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La producción mundial de biocombustibles denominados bioetanol y biodiesel se ha incrementado en la última década, como alternativa a los combustibles fósiles. Brasil produce etanol a partir de la caña de azúcar, EEUU a partir de maíz, mientras que en Europa y Canadá, el insumo más utilizado es el grano de trigo. En España las principales plantas de biocombustible utilizan maíz, trigo y cebada, para obtener etanol, básicamente. Esta situación ha generado cambios importantes en el mercado mundial de granos, por un lado, encareciéndo el precio de las materias primas tradicionales y en consecuencia el coste de los piensos, y por otro lado, ofertando nuevas materias primas, tales como los denominados granos secos de destilería con solubles o DDGS (Dried Distillers Grains with Solubles), que pueden ser destinadas a la alimentación animal si son valoradas nutritivamente para las posibles especies animales de destino, entre las que podrían encontrarse los conejos. Dado que los insumos y los procesos de producción industrial de bioetanol presentan algunas variaciones, la calidad de los DDGS generados varía consecuentemente en su composición química y su valor nutritivo, pero estas posibles fuentes de variación han sido poco estudiadas. La cunicultura es una actividad productiva muy importante en Europa, especialmente en Francia, Italia, y España, cuyos costes de producción se han incrementado en especial en el rubro de la alimentación, que constituye entre el 50 a 70% del coste total, por las razones antes señaladas.Los DDGS se han incorporado en la dieta de vacuno, aves y cerdos, pero la información relativa a su utilización en conejos es muy escasa. En este contexto, parece necesario evaluar el potencial nutritivo y el comportamiento productivo de los DDGS en piensos de conejos. / Alagón Huallpa, G. (2013). USE OF BARLEY, WHEAT AND CORN DISTILLER'S DRIED GRAIN WITH SOLUBLES IN DIETS FOR GROWING RABBITS: NUTRITIVE VALUE, GROWTH PERFORMANCE AND MEAT QUALITY [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/27648

[EN] The global objective of the present thesis was to study the functional longevity defined as length of productive life (LPL) in five Spanish specialized lines of rabbit (A, V, H and LP). Chapter 3, aimed to check the genetic heterogeneity for longevity between the five lines estimating the additive variance and the corresponding effective heritabilities. As well as to test the genetic importance of time-dependent factors such as positive palpation order (OPP), physiological status (PS) and number of kits born alive (NBA) on the genetics of longevity. This point has been assessed using four different Cox proportional hazard models; the first one (Model 1) included all the previous factors in addition to the year-season effect, the inbreeding coefficient effect and finally the animal effect as random factor. The remaining three models were the same as Model 1 but excluding OPP (Model 2), or PS (Model 3), or NBA (Model 4). The complete data set comprised 15,670 does with records 35.6 % having censoring data, and the full pedigree file involved 19,405 animals. The heritability estimates for longevity in the five lines were low and ranged from 0.02±0.01 to 0.14±0.09, and consequently, it is not recommended to include this trait as selection criteria in rabbit breeding programs. Despite of the large variation of the heritability estimates, the corresponding HPD95% always overlapped and consequently the hypothesis of all lines having the same heritability cannot be discarded. Comparing the additive variance estimates of the four models, it was observed that by correcting for PS 51, 39, 38, 83 and 75% of the additive variance in lines A, V, H, LP and R, respectively, was removed. The risk of death or culling decreases as OPP advanced. Non-pregnant-non-lactating females are those under the higher risk. The does which had zero NBA had the highest risk, apart for this special figure (zero NBA) the risk decreased as NBA increased. Chapter 4 intended to estimate the genetic and environmental correlations between longevity and two prolificacy traits (number of kits born alive (NBA) and number of kits alive at weaning (NW)). Furthermore, to estimate the genetic and environmental correlations between longevity and the percentage of days that the doe spent in the different physiological statuses with respect to its entire productive life. The complete pedigree file comprised 19,405 animals. The datasets included records on 15,670 does which had 58,329 kindlings and 57,927 weanings. In general the genetic correlations between NBA and NW, and the hazard were low to very low, and the only line for which it can be said these genetic correlation to be different from zero was the LP line. Regarding the correlations between longevity and the percentage of days the doe spent in each physiological status, there were evidences of non-negligible genetic correlations between the two traits. Chapter 5 purposed to compare the five lines at their foundation and at fixed time periods during their selection programs. The first comparison was done at the origin of the lines, involving the complete data set, and using a genetic model (CM) including the additive values of the animals, so the effect of selection was considered. For the second comparison the same model as the first comparison was used, but excluding the additive effects from the model of analysis (IM), and involving only the data corresponding to each period, so the differences between the lines included the additive values of the animals. The lines V, H and LP showed at foundation a substantial superiority over line A. The line R had higher risk of death or culling with relevant differences when compared to V, H and LP lines. The maximum relative risks were observed between the lines LP and R (0.239), and between LP and A (0.317). For the comparisons at fixed times, the pattern of the differences between the A line and the others was similar to those observed at foundation. / [ES] El objetivo global de la presente tesis fue estudiar la longevidad funcional en cinco líneas españolas de conejos (A, V, H y LP), el carácter se definió como la longitud de la vida productiva. En el Capítulo 3, dirigido a comprobar la heterogeneidad genética de la longevidad entre las 5 líneas, se estimaron las varianzas aditivas y sus correspondientes heredabilidades efectivas. Y además se evaluó la importancia del orden de la palpación positiva (OPP), el estado fisiológico (PS) y el número de gazapos nacidos vivos (NBA) sobre el determinismo genético de la longevidad. Para ello se utilizaron 4 modelos de Cox de riesgos proporcionales; el primer modelo (Modelo 1) incluyó todos los factores anteriores, además del efecto del año-estación, el efecto de la consanguinidad y, finalmente, el valor aditivo de los animales como efecto aleatorio. Los otros tres modelos fueron igual que el Modelo 1 pero excluyendo OPP (Modelo 2), o PS (Modelo 3), o NBA (Modelo 4). Los datos de longevidad estaban referidos a 15,670 conejas y tuvieron una tasa de censura de 35.6%. La genealogía completa involucró a 19,405 animales. Las estimas de heredabilidad efectiva para la longevidad en las 5 líneas fueron bajas y variaron de 0.02±0.01 a 0.14±0.09. A pesar de la gran variación de las estimas puntuales de heredabilidad, los correspondientes intervalos HPD95% siempre se solaparon y por lo tanto la hipótesis de que todas las líneas tengan la misma heredabilidad no pudo descartase. Se observó que la exclusión de PS incrementó la varianza aditiva aproximadamente, en un 51, 39, 38, 83 y 75% en las líneas A, V, H, LP y R, respectivamente. El riesgo de muerte o eliminación disminuía a medida que avanzaba el OPP, observándose el riesgo más alto durante los primeros dos partos, partos en los que las conejas todavía están creciendo lo que sería un factor de riesgo importante. El nivel No-Gestante-No-Lactante de PS tuvo el mayor riesgo. Este nivel se interpreta como indicador de baja fertilidad y/o problemas de salud de la coneja. Las conejas que tenían cero NBA tuvieron el mayor riesgo de muerte o eliminación, aunque para el resto de niveles de NBA se apreció una disminución del riesgo a medida que aumenta la prolificidad. En el capítulo 4, se estimaron las correlaciones genéticas y ambientales entre la longevidad y dos caracteres de prolificidad [número de gazapos nacidos vivos (NBA) y el número de destetados (NW)]. El fichero de datos incluyó 58,329 partos y 57,927 destetes. También se estimaron las correlaciones entre longevidad y el porcentaje de días que la coneja pasó en los diferentes estados fisiológicos con respecto a la totalidad de su vida productiva. La única línea para la que se puede decir que la correlación genética entre NBA o NW y el riesgo fue significativamente diferente de cero fue la línea LP. Hubo evidencias de correlaciones genéticas no despreciables entre la longevidad y el porcentaje de días que la hembra pasó en cada estado fisiológico los dos caracteres. En el capítulo 5 se compararon las longevidades medias de las 5 líneas en su fundación y en períodos de tiempo determinados. La comparación de las líneas en el origen, utilizó todos los datos y un modelo genético (CM) que incluía los valores aditivos de los animales. Para la comparación en tiempos fijos se utilizó el mismo modelo, pero excluyendo los efectos aditivos del modelo de análisis (IM), utilizando sólo los datos correspondientes a cada período, por lo que las diferencias entre las líneas incluían los cambios debidos a la selección. Las líneas V, H y LP mostraron una superioridad sustancial sobre las líneas A y R. Los riesgos relativos máximos se observaron entre las líneas LP y R (0.239), y entre LP y A (0.317). Con respecto a las comparaciones en tiempos fijos, el patrón de las diferencias entre la línea de A y las otras líneas fue similar a los observados en la fundación. / [CA] L'objectiu global de la present tesi va ser estudiar la longevitat funcional en cinc línies espanyoles de conills (A, V, H i LP), el caràcter es va definir com la longitud de la vida productiva. Al Capítol 3, dirigit a comprovar l'heterogeneïtat genètica de la longevitat entre les 5 línies, es van estimar les variàncies additives i les seues corresponents heretabilitats efectives. A més a més, es va avaluar la importància de factors dependents del temps, com l'orde de la palpació positiva (OPP) , l'estat fisiològic (PS) i el nombre de llorigons nascuts vius (NBA) sobre el determinisme genètic de la longevitat. Per a això es van utilitzar 4 models de Cox de riscos proporcionals; el primer model (Model 1) va incloure tots els factors anteriorment assenyalats, a més de l'efecte de l'any-estació, l'efecte de la consanguinitat i, finalment, el valor additiu dels animals com a efecte aleatori. Els altres tres models van ser igual que el Model 1 però excloent l'OPP (Model 2) , o PS (Model 3) , o NBA (Model 4) . Les dades de longevitat estaven referides a 15,670 conilles i van tindre una taxa de censura de 35.6%. La genealogia completa va involucrar a 19,405 animals. Les estimes d'heretabilitat efectiva (Model 1) per a la longevitat en les 5 línies van ser baixes i van variar de 0.02±0.01 a 0.14±0.09. A pesar de la gran variació de les estimes puntuals d'heretabilitat, els corresponents intervals HPD95% sempre es van solapar i per tant la hipòtesi que totes les línies tinguen la mateixa heretabilitat no va poder descartar-se. Es va observar que l'exclusió de PS va incrementar la variància additiva, aproximadament, en un 51, 39, 38, 83 i 75% en les línies A, V, H, LP i R, respectivament. El risc de mort o eliminació disminuïa a mesura que avançava l'OPP, observant-se el risc més alt durant els primers dos parts, en què les conilles encara estan creixent el que seria un factor de risc important. El nivell No-Gestant-No-Lactant de PS va tindre el major risc en comparació amb els altres nivells. Les conilles que tenien zero NBA van tindre el major risc de mort o eliminació, encara que per a la resta de nivells de NBA es va apreciar una disminució del risc a mesura que augmentà la prolificitat. Al Capítol 4, es van estimar les correlacions genètiques i ambientals entre la longevitat i dos caràcters de prolificitat [nombre de llorigons nascuts vius (NBA) i el nombre de deslletats (NW)]. El fitxer de dades va incloure 58,329 parts i 57,927 deslletaments. L'única línia per a la que es pot dir que la correlació genètica entre NBA o NW i el risc va ser significativament diferent de zero va ser la línia LP. Evidències de correlacions genètiques no menyspreables entre longevitat i els percentatge de dies que la femella va passar en cada estat fisiològic. Al Capítol 5 es compararen les longevitats mitges de les 5 línies en la seua fundació i en períodes de temps determinats. Per a la comparació de les línies a l'origen, es van utilitzar totes les dades i un model genètic (CM) que incloïa els valors additius dels animals, per la qual cosa es va considerar l'efecte de la selecció a partir de la fundació. En la comparació en temps fixos se va utilitzar el mateix model que en l'anterior, però excloent els efectes additius del model d'anàlisi (IM), utilitzant només les dades corresponents a cada període, per la qual cosa les diferències entre les línies incloïen els canvis deguts a la selecció. Les línies V, H i LP van mostrar una superioritat substancial sobre les línies A i R. Els riscos relatius màxims es van observar entre les línies LP i R (0.239), i entre LP i A (0.317). Respecte a les comparacions en temps fixos, el patró de les diferències entre la línia de A i les altres línies va ser semblant als observats en la fundació. / El Nagar, AGF. (2015). Genetic analysis of longevity in specialized lines of rabbits [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/52390

Tesis por compendio / The thesis is composed for four articles, where is studied either as relationships between body condition and energetic mobilization in rabbits and as the effect of selection for litter size variability in body condition and energetic mobilization, such as welfare biomarkers, and in litter size and its components after seven generation of selection. The first article examines the relationships between measures of body condition and energetic mobilization on primiparous rabbit at mating, delivery and 10 d after delivery, using principal component analysis. Body condition was measured as body weight and perirenal fat thickness. Energetic mobilization was measured as non-esterified fatty acid concentration in blood, before (NEFAb) and after lipolysis stimulation by isoproterenol (NEFAr). All body weights and perirenal fat thickness were located on the first principal component, exhibiting high correlations between them both at the same or different times (from 0.51 to 0.83). All NEFA measurements were located on the second component, showing low correlations with body condition measurements. Both NEFAs showed high positive correlations when measured at the same time (0.65 at mating, 0.72 at delivery and 0.69 at 10 d after delivery), but low correlations when measured at different times (from 0.09 to 0.20). The second article analyses the correlated response in body condition and fat reserves mobilization. The perirenal fat thickness and the increase in NEFAs from basal until adrenergic stimulation by isoproterenol were measured at second mating, at delivery and at 10 d after delivery. Perirenal fat thickness was similar in both lines at mating. However, the high line showed lower fat thickness than the low line at delivery (-0.16 mm, P=0.86), and this difference remained at 10 d after delivery (-0.17 mm, P=0.86). Moreover, this line exhibited 30% more concentration in NEFAs at delivery than the low one (P=0.96). The third and fourth articles study the correlated responses to selection in litter size and its components. A laparoscopy was performed 12 d of the second gestation, in order to estimate ovulation rate and number of implanted embryos. The litter size was recorded at the second parity. In the last gestation, the embryonic development was analysed at 28, 48 and 72 hours of gestation. The ovulation rate was similar in both lines. The line selected to reduce variability in litter size showed a higher number of implanted embryos (1.23, P=1.00) than the high line. Also, this line showed a more advanced development of the embryos from 48 hours of gestation, exhibiting a lower percentage of early morulae both at 48 hours (53.32% vs 79.90%, P=0.93) and at 72 hours (3.88% Vs. 21.04%, P=0.93). More advanced embryo development is related to higher embryo survival (0.85 vs 0.78, P=1.00). A higher uterine overcrowding of embryos in the low line did not penalise fetal survival, and as a result, this line continued showing a greater number of kits born at birth (0.98, P=0.96). In conclusion, body weight and perirenal fat thickness are good predictors of body reserves and both measurements could be used to estimate energy changes in the mid-long term, while NEFA measurements should be used in the short term. A decrease in litter size variability has a favourable effect on body condition, fat reserve mobilization, embryonic development and survival, and litter size. / La tesis se compone de cuatro artículos, donde se estudia tanto la relación entre la condición corporal y la movilización de energía en la coneja como el efecto de la selección divergente por variabilidad del tamaño de camada en la condición corporal y movilización de reservas energéticas, como biomarcadores del bienestar del animal, y en el tamaño de camada y sus componentes después de siete generaciones de selección. El primer artículo examina las relaciones entre las medidas de la condición corporal y la movilización de energía en conejas primíparas a la monta, al parto y a los 10 días tras el parto, a través de un análisis de componentes principales. La condición corporal se midió como el peso corporal y el espesor de grasa perirenal. La movilización de energía se midió como la concentración de ácidos grasos no esterificados en sangre, antes (NEFAb) y después de la estimulación lipolítica con isoproterenol (NEFAr). Todos los pesos y espesores de grasa perirenal se situaron sobre la primera componente principal, exhibiendo altas correlaciones entre ellos independientemente del estado fisiológico donde se midieron (de 0.51 a 0.83). Todas las medidas de NEFAs se localizaron sobre la segunda componente principal, mostrando una baja correlación con las medidas de la condición corporal. Los NEFAb y NEFAr mostraron elevadas correlaciones entre ellos cuando se midieron en el mismo momento (0.65 a la monta, 0.72 al parto y 0.69 a los 10 días tras el parto), pero bajas correlaciones cuando se midieron en diferentes momentos (de 0.09 a 0.20). El segundo artículo analiza la respuesta correlacionada sobre la condición corporal y la movilización de reservas grasas. El espesor de la grasa perirenal y el incremento de los niveles basales de NEFAs después de su estimulación adrenérgica con isoproterenol fueron medidos a la segunda monta, al parto y a los 10 días tras el parto. El espesor de la grasa perirenal fue similar en ambas líneas a la monta. Sin embargo la línea de alta mostró un menor espesor de grasa que la línea de baja al parto (-0.16 mm, P=0.86), y esta diferencia se mantuvo a los 10 días después del parto (-0.17 mm, P=0.86). Por otro lado, esta línea exhibió un 30% menos de NEFAs al parto que la línea de baja (P=0.96). El tercer y cuarto artículo estudian la respuesta correlacionada sobre el tamaño de camada y sus componentes. Se realizó una laparoscopía a los 12 días de la segunda gestación para estimar la tasa de ovulación y el número de embriones implantados. Se contabilizó el tamaño de camada al segundo parto. En la última gestación se analizó el desarrollo embrionario a 28, 48 y 72 horas de gestación. La tasa de ovulación fue similar en ambas líneas. La línea seleccionada para reducir la variabilidad en tamaño de camada mostró un mayor número de embriones implantados (1.23, P=1.00) que la línea de alta. También, esta línea mostró un desarrollo de los embriones más avanzado a partir de las 48 horas de gestación, exhibiendo un menor porcentaje de mórulas tempranas tanto a 48 horas (53.32% vs 79.90%, P=0.93) como a 72 horas (3.88% vs 21.04%, P=0.93). Un desarrollo más avanzado del embrión está relacionado con una mayor supervivencia de éste (0.85 vs 0.78, P=1.00). Por otro lado, un mayor atestamiento de embriones en el útero de la línea de baja variabilidad no penalizó la supervivencia fetal, y como resultado, esta línea continuó mostrando un mayor número gazapos al parto (0.98, P=0.96). En conclusión, el peso y el espesor de grasa perirenal son buenos predictores de las reservas corporales, ambas medidas podrían usarse para estimar los cambios energéticos a medio plazo, mientras que las medidas de NEFAs se deberían usar a corto plazo. La disminución de la variabilidad del tamaño de camada tiene un efecto favorable sobre la condición corporal, la movilización de reservas grasas, el desarrollo y supervivencia embrionaria y el tam / La tesi es compon de quatre articles, on s'estudia tant la relació entre la condició corporal i la mobilització d'energia en la conilla com l'efecte de la selecció divergent per variabilitat de la grandària de ventrada en la condició corporal i mobilització de reserves energètiques, com biomarcadores del benestar de l'animal, i en la grandària de ventrada i els seus components després de set generacions de selecció. El primer article examina les relacions entre les mesures de la condició corporal i la mobilització d'energia en conilles primípares a la muntada, al part i als 10 dies després del part, a través d'una anàlisi de components principals. La condició corporal es va mesurar com el pes corporal i la grossària de greix perirenal. La mobilització d'energia es va mesurar com la concentració d'àcids grassos no esterificats en sang, abans (NEFAb) i després de l'estimulació lipolítica amb isoproterenol (NEFAr) . Tots els pesos i grossàries de greix perirenal es van situar sobre la primera component principal, exhibint altes correlacions entre ells independentment de l'estat fisiològic on es van mesurar (de 0.51 a 0.83) . Totes les mesures de NEFAs es van localitzar sobre la segona component principal, mostrant una baixa correlació amb les mesures de la condició corporal. Els NEFAb i NEFAr van mostrar elevades correlacions entre ells quan es van mesurar en el mateix moment (0.65 a la muntada, 0.72 al part i 0.69 als 10 dies després del part) , però baixes correlacions quan es van mesurar en diferents moments (de 0.09 a 0.20). El segon article analitza la resposta correlacionada sobre la condició corporal i la mobilització de reserves greixos. La grossària del greix perirenal i l'increment dels nivells basals de NEFAs després de la seua estimulació adrenérgica amb isoproterenol van ser mesurats a la segona muntada, al part i als 10 dies després del part. La grossària del greix perirenal va ser semblant en ambdós línies a la muntada. No obstant això la línia d'alta va mostrar una menor grossària de greix que la línia de baixa al part (-0.16 mm, P=0.86) , i esta diferència es va mantindre als 10 dies després del part (-0.17 mm, P=0.86) . D'altra banda, esta línia va exhibir un 30% menys de NEFAs al part que la línia de baixa (P=0.96). El tercer i quart article estudien la resposta correlacionada sobre la grandària de ventrada i els seus components. Es va realitzar una laparoscopía als 12 dies de la segona gestació per a estimar la taxa d'ovulació i el nombre d'embrions implantats. Es va comptabilitzar la grandària de ventrada al segon part. En l'última gestació es va analitzar el desenrotllament embrionari a 28, 48 i 72 hores de gestació. La taxa d'ovulació va ser semblant en ambdós línies. La línia seleccionada per a reduir la variabilitat en grandària de ventrada va mostrar un nombre més gran d'embrions implantats (1.23, P=1.00) que la línia d'alta. També, esta línia va mostrar un desenrotllament dels embrions més avançat a partir de les 48 hores de gestació, exhibint un menor percentatge de mórulas primerenques tant a 48 hores (53.32% vs 79.90%, P=0.93) com a 72 hores (3.88% vs 21.04%, P=0.93). Un desenrotllament més avançat de l'embrió està relacionat amb una major supervivència d'este (0.85 vs 0.78, P=1.00). D'altra banda, un major atapeïment d'embrions en l'úter de la línia de baixa variabilitat no va penalitzar la supervivència fetal, i com resultat, esta línia va continuar mostrant un nombre més gran errors al part (0.98, P=0.96). En conclusió, el pes i la grossària de greix perirenal són bons predictors de les reserves corporals, ambdós mesures podrien usar-se per a estimar els canvis energètics a mitjà termini, mentres que les mesures de NEFAs s'haurien d'usar a curt termini. La disminució de la variabilitat de la grandària de ventrada té un efecte favorable sobre la condició corporal, la mobilització de reserves greixos, el dese / Calle Ayma, EW. (2017). CORRELATED RESPONSE TO SELECTION FOR LITTER SIZE RESIDUAL VARIANCE IN RABBITS [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/81021 / Compendio

Objetivo: Verificar o remodelamento da pele e produção de anticorpos em modelo experimental de esclerodermia em coelhos, após indução de tolerância nasal com colágeno tipo V. Métodos: Coelhas Nova Zelândia (N=12) foram imunizadas com 1mg/ml de colágeno V (Col V) em adjuvante completo de Freund e dois reforços com adjuvante incompleto de Freund. Seis coelhas imunizadas receberam uma dose diária de 25ug de Col V, iniciado via nasal (grupo tolerado) 150 dias do começo das imunizações e seis animais foram somente imunizadas (grupo imunizado). Um grupo imunizado com adjuvante de Freund serviu como controle. Biopsias de pele foram coletadas em 0, 75, 120, 150 e 210 dias e coradas pelo H&E, tricrômico de Masson e Sírius red para analise morfológica e morfométrica. Os colágenos I, III e V, além de TGFbeta e PDGF foram imunomarcados por imunofluorescência. Os soros dos animais foram coletados em 0, 150 e 210 dias para determinar anticorpos anti-colágenos I, III, IV e V e anti-nucleares. Resultados: Os animais imunizados mostraram progressivo decréscimo da derme papilar, atrofia de anexos, aumento no depósito dos colágenos I, III e V e aumento da expressão de TGFbeta e PDGF. Os tolerados apresentaram aumento dos anexos cutâneos e significante diminuição no depósito dos colágenos I, III e V, TGFbeta e PDGF. O grupo de imunizados e de tolerados apresentaram anticorpos anti-colágenos III e IV e antinucleares. Conclusões: A indução de tolerância nasal com Col V diminuiu o remodelamento da pele observado no modelo experimental de esclerodermia e inibiu a síntese de citocinas fibrogênicas. Portanto, a tolerância nasal com Col V pode ser uma opção terapêutica promissora para o controle do remodelamento cutâneo em pacientes com esclerodermia. / Objective: Our aim was to verify the skin remodeling and antibody production in experimental model of scleroderma in rabbits, after induction of tolerance by daily nasal administration of human type V collagen (Col V). Methods: Female New Zealand rabbits (N=12) were immunized with 1mg/ml of Col V in complete Freund\'s adjuvant, followed by more two boosters in incomplete Freund\'s adjuvant. Six immunized rabbits received daily nasal administrating of 25ug of Col V (tolerated group), started 150 days after the first immunization, and the others animals (N=6) were only immunized (immunized group). Finally a group of rabbits immunized with Freund\'s adjuvant served as control. Skin biopsies were collected at 0, 75, 120, 150 and 210 days, and stained with H&E, Masson\'s trichrome and Sirius red for morphological and morphometric analysis. Types I, III and V collagen, TGFbeta and PDGF were immunostained by immunofluorescence. The sera of animals were colleted at 0, 150 and 210 days to determine anti types I, III, IV and V collagen and antinuclear antibodies. Results: The immunized animals showed progressive decrease of papillary dermis, appendages atrophy, increase of types I, III and V collagen deposition and increased expression of TGF-beta and PDGF. The tolerated rabbits presented increase of cutaneous appendages and significant decrease of types I, III and V and TGF-beta and PDGF. Both immunized and tolerated rabbits presented anti types III and IV antibodies and antinuclear antibodies. Conclusions: Col V nasal tolerance reduced skin remodeling in experimental model of scleroderma and inhibited synthesis of fibrotic cytokines. Therefore, the nasal tolerance with type V collagen can be a promising therapeutic option to control the skin remodeling in patients with scleroderma.

O objetivo deste estudo foi avaliar se a injeção intra-articular em altas doses de ácido hialurônico, imediatamente após o trauma, pode reduzir a apoptose de condrócitos. Para cumprir este objetivo foi desenvolvido um estudo experimental com 40 joelhos de coelhos adultos. Os animais foram anestesiados e, em seguida, cada joelho sofreu três contusões com um bloco de 1 kg, solto por meio de um cilindro, a 1 metro de altura. Logo após as contusões, foram administrados, no mesmo coelho, 2 ml de ácido hialurônico em um joelho e 2 ml de solução salina no outro. Desta forma, obteve-se uma intervenção pareada, com melhora do poder estatístico do estudo. As doses foram repetidas a cada 3 ou 4 dias por 30 dias. Os coelhos foram mantidos no mesmo ambiente sob controle de temperatura, de atividades diárias e de alimentação. Após 30 dias, os animais foram abatidos e, por meio de artrotomia, foram realizadas as coletas da cartilagem do côndilo femoral medial e da tróclea de cada joelho. As peças foram preparadas para análise em microscopia óptica e coloração por TUNEL. Os indivíduos envolvidos no preparo e análise das peças não tiveram qualquer tipo de informação a respeito do experimento. A análise estatística foi feita pelo Teste t-student para dados pareados na comparação entre o grupo ácido hialurônico (AH) e o grupo controle. Foram analisados um total de 36 joelhos e obteve-se uma redução significativa (p<0,001) na taxa de apoptose de 68,01% (+ 19,73) do grupo controle para 53,52% (+ 18,09) do grupo AH. Diante dos resultados, concluiu-se que a injeção intra-articular de altas doses de ácido hialurônico, iniciando imediatamente após o trauma, reduz as taxas de apoptose (pós-traumática) de condrócitos de coelhos / The aim of this study was to assess whether intra-articular injection of high doses of hyaluronic acid immediately after trauma, can reduce apoptosis of chondrocytes. We have developed an experimental study with forty knees of adult rabbits. Animals were anesthetized and each one had had three knee injuries with a block of 1kg, released through a cylinder, 1 meter tall. After the bruises, 2ml of hyaluronic acid were injected in one knee and 2ml saline in the other. Doses were repeated each 3 or 4 days during 30 days. Rabbits were kept in the same environment under controlled temperature, daily activities and meals. Thirty days later, animals have been sacrificed. The cartilage of the medial femoral condyle and trochlea of each knee was retrieved with a scalpel by artrothomy. Specimens were prepared for optical microscopy and TUNEL staining. No information about the experiment was given to individuals who were involved in the preparation and analysis of the slides. Statistical analysis was performed by Students t test for paired data when comparing a group of hyaluronic acid (HA) and control group. We have analyzed a total of 36 knees and have obtained a significant reduction (p <0.001) in apoptosis rate of 68.01% (+ 19.73) for the control group 53.52% (+ 18.09) in the HA group. We conclude that the intraarticular injection of high doses of hyaluronic acid starting immediately after trauma, reduces impact-induced chondrocytes apoptosis rates in rabbits

Buscando alternativas ao enxerto ósseo autógeno para reconstruções craniofaciais, propõe-se a utilização de aloenxerto ósseo de crânio criopreservado, irradiado e enriquecido com medula óssea autógena.Vinte e um coelhos foram sacrificados e tiveram seus ossos parietais retirados, criopreservados e irradiados com irradiação gama em dose de 50kGy. Os aloenxertos foram implantados em defeitos nos crânios de vinte e um receptores. À esquerda implantava-se o aloenxerto ósseo puro e à direita o aloenxerto adicionado de medula óssea autógena. Os coelhos foram sacrificados em duas, cinco e dez semanas e os enxertos submetidos à análise macroscópica e histomorfométrica. Todos os enxertos apresentavam-se fixos ao leito. Os parâmetros histomorfométricos não mostraram diferenças estatisticamente significante. / Searching for alternatives to autogenous bone graft in craniofacial reconstructions, it is proposed deep-frozen, irradiated calvarial bone allograft added with autogenous bone marrow utilization. Twenty and one rabbits were sacrificed and their parietal bones harvest, deep-frozen and gamma irradiated with 50kGy. The allografts were implanted in twenty one other rabbits. At left side only allograft were placed, at right side were put allografts added with autogenous bone marrow. The animals were sacrificed in two, five and ten weeks. Macroscopical examination showed all grafts fixed at the host bone, the histomorphometric analysis did not showed significant statistical differences between the left and right sides.

INTRODUÇÃO: O micofenolato de mofetila é uma droga imunomoduladora utilizada no tratamento de uveítes crônicas não infecciosas. No entanto, até 20% dos pacientes interrompem o tratamento devido aos efeitos colaterais sistêmicos. O ácido micofenólico é a droga ativa do micofenolato de mofetila e sua aplicação na cavidade vítrea pode ser uma alternativa complementar ao tratamento sistêmico. Entretanto, deve-se considerar o risco de efeitos tóxicos da droga na retina e em outras estruturas oculares. OBJETIVOS: Determinar a meia-vida do ácido micofenólico no vítreo de coelhos e avaliar os efeitos retinianos causados pela injeção intravítrea de diferentes doses de MPA através de avaliações clínica, funcional e morfológica. MÉTODOS: Para o estudo farmacológico, a suspensão de ácido micofenólico (1 mg em 0,1 mL de veículo) foi injetada no vítreo de 16 coelhos albinos New Zealand. Como controle, o olho contralateral de cada coelho foi injetado com 0,1 mL do veículo usado na preparação da suspensão. Os animais foram sacrificados após 1, 7, 15 e 30 dias e as concentrações de ácido micofenólico no vítreo e no sangue foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. Para a determinação dos efeitos retinianos do ácido micofenólico foram utilizados 20 coelhos albinos New Zealand, que foram divididos em 5 grupos com quatro animais em cada grupo. Cada animal recebeu injeção de 0,005, 0,05, 0,2, 1 e 10 mg de ácido micofenólico em 0,1 mL de veículo no olho direito e 0,1 mL do veículo no olho esquerdo. Exames de biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia binocular indireta foram realizados antes da injeção e 30 dias após. A avaliação funcional da retina foi feita por eletrorretinografia, que foi realizada antes e 7, 15 e 30 dias após a injeção. Os animais foram sacrificados 30 dias após as injeções intravítreas e a avaliação histológica foi feita por microscopia de luz (hematoxilina-eosina). RESULTADOS: A meia-vida do ácido micofenólico no vítreo do coelho foi de 5,0±0,3 dias e o ácido micofenólico foi detectável no vítreo por 29 dias. O ácido micofenólico não foi detectado no vítreo do olho contralateral e no sangue em nenhum tempo estudado. Sinais inflamatórios de pouca intensidade foram observados em pelo menos um olho de cada grupo e não tiveram relação com a dose de ácido micofenólico injetada. A análise da eletrorretinografia não mostrou diferenças significativas da amplitude e tempo implícito da onda-a e da onda-b nas condições escotópica e fotópica após a injeção intravítrea nos cinco grupos avaliados. A análise da relação entre a amplitude da onda-b versus intensidade do estímulo luminoso mostrou diminuição da sensibilidade retiniana após a injeção intravítrea do ácido micofenólico nas doses de 0,05, 0,2, 1 e 10 mg. O estudo histológico não mostrou alterações estruturais da retina após a injeção intravítrea de ácido micofenólico nas cinco doses avaliadas. CONCLUSÕES: O ácido micofenólico tem meia-vida de 5 dias e foi detectável no vítreo de coelhos até 29 dias após a injeção intravítrea. A avaliação funcional mostrou que a injeção intravítrea de 0,05 a 10 mg de ácido micofenólico causou diminuição da sensibilidade retiniana. As doses entre 0,005 e 10 mg de ácido micofenólico não provocaram alterações histológicas na área analisada da retina de coelhos. / INTRODUCTION: Mycophenolate mofetil is a potent immunomodulatory agent used in the treatment of patients with chronic non-infectious uveitis. However, systemic side effects are the main reason for discontinuation, occurring in up to 20% of patients. Mycophenolic acid is the active form of mycophenolate mofetil and its intraocular delivery may avoid the side effects observed with systemic therapy. However, local side effects in the retina and other ocular structures must be considered. PURPOSE: The aims of this study were to determine the half-life of mycophenolic acid in the rabbit vitreous after intravitreal injection, and to determine the clinical, functional, and morphological retinal effects of the intravitreal injection of five different doses of mycophenolic acid. METHODS: For the pharmacological study, mycophenolic acid 1 mg was injected in the vitreous of 16 New Zealand albino rabbits. Animals were sacrificed at different time points after injections (1, 7, 15, and 30 days) and vitreous and blood samples underwent high performance liquid chromatography. For functional and histological studies, 20 New Zealand albino rabbits were divided in 5 groups of 4 animals each, according to the dose of MPA injected in the vitreous (0.005, 0.05, 0.2, 1, and 10 mg in 0.1 mL of vehicle). As control, contralateral eyes were injected with 0.1 mL of the aqueous vehicle. Electroretinograms were recorded before injection and on days 7, 15, and 30. Slit-lamp examination and indirect fundus ophthalmoscopy were performed before injection and after 30 days. Animals were sacrificed and retinas were analyzed by light microscopy (hematoxylin and eosin). RESULTS: Mycophenolic acid half-life in the rabbit vitreous was 5.0±0.3 days and the drug was detectable in the vitreous for 29 days. Mycophenolic acid was not detected either in the serum or in contralateral eyes. Signs of intraocular inflammation were detected in at least one eye of each group and had no correlation with the dose injected. Electroretinogram analysis did not show signifficant differences on a and b-wave amplitude and implicit time on scotopic and photopic conditions after intravitreal injection. The analysis of the b-wave amplitude versus light intensity curves in the dark-adapted state showed decrease in retinal sensitivity in eyes injected with mycophenolic acid 0.05, 0.2, 1 and 10 mg of the drug. No morphological change was found in any dose tested. CONCLUSION: Mycophenolic acid half-life in the rabbit vitreous is 5 days. Electroretinography shows that intravitreal injection of doses from 0.05 to 10 mg of mycophenolic acid decrease retina sensitivity. Intravitreal injection of doses from 0.005 to 10 mg of mycophenolic acid does not cause histological changes in the analysed area in the rabbit retina.

Introdução: A doença vascular do coração transplantado, consiste em um processo inflamatório proliferativo que compromete o sucesso a longo prazo do transplante cardíaco e não há prevenção ou tratamentos efetivos. Uma nanoemulsão lipídica (LDE) pode carregar agentes quimioterápicos na circulação e concentrá-los nos enxertos cardíacos dos coelhos. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do paclitaxel combinado a LDE;do metotrexate combinado ao LDE e a associação de ambos quimioterápicos ao LDE nos corações transplantados. Método: 28 coelhos alimentados com dieta com teor de 0,5% de colesterol e submetidos a transplante cardíaco herotópico foram tratados com ciclosporina (dose 10 mg/kg/ dia por via oral) e alocados em 4 grupos de 7 animais.Um grupo recebeu a associação de Metotrexate e LDE endovenosa (4 mg/kg/semana); segundo grupo recebeu por via endovenosa a combinação de Paclitaxel e LDE; o terceiro grupo recebeu a associação de LDE com metotrexate e paclitaxel; grupo controle que recebeu somente solução salina intravenosa. Os animais foram sacrificados 6 semanas após o procedimento. Foram realizadas análises da morfologia,histologia,imunohistoquímica e análise da expressão gênica do enxerto e dos corações nativos. Resultado: Em comparação com o grupo controle,coelhos transplantados e tratados com paclitaxel associado ao LDE apresentaram redução em 50% de estenose em artérias coronárias. Já nos grupos que usaram metotrexate associado a LDE ou paclitaxel combinado com metotrexate e associado a LDE, houve redução em 18% da estenose coronariana em relação ao grupo controle,mas a diferença não apresentou significância estatística.Nos três grupos tratados, houve redução do infiltrado macrofágico. No grupo que recebeu metotrexate associado a LDE,a expressão gênica de fatores pró-inflamatórios( TNF-alfa; MCP1; IL 18; VCAM-1 e MMP-12) foi reduzida drasticamente; enquanto a expressão de agentes anti-inflamatórios(IL 10 por exemplo) aumentou. Nos outros dois grupos (LDE+paclitaxel e LDE+paclitaxel e metotrexate) não houve influência consistente na expressão de genes pró e anti-inflamatórios. Conclusão: A associação paclitaxel e LDE promoveu melhora importante na vasculopatia dos enxertos.A associação metotrexate e LDE e a metotrexate mais palcitaxel e LDE reduziram a estenose de coronárias porém sem significância estatística. O infiltrado macrofagocítico foi reduzido nos três grupos tratados. Tais resultados podem servir de ponte para novos ensaios clínicos / Background: Coronary allograft vasculopathy is an inflammatory-proliferative process that compromises the long-term success of heart transplantation and currently has no effective prevention and treatment. A lipid nanoemulsion (LDE) can carry chemotherapeutic agentsin the circulation and concentrates them in the heart graft in rabbits. The aim of this study was to investigate the effects of paclitaxel (PACLI) binded tire parentesis to LDE, methotrexate (MTX) binded to LDE and the association of both particles in transplanted heart. Methods: Twenty eight rabbits fed 0,5% cholesterol diet and submitted to heterotopic heart transplantation were treated with cyclosporine A (10mg/kg/daily orally) and allocated to four groups of 7 animals. One group was treated with intravenous LDE-MTX (4mg/kg B.W., weekly); a second with LDE-paclitaxel, the third one with association of LDE-PACLI with LDE-MTX and the control group received only weekly intravenous saline solution. Animals were sacrificed 6 weeks later for morphometric, histological, immunohistochemical and gene expression analysis of the graft and native hearts. Results: Compared to controls, grafts of LDE-PACLI treated rabbits showed 50%reduction of coronary stenosis and in the LDE-MTX and LDE-MTX/PACLIstenosiswas around 18% less than control but this difference was not statistically significant. In the 3 treatment groups macrophage infiltration was decreased. In LDE-MTX group, gene expression of pro-inflammatory factors TNF-?, MCP-1, IL-18 and VCAM-1, and MMP-12 was strongly diminished whereas expression of anti-inflammatory IL-10 increased. In the other two treatment, groups (LDE-PACLI and LDE-PACLI/MTX) there was not a consistent influence in pro and anti-inflammatory gene expression. Conclusions: LDE-PACLI promoted strong improvement of the cardiac allograft vasculopathy. LDE- MTX and LDE -MTX/PACLI decreased coronary stenosis but without statistic significance. Macrophage infiltration was decrease in the three treatment groups. This new preparation maybe candidate for future clinical trials

A cartilagem articular, por sua natureza avascular, apresenta uma capacidade limitada de regeneração. Uma abordagem terapêutica para o tratamento de defeitos da cartilagem consiste na utilização de células ou tecidos aplicados ao local da lesão. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aplicação de centrifugado de medula óssea autóloga em lesões osteocondrais no joelho de coelhos, em comparação com um grupo controle de lesões osteocondrais sem preenchimento, analisando o comportamento histológico destes grupos em função do tempo. Foram utilizados doze coelhos da raça Nova Zelândia, albinos, machos, adultos, submetidos a uma lesão osteocondral, de 4 mm de diâmetro e 3 mm de profundidade, em ambos os joelhos, na região da tróclea femoral. Nos joelhos direitos, que constituíram o Grupo Estudo, o defeito osteocondral foi preenchido por um coágulo de células mesenquimais, obtidas por centrifugação de um aspirado da medula óssea e selado com cola de fibrina. Nos joelhos esquerdos, que constituíram o Grupo Controle, o defeito osteocondral não recebeu qualquer preenchimento. Os animais foram divididos em três grupos de quatro coelhos, estudados após oito, 16 e 24 semanas. Os resultados foram descritos com base em uma escala de pontuação histológica que avaliou a morfologia celular, a reconstrução do osso subcondral, o aspecto da matriz, o preenchimento do defeito, a regularidade da superfície e a conexão das margens. A análise estatística foi realizada pelo Teste t-student para dados pareados na comparação entre Grupo Estudo e Grupo Controle. Para as comparações através do fator temporal, utilizou-se o Teste ANOVA one way. Com 5% de confiança, rejeitou-se a hipótese de igualdade entre os Grupos Estudo e Controle. Notou-se uma distância decrescente entre os escores dos Grupos Estudo e Controle com o aumento do tempo, bem como uma tendência crescente do valor da escala para o Grupo Controle. Concluiu-se que a aplicação de centrifugado de medula óssea em defeitos osteocondrais no joelho de coelhos mostrou melhor resultado na avaliação histológica, em comparação ao Grupo Controle. Analisando a evolução dos grupos através do tempo, houve uma aproximação de seus escores histológicos, sobretudo pelo aumento observado no Grupo Controle / The articular cartilage, due to its avascular nature, presents a limited regeneration capacity. A therapeutical approach to the treatment of cartilage defects consists of the utilization of cells or tissues applied to the lesion site. The aim of this study was to evaluate the effect of applying autologous bone marrow centrifuged in osteochondral lesions in the knees of rabbits, compared to a control group of osteochondral lesions without any filling, analyzing the behavior of these groups in terms of time. Twelve adult albino male New Zealand rabbits were used being submitted to an osteochondral lesion of 4 mm in diameter and 3 mm deep in both knees, at the femoral trochlea area. On the right knees, which comprised the Study Group, the osteochondral defect was filled by a clot of mesenchymal cells, obtained by centrifugation of an aspirate from bone marrow and sealed with fibrin glue. On the left knees, which comprised the Control Group, the osteochondral defect did not get any filling. The animals were divided into 3 groups of 4 rabbits, and studied after eight, 16 and 24 weeks. The results were described based on a histological grading scale which took into account the cell morphology, the subchondral bone reconstruction, the matrix staining, the filling of the defect, the surface regularity and the bonding of the edges. The statistical analysis was made by the t-student Test for paired data in the comparison between the Study Group and the Control Group. For the comparisons made by the time factor, it was used the ANOVA Test one way. With 5% level of confidence, the hypothesis of equality between the Study and Control Groups was rejected. It was observed a decreasing distance between scores of the Study and Control Groups as time increased, as well as an increasing tendency of the scale value for the Control Group. It was concluded that the application of autologous bone marrow centrifuged in osteochondral defects in the knees of rabbits showed better result in histological evaluation, in comparison to the Control Group. By analyzing the evolution of the groups through time, there was an approach of their histological scores, especially by the increase observed in the Control Group