Aproximadamente vinte espécies do gênero Hypericum (Guttiferae) têm ocorrência natural no Brasil, e concentram-se principalmente na região Sul do País. Considerando a importância deste gênero como fonte de substâncias com variadas atividades biológicas, tais como analgésica, antidepressiva, antimicrobiana, antiviral, antiproliferativa, entre outras, o presente trabalho teve como objetivos analisar a constituição química e o potencial antioxidante de espécies de Hypericum, desenvolver protocolos para manutenção de algumas espécies nativas através de culturas de tecidos e células e validar metodologia para quantificação de benzopiranos em H. polyanthemum proveniente de cultivo a campo, in vitro e aclimatizado. Utilizando-se métodos cromatográficos e espectroscópicos, foram isolados e identificados o ácido fenólico ácido 5-O-cafeoil-1-metoxi-quínico e os flavonóides 3,7-dimetil-quercetina, 3-Ometil- quercetina, I3,II8-biapigenina, guaijaverina, isoquercitrina e hiperosídeo, todos derivados da quercetina e obtidos da fração acetato de etila das partes aéreas de H. ternum. Ainda desta espécie, porém da fração n-hexano das raízes, obteve-se o derivado de floroglucinol uliginosina B. De H. myrianthum foram isolados e identificados os flavonóides quercetina e hiperosídeo, da fração metanólica das partes aéres, bem como os derivados de floroglucinol japonicina A e uliginosina B, fração n-hexano das raízes. Através do método colorimétrico de Folin-Ciocalteau, foram quantificados os teores de fenólicos totais das espécies H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum e H. polyanthemum, verificando-se teores variando entre 37,40 a 228,36 mg EQ/g de extrato seco. Utilizando as técnicas de TRAP (Total Radical-trapping Antioxidant Parameter), ORAC-PGV (Oxygen Radical Absorbance Capacity) e reação bioautográfica e espectrofotométrica com radicais DPPH• (2,2 difenil-1-picril-hidrazil) evidenciou-se que extratos brutos metanólicos, e frações metanólicas e n-hexânicas das espécies H. caprifoliatum, H. carinatum H. myrianthum e H. polyanthemum, bem como produtos isolados de espécies de Hypericum nativas do Estado apresentam potencial antioxidante. A regeneração in vitro foi obtida em meio Murashige & Skoog modificado (MΔ) para as espécies H. campestre, H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum, H. polyanthemum e H. ternum utilizando diferentes combinações e concentrações dos reguladores de crescimento 6-benzilamino-purina (BAP), ácido naftaleno-acético (ANA) e ácido 2,4 dicloro-fenóxi-acético (2,4-D). Plântulas dessas espécies foram posteriormente aclimatizadas com sucesso, sendo cultivadas a campo. As espécies micropropagadas demonstraram perfis químicos qualitativamente similares aos apresentados pelas plantas desenvolvidas no campo, de modo que o cultivo in vitro apresenta-se como uma alternativa interessante aos métodos convencionais de produção de biomassa para extração de metabólitos secundários bioativos. Culturas de calos foram estabelecidas em meio MΔ para H. myrianthum, H. polyanthemum e H. ternum, utilizando diferentes combinações e concentrações dos reguladores de crescimento cinetina (CIN), BAP, ANA e 2,4-D. Considerando-se as importantes atividades biológicas de produtos obtidos de H. polyanthemum foi estabelecida uma metodologia para quantificação, através da técnica de CLAE, de benzopiranos no extrato apolar desta planta, espécie de ocorrência restrita. A validação analítica foi avaliada conforme o preconizado por normas reconhecidas internacionalmente, com análise dos parâmetros linearidade, seletividade, precisão (repetibilidade e precisão intermediária), exatidão e limites de detecção e quantificação, demonstrando resultados coerentes com os exigidos pela legislação vigente. Foram evidenciadas variações no teor de benzopiranos na planta micropropagada, aclimatizada e desenvolvida a campo, provavelmente devido a fatores, que vão desde a regulação endógena de processos fisiológicos até variações sazonais no cultivo. / Approximately twenty species of Hypericum genus (Guttiferae) are native of Brazil, occurring mainly in the South region. Considering the importance of the genus as a source of compounds with different biological activities, such as analgesic, antidepressant, antimicrobial, antiviral, antiproliferative, among others, the objectives of this work were to evaluate the phytochemistry and antioxidant potential of some Hypericum species, to develop protocols for the maintenance of the species through in vitro cultures and to validate a technique to quantify the benzopyrans in H. polyanthemum grown in field, in vitro and acclimatized plants. Chromatographic and spectroscopic techniques were used for the isolation and identification of the phenolic acid 5-O-caffeoyl-1-methyl ester-quinic acid and the flavonoids quercetin 3,7-dimethyl ether, quercetin 3-methyl ether, I3,II8-biapigenin, guaijaverin, isoquercitrin and hyperoside, all of them quercetin derivatives and obtained from ethyl acetate fraction of H. ternum aerial parts. From n-hexane fraction of the roots of this species the phloroglucinol derivative uliginosin B was obtained. The flavonoids quercetin and hyperoside (from aerial parts of methanolic fraction), and the phloroglucinol derivatives japonicin A and uliginosin B (from n-hexane fraction of roots) were isolated from H. myrianthum. Total phenol concentration ranging from 37.40 to 228.36 mg QE/g dry extract (Folin–Ciocalteu colorimetric method) in H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum and H. polyanthemum was measured. The antioxidant potential of the extracts obtained from H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum and H. polyanthemum and isolated compounds was determined using TRAP (Total Radicaltrapping Antioxidant Parameter), ORAC-PGR (Oxygen Radical Absorbance Capacity) and bioautographic and spectrofotometric reaction with DPPH• (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl radical techniques. In vitro regeneration of H. campestre, H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum, H. polyanthemum and H. ternum was obtained in Murashige & Skoog modified medium (MΔ) supplemented with differents combinations and concentrations of the growth regulators 6-benzylaminopurine (BAP), α-naphthalene acetic acid (ANA) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Plantlets were acclimatizated and transferred to open field. The micropropagated species showed chemical pattern qualitatively similar to field grown plants, demonstrating that the in vitro cultures are an alternative to conventional methods for biomass production of bioactive secondary metabolites. Callus cultures of H. myrianthum, H. polyanthemum and H. ternum were established in MΔ medium using different combinations and concentrations of kinetin (CIN), BAP, ANA and 2,4-D. Considering the important biological activities of the benzopyrans isolated from H. polyanthemum, an HPLC quantification methodology was established. Analytical validation was performed according to international rules (linearity, selectivity, precision, accuracy, detection and quantitation limits) showing results coherent with those required by the current legislation. Variation of the benzopyrans concentration was observed among the micropropagated plantlet, acclimatizated and field grown plants, probably due to factors as endogenous regulation of physiological process and seasonal variation of the culture.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-09-08T14:07:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Bruno Oliveira Moreira.pdf: 2873345 bytes, checksum: fb82fba04e55b832201ffd285264867c (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Reis (vanessa.jamile@ufba.br) on 2016-09-08T14:28:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Bruno Oliveira Moreira.pdf: 2873345 bytes, checksum: fb82fba04e55b832201ffd285264867c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T14:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Bruno Oliveira Moreira.pdf: 2873345 bytes, checksum: fb82fba04e55b832201ffd285264867c (MD5) / CAPES / Este trabalho descreve o isolamento e a elucidação estrutural de alguns metabólitos especiais presentes nas fases hexânica e diclorometânica obtidas por partição do extrato metanólico bruto das folhas de Schinopsis brasiliensis Engl. (Anacardiaceae), além da avaliação da atividade antioxidante dos extratos e das substâncias isoladas. Utilizando-se métodos cromatográficos usuais (CC, CCDC em sílica e permeação em gel de Sephadex LH- 20) foram isolados do extrato hexanico friedelina. β-amirina, β-sitosterol e seu derivado glicosilado. Do extrato diclorometânico foram isolados o ácido gálico e o galato de metila, os flavonóides quercetina-3-O-β-D-xilopiranosídeo, 5,6,7,8,3',4'-hexahidroxiflavonol que tem o seu primeiro relato na família Anacardiaceae e 5,7,4’,5’-tetrahidroxiflavona-3’-O-β-D- glicopiranosídeo também conhecido como tricetina-3’-O-β-D-glicopiranosídeo, sendo esse o seu primeiro relato nesta família bem como é a primeira vez que os dados de RMN de 1H e de 13C deste composto são inequivocamente atribuídos. Este fracionamento também possibilitou a identificação do megastigmano, (6R,9R)-megastigma-4-en-3-ona 9-O-β-glicopiranosídeo. As estruturas das substâncias isoladas foram elucidadas através da análise dos dados obtidos pelos espectros no IV, de RMN de 1H e 13C (BB e DEPT), além de técnicas bidimensionais (COSY, HMBC e HMQC). Os testes de atividade antioxidante in vitro utilizando a metodologia do seqüestro do radical estável DPPH, demonstrou que as substâncias quercetina-3-O-β-D-xilopiranosídeo, ácido gálico e galato de metila apresentaram excelente atividade em todas as concentrações testadas. Enquanto que, tricetina-3’-O-β-D- glicopiranosídeo apresentou atividade antioxidante comparável aos padrões utilizados apenas nas maiores concentrações e o (6R,9R)-megastigma-4-en-3-ona 9-O-β-glicopiranosídeo não apresentou atividade antioxidante. / This work describes the isolation and structural elucidation of the secondary metabolites present in the hexane and dichloromethane fractions obtained by partition of the crude methanol extract of leaves of Schinopsis brasiliensis Engl. (Anacardiaceae). The isolates and extracts were also submitted to evaluation of the antioxidant activity. The compounds were isolated by usual chromatographic methods (CC, CCDC over silica and Sephadex LH-20 gel-permeation). From the hexane extract were obtained friedelin, β-amyrin and β-sitosterol and its glycosil derivative. From the dichloromethane extract were isolated gallic acid and methyl gallate, the flavonoids quercetin-3-O-β-D-xylopyranoside, 5,6,7,8,3',4'- hexahydroxyflavonol which is the first report on the family Anacardiaceae of this compound. Besides it was also isolated 5,7,4',5'-tetrahydroxyflavon-3'-O-β-D-glucopyranoside (know as tricetin-3'-O-β-D-glucopyranoside); this is the first report for this substance in this family and is the first time that the data of 1H and 13C NMR of this compound was unequivocally assigned. The fractionation also allowed the isolation of megastigmane, (6R,9R)-megastigma- 4-en-3-one 9-O-β-glucopyranoside. The structures of the isolated compounds were elucidated through data analysis of IR spectra, 1H and 13C NMR (BB and DEPT), as well as bidimensional techniques (COSY, HMBC and HMQC). Antioxidant activity in vitro using the methodology of the DPPH, demonstrated that quercetin-3-O-β-D-xylopyranoside, gallic acid and methyl gallate showed excellent activity in all concentrations tested. While, tricetin-3'-O- β-D-glucopyranoside showed antioxidant activity comparable to standards used only in higher concentrations and (6R,9R)-megastigma-4-en-3-one 9-O-β-D-glucopyranoside showed none antioxidant activity. Keywords: Schinopsis

106 f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-05T13:23:56Z No. of bitstreams: 1 Tese Larissa Rezende.pdf: 2690263 bytes, checksum: 4461df09facd5282efcaf6bceeddc6bd (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-05-09T13:01:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Larissa Rezende.pdf: 2690263 bytes, checksum: 4461df09facd5282efcaf6bceeddc6bd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-09T13:01:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Larissa Rezende.pdf: 2690263 bytes, checksum: 4461df09facd5282efcaf6bceeddc6bd (MD5) Previous issue date: 2010 / CNPq / Este trabalho descreve o estudo fitoquímico do extrato em acetato de etila dos frutos de Genipa americana L. e do extrato em diclorometano das sementes de Spondias mombin L., bem como a determinação do teor de fenólicos totais pelo método convencional de Folin-Ciocalteu e avaliação da atividade antioxidante, medida através dos métodos do sequestro radical livre DPPH e da auto-oxidação do sistema β-caroteno/ácido linolênico das frutas tropicais, Spondias mombin L. (cajá), Spondias purpurea L. (siriguela), Genipa americana L. (jenipapo), Manilkara achras L. (sapoti), Spondias tuberosa L. (umbu) e Myrciaria cauliflora Berg. (jabuticaba), consumidas na Bahia. Além disso, foi avaliada a concentração de fenólicos totais e atividade antioxidante de diversas partes da jabuticaba, após ser avaliado por planejamento fatorial, diferentes solventes empregados na extração dos fenólicos. Assim, a partir de sucessivos fracionamentos do extrato acetato de etila dos frutos de G. americana foram isolados a mistura de ácido cinâmico e ácido octanóico, a mistura de sitosterol e estigmasterol, além de ácido octanóico, ácido cinâmico e escopoletina. A partir do extrato em diclorometano das sementes de Spondias mombin L. foram isolados o glicerol 1,3-dioleoil-2-linoleoil, a mistura de β-sitosterol e estigmasterol, além da mistura de 1-hidroxi-3-[(Z)-10’-octadecenil]-benzeno e 1-hidroxi-3-[(Z)-10’-docosenil]-benzeno. A elucidação estrutural das substâncias isoladas foi baseada na análise de dados de espectros de Massas, dos espectros de RMN 1H e 13C e comparação com dados da literatura. O teor de compostos fenólicos expressos em miligramas equivalentes ao ácido gálico das frutas variou na faixa de 50,25 ± 4,59 a 1405,79 ± 35,97 para as polpas congeladas, e de 193,87 ± 8,32 a 5198,11 ± 410,92 para polpas liofilizadas. Foi verificado que as diferentes partes de jabuticaba (polpa, casca e suco) apresentavam elevada concentração de compostos fenólicos, sendo que o suco de jabuticaba apresentava a menor concentração de fenólicos (270,66 mg/100g). Assim, foi evidenciado a significativa atividade antioxidante da casca da jabuticaba, bem como, o fato de que todas as amostras estudadas apresentavam elevada concentração de compostos fenólicos, sendo que as polpas, congelada e liofilizada, de jabuticaba apresentavam a maior concentração de fenólicos. / Salvador

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-09T14:23:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertação corrigifa aos defesa.pdf: 1579566 bytes, checksum: 212d44a2c53e2dbbae9af296ae48959c (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-19T12:56:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação corrigifa aos defesa.pdf: 1579566 bytes, checksum: 212d44a2c53e2dbbae9af296ae48959c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-19T12:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação corrigifa aos defesa.pdf: 1579566 bytes, checksum: 212d44a2c53e2dbbae9af296ae48959c (MD5) Previous issue date: 2010 / CAPES / Própolis é uma mistura complexa, formada basicamente por secreções salivares das abelhas e por um material resinoso e balsâmico coletado por elas dos ramos, flores, pólen, brotos e exsudados de árvores, à qual têm sido atribuídas propriedades antimicrobiana, antioxidante, antiinflamatória, antiviral entre outras. Sua composição varia com a flora da região e época da colheita. Este trabalho descreve o perfil cromatográfico dos extratos hexânicos e metanólicos da própolis da Bahia obtidos por maceração, bem como o isolamento e a elucidação estrutural de algumas substâncias presentes na fase hexânica da própolis marrom clara, e avaliação da atividade antioxidante e citotóxica dos extratos. Utilizando-se métodos cromatográficos usuais (CC, CCDC e CCDP) foram isolados do extrato hexânico o trans cinamato de metila, o cinamato de sitosterila que tem seu primeiro relato na própolis, além de duas benzofenonas a hyperibona A e a clusianona, esta última também identificada pela primeira vez na própolis. As estruturas das substâncias isoladas foram elucidadas através da análise dos dados obtidos pelos espectros no IV, de RMN de 1H, 13 C, DEPT, além de técnicas bidimensionais (COSY, HMBC e HMQC). Os testes de atividade antioxidante in vitro utilizando a metodologia do seqüestro do radical estável DPPH, demostraram que os extratos apresentaram moderada atividade antioxidante quando comparados com o padrão ácido gálico. Nos ensaios de atividade citotóxica frente Artemia salina os extratos apresentaram CL50 < 145 ug/mL podendo ser um indicativo de atividade antitumoral. / Salvador

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-04-22T14:46:07Z No. of bitstreams: 5 André Barreiros 5.pdf: 1310338 bytes, checksum: d59dc4bf426cac1e442be4eb9ee6d894 (MD5) André Barreiros 4.pdf: 1401764 bytes, checksum: 07e4fdbbe9dd39da5506e4d366f674d3 (MD5) André Barreiros 3.pdf: 1612776 bytes, checksum: 615c8ab2914ba19f8eb7af1b4c5d83cf (MD5) André Barreiros 2.pdf: 1211895 bytes, checksum: c2f0cb1c002d0263b0c0a42dbdda2a14 (MD5) André Barreiros 1.pdf: 239109 bytes, checksum: d5ef73879c018bc308a7c7bb697a9ebc (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-22T14:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 5 André Barreiros 5.pdf: 1310338 bytes, checksum: d59dc4bf426cac1e442be4eb9ee6d894 (MD5) André Barreiros 4.pdf: 1401764 bytes, checksum: 07e4fdbbe9dd39da5506e4d366f674d3 (MD5) André Barreiros 3.pdf: 1612776 bytes, checksum: 615c8ab2914ba19f8eb7af1b4c5d83cf (MD5) André Barreiros 2.pdf: 1211895 bytes, checksum: c2f0cb1c002d0263b0c0a42dbdda2a14 (MD5) André Barreiros 1.pdf: 239109 bytes, checksum: d5ef73879c018bc308a7c7bb697a9ebc (MD5) Previous issue date: 2005 / O presente trabalho descreve o estudo fitoquímico de Dioclea violacea Mart. além da avaliação das atividades antioxidante e imunomoduladora das substâncias isoladas. Dioclea violacea é uma trepadeira pertencente à família Leguminosae (Fabaceae), subfamília Faboideae (Papilionoideae), tribo Phaseoleae, que ocorre no litoral desde a Guiana até o estado de São Paulo. O caule de um espécime foi coletado no município de Umburanas, Bahia, em área de vegetação de caatinga e relevo de tabuleiro. Após secagem e moagem o material foi submetido à maceração com metanol. O extrato metanólico obtido foi particionado fornecendo os extratos hexânico, clorofórmico e acetato de etila. Os extratos foram submetidos a purificação separadamente, sendo seus constituintes isolados e purificados através de técnicas de CC e CCDP em gel de sílica 60, 60H, 60PF, Poliamida 6 e 11 e permeação em gel de Sephadex LH20. Deste modo, as substâncias isoladas tiveram suas estruturas elucidadas através da análise de dados de RMN de 1H, 13C incluindo experimentos DEPT, ?nOe diff?, além de técnicas bidimensionais como HETCOR, HOMO/COSY, HMQC, HMBC, NOESY, auxiliadas por EMIE, FAB, UV, IV, [a]D25 e CD. Do extrato hexânico foram isolados e identificados a-tocoferol, estigmast-4-en-3-ona, b-sitosterol, estigmasterol, lupeol e b-amirina. Do extrato clorofórmico foram isolados ácido oleanólico, a nova flavanona 7,4?-diidroxi-6-metoxiflavanona, além das 7-hidroxi-6-metoxiflavanona, 5,7-diidroxiflavanona, 5,7-diidroxi-8-metoxiflavanona, 7-hidroxiflavanona, 4?,7-diidroxiflavanona, 7,3?,4?-triidroxiflavanona já anteriormente isoladas de outras fontes. Além disso, foram também isolados deste extrato o 7-hidroxi-6-metoxiflavanonol, 2?,4? diidroxichalcona, 2?,4,4?-triidroxi-3-metoxichalcona, 2?,3,4,4?-tetraidroxichalcona, além da lactona lasiodiplodina e de um novo biflavonóide a,b?-epoxi,-2,2?,4?-triidroxichalcona-(b®4?)-7,4?-diidroxi-6-metoxiflavanona. Enquanto que, do extrato acetato de etila foram isolados a epicatequina, a proantocianidina do tipo A denominada 3?,4?,7-triidroxiflavana-(2b®7,4b®8)-3-prenil-fustina, e outras duas proantocianidinas do tipo A2; epicatequina-(2b®7,4b®8)-epicatequina e epigalocatequina-(2b®7,4b®8)-epicatequina. As substâncias isoladas foram submetidas a testes de atividade antioxidante pelos métodos de inibição da autooxidação do b-caroteno, e seqüestro do radical livre DPPH, sendo que a epicatequina e as proantocianidinas epicatequina-(2b®7,4b®8)-epicatequina e epigalocatequina-(2b®7,4b®8)-epicatequina foram as mais ativas. Algumas das substâncias foram submetidas a testes de atividade imunomoduladora pelos métodos de inibição da proliferação de linfócitos e inibição da síntese de NO, onde a 7 hidroxiflavanona demonstrou maior atividade. A substância mais ativa 7-hidroxiflavanona foi sintetizada a partir da reação de esterificação do ácido cinâmico com o resorcinol em presença de ácido polifosfórico, seguida de rearranjo de Fries e ciclização, porém com baixo rendimento (1,6%). Os produtos principais da reação foram a 7-hidroxi-3,4-diidro-4-fenilcumarina (68,7%) e a 5-hidroxi-3,4-diidro-4-fenilcumarina (11,2%). / Salvador

O cultivo de plantas das espécies de Vitis (Vitaceae), conhecidas popularmente como videiras, representa uma das atividades econômicas mais proeminentes no Sul do Brasil. Figuram entre as espécies mais ricas em compostos polifenólicos, sendo os mesmos responsáveis por inúmeras atividades biológicas e farmacológicas importantes, dentre as quais, a antioxidante. Neste contexto, este trabalho objetivou analisar quali e quantitativamente os principais grupos polifenólicos encontrados em extratos de videiras, os antocianos e flavonóides, bem como realizar ensaio para avaliação da atividade antioxidante in vitro. Neste sentido foram desenvolvidos e validados dois métodos por cromatografia líquida de alta eficiência, com detector UV/VIS. A análise dos compostos fenólicos incluíram a utilização de duas colunas diferentes, sendo uma constituída por sílica C18 e outra RP-18 com partículas híbridas contendo ligações etano-silicone. Em ambos os métodos foram utilizados sistema de eluição em gradiente, cuja composição das fases móveis foram água e acetonitrila acificadas com ácido trifluoracético. Os métodos desenvolvidos foram validados segundo as normas vigentes e atenderam aos parâmetros de validação como especificidade, linearidade, precisão, sensibilidade, exatidão e robustez nas faixas de concentração avaliadas. O presente estudo também investigou a atividade antioxidante in vitro dos extratos de videira através do método potencial antioxidante reativo total (TRAP), o qual foi otimizado e validado segundo normas internacionais, utilizando Trolox como referência. A partir deste método também foi possível avaliar a reatividade total antioxidante (TAR). Todas as concentrações testadas apresentaram reatividade instantânea inferior ao composto de referência, entretanto, demonstraram atividade antioxidante superior ao Trolox 200 nM. / The cultivation of plants from Vitis species (Vitaceae), popularly known as grapevine, is one of the most prominent economic activities in southern Brazil. The Vitis species is one of the plants that is most rich in polyphenolic compounds, responsible for numerous important pharmacological and biological activities, such as antioxidant activity. In this context, this study aimed to analyze qualitatively and quantitatively the principal groups encountered in grapevine extracts, the anthocyans and flavonoids, and to assay their antioxidant activities in vitro. For this purpose, two methods were developed and validated using high-performance liquid chromatography, employing a UV/VIS detector. The analysis of phenolic compounds included the utilization of two different columns: a column constituted by silica C18 and other RP18 column with bridged ethane-silicon hybrid particles. In both methods, a gradient system was used, with water and acetonitrile acidified with trifluoroacetic acid as a mobile phase. The methods developed were validated according to ICH evaluating parameters such as specificity, linearity, precision, sensibility, accuracy and robustness in the concentration range evaluated. The present study also analyzed the antioxidant activity in vitro of grapevine extracts employing the Total Reactive Antioxidant Potencial (TRAP) method, which was optimized and validated according to international patterns, using Trolox as a reference substance. This method also allowed evaluation of the total instantaneous reactivity (TAR). In all concentrations, the samples presented lower instantaneous reactivity than that of the reference compound. In contrast, the samples presented higher antioxidant activity than Trolox 200 nM.

A doença de Alzheimer é uma doença neurodegenerativa que causa perdas de memória, danos cognitivos e no comportamento, sendo considerada uma das causas principais de demência entre a população. Esta doença é caracterizada por uma intensa perda neuronal colinérgica, de forma que tanto os inibidores da enzima acetilcolinesterase (AChE) quanto compostos antioxidantes possam ser empregados como neuroprotetores. Nesse sentido, plantas da família Lycopodiaceae vêm sendo estudadas como fonte de novos alcalóides anticolinesterásicos desde a descoberta da huperzina A, isolada a partir da planta chinesa Huperzia serrata. Este trabalho foi realizado com o objetivo de caracterizar e isolar os alcalóides majoritários de Huperzia acerosa, H. heterocarpon, H. quadrifariata, H. reflexa, Lycopodiella cernua, Lycopodium clavatum e L. thyoides, de ocorrência no estado do Rio Grande do Sul, bem como avaliar as atividades anticolinesterásicas e antioxidantes in vitro e in vivo para os extratos. Extratos de alcalóides totais de espécies de L. clavatum e L. thyoides ocorrentes no Brasil e Argentina foram comparados quanto ao seu conteúdo químico, aliado à atividade anticolinesterásica. A atividade inibitória para AChE e butirilcolinesterase (BuChE) dos alcalóides isolados também foi ensaiada, juntamente com a determinação das propriedades citotóxicas exercidas pelos extratos sobre uma linhagem de gliomas C6. Todos os extratos de alcalóides foram analisados através de CG-EM, sendo os perfis de fragmentação dos compostos comparados através de dados da literatura. L. clavatum e L. thyoides possuem perfil químico similar, com licopodina e acetildiidrolicopodina como alcalóides principais, enquanto que L. cernua possui apenas dois alcalóides, cernuína e licocernuína. Os extratos de alcalóides de H. acerosa, H. quadrifariata e H. reflexa também foram analisados, sendo detectados tanto compostos do grupo licopodano quanto do grupo flabelidano, juntamente com outros alcalóides cujas estruturas ainda são desconhecidas. Os alcalóides encontrados em H. heterocarpon não puderam ser elucidados a partir de dados de fragmentação, uma vez que eles não coincidiram com nenhum perfil da literatura. Nesse estudo verificamos que dentre os extratos analisados, H. quadrifariata e H. reflexa promoveram a maior inibição para a enzima AChE obtida de eritrócitos humanos, com IC50 de 2,0 e 0,11 μg/mL, respectivamente, enquanto que H. heterocarpon foi o único extrato com maior seletividade para a BuChE (IC50 = 8,3 μg/mL). Além disso, dentre os alcalóides isolados licopodina, acetildiidrolicopodina, cernuína, licocernuína e clavolonina, apenas acetildiidrolicopodina e cernuína possuem inibição importante, sendo que nenhum deles possui efeito butirilcolinesterásico significativo. Também foi estimada a atividade anticolinesterásica para os extratos de alcalóides totais de L. clavatum e L. thyoides empregando-se homogenatos de córtex, hipocampo e estriato de ratos como fonte enzimática, sendo determinadas suas curvas de inibição com distintos tempos de incubação em uma faixa de concentrações. Também foi verificada para os dois extratos uma inibição do tipo competitiva/não-competitiva, bem como seu perfil antioxidante in vitro pelos métodos de descoloração do radical DPPH, degradação da 2-deoxirribose, TRAP e óxido nítrico. Após um tratamento agudo em camundongos de 14 meses com os extratos, foram verificados os efeitos antioxidantes através do método de TBA-RS, e para as enzimas catalase e superóxido dismutase. Do mesmo modo, verificamos que os mesmos extratos promoveram uma diminuição na atividade da acetilcolinesterase, quando administrados por via intraperitoneal. Nessa metodologia, os extratos mais potentes foram H. quadrifariata e H. reflexa, corroborando o efeito in vitro encontrado para os mesmos. Os extratos purificados de alcalóides de L. clavatum e L. thyoides com habitat no Brasil e Argentina foram comparados quanto ao seu perfil químico e biológico. Nesse estudo, foi verificado que os alcalóides licopodina e acetildiidrolicopodina são os compostos majoritários para todas as espécies, tendo L. clavatum maior atividade anticolinesterásica em relação a L. thyoides, tanto a espécie brasileira quanto a espécie argentina. / Alzheimer’s disease is a neurodegenerative disease which causes memory loss, cognitive and behavioral damages, considered to be the leading cause of dementia among the elderly. This disease is characterized for an intense cholinergic loss, and the use of acetylcholinesterase (AChE) inhibitors together with antioxidant compounds as neurprotectors is a strategy for the treatment. In this sense, Lycopodiaceae plants are well studied as a source of new anticholinesterasic alkaloids since the discovery of huperzine A, isolated from Chinese Huperzia serrata. This work was conducted with the objective of characterize and isolate the main alkaloids from Huperzia acerosa, H. heterocarpon, H. quadrifariata, H. reflexa, Lycopodiella cernua, Lycopodium clavatum and L. thyoides, with occurrence in Rio Grande do Sul state, and also evaluate the anticholinesterasic and antioxidant activities in vitro and in vivo for the extracts. Alkaloidal extracts from L. clavatum and L. thyoides species with habitat in Brazil and Argentina were compared to their chemical content, together with their anticholinesterasic activity. The inhibitory effect for AChE and butyrylcholinesterase (BuChE) for the isolated alkaloids was also evaluated, together with the determination of the cytotoxic properties exherced by the extracts in a gliome C6 cell line. Every alkaloidal extract was analyzed by means of GC-MS, and the fragmentation patterns for the compounds were compared with those from literature. L. clavatum and L. thyoides have similar chemical profile, with lycopodine and acetyldihydrolycopodine as main alkaloids, while L. cernua has only two alkaloids, cernuine and lycocernuine. The alkaloidal extracts of H. acerosa, H. quadrifariata e H. reflexa were also analyzed, and compounds from lycopodane and flabellidane groups were detected, along with other alkaloids whose structures are still unknown. The alkaloids found in H. heterocarpon could not be elucidated with fragmentation dates so far, since they did not coincide with those found in literature. We also verified that among the extracts, H. quadrifariata and H. reflexa promoted a higher inhibition for AChE obtained from human erythrocytes, with a IC50 value of 2,0 e 0,11 μg/mL, respectively, while H. heterocarpon extract was the only more selective for BuChE (IC50 = 8,3 μg/mL). Moreover, among the isolated alkaloid lycopodine, acetyldihydrolycopodine, cernuine, lycocernuine and clavolonine, only acetyldihydrolycopodine and cernuine possess an important inhibition, and none significantly inhibited butyrylcholinesterase. It was also assessed the anticholinesterase effect for the alkaloidal extracts of L. clavatum and L. thyoides employing cortex, hippocampus and striatum rat brain homogenates as enzymatic sources, being determined the incubation time-inhibition curves over a concentrations range. It was also verified for both extracts an inhibitory effect of the competitive/non competitive mixed type, as well as their in vitro antioxidant profile using the methods of DPPH radical decoloration, 2-deoxyrribose degradation, TRAP and nitric oxide. After an acute treatment in 14 months-aged mice, we verified the antioxidant effects though TBA-RS and also the enzymes catalase and superoxide dismutase. In the same way, we found out that the same extracts reduced the acetylcholinesterase activity when administered by intraperitoneal injection. Using this methodology, the most potent extracts were H. quadrifariata and H. reflexa, corroborating the in vitro effect found for them. The purified alkaloidal extracts of L. clavatum and L. thyoides with habitat in Brazil and Argentine were compared to their chemical and biological profile. In this study, we found out that lycopodine and acetyldihydrolycopodine are the main alkaloids found for all species, and L. clavatum possesses a better inhibition against AChE when compared to L. thyoides for both Brazilian and Argentinean collected species.

Metabólitos secundários são produzidos por alguns grupos vegetais e são essenciais nas diferentes estratégias de adaptação às adversidades ambientais, atuando na proteção e comunicação das plantas, sendo responsivos a diversos fatores bióticos e abióticos. Entre as diversas categorias de metabólitos secundários, os alcalóides apresentam principal função relacionada à defesa contra herbívoros; atuam também na proteção contra patógenos e na interação química com outras plantas (alelopatia). Alcalóides monoterpenos indólicos (MIAs) são uma classe de alcalóides de origem biossintética mista, e apresentam propriedades farmacológicas conhecidas (e.g. MIAs de Catharanthus roseus e Rauwolfia serpentina). MIAs provenientes de algumas espécies de Psychotria do Sul do Brasil são descritos como agentes antioxidantes, antimutagênicos, ansiolíticos, antidepressivos, antipsicóticos e analgésicos, apresentando grande potencial farmacológico. N,β-D-glicopiranosil vincosamida (GPV) é o alcalóide majoritário de Psychotria leiocarpa (Rubiaceae – APG III), apresentando estrutura semelhante a alguns alcalóides bioativos de Psychotria da região, com a peculiaridade de ser N-glicosilado. No presente trabalho, foi avaliado o efeito de dano mecânico e aplicação de jasmonato sobre o acúmulo de GPV no contexto de um possível papel do alcalóide em respostas à herbivoria, além de propriedades antioxidantes do composto. O teor de GPV se manteve constante após a aplicação dos tratamentos, ao longo de todo o experimento. Portanto, a estratégia de acúmulo deste alcalóide segue o padrão de fitoanticipina. No ensaio de dano mecânico os teores de compostos fenólicos também foram monitorados e se mantiveram constantes. Ensaios de herbivoria utilizando dois modelos generalistas e um especialista, não constataram eficácia do GPV na proteção contra estes predadores. Ensaios de atividade contra oxigênio singleto, ânions superóxido, radicais hidroxil e peróxido de hidrogênio revelaram ampla atividade antioxidante, com alguns resultados similares ao controle positivo (Trolox, um análogo da vitamina E). Os resultados obtidos neste trabalho, juntamente com dados existentes da literatura para metabólitos correlatos, sugerem uma função fundamentalmente antioxidante de MIAs de Psychotria, atuando como um modulador de estresse oxidativo. / Some plants groups accumulate secondary metabolites, which may play a major role in different strategies to deal with environmental challenges, being responsive to several biotic and abiotic factors and functioning as protection and communication agents. Among secondary metabolites, alkaloids play a major role as anti-feedant agents and are also involved in pathogen protection and chemical interaction (allelopathy). Monoterpene indole alkaloids (MIAs) are derived from two distinct biosynthetic pathways and possess well known pharmacological properties (e.g. MIAs from Catharanthus roseus and Rauwolfia serpentina). MIAs from Southern Brazilian Psychotria have been characterized as antioxidant, antimutagenic, ansyolitic, antidepressive, antipsychotic and analgesic agents, therefore bearing relevant pharmacological potential. N,β-D-glucopyranosil vincosamide (GPV) is the major alkaloid from Psychotria leiocarpa (Rubiaceae - APG III) and its structure, besides being additionally glycosylated in the N indol ring, is similar to a few bioactive alkaloids from native Psychotria species. In the present work, the effects of wounding and jasmonate application on GPV accumulation, and also antioxidant properties, were evaluated in the context of a potential role of the alkaloid in herbivory responses. GPV content remained constant after treatments, at all times of exposure. Therefore, GPV seems to present a phytoanticipin-like accumulation pattern. In the mechanical wounding assay, phenolic compounds content was also monitored and remained constant. In two herbivory assay models, a generalist and a specialist, GPV was not efficient to prevent herbivore feeding. Singlet oxygen, superoxide anions, hydroxyl radicals and hydrogen peroxide assays showed GPV has broad antioxidant activity, in some cases with activity equivalent to the positive control (Trolox, a vitamin E analog). The results obtained in this work, together with published results from our research group, strongly suggest an antioxidant role for Psychotria MIA alkaloids, which may act as oxidative stress modulators.

Filmes biodegradáveis são uma alternativa ao uso de embalagens não biodegradáveis, relacionado ao aumento do uso deste material, impacto e descarte inadequado. Para produção de filmes diversos polímeros podem ser utilizados, em que o amido apresenta boas características e propriedades para obtenção. A adição de antioxidantes naturais nanoencapsulados, como carotenoides, pode auxiliar no desenvolvimento de filmes biodegradáveis com atividade antioxidante, com maior estabilidade e solubilidade destes compostos. Assim, filmes biodegradáveis ativos foram obtidos a partir do amido de mandioca com adição de licopeno ou β-caroteno livres e nanoencapsulados. Diferentes formulações foram desenvolvidas, nos quais os antioxidantes naturais livres ou nanoencapsulados foram adicionados a mesma concentração. Os filmes com adição dos pigmentos nanoencapsulados apresentaram características diferentes da adição dos pigmentos livres, com maior espessura, permeabilidade ao vapor de água, opacidade, propriedades mecânicas, menor transmissão de luz UV/Vis e maior interação do aditivo com a matriz. Os filmes com nanocápsulas também apresentaram maior efeito protetor sobre a estabilidade do óleo de girassol armazenado sob condição acelerada de oxidação, com menor formação de produtos de oxidação e potencial aplicação como embalagem de alimentos. Os filmes foram utilizados para avaliar a estabilidade oxidativa de manteiga, que apresentou maior estabilidade e manutenção da qualidade durante o armazenamento sob incidência de luz quando armazenada nos filmes com adição de nanocápsulas. Além disso, independente da adição de licopeno ou β-caroteno livres e nanoencapsulados, todos os filmes apresentaram estabilidade térmica e rápida biodegradabilidade após 15 dias. Filmes biodegradáveis com adição de carotenoides, licopeno e β-caroteno, apresentaram resultados promissores para o desenvolvimento de embalagens com antioxidantes naturais e manutenção da estabilidade de alimentos com alto teor de gordura durante o armazenamento. / Biodegradable films are an alternative to use of non-biodegradable packaging, related to increased use of this material, impact and inappropriate disposal. For film production, various polymers may be used, wherein the starch has good characteristics and properties for obtaining. The addition of natural nanoencapsulated antioxidants, such as carotenoids, may aid the development of biodegradable films with antioxidant activity, with greater stability and solubility of these compounds. Thus, active biodegradable films were obtained from cassava starch with the addition of free and nanoencapsulated lycopene or β-carotene. Different formulations were developed, where free or nanoencapsulated natural antioxidants were added at the same concentration. The films with the addition of nanoencapsulated pigments presented different characteristics of free pigment addition, with greater thickness, permeability to water vapor, opacity, mechanical properties, lower transmission of UV/Vis light and greater interaction of the additive with the matrix. The films with nanocapsules also had a greater protective effect on the stability of the sunflower oil stored under accelerated oxidation conditions, with less formation of oxidation products and potential application as food packaging. The films were used to evaluate the oxidative stability of butter, which presented higher stability and maintenance of the quality during storage under light incidence when stored in the films with the addition of nanocapsules. In addition, independent of the addition of free and nanoencapsulated lycopene or β-carotene, all films showed thermal stability and rapid biodegradability after 15 days. Biodegradable films with the addition of carotenoids, lycopene and β-carotene, presented promising results for the development of packages with natural antioxidants and maintenance of the stability of foods with high-fat content during storage.

Achyrocline satureioides (AS) - Asteraceae é uma planta medicinal amplamente usada na América do Sul. Uma vasta literatura tem mostrado a atividade antioxidante dos extratos de AS. Tal atividade tem sido relacionada às principais agliconas flavonoídicas dos extratos de AS: quercetina, luteolina e 3-O-metilquercetina. Neste estudo, descrevemos o desenvolvimento de hidrogéis antioxidantes contendo extrato de AS incorporado em nanoemulsões, objetivando a aplicação tópica. Em uma primeira etapa, nanoemulsões compostas do extrato de AS, triglicerídeos de cadeia média, lecitina de gema de ovo, polissorbato 80 e água foram preparadas por emulsificação espontânea. Este procedimento conduziu à obtenção de nanoemulsões monodispersas (índice de polidispersão <0,2) com tamanho médio de gotícula de 250 nm, confirmado por microscopia eletrônica de transmissão, e potencial zeta de aproximadamente -50 mV. Tais propriedades foram similares após a incorporação das nanoemulsões em hidrogéis de Carbopol Ultrez (0,15%) e estas mantiveram-se inalteradas ao longo do tempo (até 90 dias). Os hidrogéis exibiram um comportamento não-Newtoniano pseudoplástico. Foi observada uma maior liberação de 3-O-metilquercetina a partir das ASNE quando comparada com o HASNE. Estudos de permeação/retenção em pele de orelha suína foram realizados utilizando células de difusão do tipo Franz durante 8 horas. Os flavonoides foram retidos progressivamente na pele com um aumento na quantidade de formulação colocada no compartimento doador, até atingir um platô em aproximadamente 2 ug/cm2. Neste platô foi detectada uma maior retenção de 3-O-metilquercetina em comparação com os outros flavonoides. Finalmente, a proteção da pele de orelha suína pelas formulações contra o estresse oxidativo gerado pela luz UVA/UVB, foi evidenciado por meio de técnicas como TBARS, carbonilação de proteínas e grupamentos tióis totais. Os resultados globais mostraram o potencial das formulações desenvolvidas neste estudo visando à prevenção do estresse oxidativo na pele. / Achyrocline satureioides (AS) - Marcela is a medicinal plant widely used in South America. A well-documented literature has shown the antioxidant activity of the extracts of A. satureioides. Such activity has been related to the main aglycone flavonoids of AS: quercetin, luteolin, and 3-O-methylquercetin. In this study, we described the development of antioxidant hydrogels containing an A. satureioides extract-loaded nanoemulsions aimed at topical application. In the first step, nanoemulsions composed of A. satureioides extract, medium chain triglycerides, lecithin yolk egg, polysorbate 80, and water were prepared by means of the spontaneous emulsification. This procedure led to obtaining monodisperse nanoemulsions (polydispersity index <0.2) with average droplet size of 250 nm, confirmed by transmission electron microscopy, and zeta potential of approximately -50mV. Such properties were quite similar after thickening of nanoemulsions with Carbopol® Ultrez (0.15%) and remained unchanged over time (up to 90 days). Hydrogels exhibit a non-Newtonian pseudoplastic behavior. A higher release of 3-O-mehylquercetin from ASNE was observed when compared with HASNE. Studies of flavonoids permeation/retention through porcine ear skin were performed using Franz diffusion cells during 8 hours. Flavonoids were progressively retained into the porcine ear skin with an increase of the amount of formulation placed in donor compartment, until it reached a plateau of approximately 2 ug/cm2. At this plateau, it was detected a higher retention of 3MQ in comparison with other flavonoids. Finally, a protection the porcine ear skin by formulations, against oxidative stress generated by UVA/UVB light, was demonstrated by means of TBARS, protein carbonylation, and total protein thiol content assays. The overall results showed the potential of the formulations developed in this study for the prevention of oxidative stress on the skin.