Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Câncer de mama (CM) é hoje o tipo de câncer mais incidente entre as mulheres, com a estimativa de 53 mil novos casos para o ano de 2013, segundo o Instituto Nacional do Câncer (INCA). É considerada uma doença de bom prognóstico, principalmente quando diagnosticada na sua fase mais precoce. A evolução no diagnóstico, e nas técnicas de tratamento para o CM, que incluem a quimioterapia e/ou radioterapia, aumentaram a expectativa de sobrevida para este tipo de câncer. Uma das complicações tardias induzidas pelo tratamento desta doença é a cardiotoxicidade. O termo cardiotoxicidade abrange uma série de efeitos colaterais, que incluem arritmias, alterações na pressão arterial, isquemia do miocárdio, trombose ou insuficiência cardíaca. É, por isso, fundamental entender os mecanismos envolvidos no desenvolvimento da toxicidade cardíaca para o sucesso do tratamento dos pacientes com CM. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos cardíacos tardios induzidos pela irradiação e quimioterapia, simulando um tratamento para o CM, em ratas Wistar. Ratas Wistar, com aproximadamente 3 meses de idade, foram divididas em: grupo controle, grupo que recebeu quimioterapia + irradiação (TC+IR), e grupo que recebeu apenas irradiação (IR). A quimioterapia foi administrada em 4 ciclos, com intervalo de 1 semana entre eles. A irradiação na região do coração foi realizada em dose única, de 20Gy, em um campo de 2x2 cm2. Os ratos foram submetidos à eutanásia 5 meses após o término dos tratamentos, para que os efeitos tardios pudessem ser avaliados. Vários estudos foram conduzidos: ecocardiografia para observar as alterações funcionais do coração; PCR em tempo real para detectar alterações no nível mRNA de procolágeno tipo I, TGF-β1, angiotensinogênio, renina, ECA, AT1, VEGF e razão Bax/;bcl2, no tecido do ventrículo esquerdo (VE); Além de ensaios histológicos para avaliar o aspecto do tecido cardíaco do VE. Resultados e discussão Os resultados obtidos indicam um processo de remodelamento cardíaco após os tratamentos para o CM. Sugere-se que este remodelamento inicie-se com a diminuição de vasos no VE, causada pelos tratamentos, conforme os resultados da estereologia e do PCR para VEGF. Em seguida mostrou-se hipertrofia dos cardiomiócitos, o aumento da expressão de procolágeno e TGF-β1 e de tecido conjuntivo neste tecido. E associado a estes resultados, mostrou-se a participação dos sistema renina angiotensina cardíaco neste processo de remodelamento. Porém, apesar de todas estas alterações terem ocorrido em ambos os grupos tratados, apenas o grupo que recebeu irradiação e quimioterapia concomitantemente apresentou alteração da função cardíaca, na ecocardiografia. Sugere-se, desta forma, que a associação destas terapias seja mais lesiva ao coração, do que a irradiação aplicada exclusivamente. Conclusão Os objetivos do trabalho foram alcançados, e pode-se entender melhor as vias envolvidas na cardiotoxicidade. Este é um estudo inédito, o assunto abordado é recente, e de sumo importância para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento para o CM, onde sejam consideradas as complicações cardíacas tardias envolvidas. / Breast cancer (BC) is today the most frequent type of cancer among women, there were estimated 53 000 new cases for the year 2013, according to the National Cancer Institute (INCA). It is considered a disease of good prognosis, especially when diagnosed in early stages. The developments in the diagnosis, and treatment techniques for the BC, which include chemotherapy and/or radiotherapy, increased the survival rates for this type of cancer. One late complication induced by BC treatment is the cardiotoxicity. The cardiotoxicity term comprises different cardiotoxic side effects, which includes arrhythmia, blood pressure alterations, myocardial ischemia, thrombosis or congestive heart failure. It is, therefore, essential to understand the mechanisms involved in the development of cardiac toxicity for the successful treatment of patients with BC. This study aimed to evaluate the late cardiac effects induced by irradiation and chemotherapy, simulating a treatment for BC in Wistar rats. Wistar rats, about 3 months old, were divided into control group; a group receiving chemotherapy + irradiation (TC+IR), and a group that received only irradiation (IR). Chemotherapy was administered in 4 cycles, with an one week interval between them. The irradiation at the heart area was performed in a single dose of 20 Gy, and a field of 2x2 cm2. The rats were euthanized 5 months after the end of treatments, so the late effects could be evaluated. Several studies were conducted: echocardiography to observe the heart functional changes, real-time PCR to detect alterations in mRNA level of procollagen type I, TGF-β1, angiotensinogen, renin, ACE, AT1, VEGF and Bax/bcl2 ratio, in the left ventricle (LV) tissue; The LV cardiac tissue was also evaluated by assays. The results indicate a process of cardiac remodeling after the BC. It is suggested that this remodeling starts with a reduction of the cardiac vessels, induced by treatments, according the results of stereology, and the PCR for VEGF. Then, it was showed a cardiomyocyte hypertrophy, an increased expression of TGF-β1 and procollagen, and increased connective tissue in the LV. Associated with these results, it was indicated the involvement of the cardiac renin-angiotensin system in the remodeling process. However, even though all these changes have occurred in both treated groups, only the group receiving concurrent radiation and chemotherapy had a decrease in the cardiac function, showed by echocardiography. It is suggested that the combination of these therapies to the heart is more detrimental than the irradiation applied alone. The aims of this work were achieved, and it is possible to better understand the pathways involved in cardiotoxicity. This is a novel study, the subject issue is recent, and of high impact in the development of new treatment strategies for BC where the involved cardiac complications are considered.

Recentemente foi descrito que camundongos com ablação dos receptores \'alfa\' 2A and \'alfa\' 2C adrenérgicos (KO) desenvolvem cardiomiopatia induzida por hiperatividade simpática. No presente trabalho caracterizamos o fenótipo desses camundongos aos três e sete meses de idade avaliando a tolerância ao esforço, a função ventricular e a ultraestrutura cardíaca. Além disso, estudamos o efeito da hiperatividade simpática sobre o sistema renina angiotensina (SRA) cardíaco avaliando a expressão de Ang II cardíaca, a atividade da enzima conversora de angiotensina (ECA), a atividade e expressão da renina e a expressão do angiotensinogênio cardíaco. Aos três meses de idade os camundongos KO apresentaram redução de 16% na fração de encurtamento e aumento do diâmetro dos cardiomiócitos em relação ao grupo controle (CO), caracterizando uma cardiomiopatia em estágio inicial. Concomitantemente, os animais KO apresentaram aumento da Ang II, atividade da ECA e expressão do angiotensinogênio cardíacos; e aumento da atividade da renina plasmática. Aos sete meses de idade, os camundongos KO apresentaram intolerância ao esforço, redução de 34% na fração de encurtamento, dilatação do ventrículo esquerdo, retenção hídrica nos pulmões, aumento do diâmetro dos cardiomiócitos e acúmulo de colágeno cardíaco em relação ao grupo CO, caracterizando uma cardiomiopatia grave com sinais clínicos de IC. Nessa fase, os camundongos KO apresentaram aumento da Ang II e expressão do angiotensinogênio cardíacos; e diminuição da expressão e atividade da renina. Dessa forma, os dados evidenciaram a ativação do SRA cardíaco na progressão da cardiomiopatia induzida por hiperatividade simpática / We have recently reported that disruption of both \'alfa\' 2A and \'alfa\' 2C adrenergic receptor subtypes (KO) in mice leads to sympathetic hyperactivity with evidence of heart failure (HF) by seven months (mo) of age. In the present study, we have performed the phenotypical characterization on KO mice at three and seven month of age. In addition, we evaluated the effect of sympathetic hyperactivity on cardiac renin-angiotensin system (RAS) components. For that, we evaluated cardiac Ang II content, angiotensin converting activity (ACE), plasma renin activity and cardiac angiotensinogen expression. At three mo, KO mice displayed reduced fractional shortening (16%) and increased cardiomyocyte width compared with age-matched wild type (WT). Indeed, KO mice showed significantly increased cardiac Ang II content, cardiac ACE activity, angiotensinogen expression and plasma renin activity. At seven mo, KO mice displayed exercise intolerance, reduced fractional shortening (34%), cardiac dilatation, lung edema, increased cardiomyocyte width and increased cardiac collagen content compared with age-matched WT. In addition, KO mice presented an increased cardiac Ang II content and angiotensinogen expression, concomitantly with a decreased plasma renin activity. Collectively, these results uncover potential feedback regulation of cardiac and circulating components of SNS and RAS, which may contribute to a better understanding of the processes taking place during the progression of cardiomyopathy induced by sympathetic hyperactivit.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A hipertensÃo, uma das doenÃas mais comuns em todo o mundo, Ã uma doenÃa crÃnica onde a pressÃo sanguÃnea elevada pode afetar a saÃde. A enzima conversora de angiotensina I (ECA) pode aumentar a pressÃo arterial atravÃs da conversÃo da angiotensina I no potente vasoconstritor angiotensina II. Sendo assim, a inibiÃÃo da atividade da ECA Ã considerada uma abordagem terapÃutica Ãtil para combater a hipertensÃo. Alpinia zerumbet, uma planta aromÃtica abundante no nordeste do Brasil, Ã comumente utilizada na medicina popular devido suas propiedades diurÃticas e hipotensivas. AlÃm disso, vÃrios estudos relatam atividade antihipertensiva para esta espÃcie. Dessa forma, Alpinia zerumbet pode ser uma importante fonte de inibidores de ECA. Sabendo disso, resolveu-se investigar os extratos dos rizomas desta espÃcie na busca de compostos inibidores de ECA. A prospecÃÃo quÃmica do extrato hexÃnico do rizoma permitiu o isolamento de cinco substÃncias: Um estilbeno denominado (E)-3,5-dimetoxiestilbeno, inÃdito na espÃcie em estudo; um diterpeno de esqueleto labdano denominado (E)-15,16-bis-norlabda-8,11-dieno-13-ona; uma chalcona denominada 2â,4â-dihidroxi-6â-metoxi-3â-(3ââ-metil-6ââ-metil-etil-2ââ-ciclohexenil)chalcona; um esterÃide denominado β-sitosterol, comumente encontrado em plantas; e um hidrocarboneto aromÃtico da classe kavapirona denominado 5,6-dehidrokawain. Na determinaÃÃo estrutural dos compostos isolados, foram empregadas tÃcnicas espectromÃtricas de anÃlise unidimensionais [ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN) de 1H e 13C, e tÃcnicas bidimensionais (1H-1H-COSY, HSQC, HMBC, NOESY). TambÃm foram realizados os testes de inibiÃÃo da enzima conversora de angiotensina, antioxidante, de inibiÃÃo da enzima acetilcolinestarase e larvicida dos extratos hexÃnicos e etanÃlicos dos rizomas de Alpinia zerumbet. Os dois extratos apresentaram potencial de inibiÃÃo da enzima conversora de angiotensina e antioxidante. Somente o extrato hexÃnico apresentou atividade larvicida, com CL50 823,1 ppm. Nenhum dos extratos em estudo apresentou potencial de inibiÃÃo da enzima acetilcolinesterase. / Hypertension is one of the most common diseases in the world, is a chronic disease in which high blood pressure can affect health. The angiotensin I converting enzyme (ACE) can increase blood pressure through the conversion of angiotensin I to the potent vasoconstrictor, angiotensin II. Thus, inhibition of ACE activity is considered a useful therapeutic approach to combat hypertension. Alpinia zerumbet, a herb abundant in northeastern Brazil, is commonly used in folk medicine due to its diuretic and hypotensive properties. Moreover, several studies reported for this species antihypertensive activity. Thus, Alpinia zerumbet can be an important source of ACE inhibitors. Knowing this, we decided to investigate the extracts of the rhizomes of this species in the search for compounds ACE inhibitors. Prospecting chemical hexane extract of the rhizome allowed the isolation of five substances: A stilbene, named (E) -3,5-dimethoxystilbene, unprecedented in the species in this study, a labdane diterpene skeleton called (E) -15.16-bisnorlabda- 8,11-diene-13-one; one chalcone called 2â,4â-dihydroxy-6â-methoxy-3â-(3ââ-methyl-6ââ- methyl - ethyl -2ââ-cyclohexenyl) chalcone; a steroid called β-sitosterol, commonly found in plants, and an aromatic hydrocarbon class kavapirone, called 5,6- dehidrokawain. In the structural determination of individual compounds, spectrometric techniques were employed dimensional analysis [nuclear magnetic resonance (NMR) 1H and 13C and two dimensional techniques (1H-1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY). Inhibition angiotensin converting enzyme, antioxidant potential, inhibition of acetilcolinestarase and larvicidal tests of ethanol and hexane extracts of the rhizomes of Alpinia zerumbet were tested. The two extracts showed potential for inhibition of angiotensin converting enzyme and antioxidant potential. Only the hexane extract showed larvicidal activity with LC50 823.1 ppm. None of the extracts studied showed potential inhibition of the enzyme acetylcholinesterase.

A angiotensina II (AngII) pode ativar as vias de sinalização das proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPKs). Investigamos o papel da obesidade e das MAPKs na resposta à AngII em ratos obesos por injeção de glutamato monossódico (Ob). Artérias mesentéricas de resistência com endotélio intacto e não as artérias sem endotélio, isoladas de Ob, respondem menos à AngII. As respostas à noradrenalina e ao cloreto de potássio estavam inalteradas. Aumento da expressão do receptor AT2 (AT2R), da óxido nítrico sintase (eNOS) e da ERK1/2 podem estar envolvidos na menor resposta pois a inibição do AT2R, da eNOS e da ERK1/2 corrigiram-na. A maior ativação da ERK1/2 nos Ob levou à maior ativação da eNOS e maior geração de NO, diminuindo a resposta à Ang II. Concluímos que na obesidade, a resposta contrátil à Ang II é menor, como possível mecanismo adaptativo frente ao aumento da ativação do sistema renina-angiotensina. Esse mecanismo envolve a participação do endotélio com maior liberação de NO, aumento do número de AT2R, e da fosforilação da eNOS e da ERK1/2. / Angiotensin II (AngII) can activate mitogen-activated protein kinases (MAPKs) pathways. We investigated the role of obesity and MAPKs in AngII response in monosodium glutamate-induced obese rats (Ob). Endothelium-intact but not endothelium-denuded mesenteric resistance arteries isolated from Ob exhibited a lower response to AngII. The response to nordrenaline and potassium chloride were unaltered. Increased expression of AT2 receptor, nitric oxide synthase (eNOS) and ERK1/2 might be involved in the reduced response since inhibition of AT2R, eNOS and ERK1/2 corrected it. Increased activation of ERK 1/2 in Ob might activate eNOS, generating more NO and vasodilation that contributed to reduce the contraction to AngII. We concluded that, in obesity, the lower response to AngII might be an adaptive mechanism against the increased activation of the renin-angiotensin system. This mechanism involves the participation of the endothelium through a greater release of NO, increased AT2R, eNOS and ERK1/2 expressions.

Interação entre angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] e bradicinina (BK) foi determinada no mesentério de ratos Wistar anestesiados utilizando-se microscopia intravital. Aplicação tópica de BK e Ang-(1-7) induziram vasodilatação que foi abolida por HOE-140 e A-779, respectivamente. Ang-(1-7) (100 pmol) potencializou a vasodilatação de BK (1 pmol) mas não a vasodilatação promovida por acetilcolina, nitroprussiato de sódio, histamina e ácido araquidônico. O efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK foi abolido por A-779, HOE-140, indometacina, L-NAME e TEA, entretanto, losartan não bloqueou este efeito. Enalaprilato aumentou a resposta vasodilatadora de BK e Ang-(1-7) e não alterou o efeito potencializador do segundo sobre o primeiro. Conclui-se que: 1)efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK depende da interação de ambos com seus respectivos receptores; 2)é dependente de óxido nítrico, produtos da cicloxigenase e hiperpolarização de membrana via canais de potássio; 3) o mecanismo de potencialização parece não depender da atividade catalítica da ECA. / The interaction between angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] and bradykinin (BK) was determined in the mesentery of anesthetized Wistar rats using intravital microscopy. The response-induced by topical application of BK (1, 10 and 30 pmol), Ang-(1-7) (1, 10, 100 and 1000 pmol) and Ang-(1-7) (100 pmol) + BK (1 pmol) was determined in mesenteric arterioles (15-20 mm diameter). The BK (1 pmol)- and Ang-(1-7) (100 pmol)- induced vasodilation was abolished by BK B2 receptor antagonist HOE-140 (100 pmol applied during 60 seconds) and the Ang-(1-7) antagonist [d-Ala7]-Ang-(1-7)] (A-779) (100 pmol applied during 15 seconds), respectively. Indomethacin (5 mg/kg; IM, 30 min before), a cyclooxygenase inhibitor; L-NAME (10 nmol; topical application, 3 min before), a NO synthase inhibitor, decreased the Ang-(1-7)-induced vasodilation. However, TEA (90 pmol; topical application), a non specific K+ channels blocker, did not alter the response to BK or Ang-(1-7). BK (1 pmol)-induced vasodilation, however, was potentiated by Ang-(1-7) 100 pmol. Sodium nitroprusside (38 pmol), acetylcholine (1,6 nmol), histamine (5,4 nmol) and arachdonic acid (10 nmol) responses were not modified by Ang-(1-7) 100 pmol. The Ang-(1-7)-potentiating effect on BK-induced vasodilation was abolished by A-779, HOE-140, indomethacin, L-NAME and TEA. Losartan (15 mg/kg.IV, 40 min before), an AT1 angiotensin receptor antagonist was without effect. On the other hand, enalaprilat treatment (10 mg/kg; IV, 30 min before), to inhibit angiotensin-converting enzyme (ACE), enhanced the BK and Ang-(1-7)-induced vasodilation but did not modify the effect of Ang-(1-7) on BK vasodilation. In conclusion, the potentiation of BK-induced vasodilation by Ang-(1-7) is a receptor-mediated phenomenon dependent on cyclooxygenase-related products, NO release and K+ channel-mediated membrane hyperpolarization. The potentiating mechanism, apparently, is not related to ACE catalytic activity.

O Sistema Renina-angiotensina (SRA), e um sistema capaz de gerar hormonios peptideos com grande impacto na regulacao cardiovascular e na patogenese das doencas cardiovasculares. Este sistema opera, por meio das acoes da Angiotensina II, tanto em nivel sistemico (endocrino) quanto tecidual (local, paracrino/autocrino) controlando importantes funcoes, varias delas relacionadas a facilitacao da instalacao e progressao do processo inflamatorio. Por este motivo, a producao desta proteina nos tecidos pode estar relacionada a patogenese de muitas doencas, dentre elas a doenca periodontal (DP), tendo em vista seu carater infeccioso-inflamatorio e os achados da literatura que mostram que a inibicao da formacao de Ang II, diminui a perda óssea da DP em animais. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivos: Avaliar in vitro, a) A expressao de componentes do SRA (ANGT, RENINA, ECA, ECA-2, AT1, AT2 e Mas) por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, por RT-qPCR; b) A producao de componentes do SRA (RENINA, ECA, ECA-2) no sobrenadante de culturas de fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, por ELISA; c) A producao dos receptores do SRA (AT1, AT2 e Mas), nestes fibroblastos, por Imunofluorescencia e d) Se a expressao e a producao dos componentes do SRA por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, se alteram com a estimulacao por LPS de P. gingivalis e E. coli. Apos a coleta, os dados foram analisados com o auxilio do programa GraphPad Prism 5.0. por meio da analise de variancia a 2 criterios (ANOVA-two way) seguida do pos teste de Bonferroni, com nivel de significancia de 5% para a verificacao das possíveis diferencas. Foi detectada a expressao genica para alguns dos componentes do SRA (ANGT, RENINA, ECA, AT1) por fibroblastos tanto de gengiva quanto de ligamento periodontal. Foi detectada ainda uma expressao genica diferenciada entre fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal para a ECA, sendo significativamente maior nos fibroblastos da gengiva. Houve imunomarcacao positiva tanto nos fibroblastos de gengiva quanto de ligamento periodontal compativel com a presenca dos receptores AT1 e Mas. Pode-se observar por fim que o contato com LPS de P. gingivalis e E. coli, na concentracao de 10 g/mL/24 h, nao alteram a expressão dos componentes do SRA. Portanto, pode-se concluir que os fibroblastos tanto de gengiva quanto de ligamento periodontal apesar de nao expressarem e produzirem todos oscomponentes do SRA necessarios para a formacao local de Ang II, poderiam contribuir, ainda que parcialmente, com outras celulas do microambiente dos tecidos periodontais para a formacao e acao locais da Ang II, e assim, para a instalacao e progressao da DP. / The Renin-angiotensin system (RAS) can generate hormones that have a high-impact on cardiovascular regulation as well as in the pathogenesis of cardiovascular disease. This system acts through both systemic (endocrine) and local (paracrine/autocrine) effects of Angiotensin II, controlling important functions related to the facilitation of installation and progression of the inflammatory process. For this reason, this proteins production in tissues can be associated to the pathogenesis of many diseases, including periodontal disease (PD). In the PD setting, a infectious-inflammatory characterized disease, the literature findings shows that inhibition of the Ang II formation can decrease the bone loss in animals. In this context, the aims of the present study were: to investigate in vitro: a) the expression of RAS components (ANGT, RENIN, ECA, ECA- 2, AT1, AT2 and Mas) by human gingival and periodontal ligament fibroblasts by RT-qPCR; b) the production of RAS receptors (AT1, AT2 and Mas) by human cultured gingival and periodontal ligament fibroblasts by Immunofluorescence and d) the production of RAS components (RENIN, ECA, ECA-2) if the expression and production of RAS components by gingival and periodontal ligament fibroblasts modify under P. gingivalis and E. coli LPS stimulation. After collected, the data were analysed using GraphPad Prism 5.0, by the two way ANOVA followed by Bonferroni post test with a significance level of 5%. Gene expression was detected for some of the RAS components (ANGT, RENIN, ECA, AT1) by both gingival and periodontal ligament fibroblasts. It was detected a differential gene expression between gingival and periodontal ligament fibroblasts for ECA, being significantly higher in gingival fibroblasts. There was a stain in Immunofluorescence compatible with the production of RAS receptors (AT1 and Mas). It must be noted that the stimulation with P. gingivalis and E. coli LPS, in a concentration of 10 g/mL/24 h, did not altered the expression of RAS components. In conclusion, despite of neither gingival or periodontal ligament fibroblasts express all components of RAS, needed to local formation of Ang II, they might also contribute to the local formation and action of Ang II and in consequence, to the installation and the progression of DP.

Orientadores: José Antonio Rocha Gontijo, Konradin Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:14:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borges_RafaeldeCamargoPenteado_D.pdf: 2255338 bytes, checksum: 0a8e55e3d0ad46a2d03da9d085f9fc64 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A hipertensão arterial (HA) é um dos principais fatores de risco para a elevada morbidade e mortalidade cardiovascular. O exercício físico aeróbico promove alterações fisiológicas e morfológicas importantes para o controle da HA mediados pelo sistema renina angiotensina (SRA), porém muitos destes mecanismos continuam obscuros. Foram utilizados 80 animais, SHR (n=40) e WKy (n=40), controle (c) (n=20) e exercício (e) (n=20), com acesso livre a ração padrão e água, em um ciclo dia/noite 12h cada. Os animais SHRe e WKye realizaram treinamento de natação com sobrecarga durante 8 semanas consecutivas. Ao término do período experimental, foram aferidas a freqüência cardíaca (FC), pressão arterial sistólica (PAS) e manipulação tubular de sódio. Após o período experimental os animais (n=12 por grupo) foram perfundidos para análise morfológica da aorta (Ao), artéria mesentérica (AMes) e massa cardíaca (MCard), e para análise de western blotting (WB) (n=8 por grupo) para Ao, ventrículo esquerdo (VE) e rim. Os animais WKye e SHRe responderam com uma redução significativa (p<0,05) da FC, sendo que, o SHRe reduziu (p<0,05) a PAS quando comparado ao SHRc. A fração de excreção de sódio e fração de excreção pós proximal de sódio apresentaram-se aumentadas (p<0,05) para SHRe e reduzidas (p<0,05) para WKye. As análises morfológicas indicaram que os animais Wkye aumentaram (p<0,05) o número de camadas da Ao e MCard, e reduziram (p<0,05) a distância média entre camadas da AMes; enquanto os SHRe aumentaram a MCard (p<0,05), porém reduziram (p<0,05) o número de camadas da Ao e a espessura total da AMes. As análises de WB demonstraram que os WKye tiveram um aumento (p<0,05) da razão AT1R/AT2R no VE e Ao, e redução (p<0,05) no rim, enquanto os SHRe tiveram um aumento (p<0,05) da razão AT1R/AT2R somente no VE, e redução (p<0,05) na Ao e rim. As alterações morfológicas da Ao no Wkye foram promovidas pelo aumento (p<0,05) das vias ERK1, ERK2 e AKT, no VE pela ERK2, e no rim mediado pela via JAK2/STAT3. Já nos animais SHRe as alterações na Ao foram mediadas pela redução (p<0,05) da via ERK1 e ERK2, no VE pelo aumento (p<0,05) da via ERK2 e no rim pelo aumento (p<0,05) das vias ERK1, ERK2 e STAT3. Este estudo evidenciou que o exercício promoveu mecanismos distintos para manipulação tubular de sódio, adaptações morfológicas da Ao, AMes e MCard mediados pela razão AT1R/AT2R e hemodinâmicas em normotensos e hipertensos, este com redução de PAS, através do SRA atuante de forma sistêmica e localizada através de sinalização intracelular mediada por AKT, ERK1 e ERK2, JAK2 e STAT3 / Abstract: Systemic hypertension is one of the main risk factors for the high morbidity and mortality. Aerobic exercise promotes important morphological and physiological changes for the hypertension control mediated by renin angiotensin system (RAS), however many of these mechanisms are still obscure. 80 animals were used, SHR (n = 40) and WKy (n = 40), (c) (n = 20) and (e) (n = 20), with free access to standard rat chow and tap water in a day/night cycle 12 each. Animals SHRe and WKye practiced swimming with overload for 8 consecutive weeks. At the end of the experimental period, was measured the heart rate (HR), systolic blood pressure (SBP) and tubular sodium handling. After the experimental period animals (n = 12 per group) have been perfused for segmentation of the aorta (Ao), mesenteric artery (MesA) and cardiac mass (CardM), and for analysis of western blotting (WB) (n = 8 per group) to the Ao, left ventricle, (LV) and kidney. Animals WKye and SHRe replied with a significant reduction (p<0,05) to HR, were, SHRe reduced (p<0,05) the SBP when compare with SHRc. The fraction of sodium excretion and fraction of post proximal sodium excretion showed a increase (p<0,05) for SHRe and reduction (p<0,05) for WKye. The morphological analysis indicated that Wkye animals increased (p<0,05) the Ao layers number and CardM, and reduced (p<0,05) the distance between layers of MesA; while the SHRe increased the CardM (p<0,05), but reduced (p<0,05) the layers number of Ao and the total thickness of MesA. The WB analysis, showed that Wkye answered with the increase (p<0,05) in AT1/AT2 ratio in LV and Ao, and a decrease (p<0,05) in kidney, during SHRe answer only with an increase (p<0,05) of AT1/AT2 ratio in LV, and reduction (p<0,05) in Ao and kidney. The morphologic alterations of Ao in WKye was promoted by increase (p<0,05) of ERK1, ERK2 and AKT stream, in the LV by ERK2, and in the kidney the increase (p<0,05) by ERK1, ERK2 and STAT3. This study showed that the exercise promoted different mechanisms for tubular sodium handling, morphological adaptations to MesA and CardM mediated by AT1R/AT2R ratio and hemodynamic in normotensive and hypertensive rats, which answer with SBP reduction by RAS acts of systemic form and located by intracellular signaling mediated AKT, ERK1 and ERK2, JAK2 and STAT3 / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientadores: Patricia Aline Boer, Jose Antonio Rocha Gontijo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T02:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mesquita_FlaviaFernandes_D.pdf: 7289105 bytes, checksum: 59a407e77182fcf42a71858f95503a9b (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O desenvolvimento renal é finamente orquestrado por diversos fatores e pequenas modificações neste mecanismo podem resultar no fenótipo de menor número de glomérulos, até agenesia renal. A programação fetal por restrição proteica gestacional está relacionada com a hipertensão arterial manifestada no indivíduo adulto submetido à dieta hipoproteica durante a fase uterina. Estudos descrevem que a "hipertensão programada" pode estar relacionada ao menor número de nefro (30%) encontrado nestes indivíduos. Dados obtidos em animais também confirmam a relação entre dieta materna e número de nefro em animais adultos. Esta tese tem por objetivo determinar desde qual ponto do desenvolvimento a organogênese renal pode ser influenciada pela restrição proteica gestacional, bem como determinar quais adaptações renais, morfológicas e funcionais, o animal sofre em sua vida adulta, relacionadas ao perfil hipertensivo. Ratos Wistar fêmea foram submetidas a dieta hipoproteica durante a gestação, e a prole de machos foi estudada nos experimentos seguintes: A cultura de metanefro mostrou que na idade gestacional de 14.25 dias, o metanefro do embrião desnutrido proteicamente já está "programado" a se ramificar menos do que o controle, gerando menor número de pontos de formação de nefros. A quantificação de glomérulos em embriões de 17.5 dias foi compatível com o resultado do estudo "in vitro". Estudo utilizando PCR em tempo real para avaliar o sistema renina-angiotensina durante a nefrogênese revelou que este sistema não está alterado enquanto intra-utero, no entanto, a expressão de mRNA de renina, angiotensinogênio e receptores de angiotensina II após o nascimento é excessiva quando comparado ao animal controle. Experimentos em animais adultos que sofreram restrição proteica intra-utero revelaram que os receptores de angiotensina II estão regulados negativamente nos rins, comparados aos animais controle. Os animais "programados" nasceram com baixo peso e também apresentaram pressão arterial elevada a partir da 12a semana de vida. A análise da função renal mostrou que a filtração glomerular não está alterada, mesmo com menor número de nefros apresentado neste modelo, sugerindo uma hiperfiltração decorrente da hipertrofia glomerular e podocitária, confirmadas por microscopia eletrônica. Além disso, a fração de excreção de sódio proximal é menor nos animais desnutridos, podendo ser dependente da ação da angiotensina II no transportador Na/K ATPase na membrana basal do túbulo proximal cuja expressão é elevada. O presente estudo demonstrou que a restrição proteica gestacional durante as primeiras semanas de gestação é suficiente para determinar a redução na nefrogênese, levando os rins a adaptações envolvidas no estabelecimento e/ou manutenção da hipertensão arterial / Abstract: The kidney development is a complex mechanism orchestrated by different factors and any alterations at this stage can change the phenotype from a low nephron number to renal agenesis. The maternal protein restriction is related with adult hypertension after low protein diet in utero. Many studies have been demonstrated that "programmed hypertension" can be linked with the low nephron number found in these adults. Animal studies have been found equal relation between maternal diet and nephron number at adult age. Our objective is to determine from each point of development the renal organogenesis can suffer gestational protein restriction influence. Also we look for understand which morphological and functional renal adaptations rats present on adult age, and if these alteration are linked with hypertension. The metanephroi culture shows that at gestational age 14.25, the metanephros from undernourished embryo is already programmed to branch less than control animal, leading to low number of nephron formation sites. The stererological study showed the same result that the "in vitro" study, showing less glomeruli at 17.5 gestational days. RT-PCR for renin-angiotensin system shows that this system is not altered in kidneys from programmed group during intra-uterine life, however renin, angiotensinogen and angiotensin II receptors mRNA expression are up-regulated after birth when compared with control animals. Adult animals from low protein diet in utero showed that angiotensin II receptors are down-regulated in kidneys, when compared with animals that received normal food in utero. These animals also have an up-regulated expression of angiotensin II receptors in adrenals. The "programmed" animals had low birth weight and high arterial pressure from 12th week-age. The renal function study showed that glomerular filtration is not altered, even with low nephron number, what suggests a hyperfiltration, that may be linked with glomerular and podocitary hypertrophy. Indeed, proximal sodium excretion fraction is lower in low birth weight animals, suggesting an angiotensin II action at the basal membrane Na/K ATPase. By western blot, we found that Na/K ATPase protein is up-regulated on kidneys from low protein diet animals. This study demonstrated that early gestational protein restriction is enough to determine the impaired nephrogenesis, leading to renal adaptations to support the establishment of arterial hypertension / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Os Hormônios Tiroideanos (HT) representam um fenótipo de cardioproteção e influenciam no estado trófico do tecido cardíaco através de diversos mecanismos, dentre eles a modulação dos componentes do Sistema Renina Angiotensina- a Angiotensina II e seus receptores (AT1 e AT2). Este estudo teve como objetivos avaliar o papel do receptor AT2 na cardioproteção induzida pelo HT e a participação da proteína quinase ativada por AMP (AMPK) nesse processo. O modelo de isquemia e reperfusão (I/R) foi desenvolvido em corações de ratos submetidos ao hipertiroidismo experimental na presença ou ausêcia do antagonista do receptor AT2 (PD123319), utilizando-se o aparto de Langendorff. Os resultados mostraram que o HT exerce efeito cardioprotetor com aumento na expressão protéica do receptor AT2 e da AMPK fosforilada, que foi prevenido com a administração do PD, seguido de piora da função cardíaca. Estes dados sugerem que parte da cardioproteção induzida pelo HT é mediada pelo receptor AT2, e que a AMPK também está envolvida proteção do miocárdio após injúria por I/R. / Thyroid Hormones (TH) is a phenotype of cardioprotection and may influence the trophic state of cardiac tissue through several mechanisms, including the modulation of the components of renin-angiotensin system - angiotensin II and its receptors (AT1 and AT2). The present study aimed to evaluate the role of AT2 receptor in cardioprotection mediated by the TH and the involvement of AMP-activated protein kinase (AMPK) in this context. A model of Ischemia and Reperfusion (I/R) was performed in isolated hearts of rats subjected to experimental hyperthyroidism, in the presence or absence of the AT2 receptor antagonist (PD123319), using the Langendorff system. The results showed that TH exerts cardioprotective effect with increased levels of AT2 and phosphorylated AMP protein expression, which was prevented by the administration of PD, with a loss in cardiac function. These data suggest that part of the TH-induced cardioprotection is mediated by the AT2 receptor with the involvement of AMPK in protection of the myocardium after I/R injury.

A disfunção cardiovascular induzida pelo consumo crônico de etanol esta associada à formação de espécies reativas de oxigênio (ERO). A angiotensina II, via receptores AT1, é um importante formador de ERO no sistema cardiovascular. O objetivo foi avaliar a participação dos receptores AT1 nas disfunções cardiovasculares induzidas pelo consumo crônico de etanol. Ratos Wistar foram divididos em quatro grupos: Controle: recebeu água \"ad libitum\"; Etanol: recebeu solução de etanol 20% (vol./vol.); Controle+Losartan: recebeu água \"ad libitum\" e losartan (10 mg/kg) diariamente por gavagem; Etanol+Losartan: recebeu solução de etanol 20% e losartan. Foram realizadas aferições semanais da pressão arterial e freqüência cardíaca dos animais. Foram realizadas as dosagens para determinar: o nível de etanol no sangue; os níveis plasmáticos e teciduais (aorta e leito arterial mesentérico) de angiotensina I (ANG I) e ANG II; a atividade plasmática da renina; atividade plasmática e tecidual da enzima conversora de angiotensina (ECA); níveis plasmáticos de aldosterona; níveis plasmáticos do peptídeo natriurético atrial (ANP), vasopressina (AVP) e ocitocina (OT); a osmolaridade e o sódio plasmático; nitrato plasmático e tecidual; espécies reativas ao ácido tiobarbitútico (TBARS); a formação tecidual de ânion superóxido; a capacidade antioxidante total; além de verificar a expressão gênica e protéica (aorta) da via das MAPKs, via do óxido nítrico (NO), das ciclooxigenases (COX), além dos componentes do sistema renina angiontensina (SRA). A artéria aorta torácica foi isolada e foram obtidas curvas concentração-resposta para fenilefrina, acetilcolina (Ach) e nitroprussiato de sódio (NPS). O tratamento crônico de etanol aumentou a pressão arterial sistólica, diastólica e média dos animais, sem afetar a freqüência cardíaca; induziu o aumento da atividade plasmática da renina, aumento da atividade da ECA e dos níveis plasmáticos de ANG I e ANG II, sendo que tais efeitos não foram prevenidos pela administração de losartan. Não houve alteração dos níveis teciduais de ANG I e ANG II. O tratamento com etanol não alterou a osmolaridade ou os níveis plasmáticos de sódio e de aldosterona. Nos animais tratados cronicamente com etanol houve redução plasmática de AVP, OT e aumento de ANP. O losartan não preveniu estes efeitos induzidos pelo etanol. O etanol promoveu aumento dos níveis plasmáticos de TBARS, os níveis teciduais de ânion superóxido, e o tratamento com losartan preveniu tais respostas. O tratamento com etanol não alterou os níveis plasmáticos de peróxido de hidrogênio e da atividade plasmática da SOD. Houve redução dos níveis plasmáticos e teciduais do NO, alteração da capacidade antioxidante plasmática total e o tratamento com losartan preveniu esses efeitos. O consumo etanol potencializou a resposta vasoconstritora induzida pela fenilefrina em anéis de aorta com e sem endotélio. O losartan preveniu tal resposta contrátil. No entanto, o tratamento com etanol não alterou a resposta de relaxamento induzida pela Ach e pelo NPS em anéis de aorta. O etanol foi capaz de alterar a expressão gênica e protéica da via das MAPKs, via do NO-AKT, das COX, e os componentes do SRA. Portanto, conclui-se que o consumo crônico de etanol ativa o SRA sistêmico, induz estresse oxidativo sistêmico e vascular, altera a reatividade vascular, reduz os níveis plasmáticos de NO, altera a expressão gênica e protéica da via das MAPKs, do NO, das COX e os componentes do SRA, e promove alterações neuro-humorais que, em conjunto, contribuem para a elevação da pressão arterial sistêmica e alterações cardiovasculares pela ação da ANG II via receptor AT1. / The cardiovascular dysfunction induced by chronic ethanol consumption is associated with the formation of reactive oxygen species (ROS). Angiotensin II via AT1 receptors is a major maker of ROS in the cardiovascular system. To evaluate the role of AT1 receptors in the cardiovascular dysfunction induced by chronic ethanol consumption. Male Wistar rats were divided into four groups: Control: received water \"ad libitum\"; Ethanol: received ethanol solution 20% (vol./vol.); Control+Losartan: received water \"ad libitum\" and losartan (10 mg/kg) daily by gavage; Losartan+Ethanol: received 20% ethanol solution and losartan. The measurements were performed to determine: the level of ethanol in blood, plasma and tissue levels (aorta and mesenteric arterial bed) of angiotensin I (ANG I) to ANG II, plasma renin activity, plasma and tissue activity of angiotensin converting enzyme (ACE), plasma aldosterone levels, plasma levels of atrial natriuretic peptide (ANP), vasopressin (AVP) and oxytocin (OT); osmolality and sodium, plasma and tissue nitrate (NO); tiobarbitútico reactive to acid species (TBARS); tissue formation superoxide anion, total antioxidant capacity, besides verifying the gene and protein expression of MAPK pathway, the nitric oxide (NO), the cyclooxygenase (COX), in addition to the components of the renin angiotensin (RAS). The thoracic aorta was isolated and concentration-response curves for phenylephrine, acetylcholine and sodium nitroprusside were obtained. Chronic ethanol treatment increased systolic blood pressure, diastolic and mean animals, without affecting heart rate; induced increase in plasma renin activity, increased plasma and tissue levels of ACE and plasma levels of ANG I and ANG II, and these effects were prevented by administration of losartan. There were no changes in tissue levels of ANG I and ANG II. The treatment with ethanol did not alter osmolarity and plasma levels of sodium and aldosterone. In animals chronically treated with ethanol was reduced plasma AVP, OT and ANP increase. Losartan did not prevent these effects induced by ethanol. Ethanol promoted increased plasma levels of TBARS, tissue levels of superoxide anion, and treatment with losartan prevented these responses. The ethanol treatment did not alter plasma levels of hydrogen peroxide and plasma activity of SOD. There was a reduction in plasma and tissue levels of NO, alteration in total plasma antioxidant capacity and treatment with losartan prevented these effects. The consumption ethanol potentiated the pressor response induced by phenylephrine in aortic rings with and without endothelium. The losartan prevented this contractile response. However, treatment with ethanol did not alter the response of relaxation induced by Ach and SNP in aortic rings. The ethanol was able to alter the gene and protein expression via the MAPK, via the NOAKT, the COX, and the components of the RAS. Therefore, it is concluded that chronic consumption of ethanol activates the systemic RAS, induces systemic oxidative stress and vascular change vascular reactivity, reduces plasma levels of NO, alters gene and protein expression via the MAPK, NO, the COX and RAS components, and promotes neurohumoral changes that, together, contribute to the elevation of blood pressure and cardiovascular changes by the action of ANG II via AT1 receptor.