INTRODUÇÃO: Não são conhecidos os mecanismos que determinam o comportamento da pressão arterial durante o sono. OBJETIVO: Investigar o papel do sistema nervoso simpático, do sistema renina-angiotensinaaldosterona e da excreção de sódio urinário no descenso da pressão arterial durante o sono. MÉTODOS: Hipertensos e normotensos foram submetidos a duas monitorizações ambulatoriais de pressão arterial (MAPA)/24h com SpaceLabs 90207, medidas de 15/15 minutos durante a vigília e de 20/20 minutos no período de sono. Na ocasião da MAPA 1 foram submetidos às dosagens laboratoriais de atividade de renina (ARP), aldosterona e catecolaminas plasmáticas e excreção em diurese de 24h de sódio (Na+u), potássio (K+u) e creatinina. Após o período médio de 50 ± 20 (média ± DP) dias a MAPA e as dosagens foram repetidas. RESULTADOS: Foram incluídos 35 hipertensos e 24 normotensos, com idade 56 ± 12 anos, 45 mulheres e 42 com cor da pele branca. Não houve diferença nos parâmetros laboratoriais na ocasião da MAPA 1 e da MAPA 2 nos normotensos e hipertensos. Mantiveram o mesmo comportamento de descenso da pressão sistólica e diastólica durante o sono nas duas MAPAs (>= 10% ou < 10%) 29 (49%) indivíduos, denominado grupo manteve (hipertensos n = 18). Mudaram o comportamento do descenso durante o sono da pressão sistólica ou diastólica (de >= 10% para < 10% ou de < 10% para >= 10%) 30 (51%) indivíduos, denominado grupo mudou (hipertensos n = 17). O grupo \"mudou\" apresentou menor Na+u na ocasião da MAPA 2 (145 ± 65 mEq/24 h vs 120 ± 46 mEq/24 h, p = 0,04). Houve correlação positiva entre: a) a diferença do descenso da pressão sistólica e a diferença dos resultados das dosagens de Na+u (r = 0,41; p = 0,01) realizadas nas MAPAs 1 e 2 em todos os indivíduos dos grupos \"manteve\" e \"mudou\"; b) a diferença do descenso da pressão sistólica e a diferença de Na+u/creatinina urinária (r = 0,67; p = 0,03) e de L dopa plasmática (r = 0,75; p = 0,003) realizadas nas MAPAs 1 e 2 no grupo \"manteve\" (>= 10%); e c) a diferença do descenso da pressão sistólica e a diferença do resultado das dosagens de ARP/Na+u realizadas nas MAPAs 1 e 2 (r = 0,81; p = 0,03) no grupo \"manteve\" (< 10%). CONCLUSÃO: Em hipertensos e normotensos, sem intervenção medicamentosa ou dietética, a diferença do descenso da pressão sistólica durante o sono entre duas MAPAs apresenta correlação positiva com a diferença da excreção de sódio urinário / INTRODUCTION: The mechanisms which determine the pattern of blood pressure during sleep are unknown. OBJECTIVE: To investigate the role of the sympathetic nervous system, renin-angiotensin-aldosterone system and urinary sodium excretion in the nocturnal blood pressure fall. METHODS: Hypertensive and normotensive subjects were submitted to two ambulatorial blood pressure monitorings (ABPM)/24h with a SpaceLabs 90207 equipment programmed to obtain measurements 15/15 minutes while awake and 20/20 minutes during sleep. Upon the ABPM 1, they were submitted to laboratory measurements of plasma renin activity (PRA), plasma aldosterone and catecholamines, as well as of the excretion of sodium (UNa+), potassium (UK+) and creatinine in 24-h-diuresis. After a mean period of 50 ± 20 days, the ABPM and the laboratory measurements were repeated. RESULTS: Included in the study were 35 hypertensive and 24 normotensive subjects, aged 56 ± 12 years, of which 45 were females and 42 Caucasian. There was no difference in the laboratory parameters measured upon ABPM 1 or 2, in either normotensive or hypertensive subjects. The same pattern of nocturnal systolic and diastolic pressure fall was maintained in both ABPMs (>=10% or <10%) by 29 (49%) subjects, named the \"maintained\" group (hypertensive n = 18). The nocturnal systolic or diastolic pressure fall changed (from >=10% to <10% or from <10% to >=10%) in 30 (51%) subjects, named the \"changed\" group (hypertensive n = 17). The \"changed\" group showed a smaller UNa+ upon the ABPM 2 (145 ± 65 mEq/24 h vs 120 ± 46 mEq/24 h; p = 0.04). There was a positive correlation between the difference in the nocturnal systolic pressure fall and the difference in the results of the UNa+ (r = 0,41; p = 0,01) measurements performed upon ABPM 1 and 2 in the normotensive or hypertensive subjects of the \"maintained\" and \"changed\" groups; b) the difference in the nocturnal systolic pressure fall and the difference in the measurements of UNa+/creatinine excretion (r = 0.67; p = 0.025) and plasma L dopa (r = 0.75; p = 0.003) carried out upon ABPM 1 and 2 in the \"maintained\" group (>=10%); and c) the difference in the nocturnal systolic pressure fall and the difference in the results of the PRA/UNa+ measurements performed upon ABPM 1 and 2 (r = 0.81; p = 0.03) in the \"maintained\" group (<10%). CONCLUSION: In hypertensive and normotensive individuals, without any pharmacological or dietary intervention, the difference in the nocturnal systolic pressure fall between the two ABPMs shows a positive correlation with the difference in urinary sodium excretion

Descrevemos recentemente um novo modelo de DRC, baseado nos efeitos adversos da administração de L na lactação (LLact). Os objetivos do presente estudo foram; caracterizar os mecanismos patológicos envolvidos com a nefropatia do LLact e investigar se o extraordinário efeito renoprotetor obtido com a associação L+H no modelo NX seria reproduzido no modelo LLact. Utilizamos 20 ratas Munich-Wistar lactantes, com 6 filhotes cada. As matrizes receberam L, 250mg/Kg/d durante a amamentação e a droga atingiu a prole via leite materno. Os filhotes machos foram acompanhados até os 7 meses de vida, quando se verificou; pressão caudal, albuminúria, creatinina sérica, glomerulosclerose, expansão intersticial, proliferação celular, presença de miofibroblastos intersticiais e rarefação capilar. Os animais LLact restantes foram divididos em 3 novos grupos: LLact+V, mantido sem tratamento, LLact+L, LLact+H, e LLact+LH. Os parâmetros foram reavaliados após 3 meses nesses grupos e também em animais controle (C). Os ratos, LLact apresentaram hipertensão, albuminuria, glomerulosclerose (GS) e lesão intersticial com inflamação e fibrose aos 10 meses de vida. O tratamento com L+H na vida adulta limitou a hipertensão, albuminúria, GS, proliferação intersticial e infiltração de miofibroblastos. Porém, a renoproteção obtida pela associação foi moderada em relação aos resultados previamente obtidos com o modelo NX, especialmente no tocante ao comprometimento tubulointersticial / We recently standardized a severe CKD model based on impaired nephrogenesis by suppression of angiotensin II (Ang II) activity during lactation (LLact). In the present study we sought to gain further insight into the mechanisms associated with the LLact model and to verify if the renoprotection obtained with the association of the Ang II receptor blocker, Losartan (L), and Hydrochlorothiazide (H), which arrested renal injury in the remnant kidney model, could be also obtained in the LLact model. Twenty Munich-Wistar dams, each nursing 6 pups, received L, 250 mg/kg/d, until weaning. The male LLact offspring remained untreated until 7 months of age, when renal functional and structural parameters were studied in 17 of them, used as pretreatment control (LLactPre), followed no further. The remaining rats were divided in groups: LLact+V, untreated, LLact+L, given L, 50 mg/kg/day, now as a therapy, LLact+H, given H, 6mg/kg/day and LLact+LH, given L and H. All the parameters were reassessed 3 months later in these groups and in agematched controls (C). At this time, LLact rats exhibited hypertension, albuminuria, glomerulosclerosis (GS), interstitial expansion and inflammation, enhanced cell proliferation, myofibroblast infiltration, and creatinine retention. LH therapy normalized blood pressure, albuminuria, GS, and limited interstitial cell proliferation and -smooth muscle actin (-SMA) accumulation. However, LH renoprotection achieved with the LLact model was only mild if compared previous studies with the 5/6 renal ablation model

Uma das causas da hipertensão está relacionada a alterações de núcleos autonômicos responsáveis pelo controle dos reflexos cardiovasculares, destacando-se o PVN, o NTS e o RVLM. A ANG II, atuando nestes núcleos, participa do controle da PA. Estudos in vitro, demonstraram uma via de sinalização da ANG II que envolve a ativação da PI3K e da Akt. Neste estudo avaliamos as diferenças na atividade da PI3K, através da quantificação da subunidade p85 (PI3K) e da p-Akt por meio de immunoblotting desses núcleos centrais de animais SHR, WKY e Wistar, além da interação da PI3K com os efeitos cardiovasculares da ANG II injetada no PVN de Wistar acordados. A expressão da p85 não diferiu entre os núcleos estudados. No entanto, a p-Akt estava 1,5x mais expressa no PVN de SHR. Ainda, o aumento da PAM promovido pela injeção de ANG II no PVN foi reduzido 5 min após a injeção do inibidor da PI3K, com recuperação da resposta 30 min mais tarde, sugerindo que a via da PI3K está mais ativa no PVN de animais SHR e que a interação das vias ANG II-PI3K está relacionada com a hipertensão. / One cause of the hypertension is associated to changes in autonomic nuclei that control the cardiovascular reflexes. Among these nuclei are PVN, NST and RVLM. The ANG II, acting in these nuclei, contributes to the control of the AP. In vitro studies had demonstrated a signaling pathway of the ANG II that involves the activation of PI3K and Akt. In the present study we evaluated the PI3K activity via expression of p85 (PI3K) and p-Akt, through the immunoblotting of these central nuclei of SHR, WKY and Wistar. Moreover, we evaluated the interaction of PI3K to the cardiovascular effects of ANG II injected into the PVN of awake Wistar. The p85 expression was not different at all autonomic nuclei studied. However, the p-Akt expression was 1.5x higher in the PVN of SHR. Besides, the increase in the MAP elicited by the injection of ANG II into the PVN was reduced 5 min after the blockade of the PI3K, and restored 30 min later, suggesting that PI3K pathway is more activate at the PVN level of SHR and that the interaction between ANG II-PI3K is related to hypertension.

Orientadores: José Antônio Rocha Gontijo, Patrícia Aline Boer / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T01:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Scabora_JoseEduardo_D.pdf: 7481608 bytes, checksum: 23065b09d5b3f87bff805b9571585e88 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O presente estudo investigou as alterações pós-natais dos receptores de angiotensina II (AngII) do tronco encefálico resultantes da restrição proteica materna (LP) e seu impacto na programação da hipertensão na idade adulta. Os resultados demonstraram que a massa corpórea da prole ao nascer de machos LP foi reduzida significativamente quando comparado ao grupo controle (NP) ou com a prole LP suplementada com taurina (LPT). Esta redução foi revertida rapidamente nos primeiros 12 dias de vida. A redução da massa corpórea foi acompanhada por uma expressiva redução no número de neurônios do tronco cerebral de ratos, recém-nascidos LP, comparados aos controles adequados e LPT pareados por idade. A análise imunoistoquímica para receptores da AngII também demonstrou que em LP de 16 semanas de vida ocorre diminuição significativa na expressão dos receptores de angiotensina tipo 1 (AT1R) no núcleo do trato solitário (NTS) sendo mais intensa na parte medial do mesmo, comparativamente a NP e LPT. Contrariamente, a expressão dos receptores tipo 2 (AT2R) em LP com 16 semanas de vida não foi diferente na região medial embora estivesse reduzida nas regiões rostral e caudal do NTS. O presente trabalho mostrou redução precoce na excreção urinária de sódio na prole LP, a qual foi abolida pela suplementação de taurina. A redução na fração de excreção de sódio foi acompanhada por um aumento na reabsorção proximal de sódio que ocorreu a despeito de uma inalterada filtração glomerular estimada pela depuração renal de creatinina. No presente estudo é plausível supor uma associação entre o decréscimo no desenvolvimento fetal do NTS, uma menor expressão central de AT1R associada a menor razão AT1R/AT2R e, um decréscimo na excreção urinaria hidrossalina. Estas alterações poderiam estar relacionadas à elevação dos níveis pressóricos em LP (progênie deficiente em taurina) comparativamente a prole NP e LPT da mesma idade / Abstract: The current study pays attention to changes of the postnatal brainstem angiotensin receptors by maternal protein restriction (LP), and its impact on in uteri programming of hypertension in adult life. The data shows that LP male pup body weight was significantly reduced when compared to that of control (NP) or LP taurine-supplemented (LPT) pups. That fall in in-born LP body weight was rapidly reverted in 12-wk-old LP offspring. The reduced body weight was associated with striking decreases in the neurons number in inborn brainstem LP offspring, when compared to age-matched LP and LPT. Also, the immunohistochemistry analysis demonstrated a significantly decreased expression of type 1 AngII receptors (AT1R) in the entire medial solitary tract nuclei (NTS) of LP rats at 16-week of age compared to age-matched NP and LPT offspring. Conversely, the immunostained type 2 AngII (AT2R) receptors in 16- wk-old LP medial NTS were unchanged, although, they were expressively decreased in rostral and caudal NTS subnuclei. The present investigation shows an early decrease in fractional urinary sodium excretion in maternal proteinrestricted offspring reverted by diet taurine supplementation. The decreased fractional sodium excretion was accompanied by a fall in proximal sodium excretion and occurred despite unchanged creatinine clearance. In the present study it is plausible to hypothesized an association of decreasing of NTS neuronal development, AT1R/AT2R ratio, and water-electrolyte renal excretion with the higher blood pressure levels found in LP (a taurine-deficient progeny), compared with age-matched NP and LPT offspring / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutor em Ciências

The aim of the present study was to evaluate the action of angiotensin II (Ang II), insulin-like growth factor-I (IGF-I) and insulin (Ins) on bovine oocyte nuclear and cytoplasmic maturation with follicular cells. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 22 h with follicular cells and Ang II, IGF-I or Ins. In this experiment, two control groups were used, where the oocytes were cultured with (control with cells) or without (control without cells) follicular cells. Two experiments were performed with these five groups, in the presence or absence of LH and FSH. Only the oocytes cultured in the Ang II group (88.2±1.8 and 90.7±4.3%), respectively without and with LH/FSH) had resumption of meiosis in similar rates than those cultured in the absence of follicular cells (89.7±0.3 and 92.6±2.6; P<0.01). In a second experiment, the action of Ang II and its association with IGF-I or insulin on oocyte meiotic maturation was observed for 7 (germinal vesicle breakdown - GVBD), 12 (metaphase I - MI) and 22 (metaphase II - MII) hours, in a similar experimental design of the previous experiment. The Ang II, Ang II + IGF-I and Ang II + Ins, independent of gonadotrophins, were able to overturns the inhibition of meiotic maturation caused by follicular cells, in the same rates of control group without cells, in the three evaluated period (P<0.01). One last study was performed to investigate the effect of follicular cells, Ang II, IGF-I, Ins and its associations during oocyte maturation on the rate of subsequent embryo development. The oocytes were submitted to maturation similarly to the second experiment for 1 h (1+23 h), 12 h (12+12 h) or 24 h in the presence of follicular cells and its respective treatments + the period to complete 24 h in maturation media. In 1 + 23 h, the cleavage, blastocyst and hatching rates were not different among these five groups. In 12 + 12 h, the oocytes matured in the Ang II + IGF-I group developed into blastocyst (43.8±0.6) and hatching/total oocytes (17.1±1.2) in a higher rates than the others treatments (P<0.05). In 24 h, the association of Ang II + IGF-I improved blastocyst rate in comparison to the others treatments with follicular cells (P<0.05). Also, only in this group hatched blastocysts were obtained after 24 h in the presence of follicular cells. In conclusion, Ang II overturned the inhibitory effect on bovine oocyte nuclear maturation caused by follicular cells, independent of the presence of gonadotrophins, IGF-I and insulin. However, the oocyte cytoplasmic maturation evaluated through embryo development was improved when the Ang II and IGF-I were presents in maturation media with follicular cells for 12 + 12 hours. / O objetivo do presente estudo foi de avaliar a ação da angiotensina II (Ang II), fator-I de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e insulina (Ins) na maturação nuclear e citoplasmática de oócitos bovinos na presença de células foliculares. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram cultivados por 22 h na presença de células foliculares e Ang II, IGF-I ou Ins. Nesse experimento, foram utilizados dois grupos controles, onde os oócitos foram cultivados na presença (controle com células) ou na ausência (controle sem células) de células foliculares. Dois experimentos foram realizados com esses cinco grupos, sendo um com e outro sem adição de LH e FSH. Somente os oócitos cultivados no grupo Ang II (88,2±1,8 e 90,7±4,3%, respectivamente sem e com LH/FSH) reiniciaram a meiose em índices similares àqueles cultivados na ausência de células foliculares (89,7±0,3 e 92,6±2,6; P<0,01). Em um segundo experimento, foi avaliada a ação da Ang II e sua associação ao IGF-I ou insulina na maturação de oócitos por 7 (rompimento da vesícula germinativa - RVG), 12 (metáfase I - MI) e 22 (metáfase II - MII) horas, em um delineamento similar ao do experimento anterior. A Ang II, Ang II + IGF-I e Ang II + Ins, independente de gonadotrofinas, foram capazes de reverter a inibição da maturação causada pelas células foliculares, nos mesmos níveis do grupo controle sem células (P<0,01), nos três horários estudados. Um último experimento foi realizado para avaliar o efeito das células foliculares, Ang II, IGF-I, Ins e suas associações durante a maturação de oócitos sobre o índice de desenvolvimento embrionário subseqüente. Os oócitos foram maturados em grupos similares aos do segundo experimento por 1 h (1+23 h), 12 h (12+12 h) ou 24 h na presença de células foliculares e seus respectivos tratamentos + o período para completar 24 h em meio de maturação. Em 1 + 23 h, não houve diferença nos resultados de clivagem, blastocistos e eclosão entre os cinco grupos. No sistema 12 + 12 h, os oócitos no grupo Ang II + IGF-I atingiram índices de blastocistos (43,8±0,6) e eclosão/total de oócitos (17,1±1,2) superiores aos outros tratamentos (P<0,05). Em 24 h, a associação de Ang II + IGF-I obteve maiores índices de blastocistos em comparação aos demais tratamentos contendo células foliculares (P<0,05). Somente nesse grupo foram obtidos blastocistos eclodidos após 24 h na presença de células foliculares. Em conclusão, a Ang II reverte o efeito inibitório da maturação nuclear de oócitos bovinos causado pelas células foliculares, independente da presença de gonadotrofinas, IGF-I e insulina. No entanto, a capacitação oocitária, medida pelo desenvolvimento embrionário, é superior quando a Ang II e IGF-I estão presentes em meios contendo células foliculares em cultivos de 12 + 12 horas.

Orientador: Jose Butori Lopes de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T11:40:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amazonas_RobertoBleuel_D.pdf: 3511441 bytes, checksum: b4fcb466c8675ae1dba5206babaf5e15 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: No diabetes mellitus (DM), a hipertensão arterial (HA) é o principal fator associado ao desenvolvimento e progressão da nefi-opatia diabética (ND). Os mecanismos de interação entre HA e DM no agravamento da ND são pouco conhecidos. No presente trabalho investigamos a contribuição da HA nas alterações renais precoces de um modelo que combina HA e DM. Ratos machos com 4 semanas de idade, espontaneamente hipertensos (SHR) e seus controles Wistar Kyoto (WKY), foram tornados diabéticos através da injeção endovenosa de estreptozotocina. Os ratos SHR com DM foram randomizados para tratamento com captopril, losartan, terapia triplice (hidroclorotiazida, reserpina e hidralazina) e nenhum tratamento por 20 dias. O aumento na pressão sistólica foi igualmente previnido pelos diversos esquemas anti-hipertensivos. A expressão glomerular de nemna estava reduzida nos animais SHR controle em relação aos animais WKY, e de forma mais acentuada no grupo SHR DM. A prevenção da HA foi capaz de evitar a redução na nemna, bem como reduzir a albuminúria. A superfície, expressão de fibronectina e TGF 131 glomerulares estavam significativamente aumentadas no grupo SHR diabético em relação ao grupo SHR controle e foi prevenida pelos diversos tratamentos. A replicação de células renais foi significativamente menor no grupo SHR diabético em relação ao controle, e restaurado com a prevenção da hipertensão arterial. A expressão glomerular de p27Kipl estava aumentada no grupo SHR diabético, mas não foi modificada pelo tratamento anti-hipertensivo. Em conclusão a presença da HA em ratos diabéticos induziu o aparecimento de alterações renais precoces que puderam ser previnidas com o tratamento anti-hipertensivo, independente da classe de droga utilizada / Abstract: In diabetic patients hypertension is the main secondary factor associated with the development and progression of renal disease. However, the mechanism of interaction between diabetes and hypertension to exacerbate diabetic renal disease is poorly understood. The aim of this study was to evaluate the effect of presence of hypertension had on nephrin expression, glomerular hypertrophy, renal celI replication and accumulation of glomerular TGF f3 and fibronectin in a model of genetic hypertension and experimental diabetes mellitus. Four-week-old spontaneously hypertensive rats (SHR) and their normotensive control Wistar K yoto (WKY) were rendered diabetic by means of intravenously injection of streptozotocin. To further assess the contribution ofhypertension to renal abnormalities diabetic SHR were randomÍzed for no treatment, or for treatment with captopril, losartan or triple therapy (hydrochlorothiazide, reserpine and hydralazine) for 20 days. Increase in systolic blood pressure was equally prevented by captopril (113 :i: 9mmHg), losartan (115 :!:: 16) and triple therapy (108 :i: 12, p<0.005). Glomerular expression of nephrin was reduced in SHR and further diminished in diabetic SHR in comparison with controls and the antihypertensive treatment prevents the reduction in glomerular expression of nephrin. Glomerular sÍze was higher (p<0.005) in diabetic SHR (27,300 :i: 2130 Jim2) compared with non-diabetic SHR (23,800 :!:: 307). The antihypertensive therapy with captopril (23,900 :i: 175), losartan (23,800 :i:120), and triple therapy (23,400 :i:21O) prevented the glomerular enlargement in diabetic SHR. Glomerular expression of TGF f3 and fibronectin was significantly increased in diabetic SHR as compared to the controls, and was prevented with captopril, losartan and triple therapy. The number of replicating glomerular cell significantly decreased in diabetic SHR and it was restored by alI three antihypertensive regimes. The glomerular expression of p27Kipl was significantly higher in diabetic SHR but it was not modified by antihypertensive treatment. In diabetic rats the presence of genetic hypertension induced early renal abnormalities that were prevented by strict control of blood pressure. These abnormalities may be involved in the mechanism of interaction between diabetes and hypertension to exacerba te renal disease / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Fernanda Klein Marcondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T14:51:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_Rafaela_D.pdf: 1664351 bytes, checksum: 856190c69c5300d3e8c63ffa3c136ddf (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Dados da Organização Mundial de Saúde mostram que atualmente a depressão atinge 121 milhões de pessoas e deverá ser a doença mais comum no mundo em 2020. Evidências científicas mostram sua associação com o estresse crônico e alterações neuronais relacionadas à depressão, ansiedade, prejuízo no aprendizado e memória. A qualidade do ambiente em que o indivíduo está inserido e o suporte social de que dispõe representam os principais fatores na regulação dessas alterações. Com relação aos mecanismos fisiopatológicos envolvidos nos efeitos do estresse crônico, há estudos que demonstram uma importante associação entre estresse e hiperatividade do sistema renina angiotensina (SRA). Porém, os mecanismos envolvidos na associação entre estresse e depressão e nos efeitos protetores de condições ambientais favoráveis ainda não estão esclarecidos. Em modelo animal, a intervenção ambiental por meio da estimulação tátil ou enriquecimento ambiental tem sido proposta como um fator que poderia diminuir o estresse e promover o bem-estar. No experimento 1, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da intervenção ambiental, por meio da estimulação tátil (manipulação) ou enriquecimento ambiental, sobre as respostas hormonais e comportamentais induzidas pelo estresse crônico moderado e imprevisível (ECMI) em ratos Sprague-Dawley jovens. Nesse estudo foi evidenciado que o ECMI aumentou as concentrações séricas de corticosterona e plasmáticas de noradrenalina e adrenalina; induziu comportamentos análogos à depressão; prejudicou o aprendizado e memória e aumentou a concentração tecidual de angiotensina I, II e IV no hipotálamo. Tanto a manipulação quanto o enriquecimento ambiental atenuaram a secreção hormonal, os comportamentos análogos à depressão e o aumento de angiotensina II no hipotálamo; e cancelaram o prejuízo cognitivo induzido pelo ECMI. Com o objetivo de estudar se os efeitos da angiotensina II, mediados pelo receptor tipo 1 de angiotensina II (AT1), estão envolvidos nas respostas hormonais e no prejuízo cognitivo induzido pelo ECMI, no experimento 2, ratos machos Sprague-Dawley controles e estressados, tratados ou não com losartan (antagonista de receptor AT1) foram avaliados. Nesse experimento, a administração do losartan cancelou o aumento na secreção dos hormônios do estresse, atenuou o desamparo aprendido e o prejuízo cognitivo em animais estressados. Os resultados obtidos mostraram que a manipulação ou o enriquecimento ambiental produzem efeitos hormonais e comportamentais positivos capazes de melhorar o bem-estar animal e podem diminuir os efeitos deletérios induzidos por estresse crônico em ratos jovens. Além disso, sugerem que a atividade do sistema renina-angiotensina pode estar envolvida nos efeitos negativos desencadeados pelo estresse crônico / Abstract: Data from the World Health Organization show that depression currently affects 121 million people and will probably be the most common disease in the world in 2020. Scientific evidences show that it is associated with chronic stress, neuronal changes depression-related, anxiety and impairment in learning and memory. There are also a significant association between stress and hyperactivity of the renin angiotensin system on behavioral changes and cardiovascular effects. It is also noteworthy that the quality of the environment in which the individual belongs and the social support represent the main factors that may regulated these effects. In addition, the pathophysiological mechanisms involved in the association between stress and depression, and the protective effects of favorable environmental conditions remain unclear. In animal models, environmental intervention through tactile stimulation (handling) or environmental enrichment have been proposed as factors that may reduce stress and promote well-being. In the experiment 1, the objective of this study was to evaluate the effects of environmental intervention, through tactile stimulation (handling) or environmental enrichment on behavioral and hormonal responses induced by chronic mild unpredictable stress (CMS) in young Sprague-Dawley rats. The results of this study showed that the CMS increased serum corticosterone, plasma norepinephrine and epinephrine concentrations; induced depression-like behaviors; impaired learning and memory and increased hypothalamus angiotensin I, II and IV. Handling and environmental enrichment attenuated stress hormones secretion, depression-like behaviors and increased hypothalamic angiotensin II levels; and cancelled impairment of learning and memory induced by CMS. Considering that the aim of study 1 was evaluate if the effects of angiotensin II, mediated by angiotensin II type 1 receptor (AT1), are involved in hormone responses and cognitive impairment induced by CMS, the experiment 2 were performed. In the second study, male Sprague-Dawley rats controls and stressed, treated or not with losartan (AT1 receptor antagonist) were evaluated. Results from the second study showed that the losartan administration cancelled the increase in stress hormones secretion, attenuated depression-like behaviors and reduced the impairment of learning and memory in stressed animals. The data obtained indicated that the handling or environmental enrichment produced positive hormonal and behavioral effects capable of improving the animal¿s welfare, diminishing the deleterious effects induced by chronic stress in adult rats. The results also suggest that renin-angiotensin system over activity seems to be involved in negative effects of CMS / Doutorado / Fisiologia / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Os hormônios peptídicos Angiotensina II (Ang II) e bradicinina (BK) ativam transdução de sinal através da ligação a Receptores Acoplados a Proteínas G (GPCR). Este trabalho propõe o estudo de propriedades conformacionais, através de espectroscopia de fluorescência da Ang II e BK e de seus análogos contendo o marcador de spin ácido 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxílico, TOAC (TOAC1-Ang II, TOAC3-Ang II, TOAC0-BK, TOAC3-BK). Os peptídeos foram estudados em solução (efeito do pH) e também na presença de membranas modelo, micelas e bicamadas, formadas por anfifílicos zwitteriônicos ou aniônicos. Foi monitorada a fluorescência intrínseca dos resíduos aromáticos (Tyr4 na Ang II e Phe5 e Phe8 na BK). O efeito de supressão da fluorescência pelo TOAC foi utilizado para obter informação sobre a proximidade desse resíduo aos grupos fluoróforos. Foi observada dependência da fluorescência com o pH e regiões de pKs dos grupamentos ionizáveis. Os espectros evidenciaram também a interação peptídeo-membrana modelo. Interações mais fortes ocorreram entre os peptídeos e membranas com carga superficial negativa, evidenciando a importância de interações eletrostáticas para a ligação. Porém, interações hidrofóbicas também estão envolvidas, como verificado pela ligação dos peptídeos a membranas zwitteriônicas. Estudos com variação de pH também mostraram o papel dessa variável na interação peptídeo-membrana e a alteração de pKs de resíduos ionizáveis decorrentes da interação. A titulação com concentrações crescentes de membranas permitiu o cálculo das constantes de associação. A ligação a membranas é função da conformação dos peptídeos. Em particular, a presença de TOAC na posição 3 parece diminuir a afinidade desses análogos por membranas. Supressão de fluorescência foi efetuada empregando três diferentes abordagens: 1) supressão pela molécula aquossolúvel acrilamida, 2) supressão da fluorescência de fosfolipídeos contendo o fluoróforo NBD em diferentes posições da molécula pelos análogos marcados com TOAC, 3) supressão da fluorescência dos peptídeos por ésteres metílicos do ácido esteárico contendo o grupamento nitróxido em diferentes posições da cadeia. Esses estudos permitiram determinar a localização dos peptídeos na interface água-membrana. Medidas de anisotropia de fluorescência também evidenciaram a ligação dos peptídeos a membranas, revelando maior imobilidade dos mesmos nessas condições. Foi ainda estudado um peptídeo que contém os resíduos 92-100 (fEL1) do receptor AT1 de Ang II humano. Predições baseadas na estrutura cristalina da rodopsina estimam que essa seqüência localiza-se na primeira alça extra-celular do receptor. A seqüência contém a Tyr92, considerada um resíduo importante para a ligação hormônio-receptor. Resultados preliminares sugeriram que fEL1 interage com Ang II e TOAC1-Ang II, mas não com TOAC3-Ang II. Este último resultado provavelmente deve-se à dobra causada por TOAC que restringe a liberdade de movimento do esqueleto peptídico. Essa característica provavelmente determina a falta de atividade biológica de TOAC3-Ang II e TOAC3-BK, enquanto os análogos marcados no N-terminal retém atividade parcial (Nakaie et al., 2002). Tem sido proposto que peptídeos ligantes de GPCR se ligariam à bicamada lipídica e atingiriam seu receptor através da difusão pela bicamada. Em solução aquosa essas moléculas são flexíveis, existindo um equilíbrio dinâmico entre várias conformações. A ligação à bicamada lipídica estabilizaria uma ou algumas conformações, entre elas aquela que o ligante adota ao ligar-se ao receptor. O presente estudo contribui para a compreensão, a nível molecular, do processo de interação entre os hormônios peptídicos e membranas lipídicas. / The peptide hormones Angiotensin II (Ang II) and bradykinin (BK) trigger signal transduction by binding to G Protein Coupled Receptors (GPCR). This work proposes the study of conformational properties of Ang II and BK, as well as their analogues containing the spin label 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl-4-amino-4-carboxylic acid, TOAC (TOAC1-Ang II, TOAC3-Ang II, TOAC0-BK, TOAC3-BK) making use of fluorescence spectroscopy. Studies were performed in solution (effect of pH) and also of the interaction between the peptides and model membranes - micelles and bilayers - formed by amphiphiles, either zwitterionic or negatively charged. The intrinsic fluorescence of aromatic residues (Tyr4 in Ang II and Phe5 and Phe8 in BK) was monitored. Fluorescence quenching by the TOAC-carrying analogues provided information about the proximity between TOAC and the fluorophores. The fluorescence was pH-dependent and evinced regions corresponding to pKs of ionizable groups. Peptide-model membrane interactions were also examined. Stronger interactions were detected between the peptides and membranes formed by negatively charged amphiphiles, pointing to the importance of electrostatic interactions for binding. However, hydrophobic interactions were also involved, as suggested by the fact that the peptides also bound to zwitterionic membranes. Variable pH studies showed the effect of this parameter on peptide-membrane interaction. The peptide-membrane interactions promoted changes in the pKs of ionizable residues. Titrations with increasing membrane concentrations allowed calculation of binding constants. Binding to membranes is a function of peptide conformation. In particular, TOAC at position 3 seems to decrease the affinity of both Ang II and BK for membranes. Fluorescence quenching studies made use of three different approaches: 1) quenching by water soluble acrylamide, 2) quenching of the fluorescence of phospholipids carrying the fluorescent group NBD in different positions by the spin-labeled TOAC-bearing analogues, 3) quenching of the peptides fluorescence by methyl esters of stearic acid containing the nitroxide moiety at different positions in the acyl chain. These studies indicated that the peptides are located at the water-membrane interface. Measurements of fluorescence anisotropy also evinced binding of the peptides to the membranes and showed that the peptides undergo more restricted motion under these conditions. A peptide containing residues 92-100 (fEL1) of the Ang II AT1 human receptor was also studied. Predictions based on rhodopsin crystalline structure estimate that this sequence is located in the receptor´s first extra-cellular loop. Preliminary results suggest that fEL1 interacts with Ang II and TOAC1-Ang II, but not TOAC3-Ang II. This latter result is probably due to the TOAC-induced bend that restricts the freedom of motion of the peptide backbone. This feature is probably the cause of lack of biological activity of TOAC3-Ang II and TOAC3-BK, while the N-terminally labeled analogues retain partial activity (Nakaie et al., 2002). GPCR-binding peptides have been proposed to bind to the lipid bilayer and reach their receptors by diffusion in the bilayer. In aqueous solution these molecules exist as a dynamic equilibrium between various flexible conformations, among them, the receptor-bound conformation. The present study provides contributions for the understanding, at the molecular level, of the interaction between the peptide hormones and lipid membranes.

No sistema cardiovascular, modificações de pressão e shear stress devido ao fluxo sanguíneo influenciam a morfologia e a patofisiologia dos vasos sanguíneos e do coração. Neste trabalho, estudamos o papel de duas moléculas transmembrânicas do Sistema Renina-Angiotensina: a Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) e o Receptor de Angiotensina do tipo I (AT1) como mecanosensoras e mecanotransdutoras dessas forças físicas. A ECA foi por muito tempo conhecida somente por sua ação em converter Angiotensina I em Angiotensina II e por inativar a Bradicinina. Recentemente foi demonstrado que a ECA, além dos efeitos enzimáticos já conhecidos, pode ter sua cauda citoplasmática fosforilada e desencadear vias de sinalização intracelular. Observamos que o shear stress, mas não o estiramento, induziu a diminuição da fosforilação da porção citoplasmática da ECA após 5 minutos de estímulo e se mantém até 18 horas. Demonstramos também que a porção extracelular da ECA tem papel fundamental como mecanosensora e que a via intracelular da JNK participa da mecanotransdução em resposta ao shear stress. Além disto, demonstramos que a diminuição da fosforilação da ECA está associada na diminuição da sua expressão pelo shear stress. O receptor AT1 é a principal molécula efetora das ações da angiotensina II. Recentemente foi demonstrado que esse receptor pode também ser ativado por forças físicas, estiramento celular, independentemente da presença da angiotensina II. No presente estudo, observamos que o receptor AT1 é ativado pelo shear stress e que o Candesartan, mas não o Losartan, é capaz de impedir esta resposta. A via intracelular ativada é dependente de proteína-G e da entrada de cálcio do meio extracelular. Interessantemente, a pré-exposicao dos receptores ao shear stress diminuem a responsividade dos receptores ao peptídeo Angiotensina II porém a Angiotensina II não é capaz de inibir a ativação pelo shear stress.. Em conjunto, demonstramos novos mecanismos de ação da ECA e do AT1 que são duas importantes moléculas do sistema renina angiotensina. A modulação destes componentes por estímulos mecânicos traz novas possibilidades de intervenções farmacologicas sobre esse sistema bem como o melhor entendimento da participação dessas moléculas na fisiopatologia cardiovascular. / Hemodynamic forces such as pressure and shear stress modulate the patophysiolgy of the cardiovascular system. In this study, we investigated two transmembranic key molecules of the renin-angiotensin system (RAS) as mechanosensors and mechanotransducers of physical forces: Angiotensin Converting Enzyme (ACE) and Angiotensin II type 1 Receptor (AT1). ACE is an enzyme that converts angiotensin I in angiotensin II. Recently, it was demonstrated that ACE cytoplasmic tail can be phosphorylated by ACE inhibitors and elicited intracellular cell signaling. Here, we observed that shear stress, but not stretch, decreased ACE cytoplasmic phosphorylation after 5 minutes and maintained up to 18 hours. ACE extracellular portion act as mechanosensor and JNK pathway participate in the mechanotransduction activation. In addition, we also demonstrate that decrease in ACE phosphorylation is involved in ACE expression downregulation by shear stress. AT1 receptor is the main effector molecule of angiotensin II cellular responses. It has recently been shown that AT1 receptor can directly be activated by mechanical stretch stress through an angiotensin-II-independent mechanism. In the present study, we observed that shear stress also activates AT1 receptor which is blocked by Candesartan, but not by Losartan. The intracellular pathway activated by shear stress involves both G-protein and extracellular calcium. Interestingly, preconditioning of AT1 receptor by shear stress impairs its responsiveness to angiotensin II while the pretreatment with angiotensin II still allow AT1 responsiveness to shear stress. Altogether, we demonstrated that ACE and AT1 receptor activates intracellular signal in response to mechanical force. This new concept for the RAS, the modulation of these molecules by mechanical forces gives new insigh into the discovery for pharmacological interventions to the RAS

O tecido adiposo perivascular (PVAT) libera substâncias dilatadoras e constritoras, sendo que as dilatadoras se sobrepõem, exercendo efeito anticontrátil. Esse efeito está prejudicado na presença de algumas doenças cardiovasculares. Na insuficiência cardíaca (IC) ocorrem danos ao sistema vascular, todavia nenhum estudo avaliou a função do PVAT na IC. A utilização do treinamento físico (TF) tem sido recomendada com terapia não farmacológica eficiente em promover benefícios ao sistema cardiovascular. As recomendações sugerem que o exercício resistido seja adicionado aos programas de TF para pacientes com IC, podendo, assim, o treinamento combinado (TC; aeróbio e resistido) fornecer benefícios adicionais à saúde cardiovascular. Com isso, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel do PVAT na reatividade vascular da aorta torácica dos ratos com IC e, após, avaliar a influência do TC na resposta anticontrátil do PVAT da aorta torácica e abdominal de ratos saudáveis e com IC. Ratos Wistar foram submetidos à oclusão da artéria coronária descendente ou falso operado (SO). Após 4 semanas, para o estudo sem TC os animais foram mantidos sem intervenção, e para o estudo que envolvia o TC foram divididos em sedentários (SOs e ICs) e treinados (SOt e ICt, esteira e escada, 5 x/sem., 8 sem.). Anéis da aorta torácica e/ou abdominal com (E+) e sem endotélio (E-), na presença (PVAT+) ou na ausência do PVAT (PVAT-), foram montados em miógrafo de arame e curvas concentração-resposta à fenilefrina (FEN, 10-910-5M) foram realizadas. A IC promoveu aumento da contração FEN nos anéis E+/PVAT- da aorta torácica quando comparado aos SO, e o efeito anticontrátil do PVAT foi prejudicado pela IC nos anéis E+/PVAT+ e E-/PVAT+. O prejuízo no efeito anticontrátil do PVAT foi acompanhado por maior atividade da ECA1 e da expressão dos AT1R, AT2R e MASR no PVAT dos animais com IC. O antagonismo dos AT1R, AT2R e MASR promoveram redução da resposta contrátil nos anéis E+/PVAT- nos IC, nos anéis E+/PVAT+ essa redução foi superior apenas para o antagonismo do AT1R e AT2R. A produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) na aorta torácica e PVAT dos animais IC foi maior que nos SO, acompanhada por uma menor biodisponibilidade de NO. O TC aumentou a capacidade física nos SOt e ICt. Na aorta torácica o TC reverteu parte do prejuízo da função anticontrátil do PVAT, aumentou a expressão do PRDM-16 e ESPST-1 que estavam reduzidos na IC, além disso, melhorou a biodisponibilidade de NO no PVAT pela maior expressão da eNOS, &beta;3-AR e AMPk1/2&alpha;, aumentou a concentração de adiponectina e reduziu marcadores pró-inflamatórios. Na aorta abdominal, o efeito anticontrátil do PVAT não estava presente e o TC reverteu a disfunção endotelial dos animais com IC, aumentando a biodisponibilidade de NO e a expressão da eNOS na aorta. Em conclusão, na IC os AT1R e AT2R contribuem tanto para a disfunção endotelial quanto do PVAT, reduzindo a biodisponibilidade de NO e aumentando a produção de ERO. O TC melhorou a função anticontrátil na aorta torácica, por benefícios na via de sinalização &alpha;3-AR/Adiponectina/AMPK/eNOS, modificando o perfil morfológico e inflamatório do PVAT. Já na aorta abdominal, o TC melhorou a função vascular, aumentando a biodisponibilidade de NO. / Perivascular adipose tissue (PVAT) releases dilating and constricting substances, and the dilators overlap, exerting an anti-contractile effect. This effect is impaired in the presence of some cardiovascular diseases. In heart failure (HF) damage to the vascular system occurs, however, no study has evaluated the function of PVAT in HF. The use of physical training (PT) has been recommended with non-pharmacological therapy effective in promoting cardiovascular system benefits. The recommendations suggest that resistance exercise be added to the PT programs for patients with HF, thus, combined training (CT, aerobic and resisted) may provide additional cardiovascular health benefits. The objective of the present study was to evaluate the role of PVAT in the vascular reactivity of the thoracic aorta of HF rats and, after that, to evaluate the influence of CT in the anti-contractile response of PVAT of the thoracic and abdominal aorta of healthy and HF rats. Wistar rats were submitted to descending coronary artery occlusion or false operated (SO). After 4 weeks, for the study without CT, the animals were kept without intervention, and for the study involving the CT were divided into sedentary (SOs and HFs) and trained (SOt and HFt, treadmill and ladder, 5 x/8 sem.). In the presence (PVAT+) or in the absence of the PVAT (PVAT-), thoracic and/or abdominal aorta with (E+) and without endothelium (E-), were mounted on wire myograph and concentration-response curves to phenylephrine, (PHE, 10-9-10-5M) were performed. HF promoted an increase in PHE contraction in the E+/PVAT- rings of the thoracic aorta when compared to SO, and the ani-contratile effect of PVAT was impaired by HF in the E+/PVAT+ and E-/PVAT+ rings. The impairment in the anti-contratile effect of PVAT was accompanied by increased activity of ECA1 and the expression of AT1R, AT2R and MASR in the PVAT of animals with HF. The AT1R, AT2R and MASR antagonism promoted a reduction of the contractile response in the E+/PVAT- rings in the HF, in the E+/PVAT+ rings, this reduction was superior only to the antagonism of AT1R and AT2R. The production of reactive oxygen species (ROS) in the thoracic aorta and PVAT of the HF animals was higher than in the SO, accompanied by a lower NO bioavailability. CT increased physical capacity in SOt and HFt. In the thoracic aorta CT reversed part of the impairment of PVAT anti-contratile function, increased the expression of PRDM-16 and ESPST-1 that were reduced in HF, in addition, it improved the bioavailability of NO in PVAT by the greater expression of eNOS, &beta;3-AR and AMPk1/2 &alpha;, increased the concentration of adiponectin and reduced proinflammatory markers. In the abdominal aorta, the anti-contratile effect of PVAT was not present and CT reversed the endothelial dysfunction of HF animals, increasing NO bioavailability and eNOS expression in the aorta. In conclusion, in HF, AT1R and AT2R contribute to both endothelial and PVAT dysfunction, reducing NO bioavailability and increasing ROS production. CT improved the anti-contractile function in the thoracic aorta due to benefits in the &beta;3-AR/Adiponectin/AMPK/eNOS signaling pathway, modifying the morphological and inflammatory profile of PVAT. Already in the abdominal aorta, the CT improved the vascular function, the CT improved the vascular function, increasing the bioavailability of NO.