No description available.

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Retinoic acid (RA) is critical for embryonic development and cell differentiation. Previous work in our laboratory has shown that blocking the RA-dependent increase in Pre-â cell leukemia transcription factors (PBX) mRNA and protein levels in P19 cells prevents them from differentiating to either endodermal or neuronal cells. This suggests that PBX is an important regulator of RA-induced differentiation of P19 cells. A microarray analysis was performed to identify PBX regulated genes, utilizing the empty vector P19 (TO3) and antisense to PBX (AS2) cell lines, during RA-induced differentiation of P19 cells into endodermal or neuronal cells. Among the genes identified by the microarray, Dosage-sensitive sex reversal, adrenal hypoplasia critical region, on chromosome X, gene 1 (DAX-1) and steroidogenic factor 1 (SF-1) were identified to be directly or indirectly regulated by PBX. Both DAX-1 and SF-1 proteins have only recently been reported to be present in preimplantation mouse embryos prior to the expression of steroidogenic enzymes, suggesting they may play a role in early mouse embryogenesis. To determine the roles of DAX-1 and SF-1 during RA-dependent differentiation, P19 cells that inducibly express either FLAG-DAX-1 or FLAG-SF-1 upon removal of doxicyclin were prepared. We found that overexpression of FLAG-DAX-1 had no effect on the RA-induced differentiation of P19 cells. However, FLAG-SF-1 overexpression prevented the RA-dependent loss of Oct-4, DAX-1 and the increase in COUP-TFI, COUP-TFII, and Ets-1 mRNA levels during the commitment stages of both endodermal and neuronal differentiation. Surprisingly, continued expression of SF-1 for seven days caused a RA-independent loss of Oct-4 protein. However, cells which continued to express SF-1 for seven days did not terminally differentiate into endodermal or neuronal cells in response to RA treatment. In addition, we found evidence for a feedback loop, where PBX reduces SF-1 mRNA expression and continued SF-1 expression blocks the RA-dependent increase in PBX protein levels. Our findings suggest that SF-1 plays a novel role in P19 cells where its level of expression is critical for the differentiation state of the cells. At basal levels SF-1 maintains the pluripotent state of the cells, while SF-1 levels must be dramatically reduced for cells to differentiate into both endodermal and neuronal cells upon RA treatment. However, at elevated levels above basal, SF-1 inhibits Oct-4 expression and leads to the induction of the expression of steroidogenic enzymes with a pattern consistent with adrenal cells in a RA-independent fashion. Taken together these data suggest that SF-1 plays a much more dynamic role in P19 cells than previously reported. / Biochemistry

When Y-1 mouse adrenal tumor cells were treated with sodium orthovanadate, an intermediate filament (IF) inhibitor in BHK21-F cells, there was no change in the amount of 20α-dihydroprogesterone produced. A neurofilament inhibitor, β, β'-iminodipropionitrile (IDPN), enhanced the ability of Y-1 cells to produce steroid in response to ACTH by acting on the plasma membrane. Electron microscopy of Y-1 cells extracted with Triton X-100 revealed that both vanadate and IDPN caused the aggregation of cytoskeletal and granular structures in the perinuclear area. The steroidogenic effects of IDPN suggest that the perinuclear aggrergation of cytoskeletal structures may result from the detachment of IF from the plasma membrane, while the reason for the cytoskeletal changes by vanadate is unknown.

A ocorrência do pico pré-ovulatório de LH no proestro depende da pré-exposição aos estrógenos seguida da ação aguda da progesterona, hormônio responsável pela deflagração e amplitude desse pico. No entanto, a origem da progesterona durante essa fase do ciclo ainda é incerta. Enquanto alguns estudos sugerem que a adrenal contribui significativamente para secreção de progesterona nesse período, outros apontam a ovário como a fonteprincipal. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi estudar o perfil e a origem da secreção de progesterona durante o proestro e a sua relação com o pico pré-ovulatório de LH. Para tanto, às 7h00 da manhã do proestro ratas Wistar adultas foram submetidas apenas à canulação da veia jugular (controle) ou a esse procedimento seguido pela cirurgia fictícia de retirada do ovário e adrenal (Sham), oupela ovariectomia (OVX) ou pela adrenalectomia (ADX). Amostras sanguíneas foram coletadas a cada 15 minutos das 11h00 às 13h45 para dosagem de progesterona, estradiol e corticosterona e a cada hora das 14h00 às 19h00 para dosagem desses três hormônios e do LH. Adicionalmente, 7 dias depois da ovariectomia, ratas foram tratadas com óleo milho (OVO) ou 17-?-estradiol (OVE) por 3 dias consecutivos, para compreender melhor o padrão de secreção de progesterona pela adrenal e verficar essa secreção se essa secreção poderia ser modulada pelos estrógenos. Um,dois ou três dias depois da última injeção amostras de sangue foram coletadas conforme descrito acima. No proestro, nenhuma diferença significativa foi detectada entre os grupos controle e Sham em relação ao número de animais que apresentaram o pico pré-ovulatório de LH, ao número de oócitos presentes nos ovidutos na manhã do estro, bem como às concentrações plasmáticas de LH, progesterona, estradiol e corticosterona, sendo os dados referentes a esses dois grupos apresentados em um único grupo denominado Controle.A secreção de estradiol foi similar nos grupos Controle e ADX e significativamente reduzida no grupo OVX. Como esperado, a secreção de corticosterona foi completamente abolida no grupo ADX, enquanto foi similiar nos grupos Controle e OVX. Em todos os grupos experimentais as concentrações basais de progesterona foram em média de 2 pg/mL. Entre às12h00 e 14h00 o grupo Controleapresentou um aumento discreto, mas significativo,da secreção de progesterona (pico 1: de 3,5 ± 1,1 para 22,3 ± 2,7 ng/mL), e após às 15h00 um segundo pico de progesterona (pico 2: de 10,5 ± 2,2para 43,0 ± 2,5 ng/mL), como também o pico de LH (25,4 ± 2,4 ng/mL). Embora o grupo OVX não tenha apresentado o pico 2 de progesterona (de 5,7 ± 2,2 para 6,5 ± 1,2 ng/mL), o pico de LH (26,5 ± 3,9 ng/mL) foi similar ao do grupo Controle.Nessas ratas o pico 1 de progesterona foi atenuado para 12,3 ± 1,9 ng/mL. Ambos picos de progesterona 1 e 2 como o pico de LH, foram praticamente abolidos nas ratas ADX (pico 1: de 2,0 ± 0,3 para 4,5 ± 0,7 ng/mL; pico 2: de 2,2 ± 0,4 para8,9 ± 3,6 ng/mL). Nas ratas OVX, tratadas ou não com estradiol, um pico de progesterona (provavelmente de origem adrenal) foi observado diariamente por volta das 12h00, sendo que a amplitude desse pico não foi influenciada pelo estradiol (OVO: 19,0 ± 5,7 ng/mL; OVE: 22,9 ± 5,3 ng/mL). Esses dados, em conjunto, sugerem que: 1) o pico 1 de progesterona é de origem adrenal e está envolvido na gênese do pico de LH ; 2) esse pico parece ser circadiano uma vez que ratas OVX apresentam um ritmo diário de secreção de progesterona, com um pico por volta das 12h00; 3) opico 2 de progesterona é de origem ovariana e não é necessário para ocorrência do pico de LH; 4) existe uma comunicação endócrina entre ovário e a adrenal de forma que o ovário participa da regulação da secreção de progesterona pela adrenal e 5) o estradiol não está envolvido na regulação da secreção de progesterona pela adrenal. / It is well known that the occurrence of preovulatory surge on proestrus depends on estradiol pre-exposure followed by the acute action of progesterone, a hormone responsible for both the onset and amplitude of this peak. However the origin of progesterone during this period is not clear yet. While some authors argue that the adrenals contribute significantly to preovulatory progesterone, others consider the ovary as the main source. The origin of progesterone that regulates the LH preovulatory surge is not clear. Therefore, we determined here the profile and the source of progesterone secretion during proestrus and its relationship with the LH preovulatory surge. At 7:00h of the proestrus day, female rats were either submitted to jugular vein cannulation (control) or to cannulation followed by ovariectomy (OVX), adrenalectomy (ADX), or sham surgery (Sham). Blood samples were collected every 15 minutes between 11 and 13:45 h for progesterone, estradiol and corticosterone measurements and hourly between 14 and 19 h for progesterone, estradiol and corticosterone and LH measurements. Also, to betterunderstand the pattern of adrenal progesterone secretion and to verify if estrogen can modulate this secretion, seven-day ovariectomized rats were treated with corn oil (OVO) or 17-?estradiol (OVE) for 3 days. One, two, or three days after the last injection, blood samples were withdrawn as described above. Since no difference was observed between the control and Sham groups with regard to the preovulatory LH surge, the number of oocytes or the plasma concentration of LH, progesterone, estradiol and corticosterone, data from these groups were presented as a single group called Control. Upon proestrus, estradiol secretion was similar between Control and ADX groups and significantly decreased in OVX group. As expected, corticosterone secretion was completely abolished in ADX group, while it was similar between the Control and OVX groups. In all groups basal progesterone levels were around 2pg/mL. In Control group, we observed a significant increase in progesterone secretion, around 12-13h (surge 1: from 3.5 ± 1.1 to 22.3 ± 2.7 ng/mL) and after 15h a second progesterone surge (surge 2: from 10.5 ± 2.2 to 43.0 ± 2.5 ng/mL) as well as LH surge (25.4 ± 2.4 ng/mL). OVX group failed to present surge 2 of progesterone (from 5.7 ± 2.2 to 6.5 ± 1.2 ng/mL), but LH surge (26.5 ± 3.9 ng/mL) was identical to that of Control group. In these rats, surge 1 was attenuated to 12.3 ± 1.9 ng/mL. Both progesterone surges 1 and 2 as well as LH surge were absent in ADX group (surge 1: from 2.0 ± 0.3 to 4.5 ± 0,7 ng/mL; surge 2: from 2.2 ± 0.4 to 8.9 ± 3.6 ng/mL).In OVX rats, treated or not with estradiol, a surge of similar magnitude of progesterone (probably fromadrenal) was observed around noon (OVO: 19.0 ± 5.7 ng/mL; OVE: 22.9 ± 5.3 ng/mL). We may conclude that 1) the surge 1 of progesterone is from the adrenal glands and is important for the LH; 2) this surge seems to be circadian since the OVX rats displays a daily rhythm of progesterone secretion, with a surge around 12 h; 3) the surge 2 of progesterone surge originates from the ovary and isnot required for the genesis of the LH surge; 4) there is a potential crosstalk between the ovary and the adrenal gland. in a way that ovary influences adrenal progesterone secretion and 5) the adrenal progesterone secretion is not influenced by estradiol levels.

INTRODUÇÃO: A poluição em centros urbanos é produzida, principalmente, pela queima de combustíveis fósseis. Constitui problema que afeta a saúde da população, provocando doenças tanto no sistema respiratório, como sistemicamente em vários órgãos. Dentre as funções afetadas, realça o impacto da poluição sobre o sistema endócrino, podendo acometer as adrenais, tanto, no ser humano, como em roedores. Todavia, pouco se conhece sobre a ação nesta glândula. Assim, propusemo-nos a analisar os efeitos do ar poluído sobre as adrenais em duas gerações consecutivas de camundongas. OBJETIVOS: Analisar os efeitos do ar concentrado com material particulado (MP) 2,5um sobre as adrenais, avaliando as alterações histomorfométricas; a angiogênese pelo fator de crescimento vascular endotelial (VEGF-A); a pela proliferação celular por meio da proteína Ki-67 e o índice de apoptose pela caspase 3-clivada nas três zonas do córtex da adrenal. MATERIAL E MÉTODOS: Utilizaram-se 20 camundongas alocadas em biotério livre de poluentes, as quais foram acasalados na proporção de um macho para duas fêmeas. Após confirmação da cópula, foram divididas em 2 grupos de 10 animais cada. Acondicionou-se um grupo diariamente em uma câmara, onde as camundongas foram expostas a MP 2,5um à concentração de 600ug/m³ (G0P). O outro grupo, com 10 animais, foi alocado em outra câmara com ar filtrado (G0NP). A exposição ocorreu diariamente durante toda a prenhez das camundongas. Ao nascimento os conceptos, foram amamentados por 30 dias em amamentação, período onde não houve exposição aos poluentes. Após este período, as mães foram eutanasiadas para coleta das adrenais e as filhas sofreram o mesmo protocolo de exposição (G1P e G1NP - submetidas e não submetidas à poluição), não foram acasaladas, sendo eutanasiadas para coleta das adrenais ao fim do protocolo. As adrenais passaram por processamento histológico para coloração de H.E. e imunoistoquímico. RESULTADOS: As adrenais do grupo G0P apresentaram maior espessura da zona glomerulosa e as do G1P apresentaram maior quantidade de espongiócitos na zona fasciculada. As adrenais do grupo G1P tiveram maior imunoexpressão de VEGF-A na zona glomerulosa do que as do G1NP. A imunoexpressão do Ki-67 foi maior na zona reticulada no grupo G0P; no grupo G1P houve maior expressão do Ki-67 na zona glomerulosa do que no grupo G1NP. A imunoexpressão da caspase-3 clivada foi maior nos grupos G0P e G1P do que nos demais. CONCLUSÃO: A exposição ao ar poluído com material particulado 2.5?m determinou alterações histomorfométricas e imunoistoquímicas nas três zonas do córtex da adrenal de duas gerações consecutivas de camundongas. Estas alterações poderiam causar distúrbios endócrinos e cardiovasculares / INTRODUCTION: The pollution in urban centers is produced mainly by the burning of fossil fuels. It\'s a concern of public health, causing diseases in both the respiratory system and the other organs. Among the affected functions, it is important to highlight the impact of pollution on the endocrine system and this effect on the adrenal glands, both in humans and in rodents. However, little is known on the action of pollutants on this gland. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of polluted air on the adrenal in two consecutive generations of female mice. OBJECTIVES: To assess the effects of concentrate air with particulate matter (PM) 2.5um on the adrenal cortex evaluating histomorphometric changes; angiogenesis by vascular endothelial growth factor (VEGF-A); the cell proliferation by Ki-67 index and apoptosis by cleaved caspase-3 in the three zones of the adrenal cortex. MATERIAL AND METHODS: We used 20 female mice in their cages free of pollutants. Those animals were mated at a ratio of one male to two females. After mating confirmation, animals were divided into 2 groups of 10 animals each. A group was daily allocated in a chamber where the female mice were exposed to PM 2.5um at a concentration of 600ug/m³ (G0P). The other group of 10 animals was allocated in another chamber with filtered air (G0NP). The exposure occurred daily throughout pregnancy period. At birth, the fetuses were breastfed for 30 days. During breastfeeding period there was no pollutants exposure. After this period, mothers were euthanized for adrenal collection and daughters suffered the same exposure protocol (G1P and G1NP - exposed and not exposed to pollution), but those were not mated, being euthanized for adrenal collection at the end of the protocol. The adrenal underwent histological processing for H.E. staining and immunohistochemistry. RESULTS: The adrenal of the G0P group had increased thickness of the zona glomerulosa and the G1P presented more espongiocytes in the zona fasciculata. The adrenal of the G1P group had higher immunoreactivity of VEGF-A in the zona glomerulosa than one of the G1NP. The immunoreactivity of Ki-67 in the zona reticularis of G0P group was higher one of G0NP; there was a higher expression of Ki-67 in the zona glomerulosa of the G1P group compared to G1NP group. The immunoreactivity of cleaved caspase-3 in G0P and G1P was higher than ones of other groups. CONCLUSION: Exposure to air pollution with particulate matter 2.5um determined histomorphometric and immunohistochemical changes in the three adrenal cortical zones of the two consecutive generations of mice. These changes could cause endocrine and cardiovascular disorders

Existem evidências na literatura que demonstram a existência de células indiferenciadas na capsula adrenal, e que o ACTH poderia estimular estas células. Porém não se sabe quais os genes e vias que desencadeiam esta resposta. Através de animais Cre-Lox induzível por Tamoxifeno, silenciamos o gene Pomc em camundongos adultos e avaliamos o efeito do ACTH nessas células. Foram utilizadas placas de PCR array para análise de genes relacionados com células progenitoras em amostras obtidas pela técnica de rolamento, e validação por PCRq com amostras microdissecadas da zona capsular/subcapsular da adrenal. Após caracterização dos animais com o gene Pomc silenciado e tratamentos com ACTH observamos o aumento da expressão de genes relacionados com as vias Wnt, Igf1 e Notch. Esses dados corroboram evidencias descritas na literatura que mostram a importância dessas vias no desenvolvimento e manutenção do córtex adrenal, e sugerem o envolvimento do ACTH nesses processos que envolvem as células progenitoras do córtex adrenal. / There is evidence in the literature demonstrating the existence of stem cells in the adrenal capsule, and that ACTH could stimulate these cells. However, it remains unknown which genes and pathways that trigger this response. By using a tamoxifen-inducible Cre-Lox mice strain, we knocked-out Pomc gene in adult mice and evaluated the effect of ACTH in these cells. PCR array technique was used to determine the expression level of key genes related to progenitor cells in samples obtained by the technique of \"rolling bearing\". Also, we validated the data by qPCR using samples from microdissected capsular areas of the adrenal gland. After characterization of animal model, the results show that treatment with ACTH increase the expression of genes related to Wnt, Igf1 and Notch pathways. These data corroborate with the literature, reinforcing the importance of these pathways in the development and maintenance of the adrenal cortex, and also suggesting the involvement of ACTH in these processes involving the progenitor cells of the adrenal cortex.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Alterações nutricionais, hormonais e ambientais nos períodos críticos do desenvolvimento como a gestação e/ou lactação podem influenciar a estrutura e a fisiologia de órgãos e tecidos, predispondo ao aparecimento de doenças na vida adulta. Esse fenômeno é conhecido como programação metabólica. O fumo materno na gestação/lactação tem sido associado ao sobrepeso/obesidade na infância e na vida adulta em ambos os sexos. Porém, estudos evidenciam diferenças entre os gêneros em resposta a exposição à nicotina. Já foi demonstrado que muitas mulheres param de fumar na gestação, mas a maioria destas volta a fumar na lactação. Anteriormente, mostramos que machos adultos cujas mães foram expostas à nicotina na lactação, desenvolveram obesidade central, hiperleptinemia e hipotireoidismo. Como a nicotina afeta a função adrenal e como catecolaminas e glicocorticóides têm efeitos bem conhecidos sobre o tecido adiposo, avaliamos a função da medula adrenal e o conteúdo de leptina no tecido adiposo e músculo de machos e fêmeas cujas mães foram expostas à nicotina na lactação. Dois dias pós-parto, implantamos minibombas osmóticas nas ratas lactantes dividas em: NIC infusão de nicotina (6mg/Kg/dia s.c.) por 14 dias, e C infusão de salina pelo mesmo período. Estas lactantes foram divididas de acordo com o sexo das proles. O sacrifício das proles de ambos os sexos ocorreu aos 15 (fim da exposição à nicotina) e 180 dias de vida. Aos 15 dias, os machos da prole NIC apresentaram aumento de MGV absoluta e relativa ao peso corporal (+72% e +73% respectivamente), hiperleptinemia (+35%), hipercorticosteronemia (+67%), maior peso adrenal (+39%), conteúdo de catecolaminas totais (absoluto: +69% e relativo: +41%), embora diminuição da enzima TH (-33%). Quando adultos, os machos programados exibiram maior massa corporal (+10%), MGV absoluta (+47%) e relativa (+33%), além de hiperleptinemia (+41%) e maior conteúdo de leptina no TAV (+23%). Esses animais também apresentaram hipercorticosteronemia (+77%), maior conteúdo de catecolaminas totais absoluto e relativo (+79% e +89% respectivamente) e de TH (+38%) embora tenham menor secreção de catecolaminas in vitro estimulada por cafeína (-19%) e maior expressão do ADRB3 no TAV (+59%). Em relação as fêmeas da prole NIC aos 15 dias de vida, estas apresentaram menor massa corporal (-6%) e hiperleptinemia (+41%) embora sem alteração da MGV. Aos 180 dias, as fêmeas da prole NIC apresentaram menor conteúdo de leptina no TAS (-46%) e maior conteúdo de leptina no músculo solear (+22%) e diminuição da expressão do ADRB3 no TAV (-39%). Concluímos que a nicotina materna afeta ambos, medula adrenal e tecido adiposo de forma gênero dependente, tanto em curto prazo (quando a nicotina está presente no leite materno), quanto em longo prazo (repercussões na vida adulta). De forma geral, as fêmeas da prole NIC apresentam alterações mais discretas do que os machos em ambos os períodos estudados. / Nutritional, hormonal and environmental changes during critical periods of life (pregnancy and/or lactation) are associated with future changes in the structure and physiology of body tissues and systems, influencing some diseases in adulthood. This phenomenon is known as metabolic programming. Maternal smoking during pregnancy/lactation has been associated with overweight/obesity in childhood and adulthood in both genders. However, studies have shown gender differences in response to nicotine exposure. Although many women quit smoking during pregnancy, data reveal that most women who stop smoking during gestation relapse during lactation. Previously, we showed that adult male rats whose mothers received nicotine during lactation developed overweight, hyperleptinemia and hypothyroidism. Because nicotine affects the adrenal function and, as glucocorticoids and catecholamines have well known effects on adipose tissue, we evaluated adrenal medulla function and leptin content in adipose tissue and muscle of males and females whose dams were nicotine-treated during lactation. On postnatal (PN) day 2, dams were subcutaneously implanted with osmotic minipumps releasing nicotine (6mg/Kg/day) for 14 days of lactation (NIC) or saline. Male and female offspring were killed at 15 and 180 days-old. In PN15, males of NIC group presented higher absolute (+72%) and relative (+73%) VFM, hyperleptinemia (+35%), hypercorticosteronemia (+67%), higher adrenal weight (+39%) and adrenal catecholamine content (absolute: +69% and relative: +41%) although lower TH content (-33%). In PN180, these males displayed higher body mass (+10%), absolute (+47%) and relative (+33%) VFM, hyperleptinemia (+41%), higher leptin content in VAT (+23%), hypercorticosteronemia (+77%), higher adrenal catecholamine content (absolute:+79% and relative:+89%), higher TH expression (+38%), lower in vitro catecholamine release (-19%) and higher ADRB3 content in VAT (+59%). Females of NIC group at PN15 presented lower body mass (-6%) and hyperleptinemia (+41%) but no change in VFM. In PN180, these females showed lower leptin content in SAT (-46%), higher leptin content in muscle (+22%) and lower ADRB3 content in VAT (-39%). Thus, we evidenced a sex dimorphism in the model of programming by maternal nicotine exposure during lactation. The medullary adrenal function and corticosteronemia in adult rat were programmed only in male offspring while the female offspring displayed relevant alterations in leptin content.

INTRODUÇÃO: A poluição em centros urbanos é produzida, principalmente, pela queima de combustíveis fósseis. Constitui problema que afeta a saúde da população, provocando doenças tanto no sistema respiratório, como sistemicamente em vários órgãos. Dentre as funções afetadas, realça o impacto da poluição sobre o sistema endócrino, podendo acometer as adrenais, tanto, no ser humano, como em roedores. Todavia, pouco se conhece sobre a ação nesta glândula. Assim, propusemo-nos a analisar os efeitos do ar poluído sobre as adrenais em duas gerações consecutivas de camundongas. OBJETIVOS: Analisar os efeitos do ar concentrado com material particulado (MP) 2,5um sobre as adrenais, avaliando as alterações histomorfométricas; a angiogênese pelo fator de crescimento vascular endotelial (VEGF-A); a pela proliferação celular por meio da proteína Ki-67 e o índice de apoptose pela caspase 3-clivada nas três zonas do córtex da adrenal. MATERIAL E MÉTODOS: Utilizaram-se 20 camundongas alocadas em biotério livre de poluentes, as quais foram acasalados na proporção de um macho para duas fêmeas. Após confirmação da cópula, foram divididas em 2 grupos de 10 animais cada. Acondicionou-se um grupo diariamente em uma câmara, onde as camundongas foram expostas a MP 2,5um à concentração de 600ug/m³ (G0P). O outro grupo, com 10 animais, foi alocado em outra câmara com ar filtrado (G0NP). A exposição ocorreu diariamente durante toda a prenhez das camundongas. Ao nascimento os conceptos, foram amamentados por 30 dias em amamentação, período onde não houve exposição aos poluentes. Após este período, as mães foram eutanasiadas para coleta das adrenais e as filhas sofreram o mesmo protocolo de exposição (G1P e G1NP - submetidas e não submetidas à poluição), não foram acasaladas, sendo eutanasiadas para coleta das adrenais ao fim do protocolo. As adrenais passaram por processamento histológico para coloração de H.E. e imunoistoquímico. RESULTADOS: As adrenais do grupo G0P apresentaram maior espessura da zona glomerulosa e as do G1P apresentaram maior quantidade de espongiócitos na zona fasciculada. As adrenais do grupo G1P tiveram maior imunoexpressão de VEGF-A na zona glomerulosa do que as do G1NP. A imunoexpressão do Ki-67 foi maior na zona reticulada no grupo G0P; no grupo G1P houve maior expressão do Ki-67 na zona glomerulosa do que no grupo G1NP. A imunoexpressão da caspase-3 clivada foi maior nos grupos G0P e G1P do que nos demais. CONCLUSÃO: A exposição ao ar poluído com material particulado 2.5?m determinou alterações histomorfométricas e imunoistoquímicas nas três zonas do córtex da adrenal de duas gerações consecutivas de camundongas. Estas alterações poderiam causar distúrbios endócrinos e cardiovasculares / INTRODUCTION: The pollution in urban centers is produced mainly by the burning of fossil fuels. It\'s a concern of public health, causing diseases in both the respiratory system and the other organs. Among the affected functions, it is important to highlight the impact of pollution on the endocrine system and this effect on the adrenal glands, both in humans and in rodents. However, little is known on the action of pollutants on this gland. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of polluted air on the adrenal in two consecutive generations of female mice. OBJECTIVES: To assess the effects of concentrate air with particulate matter (PM) 2.5um on the adrenal cortex evaluating histomorphometric changes; angiogenesis by vascular endothelial growth factor (VEGF-A); the cell proliferation by Ki-67 index and apoptosis by cleaved caspase-3 in the three zones of the adrenal cortex. MATERIAL AND METHODS: We used 20 female mice in their cages free of pollutants. Those animals were mated at a ratio of one male to two females. After mating confirmation, animals were divided into 2 groups of 10 animals each. A group was daily allocated in a chamber where the female mice were exposed to PM 2.5um at a concentration of 600ug/m³ (G0P). The other group of 10 animals was allocated in another chamber with filtered air (G0NP). The exposure occurred daily throughout pregnancy period. At birth, the fetuses were breastfed for 30 days. During breastfeeding period there was no pollutants exposure. After this period, mothers were euthanized for adrenal collection and daughters suffered the same exposure protocol (G1P and G1NP - exposed and not exposed to pollution), but those were not mated, being euthanized for adrenal collection at the end of the protocol. The adrenal underwent histological processing for H.E. staining and immunohistochemistry. RESULTS: The adrenal of the G0P group had increased thickness of the zona glomerulosa and the G1P presented more espongiocytes in the zona fasciculata. The adrenal of the G1P group had higher immunoreactivity of VEGF-A in the zona glomerulosa than one of the G1NP. The immunoreactivity of Ki-67 in the zona reticularis of G0P group was higher one of G0NP; there was a higher expression of Ki-67 in the zona glomerulosa of the G1P group compared to G1NP group. The immunoreactivity of cleaved caspase-3 in G0P and G1P was higher than ones of other groups. CONCLUSION: Exposure to air pollution with particulate matter 2.5um determined histomorphometric and immunohistochemical changes in the three adrenal cortical zones of the two consecutive generations of mice. These changes could cause endocrine and cardiovascular disorders

A ocorrência do pico pré-ovulatório de LH no proestro depende da pré-exposição aos estrógenos seguida da ação aguda da progesterona, hormônio responsável pela deflagração e amplitude desse pico. No entanto, a origem da progesterona durante essa fase do ciclo ainda é incerta. Enquanto alguns estudos sugerem que a adrenal contribui significativamente para secreção de progesterona nesse período, outros apontam a ovário como a fonteprincipal. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi estudar o perfil e a origem da secreção de progesterona durante o proestro e a sua relação com o pico pré-ovulatório de LH. Para tanto, às 7h00 da manhã do proestro ratas Wistar adultas foram submetidas apenas à canulação da veia jugular (controle) ou a esse procedimento seguido pela cirurgia fictícia de retirada do ovário e adrenal (Sham), oupela ovariectomia (OVX) ou pela adrenalectomia (ADX). Amostras sanguíneas foram coletadas a cada 15 minutos das 11h00 às 13h45 para dosagem de progesterona, estradiol e corticosterona e a cada hora das 14h00 às 19h00 para dosagem desses três hormônios e do LH. Adicionalmente, 7 dias depois da ovariectomia, ratas foram tratadas com óleo milho (OVO) ou 17-?-estradiol (OVE) por 3 dias consecutivos, para compreender melhor o padrão de secreção de progesterona pela adrenal e verficar essa secreção se essa secreção poderia ser modulada pelos estrógenos. Um,dois ou três dias depois da última injeção amostras de sangue foram coletadas conforme descrito acima. No proestro, nenhuma diferença significativa foi detectada entre os grupos controle e Sham em relação ao número de animais que apresentaram o pico pré-ovulatório de LH, ao número de oócitos presentes nos ovidutos na manhã do estro, bem como às concentrações plasmáticas de LH, progesterona, estradiol e corticosterona, sendo os dados referentes a esses dois grupos apresentados em um único grupo denominado Controle.A secreção de estradiol foi similar nos grupos Controle e ADX e significativamente reduzida no grupo OVX. Como esperado, a secreção de corticosterona foi completamente abolida no grupo ADX, enquanto foi similiar nos grupos Controle e OVX. Em todos os grupos experimentais as concentrações basais de progesterona foram em média de 2 pg/mL. Entre às12h00 e 14h00 o grupo Controleapresentou um aumento discreto, mas significativo,da secreção de progesterona (pico 1: de 3,5 ± 1,1 para 22,3 ± 2,7 ng/mL), e após às 15h00 um segundo pico de progesterona (pico 2: de 10,5 ± 2,2para 43,0 ± 2,5 ng/mL), como também o pico de LH (25,4 ± 2,4 ng/mL). Embora o grupo OVX não tenha apresentado o pico 2 de progesterona (de 5,7 ± 2,2 para 6,5 ± 1,2 ng/mL), o pico de LH (26,5 ± 3,9 ng/mL) foi similar ao do grupo Controle.Nessas ratas o pico 1 de progesterona foi atenuado para 12,3 ± 1,9 ng/mL. Ambos picos de progesterona 1 e 2 como o pico de LH, foram praticamente abolidos nas ratas ADX (pico 1: de 2,0 ± 0,3 para 4,5 ± 0,7 ng/mL; pico 2: de 2,2 ± 0,4 para8,9 ± 3,6 ng/mL). Nas ratas OVX, tratadas ou não com estradiol, um pico de progesterona (provavelmente de origem adrenal) foi observado diariamente por volta das 12h00, sendo que a amplitude desse pico não foi influenciada pelo estradiol (OVO: 19,0 ± 5,7 ng/mL; OVE: 22,9 ± 5,3 ng/mL). Esses dados, em conjunto, sugerem que: 1) o pico 1 de progesterona é de origem adrenal e está envolvido na gênese do pico de LH ; 2) esse pico parece ser circadiano uma vez que ratas OVX apresentam um ritmo diário de secreção de progesterona, com um pico por volta das 12h00; 3) opico 2 de progesterona é de origem ovariana e não é necessário para ocorrência do pico de LH; 4) existe uma comunicação endócrina entre ovário e a adrenal de forma que o ovário participa da regulação da secreção de progesterona pela adrenal e 5) o estradiol não está envolvido na regulação da secreção de progesterona pela adrenal. / It is well known that the occurrence of preovulatory surge on proestrus depends on estradiol pre-exposure followed by the acute action of progesterone, a hormone responsible for both the onset and amplitude of this peak. However the origin of progesterone during this period is not clear yet. While some authors argue that the adrenals contribute significantly to preovulatory progesterone, others consider the ovary as the main source. The origin of progesterone that regulates the LH preovulatory surge is not clear. Therefore, we determined here the profile and the source of progesterone secretion during proestrus and its relationship with the LH preovulatory surge. At 7:00h of the proestrus day, female rats were either submitted to jugular vein cannulation (control) or to cannulation followed by ovariectomy (OVX), adrenalectomy (ADX), or sham surgery (Sham). Blood samples were collected every 15 minutes between 11 and 13:45 h for progesterone, estradiol and corticosterone measurements and hourly between 14 and 19 h for progesterone, estradiol and corticosterone and LH measurements. Also, to betterunderstand the pattern of adrenal progesterone secretion and to verify if estrogen can modulate this secretion, seven-day ovariectomized rats were treated with corn oil (OVO) or 17-?estradiol (OVE) for 3 days. One, two, or three days after the last injection, blood samples were withdrawn as described above. Since no difference was observed between the control and Sham groups with regard to the preovulatory LH surge, the number of oocytes or the plasma concentration of LH, progesterone, estradiol and corticosterone, data from these groups were presented as a single group called Control. Upon proestrus, estradiol secretion was similar between Control and ADX groups and significantly decreased in OVX group. As expected, corticosterone secretion was completely abolished in ADX group, while it was similar between the Control and OVX groups. In all groups basal progesterone levels were around 2pg/mL. In Control group, we observed a significant increase in progesterone secretion, around 12-13h (surge 1: from 3.5 ± 1.1 to 22.3 ± 2.7 ng/mL) and after 15h a second progesterone surge (surge 2: from 10.5 ± 2.2 to 43.0 ± 2.5 ng/mL) as well as LH surge (25.4 ± 2.4 ng/mL). OVX group failed to present surge 2 of progesterone (from 5.7 ± 2.2 to 6.5 ± 1.2 ng/mL), but LH surge (26.5 ± 3.9 ng/mL) was identical to that of Control group. In these rats, surge 1 was attenuated to 12.3 ± 1.9 ng/mL. Both progesterone surges 1 and 2 as well as LH surge were absent in ADX group (surge 1: from 2.0 ± 0.3 to 4.5 ± 0,7 ng/mL; surge 2: from 2.2 ± 0.4 to 8.9 ± 3.6 ng/mL).In OVX rats, treated or not with estradiol, a surge of similar magnitude of progesterone (probably fromadrenal) was observed around noon (OVO: 19.0 ± 5.7 ng/mL; OVE: 22.9 ± 5.3 ng/mL). We may conclude that 1) the surge 1 of progesterone is from the adrenal glands and is important for the LH; 2) this surge seems to be circadian since the OVX rats displays a daily rhythm of progesterone secretion, with a surge around 12 h; 3) the surge 2 of progesterone surge originates from the ovary and isnot required for the genesis of the LH surge; 4) there is a potential crosstalk between the ovary and the adrenal gland. in a way that ovary influences adrenal progesterone secretion and 5) the adrenal progesterone secretion is not influenced by estradiol levels.