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Biological control of clubroot (Plasmodiophora brassicae) by an endophytic fungus (Acremonium alternatum)Auer, Susann 18 August 2015 (has links)
The biological control of plant pests with beneficial microbes has become increasingly important over the last decades. Soil microbes such as fungi and bacteria colonise the roots of plants and promote their growth. Some beneficial microbes can trigger a weak plant defence response that enhances the immune response of the plant at subsequent pathogen attacks and therefore increase the resistance of the plant to other invaders. This mechanism is called “priming”.
While biocontrol agents are applied against a variety of plant pests fundamental knowledge of the molecular mechanisms of plant-microbe interactions is still lacking. Especially molecular studies on the role of resistance genes in the interaction of plants with beneficial endophytic fungi are rare.
In this study it was investigated how the fungal biocontrol agent Acremonium alternatum affects the development of the clubroot pathogen Plasmodiophora brassicae within the plant host Arabidopsis thaliana. Clubroot is a devastating disease in crop plants such as cabbage and rapeseed and causes abnormal root growth that leads to so called “club roots”. P. brassicae develops within the plant roots and forms resting spores that are very durable and stay infective in soils for up to 2 decades. The control of clubroot by chemical means is difficult and the disease continues to spread on all continents and was also found in Saxony, Germany in recent years.
In 2 preliminary studies the co-inoculation of clubroot plants with the fungus A. alternatum resulted in reduced clubroot symptoms in Chinese cabbage and Arabidopsis. It was therefore hypothesised that A. alternatum induces resistance mechanisms in the plant and thus enhances immunity.
The focus of this study was to test this hypothesis by carrying out expression analyses on root tissue of infected Arabidopsis plants. For this the plants were inoculated with spores of P. brassicae and A. alternatum before RNA was extracted from the roots, followed by cDNA synthesis and quantitative Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR). A microarray of root tissue of infected Arabidopsis plants was carried out to depict the events at the stage of initial root hair infection with the clubroot pathogen. The findings from the gene expression analyses were verified for 2 genes with Arabidopsis mutants that are defective in the respective gene and with 2 overexpressor lines.
Clubroot symptoms were assessed by rating the root galls according to their stage of development. The overall plant health was further evaluated by recording the developmental stage of the plants (generative vs. vegetative), stem lengths and plant biomass. In addition, 2 local varieties of the economically important crop plant rapeseed (Brassica napus var. Ability and var. Visby) were investigated with qRT-PCR and by recording the disease parameters just described.
A second goal of this study was to assess the general biocontrol potential of the yet relatively unknown endophyte A. alternatum in terms of enzymatic activity and competitive behaviour against other phytopathogenic fungi. The potential of this fungus for the use in integrative pest management was investigated. The results presented here are novel findings for this fungus and have not been studied before.
The microarray from Arabidopsis roots revealed that the clubroot pathogen P. brassicae suppresses its recognition by pathogen receptors of the plant and thus prevents the host to induce resistance mechanisms. The fungus A. alternatum boosted the level of the pathogen recognition-related genes BAK1 and FLS2 and thus helped to establish early plant defence responses. PCR analyses confirmed that these early responses led to salicylic acid-dependent resistance in the plants which was maintained for several days as shown by elevated levels of the PATHOGENESIS-RELATED gene PR1. Marker genes for an alternative resistance pathway that is mediated over the plant signals jasmonate and ethylene were not activated in Arabidopsis.
The co-inoculation of Arabidopsis plants with the endophyte A. alternatum resulted in a significant reduction of clubroot symptoms by up to 24%. In rapeseed the reduction of disease symptoms was 19% and 28% when the plants were treated with a crude cell wall extract of A. alternatum before inoculation with the clubroot pathogen. PCR analyses from Arabidopsis showed a strong response of pathogen recognition genes to the cell wall extract and spores of the endophytic fungus. In rapeseed all of the investigated pathogen recognition genes were upregulated after the endophyte treatment but not with the clubroot pathogen. Together with the PCR results from the microarray these findings suggest that A. alternatum primes its host plant and enhances the resistance of the plant towards P. brassicae. In addition, the fungus increased biomass, stem lengths and survival rates of clubroot-infected plants.
In vitro tests revealed that the endophyte can solubilise phosphate and is not very competitive against other phytopathogenic fungi such as Aspergillus or Fusarium which is likely an effect of the relatively slow growth of the endophyte on agar plates.
From this study it can be concluded that i) the fungus Acremonium alternatum induces resistance mechanisms in Arabidopsis and 2 Brassica napus cultivars and facilitates the recognition of the clubroot pathogen Plasmodiophora brassicae; ii) that Arabidopsis and Brassica react differently to this beneficial microbe, a fact that has been observed for Plasmodiophora and other microorganisms as well; iii) living spores are not necessary for clubroot biocontrol in rapeseed as a crude cell wall extract reduces symptoms more efficiently.
Overall the endophyte A. alternatum is a very promising candidate for the use in integrative pest management in plant strengtheners or as biocontrol agent. / Die biologische Kontrolle von Pflanzenkrankheiten gewinnt zunehmend an Bedeutung. Bodenbewohnende Mikroben wie Pilze oder Bakterien kolonisieren die Wurzeln von Pflanzen und fördern deren Wachstum. Einige dieser förderlichen Mikroben aktivieren eine schwache Abwehrreaktion in der Pflanze die sich verstärkt bei einer weiteren Infektion mit einem Krankheitserreger. Dieser Mechanismus, den man “Priming” nennt, führt zu einer verbesserten Resistenz der Pflanze gegenüber Pflanzenpathogenen.
Obwohl natürliche Schädlingsbekämpfer bereits gegen eine Vielzahl an Krankheiten eingesetzt werden, weiss man über grundsätzliche molekulare Mechanismen dieser Pflanzen-Mikroben-Interaktionen nur wenig. Besonders die Rolle von Resistenzgenen ist bisher wenig erforscht, welche bei der Beziehung zwischen Pilzen und Pflanzen eine Rolle spielen.
In der hier vorliegenden Arbeit wurde untersucht, wie der endophytische Pilz Acremonium alternatum die Entwicklung des Krankheitserregers Plasmodiophora brassicae in der Pflanze Arabidopsis thaliana beeinflusst. Die Kohlhernie, ausgelöst von P. brassicae, ist eine verheerende Krankheit die u. a. bei Kohl und Raps auftritt und Wurzelgallen, so genannte “Hernien”, hervorruft. Der Krankheitserreger entwickelt sich im Wurzelsystem der Pflanze und bildet Dauersporen, die bis zu 20 Jahre lang im Boden infektiös überdauern können.
Ein Eindämmen der Krankheit mit Pflanzenschutzmitteln ist durch den komplexen Lebenslauf des Erregers sehr schwierig, das führte zu einer weltweiten Verbreitung der Kohlhernie. Auch in Sachsen wurden in den letzten Jahren Fälle von Kohlhernie gemeldet. Wie 2 Studien zeigen, führt die Ko-Inokulation von Kohlhernie-erkrankten Pflanzen mit A. alternatum zu einer Verringerung der Symptome in Chinakohl und Arabidopsis. Es wurde daher die Hypothese aufgestellt, dass der Pilz Resistenzmechanismen in der Pflanze anschaltet und damit ihre Immunität erhöht.
Um diese Hypothese zu testen, wurden in der hier vorliegenden Studie Genexpressionsanalysen an infizierten Arabidopsiswurzeln durchgeführt. Dafür wurden die Pflanzen zunächst mit Sporen des Kohlhernieerregers und des Pilzes inokuliert, es wurde RNA aus den Wurzeln extrahiert, in cDNA umgeschrieben und diese mittels quantitativer Reverse-Transkriptase-Polymerasenkettenreaktion (RT-qPCR) untersucht. Ein Microarray von Wurzeln infizierter Pflanzen wurde durchgeführt um die Ereignisse abzubilden, die sich zeitnah nach der Infektion in den Wurzeln abspielen. Die Ergebnisse der Genexpressionsanalysen wurden dann an Arabidopsismutanten, die einen Gendefekt im jeweiligen Gen haben, und an Überexprimierer-Pflanzen verifiziert.
Kohlherniesymptome an Pflanzen wurden durch eine Kategorisierung der Schadsymptome erfasst. Die allgemeine Pflanzengesundheit sowie der Entwicklungsstand der Pflanze, Stengellängen und das Frischgewicht wurden bestimmt. Zusätzlich wurden 2 Rapssorten, die in Sachsen angebaut werden, untersucht im Hinblick auf die Krankheitsenwicklung und die Reguation von Abwehrgenen.
Ein weiteres Ziel dieser Arbeit war es das Biokontrollpotential des bisher schlecht untersuchten Pilzes A. alternatum zu bestimmen. Dazu wurde in vitro die Enzymaktivität des Pilzes getestet sowie seine Konkurrenzfähigkeit gegenüber anderen pflanzenpathogenen Pilzen. Das Potential des Pilzes für die Anwendung im integrierten Pflanzenschutz wurde getestet. Die hier präsentieren Ergebnisse stellen neue Erkenntnisse dar, die für diesen Pilz noch nie untersucht wurden. Der Microarray von Arabidopsiswurzeln zeigte, dass der Kohlhernieerregers die Erkennung durch die Pflanze verhindert und damit Abwehrmechanismen verhindert. Der Pilz A. alternatum förderte die Aktivität der pflanzlichen Erkennungsrezeptoren FLS2 und BAK1 und setzte damit die Erkennung von P. brassicae in Gang. PCR-Analysen ergaben, dass diese früh induzierten Abwehrmechanismen zu einer systemischen Resistenz in der Pflanze führte durch die Aktivierung des Pathogenese-relevanten Gens PR1. Genmarker, die die Aktivität eines alternativen, von Jasmonat und Ethylen vermittelten Abwehrweges anzeigen, waren nicht ativiert.
Die Ko-Inokulation von Arabidopsis mit dem Endophyten führte zu einer signifikanten Reduktion der Krankheitssymptome um 24%. In Raps betrug die Reduktion 19% und 24% wenn die Pflanzen vor der Kohlhernie-Infektion mit einem Zellwandextrakt des Pilzes behandelt wurden. Mittels PCR konnte gezeigt werden, dass Gene für das Erkennen von Pathogenen in der Wurzel von Arabidopsis auf den Zellwandextrakt und Sporen des Pilzes reagieren. In Raps wurden alle der untersuchten Erkennungsgene aufreguliert nach der Infektion mit A. alternatum, nicht jedoch bei der Infektion mit P. brassicae.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der endophytische Pilz A. alternatum die Wirtspflanze auf eine folgende Infektion vorbereitet (Priming) und systemische Abwehr-mechanismen in der Pflanze induziert, wenn diese mit Kohlhernie infiziert ist. Außerdem treibt der Pilz das Sprosswachstum voran, erhöht die Biomasse und fördert das Überleben von Kohlhernie-infizierten Pflanzen. In vitro-Tests ergaben, dass der Endophyt Kalziumphosphat löslich machen kann und wenig kompetitiv gegenüber Pflanzenpathogenen wie Aspergillus oder Fusarium ist. Dies ist vermutlich mit dem langsameren Wachstum des Endophyten im Gegensatz zu den anderen Pilzen zu erklären.
Aus den Ergebnissen dieser Arbeit lassen sich folgende Schlüsse ziehen: i) der endophytische Pilz Acremonium alternatum induziert Resistenzmechanismen in Arabidopsis und Raps und und fördert die Erkennung des Kohlhernieerregers Plasmodiophora brassicae; ii) Arabidopsis und Raps reagieren unterschiedlich auf diesen förderlichen Pilz, ein solcher Unterschied wurde bereits für Plasmodiophora und andere Mikroben beschrieben; iii) lebende Sporen des Pilzes sind nicht notwendig um Krankheitssymptome der Kohlhernie in Raps zu verringern, ein Zellwandextrakt von A. alternatum ist dafür besser geeignet.
Ganz allgemein lässt sich sagen, dass der endophytische Pilz Acremonium alternatum ein sehr vielversprechender Kandidat ist für den Einsatz im integrierten Pflanzenschutz in Pflanzenstärkungsmitteln oder als Biokontrollorganismus.
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WORKSHOP "MOBILITÄT"Anders, Jörg 12 June 2001 (has links)
Gemeinsamer Workshop von Universitaetsrechenzentrum und Professur "Rechnernetze und verteilte Systeme" der Fakultaet fuer Informatik der TU Chemnitz.
Workshop-Thema: Mobilitaet
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WORKSHOP "MOBILITÄT"Anders, Jörg 12 June 2001 (has links)
Gemeinsamer Workshop von Universitaetsrechenzentrum und Professur "Rechnernetze und verteilte Systeme" der Fakultaet fuer Informatik der TU Chemnitz.
Workshop-Thema: Mobilitaet
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Die Begleitung von Schwerkranken und Sterbenden unter Berücksichtigung des Copingmodells von Richard S. Lazarus und dessen Bedeutung für die Seelsorgearbeit = Pastoral counselling of seriously ill and dying humans with regard to the "coping model" by Richard S. Lazarus and its significance for spiritual guidance / Pastoral counselling of seriously ill and dying humans with regard to the "coping model" by Richard S. Lazarus and its significance for spiritual guidanceMenn, Gerhard 07 December 2007 (has links)
Text in German / Forschungsgegenstand dieser Arbeit ist das Bewältigungsverhalten von schwer kranken und
sterbenden Menschen, die in einer Gesellschaft ihren bevorstehenden Tod bewältigen müssen,
die ambivalent mit dieser Thematik umgeht. Die unterschiedlichen menschlichen Bewältigungsformen
können mit den bisher gängigen Zugangswegen über Phasenmodelle nicht
immer befriedigend erklärt werden. Hilfreich erscheint hier das aus der Stressforschung
stammende Copingmodell von Richard S. Lazarus und seiner Forschungsgruppe, um Menschen
verstehen zu lernen. In wieweit dieses Verstehensmodell aus einem säkularen Forschungszweig
für die Seelsorgearbeit unterstützend sein kann, soll in dieser Arbeit geklärt
werden. Als Grundlage dienen Seelsorgegespräche mit unterschiedlichen Menschen, die eine
große Bandbreite an Bewältigungsverhalten demonstrierten. Die Herausforderung lag darin,
Menschen in ihrem Sterben umfassend wahrzunehmen, um möglichst viele Impulse zu erkennen,
die ihr Bewältigungsverhalten beeinflussten. Aus der Aufarbeitung dieses Verhaltens
ergaben sich Perspektiven für die Begleitung sterbender Menschen. Dies hat gleichbedeutend
Konsequenzen für den seelsorgerlichen Umgang mit Sterbenden. Das Wissen um
das christlich-biblische Menschenbild und die umfassende Kenntnis der Copingforschung
können sich durchaus gegenseitig befruchten, denn beide gehen auf die Individualität des
Menschen ein und unterstützen ihn seinen eigenen Zugang zu seinem Leben und seinem Tod
finden zu lassen. Dies führt letztlich zu einer intensiven Kommunikation zwischen Patient
und Seelsorger, der den Mut und das Vertrauen haben darf, dem Sterbenden eigenständig
sein Leben bewältigen zu lassen. Die Ansätze der Copingforschung bieten weitreichende
Impulse für vielfältige seelsorgerliche Fragestellungen auch außerhalb der Sterbebegleitung.
Object of research of this thesis is the specific behaviour of seriously ill and dying humans
coping with their impending death and being members of a society having an ambivalent attitude
towards death. People's different and individual ways of coping cannot always be sufficiently
explained by the current use of phasing models. In this context the "Coping Model"
by Richard S. Lazarus and his stress research group seems to be helpful in understanding
dying humans. In how far this comprehension model from a secular branch of research can
be supportive of pastoral counselling is the objective of this thesis. Counselling dialogues
with different persons who show a wide range of coping form the basis of this research. The
challenge of this paper was to observe and sense humans in their death experiences from a
broader point of view in order to identify as much as possible kinds of impulses crucial to
their coping behaviour. Analysing the behaviour of dying humans led to new perspectives
on spiritual guidance. Tantamountly, this has its consequences for spiritual dealing with dying
humans. The comprehension of the biblical Christian idea of man and a detailed knowledge
of coping research can, by all means, be interactive and thus show positive results as
both respond to a person's individuality and support them in their own ways of approach to
life and death. Finally, this leads to an intensive dialogue between patient and pastor who
can have the courage and the confidence in letting the person find his own way of coping.
The different kinds of approach of the coping model research offer far-reaching impulses to
various pastoral questions going even beyond terminal care. / Philosophy, Practical & Systematic Theology / D.Th. (Practical Theology)
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Begleitung von Schwerkranken und Sterbenden unter Berücksichtigung des Copingmodells von Richard S. Lazarus und dessen Bedeutung für die Seelsorgearbeit / Pastoral counselling of seriously ill and dying humans with regard to the "coping model" by Richard S. Lazarus and its significance for spiritual guidanceMenn, Gerhard 07 December 2007 (has links)
Text in German / Forschungsgegenstand dieser Arbeit ist das Bewältigungsverhalten von schwer kranken und
sterbenden Menschen, die in einer Gesellschaft ihren bevorstehenden Tod bewältigen müssen,
die ambivalent mit dieser Thematik umgeht. Die unterschiedlichen menschlichen Bewältigungsformen
können mit den bisher gängigen Zugangswegen über Phasenmodelle nicht
immer befriedigend erklärt werden. Hilfreich erscheint hier das aus der Stressforschung
stammende Copingmodell von Richard S. Lazarus und seiner Forschungsgruppe, um Menschen
verstehen zu lernen. In wieweit dieses Verstehensmodell aus einem säkularen Forschungszweig
für die Seelsorgearbeit unterstützend sein kann, soll in dieser Arbeit geklärt
werden. Als Grundlage dienen Seelsorgegespräche mit unterschiedlichen Menschen, die eine
große Bandbreite an Bewältigungsverhalten demonstrierten. Die Herausforderung lag darin,
Menschen in ihrem Sterben umfassend wahrzunehmen, um möglichst viele Impulse zu erkennen,
die ihr Bewältigungsverhalten beeinflussten. Aus der Aufarbeitung dieses Verhaltens
ergaben sich Perspektiven für die Begleitung sterbender Menschen. Dies hat gleichbedeutend
Konsequenzen für den seelsorgerlichen Umgang mit Sterbenden. Das Wissen um
das christlich-biblische Menschenbild und die umfassende Kenntnis der Copingforschung
können sich durchaus gegenseitig befruchten, denn beide gehen auf die Individualität des
Menschen ein und unterstützen ihn seinen eigenen Zugang zu seinem Leben und seinem Tod
finden zu lassen. Dies führt letztlich zu einer intensiven Kommunikation zwischen Patient
und Seelsorger, der den Mut und das Vertrauen haben darf, dem Sterbenden eigenständig
sein Leben bewältigen zu lassen. Die Ansätze der Copingforschung bieten weitreichende
Impulse für vielfältige seelsorgerliche Fragestellungen auch außerhalb der Sterbebegleitung.
Object of research of this thesis is the specific behaviour of seriously ill and dying humans
coping with their impending death and being members of a society having an ambivalent attitude
towards death. People's different and individual ways of coping cannot always be sufficiently
explained by the current use of phasing models. In this context the "Coping Model"
by Richard S. Lazarus and his stress research group seems to be helpful in understanding
dying humans. In how far this comprehension model from a secular branch of research can
be supportive of pastoral counselling is the objective of this thesis. Counselling dialogues
with different persons who show a wide range of coping form the basis of this research. The
challenge of this paper was to observe and sense humans in their death experiences from a
broader point of view in order to identify as much as possible kinds of impulses crucial to
their coping behaviour. Analysing the behaviour of dying humans led to new perspectives
on spiritual guidance. Tantamountly, this has its consequences for spiritual dealing with dying
humans. The comprehension of the biblical Christian idea of man and a detailed knowledge
of coping research can, by all means, be interactive and thus show positive results as
both respond to a person's individuality and support them in their own ways of approach to
life and death. Finally, this leads to an intensive dialogue between patient and pastor who
can have the courage and the confidence in letting the person find his own way of coping.
The different kinds of approach of the coping model research offer far-reaching impulses to
various pastoral questions going even beyond terminal care. / Philosophy, Practical and Systematic Theology / D.Th. (Practical Theology)
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