJETIVOS: Avaliar o impacto do uso da DEX em pacientes submetidos a prostatectomia radical robótica. MÉTODO: Estudo retrospectivo em cem pacientes submetidos a prostatectomia radical robótica. Quarenta e oito pacientes não utilizaram DEX, e 52 pacientes receberam dexmedetomidina na dose de 0,3 a 0,7mcg/kg/h no intraoperatório e desligado meia hora antes do final do procedimento. Durante o procedimento e no pós-operatório receberam analgésico opióide e não opióide sob prescrição ou a critério do anestesiologista. O consumo de medicação opióide e não opióide e escores de dor através do consumo de analgésicos foram avaliados durante a RPA, POI e 1PO, dividindo os pacientes em quatro grupos (sem DEX, nem Morfina; somente DEX; DEX com morfina; Morfina apenas). RESULTADOS: Nossos resultados demonstraram que a utilização de DEX no intra-operatório levou a um aumento da utilização de morfina na RPA, comparado aos grupos (28,1%, 38,5%, 25% e 15,4%, necessitaram de mais do que 5 mg de morfina na RPA) (p=0,135). Os pacientes que tomaram apenas DEX também demonstraram mais dor forte (84,6%) e menos pacientes sem dor (15,4%) (p=0,001). A DEX foi responsável pela diminuição da utilização de analgésico não opioide na RPA do grupo onde somente a DEX foi utilizada e nenhum paciente necessitou de analgésico não opioide e do grupo onde houve associação de DEX e morfina (2,8%), sendo que nos outros 2 grupos 12,5% necessitaram (p=0,083) O grupo que recebeu DEX e morfina foi o que menos recebeu morfina na RPA (59% não recebeu nenhuma morfina) (p=0,135). No POI e no 1PO, 100% dos pacientes não receberam nenhuma morfina (p=0,555). Este último grupo de pacientes também apresentou menor dor, sendo que 48,7% não apresentou dor na RPA e 51,3% na avaliação durante o POI (p=0,001). A combinação das duas drogas levou a uma impressionante redução da dor no POI (10,3%), de aproximadamente 8 vezes menos dor forte do que no grupo sem utilização de nenhuma droga (81,3%) (p=0,000). CONCLUSÃO: Portanto a utilização da DEX durante o intra-operatório não mostrou resultado favorável na diminuição do consumo de morfina, na diminuição da dor dos pacientes submetidos a prostatectomia radical robótica, mas, quando usamos morfina associado a morfina houve uma melhora nos resultados da dor e diminuição significativa de consumo de morfina no período pós-operatório / Introduction: Minimally invasive techniques are spreading in high incidence diseases like prostate cancer. Patients undergoing minimally invasive procedures seem to have a better pain control but many still require opioid analgesia that can induce undesirable side effects. The use of adjuvant agents as DEX intraoperatively can be desirable for their analgesic and opioid sparing effect. Purpose: Evaluate the impact of DEX use in patients undergoing robotic radical prostatectomy. Methods: The present retrospective study included 100 patients who underwent robotic-assisted laparoscopic prostatectomy. Forty-eight patients did not receive DEX was the control group and fifty-two received DEX infusion at a rate of 0,3-0,7mcg/kg/h and discontinued 30 minutes before the end of the procedure. Patients received opioid and non-opioid analgesia under prescription and anesthesiologist discretion. Opioid and non-opioid analgesia consumption and pain scores (measured by opioid and non-opioid analgesia consumption) were collected on postoperative period, immediate postoperative period and first postoperative period. Results: Our results demonstrated that compared with the groups(28,1%, 38,5%,25% e 15,4% had more than 5mg of morphine on postoperative care unit), patients that received DEX intraoperatively, required higher doses of morphine on postoperative care unit.The DEX group presented more patients with severe pain (84,6%) and fewer without pain(15,4%).The use of DEX intraoperatively lead to a reduction of non-opioid use in postanesthesia care unit and neither patients had non opioid analgesia , when morphine is associated to DEX 2,8% received, and with the other two groups 12,5% (p=0,083). The DEX and morphine received less morphine than the other groups on postanesthesia care unit (59% received any morphine)(p=0,135).On immediate postoperative period and first postoperative period , 100% received any morphine(p=0,555), this group had more patients with lesser pain, 48,7% had no pain on postanesthesia care unit e 51,3% on immediate postoperative period. The combination of DEX and morphine lead to an impressive reduction of pain on immediate postoperative period(10,3%),patients had about 8 times less severe pain than the group that did not receive neither morphine or DEX(81,3%)(p=0,000).Conclusion: The use of DEX infusion was not suitable regarding morphine spare and reduction of pain of the patients undergoing robotic-assisted radical prostatectomy. An association between DEX and Morphine seems to be the best option to relieve post-op pain and decrease morphine usage

Aproximadamente 4% das pacientes com câncer de mama têm o diagnóstico abaixo dos 36 anos. Mutação germinativa nos genes BRCA1 ou BRCA2 pode ser um dos fatores de predisposição e a identificação de pacientes carreadoras pode permitir o direcionamento do tratamento e o aconselhamento familiar para medidas de prevenção e detecção precoce. Entretanto, a maioria das pacientes apresenta câncer esporádico e fatores predisponentes são menos evidentes. Para estas pacientes, a identificação de mutações somáticas pode permitir a melhor compreensão da biologia da doença e o desenvolvimento de tratamentos dirigidos a alvos moleculares. Assim, nossos objetivos foram avaliar em pacientes jovens com câncer de mama: história familiar, hábitos de vida, mutação germinativa nos genes BRCA1 e BRCA2 e mutações somáticas no tumor. Oitenta e três pacientes diagnosticadas com câncer de mama entre 18-35 anos foram entrevistadas usando um questionário. O DNA foi extraído do sangue periférico e toda região codificadora dos genes BRCA1/2 foi sequenciada pelo método de sequenciamento de Sanger e a pesquisa de grandes deleções e inserções foi realizada por Amplificação Dependente da Ligação de Múltiplas Sondas (MLPA). Os resultados foram analisados utilizando-se os programas Mutation Surveyor v.3.20 e Chromas version 2.13 e as mutações foram caracterizadas utilizando-se os bancos de dados BIC, LOVD, LOVD-IARC, UMD e ClinVar. O sequenciamento completo do exoma foi realizado em amostras de sangue e tumor fresco congelado de oito pacientes (receptor hormonal positivo, HER2 negativo e BRCA1/2 tipo selvagem) usando Nextera Rapid Capture Enrichment e sequenciadas no Illumina HiSeq 1000. Para detecção de alterações somáticas provenientes do sequenciamento completo do exoma, foi utilizado o programa SomaticSniper (v1.0.2). Foi também analisada a presença de mutação somática no gene PIK3CA em amostras tumorais em blocos de parafina de pacientes jovens e pacientes mais idosas com câncer de mama. Além disso, foi realizada uma meta análise para avaliar se mutação somática nos cinco genes mais frequentemente mutados em câncer de mama estão associados à idade precoce. A idade mediana das 83 pacientes ao diagnóstico foi 32 anos (22-35 anos); idade mediana da menarca foi 13 anos (8-19 anos); 71,1% já passaram por pelo menos uma gestação a termo com idade mediana de 22 anos (14-34 anos); 80,7% nunca fumaram; 74,7% não ingerem bebida alcoólica regularmente; a média para índice de massa corpórea foi 25,26 (10,78-41,57). A maioria das pacientes teve diagnóstico de carcinoma ductal invasivo (89,3%), grau histológico III (49,4%), subtipo luminal (65,9%) e com expressão de Ki67 >14% (89,2%). Aproximadamente 52% das pacientes relataram história familiar para câncer de mama, ovário ou próstata. Mutações deletérias nos genes BRCA1/2 foram detectadas em 13 pacientes (BRCA1, n= 4 e BRCA2, n= 9). Uma mutação nova, que gera um códon de terminação (c.483T>A; p.Cys161Ter), foi detectada no exon 6 do gene BRCA2. O sequenciamento do exoma foi realizado em amostras de oito pacientes carreadoras de BRCA1/2 tipo selvagem e tumor subtipo luminal e revelou uma média de 39 alterações somáticas por tumor (variando entre 19-74). Foram observadas alterações com potencial driver em 53 genes, como PIK3CA, PRKD1, PRKAR1A e PIK3AP1, que codificam proteínas tirosina quinase ou proteínas envolvidas na regulação de proteínas quinases; e no gene POLD1, que codifica a subunidade catalítica da polimerase delta, com papel na replicação e reparo do DNA. Em uma meta análise observamos que a mutação somática no gene PIK3CA é relativamente frequente em pacientes jovens e idosas. Concluindo, mais de 15% das pacientes jovens são carreadoras de mutação deletéria nos genes BRCA1 ou BRCA2. Em pacientes com câncer esporádico foram encontradas mutações somáticas em genes que codificam proteínas tirosina quinase ou proteínas envolvidas em reparo de DNA. Em consonância com o observado em tumores de pacientes mais idosas, mutação somática no gene PIK3CA é relativamente frequente em tumores de pacientes jovens / Approximately 4% of the breast cancer patients have their diagnosis under the age of 36 years and germline mutations in BRCA1 or BRCA2 genes is one of the predisposing factors. Identification of patients who are mutation carriers may contribute for the adoption of targeted therapies and for genetic counseling of their family members for early detection or preventive measures. However, most patients present with sporadic cancer where predisposing factors are less understood. In the latter group of patients, the identification of somatic mutations may contribute to a better understanding of the biology of the disease and to the development of molecular targeted therapies. Therefore, our goals were to characterize early onset breast cancer patients for family history, lifestyle, germline mutations in BRCA1 and BRCA2 genes and somatic mutations. Eighty-three breast cancer patients aged 18-35 years were interviewed using a questionnaire. DNA was extracted from peripheral blood and all coding regions of BRCA1/2 genes were screened by Sanger sequencing and large deletions and insertions were examined by Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification (MLPA). Results were analyzed through Mutation Surveyor v.3.20 and Chromas version 2.13 and searched in BIC Database, LOVD, LOVD-IARC, UMD and ClinVar. Whole exome sequencing was performed in blood and fresh-frozen tumor samples from eight patients (hormone receptor positive, HER2 negative and BRCA1/2 wild type) using Nextera Rapid Capture Enrichment in an Illumina HiSeq 1000. To detect somatic SNVs from whole exome sequencing data, SomaticSniper (v1.0.2) was used. Somatic mutation in PIK3CA gene was then searched in Formaldehyde Fixed-Paraffin Embedded samples from another group of young and older breast cancer patients. In addition, a metaanalysis was performed to evaluate whether somatic mutations in the five genes most frequently mutated in breast cancer patients were associated with an early age onset. Median age of 83 patients at diagnosis was 32 years (22-35y), median age of menarche was 13 years (8-19y); 71.1% patients had at least one born child, median age of first pregnancy was 22 years (14-34y); 80.7% were never smokers; 74.7% reported no regular alcoholic drinking; median body mass index was 25.26 (10.78-41.57). Most patients presented with invasive ductal carcinoma (89.3%), histological grade III (49.4%), luminal subtype (65.9%) and Ki67 expression > 14% (89.2). Approximately 52% of the patients reported a positive family history for breast, ovarian or prostate cancer. Deleterious mutations in BRCA1/2 genes ware detected in 13 patients (BRCA1, n= 4 and BRCA2, n= 9). One novel mutation was detected in BRCA1 gene: a stop codon in exon 6 (c.483T > A; p.Cys161Ter). Exome sequencing was evaluated in eight luminal tumors fromBRCA1/2 wild type patients and a median of 39 somatic alterations/tumor was detected, varying from 17 to 74. Potential driver alterations were detected in 53 genes, such as PIK3CA, PRKD1, PRKAR1A and PIK3AP1, that encode tyrosine kinase proteins or proteins involved in tyrosine kinases regulation; and POLD1 gene, that encodes the catalytic subunit of DNA polymerase delta which plays a critical role in DNA replication and repair. A Meta-analysis showed that somatic mutation in PIK3CA gene was frequently detected in both young and older patients. In conclusion, more than 15% of the young breast cancer patients are BRCA1 or BRCA2 mutation carriers. In patients with sporadic cancer somatic mutations were found in genes that encode tyrosine kinase proteins or are involved in the DNA repair. In agreement with what was observed in tumors from older patients, somatic mutation in PIK3CA gene is relatively frequent in tumors from young patients

Leung Kam Tong. / Thesis submitted in: September 2006. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2007. / Includes bibliographical references (leaves 79-95). / Abstracts in English and Chinese. / Abstract --- p.i / Abstract (Chinese) --- p.iii / Acknowledgements --- p.v / Table of contents --- p.vi / List of figures --- p.ix / List of abbreviations --- p.xii / Chapter Chapter 1 --- General Introduction --- p.1 / Chapter 1.1 --- Acute lymphoblastic leukemia --- p.1 / Chapter 1.2 --- T-cell acute lymphoblastic leukemia --- p.2 / Chapter 1.2.1 --- Chemotherapy --- p.2 / Chapter 1.2.1.1 --- Induction therapy --- p.2 / Chapter 1.2.1.2 --- Intensification therapy --- p.3 / Chapter 1.2.1.3 --- Maintenance therapy --- p.3 / Chapter 1.2.2 --- Chemoresistance in T-ALL --- p.3 / Chapter 1.3 --- Apoptosis and chemoresistance --- p.5 / Chapter 1.3.1 --- "Initiation, execution and regulation of apoptosis" --- p.5 / Chapter 1.3.1.1 --- Initiation of apoptosis --- p.5 / Chapter 1.3.1.2 --- Execution of apoptosis --- p.7 / Chapter 1.3.1.3 --- Regulation of apoptosis --- p.7 / Chapter 1.3.2 --- Mechanisms of resistance to apoptosis --- p.9 / Chapter 1.3.2.1 --- Overexpression of pro-survival proteins --- p.9 / Chapter 1.3.2.2 --- Downregulation and mutation of pro-apoptotic proteins --- p.11 / Chapter 1.3.2.3 --- Other mechanisms --- p.13 / Chapter 1.4 --- Bcl-2 interating mediator of cell death --- p.14 / Chapter 1.4.1 --- Role of Bim in apoptosis --- p.16 / Chapter 1.4.2 --- Regulation of Bim --- p.17 / Chapter 1.4.2.1 --- Transcriptional regulation of Bim --- p.18 / Chapter 1.4.2.2 --- Post-transcriptional regulation of Bim --- p.18 / Chapter 1.5 --- c-Jun N-terminal kinase --- p.20 / Chapter 1.5.1 --- Pro-apoptotic role of JNK --- p.21 / Chapter 1.5.2 --- Anti-apoptotic role of JNK --- p.21 / Chapter 1.6 --- Hypotheses --- p.22 / Chapter Chapter 2 --- Materials and Methods --- p.23 / Chapter 2.1 --- Cell culture --- p.23 / Chapter 2.2 --- Induction of quantification of apoptosis --- p.24 / Chapter 2.3 --- Determination of caspase activities --- p.24 / Chapter 2.4 --- Western blotting --- p.25 / Chapter 2.4.1 --- Protein extraction and determination of protein concentration --- p.25 / Chapter 2.4.2 --- SDS-PAGE and immunodetection --- p.26 / Chapter 2.5 --- Cell-free apoptosis reactions --- p.27 / Chapter 2.6 --- Analysis of mitochondrial membrane potential --- p.27 / Chapter 2.7 --- Transient transfection of Sup-Tl cells --- p.28 / Chapter 2.8 --- Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) --- p.28 / Chapter 2.8.1 --- RNA isolation --- p.28 / Chapter 2.8.2 --- Synthesis of first-strand cDNA --- p.29 / Chapter 2.8.3 --- Polymerase chain reaction --- p.29 / Chapter 2.9 --- Alkaline phosphatase digestion of Bim --- p.30 / Chapter Chapter 3 --- Results --- p.31 / Chapter 3.1 --- The T-ALL cell line Sup-Tl is resistant to etoposide-induced apoptosis --- p.31 / Chapter 3.2 --- Sup-Tl cells are resistant to etoposide-induced caspase activation --- p.40 / Chapter 3.3 --- Sup-Tl cells are insusceptible to etoposide-induced mitochondrial alterations --- p.46 / Chapter 3.4 --- BimEL is required for etoposide-induced apoptosis in Sup-Tl cells --- p.51 / Chapter 3.5 --- The reduced level of BimEL in Sup-Tl cells is owing to the presence of constitutively active JNK --- p.58 / Chapter Chapter 4 --- Discussion --- p.67 / References --- p.79

<p>Karcinom bronha najče&scaron;ći uzrok smrti među malignim bolesti u svetu. U XX veku je registrovan značajan porast kako incidence, tako i mortaliteta karcinoma bronha u većini zemalja. Medijana preživljavanja u svim stadijumima bolesti se značajno pobolj&scaron;ala poslednjih godina XX veka, ali nedovoljno u odnosu na očekivano. U najvećem broju slučajeva, bolest se otkriva u uznapredovalom stadijumu, kada je radikalno hirur&scaron;ko lečenje kao optimalan vid lečenja nemoguće. Neodjuvantna terapija kod bolesnika sa lokalno uznapredovalim karcinomom pluća i zahvaćenim N2 limfnim čvorovima jedan je od modusa multimodalnog lečenja bolesnika sa nemikrocelularnim karcinomima pluća (NSCLC) u cilju pobolj&scaron;anja ishoda njihovog lečenja. Ovakav pristup podrazumeva prevođenje pacijenta iz vi&scaron;eg u niži stadijum bolesti - &bdquo;downstaging&rdquo;. Na taj način pacijent postaje potencijalno resektabilan u smislu daljeg hirur&scaron;kog lečenja koji bi mogao da obezebedi sveukupni onkolo&scaron;ki benefit. Osnovni ciljevi ove doktorske disertacije su bili: procena odgovora na neoadjuvantnu terapiju kod bolenika sa IIIA stadijumom nemikrocelularnog karcinoma bronha u odnosu na T faktor i N faktor, procena TNM klasifikacije pre i posle primenjene neoadjuvantne terapije kod bolesnika sa IIIA stadijumom nemikrocelularnog karcinoma bronha, određivanje stepena tumorske regresije patohistolo&scaron;kom analizom hirur&scaron;kog resekata nemikrocelularnog karcinoma bronha operisanih bolesnika nakon primenjene neoadjuvantne terapije, kao prognostički faktor za period bez bolesti i ukupnog preživljavanja i određivanje stepena regresije tumora u maligno izmenjenim limfnim čvorovima nakon primenjene neoadjuvantne terapije kod bolesnka sa IIIA stadijumom nemikrocelularnog karcinoma bronha, kao prognostički faktor za period bez bolesti i ukupnog preživljavanja.Rezultati su pokazali da neoadjuvantna terapija prema RECIST kriterijumima dovodi značajnog smanjenja veličine tumora, T faktora, kao i do znčajnog downstaging&ldquo;-a nodalnog statusa, N faktora, u terapiji bolesnika sa IIIA stadijumom nemikrocelularnog karcinoma bronha. Neoadjuvantna terapija prema RECIST kriterijumima dovodi značajnog smanjenja klinikog stadijuma bolesti, u terapiji bolesnika sa IIIA stadijumom nemikrocelularnog karcinoma bronha Nakon primenjene neoadjuvantne terapije nema značajne razlike u T faktoru koji je određen radiolo&scaron;ki prema RECIST kriterijumima (ycT) i patohistolo&scaron;ki (ypT) na hirur&scaron;kom materijalu. Nakon primenjene neoadjuvantne terapije prisutna je značajna razlika u N faktoru koji je određen radiolo&scaron;ki prema RECIST kriterijumima (ycN) i patohitolo&scaron;ki (ypN) na hirur&scaron;kom materijalu. Nakon primenjene neoadjuvantne terapije prisutna je značajna razlika u kliničkom stadijumu bolesti koji je određen radiolo&scaron;ki prema RECIST kriterijumima (yc) i patohitolo&scaron;ki (yp) na hirur&scaron;kom materijalu. Gradusi tumorske regresije su usko povezani sa procentom očuvanog tumorskog tkiva. Stepen tumorske regresije u resekatu primarnog tumora nije u korelaciji sa ukupnim preživljavanjem i procenom perioda bez bolesti kod pacijenata sa IIIA stadijumom nemikrocelularnog karcinoma bronha.</p> / <p>Lung cancer is the most common cause of death among malignant diseases in the world. In the twentieth century was a significant increase in both incidence and mortality of lung cancer in most countries. Median survival in all stages of the disease has improved significantly in recent years of the twentieth century, but not as we expected. In most cases, the disease is detected at an advanced stage, when the radical surgical treatment is considered impossible. Neoadjuvant therapy, in patients with locally advanced carcinoma of the lung, and with affected the lymph nodes N2, is one of the modes of multimodal treatment of patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) in order to improve the outcome of their treatment. This involves translating the patient from a higher to a lower stage of the disease - &quot;downstaging&quot;. In this way the patient is considered for further surgical treatment that could provide him overall oncology benefit. Main objectives of this PhD dissertation are: evaluation of response to neoadjuvant therapy in stage IIIA NSCLC patients in relation to T factor and N factor; evaluation of TNM classification before and after use of neoadjuvant therapy in stage IIIA NSCLC patients; determination of degree of tumor regression with pathohistologic analysis of resection specimen of NSCLC obtained from patients after application of neoadjuvant therapy, as a prognostic factor for disease-free period and overall survival rate; and determination of degree of tumor regression in malignant lymph nodes after application of neoadjuvant therapy in stage IIIA NSCLC patients, as a prognostic factor for disease-free period and overall survival rate. Results have shown that neoadjuvant therapy according to RECIST criteria leads to significant reduction of tumor size, T factors, as well as significant downstaging of nodal status, N factor, in treatment of stage IIIA NSCLC patients. Furthermore, neoadjuvant therapy according to RECIST criteria leads to significant reduction of clinical stage of the disease in treatment of stage IIIA NSCLC patients. However, after neoadjuvant therapy is applied there is no significant difference in T factor determined radiologically according to RECIST criteria (ycT) and by pathohistologic analysis (ypT) of resected specimen. Neoadjuvant therapy leads to significant difference in N factor which is determined radiologically according to RECIST criteria (ycN) and by pathohistologic analysis (ypN) of resection specimen. After neoadjuvant therapy is applied there is significant difference in clinical stage of the disease determined radiologically according to RECIST criteria (yc) and by pathohistologic analysis (yp) of resection specimen. Tumor regression grading is closely linked to the percentage of preserved tumor tissue. Degree of tumor regression in surgical resection of primary tumor does not correlate to the overall survival rate and estimation of disease-free period in stage IIIA NSCLC patients.</p>

A incidência do câncer cervical permanece elevada em nosso país, provavelmente devido ao rastreamento ser realizado principalmente em áreas urbanas e haver áreas menos favorecidas onde os programas de rastreamento não são efetivos. É bem sabido que a mortalidade pelo câncer raramente é devida ao tumor primário, mas à disseminação metastática das células tumorais em órgãos distantes. A via linfática é considerada a preferencial para disseminação metastática nos tumores ginecológicos. E o estágio clínico e os linfonodos regionais são considerados os fatores prognósticos mais potentes no carcinoma de colo útero. A compreensão da linfangiogênese pode ser considerada uma importante chave na elucidação dos mecanismos usados pelas células tumorais na sua disseminação. Os objetivos do presente estudo são avaliar as características clínico-patológicas do câncer do colo do útero e sua associação com o comprometimento linfonodal e o desfecho; avaliar a linfangiogênese intratumoral pela análise quantitativa da microdensidade vascular linfática (MDVL), usando o método imunoistoquímico para marcação dos vasos linfáticos e três métodos morfométricos para a quantificação; determinar a associação entre a MDVL, características clínico-patológicas de apresentação, comprometimento linfonodal, desfecho e a expressão de podoplanina em células neoplásicas e a expressão da podoplanina em células fibroblásticas do estroma intratumoral. Os estudos sobre a MLVD em câncer de colo de útero são raros e controversos. Nossos resultados demonstraram que a MLVD foi mais acentuada nos tumores de menor tamanho (<2 cm), nos estádios iniciais (IB1), com menos infiltrações, sem comprometimento vascular e sem comprometimento linfonodal, provavelmente porque a indução da linfangiogênese pode ser um evento inicial na progressão do câncer, quando ainda nem todos os vasos neoformados estão funcionantes ou patentes. Isto explicaria a elevada MLVD nos tumores iniciais quando os linfonodos estavam frequentemente negativos. Observou-se que não não houve associação significativa entre expressão de podoplanina em células neoplásicas e comprometimento vascular, comprometimento dos linfonodos ou desfecho. A expressão de podoplanina em fibroblastos do estroma intratumoral no câncer precoce de colo de útero está associada a melhor prognóstico. Até o presente, acreditase que este seja o primeiro estudo a investigar o papel da expressão da podoplanina no estroma intratumoral de carcinoma precoce do colo do útero, relacionando-a com MLVD, comprometimento dos linfonodos e o desfecho / Cervix carcinoma incidence remains still high in our country, probably as the screening occurrence is carried out mainly in the urban areas and there are less favored areas where the screening programs are not effective. It is well known that the cancer mortality is rarely caused by the primary tumor, but it is caused by the metastatic spread of tumor cells in distant organs. The lymphatic route is considered the choice for the metastatic dissemination in the gynecological tumors. And the clinical stage and the regional lymphonodes are considered the most powerful prognostic factors in the uterine cervix cancer. The understanding of the lymphangiogenesis can be considered an important key for the elucidation of the mechanisms used in the tumor cells dissemination. The current study objectives are to evaluate the clinic-pathological characteristics of the uterine cervix carcinoma and its association with the lymphnodal involvement and outcome; to evaluate the intratumoral lymphangiogenesis by the quantitative analysis of the lymphatic vessel micro density (LVMD), using the immunoistochemical method for marking the lymphatic vessels and three morphometric methods for the quantification. To determine the association between the LVMD, the clinicpathological characteristics, the lymphonodal involvement and outcome and the podoplanin expression in neoplasic cells and in fibroblastic cells of the intratumoral stroma. Studies about the LVDM in uterine cervical cancer are rare and controversial. Our results demonstrated that the LVDM was more remarkable in the smaller tumors(<2cm), in the initial stages (IB1), with less infiltrations, with no vascular involvement and no lymphnodal involvement. Probably because the induction of lymphangiogenesis may be an early event in cancer progression, while still not all the newly formed vessels are functioning or patent. This would explain the high LVMD in the initial tumors while the lymphonodes were frequently negative. It was noted that there were no significant association between podoplanin expression in neoplasic cells and vessel involvement, lymphonodes involvement or outcome. Podoplanin expression in fibroblasts of the intratumoral stroma in early cervix carcinoma was associated to better prognosis. To date, it is believed that this is the first study to investigate the role of podoplanin expression in intratumoral stroma of cervix carcinoma, relating it to LVMD, lymph node involvement and outcome

O objetivo deste trabalho foi avaliar as propriedades físicas e adesivas do esmalte dental após radioterapia e colagem de bráquetes ortodônticos metálicos e cerâmicos. O estudo foi dividido em duas etapas. Na primeira, foram utilizados 10 molares permanentes humanos hígidos, que foram seccionados em fragmentos de esmalte de 1 mm² e divididos entre grupo irradiado e não irradiado, de forma pareada. O grupo irradiado foi submetido à radiação ionizante, com uma dose total de 60 Gy, 2 Gy/dia, durante seis semanas, com intervalo de dois dias entre às semana. Os fragmentos de esmalte dental foram submetidos a teste mecânicos de microcisalhamento para verificar se a radioterapia alterou a resistência coesiva do esmalte dental irradiado. A segunda etapa deste estudo utilizou-se de 90 pré-molares humanos hígidos e devidamente preparados, divididos em seis grupos/subgrupos (n=15): G1 - dentes não irradiados e não envelhecidos; G2 - dentes não irradiados e envelhecidos; G3 - dentes irradiados e envelhecidos; Subgrupos: bráquetes metálicos (M) e bráquetes cerâmicos (C). Os grupos G2 e G3 foram submetidos à envelhecimento artificial acelerado por meio de termociclagem, simulando o período aproximado de 1 a 2 anos, tempo esse indicado para o início de tratamento ortodôntico em pacientes pós radioterapia. Em seguida, os grupos G2 e G3 foram submetidos à radioterapia, conforme descrito. Finalizado o ciclo radioterápico, os bráquetes foram colados no esmalte dental dos espécimes com compósito Transbond XT, sendo o bráquete metálico Morelli e cerâmico Radiance. Após 24 horas, os corpos de prova foram submetidos à teste mecânico de cisalhamento e a superfície do esmalte avaliada em microscopia confocal de varredura à laser (MCVL) avaliando o índice de remanescente adesivo (IRA) e modo de fratura. Em seguida, quatro corpos de prova que apresentaram fratura do tipo coesiva de cada grupo/subgrupos foram devidamente preparados e a interface compósito/esmalte avaliada em MCVL e microscopia eletrônica de varredura. Os fragmentos de esmalte dental submetidos à radiação apresentaram menores valores de resistência ao cisalhamento do que o esmalte dental não irradiado (p<0,05). Levando em consideração a interação dos fatores dos espécimes submetidos ao teste de cisalhamento, os grupo/subgrupos submetidos à radiação e colados bráquetes cerâmicos, apresentaram menores valores de resistência. Os grupos não submetidos à irradiação, G1-M e G2-M, apresentaram com maior frequência IRA escore 0 (sem compósito na superfície), enquanto, os grupos G1-C, G2-C, G3-M e G3-C apresentaram mais de 50% de compósito aderido à superfície Quanto ao modo de fratura, os grupos controle apresentaram em sua maioria os tipos de fratura adesiva (Ad) e coesiva resina (CR), independente do tipo de bráquete Os bráquetes metálicos colados em esmalte dental submetidos à irradiação apresentaram fratura do tipo mista coesiva resina/adesiva (CR/Ad), enquanto os bráquetes cerâmicos resultaram em fraturas coesiva resina (CR) e coesiva resina/adesiva (CR/Ad). Nas imagens obtidas da região de interface compósito/esmalte, observou-se que os tags de resina foram mais extensos no esmalte dental irradiado, circundando os prismas de esmalte. Assim, conclui-se que a radiação diminuiu a resistência coesiva do esmalte dental e que os espécimes submetidos à radioterapia apresentaram maior falha adesiva entre bráquete/compósito e tags de resina mais extensos e profundos quando comparados ao grupo controle / The objective of this study was to evaluate the physical and adhesive properties of the enamel after radiotherapy and bonding of metal and ceramic orthodontic brackets. The study was divided into two stages. In the first one, 10 human permanent molars, which were cut into fragments of enamel 1 mm² and divided between irradiated and non-irradiated group, in a paired form. The irradiated group was subjected to ionizing radiation, with a total dose of 60 Gy, 2 Gy / day for six weeks, with an interval of two days between the weeks. The enamel fragments were subjected to mechanical testing to verify that microshear radiotherapy changed cohesive strength of the irradiated enamel. In The second phase of this study, was used 90 healthy and properly prepared human premolars,divided into six groups / subgroups (n = 15): G1 - non-irradiated teeth and not aged; G2 teeth unirradiated and aged; G3 - irradiated and aged teeth; Subgroups: metallic brackets (M) and ceramic brackets (C). G2 and G3 were subjected to accelerated artificial aging by thermal cycling, simulating period of approximately 1 to 2 years, this time indicated for the beginning of orthodontic treatment in post radiotherapy patients. Then the G2 and G3 groups underwent radiotherapy as described. After the radiotherapy cycle, the brackets were bonded on the enamel specimens with Transbond XT, and the metallic and Morelli ceramic bracket Radiance. After 24 hours, the specimens were subjected to mechanical shear test and evaluated the enamel surface in confocal laser scanning microscopy (CLSM) evaluating the adhesive remnant index (ARI) and fracture mode. Then four specimens showed that the cohesive fracture type were properly prepared for each group / subgroup and the composite interface / enamel evaluated CLSM and scanning electron microscopy. Fragments enamel subjected to radiation had significantly lower shear strength than the non-irradiated enamel (p <0.05). Considering the interaction of the factors of the specimens subjected to shear stress, the group / subgroup undergoing radiation and bonded ceramic brackets showed lower resistance values. The two groups were subjected to irradiation, G1 and G2-M-M, showed more IRA frequency scores of 0 (no composite surface), while the C-G1, G2, C, G3 and G3-M-C groups had more 50% of adhesive left on the surface Concerning the fracture mode, the control groups showed mostly the types of adhesive fracture (Ad) and cohesive resin (CR), regardless of the bracket\'s metal brackets bonded submitted to enamel irradiation, that showed mixed type of cohesive resin / adhesive (CR / Ad) fracture, while ceramic brackets resulted in cohesive fractures resin (CR) and cohesive resin / adhesive (CR / Ad). In images obtained from the composite region / enamel interface, it was observed that the resin tags were more extensive in the irradiated tooth enamel surrounding the enamel prisms. Thus, it is concluded that radiation decreased the tensile strength of the enamel and the specimens treated with radiotherapy had higher adhesive failure between bracket / composite and tags of more extensive and deep resin, compared to the control group

Introdução: O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço tem na cirurgia e na radioterapia, as principais modalidades terapêuticas iniciais. Nas recidivas loco-regionais, a cirurgia é a escolha padrão de tratamento. Objetivos: Identificação de fatores prognósticos clínicos, histopatológicos e biomoleculares e a avaliação da sobrevida após cirurgia de resgate. Casuística e Métodos: Estudo retrospectivo de pacientes submetidos a tratamento cirúrgico inicial, com revisão de variáveis histopatológicas e expressão imunohistoquímica de VEGF, ciclina d1 e EGF-R no tumor inicial e no resgate. Das recidivas, 10 eram de estádio clínico precoce (I e II) e 18, avançado (III e IV). O período de seguimento médio foi de 33,4 meses. Resultados: A comparação das variáveis histológicas e dos marcadores moleculares no tumor inicial e na recidiva não apresentou alterações estatisticamente significantes. A sobrevida global após cirurgia de resgate foi superior nas recidivas com diagnóstico após seis meses (p=0,02). Conclusões: Os achados sugerem que a expressão de VEGF superior a 75% é fator preditivo para controle da doença após a recidiva. A sobrevida entre o tempo decorrido do tratamento inicial e a recidiva foi estatisticamente significante / Introduction: The usual management of squamous cell carcinoma (SCC) head and neck is the surgery associated or not to post surgical radiotherapy. Salvage surgery is the first therapeutic option for recurrent tumors. Objective: The identification of prognostic factors and to assess survival interval after salvage surgery for SCC. Methods: Retrospective analysis of patients treated with surgery and review of histopathological variables and immunohistochemical expression of VEGF, EGF-R and Ciclina in the initial tumor and salvage surgery. Twenty eight patients were submitted salvage surgery with 10 were staged as early tumors (I and II) and 18 as advanced ones (III and IV). The average follow-up was 33.4 months. Results: The comparison of histopathologicals variables in the initial tumor and loco regional recurrence no statistically significant changes. Survival after salvage surgery was 70% in cases with recurrences diagnosed after six months of follow-up (p=0.02). Conclusions: The findings suggest that variables immunohistopathologicals in loco regional recurrence were of minor importance in prognosis. The time between the initial treatment and recurrence loco regional was independent variable of survival