O oomiceto aquático Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenipila, é o agente etiológico da pitiose, uma doença crônica, piogranulomatosa, que acomete eqüinos, caninos, felinos, bovinos, ovinos e humanos que habitam regiões tropicais e subtropicais. Diversos protocolos para o tratamento da enfermidade têm sido utilizados, incluindo terapia com antifúngicos, cirurgia e imunoterapia. O presente estudo objetivou avaliar a suscetibilidade in vitro de 27 isolados clínicos de Pythium insidiosum ao acetato de caspofungina, bem como correlacionar os resultados obtidos in vitro com a resposta da terapêutica in vivo e comparar a eficácia de dois tratamentos, acetato de caspofungina e imunoterapia, utilizando coelhos como modelo experimental. Vinte e seis isolados de Pythium insidiosum provenientes de casos clínicos de pitiose em animais no Brasil (24 eqüinos, 01 canino e 01 ovino) e um isolado ATCC (58637) foram avaliados neste estudo. Os testes in vitro foram desenvolvidos utilizando-se a macrotécnica em caldo seguindo o protocolo internacional M38-A do CLSI. O inóculo consistiu de uma suspensão de 2-3x103 zoósporos de Pythium insidiosum diluído 1:10 em caldo RPMI. As concentrações finais do acetato de caspofungina variaram de 0,25 – 128 μg/mL. A leitura dos CIMs foi visual, considerando-se o crescimento ou não de hifas em 24 horas de incubação a 370C, sendo adotados 3 critérios de leitura: CIM0; CIM1 e CIM2 (100%, 90% e 50% de inibição de crescimento, respectivamente), assim como também foi determinada a concentração fungicida mínima. No ensaio in vivo, 15 coelhos inoculados subcutaneamente com 20.000 zoósporos de Pythium insidiosum foram divididos em 3 grupos de 5 animais (grupo 1, controle; grupo 2, tratado com imunoterápico Pitium Vac® e grupo 3, tratado com acetato de caspofungina). Os tratamentos iniciaram-se 25 dias após a inoculação e consitiram de: 1) 8 doses de imunoterápico administradas em intervalos de 14 dias; 2) 1 mg/kg/dia de acetato de caspofungina durante 20 dias consecutivos. Dezoito semanas após o início do experimento, os animais foram necropsiados e fragmentos de lesões foram coletados para análise histopatológica e morfométrica. Quatorze isolados (51,8%) evidenciaram CIM0 de 64 μg/mL e 24 (88,8%) CIM1 com variação de ≥ 8μg/mL a 64 μg/mL. Na determinação da concentração fungicida mínima, 17 (62,9%) amostras requereram 64 μg/mL. Os animais de ambos os tratamentos apresentaram redução da área de lesões, quando comparados aos animais do grupo controle (P<0.05). As áreas de lesões dos coelhos tratados com acetato de caspofungina evidenciaram redução durante o tratamento, porém rapidamente retornaram a progredir quando a administração do fármaco foi suspensa. O aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos estudados e a avaliação morfométrica evidenciou que os animais dos grupos 2 e 3 apresentaram menor quantidade de hifas nas áreas de necrose (P<0.05). Os resultados obtidos evidenciam que, embora não tenha havido diferença entre os tratamentos avaliados, a imunoterapia, em função de seu custo, continua sendo a melhor alternativa para o tratamento da pitiose. A ocorrência de altas CIMs associada a falta de atividade fungicida do acetato de caspofungina observados neste estudo, sugerem que Pythium insidiosum é pouco suscetível a este antifúngico. / For the in vivo assay, fifteen rabbits were subcutaneously inoculated with 20,000 Pythium insidiosum zoospores and were divided into 3 groups of 5 animals (group 1, control; group 2, treated with Pitium Vac® immunotherapic; and group 3, treated with caspofungin acetate). The treatments were started 25 days after the inoculation, and consisted of: 1) 8 doses of the immunotherapic administered at 14-day intervals; and 2) 1mg/kg/day of caspofungin acetate during 20 consecutive days. The animals were necropsied eighteen weeks after the start of the experiment, and lesion fragments were collected for histopathologic and morphometric analyses. Fourteen isolates (51.8%) had an MIC0 of 64 μg/mL, and 24 (88.8%) had an MIC1 that varied between ≥ 8μg/mL and 64 μg/mL. When subjected to the minimum fungicidal concentration assay, 17 (62.9%) samples required 64 μg/mL. The animals in both treatment groups displayed smaller lesion sizes compared to the animals of group control (P<0.05). The subcutaneous lesion areas of rabbits treated with caspofungin acetate exhibited a reduction in their progression during the treatment. However, lesions quickly resumed growth when the administration of the drug was suspended. The histological aspect of the lesions was similar between the groups under study, and the morphometric evaluation showed that the animals in groups 2 and 3 had lower amounts of hyphae in necrotic areas (P<0.05). The results obtained indicate that, even though the treatments did not differ significantly, the immunotherapic treatment is still the best alternative to treat pythiosis. In addition, the high MICs and lack of fungicidality of caspofungin acetate suggest that Pythium insidiosum is poorly susceptible to this antifungal drug.

O criptorquidismo é a uma afecção hereditária caracterizada por ausência de um ou ambos os testículos na bolsa escrotal devido à interrupção de seu trajeto normal de migração da cavidade abdominal para a bolsa escrotal. Tal interrupção faz com que o testículo se apresente ectópico, permanecendo no tecido subcutâneo, abdômen ou região do anel inguinal. Para a correção desta patologia, indica-se, na Medicina Veterinária, a criptorquidectomia convencional ou laparoscópica, sendo que a laparoscópica tem se firmado como melhor alternativa devido ao menor trauma tecidual, melhor visualização, menor dor, necessidade de menor analgesia, tempo menor de recuperação do paciente e melhor aspecto do ferimento cirúrgico. Este estudo objetivou desenvolver uma técnica para criptorquidectomia através de um único portal (LESS-single site surgery) utilizando o trocarte Centry Port®, com apenas dois canais de trabalho. Foram utilizados dez coelhos machos, da raça Nova Zelândia e Califórnia, com peso entre 2,8 kg e 3,85 kg. Após a intubação e manutenção do plano anestésico e colocação do animal em posição de Trendelenburg a 200, foi introduzido o Centry Port® aproximadamente a 1 cm cranial à cicatriz umbilical através de incisão de aproximadamente 1,5 cm de extensão. O pneumoperitôneo com CO2 foi estabelecido e mantido durante todos os procedimentos com 10 mm Hg. Por meio de compressão manual o testículo foi introduzido para o interior da cavidade abdominal através do anel inguinal. Após sua visualização e apreensão com uma pinça de Kelly, foi fixado à parede abdominal com auxílio de sutura transparietal. A hemostasia foi realizada com auxílio da eletrocoagulação bipolar regulada em 20 watts. Após a secção do cordão espermático os testículos foram removidos por dentro do trocarte. Ao término dos procedimentos laparoscópicos e após a inspeção da cavidade, foi desfeito o pneumoperitôneo, sendo realizada a sutura da musculatura e da pele. Todos os tempos cirúrgicos foram anotados, para que uma curva de aprendizado fosse avaliada. As intercorrências cirúrgicas não foram clinicamente significativas e o procedimento foi factível em todos os animais do experimento. Os coelhos foram doados após a retirada dos pontos. As maiores dificuldades encontradas com o uso do Centry Port® foram a visualização em linha e o choque entre as mãos do cirurgião e câmera junto ao trocarte. Concluiu-se com este estudo que a técnica de criptorquidectomia por single-port em coelhos, utilizando o Centry Port® é viável e que as dificuldades são superadas na medida em que a equipe estabelece maior experiência com a técnica por um único acesso. / The cryptorchidism is a hereditary disease characterized by the absence of one or both testicles in the scrotum due to interruption of their normal migration path of the abdominal cavity to the scrotum. Such interruption causes the testicle is ectopic, remaining in the subcutaneous tissue, abdomen or inguinal ring region. In Veterinary Medicine, the indication for this is the exerese surgical pathology by means of conventional or laparoscopic criptorquidectomia and laparoscopic has signed as a better alternative due to the less tissue trauma, better view, less pain, less need for analgesia, less patient recovery time and better aspect of the surgical wound. This study aimed to develop a technique to criptorquidectomia through a single portal (LESSsingle site surgery) using the Centry Port® trocar, with only two working channels. Ten male rabbits were used, the New Zealand-bred and California, weighing between 2.8 kg and 3.85 kg. After intubation and anesthetic plan maintenance and placement of the animal in the Trendelenburg position 200, Centry Port® was introduced approximately 1 cm cranial to the umbilical scar through incision about 1.5 cm long. The pneumoperitôneo with CO2 was established and maintained during all procedures with 10 mm Hg. Through manual compression the testicle was introduced into the abdominal cavity through the inguinal ring. After your viewing and seizure with a clamp on Kelly, was attached to the abdominal wall with the aid of transparietal suture. The haemostasis was performed with the aid of bipolar electrocoagulation adjusted to 20 watts. After the section of the spermatic cord the testicles were removed inside the trocar. At the end of laparoscopic procedures and after inspection of the well, was shattered the pneumoperitôneo, being performed the suture of the muscles and the dermal suture. All surgical times were noted for which a learning curve to be evaluated. The surgical complications were not clinically significant and the procedure was doable in all animals in the experiment. The rabbits were donated after the withdrawal of points. The major difficulties encountered with the use of Centry Port® were viewing online and the clash between the hands of the surgeon and the camera next to the trocar. This study concluded that the technique of criptorquidectomia by single-port in rabbits using Centry Port® is feasible and that the difficulties related to its use are exceeded in that the team establishes greater experience with the technique by single port.

Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) de uso tópico ocular são amplamente utilizados por um número crescente de médicos e veterinários, clínicos gerais e oftalmologistas. A crescente utilização de AINEs tópicos é motivada pela busca de fármacos que não apresentem os conhecidos efeitos adversos tópicos e sistêmicos dos corticosteróides. Desta forma, os profissionais envolvidos no cuidado destes pacientes devem estar cientes de que fármacos AINEs tópicos não são livres de efeitos adversos. Este trabalho objetivou investigar os potenciais efeitos adversos locais e sistêmicos da utilização de colírios contendo diclofenaco sódico 0,1% e cetorolaco de trometamina 0,5% em coelhos tratados por 90 dias. Desta forma buscou-se elucidar questões relacionadas à segurança do seu uso como agente terapêutico, que poderiam restringir a sua aplicação clínica em pequenos animais. Para isso, 18 coelhos foram divididos em três grupos. Os animais foram tratados três vezes ao dia por 90 dias com colírio de cetorolaco de trometamina 0,5%, diclofenaco sódico 0,1% e solução fisiológica (NaCl 0,9%). Foi realizada a mensuração diária do consumo de água e ração, assim como exames clínicos semanais e coleta de sangue a cada 30 dias. Ao final do tratamento os animais foram eutanasiados e necropsiados. A superfície da córnea foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Não houve alterações clínicas e diferenças entre os grupos quanto aos valores de hemograma, leucograma, contagem de plaquetas, tempo de protrombina e tromboplastina, proteínas totais, albumina, creatinina, sódio e potássio. Dados de necropsia não apontaram alterações macro ou microscópicas no sistema gástrico, hepático e renal. Após noventa dias de tratamento com ambos os colírios contendo AINEs, pôde ser identificado os princípios ativos no plasma por extração em fase sólida e detecção por espectrometria de massas. Valendo-se da MEV foi comprovado que ambos os AINEs causaram alterações no padrão celular do epitélio corneano. Os resultados desta tese foram apresentados no formato de artigos, sendo que no primeiro artigo foram descritas as implicações da absorção sistêmica dos colírios contendo cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1%; e o segundo artigo referiu-se à avaliação ultraestrutural do epitélio corneano de coelhos tratados por 90 dias com os colírios de sem cons cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1% sem conservantes. / The use of topical ophthalmic nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) is widely adopted by an increasing number of physicians and veterinarians, general practitioners and ophthalmologists. The increasing use of topical NSAIDs is motivated by the need of administer drugs that do not present the well-known adverse effects of topical and systemic corticosteroids. Thus, the professionals involved in the care of these patients should be aware that topical NSAIDs drugs are not free of adverse effects. This study aimed to investigate the potential local and systemic adverse effects of eye drops administration containing diclofenac sodium 0.1% and ketorolac tromethamine 0.5% in rabbits treated during a period of 90 days. In this manner we sought to clarify issues related to the safety of their use as a therapeutic agent, which could restrict its clinical application in small animals. The 18 rabbits were separated into three groups. The animals were treated three times daily during a period of 90 days with ketorolac tromethamine 0.5% eye drop, sodium diclofenac and 0.1% saline (0.9% NaCl). It was carried out a daily measurement of water and food consumption as well as a weekly clinical examination and blood sampling every 30 days. At the end of the treatment the animals were euthanized and necropsied. The corneal surface was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). There were no clinical alterations and differences between the three groups in terms of blood count values, white blood cell count, platelet count, prothrombin time and thromboplastin, total protein, albumin, creatinine, sodium and potassium. Necropsy data showed no macroscopic or microscopic changes in gastric, hepatic and renal system. Ninety days after treatment with both eye drops containing NSAIDs, it could be identified the active ingredients in the plasma by solid phase extraction and detection by mass spectrometry. Taking advantage of SEM has been proven that both NSAIDs caused changes in cellular pattern of the corneal epithelium. The results from the thesis were presented in these two articles, in the first, we described the implications of the systemic absorption of eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5%; and in the second article which refers to the ultrastructural evaluation of the corneal epithelium of rabbits treated for 90 days with eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5% preservative-free.

Introdução: A terapia a laser de baixa intensidade (LLLT) é uma importante ferramenta na biomodulação tecidual quando do processo cicatricial de uma ferida ou dano cirúrgicos. A sua aplicação favorece o reparo ósseo na região de implantes dentários. Objetivos: Avaliar as alterações no processo de reparo ósseo perimplantar em alvéolo do incisivo inferior de coelho após exodontia seguido da instalação imediata de um implante osseointegrável, irradiado ou não com laser de baixa intensidade (AsGaAl) em diferentes parâmetros através da análise da densidade de imagem perimplantar por tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC) e histomorfométrica da interação entre osso e implante. Verificar a aplicabilidade da TCFC no controle pós-operatório de implantes dentários através de correlação com a microscopia óptica. Metodologia: A amostra foi composta por vinte e quatro fragmentos de mandíbulas dissecadas de coelhos contendo um implante dentário colocado após a exodontia. A distribuição das amostras foi realizada de forma que cada grupo conteve seis mandíbulas, sendo um grupo controle (C) e três grupos experimentais (EI, EII, EIII) seguindo o padrão de aplicação da laserterapia, nos animais in vivo durante 13 dias. O grupo controle recebeu aplicação de laser placebo. O grupo EI recebeu dose de 70J/cm2, o EII-35J/cm2 e o EIII-140J/cm2. Aos 45 dias do experimento todos os animais foram mortos tendo suas mandíbulas dissecadas e submetidas à TCFC para análise da densidade de imagem perimplantar através de dois métodos de avaliação (linear e área retangular). Após, as amostras foram incluídas em resina e preparadas para análise através de microscopia óptica. Na análise histomorfométrica foi mensurada a extensão linear de contato entre osso e implante (ELCOI), a área óssea por espira (AOE), a área óssea retangular (AOR) e a área de fibras colágenas (FC) das três espiras médias do implante. Resultados: Os resultados foram analisados através da análise de variância (ANOVA) complementada pelo teste de comparações múltiplas de Tukey ao nível de significância de 5%. Observou-se um aumento da ELCOI e da FC para o grupo EIII em comparação com os demais grupos. A avaliação linear por TCFC demonstrou médias de nível de cinza mais elevadas para o grupo EIII em comparação com os demais grupos e que os grupos EI e EII apresentaram valores maiores que o grupo C. A avaliação da área retangular por TCFC e avaliações histomorfométricas de área óssea retangular (AOR) e por espira (AOE) não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. Não foi possível detectar correlação entre as análises dos resultados obtidos por histomorfometria e TCFC através do coeficiente de correlação de Pearson ao nível de significância de 5%. Conclusão: A LLLT biomodula positivamente o reparo ósseo perimplantar na dose de 140J/cm2. A densidade de imagem perimplantar avaliada pelos dois métodos propostos obtidos por TCFC não demonstrou correlação significativa com os resultados da histomorfometria, sendo discutível sua aplicação no controle pós-operatório de implantes dentários. / Introduction: The use of low level laser therapy (LLLT) is an important tool in tissue biomodulation during the healing process of a wound or surgical damage. The application promotes bone repair in the area of dental implants. Objectives: To evaluate the changes in the peri-implant bone healing in mandibular incisor alveoli of rabbits after extraction followed by immediate installation of an osseointegrated implant, irradiated or not with low intensity laser (GaAlAs) on different parameters by analyzing the image density perimplantar with cone beam computed tomography (CBCT) and histomorphometry of the interaction between bone and implant. Verify the applicability of CBCT in postoperative follow up of dental implants through correlation with optical microscopy. Methodology: The sample was composed of twenty-four fragments of dissected rabbits jaws containing a dental implant placed after the extraction. The distribution of samples was performed so that each group contained six jaws A sample was divided in one control group (C) and three experimental groups (EI, EII, EIII) in which the standard laser therapy was applied in live animals for 13 days. The control group received placebo laser application. The EI group received a dose 70J/cm2, EII-35J/cm2 and EIII-140J/cm2. At 45 days of the experiment all animals were killed and their mandibles were dissected and submitted for analysis to the CBCT image density perimplantar through two evaluation methods (linear and rectangular area). After the samples were embedded in resin and prepared for analysis by optical microscopy. In histomorphometry was measured the bone-implant contact (BIC), bone area within the implant threads (BAS), bone area rectangular (BAR) and the area of collagen fibers (CF) of three median spirals of the implant. Results: The results were analyzed by analysis of variance (ANOVA) complemented by the multiple comparison test of Tukey at a significance level of 5%. It was observed an increase in BIC and CF for the group EIII compared to the other groups. The CBCT linear evaluation demonstrated gray level averages higher for the group EIII compared to the other groups and that the groups EI and EII were higher than group C. The evaluation of the rectangular area by CBCT and ratings histomorphometric bone area rectangular (BAR) and within the implant threads (BAT) showed no significant differences between groups. There were no significant relation between the analyzes of the results obtained by histomorphometry and CBCT through the Pearson correlation coefficient at a significance level of 5%. Conclusion: LLLT modulates positively bone repair in the peri-implant with dose 140J/cm2. The image density perimplantar evaluated by the two proposed methods obtained by CBCT demonstrated no significant correlation with the results of histomorphometry, being moot its application in controlling postoperative dental implants.

This dissertation presents an implant model of natural latex to be used on partial canine diaphragm replacement. The implant could be used in cases of diaphragmatic hernias, or significant loss of the diaphragm integrity disabling its reconstitution. For such, seven different membranes had been tested, six of them had been produced experimentally and one is a commercial model in use, for several applications. Firstly, the biocompatibility was evaluated in rabbits. Membranes were implanted between the cutaneous and the oblique abdominal sternum muscles by the means of a surgical procedure and the reactions of hipersensibility and rejection were evaluated. Mechanical traction tests were performed in control membranes to measure deformation and resistance. Results pointed that the membranes are incompatible, and not able to substitute muscular sheath in rabbits. New tests were made in dogs. The membranes were regrouped and three of then were tested in a similar way, in abdomen straight muscle. Two membranes were selected, for use in the canine diaphragm, and being tested in front a control group, without membrane. A rectangular defect (4 cm in length and 3 cm in width) was created in the diaphragm muscle, which was substituted, in groups 1 and 2, by the implantation of the corresponding latex membrane. The animals were evaluated radiographically, by blood count, video-surgery, and histopathology study. The results showed that the membrane made of natural latex, vulcanizants mixture and formic acid, were efficient in the correction of the diaphragm defect, promoting repair and local neovascularization, capable to keep the respiratory function and movements of the diaphragm without causing rejection during the evaluated period. / Esta dissertação apresenta um modelo de implante à base de látex natural para a substituição parcial de diafragma canino. Este poderá ser utilizado em casos de hérnias diafragmáticas, ou situações em que haja perda da integridade do diafragma, impossibilitando sua reconstituição. Para tal, foram testadas sete diferentes membranas, das quais seis foram produzidas experimentalmente e um modelo comercial em uso no mercado, para diferentes fins. Foram realizados testes de resistência para verificar a deformação e elasticidade das membranas. A biocompatibilidade foi avaliada primeiramente em coelhos, nos quais as membranas foram fixadas através de procedimento cirúrgico na bainha do músculo oblíquo externo do abdome e avaliadas quanto a reações de hipersensibilidade e rejeição. Os resultados contra-indicam o uso destas em coelhos. Novos testes foram realizados em cães. As membranas foram reagrupadas e três delas testadas de maneira semelhante, no músculo reto do abdome verificando-se biocompatibilidade com essa espécie. Foram selecionadas duas membranas para a utilização no diafragma canino, sendo testadas frente a um grupo controle, sem membrana. Foi criado um defeito retangular no músculo diafragma, com 4 cm de comprimento e 3 cm de largura, que no grupo 1 e 2 foi substituído pelo implante de membrana de látex correspondente. A avaliação foi feita através de análise do hemograma, por estudo radiográfico, por vídeocirurgia e estudo histopatológico. Pode-se inferir dos resultados que a membrana constituída de: látex natural, mistura vulcanizante e ácido fórmico, foi eficiente na correção do defeito no diafragma canino, promovendo a reparação tecidual e neovascularização local, capaz de manter a função do diafragma e movimentos respiratórios sem causar rejeição durante o período de avaliação.

O oomiceto aquático Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenipila, é o agente etiológico da pitiose, uma doença crônica, piogranulomatosa, que acomete eqüinos, caninos, felinos, bovinos, ovinos e humanos que habitam regiões tropicais e subtropicais. Diversos protocolos para o tratamento da enfermidade têm sido utilizados, incluindo terapia com antifúngicos, cirurgia e imunoterapia. O presente estudo objetivou avaliar a suscetibilidade in vitro de 27 isolados clínicos de Pythium insidiosum ao acetato de caspofungina, bem como correlacionar os resultados obtidos in vitro com a resposta da terapêutica in vivo e comparar a eficácia de dois tratamentos, acetato de caspofungina e imunoterapia, utilizando coelhos como modelo experimental. Vinte e seis isolados de Pythium insidiosum provenientes de casos clínicos de pitiose em animais no Brasil (24 eqüinos, 01 canino e 01 ovino) e um isolado ATCC (58637) foram avaliados neste estudo. Os testes in vitro foram desenvolvidos utilizando-se a macrotécnica em caldo seguindo o protocolo internacional M38-A do CLSI. O inóculo consistiu de uma suspensão de 2-3x103 zoósporos de Pythium insidiosum diluído 1:10 em caldo RPMI. As concentrações finais do acetato de caspofungina variaram de 0,25 – 128 μg/mL. A leitura dos CIMs foi visual, considerando-se o crescimento ou não de hifas em 24 horas de incubação a 370C, sendo adotados 3 critérios de leitura: CIM0; CIM1 e CIM2 (100%, 90% e 50% de inibição de crescimento, respectivamente), assim como também foi determinada a concentração fungicida mínima. No ensaio in vivo, 15 coelhos inoculados subcutaneamente com 20.000 zoósporos de Pythium insidiosum foram divididos em 3 grupos de 5 animais (grupo 1, controle; grupo 2, tratado com imunoterápico Pitium Vac® e grupo 3, tratado com acetato de caspofungina). Os tratamentos iniciaram-se 25 dias após a inoculação e consitiram de: 1) 8 doses de imunoterápico administradas em intervalos de 14 dias; 2) 1 mg/kg/dia de acetato de caspofungina durante 20 dias consecutivos. Dezoito semanas após o início do experimento, os animais foram necropsiados e fragmentos de lesões foram coletados para análise histopatológica e morfométrica. Quatorze isolados (51,8%) evidenciaram CIM0 de 64 μg/mL e 24 (88,8%) CIM1 com variação de ≥ 8μg/mL a 64 μg/mL. Na determinação da concentração fungicida mínima, 17 (62,9%) amostras requereram 64 μg/mL. Os animais de ambos os tratamentos apresentaram redução da área de lesões, quando comparados aos animais do grupo controle (P<0.05). As áreas de lesões dos coelhos tratados com acetato de caspofungina evidenciaram redução durante o tratamento, porém rapidamente retornaram a progredir quando a administração do fármaco foi suspensa. O aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos estudados e a avaliação morfométrica evidenciou que os animais dos grupos 2 e 3 apresentaram menor quantidade de hifas nas áreas de necrose (P<0.05). Os resultados obtidos evidenciam que, embora não tenha havido diferença entre os tratamentos avaliados, a imunoterapia, em função de seu custo, continua sendo a melhor alternativa para o tratamento da pitiose. A ocorrência de altas CIMs associada a falta de atividade fungicida do acetato de caspofungina observados neste estudo, sugerem que Pythium insidiosum é pouco suscetível a este antifúngico. / For the in vivo assay, fifteen rabbits were subcutaneously inoculated with 20,000 Pythium insidiosum zoospores and were divided into 3 groups of 5 animals (group 1, control; group 2, treated with Pitium Vac® immunotherapic; and group 3, treated with caspofungin acetate). The treatments were started 25 days after the inoculation, and consisted of: 1) 8 doses of the immunotherapic administered at 14-day intervals; and 2) 1mg/kg/day of caspofungin acetate during 20 consecutive days. The animals were necropsied eighteen weeks after the start of the experiment, and lesion fragments were collected for histopathologic and morphometric analyses. Fourteen isolates (51.8%) had an MIC0 of 64 μg/mL, and 24 (88.8%) had an MIC1 that varied between ≥ 8μg/mL and 64 μg/mL. When subjected to the minimum fungicidal concentration assay, 17 (62.9%) samples required 64 μg/mL. The animals in both treatment groups displayed smaller lesion sizes compared to the animals of group control (P<0.05). The subcutaneous lesion areas of rabbits treated with caspofungin acetate exhibited a reduction in their progression during the treatment. However, lesions quickly resumed growth when the administration of the drug was suspended. The histological aspect of the lesions was similar between the groups under study, and the morphometric evaluation showed that the animals in groups 2 and 3 had lower amounts of hyphae in necrotic areas (P<0.05). The results obtained indicate that, even though the treatments did not differ significantly, the immunotherapic treatment is still the best alternative to treat pythiosis. In addition, the high MICs and lack of fungicidality of caspofungin acetate suggest that Pythium insidiosum is poorly susceptible to this antifungal drug.

Durante as duas últimas décadas, têm ocorrido progressos substanciais a respeito do entendimento da fisiopatologia da cicatrização de feridas, e novas terapias tem sido desenvolvidas. Contudo, acelerar o processo de reparo continua sendo um desafio no campo da cirurgia plástica reconstrutiva. Tratamentos inovadores para melhorar a cicatrização e a regeneração cutânea são necessários e é nesse âmbito que as pesquisas com as células-troncos mesenquimais (MSCs) vêm ganhando espaço na última década. As MSCs foram estudadas em diversas áreas no que diz respeito ao seu efeito sobre a cicatrização de lesões e suas aplicações clínicas. Relatos apontam que tanto as MSCs originárias da medula óssea influenciam beneficamente a cicatrização de feridas, quanto originárias do tecido adiposo (ADSCs). A vantagem das ADSCs está na facilidade de serem coletadas, baixas taxas de morbidade e pelo alto rendimento de MSCs por coleta. Estudos demonstram que a eletroacupuntura (passagem de eletricidade através de agulhas de acupuntura inseridas na pele) pode exercer efeito cicatrizante em feridas cutâneas experimentalmente induzidas por meio do aumento da proliferação e da migração de células epiteliais e do tecido conjuntivo envolvidos no reparo de feridas. Dessa forma, este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da terapia com ADSCs no processo da cicatrização de feridas cutâneas em coelhos induzidas experimentalmente. Além disso, avaliar se a eletroacupuntura (EA) é capaz de causar efeito sobre a terapia com ADSCs no reparo de lesões cutâneas experimentais. Para tanto, foram utilizados 32 coelhos divididos em quatro grupos: GCTAD (ADSCs), GCTADE (ADSCs associado a EA), GE (EA) e GC (controle) o período de avaliação das lesões foi de 15 dias. As feridas induzidas cirurgicamente foram avaliadas por observações clinicas e análises histológicas. Os animais do GCTAD apresentaram uma velocidade cicatricial superior aos demais grupos até a quinta avaliação. Já na sétima avaliação o GE passa a ter a melhor taxa de contração cicatricial superando o GCTAD (p=0,039) e o GC (p=0,05). O GCTAD apresentou as maiores médias nas variáveis histológicas: proliferação vascular (p=0,059), proliferação fibroblástica (p=0,05) e Ki67. Nas variáveis reepitelização e colagenização as médias foram maiores que a dos outros grupos, mas semelhantes ao GE e a presença de queratina, da mesma forma, semelhante ao GCTADE. O GCTADE se destaca pela presença de folículos pilosos (p=0,026) e pelas maiores médias encontradas para as células mononucleares e polimorfonucleares, mas esses valores não configuram diferença estatística significativa. Por meio desse experimento, demostrou-se que o GCTAD melhora a cicatrização de feridas, acelerando a fase proliferativa do processo cicatricial. A associação dos tratamentos EA e ADSCs só foi considerada superior aos outros tratamentos na avaliação da presença de folículos pilosos. Talvez, o beneficio dessa associação seja mais evidente se o estudo for feito por um período superior aos 15 dias, ou seja, durante a fase de remodelamento da cicatrização, onde pode ser que se verifique um aspecto cosmético mais favorável da cicatriz. / The pathophysiology understanding of wound healing has been substantial progress during the last two decades, and new therapies have been developed. However, to accelerate the repair process remains a challenge in the field of reconstructive plastic surgery. Innovative treatments to enhance wound healing and cutaneous regeneration are necessary and in this context the research with mesenchymal stem cells (MSCs) are getting space in the last decade. MSCs have been studied in several areas with regard to its effect on the healing of lesions and their clinical applications. Reports indicate that both MSCs from bone marrow beneficially influence wound healing, as originating from adipose tissue (ADSCs). The advantage of ADSCs is because they can be easily collected, with low rates of morbidity and the high yield of MSCs per collection. Studies show that electro acupuncture (passing electricity through the acupuncture needles inserted into the skin) can have a healing effect on experimentally induced skin wounds by increasing the proliferation and migration of epithelial cells and connective tissue involved in wound repair. Thus, this study aims to evaluate the effect of therapy with ADSCs in the process of skin wound healing in rabbits that were experimentally induced. Moreover, to evaluate whether electro acupuncture (EA) is capable to causing effect on ADSCs therapy in the repair of experimental skin lesions. Therefore, it was used 32 rabbits divided into four groups: GCTAD (ADSCs), GCTADE (ADSCs associated with EA), GE (EA) and CG (control) the evaluation period of the lesions was 15 days. The surgically induced wounds were evaluated by clinical observations and histological analysis. The GCTAD animals showed an accelerated wound healing than the other groups until the fifth assessment. In the seventh evaluation GE replaced by the best healing rate than GCTAD (p = 0.039) and CG (p = 0.05). The GCTAD had the highest averages in the histological variables: vascular proliferation (p = 0.059), fibroblast proliferation (p = 0.05) and Ki67. Reepithelialization and collagen variables the averages were higher than other groups, but similar to GE and the presence of keratin, the same way, similar to GCTADE. The GCTADE stands by the presence of hair follicles (p = 0.026) and by the major averages found for the mononuclear and polymorph nuclear cells, but these values are not statistically significant. Through this experiment, we show that the GCTAD improves wound healing by accelerating the proliferation phase of healing. The combination of EA and ADSCs treatments were not considered superior to other treatments in assessing the presence of hair follicles. Perhaps the benefit of this association is more evident if the study is done for a period exceeding 15 days, during the remodeling phase of healing, it could be ascertained a more favorable cosmetic appearance of the scar.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-19Bitstream added on 2014-06-13T19:49:04Z : No. of bitstreams: 1 brock_rs_me_botfm.pdf: 602525 bytes, checksum: bd2115da27f5dda49225e5afda53918e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Defeitos ósseos decorrentes de traumas, ressecções de tumores ou mesmo malformações congênitas, são encontrados com freqüência na prática médica. O tratamento destas deformidades é feito mediante reconstruções cirúrgicas, principalmente na cirurgia plástica, proporcionando aos pacientes melhor qualidade de vida. Os defeitos ósseos são corrigidos preferencialmente com enxertos ósseos autológos por não causarem rejeição, mas estes apresentam como desvantagens a morbidade das áreas doadoras e a grande porcentagem de absorção dos enxertos, com diminuição ou perda do resultado final. Outros métodos de reconstrução, como o uso de materiais aloplásticos, são utilizados mas, muitas vezes, evoluem com rejeição e extrusão ou infecção, e necessitam ser retirados. Retalhos livres, compostos de osso com músculo ou derme e subcutâneo, em casos graves, representam a melhor opção. Entretanto, este método requer preparo específico da equipe cirúrgica, maior tempo de cirurgia e, muitas vezes, apresenta trombose vascular e perda do retalho. Avaliar a viabilidade e a formação óssea em retalho gáleoperiostal preenchido com pó de osso em calota craniana de coelhos. Foram estudados 40 coelhos divididos em dois grupos, o primeiro com retalho gáleo-periostal e o segundo com o mesmo retalho, porém preenchido com pó de osso. Os resultados demonstraram neoformação óssea em ambos, mas com diferenças na estrutura e conformação óssea. O retalho gáleo-periosteal preenchido com pó de osso em calota craniana de coelhos é viável. A formação óssea ocorreu em ambos os grupos, preenchido ou não com pó de osso. A maturidade do tecido ósseo foi maior nos retalhos preenchidos com pó de osso / Osseus defects from traumas, tumor ressections or congenital malformations are usual in medical practice. The treatment of these deformities has been made with reconstructive surgeries, specially in plastic surgery, to give the patients better quality of life. The osseus defects are usually corrected with autologous bone grafts. These grafts are used because they do not cause rejection. However, they have disadvantages like the donnor site morbidity, the high number of absorption of these grafts and the final result partial or total lost. Other reconstruction methods like alloplastic materials are used, but they have high percentage of rejection and extrusion or even infection of these materials, which need to be taken off. Flaps of bone and muscle or dermis and subcutaneous are considered the best choice in difficult cases. However, this method needs specific training of the medical group, longer surgeries and, sometimes, presents the flap necrosis after vascular thrombosis. To study the viability and bone neoformation in a vascularized galea and periosteum flap filled with bone fragments. Fourty rabbits were studied, and divided into two groups. One had a simple galea and periosteum flap done and the other had the same flap done but filled with bone fragments of the calvaria. The results demonstrated bone formation in both groups, but with differences in the bone form and structure. The galea-periosteum flap filled with bone dust at rabbit’s calvaria is viable. The bone formation happened in both groups, with or without bone dust. Bone maturity was higher in the flaps filled with bone dust

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study describes aspects of the pathogenesis of bovine herpesvirus-5 (BoHV-5) infection in goats and rabbits. The study performed in goats was aimed at investigating the susceptibility of this species to BoHV-5 infection, due its potential role as a virus reservoir. Young goats were inoculated intranasally with three Brazilian BoHV-5 isolates (SV-507, G1; SV-609, G2; and EVI-88, G3) and monitored thereafter regarding to virus shedding, clinical signs and antibody response. The acute infection was characterized by virus shedding in nasal secretions for up to 14 days post-inoculation (pi) in titers reaching up to 105.97 TCID50/mL, mild respiratory signs and seroconversion. At day 60 pi, two animals of each group were euthanized for tissue collection to search viral DNA. The remaining animals were submitted to dexamethasone (Dx) administration to reactivate latent infection. Dx treatment resulted in virus reactivation in 75% (9/12) animals, as ascertained by virus shedding (8/12), and/or seroconversion (3/12). Latent viral DNA was detected in the trigeminal ganglia (TG) and/or in the main olfactory bulb (MOB) of all goats euthanized at days 60 pi and 40 post-dexamethasone. These results demonstrate that goats are susceptible to BoHV-5 acute and latent infection and may shed virus upon reactivation of latency. Thus, this species should be considered a potential reservoir for BoHV-5 in areas where goats and cattle are raised in close contact. The second experiment was aimed at investigating the role of the olfactory pathway in the transport of BoHV-5 to the brain of rabbits. For this, thirty days-old rabbits had the MOB surgically removed and were subsequently inoculated intranasally (IN) or conjunctivally (IC) with the strain SV-507 of the BoHV-5. Intranasal inoculation resulted in neurological disease in 100% of the control animals (with MOB), with clinical signs starting between days 5 and 10 pi; in the group submitted to MOB ablation only one animal (9.1%) developed neurological signs (started at day 17 pi). Following IC inoculation 10/12 (83.3%) control rabbits (with MOB) developed neurological disease with clinical signs starting between days 11 and 20 (mean 15.3 days). Furthermore, 10/12 rabbits lacking the MOB also developed neurological disease starting between days 9 and 15 pi (mean 12.5 days). These results demonstrate that both the olfactory and the trigeminal pathways may be used by BoHV-5 to invade the brain of rabbits after experimental infection. The transport by the olfactory pathway is faster and more efficient, while the trigeminal transport is slower and less efficient. These results add important information to the knowledge about the neuropathogenesis of alphaherpesvirus infection. / O presente estudo descreve aspectos da patogenia da infecção pelo herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) em caprinos e coelhos. O estudo em caprinos teve como objetivo investigar a susceptibilidade da espécie ao BoHV-5, devido ao seu possível papel como reservatório do vírus. Para isto, caprinos jovens foram inoculados pela via intranasal (IN) com três isolados brasileiros do BoHV-5 (SV-507, G1; SV-609, G2; e EVI-88, G3) e monitorados nos aspectos virológicos, clínicos e sorológicos. A fase aguda caracterizou-se por excreção viral em secreções nasais por um período de até 14 dias pós-inoculação (pi) em títulos de até 105,97 DICC50/mL, sinais respiratórios brandos e soroconversão. No dia 60 pi, dois animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia para a coleta de tecidos e pesquisa de DNA viral. Os animais restantes foram submetidos à administração de dexametasona (Dx), na tentativa de reativar a infecção latente. A administração de Dx resultou em reativação da infecção latente em 75% (9/12) animais, detectada pela excreção viral (8/12) e/ou soroconversão (3/12). O DNA viral latente foi detectado no gânglio trigêmeo (TG) e/ou no bulbo olfatório (BO) de todos os animais eutanasiados nos dias 60 pi e 40 pós-dexametasona. Esses resultados demonstram que caprinos são susceptíveis a infecção aguda e latente pelo BoHV-5 e podem excretar vírus durante a reativação da infecção. Portanto, essa espécie pode ser considerada um potencial reservatório do BoHV-5 em áreas onde caprinos e bovinos são criados conjuntamente. O segundo experimento teve como objetivo investigar a importância da via olfatória na invasão do encéfalo de coelhos pelo BoHV-5. Para isto, coelhos recém desmamados foram previamente submetidos à ablação cirúrgica do BO e inoculados pela via IN ou conjuntival (IC) com a cepa SV-507 do BoHV-5. A inoculação IN resultou no desenvolvimento de doença neurológica em 100% dos animais controle (com BO), com início dos sinais clínicos entre os dias 5 e 10 pi. No grupo submetido à ablação do BO apenas um animal (9,1%) apresentou sinais neurológicos (início dia 17 pi). Após a inoculação IC, 10/12 (83,3%) coelhos controle (com BO) desenvolveram doença neurológica com o início dos sinais entre os dias 11 e 20 (média 15,3 dias); 10/12 coelhos (83,3%) sem o BO também desenvolveram a doença neurológica, com os sinais iniciando entre os dias 9 e 15 pi (média 12,5 dias). Esses resultados demonstram que tanto a via olfatória como a via trigeminal podem ser utilizadas pelo BoHV-5 para invadir o SNC de coelhos após infecção experimental. Porém, o transporte pela via olfatória é mais rápido e mais eficiente enquanto que a via trigeminal atua como via de acesso mais lento e menos eficiente. Esses resultados são importantes para um melhor conhecimento sobre a neuropatogênese das infecções pelos alfaherpesvírus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-24Bitstream added on 2014-06-13T19:09:50Z : No. of bitstreams: 1 macedo_lr_me_jabo.pdf: 704711 bytes, checksum: 5b7cb390daed7f40913d5a7cfd9176c2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Avaliaram-se descritivamente, à clínica, à histopatologia e à imunoistoquímica (ki 67- marcador de proliferação celular) os resultados, da cicatrização da córnea, após ceratoplastias lamelares com membrana de celulose microfibrilar em coelhos. Para tal, utilizaram-se 30 coelhos , distribuídos em 5 grupos de 6 animais, avaliados por até 60 dias de pós operatório. A avaliação clínica revelou manifestações moderadas de edema, blefaroespasmos, fotofobia desde o segundo dia, evoluindo para formas discretas ou ausentes a partir do sétimo dia, onde observou-se clinicamente o reparo do defeito da córnea. A histopatologia revelou uma fina camada de células escamosas, recobrindo totalmente a área lesada, aos sete dias, e com leve infiltrado de células polimorfonucleares. Observou-se a presença de vasos no epitélio a partir do 15º dia , com regressão aos 48º dias .A imunoistoquímica mostrou aumento de células em proliferação aos 15 dias no epitélio (p= 0,049) e aos trinta dias no estroma (p= 0,042). Frente aos resultados obtidos, há como admitir que mesmo com o defeito corneal concluído, aos sete dias, o sistema de defesa celular ainda se manteve ativo, pois a proliferação celular no epitélio se mostrou mais intensa aos 15 dias de observação ,conforme demonstrado imunoistoquimicamente. Onde nesse período ocorreu remodelamento e adesão epitelial da córnea, características satisfatórias em ceratoplastia lamelar em coelhos . / Were evaluated the clinic, the histopathology and immunohistochemistry (ki 67 - marker of cell proliferation), the results of the membrane of cellulose in lamellar keratoplasty in rabbits. To this end, 30 rabbits were used, divided into 5 groups of 6 animals, assessed by up to 60 days of post-operative. The assessment showed clinical manifestations of moderate swelling, blefarospasmos, photophobia since the second day, evolving into discrete forms or absent from the seventh day, where there was clinically repair the defect of the cornea. The histopathology revealed a thin layer of squamous cells, completely covering the injured area, the seven days, and with mild infiltration of polymorphonuclear cells. There was the presence of vessels in the epithelium from the 15 th day, with regression of days to 48. Immunohistochemistry showed increased cell proliferation in the 15 days in the epithelium (p = 0049) and the thirty days in the stroma (p = 0042) . Facing the results achieved, as there admit that even with the beginning of healing, and with the defect of the cornea closed to seven days, the system of defence cell remained active, as in the epithelial cell proliferation was more intense at 15 days, as shown imunoistochemistry. Where in that period showed epithelial remodeling and membership, characteristics satisfactory in lamellar keratoplasty in rabbits.