O presente estudo teve como objetivo identificar áreas de risco para a co-infecção HIV/TB no município de Ribeirão Preto através da distribuição espacial dos casos notificados em 2006. Trata-se de um estudo de caráter ecológico em que a unidade de observação é um conjunto de indivíduos do município de Ribeirão Preto-SP. A população do estudo foi constituída por 48 casos novos de co-infecção HIV/TB notificados e residentes em Ribeirão Preto no ano de 2006. As informações sobre os doentes de TB co-infectados foram coletadas do sistema de notificação TB-WEB. Outra fonte de informação utilizada foi a base de dados dos setores censitários do município disponibilizada pelo Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE) referentes ao censo demográfico do ano 2000. Para caracterização dos doentes foram selecionadas variáveis sócio-demográficas (sexo, data de nascimento, escolaridade e endereço do doente) e clínico-epidemiológicas (tipo de caso, forma clínica, tipo de tratamento, encerramento de caso e local de atendimento). Para caracterizar os setores censitários foram selecionadas variáveis relacionadas a: renda média dos responsáveis pelos domicílios, média de anos de instrução das pessoas responsáveis pelos domicílios, renda média das mulheres chefes de família, média de anos de instrução das mulheres chefes de família, proporção de pessoas analfabetas, proporção de mulheres analfabetas, porcentagem de domicílios com 5 ou mais moradores. Os casos novos de co-infecção selecionadas foram então georreferenciados utilizando-se o software ArcGIS 9.1, da Esri. A Unidade espacial de análise considerada foi a de setor censitário e a análise estatística realizada foi a de componentes principais. Após o cálculo dos fatores socioeconômicos, foi escolhido o responsável pela maior variação (83%) que foi chamado de fator socioeconômico. Dos setores que permaneceram para análise (633), estes foram ordenados de forma decrescente e divididos em tercis. Assim, os tercis foram classificados em 3 faixas socioeconômicas: superior (condições socioeconômicas mais favoráveis), intermediária e inferior (condições socioeconômicas desfavoráveis). Em 2006, no período da coleta, 190 casos de TB estavam notificados no TB-WEB, sendo 58 (30,5%) casos de co-infecção. Foram considerados para este estudo 48 casos novos de co-infecção. Os resultados mostraram que: 68,7% dos casos eram do sexo masculino, faixa etária de 20 a 39 anos (47,9%), 4 a 7 anos de escolaridade (58,3%), forma clínica pulmonar (75%), sob o tratamento supervisionado (48%), 48% foram curados e 31% em tratamento no HCFMRPUSP. A distribuição espacial mostrou uma concentração dos casos de co-infecção nas regiões oeste e norte do município (58,3%) e 52,1% dos casos localizam-se na faixa socioeconômica inferior, seguido da faixa intermediária. O estudo evidenciou a forte ligação entre o aparecimento da TB e aspectos sociais entre os casos de AIDS. O conhecimento de alguns determinantes sociais e mesmo a desigualdade que permeia um espaço geográfico pode favorecer um planejamento mais adequado de ações para controle dessas doenças. / This ecological study aimed to identify the risk areas for HIV/TB (Human Immunodeficiency Virus, HIV/tuberculosis) co-infection in the city of Ribeirão Preto, state of São Paulo, through the spatial distribution of the cases registered in 2006. The unit of observation was a set of individuals from Ribeirão Preto. The study population consisted of 48 new cases of HIV/TB co-infection, registered and of patients living in Ribeirão Preto in 2006. The information about co-infected TB patients was collected in the TB-WEB register system. Another source of information used was the database of the census sectors of the city, published by the Brazilian Institute for Geography and Statistics (IBGE) regarding the demographic census of the year 2000. Sociodemographic variables (gender, birth date, educational level and address) and clinical-epidemiological variables (type of case, clinical form, type of treatment, case closing and venue of care) were selected for patients\' characterization. To characterize the census sectors, variables related to the following topics were selected: average income of the individuals responsible for the households, average years of education of the individuals responsible for the households, average income of the women head of families, average years of education of the women head of families, proportion of illiterate people, proportion of illiterate women, percentage of households with 5 or more residents. The selected new coinfection cases were then georeferentiated using the ArcGIS 9.1 software, by Esri. The census sector was considered the spatial analysis unit and the statistical analysis was carried out with the main components. After the calculation of the socioeconomic factors, the responsible for the main variation (83%) was chosen, and it was entitled socioeconomic factor. The sectors remaining for analysis (633) were ordered decreasingly and divided into tertiles. Thus, the tertiles were classified in socioeconomic bands: upper (more favorable socioeconomic conditions), intermediate and lower (unfavorable socioeconomic conditions). In 2006, during the data collection period, 190 TB cases were registered in the TB-WEB, of which 58 (30.5%) were cases of co-infection. In this study, 48 new cases of co-infection were considered. The results showed that: 68.7% of the cases were of male subjects, aged between 20 and 39 years of age (47.9%), having studied between 4 to 7 years (58.3%), pulmonary clinical form (75%), under supervised treatment (48%), 48% had been cured and 31% were under treatment at HCFMRP-USP (Hospital das Clinicas of the University of São Paulo at Ribeirao Preto Medical School). The spatial distribution showed the concentration of the cases of coinfection in the West and North regions of the city (58.3%) and 52.1% of the cases were located in the lower socioeconomic band, followed by the intermediate band. The study evidenced a strong relation between the outcome of TB and social aspects among the cases of AIDS. The knowledge of certain social determinants and even the inequality that permeates a geographic space can favor a more appropriate planning of actions for the control of these diseases.

Cheng, Baohui. / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2013. / Includes bibliographical references (leaves 206-221). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstracts also in Chinese.

It is well established that biofilm formed on tooth surfaces is the major culprit for caries and periodontal disease development. The critical early event of biofilm formation is the specific interaction of microorganisms with the acquired enamel pellicle. This pellicle is formed from adsorbing proteins from saliva, and perhaps also from gingival crevicular fluid. The purpose of this project was two fold: first, to investigate the extent of serum protein adsorption in a salivary protein environment, and second, to investigate the colonization of salivary pellicles by early microbial colonizers. Hydroxyapatite (HA) was incubated with saliva and serum and adsorbing proteins were identified by LC-ESI-MS/MS. To investigate competition among salivary and serum proteins for adsorption to HA proteins were labeled with specific CyDyes, mixed in various ratios and incubated with HA. The early phase of oral biofilm formation in vivo was studied on teeth exposed to the oral environment. The harvested biofilm samples were analyzed with the Human Oral Microbiome Identification Microarray containing 407 different microbial probes. In the pure saliva- and serum-derived pellicles eighty-two and eighty-four proteins were identified. Concomitant presence of salivary and serum proteins showed that salivary protein adsorbers effectively competed with serum proteins adsorbers for the HA surface. Specifically acidic proline-rich protein, cystatin, statherin and amylase proteins in saliva competed off apolipoprotein, C-reactive protein, peroxiredoxin-1 and albumin. In vivo evidence supported the replacement of serum proteins by salivary proteins. The studies with oral biofilm formed in vivo led to the identification of 92 species with streptococci being the most abundant early colonizers. High frequency detection was furthermore made with Haemophilus parainfluenzae, Gemella haemolysans, Slackia exigua and Rothia species. Eight uncultivated phylotypes were detected. While there is a significant amount of serum protein emanating from the gingival sulcus, their ability to participate in dental pellicle formation is likely reduced in the presence of strong salivary protein adsorbers. Furthermore, the early pellicle colonizers exhibit considerable bacterial diversity and include non-cultivable species. These findings will be helpful in designing target-specific approaches for the prevention of and/or intervention in diseases exhibiting an oral-biofilm-based etiology.

A anemia aplástica (AA) é uma doença hematológica rara caracterizada pela hipocelularidade da medula óssea, o que provoca pancitopenia. Esta pode ser de origem genética (associada a encurtamento telomérico) ou adquirida (não-associada a desgaste excessivo dos telômeros). Na forma adquirida, a ativação anormal de linfócitos T provoca a destruição das células hematopoéticas. O mecanismo que leva a essa destruição ainda não foi elucidado. Um dos tratamentos mais eficazes para repovoar a medula óssea hipocelular é o transplante com célulastronco hematopoéticas (CTHs). Porém, uma grande porcentagem de pacientes não se beneficia de nenhum tratamento, fazendo-se necessário o desenvolvimento de novas alternativas para terapia. A geração de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) a partir de células somáticas (reprogramação) representa uma ferramenta promissora para o estudo de doenças e para o desenvolvimento de possíveis terapias paciente-especificas, como transplantes autólogos. Neste trabalho, avaliamos a capacidade de reprogramação de fibroblastos e eritroblastos de pacientes com AA adquirida. Metodologias de reprogramação utilizando lentivírus ou plasmídeos epissomais não integrativos foram testadas em células de quatro pacientes e de um controle saudável. Eritroblastos dos quatro pacientes e do controle foram reprogramados utilizando os plasmídeos não integrativos. As iPSCs geradas apresentaram-se similares a células-tronco embrionárias quanto à morfologia, expressão dos marcadores de pluripotência OCT4, SOX2, NANOG, SSEA-4, Tra-1-60 e Tra-1-81, e capacidade de diferenciação in vitro em corpos embrioides (EBs). A dinâmica telomérica das células pré- e pós-reprogramação foi avaliada em diferentes passagens utilizando a técnica de flow-FISH. O comprimento telomérico foi aumentado nas iPSCs quando comparado às células parentais o que indica que a célula foi completamente reprogramada. No presente trabalho, células de pacientes com AA adquirida foram reprogramadas a um estado de pluripotência por meio de um método não integrativo. As iPSCs geradas serão essenciais para futuros ensaios de diferenciação hematopoética, o que poderá contribuir para o entendimento dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento dessa doença. Além disso, a diferenciação dessas células livres de transgenes poderá servir como uma alternativa terapêutica para os pacientes com AA como, por exemplo, em transplantes autólogos / Aplastic anemia (AA) is a rare hematological disease characterized by bone marrow hypocellularity that leads to pancytopenia. Its origin can be genetic (associated with telomere shortening) or acquired (non-associated with telomere shortening). The acquired form exhibit T lymphocytes abnormal activation, which leads to hematopoietic cells destruction. The mechanisms behind this phenomenon are still unclear. One of the most effective treatments for hypocelullar bone marrow repopulation is hematopoietic stem cell (HSCs) transplantation. However, a large percentage of patients do not benefit from any of the available treatments. This highlights the need to develop new therapeutic strategies. The generation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells (reprogramming) represents a powerful tool for disease modeling and for the development of patient-specific therapies such as autologous transplants. In this study, we evaluate the capacity of reprogramming acquired AA patients\' fibroblasts and erythroblasts. Reprogramming methods using lentivirus or non-integrative episomal plasmids were tested in four patients\' cells and in cells from one healthy donor. Erythroblasts from these four patients and healthy donor were reprogrammed using non-integrative plasmids. The iPSCs resembled human embryonic stem cells in morphology, in the expression of pluripotent markers such as OCT4, SOX2, NANOG, SSEA-4, Tra-1-60 and Tra-1-81, and in in vitro differentiation (capacity to form embryoid bodies). The telomere dynamics of the cells before and after reprogramming was assessed along passaging using flow-FISH. The telomere length in the iPSCs was increased when compared to the parental cells. Thus, acquire AA patients\' cells could be reprogrammed to a pluripotent state by a nonintegrative method. The iPSCs will be essential for future hematopoietic differentiation assays that could contribute to the understanding of the mechanisms involved in the disease development. Furthermore, the differentiation of transgene-free cells may serve as an alternative therapy for patients with AA such as autologous transplants

Determinação da composição da Película Adquirida formada sobre o esmalte humano in vivo e da sua modificação após estimulação química e mecânica do fluxo salivar: estudo proteômico. Todas as superfícies sólidas expostas na cavidade bucal são cobertas por uma camada proteinácea denominada película adquirida do esmalte. Trata-se de um filme orgânico, livre de bactérias, que recobre os tecidos dentários e é composto basicamente por proteínas. Diversos trabalhos têm se concentrado na caracterização e no impacto protetor da película adquirida formada sobre a superfície do esmalte. Porém tanto para a película adquirida formada sobre o esmalte in situ quanto in vivo, as considerações sobre o tipo de saliva que contribuiu para sua formação são bastante limitadas, senão inexistentes. Com base nisto, o objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteico em películas adquiridas formadas in vivo sobre o esmalte humano em condições de repouso, bem como analisar as películas formadas após estimulação salivar mecânica e química, através de espectrometria de massa. Os experimentos foram realizados por três dias consecutivos, seguindo um delineamento cruzado. Em cada dia, os voluntários (n=9) receberam uma meticulosa profilaxia dentária. Em seguida, aguardaram por duas horas para que a película adquirida fosse formada naturalmente sobre o esmalte (saliva não estimulada Grupo 1, controle). Após o período em questão, cada quadrante da boca foi enxaguado, seco e a película adquirida foi então coletada com auxílio de um papel filtro de eletrodos (electrode wick filter paper, Bio-Rad) embebido em ácido cítrico 3%. Os procedimentos descritos acima foramrepetidos em outros dois dias consecutivos para cada voluntário, sendo que em um dos dias os voluntários estimularam o fluxo salivar mecanicamente (saliva com estimulação mecânica Grupo 2), através da mastigação de Parafilm®, durante o mesmo período de tempo. Em outro dia, o fluxo salivar foi estimulado através de gotejamento de ácido cítrico 2% (p/v) em ambas as bordas laterais da língua, em intervalos de 1 minuto, durante o mesmo período de tempo. O restante dos procedimentos foi repetido como descrito. Para cada grupo, foi feito um pool com os papéis de filtro dos 9 voluntários. Após extração e digestão das proteínas presentes nos papéis, foi realizada a separação dos peptídeos por nano-HPLC (nano- Cromatografia Líquida de Alta Performace) interligada a um espectrômetro de massa (LC-ESI-MS/MS). Os dados MS/MS obtidos foram processados e pesquisados junto ao banco de dados de proteínas humanas (UniProt and TrEMBL, Swiss Institute of Bioinformatics) utilizando algorítimo SEQUEST no software Proteome Discoverer 1.3 (Thermo Scientific). Foram detectadas no total 115 proteínas/peptídeos identificados por pelo menos dois peptídeos. Todos apareceram em pelo menos três corridas de cada Grupo, sendo que 51 proteínas apareceram nos três grupos. O perfil protéico da película adquirida foi semelhante em todos os grupos, embora tenham sido detectadas proteínas específicas para cada grupo. Utilizando a tecnologia de quantificação SIEVE, foi observado que a concentração de proteínas foi maior nos grupos nos quais houve estimulação salivar (2 e 3). Os resultados sugerem que a estimulação do fluxo salivar, tanto mecânica quanto química, promove a formação de película adquirida com maior concentração de proteínas protetoras como anidrase carbônica, mucinas, cistatinas e imunoglobulinas, o que pode resultar num maior caráter protetor para o esmalte dentário. Contudo, são necessários mais estudos para se compreender por completo o complexo processo de formação (mediante variadas condições) e as dinâmicas funções deste importante tegumento. / All solid surfaces exposed in the oral cavity are covered by a closely adherent protein film termed the acquired enamel pellicle (AEP). It is an organic, bacteria-free film that overlies the hard dental tissues and is basically composed by glycoproteins and proteins. Recently, many studies have focused on the characterization and the protector impact of the acquired pellicle formed over the enamel surface. However either for the in situ or in vivo formed AEP, information regarding the type of saliva which has contributed for its formation is quite limited, or even inexistent. Based on this, the aim of the present study was to compare the protein profile of acquired pellicles formed in vivo over the human enamel surfaces under resting condition and also to analyze the protein profile of the pellicles formed after mechanical and chemical salivary flow stimulation using mass spectrometry. The experiments were performed on three consecutive days, following a crossover design. On each day, the volunteers (n=9) received a meticulous dental prophylaxis and then waited for two hours to allow the AEP formation (non stimulated saliva - group 1). After the time span, each quadrant of the mouth was rinsed with water, dried by air spray and then the collection of the AEP was carried out using a filter paper (electrode wick filter paper, Bio-Rad) presoaked in 3% citric acid The procedures described above were repeated on two other consecutive days for each volunteer. However, in one day their salivary flow was mechanically stimulated (mechanical stimulation Group 2) by chewing on Parafilm® during the same period of time. In another day, the salivary flow was chemically stimulated (Chemical stimulation Group 3) by 2% citric acid drops on each side of the tongue, once per minute, for the same period of time. For each group, a pool with the wick filters from all 9 volunteers was made. After the extraction and digestion of the proteins from the paper strips, peptide separation and mass spectrometric analyses were carried out with a nano-HPLC Proxeon linked to mass spectrometer (LC-ESI-MS/MS). The obtained MS/MS spectra were searched against human protein databases (UniProt and TrEMBL, Swiss Institute of Bioinformatics) using SEQUEST algorithm in Proteome Discoverer 1.3 software (Thermo Scientific). The combination of all 3 experiments yielded a total of 115 proteins/peptides identified by at least two peptides. All proteins were identified in at least three runs at each Group fifty-one proteins were found in all three Groups. The protein profile of the AEP observed in each study group was similar, but all groups presented specific proteins. Using the SIEVE quantification technology, it was observed that the amount of proteins that compose the AEP was greater in the groups in which the salivary stimulation was performed (2 and 3). The data suggest that salivary flow stimulation, either mechanical or chemical/gustatory, promotes the formation of AEP with higher concentration of protective proteins, such as carbonic anhydrase, mucins, cystatins and immunoglobulins, which may result with a greater protective character for the tooth enamel. However, further studies are necessary to fully understand the complex process of formation (under various conditions) and the dynamic functions of this important integument.

Este estudo teve como objetivos averiguar a dimensão afetiva em pacientes adultos com surdez adquirida, antes e após o uso do implante coclear, indicando a ocorrência de alterações nesta dimensão e investigá-las, especificamente, nas modalidades dos sentimentos egóicos, sentimentos em relação ao próximo, sentimentos de temporalidade e estados de ânimo, antes e após o uso do implante coclear. Participaram 44 adultos de ambos os sexos que realizaram o implante coclear multicanal no Centro de Pesquisas Audiológicas do Hospital de Reabilitação das Anomalias Craniofaciais da Universidade de São Paulo de Bauru. Concluiu-se que, na vivência da surdez houve um predomínio dos sentimentos negativos e de um clima afetivo de tensão e depressão, levando o sujeito a uma vinculação negativa, de assintonia com o mundo. Por outro lado, na vivência com o implante coclear multicanal houve um predomínio dos sentimentos positivos e de um clima afetivo de tranqüilidade e contentamento, levando o sujeito a uma vinculação positiva, de sintonia com o mundo, indicando a ocorrência de alterações estatisticamente significativas na dimensão afetiva antes e após o uso do implante coclear multicanal. / This study aimed to research the affective dimension in adult patients with acquired deafness, before and after the use of cochlear implant, indicating the occurrence of changes in this dimension and to investigate it, particularly, in the modalities of egoic feelings, feelings towards others, feelings of temporality and states of mind before and after the use of cochlear implant. Forty-four adults of both sexes, who received a cochlear implant at the Centro de Pesquisas Audiológicas of the Hospital de Reabilitação das Anomalias Craniofaciais at Universidade de São Paulo in Bauru, took part in this study. The conclusion was that, during the period of deafness, negative feelings and an affective climate of tension and depression prevailed, leading the subject to a negative vinculation, of assyntony with the world. On the other hand, after the cochlear implant, positive feelings and an affective climate of tranquility and satisfaction prevailed, leading the subject to a positive vinculation, of syntony with the world, indicating the occurrence of statiscally meaningful changes in the affective dimension before and after the use of the cochlear implant.

Nos anos recentes, a atividade agrícola da citricultura vem enfrentando grandes problemas fitossanitários, principalmente, com relação à viabilidade econômica decorrente do controle das doenças. A bactéria Candidatus Liberibacter spp. está associada ao HLB, a principal doença que limita a produção das plantas cítricas. Assim, muitos pesquisadores têm voltado suas atenções para estudarem e encontrarem genes-alvo na resposta do hospedeiro a este patógeno para utilização no melhoramento genético. Nesse sentido, métodos de transformação genética das plantas cítricas são essenciais, porém características inerentes à espécie limitam seu cultivo in vitro e requerem um maior tempo para crescimento e propagação. Com isso, torna-se importante o estudo em plantas modelo, principalmente, para seguir protocolos de validação de genes. De acordo com o exposto, o gene EDS5 isolado de Citrus sinensis, associado ao mecanismo de Resistência Sistêmica Adquirida (SAR) foi superexpresso por meio da transformação genética em tomateiro (Solanum lycopersicum L. Micro-Tom). Após o crescimento dos brotos regenerados, foram identificadas as plantas positivas por meio de análise de GUS e PCR. Linhagens transgênicas homozigotas foram obtidas com avaliação da resistência ao antibiótico canamicina. / In the recent years, the agricultural activity of the citrus industry has been facing big phytosanitary problems, mainly with regard to economic viability arising from disease control. The bacterium Candidatus Liberibacter spp. is associated with HLB, the main disease that limits the production of citrus trees. Thus, many researchers have been returning their attentions to study and find target genes in the host response to this pathogen for use in the genetic improvement. In this way, methods of genetic transformation of citrus plants are essential, but the inherent characteristics of the species border your in vitro cultivation and require a longer time for growth and propagation. Therefore, it is important to study of model plants, mainly for genetic validation protocols. Thus, the EDS5 gene isolated from Citrus sinensis, associated with Systemic Acquired Resistance mechanism (SAR) was overexpressed by genetic transformation in tomato (Solanum lycopersicum L. Micro-Tom). After the growth of regenerated shoots, positive plants were identified by PCR and GUS analysis. Homozygous transgenic lines were obtained with evaluation of resistance to kanamycin.

Objective: This systematic review explored how “adjustment” is generally defined in adults with an acquired visible difference (AVD) and what positive psychological factors have been evidence to be associated with positive coping and processes of adjustment in AVD. Method: A systematic search for peer reviewed journal articles from 1980 to February 2016 was conducted using: PyschINFO, Medline, EMBASE and CINAHL. Studies were appraised according to eligibility criteria and evaluated against a quality criterion to assess risk of bias. Results: Fourteen studies were included and were in the areas of head and neck cancer, burns and amputation. Selected studies demonstrated inconsistent conceptualisations of adjustment ranging from: lack of psychopathology, resilience, post-traumatic growth and quality of life. Psychological factors identified were; social functioning (social support, social self-efficacy), coping strategies (emotion, problem-focused, active coping) and dispositional optimism. Studies were considered to be of moderate methodological quality with weaknesses including; a lack of control/comparison groups, lack of measure sensitive to the unique challenges of living with AVD and minimal account for confounding variables. Results are discussed in the context of future research implications. Objective: This study aimed to explore the relationship between two dimensions of attachment insecurity (avoidance and anxiety), body image dissatisfaction and perfectionism using theoretically driven multiple mediation models that included emotion dysregulation and interpersonal problems as hypothesised mediators. Method: Fifty female outpatients seeking cosmetic surgery on the National Health Service (NHS) and 26 females interested in seeking cosmetic surgery within the public domain participated in this cross-sectional study (N=76). Participants completed measures of attachment avoidance and anxiety, body image dissatisfaction, perfectionism, emotion dysregulation and interpersonal problems. Results: Attachment insecurity was significantly associated with body image dissatisfaction and perfectionism. Interpersonal problems and emotion dysregulation also significantly partially mediated the relationship between attachment insecurity and body image dissatisfaction, specifically satisfaction with discrete aspects of body parts. Emotion dysregulation was also found to significantly partially mediate the relationship between avoidant attachment and perfectionism, but not anxiety. The clinical implications of this research are discussed.

Claritromicina era considerada um antibiótico de escolha para infecções causadas pelo complexo Mycobacterium abscessus, entretando, recentemente falhas no tratamento com este antibiótico têm sido reportadas. A resistência adquirida a claritromicina está relacionada à mutações pontuais que acarretam substituição da adenina na posição 2058 ou na posição 2059 na região do gene rrl que codifica o domínio peptidil transferase do rRNA 23S. Um mecanismo secundário de resistência à claritromicina tem sido descrito como resistência induzida, que é conferida pelo polimorfismo T/C no nucleotídeo 28 do gene erm(41). A resistência adquirida pode ser detectada em até 3 dias de incubação do M. abscessus com a claritromicina enquanto que a resistência induzida requer mais do que 5 dias de incubação. Por outro lado, o uso de marcadores moleculares para detecção de resistência adquirida e induzida no complexo M. abscessus têm sido propostos. O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de suscetibilidade e os marcadores moleculares de resistência à claritromicina no complexo M. abscessus. Um total de 42 isolados de um estudo prévio de vigilância, entre os anos 2007 e 2013 foram utilizados. O perfil de suscetibilidade para a claritromicina foi determinado por microdiluição em caldo com leituras em 3, 5, 7 e 14 dias. Mutações nos genes rrl e erm(41) foram avaliados por PCR com primers específicos e posterior sequenciamento. Resistência à claritromicina, em até 3 dias de incubação, foi observada em 31 dos 42 (73,8%) isolados. Resistência induzida à claritromicina foi observada em 6 de 11 (54,5%) isolados que apresentaram resistência após 5 ou 7 dias de incubação. Todos os isolados com resistência induzida foram M. abscessus subsp. massiliense. Além disso, todos os 28 isolados de M. abscessus subsp. massiliense apresentaram deleção em erm(41). Apenas cinco isolados foram sensíveis à claritromicina após 14 dias de incubação. Nenhum dos 42 isolados apresentaram mutação pontual na região de peptidil transferase do rRNA 23S e todos os isolados apresentaram o polimorfismo T/C no nucleotídeo 28 do gene erm(41). Os dados deste estudo indicam a falta de correlação dos marcadores moleculares com a expressão de resistência à claritromicina. / Infections due to Mycobacterium abscessus complex used to respond to clarithromycin treatment but more recently treatment failure with this antibiotic has been reported. Acquired resistance to clarithromycin is related to substitutions at the adenine either at position 2058 or at position 2059 in a region of the rrl gene encoding to the peptidyltransferase domain of the 23S rRNA. A secondary mechanism related to clarithromycin resistance has been described as an inducible resistance, conferred by T/C polymorphism at the 28th nucleotide in erm(41) gene. Acquired resistance can be detected up to 3 days of incubation of the M. abscessus with the clarithromycin while inducible resistance requires more than 5 days of incubation. Molecular markers to detect acquired and inducible resistance in M. abscessus complex isolates were proposed. This study evaluated the profile of susceptibility and the molecular markers of clarithromycin resistance in M. abscessus complex. A total of 42 isolates from a previous surveillance study (2007 to 2013) were used in this study. The susceptibility profile for clarithromycin was determined by broth microdilution with reads at 3, 5, 7 and 14 days. Mutations in rrl and erm(41) genes were evaluated by PCR with specific primers followed by sequencing. Clarithromycin resistance, up to 3 days of incubation, was observed in 31 of 42 (73.8%) isolates. Inducible clarithromycin resistance was observed in 6 of 11 (54.5%) isolates which presented resistance only after 5 or 7 days of incubation. All isolates with inducible resistance were identified as M. abscessus subsp. massiliense. Moreover, all 28 M. abscessus subsp. massiliense had a deletion in erm(41). Only five isolates proved to be susceptible to clarithromycin after 14 days of incubation. None of the 42 isolates presented a point mutation in the peptidyltransferase region of the 23S rRNA (rrl) and all isolates presented the T/C polymorphism at the 28th nucleotide of the erm(41) gene. The data of this study indicates a lack of correlation of molecular markers of clarithromycin resistance for both acquired and inducible resistance to clarithromycin.

Submitted by Natalia Vieira (natalia.vieira@famerp.br) on 2016-05-20T18:39:11Z No. of bitstreams: 1 gismarmonteirocastrorodrigues_dissert.pdf: 1476033 bytes, checksum: 1656cd496debef44e68dd36fe6a5966c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T18:39:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gismarmonteirocastrorodrigues_dissert.pdf: 1476033 bytes, checksum: 1656cd496debef44e68dd36fe6a5966c (MD5) Previous issue date: 2007-09-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Introduction: Candida albicans is as a human oral cavity colonizer. However, for the human immunodeficiency virus (HIV) serum-positive individuals and/or acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) patients, it assumes opportunistic profile causing, amongst other clinical manifestations, oropharyngeal candidiasis. In the population, it is also isolated a group of species named Candida “non-albicans”, whose response in the presence of antifungical drugs can diverge. Objective: To study Candida sp. oral colonization in HIV-1 carriers/AIDS patients and their respective group, and describe its antifungal susceptibility profile. Methodology: Oral cavity samples, collected from 52 patients and respective controls were submitted micromorphological analysis of the strains. The antifungal susceptibility profile was evaluated by disc diffusion and by broth microdilution, for the following drugs: anfotericin-B, ketoconazole, itraconazole and fluconazole. Results: Candida sp. colonization/infection index was higher in the HIV/AIDS patients compared to their controls (p<0.05), and C. albicans was the most isolated species. Candida “non-albicans” frequency was similar for both studied groups, including C. dubliniensis absence. Single and mixed species colonization/infection rates were superior among HIV/AIDS dental prosthesis users in relation to those without such apparatus (P <0.05). the strains of the C. albicans isolated from the group patient regarding the isolated in the control group, showed higherthe fluconazole minimum inhibitory concentration (CIM) (P<0,01), smaller percentages of dose-dependent susceptibility (SDD) to ketoconazole (P<0,1) and greater ones for itraconazole (P<0,06). Higher percentages of SDDs to the same drugs were provided by Candida “non-albicans” isolated from healthy individuals. None of the isolated strains displayed resistant phenotype to fluconazole whereas they were all sensitive to anfotericin-B. Conclusions: The HIV/AIDS group, compared to the HIV serum-negative individuals, is more often colonized by Candida sp., without changes in the albicans x “non-albicans” ratio, and also with equivalent antifungal susceptibility profiles. C. dubliniensis does not colonize/infects the oral cavities of HIV infected subjects/AIDS patients, or their healthy controls, from São Paulo State Northwest region. HIV carriers/AIDS personnel who make use of dental prosthesis have higher Candida sp. oral cavity colonization/infection rates, needing, therefore, closest attention to their oral health. / Introdução: Candida albicans é colonizadora da cavidade bucal humana sendo que em pacientes soropositivos para o vírus da imunodeficiência humana (HIV)/doentes com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), assume perfil oportunista causando, dentre outras manifestações, a candidíase orofaríngea. Nesses indivíduos, são também isoladas as espécies “não albicans”, cuja resposta aos antifúngicos pode variar. Objetivo: Avaliar Candida sp. isolada a partir da microbiota oral de pacientes soropositivos para o HIV-1/doentes de AIDS e do respectivo grupo controle e descrever seu perfil de sensibilidade aos antifúngicos. Metodologia: As amostras obtidas a partir da mucosa oral de 52 pacientes e respectivos controles foram submetidas às análises micro-morfológicas das cepas. Para a pesquisa molecular de C. dubliniensis foi utilizada a reação em cadeia de polimerase. O perfil de sensibilidade antifúngica foi avaliado por difusão em disco e por microdiluição, frente à anfotericina B, cetoconazol, itraconazol e fluconazol... Resultados: O índice de colonização/infecção por Candida sp. foi maior no grupo HIV/AIDS comparado ao grupo controle (p<0,05), sendo C. albicans a espécie mais isolada. A freqüência de espécies “não albicans” foi similar em ambos os grupos, sem detecção de C. dubliniensis. O índice de colonização (única e mista) foi superior entre os pacientes HIV/AIDS usuários de próteses em relação aos não usuários (P <0,05). As cepas de C. albicans isoladas do grupo paciente em relação às isoladas do grupo controle apresentaram maior concentração inibitória mínima (CIM) frente ao fluconazol (P<0,01), menor percentual de sensibilidade dependente da dose (SDD) frente ao cetoconazol (P<0,1) e maior SDD para o itraconazol (P<0,06). Já Candida “não albicans”, isolada a partir de pessoas saudáveis, mostrou porcentagens maiores de SDD frente às mesmas drogas. Nenhuma levedura mostrou resistência às drogas avaliadas sendo unânime também a sensibilidade à anfotericina B. Conclusões: O grupo HIV/AIDS é mais colonizado por Candida sp. que os soronegativos para esse vírus, sem mudanças na proporção Candida albicans x “não albicans”, sendo que as cepas obtidas a partir de ambos grupos apresentam perfil de sensibilidade equivalente aos antifúngicos testados. C. dubliniensis não coloniza/infecta a mucosa oral dos portadores do HIV/doentes com AIDS ou de controles saudáveis da região Noroeste paulista. Portadores do HIV/doentes com AIDS que fazem uso de prótese dentária têm maiores chances de colonização/infecção da mucosa oral por tais levedu ras, necessitando, portanto, de maior atenção à saúde bucal.