Orientador: Fabio Trindade Maranhão Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bastos_MarceleFontenelle_M.pdf: 15905703 bytes, checksum: b7c6bc673961fdae05225ebe3ac50346 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: 0 seqüestro de eritrócitos infectados par Plasmodium falciparum (Pf-Els) na microvasculatura de varies órgãos envolve uma seqüência de eventos que acredita­se contribuir para a patogênese da malaria grave. Apesar do tratamento com drogas antimaláricas serem eficazes, mortalidade significativa ainda é vista nos casos graves da doença, particularmente no prazo de 24 horas da admissão hospitalar. Acredita-se que o uso de terapias anti-adesivas nesse período poderia minimizar as complicações causadas pelo P. falciparum. Nesse sentido, polissacarídeos sulfatados, como a heparina e a condroitina-sulfato-A (CSA), têm mostrado capacidade em inibir a citoaderência de Pf-Els a receptores endoteliais. A heparina foi usada no passado no tratamento da malaria grave, mas deixou de ser recomendada, devido a ocorrência de sérios efeitos colaterais, como hemorragias. Além disso, esses compostos são derivados de mamíferos, o que aumenta o risco de contaminação por agentes patogênicos. De fato, embora muitos compostos tenham sido testados, nenhum demonstrou evidência inequívoca de melhora nos testes clínicos para prevenção e tratamento da malária grave. 0 condroitim sulfate fucosilado (FucCS) é um polissacarídeo altamente sulfatado extraído do pepino-do-mar Ludwigothurea grisea, composto por uma base estrutural de condroitim sulfato de mamífero, e substituído na posição 3 dos resíduos de acido ß-D-glucurônico com cadeias de fucose sulfatadas. Nesse estudo, mostramos que o FucCS apresenta baixa toxicidade, e é um potente inibidor da citoaderência parasitária em células endoteliais de pulmão humano (HLEC) e da reinvasão de eritrócitos por merozoítos de P. falciparum. Em ambos os casos, a inibição ocorre de maneira dose dependente, e o composto mostrou ser eficiente na inibição de diferentes fenótipos parasitários. A remoção das cadeias de fucose sulfatadas do FucCS praticamente aboliu o efeito inibitório, sugerindo um papel central desempenhado por essas cadeias na ocorrência do processo inibitório. 0 composto também mostrou ser capaz de reverter a citoadesão parasitária em sistema que mimetiza o fluxo sangüíneo. Além disso, o tratamento com o FucCS (1 mg/kg/animal/dia) demonstrou retardar a morte de camundongos infectados com Plasmodium berghei ANKA (PbA), modelo experimental de malária cerebral. Assim, sugerimos o FucCS como um candidato promissor a terapia adjuvante no tratamento da malária grave e na prevenção ao agravamento da doença / Abstract: Sequestration of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (Pf-EIs) in the microvasculature of several organs involves a sequence of events that contributes to the pathogenesis of severe malaria. Despite treatment with effective antimalarial drugs, significant mortality is still observed in severe cases of disease, particularly within 24 hours of hospital admission. It is believed that the use of anti-adhesive therapies in this period could reduce complications caused by P. falciparum. Accordingly,sulfated polysaccharides such as heparin and chondroitin sufate A (CSA) have shown ability to inhibit the cytoadherence of Pf-EIs to endothelial receptors. Although heparin was used in the past as treatment for severe malaria, its use was discontinued due to the occurrence of serious side effects such as bleeding. Moreover, given that these compounds are obtained from mammals, potential risk of contamination has to be considered. In fact, although many compounds have been tested, none demonstrated unequivocal evidence of improvement in clinical trials for prevention and treatment of severe malaria. The fucosylated chondroitin sulfate (FucCS) is a highly sulfated polysaccharide extracted from sea cucumber Ludwigothurea grisea, composed of a chondroitin sulfate backbone substituted at the 3-position of the ß-D-glucuronic acid residues with sulfated fucose branches. In this study, we show that FucCS presents low toxicity and is a potent inhibitor of parasite cytoadherence in human lung endothelial cells (HLEC) and reinvasion of erythrocytes by P. falciparum merozoites. In both cases, inhibition occurs in a concentration-dependent manner, and the compound showed to be effective in inhibiting different parasite phenotypes. Removal of the sulfated fucose branches on the FucCS practically abolished the inhibitory effect, suggesting a central role played by these branches in the occurrence of the inhibitory process. The compound also showed ability to reverse parasite cytoadhesion under flow conditions. Furthermore, treatment with FucCS at 1 mg/kg/animal/day improved survival of C57BL/6 ice infected with Plasmodium berghei ANKA (PbA), an experimental model for cerebral malaria. Thus, we suggest FucCS as a promising candidate for adjunct therapy in the treatment of severe malaria and in prevention of severe malaria outcomes / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Jose Geraldo P. Ferraz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T17:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coppi_LucianeCristina_D.pdf: 5991264 bytes, checksum: bbcad7dd36b02092b27ac1c30b751988 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Os eosinófilos estão envolvidos na patogênese de várias doenças inflamatórias crônicas? incluindo doenças inflamatórias intestinais (Dll)? como doença de Crohn (DC) e retocolite ulcerativa inespecífica (RCVI). No entanto? ainda é desconhecido como os eosinófilos contribuem para a patogênese das Dll. Portanto? o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade dos eosinófilos isolados de sangue periférico de pacientes com Dll comparada aos voluntários sadios. Eosinófilos dos voluntários sadios (n=5)? com DC (n=5) e RCVI (n=5) foram purificados usando-se um gradiente de Percoll? seguido de separação imunomagnética. A atividade dos eosinófilos foi avaliada usando-se os ensaios de quimiotaxi~ adesão? liberação de peroxidase do eosinófilo (EPO)? citometria de fluxo? contagem histológica e análise morfométrica. A quimiotaxia dos eosinófilos induzida pelo N-formyl-metionyl-Ieucyl-fenilanina(fMLP) foi significativamente maior para as células isoladas de pacientes com DC e RCVI? quando comparada aos voluntários sadios.A adesão basal dos eosinófilos de pacientes com DC aumentou significativamente para fibronectina ou soro? quando comparada aos voluntários sadios e RCVI. A liberação basal e estimulada de EPO foi reduzida em células de pacientes com DC? quando comparada aos voluntários sadios. Entretanto? em células isoladas de pacientes com RCVI? a liberação de EPO basal foi significativamente maior quando comparada aos voluntários sadios. A expressão das moléculas de adesão macrophage-l antigen (Mac-l) e very late antigen 4 (VLA-4) não apresentou diferença em relação aos voluntários sadios. A contagem histológica dos eosinófilos em tecido intestinal e morfométrica dos grânulos destas células mostrar~ respectivamente? aumento significativo do número de eosinófilos e de seus grânulos em pacientes com DC e RCVI quando comparadas aos voluntários sadios. Nossos resultados sugerem que os eosinófilos periféricos estão pré-ativados em pacientes com Dll. A ativação dos eosinófilos periféricos? seguida da migração para o tecido intestinal deve contribuir para a patogênese das Dll / Abstract: Eosinophils are involved in the pathogenesis of several chronic inflammatory diseases, including inflammatory bowel disease (ffiD), as Crohn's disease (CD) and ulcerative colites (DC). However, how activation of intravascular eosinophils contributes to disease activity or ffiD pathogenesis is still unknown. The aim of this study was to investigate if eosinophils isolated ITomperipheral blood ITomffiD patients are activated compared to healthy volunteers. Eosinophils ITomhea1thyvolunteers (n=5), CD (n=5) and DC patients (n=5) were purified using a Percoll gradient followed by immunomagnetic cell separator. Eosinophil activity was investigated using chemotaxis, adhesion and mediator release assays (eosinophil peroxidase, EPO), flow cytometric, histologic counting and morphometric analysis. -formyl-metionyl-Ieucyl-fenilanina (fMLP) induced eosinophil chemotaxis was significandy augmented in cells isolated from CD and DC patients compared to hea1thyvolunteers. Eosinophil basal adhesion of CD significantlyincreased to fibronectin or serum if compared to DC or hea1thyvolunteers. Basal and stimulated EPO release was reduced in cells ITomCD patients compared to hea1thyvolunteers. However, basal EPO release was significantly enhanced in cells isolated from DC patients when compared to hea1thy volunteers. The expression of adhesion molecules macrophage-l antigen (Mac-l) and very late antigen 4 (VLA-4) isn't different in patients with DC and CD compared to hea1thyvolunteers. Histologic counting of eosinophils in intestinal tissue and morphometric analysis of granules of this cells showed, respectively, significant augmentation in the number of eosinophils and its granules in CD and DC patients compared to hea1thy volunteers. Our results suggest that peripheral eosinophils are preactivated in ffiD patients. Activation of peripheral eosinophils followed by migration to intestinal tissue probably contributes to ffiD pathogenesis / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T18:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nakazato_Gerson_D.pdf: 8124428 bytes, checksum: 0945b4124057f20c385fd7c7658685be (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Duas linhagens de Escherichia co/i patogênicas isoladas de aves (APEC) com sinais clínicos de septicemia (517 e 521) e wna isolada de aves com sinais clínicos de 5índrome de Cabeça Inchada (5CIl O) foram selecionadas, do conjunto de 49 linhagens pertencentes ao Laboratório de Biologia Molecular Bacteriana, após a caracterização das mesmas quanto à presença das capacidades de adesão e invasão em células HEp-2 e HeLa, perfil de resistência a diferentes antimicrobianos, presença de genes (detectados por PCR) relacionados à patogenicidade, e perfil de DNA plasmidial. Teste de REP-PCR também foi realizado para separação destas linhagens em grupos clonais. Os plasmídios dessas linhagens foram transferidos, através de conjugação, para a linhagem receptora não patogênica, E. co/i HBI0l. A análise das amostras recombinantes obtidas, através das características estudadas, demonstrou que somente aquelas transconjugantes derivadas da linhagem 517, uma delas denominada de 517-1, apresentaram adesão e invasão nessas culturas celulares utilizadas, indicando que os genes responsáveis por estas características estão localizados no plasmídio que foi transferido (70 MDa). Pelo fato das capacidades de adesão e invasão das linhagens 521 e SCIl O não terem sido detectadas em transconjugantes em que ocorreram as transferências de plasmídios existentes nestas duas linhagens, indica que os genes responsáveis por estas características não são plasmídio-mediado, podendo, ou serem cromossômicos, ou mesmo serem plasmidiais, porém com controle de genes cromossômicos. A mutação da amostra 517-1, com o transposon TnphoA levou à perda das capacidades de adesão e/ou invasão em células HEp-2 e HeLa, o que indica que o processo de inserção do transposon tenha ocorrido em genes relacionados aos processos citados. O gene tsh (hemaglutinina termo-sensível) presente na linhagem 521, e os genes relacionados ao sistema de aerobactina presentes nas linhagens SCIlO ifepC) e 521 (iucA), também não foram identificados nas amostras transconjugantes. Com isso, sugere-se que estes genes possam estar localizados no cromossomo destas linhagens, bem como os genes de adesão e invasão dessas linhagens. Esta observação pode indicar a presença de possíveis "ilhas de patogenicidade" nestas linhagens, porém outros estudos devem ser realizados para que esta hipótese se confirme. A produção de colicinas (Ia, Ib, El, E3, B, K) pela linhagem SCIlO também foi passível de ser transferida para a linhagem bacteriana receptora, o que indica que esta característica é expressa por genes presentes no plasmídio transferido (120 MDa). Através de testes de invasão na linhagem celular HEp-2, Microscopia Eletrônica de Varredura e teste de F AS verificou-se que a capacidade de invasão celular presente na linhagem S 17 é diferente daquelas descritas para outras E. coZi invasivas, Salmonella spp. e Shigella sp / Abstract: Two pathogenic Escherichia coZi strains isolated from avian (APEC) showing c1inical signs of septicemia (817 and 821), and one isolated from avian showing c1inical signs of 8wollen Head 8yndrome (8H8 1 O), were selected from a total of 49 strains belonging to the Laboratory of Bacterial Molecular Biology, after a biological characterization regarding the presence of adhesion and invasion capacities to HEp-2 and HeLa cells, resistance profile to different antimicrobial drugs, presence of genes (detected by PCR) associated with pathogenicity, and plasmidial DNA profile. REP-PCR assay also was performed for separation of these strains in c10nal groups. Plasmids from these strains were transferred by conjugation assays to the non-pathogenic E. coZi strain HB 1 O 1. The analysis of the obtained recombinants strains, demonstrated that only recombinant strains derived from 817, one of these designated as 817-1, showed adhesion and invasion to these cells, indicating that the genes responsible for these characteristics are located in the transferred plasmid (70 MDa). 8ince the adhesion and invasion capacities of 821 and 8H8 1 O strains were not detected in recombinant strains where the transference of plasmids presents in these two strains occurred, indicates that the genes responsible for these characteristics are not plasmid-mediated. The location of these genes could be chromosomal, or thus plasmidial, but with chromosomal control. The mutation of 817-1 strain, with TnphoA transposon, resulted in the lost of adhesion and/or invasion capacities to HEp-2 and HeLa cells, which indicate that the transposon insertion process had occur at genes associated with the described processo The tsh gene (temperature-sensitive hemagglutinin) from 821 strain, and aerobactin genes from 8H810 ifepC) and 821 (iucA) strains, also were not found in the recombinants strains. These results suggest that these genes could be located in chromosomal regions as well as the adhesion and invasion genes from these strains. This observation could indicate that the presence of possible "pathogenicity islands" in these strains, but other studies must be realized for confirmation of this hypothesis. The production of colicins (Ia, Ib, El, E3, B and K) by strain 8H810 also was transferred to the recipient strain, which indicate that this characteristic is expressed by genes located at the transferred plasmid (120 MDa). Using invasion assays to HEp-2 cells, 8canning Electron Microscopy and FA8 assay, it was possible to observe that the cellular invasion capacity from 817 strain is different of those processes described by others invasive E. coZi, Salmonella spp. and Shigella sp / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Carlos Kenichi Suzuki / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-07-23T15:15:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Watanabe_Noemia_M.pdf: 11788880 bytes, checksum: f32c97abd30fa0b8660125ac7fc2143f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Uma das limitaçõesna utilização industrial de filmes de diamante pelo processo CVD (Chemical Vapor Deposition), é a ocorrência da tensão residual na interface entre o filme e o substrato, o que está diretamente relacionada com a sua boa aderência. A origem da tensão residual usualmentepode ser classificadaem duas: (i) a intrínsica,que é devido à diferença de paràmetro de rede entre o filme e o substrato, (ii) a térmica, em virtude da diferença de coeficiente de dilatação térmica entre o filme de diamante e o substrato, considerandoque a deposição se processa na temperatura de 50o-S00°c. Com o objetivo de estudar a tensão residual em filmes de diamante, o presente projeto foi desenvolvido em três etapas: (1) o desenvolvimento da instrumentação; (2) a deposição de diamante em diversos substratos; e (3) a caracterização estrutural e medida da tensão residual nos filmes de diamante usando a técnica de diftação de raios-X. Três tipos distintos de filmes de diamante sintético foram estudados: O) diamante policristalino obtido por combustão oxi-acetilênica;(ii) diamante policristalino preparado em reator de filamentoquente; e (iii) diamante monocristalino homoepitaxial crescido em plasma induzido por microondas (crescimento realizado no NIRIM -National Institute of Research in Inorganic Materials), Japão, no laboratório do Dr. Mutsukazu Kamo. Usando a metodologia para quantificar a razão fase diamante cristalino / fase carbono amorfo, observou-se que a tensão residual é crescente com o grau de cristalinidade da amostra (policristal). Um outro resultado de relevância foi a observação da variação da quantidade e da forma de agregação da fase carbono amorfo com a velocidade de rotação do substrato. Para a velocidadede rotação do substrato a partir de 600 rpm, há a formação de DLC - Diamond Like Carbon, tratando-se de um método inédito de grande interesse científico e tecnológico. A caracterização do filme monocristalino de diamante sintético por topografia e goniometria de raios-X fornece uma análise qualitativa e quantitativa da tensão residual gerada na interface filme substrato / Abstract: Industrial utilization of diamond films obtained by CVD- "Chemical Vapor Deposition" method are limited by the residual stress created in the substrate and film interface, which is directly related with its adherence. The origin of the total residual stress of a diamond filmon a substrate is usuallycomposed of (i) intrinsic stress, due to the difference of the interplanar distance in the layer and (ii) thermal stress, due to the difference between the thermal expansion of diamond and the substrate, because the deposition occurs at 500-800°C. This work was developed in three parts to study the residual stress in diamond films: (1) instrumental development; (2) diamond films deposition in different substrates; and (3) structural characterization and residual stress determination using the X-ray diffraction technique. Three kinds of synthetic diamond films were studied: (i) polycrystalline diamond obtained by oxyacetylene combustion; (ii) polycrystalline diamond prepared in hot filament chamber; and (iii) homoepitaxial diamond growth in microwave plasma reactor done in the Df. Mutsukazu Kamo laboratory at NIRIM - National Institute of Research in Inorganic Materials, Japan. The relation ship of the residual stress to the crystal line levei in a diamond sample has been quantified by measuring the ratio diamond/amorphous carbon. It was observed an increase in the residual stress with the amount of crystal line phase. Another important result was the observation of aggregation form and the amount of amorphous carbon according to the substrate rotation velocity.DLC - "Diamond-LikeCarbon" was formed by rotating the substrate around 600 rpm. It is a very important result to scientific and technological development.The synthetic monocrystalline diamond film characterization was carried out by X-ray goniometric and topographic techniques, which offers a qualitative and a quantitative analysisof residual stress created in the film and substrate interface / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Frab Norberto Boscolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T19:59:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cruz_AdrianaDiboda_D.pdf: 5672004 bytes, checksum: ac1f74246e4d3453193616e0b3d5a093 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: No presente estudo, materiais adesivos com diferentes modos de aplicação foram submetidos à ação de radiações ionizantes de diferentes energias com o objetivo de verificar a resistência adesiva após irradiação, por meio do ensaio de microcisalhamento, avaliando o padrão de fratura, considerando se as radiações utilizadas podem ser agentes externos capazes de causar degradação da união adesiva. Após aprovação do projeto pelo comitê de ética em pesquisa (protocolo:032/2007), 60 dentes humanos tiveram as coroas seccionadas no sentido mesiodistal, e incluídas em bloco de resina epóxi. As coroas foram lixadas para exposição da dentina média obtendo 120 corpos de provas. Os corpos de prova foram divididos em 3 grupos (n=40), de acordo com os sistemas adesivos usados: SB (Adper ¿ Single Bond Plus), CB (Clearfil¿ SE Bond) e AP (Adper¿ Prompt¿ Self-Etch). Os adesivos foram aplicados em dentina e fotoativados usando LED (Lec 1000, MMoptics, 1000mW/cm2). Sobre as áreas adesivas foram colocados moldes de elastômero (0,5mm de espessura por 1,2mm de diâmetro) com três orifícios que foram preenchidos com resina composta (Filtek¿ Z-250) fotoativada por 20s. Cada grupo foi subdividido em 4 (n=10): GC= grupo controle que não foi irradiado; UV= grupo irradiado com ultravioleta; RXD= grupo irradiado com raios-X de energia para o diagnóstico; e RXT= grupo irradiado com raios-X de energia para terapia. Após irradiação foram realizados testes de microcisalhamento (Instron Inc., modelo 4411) para a avaliação da resistência adesiva, e em seguida foram avaliados os modos da fratura das amostras, classificando-os com 5 escores: 1- fratura adesiva; 2- fratura mista com 75% de exposição dentinária, 3 -fratura mista com 50% de exposição dentinária, fratura mista com 25% de exposição dentinária, e fratura coesiva. Os resultados foram submetidos à ANOVA com os testes de Tukey, Dunnett, Kruskal-Wallis e Dunn ( =0,05). As diferentes radiações ionizantes não causaram alterações na resistência da união dos adesivos CB e AP; somente o adesivo SB exibiu aumento na resistência da união após a exposição com UV (p=0,0267). A UV também alterou os padrões de fratura do adesivo SB (p=0,0000). As alterações na resistência da união adesiva e no padrão de fratura não foram degradantes, mas dependeram tanto da energia das radiações ionizantes como do modo de aplicação dos adesivos. Assim as radiações ionizantes não podem ser consideradas como agentes externos capazes de causar degradação nos materiais adesivos estudados / Abstract: In the present study, adhesive materials with different application types were exposed to ionizing radiations of varying energy with the objective to verify by means of microshear and failure mode test the bond strength after irradiation trying to determine whether the used radiations could be external agents able to degrade the adhesive bond. After approbation of this project by the Ethical Committee for Human Research (protocol number 032/2007), 60 human teeth had its crowns sectioned mesio-distally and then were included into block of epoxy resin. The crowns were sanded to show the medium dentin and to obtain 120 specimens. The specimens were divided into 3 groups (n=40), according to the adhesive systems used: SB (Adper¿ Single Bond Plus), CB (Clearfil¿ SE Bond) and AP (Adper¿ Prompt¿ Self-Etch). The adhesives were applied on dentin and photo-activated using LED (Lec 1000, MMoptics, 1000mW/cm2). Onto the bonding areas were placed customized elastomer molds (0.5 mm-thickness by 1.2mm-diameter) with three orifices which were filled with composite resin (Filtek¿ Z-250) photoactivated during 20s. Each group was subdivided into 4 subgroups (n=10): GC=control group without irradiation; UV=group irradiated with ultraviolet radiation; RXD=group irradiated with diagnostic radiation-X; RXT=group irradiated with therapeutic radiation-X. After irradiation the microshear tests were carried out (Instron Inc., model 4411) to evaluate the adhesive bond, and afterwards the modes of failure of the specimens were evaluated and classified using 5 scores: 1=adhesive failure, 2=mixed failure with 75% dentin exposed; 3=mixed failure with 50% dentin exposed; 4=mixed failure with 25% dentin exposed; 5=cohesive failure. The results were submitted to ANOVA by the Tukey, Dunnett, Kruskal-Wallis and Dunn test ( =0.05). No changes in bond strength of CB and AP were observed after application of the different radiations; only SB showed an increase in bond strength after UV (p=0.0267) irradiation. UV also changed the failure patterns in SB (p=0.0000). The changes in the adhesive bond and in the mode of failure did not show degradation, but were dependent of both the energy of ionizing radiation and the way of adhesive application. Thus, the ionizing radiation cannot be considered an external agent able to cause degradation in the studied adhesive materials / Doutorado / Radiologia Odontologica / Doutor em Radiologia Odontológica

Orientador: Mario Fernando de Goes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T22:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sartori_CristianaGodoy_M.pdf: 5052776 bytes, checksum: d305b8dc296a1c6feb6d207ea417904d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Estudos in vitro tem sugerido o condicionamento ácido do esmalte antes da cimentação de restaurações indiretas com o cimento autoadesivo RelyX Unicem. Entretanto, não existe comprovação científica de que este procedimento tenha alguma relevância clínica. O objetivo deste estudo in vivo, foi avaliar o efeito do condicionamento ácido do esmalte na qualidade marginal de restaurações indiretas, tipo inlay/onlay de resina composta, utilizando o cimento autoadesivo RelyX U100. Foram selecionados 42 dentes posteriores de 25 pacientes que apresentaram 1 ou 2 dentes com restaurações extensas insatisfatórias, necessitando substituição. Os dentes foram preparados para receberem restaurações indiretas do tipo inlay/onlay. Imediatamente após o preparo cavitário, os dentes foram moldados com silicone polimerizado por adição e protegidos com material temporário. As restaurações em resina composta foram confeccionadas sobre troqueis de gesso de acordo com a técnica por camadas. O tempo de fotoativação foi de 40s para opacidade dentina e 20s para as demais, utilizando um aparelho de luz emitida por diodo (LED). Uma semana depois, os pacientes retornaram para cimentação das restaurações indiretas. Os dentes foram isolados com lençol de borracha e as restaurações foram cimentadas aleatoriamente de acordo com um dos protocolos: Grupo condicionado - condicionamento ácido do esmalte + cimento autoadesivo; Grupo não condicionado - cimento autoadesivo. As restaurações foram mantidas sob pressão por 2 minutos, enquanto se procedia à remoção dos excessos de cimento, e em seguida foram fotoativadas por 60s em cada face. O acompanhamento clínico foi realizado 1 semana (início) e 12 meses após a cimentação, quando os dentes foram fotografados, moldados e avaliados conforme escores pré-estabelecidos (critério USPHS). Réplicas em resina epóxica foram examinadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV) com aumentos de 18X a 200X. Os resultados foram calculados em porcentagem do comprimento total da margem visível para cada parâmetro. Não houve diferença estatística entre os grupos, com exceção da característica 'fratura marginal da restauração' na avaliação em MEV, para o grupo não condicionado. O tempo contribuiu significativamente para a degradação das margens sendo que a presença de underfilling de cimento foi a característica mais frequente. Concluiu-se que, o condicionamento ácido do esmalte, antes da utilização do cimento autoadesivo RelyX U100, não teve relevância clínica na qualidade marginal de restaurações indiretas de resina composta no período avaliado. E ainda, que a presença de pequenos defeitos marginais não interferiu na longevidade clínica das restaurações que alcançaram um mínimo 93,75% de critério Alpha aos 12 meses. / Abstract: In vitro studies have suggested enamel-etching before luting indirect restorations with the self-adhesive cement RelyX Unicem. However, there is no scientific proof that this procedure has any clinical relevance. The aim of this in vivo study was to evaluate the effect of enamel etching on the marginal quality of indirect composite resin restorations (inlay/onlay) using the self-adhesive cement RelyX U100. Forty-two posterior teeth were selected from 25 patients that presented one or two teeth with large restorations in need of replacement. The teeth were prepared for indirect restorations (inlay/onlay). Next, the teeth were molded with polyvinylsiloxane and protected with interim restorations. The composite resin restorations were built over plaster casts using the incremental technique. Using a LED device, increments were light-cured for 40s for dentin opacity shades and 20s for all other shades. After one week, patients returned so that indirect restorations could be cemented. Teeth were isolated with rubber dams and the restorations were luted according to one of the following protocols: Etched group - selective enamel-etching + self-adhesive cement; Non-etched group - selfadhesive cement alone. The restorations were kept under finger-pressure for 2 minutes while removing excess cement. Each face was then light-cured for 60s. Recalls occurred after 1 week (baseline) and 12 months when the teeth were photographed, molded and evaluated according to previously established scores (USPHS criteria). Epoxy resin replicas were examined by SEM at X18 to X200. The results were expressed as percentage of the total observable marginal length for each parameter. No statistical difference was found between groups with an exception for the 'restoration margin fracture' quality (MEV analysis) for the nonetched group. Time degraded somewhat the restorations margins with underfilling being the more frequent find. We concluded that enamel-etching had no clinical relevance on marginal quality for indirect composite resin restorations luted with RelyX U100 self-adhesive cement during 12 months. Moreover, the presence of small marginal defects did not interfere in the clinical longevity of the restorations that reached at least 93,75% of the Alpha criteria after 12 months. / Mestrado / Materiais Dentarios / Mestre em Materiais Dentários

Orientador: Ibsen Bellini Coimbra / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T21:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mara_CristianeSampaiode_D.pdf: 1385801 bytes, checksum: b23144f0f1856aa53731ad5cb632b9bb (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo. O sangue do cordão umbilical contem células tronco mesenquimais (CTM) indiferenciadas que tem potencial condrogênico e podem ser usadas para reparo de lesão articular. Durante o processo de condrogênese, a atuação de fatores de crescimento ainda não está totalmente elucidada. Este estudo teve como objetivo avaliar a formação de condrócitos, matriz cartilaginosa e colágeno tipo II a partir de células do sangue do cordão umbilical humano, expondo-as a quatro diferentes fatores de crescimento: TGF-ß3, IGF-1, BMP-2 e BMP-6 e cultivando-as em micromass e monolayer. Métodos: Sangue do cordão umbilical foi obtido de gestantes a termo. Células mononucleares foram separadas e colocadas em cultura, para expansão, caracterizadas por citometria de fluxo com anticorpos específicos para CTM e induzidas a diferenciação condrogênica, com TGF-ß3, IGF-1, BMP-2 e BMP-6 em micromass e monolayer. O fenótipo das células foi avaliado após 21 dias por RT-PCR e Western Blotting para identificação de Colágeno tipo II, Sox-9 e Agrecano. Resultados: As células expandidas foram caracterizadas como mesenquimais. A expressão do mRNA para colágeno tipo II e agrecano foi expresso a partir do 14º dia, nas células estimuladas com TGF-ß3, IGF-1, BMP-2 e BMP-6. O fator de transcrição SOX-9 foi expresso pelas células estimuladas com TGF-ß3, IGF-1 e BMP-2, o que mostra que estes fatores de crescimento estão associados com a condrogênese de condrócitos articulares, enquanto que a BMP-6 esta associada a condrogênese de condrócitos hipertróficos. No Western Blotting, nós encontramos colágeno tipo II em todos os grupos e a maior expressão foi observada no 14º dia nas células estimuladas com TGF-ß3 em sistema de cultura em micromass. Estes resultados mostram que o TGF-ß3 usado em micromass é o melhor fator de crescimento para promover a diferenciação e proliferação celular das células mesenquimais do sangue do cordão umbilical. Embora mais estudos sejam necessários, este fato nos aproxima de uma alternativa para transplantes autólogos. / Abstract. Umbilical cord blood contains undifferentiated mesenchymal stem cells (MSCs) with chondrogenic potential that may be used for the repair of joint damage. The role of growth factors during the process of chondrogenesis is still not entirely understood. The objective of this study was to evaluate the formation of chondrocytes, cartilaginous matrix and type II collagen from human umbilical cord blood stem cells exposed to four different growth factors, TGF-ß3, IGF-1, BMP-6 and BMP-2, while being cultured as a micromass or a monolayer. Umbilical cord blood was obtained from full-term deliveries, and then mononuclear cells were separated and cultured for expansion. Afterwards, these cells were induced to chondrogenic differentiation in micromass and monolayer cultures supplemented with TGF-ß3, IGF-1, BMP-2 and BMP-6. Cellular phenotype was evaluated after 7, 14 and 21 d by RT-PCR and western blot analysis to identify type II collagen, Sox- 9 and Aggrecan. The expanded cells displayed surface antigens characteristic of mesenchymal progenitor cells and were negative for hematopoietic differentiation antigens. Type II collagen and aggrecan mRNAs were expressed from day 14 in cells stimulated with TGF-ß3, IGF-1, BMP-2 or BMP-6. The Sox-9 transcription factor was expressed in cells stimulated with TGF-ß3, IGF-1 and BMP-2, which demonstrates those are associated with chondrogenesis in joint chondrocytes while BMP-6 is associated with the chondrogenesis of hypertrophic chondrocytes. Type II collagen was demonstrated by western blotting in all groups, and the greatest expression was observed 14 d after cells were stimulated with TGF. The results of this study demonstrate that TGF-ß3 used in micromass culture is the best growth factor for promoting the proliferation and differentiation of mesenchymal cells from UCB during chondrogenesis. Although more studies are needed, this approach may provide an alternative to autologous grafting. / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Carmen Verissima Ferreira, Jose Mauro Granjeiro, Maikel Peppelenbosch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T21:31:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zambuzzi_WillianFernando_D.pdf: 4779822 bytes, checksum: 33696a8be638dbe16ec5d944f0e3b0d2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Este trabalho teve como principal objetivo investigar os mecanismos de transdução de sinal disparados durante a diferenciação de células ósseas. Desta forma, vários aspectos moleculares desse processo foram analisados. A modulação da Src kinase pela proteína tirosina fosfatase de baixo peso molecular (LMWPTP) é essencial para a diferenciação dos pré-osteoblastos induzida pelo ácido ascórbico/glicerofosfato. Outro enfoque dado nesse trabalho foi a avaliação, sob o aspecto molecular e morfológico, da diferenciação de pré-osteoblastos em ¿osteocyte-like cells¿, processo esse induzido quando o Matrigel foi utilizado como substrato. De forma inédita demonstramos que nessa condição as células produziram a proteína sonic hedgehog (Shh), a qual também foi essencial para o processo de diferenciação. A análise do perfil quinômico dessas células apontou uma prevalência das quinases envolvidas com a comunicação celular. Este fato é coerente com a super-expressão de conexina 43 observada. Além disso, observamos que RECK e TIMP-1 modulam a atividade do rearranjo da matriz extracelular durante a diferenciação de osteoblastos, bem como o requerimento das proteínas PP2A e p38 MAPK durante a adesão de osteoblastos. Adicionalmente observamos uma modulação refinada das PTPs (LMWPTP, SHP2 e PTPa) bem como do status redox celular. Os resultados em conjunto demonstram que o estudo de transdução de sinal pode fornecer informações importantes para o entendimento do funcionamento celular bem como definir alvos moleculares que podem servir como ferramentas para diferentes aplicações / Abstract: The main goal of this work was to investigate the signal transduction pathways triggered during the bone cells differentiation. In this way, several molecular aspects of this process were analyzed. Src kinase modulation by the low molecular weight protein tyrosine phosphatase (LMWPTP) was essential for the occurrence of the differentiation induced by ascorbic acid and glycerophosphate. We also evaluated, under molecular and morphological patterns, the differentiation of pre-osteoblasts into osteocyte-like cells induced by 3D scaffold (matrigel as substrate). Interestingly, under this condition, the cells produced sonic hedgehog (Shh), which also was essential for stimulating the differentiation signaling pathway. Kinomic profiling of these cells revealed a prevalence of kinases involved in cellular communication, which is in agreement with the overexpression of connexin 43 observed. Besides we observed that RECK and TIMP-1 modulated the extracellular matrix rearrangement and that PP2A and p38 MAPK are required for osteoblasts adhesion. In addition, we observed that during pre-osteoblasts differentiation both PTPs and cellular redox are tightly regulated. Our findings demonstrated that the signal transduction evaluation can provide important information for understanding the cell biology as well as defining molecular targets that can be useful for different applications / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Fernando Ferreira Costa, Nicola Conran Zorzetto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T06:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Canalli_AndreiaAverci_D.pdf: 1313778 bytes, checksum: 1832f98c252279d3722a62951dcfc9c0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A hemoglobina S (HbS) é decorrente de uma mutação de ponto que ocasiona a troca do ácido glutâmico pela valina na cadeia polipeptídica da globina beta. A polimerização da HbS desoxigenada (pouco solúvel), torna as hemácias menos flexíveis e favorece a impactação das mesmas na microcirculação com subseqüente obstrução da luz do endotélio e vaso-oclusão, seguida de lesões a orgãos alvos, responsáveis pela morbi-mortalidade associada a essa doença. Numerosas evidências sugerem que outros fatores participem da fisiopatologia da vaso-oclusão e do processo inflamatório crônico característico da anema falciforme (AF). A redução da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) pode ser um fator que favoreça a vaso-oclusão, uma vez que ele é um gás vasodilatador e pode inibir a adesão leucocitária. Nesse contexto, os objetivos do presente trabalho foram avaliar as propriedades adesivas dos neutrófilos de pacientes com AF e investigar o papel da via de sinalização do NO e dos nucleotídeos cíclicos (AMPc e GMPc) nos processos de vaso oclusão na AF. Os neutrófilos de pacientes com AF apresentaram maior adesão in vitro para ambos ligantes, fibronectina (FN) e molécula de adesão intercelular (ICAM-1), quando comparados à adesão de neutrófilos de controles. A co-incubação dos neutrófilos de pacientes com AF com agentes doadores de NO, nitroprussiato de sódio (SNP), dietilamina NANOato (DEANO) e com estimulador da guanilato ciclase solúvel (GCs), BAY 412272, diminuíram significativamente o aumento da adesão dos neutrófilos à FN e ao ICAM-1. O oxidiazolo [4,3-a]quinoxalin-1-one, um inibidor da GCs, reverteu a inibição da adesão provocada pelo SNP e DEANO à FN, indicando que a sinalização ependente de GMPc participa desse mecanismo. Os níveis intracelulares de GMPc foram significativamente maiores nos neutrófilos de pacientes que fizeram uso de terapias com hidroxiurea (HU). Em concordância com esses resultados, a adesão dos neutrófilos à FN e ao ICAM-1 foi significativamente menor em pacientes com AF em uso de HU se comparada com os neutrófilos de pacientes com AF sem terapia com HU. Adicionalmente, a co-incubação dos neutrófilos de pacientes com AF com KT5720 (um inibidor de PKA) reduziu a adesão basal enquanto que a co-incubação das células com KT5823 (inibidor de PKG) não alterou a adesão dos neutrófilos à FN. O estímulo dos neutrófilos de pacientes com AF com interleucina 8 (IL-8) aumentou significativamente a adesão à FN e esse aumento na adesão foi reduzido pela KT5720. Esses dados indicam que a regulação da sinalização da via dependente de AMPc tem um importante papel na alteração das propriedades adesivas nos pacientes com AF. Tal alteração pode ter implicação na fisiopatologia da AF e tanto a via PKA dependente de AMPc pode representar um alvo terapêutico para reduzir a alteração na função leucocitária, como agentes que estimulam a via de NO dependente de GMPc podem ter efeitos benéficos na função leucocitária desses pacientes / Abstract: Increased leukocyte adhesion to vascular endothelium contributes to vaso-occlusion in sickle cell disease (SCD). Since nitric oxide (NO) bioavailability is decreased in SCD and NO may inhibit leukocyte adhesion, we determined whether stimulation of NO-signalling pathways can decrease the adhesive properties of neutrophils from SCD individuals (SCDneu). SCDneu presented greater adhesion, in vitro, to both fibronectin (FN) and ICAM-1 than control neutrophils; co-incubation of SCDneu with the NO-donor agents, sodium nitroprusside (SNP) and dietheylamine NONOate (DEANO), and the guanylate cyclase stimulator, BAY41-2272, all significantly diminished increased adhesion to FN/ICAM-1. Oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one, a guanylate cyclase inhibitor, reversed SNP/DEANO-diminished adhesion to FN, implicating cGMP-dependent signalling in this mechanism. Interestingly, intracellular cGMP was significantly higher in neutrophils from SCD individuals on hydroxyurea (SCDHUneu) and, accordingly, SCDHUneu adhesion to FN/ICAM-1 was significantly lower than that of SCDneu. In addition, co-incubation of SCDneu with KT5720 (an inhibitor of PKA), but not KT5823 (inhibitor of PKG), abrogated increased basal SCDneu adhesion. Stimulation of SCDneu with IL-8 also significantly augmented SCDneu adhesion to FN and this increase in adhesion was abolished by KT5720. Data indicate that up-regulated cAMP signalling plays a significant role in altered adhesive properties in SCDneu. Such alterations may have significant implications for the pathophysiology of the disease and the cAMP-PKA pathway may represent a therapeutic target for the abrogation of altered leukocyte function. Agents that stimulate the NO/cGMP-dependent pathway may have beneficial effects on leukocyte function if used in these individuals / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Heitor Moreno Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T09:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_WalneiaAparecidade_D.pdf: 8636548 bytes, checksum: c4e5dc584dbab0a2abcce8dceb2db584 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução: O diagnóstico de hipertensão arterial resistente requer cuidadosa avaliação da adesão ao tratamento prescrito. Objetivos: Analisar a adesão ao tratamento dos pacientes com hipertensão arterial de difícil controle, referenciados ao Ambulatório de Farmacologia Cardiovascular do Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, a fim de identificar os hipertensos resistentes ao tratamento farmacológico. Avaliar também os resultados clínicos e humanísticos durante o seguimento farmacoterapêutico. Método. Realizou-se um estudo prospectivo de 44 pacientes acompanhados por um período de 12 meses. Durante o seguimento farmacoterapêutico, utilizaram-se os seguintes instrumentos: Teste de Morisky et al. e contagem de comprimidos para análise da adesão ao tratamento; teste do conhecimento em relação à doença e ao tratamento anti-hipertensivo; análise da pressão arterial (PA) ambulatorial e através da Monitorização Ambulatorial da Pressão Arterial (MAPA); para qualidade de vida, utilizou-se o instrumento genérico como o SF-36 e instrumento específico (perfil de sintomas físicos); também utilizaram-se os facilitadores de cuidados à saúde (urgência hipertensiva e internação hospitalar). Resultados: Com relação à adesão ao tratamento pelo método contagem de comprimidos, 63,6% dos pacientes foram aderentes no início e, 95,4%, no final do estudo. Pelo Teste de Morisky et al., a adesão foi de 36,4%, no início e, 68,2%, no final. Os hipertensos apresentaram altos níveis de conhecimento em relação à doença e ao tratamento, porém não houve relação com o controle da pressão arterial. Houve redução significativa da pressão arterial (p<0,05) pela MAPA e ambulatorial, mas 59% dos pacientes não controlaram a PA. Quase todos os domínios do SF-36 não sofreram alteração durante o estudo. Mas, para o instrumento específico (perfil de sintomas físicos), houve uma redução significativa nos sintomas moderados e graves (p=0,005). Houve também uma redução significativa no número de urgências hipertensivas (p=0,0001) e de internação hospitalar (p=0,0006). Conclusões: O seguimento farmacoterapêutico foi efetivo na redução da pressão arterial, de sintomas físicos, de urgência hipertensiva e de internação hospitalar; mas não foi sensitivo o suficiente para detectar mudanças nos domínios do SF-36. Apesar dos elevados níveis de adesão ao tratamento, a maioria dos pacientes não controlou a PA. Portanto, outros fatores devem ser investigados, a fim de se caracterizar esses pacientes como resistentes ao tratamento / Abstract: Introduction: The diagnosis of resistant arterial hypertension requires careful evaluation of the adherence to the therapies prescribed. Objectives: Study of the adherence to therapy for patients with difficult-to-control hypertension referred to the Cardiovascular Pharmacology Out-Patient Clinic at the University Hospital of the State University of Campinas (UNICAMP), in Campinas, SP Brazil, in order to identify hypertensive patients with a resistance to pharmacological therapy. The humanistic and clinical results during the pharmacotherapeutic follow-up were also assessed. Method: A prospective survey of 44 patients was conducted where each patient was monitored for a 12-month period. During the pharmacotherapeutic used the following instruments: the test prepared by Morisky et al., and pill count to assess adherence to the treatment; a test to gauge the knowledge of the disease and of the anti-hypertension treatment; analysis made at the office blood pressure, and through Ambulatory Blood Pressure Monitoring (ABPM); the SF-36 (Short Form) questionnaire and a specific instrument (physical symptoms profile) were used to assess the Health-Related Quality of Life (HRQOL); and was also used the health care facilitators (hypertension urgent care and hospital admissions). Results: In relation to the adherence to therapy via the pill count method, 63.6% of the patients were adherent from the start, and 95,4% at the end of the survey. Through the Morisky et al. Test, the adherence to the therapy at the baseline was of 36.4%, and of 68.2% at the end. Hypertensive patients displayed significant knowledge about hypertension and therapy but no relation was found between that and the control of blood pressure. There was a significant blood pressure reduction (p<0.05) via the MAPA and in the office blood pressure, but 59% of the patients did not control their BP. Nearly all domains of the HRQOL assessed by SF-36 remained unchanged during the follow-up. But for the specific instrument there was a significant reduction in the moderate and severe physical symptoms (p=0.005). There were also significant reductions in the number of urgent care visits (p=0.0001) and hospital admissions (p=0.006). Conclusions: The pharmacotherapeutic follow-up was effective in reducing blood pressure, physical symptoms, and urgent care visit and hospital admission numbers; but it was not sensitive enough to detect changes in the domains of the SF-36. In spite of the high adherence levels to the therapy, most of the patients failed to control their BP. Therefore, other factors should be investigated in order to characterize these patients as resistant to treatment / Doutorado / Doutor em Farmacologia