O comportamento humano é influenciado por fatores sociais, culturais, econômicos e políticos, e pode aumentar ou diminuir o risco de infecção pela dengue, dependendo da relação entre a população e o inseto vetor da doença. Devido ao fato de nenhuma vacina 100% eficaz ter sido disponibilizada ainda, a disseminação da dengue só pode ser contida por técnicas de controle da população de vetores (Aedes aegypti e outros) e pela proteção individual dos componentes da população humana. Este estudo testou a hipótese de que as populações afetadas pela dengue provavelmente vão reduzir a intensidade de seus hábitos relacionados ao controle dos vetores na presença de uma vacina parcialmente protetora. Essa hipótese foi testada por uma avaliação em campo, na qual uma amostra de população de área endêmica para a dengue foi entrevistada sobre seus hábitos de controle do vetor na presença de uma vacina teórica. As entrevistas demonstraram que as pessoas que foram informadas sobre uma vacina muito eficiente iriam reduzir seus hábitos de controle do mosquito de maneira significativa mais importante do que a amostra que foi informada sobre a presença de uma vacina pouco eficaz / Human behaviors, which are influenced by social, cultural, economic and political factors, can increase or decrease the risk of dengue infection, depending on the relationship with the insect vector. Because no 100% efficacious vaccine is currently available, the spread of dengue can only be curtailed by controlling vector populations (Aedes aegypti and others) and by protecting individuals. This study tested the hypothesis that dengue-affected populations are likely to relax their vector-control habits if a potentially protective vaccine becomes available. The hypothesis was tested using an empirical field test in which the local population of an endemic area was interviewed about their vector-control habits given the presence of a theoretical vaccine. The interview showed that people who were informed that a very effective vaccine is available would reduce their vector-control habits significantly compared to a group that was informed that the vaccine is not very effective

Parques localizados em grandes cidades possuem potencial para manter o ciclo biológico de insetos vetores de patógenos que causam doenças. Este é o caso do Aedes fluviatilis, uma espécie de mosquito antropofílica, abundantemente encontrada na cidade de São Paulo, porém que possui sua biologia, potencial epidemiológico e características genéticas pouco conhecidas. Visando o melhor conhecimento sobre a estrutura populacional dessa espécie foram selecionados oito loci microssatélites, marcadores utilizados em estudos de genética de populações, para caracterizar as populações de Ae. fluviatilis. Objetivos: (1) Testar parâmetros de funcionalidade de marcadores microssatélites em Ae. fluviatilis, previamente utilizados com sucesso em outras espécies de culicídeos (2) Avaliar a variabilidade genética e o fluxo gênico entre populações do mosquito Ae. fluviatilis, no município de São Paulo. Material e Métodos: Foram testados 40 pares de primers de microssatélites em mosquitos Ae. fluviatilis. Os primers funcionais foram utilizados para elucidar a estruturação das populações dessa espécie coletadas em nove parques urbanos da cidade de São Paulo. Resultados: Dos primers testados, oito foram funcionais e amplificaram de forma consistente em todas as nove populações de Ae. fluviatilis. Os resultados encontrados sugerem que essa espécie possui baixa estruturação genética, alto fluxo gênico, déficit de heterozigosidade e sofreram um processo de expansão populacional. Discussão: Processos de urbanização, juntamente com mudanças climáticas, beneficiam e tendem a aumentar a abundância de espécies antropofílicas e adaptadas ao meio antrópico, como é o caso de Ae. fluviatilis, a expansão populacional dessa espécie, juntamente com o alto fluxo gênico e baixa estruturação genética, apresentam um panorama de alta adaptabilidade e sobrevivência deste culicídeo. Conclusões: Evidências, como o alto fluxo gênico, baixa estruturação populacional e déficit de heterozigosidade, indicam que as populações de Ae. fluviatilis estão em expansão populacional e que esse evento esteja ocorrendo junto com a expansão da área urbana de São Paulo. / Urban Parks have the potential to harbor and maintain the life cycle of several mosquito species such as Aedes fluviatilis, an anthropophilic mosquito very abundant in the city of São Paulo. However its biology, epidemiological potential and genetic characteristics are poorly known. Aiming at better understanding of the population structure of this species, there were selected eight microsatellite loci, previously used in Aedes aegypti, Aedes albopictus and Aedes caspius population genetic studies to genetically characterize Ae. fluviatilis populations. Objectives: (1) Test microsatellite markers functionality parameters in Ae. fluviatilis, previously used successfully in other Aedes species (2) To evaluate the genetic variability and gene flow between populations of Ae. fluviatilis mosquito in São Paulo. Materials and Methods: There were tested 40 pairs of microsatellite loci in Ae. fluviatilis samples. The functional primers were used to elucidate the populations structure of this species collected in nine urban parks located in the city of São Paulo. Results: From the tested primers, eight were functional and amplified consistently in all nine populations of Ae. fluviatilis. The results suggest that this species has low genetic structure, high gene flow, heterozygosity deficit and are expanding its population size. Discussion: Urbanization processes, along with climate change benefits and tends to increase the abundance of anthropophilic and well adapted to human environment mosquito species, such as Ae. fluviatilis. The population expansion of this species, along with the high gene flow and low genetic structure, present a panorama of high adaptability and survival of this Culicidae in urban areas. Conclusions: Evidence, as the high gene flow, low population structure and high deficit of heterozygosity, indicate that Ae. fluviatilis population are in expansion and that this event is taking place along with the expansion of the urban area of São Paulo.

Introdução: Em suas áreas urbanas, o Brasil vem enfrentando graves epidemias de Dengue, Zika e Febre Chikungunya. Sabe-se que a principal forma de transmissão se deve à veiculação dos vírus causadores destes agravos pelo mosquito Aedes aegypti, sendo fundamental o desenvolvimento de atividades de vigilância entomológica e controle vetorial. Além disso, Ae. aegypti é vetor do vírus da Febre Amarela e Mayaro, entre outros agravos. Entre as diferentes formas que contribuem para a proliferação de Ae. Aegypti, estão os imóveis onde residem pessoas que estão em situação de acumulação, e que podem se configurar como locais importantes para o aumento da densidade do vetor. Objetivo: Avaliar a relação entre os imóveis onde residem esses indivíduos, e a ocorrência de agravos causados por vírus veiculados por Ae. aegypti; elaborar um caderno de orientação aos profissionais de saúde para o atendimento de pessoas com transtorno de acumulação na esfera da Vigilância Ambiental. Materiais e Métodos: A pesquisa foi desenvolvida em uma região da zona norte da cidade de São Paulo, no período de agosto de 2013 a julho de 2017. Foram geocodificados os endereços das pessoas que estão em situação de acumulação, dos Pontos Estratégicos e dos casos autóctones de Dengue, e demais agravos envolvendo Ae. aegypti. Os imóveis das pessoas que estão em situação de acumulação e os PE foram caracterizados no espaço e temporalmente. A existência de aglomerados de casos das arboviroses em torno dos imóveis foi testada por meio da estatística espacial e focal denominada Gi, sendo considerada uma distância máxima de 500 metros, com intervalos a cada 100 metros. O caderno de orientação foi produzido com base na consolidação da estrutura de atendimento de pessoas com transtorno de acumulação existente no âmbito da Vigilância Ambiental. Resultados: Dos 93 imóveis de pessoas em situação de acumulação, foram utilizados 78, dos quais se constituíram como plausíveis para a análise. Em relação aos Pontos Estratégicos, foram considerados todos os 94 presentes na área de estudo. No período, foram confirmados 3112 casos autóctones de Dengue. Quanto às demais arboviroses, foram confirmados apenas 5 autóctones de Chikungunya. Dos imóveis de pessoas em situação de acumulação e dos Pontos Estratégicos, em apenas 6 (7,69%) e 4 (4,26%) respectivamente, foi constatada a formação de aglomerados de casos de dengue, todos pertencentes ao Distrito Administrativo de Vila Medeiros. Conclusões: Os imóveis e os Pontos Estratégicos não se mostraram relevantes para a constituição de aglomerados de casos de arboviroses. O caderno de orientação é apresentado no corpo do trabalho. / Introduction: Brazil has been facing severe epidemics of Dengue Zika and Chikungunya Fever in urban areas. It is widely known that the main form of transmission is due to the dispersion of the virus, which leads to diseases caused by the mosquito Aedes aegypti. Thus, the development of entomological surveillance and vector control activities are fundamental. In addition, Ae. aegypti is a vector of Yellow Fever, Mayaro virus and other diseases. Among different ways of contributing for the proliferation of Ae. aegypti, are the houses where people accumulate objects, who suffer from the so-called accumulation disorder, that can be configured as important places for the increase of the vector\'s density. Objective: To evaluate the relationship between the houses where people who are in a situation of accumulation reside and the occurrence of diseases caused by virus transmitted by Ae. aegypti; to elaborate a guidebook for health professionals to care for people with accumulation disorders in the ambit of Environmental Surveillance. Materials and Methods: The research was conducted in a region situated in the northern part of the city of São Paulo, from August 2013 to July 2017. The addresses of the people in the accumulation situation, the Strategic Points and the cases were geocoded. autochthonous diseases of Dengue and other diseases involving Ae. aegypti. The properties of the people afflicted by hoarding disorder and the PE were characterized in space and temporarily. The existence of arboviruses clusters around real estate was tested using the spatial and focal statistics called Gi, considering a maximum distance of 500m, with intervals every 100m. The guidance document was produced based upon the consolidation of the care structure for people with accumulation disorder existing in the scope of Environmental Surveillance. Results: Of the 93 properties of people in a situation of accumulation, 78 were used, of which they were constituted as plausible for an analysis. Regarding the Strategic Points, we considered all the 94 presents in the study area. During the period, 3,112 autochthonous cases of Dengue were confirmed. As for the other arboviruses, only 5 autochthonous cases of Chikungunya were confirmed. Regarding the properties of the people in a situation of accumulation and of the Strategic Points, only in a total of 6 (7.69%) and 4 (4.26%) were respectively identified the formation of agglomerates of Dengue cases, all belonging to the Administrative District of Vila Medeiros. Conclusions: The properties and Strategic Points were not relevant for the formation of clusters of arboviruses cases. The orientation notebook is displayed in the body of the work.

RESUMO Urbinatti PR. Observações ecológicas de Ae. albopictus (Diptera: Culicidae) em áreas de proteção ambiental e urbana na periferia da Grande São Paulo. São Paulo; 2004. [Tese de Doutorado – Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo]. Objetivos. Contribuir para o conhecimento da ecologia de uma população de Ae. albopictus em área de proteção ambiental e urbanizada. Métodos. Para avaliar aspectos da infestação desse culicídeo, escolheram-se duas áreas próximas, o Parque Ecológico do Tietê (PET), em área de proteção ambiental, (ambientes 1 e 2) e outra antrópica, Jardins São Francisco e Piratininga (ambientes 1 e 2), na Zona Leste da Capital. A primeira etapa da pesquisa foi desenvolvida no PET, de abril de 2001 a março de 2002 e a segunda foi nos Jardins São Francisco e Piratininga, de abril de 2002 a março de 2003. Com a finalidade de medir e comparar a infestação de Ae. albopictus entre os dois ambientes do PET e Jardins, utilizaram-se, 10 larvitrampas e 10 ovitrampas, sendo instaladas no peridomicílio e com monitoramento quinzenal no PET e a cada dez dias nos Jardins. Foram efetuadas coletas de amostras de água para análise de parâmetros físicos e químicos e de fauna associada. Resultados. Ae. albopictus foi à espécie mais freqüente em relação as demais coletadas, nos criadouros naturais e artificiais, correspondendo a 97,70 % e 92,50 % do total de imaturos, respectivamente no PET, Jardins São Francisco e Piratininga. Observou-se que os índices de densidade e positividade das ovitrampas e larvitrampas, no PET apresentaram valores elevados quando comparados aos Jardins São Francisco e Piratininga. Verificou-se correlação positiva significante entre a densidade de larvas e pupas de Ae. albopictus coletada em larvitrampas e as temperaturas ambiente e da água nos pneus nas duas áreas. Observou-se diferença estatisticamente significante entre a densidade de larvas de Ae. albopictus nas larvitrampas dos ambientes 1 e 2 do PET e Jardins, na presença e ausência de fauna associada.Conclusões. A presença freqüente de Ae. albopictus tanto em áreas de proteção ambiental como em alterada, reforça a evidência de sua ampla valência ecológica em colonizar ecótopos naturais e artificiais. Diante deste comportamento e aliado a competência e capacidade vetora, espera-se que os resultados dessa pesquisa possam fornecer informações que possibilitem subsidiar ações de controle caso esse mosquito represente ameaças à Saúde Pública. Descritores: Aedes albopictus, vetor, imaturos, ovitrampa, larvitrampa, urbanização / SUMMARY Urbinatti PR. Ecological observations of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) in urban and preserved areas in the outskirts of Greater Sao Paulo. São Paulo; 2004. [Tese de Doutorado – Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo]. Objective. To contribute to the knowledge of the ecology of the Ae. albopictus population both in a protected and in an urban environment. Methods. Two different environments were chosen to evaluate aspects of the infestation of the East End of the city: a protected environment - the Parque Ecológico do Tietê (PET) divided into environments 1 and 2, and another anthropogenically altered one - the Jardins São Francisco and Piratininga, divided in the same way. The first step of the investigation was undertaken in PET between April 2001 and March 2002 and the second step in the Jardins, between April 2002 and March 2003. To measure and compare Ae. Albopictus infestation as between PET and Jardins, 10 larvitraps and 10 ovitraps were installed around a domiciliary area with monitoring every 15 days in PET and every 10 days in the Jardins. The analysis of water samples for their chemical and physical parameters and associated fauna was undertaken. Results. Ae. albopictus was the most frequently collected species, both in artificial and natural breeding sites, accounting for 97.70% and 92.50% of the total of immature specimens collected in PET and in the Jardins, respectively. As regards the positive rates of ovitraps and larvitraps, PET presented higher values than the Jardins. There was a significant correlation between larval and pupal densities in the larvitraps and the temperature of water in tires and sites and a significant difference between larval densities in the larvitraps of environments 1 and 2 in both PET and Jardins, as regards the presence and absence of associated fauna. Conclusions. The frequent presence of Ae. albopictus in protected areas and in altered ones reinforces the evidence of its ecological adaptability in the colonization of both natural and artificial environments. This behavior associated with its competence and vectorial capacity should contribute with information that will be useful for control actions if these insects come to represent a public health threat. Key words: Aedes albopictus, vector, immature, ovitrap, larvitrap, urbanization

Um dos grandes problemas da saúde pública no país esta diretamente ligada à dengue, uma vez que aproximadamente 550 mil pessoas são infectadas anualmente, e cerca de 20 mil vêm a óbito. Esta doença é causada pelo vírus da família Flaviviridae, transmitido pela fêmea ao hospedeiro durante o repasto sanguíneo. Este projeto teve como objetivo isolar e caracterizar células indiferenciadas de ovos embrionados e do tubo digestivo de larvas em quarto instar de Aedes aegypti, como fonte de pesquisa na área de biologia celular e estrutural destes vetores. Mediante cultura celular, as células foram isoladas e recultivadas em meio de cultura DMEM-High, e temperatura de 28 ºC. As seguintes análises foram feitas: morfologia celular, ciclo celular, testes de imunofenotipagem pelo método de citometria de fluxo e analise de imunohistoquimica. As células de Aedes aegypti analisadas pela morfologia celular, apresentaram formato globóide, tamanho pequeno e população heterogênica. A análise das fases do ciclo Sub-G1, G0-G1, S e G2-M após cultura primaria de ovos embrionados atingiram (27,5%; 68%; 30,2% e 1,9%, respectivamente). Após 24 horas atingiram (10%; 92,4%; 6,2% e 0,6%, respectivamente). A análise de imunofenotipagem realizada pelo método de citometria de fluxo demonstrou em ovos embrionados, marcações positivas para pluripotencia, assim como baixa expressão para Oct 3/4, e alta expressão para o (Sox2). As células mesenquimais tiveram alta expressão para os marcadores (Stro-1, Vimentina e Nestin). O marcador de morte celular por apoptose (Caspase3), teve alta expressão nas células cultivadas, enquanto que os marcadores endossomicos específicos para células de insetos (Anti GM130 e Anti RAB-5) também foram altamente expressos. Na cultura celular derivada do tubo digestivo de larvas de Aedes aegypti, as analises dos marcadores para pluripotencia tais como Oct 3/4 não demonstrou expressão, entretanto, o marcador Sox2 foi altamente expresso na cultura. Para as células mesenquimais não houve expressão de nenhum marcador utilizado, ou seja, (Stro-1, Vimentina e Nestin). No entanto para o marcador de morte celular por apoptose (Caspase 3) as células em cultura demonstraram alta expressão, enquanto que para os marcadores endossomicos específicos de insetos os mesmos foram altamente marcados. O teste de imunohistoquímica realizado em ovos embrionados no final do período embrionário demonstrou que as células tinham potencial ploriferativo mediante marcação positiva para PCNA. As células pluripotentes foram pouco expressas pelos marcadores Nanog, Oct 3/4, e muito expressas pelo marcador Sox2. As células de origem mesenquimais foram altamente expressas pelos marcadores SSEA-4, Stro-1, Vimentina e Nestin assim como para os marcadores endossomicos específicos para células de insetos, os quais demonstraram alta expressão nas células de embriões de Aedes. Sendo assim, conclui-se que tanto ovos embrionados quanto larvas de quarto instar de Aedes aegypti possuem células indiferenciadas, com grande potencial para estudos com biologia molecular, visando o controle biológico deste vetor / A major problem of public health in the country is directly linked to dengue, as approximately 550 million people are infected annually, and about 20,000 have died. This disease is caused by the virus of the Flaviviridae family, transmitted by the female to the host during blood feeding. This project aimed to isolate and characterize stem cells from fertilized eggs and larvae gut fourth instar Aedes aegypti, as a source of research in cell biology and structural area of these vectors. Upon cell culture, the cells were isolated and recultured in DMEM-high culture temperature and 28 º C. The following analyzes were performed: cell morphology, cell cycle tests immunophenotyping by flow cytometry and immunohistochemistry analysis. The Aedes aegypti cells analyzed by cell morphology showed globular shape, small size and heterogenic population. The analysis of sub-G1 phase of the cycle, G0, G1, S and G2-M after primary culture reached embryonated eggs (27.5%, 68%, 30.2% and 1.9%, respectively). Achieved after 24 hours (10%, 92.4%, 6.2% and 0.6%, respectively). Immunophenotyping analysis by flow cytometry demonstrated in embryonated eggs, positive for pluripotency markers, as well as low expression of Oct 3/4 and high expression for the (Sox2). The mesenchymal cells had high expression for markers (Stro-1, vimentin and Nestin). The marker of cell death by apoptosis (Caspase3) had high expression in cultured cells, whereas the endosomal markers specific for insect cells (GM130 and Anti-Anti RAB 5) were also highly expressed. In cell culture derived from the gut of larvae of Aedes aegypti, the analysis of pluripotency markers such as Oct for 3/4 showed no expression, however, the marker Sox2 was highly expressed in the culture. For mesenchymal cells no expression of any label used, ie (Stro-1, Nestin and vimentin). However marker for cell death by apoptosis (caspase 3) cells in culture showed high expression, whereas for the specific endosomal markers insects they were highly labeled. The immunohistochemistry test on embryonated eggs at the end of the incubation period the cells have demonstrated potential ploriferativo by positive staining for PCNA. Pluripotent cells were slightly expressed by markers Nanog, Oct 3/4, Sox2, and expressed by the marker. The cells of mesenchymal origin were highly expressed by SSEA-4 markers, Stro-1, Nestin and vimentin as well as the specific endosomal markers for insect cells, which showed high expression in cells of Aedes embryos. Therefore, it is concluded that both embryonated eggs as room instar larvae of Aedes aegypti have undifferentiated cells, with great potential for studies of molecular biology, targeting the biological control of this vector

L'émergence et la réémergence d'arboviroses au niveau mondial sont responsables de pathologies pouvant causer le décès des personnes infectées et elles sont transmises par des moustiques vecteurs. En l'absence de prophylaxies efficaces, les moyens de lutte actuels reposent essentiellement sur l'utilisation d'insecticides, mais ces derniers sont nocifs pour les écosystèmes et des résistances apparaissent chez la plupart des vecteurs. Il devient nécessaire de développer des moyens de lutte alternatifs. La découverte du potentiel antiviral de certaines bactéries symbiotiques des moustiques a ouvert de nouvelles voies pour le développement de la lutte biologique. Mon projet de thèse porte sur l'étude des mécanismes déclenchés dans l'interaction tripartite entre le moustique tigre Aedes albopictus, ses deux souches de Wolbachia, wAlbA et wAlbB, et deux arbovirus (Chikungunya et Dengue) dont il est un vecteur avéré. Originaire d'Asie du Sud Est, il est devenu une préoccupation majeure de santé publique, notamment pour son fort pouvoir invasif, ayant colonisé les quatre autres continents, ainsi que pour son statut de vecteur de nombreux arbovirus et certaines filaires. Les résultats de nos travaux ont montré un potentiel antiviral de la bactérie chez les moustiques infectés par Wolbachia en comparaison des moustiques aposymbiotiques. Les analyses du protéome et du transcriptome ont permis d'identifier certains mécanismes cellulaires et moléculaires du moustique spécifiquement modulés par la présence de Wolbachia ou des arbovirus, mais aussi deux partenaires microbiens simultanément. Ces approches ont permis de mettre en évidence le rôle important du métabolisme dans le maintien de l'intégrité cellulaire et du système immunitaire pour contrôler l'infection virale. En outre, nos résultats révèlent un patron de compétition entre bactérie et arbovirus contribuant à la compréhension du phénomène interférence observé chez les moustiques / The emergence and reemergence of arboviruses in the world are responsible for pathologies that can cause the death of infected and they are transmitted by mosquitoes. In absence of effective prophylaxis, current control methods are essentially based on the use of insecticides, but they are harmful to ecosystems and resistances appear in most vectors. It becomes necessary to develop alternative means of control. Discovery of the antiviral potential of some symbiotic bacteria mosquito has opened new avenues for the development of biological control. My PhD project focuses on the study of mechanisms triggered in the tripartite interaction between the Asian tiger mosquito, Aedes albopictus, two strains of Wolbachia, and wAlbA wAlbB and two Arbovirus (Chikungunya and Dengue) of which he is a proven vector. Native to Southeast Asia, it has become a major public health concern, particularly for its highly invasive, have colonized the four other continents, as well as its status vector many arboviruses and some wire. The results of our work has shown antiviral potential of bacteria in mosquitoes infected with Wolbachia in comparison aposymbiotic mosquitoes. The analyzes of the proteome and transcriptome have identified certain cellular and molecular mechanisms of mosquito specifically modulated by the presence of Wolbachia or arboviruses, but also two microbial partners simultaneously. These approaches have helped to highlight the important role of metabolism in maintaining cell integrity and immune system to control the viral infection. In addition, our results reveal a pattern competition between bacteria and arbovirus contributing to understanding the phenomenon interference observed in mosquitoes

Mosquitos transgênicos incapazes de transmitir malária podem ser um controle alternativo, mas atualmente não estão disponíveis. O estudo da interação mosquitopatógeno é importante para melhorar o desenho de genes. A proteína circumsporozoita (CSP) tem dois domínios conservados que podem estar envolvidos na penetração dos esporozoítos na glândula salivar. Nosso objetivo foi expressar peptídeos contendo essas regiões na hemolinfa do mosquito usando o sistema de expressão transiente vírus Sindbis e a tecnologia de transgênese. Se a CSP está envolvida neste processo, os peptídeos competirão com spz impedindo a penetração. Cinco vírus sindbis e quatro linhagens transgênicas foram construídos e desafiados por P. gallinaceum. Nossos resultados mostram que os peptídeos não impediram a penetração de spz na glândula salivar, principalmente porque os peptídeos recombinantes não foram produzidos ou detectados. Aprimorar o desenho de genes, usando a otimização de códons e outras tecnologias, será essencial para a expressão de proteínas exógenas em mosquitos transgênicos. / Transgenic mosquitoes that impair malaria transmission can be an alternative control but currently an effective line is not available. A better understanding of mosquito interaction with pathogens is very important to improve refractory transgene design. Circumsporozoite protein (CSP) has two conserved domains that could be involved in spz penetration into mosquito salivary glands. Our aim was to express peptides encompassing these conserved regions in the mosquito hemolymph using Sindbis virus transient expression system and transgenesis technology. If CSP is involved in this process these peptides will compete with sporozoites impairing its penetration. Five Sindbis virus and four transgenic lines were constructed and challenged with P. gallinaceum. Our results showed these peptides could not impair sporozoites penetration in salivary glands, mainly because the recombinant proteins could not be produced or detected. Improving transgene design using codon usage and other technologies will be essential for expressing foreign proteins in transgenic mosquitoes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:01:04Z : No. of bitstreams: 1 macoris_mlg_dr_botib.pdf: 513489 bytes, checksum: f313c540626f7d5e047d63094e4c1106 (MD5) / A necessidade de se controlar dengue com uso de inseticidas tem acarretado o desenvolvimento de resistência aos produtos mais utilizados em âmbito mundial. No Brasil, o Ministério da Saúde monitora anualmente o nível de susceptibilidade de populações de Aedes aegypti aos inseticidas. Este estudo objetivou analisar os dados disponíveis para o estado de São Paulo visando avaliar não só o impacto das estratégias de manejo adotadas nos níveis de resistência das populações, mas também o papel de resistência metabólica como um mecanismo da resistência detectada em larvas. Foram analisados os dados do período de 1996 a 2009, relativos à caracterização biológica da resistência de larvas e insetos adultos e os resultados de provas de efetividade em campo. Para avaliação do papel atividade de enzimas metabólicas na resistência observada em larvas, foi feito um experimento em laboratório com medida de atividade enzimática durante o processo de incremento da resistência em população originada do campo. Os dados foram confrontados com os resultados da atividade enzimática das populações de campo. Os dados do Programa de Monitoramento demonstraram ao longo do tempo um aumento do número de populações resistentes ao principal larvicida utilizado (temephos); que a resistência a adulticidas da classe dos piretróides é disseminada em todo o estado desde 2000 e que há comprometimento do controle em campo nas populações resistentes. Enzimas do grupo das esterases foram caracterizadas como envolvidas no mecanismo de resistência a temephos, embora tenham sido caracterizadas alterações em outras classes de enzimas em populações resistentes dificultando a interpretação pontual de atividade enzimática. A caracterização do vínculo genético apontou para um baixo fluxo gênico entre as populações justificando a manutenção da avaliação e manejo... / The need to control dengue transmission with insecticides has led to the development of resistance to the most used products all over the world. In Brazil the Ministry of Health monitors annually the level of susceptibility of Aedes aegypti populations to insecticides. This study aimed to evaluate data from São Paulo State in order to evaluate the impact of management of resistance on resistance levels in vector populations and also evaluate the role of metabolic enzymes on larval resistance to temephos. Data of larval and adults resistance from 1996 to 2009 were analyzed together with field efficacy tests response. In order to evaluate the role of metabolic enzymes on resistance of larvae to temephos, an experiment for increasing resistance and measurement of enzyme activity were compared with enzyme profile from field populations. Results showed, along the period, a decrease in susceptibility to the temephos-based larvicide in all populations; resistance to pyrethroids, observed in adult stage, was disseminated in the state since 2000 and that in resistance impacts on field activities. Enzymes from the esterase class were involved on temephos resistance of larvae, although other classes of enzymes show alterations in resistant populations making it difficult the interpretation of enzyme activity on single population. The characterization of the genetic link pointed to a low gene flow among populations. This justifies the maintenance of the assessment and management of sentinel regardless of their geographical origin. The study concludes that there is a general trend for loosing susceptibility of Aedes aegypti to the most used insecticides. To date management strategies adopted were not enough to avoid this process. There is impact of field control on “resistant” populations showing that management should be trigged on populations with “Decreased Susceptibility” status. Insecticide use self imitating tool which should de preserved

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Fernando Araújo Monteiro / Banca: Jayme Augsto de Souza Neto / Banca: Mara Anice Mured Allum / Banca: Renata Schama / Resumo: Aedes aegypti é considerado o principal vetor de arboviroses que acomentem os seres humanos. Até o momento a única medida disponível para erradicação da dengue, é o controle do vetor, Ae. aegypti. O conhecimento aprofundado sobre a estruturação genética e dinâmica populacional dessa espécie em diferentes ambientes é crucial, uma vez que populações geneticamente diferentes podem apresentar diferenças quanto à capacidade e competência vetorial. O Brasil possui regiões com diferentes características climáticas e geográficas, assim o conhecimento detalhado sobre populações de mosquitos que colonizam diferentes habitats, é pertinente. Este trabalho avaliou a estrutura populacional de mosquitos Ae. aegypti provenientes de cinco cidades do Brasil (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá e Rondonópolis) utilizando marcadores microssatélites. Ainda, empregouse esses marcadores para investigar a dinâmica de oviposição e consequente dispersão de mosquitos Ae. aegypti em Botucatu. Em macro-análises populacionais, utilizando DAPC, observamos agrupamento entre indivíduos de mesma localidade e estruturação populacional para mosquitos de Belo Horizonte. Análises de micro-estruturação populacional identificaram seis sub-populações de mosquitos Ae. aegypti entre as seis sub-regiões de Belo Horizonte, ainda foram sugeridas estruturação populacional intermediária para mosquitos das sub-regiões de Campo Grande e falta de estruturação genética entre mosquitos das subregiões de Botucatu. Com esses resultados acreditamos que estruturação genética ocorra em correlação com o tamanho da cidade - localidades maiores parecem proporcionar estruturação genética para populações de mosquitos Ae. aegypti. Análises de PCA em ovitrampas da cidade de Botucatu apontaram organização populacional de Ae. aegypti em famílias. Análises de Pedigree e coeficiente de inbreeding, indicaram que de 30 mosquitos... / Abstract: Aedes aegypti is considered the main vector of arboviruses affecting humans. Nowadays, the only feasible measure to eradicate the dengue fever depends exclusively of vector control. The deep knowledge about the structure and dynamics of Ae. aegypti population in distinct environments is critical, since genetically different populations may present differences related to vector competence and capacity. Brazil has regions with different climatic and geographic characteristics, therefore, detailed knowledge about mosquito population that colonizes different habitats is extremely important. The present study evaluated the population structure of Ae. aegypti mosquitoes in five different Brazilian cities (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá and Rondonópolis) using a microsatellite markers. Those markers were also used to evaluate the oviposition dynamic and the consequences of Ae. aegypti mosquitoes dispersion, of the city of Botucatu. Population macro-analysis, using DAPC evidenced, genetic clusters among individuals of the same locality, and population structure in mosquitoes of Belo Horizonte. Population microstructure analysis identified six sub-populations of Ae. aegypti mosquitoes among six sub-regions of Belo Horizonte. In addition, the microstructure analysis suggested intermediate population structure in the sub-regions of Campo Grande, and lack of genetic structure among mosquitoes from the sub-regions of Botucatu. Therefore, these results indicate that genetic organization occurs in correlation with city size - where large towns seem to provide genetic structure to the populations of Ae. aegypti. PCA analysis of ovitraps obtained in Botucatu indicated population organization of Ae. aegypti mosquitoes in families. Pedigree analysis and inbreeding coefficient indicated that only for out of 30 mosquitoes analyzed in the same ovitrap, keep restricted familial relationships. These results suggest that Ae. aegypti... / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The present work describes the chemical study of leaves, stems and roots of the Tephrosia egregia Sandwith (Fabaceae) species, through the analysis of the volatile and nonvolatile constituent of the specie. The determination of the volatile chemical composition of leaves and stems of T. egregia showed the predominance of sesquiterpenes, with some monoterpenes and trisnor-sesquiterpenes. The comparison between identified constituents in the leaves (16; 88.75%) and stems (13; 85.22%) showed a similarity between the samples, although the trisnor-sesquiterpenes geijeren and pregeijeren were the major constituents in both the essential oils. From the chromatographic investigation of the essential oil of leaves, the trisnor-sesquiterpene dictamnol was isolated for the first time in the Tephrosia genus. The chromatographic investigation of the roots of T. egregia yields pongachalcone and praecansone B, of pongaflavone, of 6a,12a-dehydrorotenone and 12a-hydroxyrotenone, the mixture of sitosterol and stigmasterol, and their glucosylated forms, and the maackiain. From its leaves were isolated p-coumaric acid and ferulic acid. This two compounds had been isolated for the first time in the genus. The assays with extracts and isolated substances of T. egregia showed that the studied specie has very important larvicidal activity against Aedes aegypti and allelopathic activity, with best result for the ethanolic extract of the roots. In other hand, the bioassays of antimicrobial activity against of S. aureaus, E. coli, P. aeruginosa, S. choleraesuis and C. albicans, and the nematicidal activity on Meloidogyne incognta not shown significant results. / O presente trabalho descreve o estudo quÃmico das folhas, talos e raÃzes de Tephrosia egregia Sandwith (Fabaceae), atravÃs da anÃlise dos constituintes volÃteis e nÃo volÃteis da espÃcie. A determinaÃÃo da composiÃÃo quÃmica volÃtil das folhas e talos de T. egregia mostrou a predominÃncia de sesquiterpenos, com relatos de monoterpenos e trisnorsesquiterpenos. A comparaÃÃo entre os constituintes identificados nas folhas (16; 88,75%) e talos (13; 85,22%) revelou semelhanÃa entre os mesmos, onde os trisnor-sesquiterpenos geijereno e o pregeijereno foram os constituintes majoritÃrios em ambos os Ãleos essenciais. A partir do fracionamento cromatogrÃfico do Ãleo essencial das folhas foi isolado o trisnorsesquiterpeno dictamnol, relatado pela primeira vez no gÃnero Tephrosia. O estudo dos constituintes nÃo volÃteis foi iniciado a partir da obtenÃÃo dos extratos etanÃlicos das folhas, talos e raÃzes da espÃcie estudada. O fracionamento cromatogrÃfico das raÃzes levou ao isolamento das chalconas pongachalcona e praecansona B, da flavona pongaflavona, dos rotenoides 6a,12a-desidrorotenona e 12a-hidroxirotenona, da mistura dos esterÃides sitosterol e estigmasterol e de suas misturas nas formas glicosiladas e do pterocarpano maackiaina. A partir do extrato acetato de etila do decocto das folhas de T. egregia foram isolados os fenilpropanÃides Ãcido p-cumÃrico e Ãcido ferÃlico, descritos pela primeira vez no gÃnero estudado. Os ensaios de atividades biolÃgicas realizados para os extratos e substÃncias isoladas de T. egregia mostraram que a espÃcie estudada apresenta atividades larvicida sobre Aedes aegypti e alelopÃtica significativas, com destaque para o extrato etanolico das raÃzes (TERES). NÃo foram encontrados resultados significativos para os bioensaios de atividade antimicrobiana sobre cepas de S. aureaus, E. coli, P. aeruginosa, S. choleraesuis e C. albicans, assim como para atividade nematicida sobre Meloidogyne incognita.