Orientador: Angela Maria Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T02:57:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_CarlaAndreiaMirandada_M.pdf: 3794622 bytes, checksum: 8d6dcff32793d56790b11dbb1a4f2cab (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A pesquisa envolvendo o uso de veículos para a liberação controlada de agentes anti-câncer no interior de tumores tem-se intensificado nos últimos anos. Dentre os veículos testados destacam-se os lipossomas, ou vesículas lipídicas. Este trabalho teve por objetivo a preparação e caracterização de lipossomas encapsulando compostos de interesse na terapia de melanomas, em formulações potencialmente adequadas para administração por via dermatológica. Os encapsulamento em lipossomas de 5-fluorouracil e bleomicina, em caráter detalhado, e de ácido azelaico, em caráter preliminar, foram avaliados empregando-se diferentes métodos de incorporação. As formulações preparadas foram caracterizadas quanto às concentrações finais de lipídios e de drogas e quanto aos diâmetros médios das vesículas. Os lipossomas encapsulando 5-fluorouracil, por terem apresentado melhor eficiência de encapsulamento, tiveram sua estabilidade de estocagem e na presença do tenso ativo C12Es avaliadas, para a verificação da integridade da bicamada lipídica.A bleomicina foi incorporada aos lipossomas através de encapsulamento ativo por gradiente de pH e de injeção de etanol. Ambas as técnicas resultaram em reduzida eficiência de encapsulamento. O encapsulamento do 5-fluorouracil pelos métodos de hidratação do filme lipídico, incorporação ativa empregando gradiente de pH, injeção de etanol e evaporação em fase reversa indicaram que a última técnica foi a mais adequada do ponto de vista da eficiência de encapsulamento, porém este processo ainda pode ser otimizado. Na presença do tensoativo, verificou-se que a droga promove estabilização das vesículas. Quando estocados a 4°C, estes lipossomas não sofreram agregação ou fusão no período de um mês, tendo, entretanto, liberado praticamente toda a droga encapsulada neste período.O encapsulamento de ácido azelaico mostrou-se promissor, entretanto a quantificação da droga encapsulada não pôde ser efetuada / Abstract: The investigation with vehicles for controlled release of anticancer agents into tumors has been intensified in the last years. Among the vehicles tested, outstand liposomes or lipid vesicles, for drug delivery. The aim of this work was the preparation and characterization of liposomes entrapping compounds of interest in melanoma therapy with potential to be topically administered.The entrapment of 5-fluorouracil and bleomycin in liposomes, in a detailed forro, and of azelaic acid, in a preliminary forro, were analyzed using different incorporation methods. The formulations werw evaluated for stability both concerning to storage and in the presence ofthe surfactant C12Es, to verify the lipid bilayer integrity. Bleomycin was incorporated in liposomes by active loading with pH gradients and by ethanol injection. Both methods have resulted in low encapsulation efficiency.The entrapment of 5-tluorouracil was tested by the hydration of a dríed lipid film, active loading with pH gradients, ethanol injection and reverse-phase evaporation demonstrating that the last method was the most efficient in terms of encapsulation capacity, however this process should be optimized. In the presence ofthe surfactant, it was observed that the drug promotes the stabilization of these vesicles. When stored at 4°E, these lipo_ showed no fusion or aggregation during a month, however the drug was completely released ITom the vesicles in this period. The loading of azelaic acid seemed to be feasible, however the quantification of the encapsulated¿ drug could not be performed. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Douglas Soares Galvão / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-08-01T15:12:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EspiritoSanto_LarissaLimado_D.pdf: 1007225 bytes, checksum: 21fa1fa977bf1b1d148fcf9547492830 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Na primeira parte desse trabalho apresentamos estudos de estrutura-atividade realizados em uma série de compostos com atividade biológica anticancerígena (derivados do lapachol, da talidomida e das mitomicinas). As caracterizações geométrica e eletrônica desses compostos foram obtidas através de métodos de mecânica molecular e de métodos semiempíricos. Foi possível correlacionar a resposta biológica dos compostos analisados com alguns índices eletrônicos. Em particular, empregamos com êxito uma nova metodologia desenvolvida para tratar o problema da correlação estrutura geométrica com atividade biológica, denominada Metodologia de Índices Eletrônicos. Em uma segunda parte desse trabalho avaliamos a estabilidade genética de seqüências de repetições de nucleotídeos presentes em regiões do DNA, através do método de mecânica molecular AMBER. Concluímos que seqüências formadas por bases ordenadas (microssatélites) possuíam uma estabilidade energética menor do que seqüências formadas por bases distribuídas aleatoriamente sobre a cadeia de DNA / Abstract: In a first part of this work we present structure-activity studies in a compound series with anti-cancer biological activity (derived from lapachol, thalidomide and mitomycins). The geometric and electronic characterizations of these compounds had been gotten through semiempirical and molecular mechanics methods. We could relate the biological response for analyzed compounds with some electronic index. In particular we successfully used a recently developed methodology to study the correlation between geometric structure and biological activity, called Electronic Index Methodology. In a second part of this work we evaluated the genetic stability of replicated sequences of nucleotides found in DNA regions through the method of molecular mechanics AMBER. We found that sequences formed by repeated base pairs have worse genetic stability when compared against random sequences of DNA / Doutorado / Física / Doutora em Ciências

Orientador: Ricardo Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T15:16:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_LudmilaSiqueiraMedinada_D.pdf: 2573991 bytes, checksum: bbc4fec53735053895cf6758ff5de1dc (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: A primeira parte do estudo restringiu-se ao estabelecimento do modelo BRO "in vivo". Para isto, empregamos a linhagem de células BRO e sua sublinhagem transfectada BRO mdr1.1, utilizando a técnica de xeno-enxertos em camundongos atímicos. Estes animais foram observados por sucessivas passagens e avaliados quanto à resposta apresentada aos agentes citotóxicos vincristina e doxorubicina, sempre comparados com testes "in vitro" das mesmas células. Estas linhagens celulares também foram avaliadas "in vitro" e "ex-vivo" quanto à expressão da 170-Pgp e aos fatores de resistência empregando-se as técnicas de imunoperoxidase e citotoxicidade com MTT. A análise final destas informações permite afirmar que o modelo BRO pode ser utilizado no estudo da resistência a múltiplas drogas até a segunda passagem, o que corresponde ao período de tempo de 6 semanas como xeno-enxertos. A droga vincristina foi escolhida para os estudos "in vivo" devido ao elevado nível de resistência apresentado pelas células BRO mdr 1.1. A segunda parte do trabalho concentrou-se na avaliação do modelo no estudo de novos agentes reversores, bepridil e cremofor. Numa primeira fase verificou-se a efetividade da reversão destes agentes e sua citotoxicidade "in vitro". Foi possível estabelecer as doses ideais para a obtenção do efeito de reversão da MDR. As concentrações não citotóxicas de cremofor mostraram uma reversão da resistência marcadamente menor que as obtida com bepridil. Estes dados indicaram a realização de testes de reversão "in vivo" apenas com bepridil. A farmacocinética desta droga para camundongos foi estabelecida através de HPLC e cintilação líquida. Um esquema combinando vincristina e bepridil, utilizados na MTD, foi estabelecido e testado em camundongos atímicos portando tumores BRO mdr 1.1 sem um resultado efetivo de regressão tumoral, provavelmente devido aos baixos níveis plasmáticos do reversor alcançados, somados aos altos fatores de resistência presentes na segunda passagem. A terceira parte do estudo consistiu na avaliação da radioimunoterapia como outra metodologia para se atingir as células portadoras do fenótipo MDR neste modelo. Para tanto, as linhagens celulares foram testadas quanto à sua radiosensibilidade em ensaio clonogênico e em teste de citotoxicidade com SRB. Os resultados foram similares, não se detectando diferenças significativas entre as radiosensibilidades de linhagens resistentes e sensíveis. A partir destes dados realizou-se a biodistribuição do anticorpo monoclonal MRK16 após a marcação deste com o radioisótopo 131I, não havendo captação preferencial do monoclonal pelos tumores resistentes, como também não detectamos resposta tumoral a radioimunoterapia. O baixo número de epitopos de 170-Pgp encontrados na superfície das células BRO mdr1.1 pelas técnicas de citometria de fluxo e imunocompetição de Scatchard justifica a falha desta abordagem terapêutica. O modelo "in vivo" focalizado nesta pesquisa não poderá ser empregado na avaliação das modalidades terapêuticas que utilizem anticorpos monoclonais (isolados ou como imunoconjugados) de ultrapassar o fenômeno da resistência a múltiplas drogas, mas permanece útil na determinação do potencial de reversão e no estudo da toxicidade das drogas selecionadas pelos modelos "in vitro" como agentes reversores da MDR, criando condições mais seguras para o emprego clínico. O modelo desenvolvido abre, também, uma nova opção no estudo comparativo entre tumores intrinsecamente resistentes e os que apresentam resistência a múltiplas drogas adquiridas, por se tratar de um tumor desenvolvido a partir de células transfectadas com o gene MDR1. Numa perspectiva otimista destes estudos antevemos uma solução definitiva para estes tumores até hoje sem possibilidade de tratamento eficaz com quimioterapia / Abstract: Multidrug resistance has been one of the most active research areas during last decade because its growing clinical importance. Expression of the MDR1 (170-Pglycoprotein) gene is an active effux pump that decreases the intracellular accumulation of some of the major anticancer drugs such as anthracyclines, vinca alkaloids, and epipodophyllotoxins. Our study stablished an "in vivo" model using BRO cell line and its transfected subline BROmdr1.1. The MDR phenotype was detected until the second passage as xenografts or 6 weeks in cell culture by citotoxity MTT test with vincristine and doxorubicin but also by imunostainning using 3 monoclonal antibodies (C219, JSBI and MRK16). We have studied antitumor activity of vincristine and doxorubicin in nude mice bearing the second passage of BRO and BROmdr1.1. It was possible to define resistant factors for each drug. New reversal agents, cremophor and bepridil, were tested "in vitro". Bepridil presented higher reversal effect and was select to "in vivo" studies, but the doses nedded to achieved complete reversal "in vitro" could not be reached "in vivo". BROmdr1.1 xenografts were treated with monoclonal antibodies labelled with isotopes. The absence of response probably was because it was not possible to concentrate de isotope in the resistant tumors due the small number of epitopes that this cell line presented at Scatchard test. This model can be used to study new reversal agents for MDR phenotype "in vivo", Its toxicity, pharmacokinetics and reversal activity, before going further on human trials / Doutorado / Doutor em Medicina Interna

Orientador: Edésio Luiz Simionatto. / Dissertação (Mestrado em Química) - Programa de Pós-Graduação em Química, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

Orientador: Douglas Soares Galvão / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-09-11T20:51:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barone_PauloMonteiroVieiraBraga_D.pdf: 1587481 bytes, checksum: cafea1db3503e2f14be02c7d3b302052 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O termo câncer é aplicado a um grupo de doenças de organismos multicelulares, caracterizadas pela multiplicação das células de forma aparentemente descontrolada, que pode levar à formação e ao crescimento de tumores. A principal causa do câncer é a exposição a agentes químicos, chamados carcinogênicos. 0s primeiros com postos carcinogênicos identificados foram os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos, que estão entre os mais potentes carcinogênicos conhecidos. Neste trabalho, estudamos a relação entre topologia molecular/estrutura eletrônica e atividade carcinogênica de uma família de Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos, por meio do método de Huckel simplificado e dos métodos semi-empíricos PM3 e ZINDO/CI. Desenvolvemos critérios, baseados em indicadores eletrônicos das moléculas, capazes de identificar entre os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos quais têm atividade carcinogênica. Mostramos, comparando diferentes métodos, que esses critérios são essencialmente determinados pela topologia das moléculas, e que a atividade carcinogênica está relacionada com a diferença em energia entre o orbital ocupado de mais alta energia e os demais orbitais ocupados. Abordamos também o problema correlato da obtenção de relações estrutura-atividade para uma família de drogas antitumorais, a elipticina e seus derivados. Utilizando os métodos semi-empíricos PM3 e ZINDO/CI, confirmamos a correlação entre o momento de dipolo dessas moléculas e sua atividade antitumoral, já obtida anteriormente por meio de outros métodos semi-empíricos / Abstract: The term cancer is applied to a group of diseases of multicellular organisms characterized by the abnormal cell pro1iferation in an uncontrolled way. The main cause of cancer is the exposition to chemical compounds, called carcinogens. The Polycyclic Aromatic Hydrocarbons were the first compounds to be recognized as chemical carcinogens, and are among the most active known carcinogens. In this work we study the relationship between the carcinogenic activity and the molecular topology and electronic structure of a family of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons by means of the simple Huckel method and the semiempirical methods PM3 e ZINDO/CI. We develop simple rules, based on electronic indices of the molecules, in order to identify carcinogenic activity in Polycyclic Aromatic Hydrocarbons. We show through the comparison between different methods that these rules are essentially determined by the molecular topology , and that the carcinogenic activity is related to the energy difference between the highest occupied molecular orbital and the other occupied orbitals. We also study the similar problem of structure-activity relationship for a family of antitumor drugs, the ellipticine and their derivatives. We confirm, using the semiempirical methods PM3 and ZINDO/CI, the correlation between the dipole moment and the activity of theses molecules which was obtained before by means of other semiempirical methods / Doutorado / Física / Doutor em Ciências

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-23T10:37:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2300731 bytes, checksum: d8cd620baef33c7e3c5968d3accaefda (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T10:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2300731 bytes, checksum: d8cd620baef33c7e3c5968d3accaefda (MD5) Previous issue date: 2017-08-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O melanoma cutâneo é um problema de saúde pública mundial, por ser um tumor sólido altamente metastático. Compostos sintéticos têm sido desenvolvidos no intuito de combater atividades das células tumorais, como migração, invasão, adesão e proliferação. Dentre eles, compostos derivados do ácido cinâmico e isobenzofuranonas têm apresentado importante atividade antimetastática. Por isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimetastática in vitro de dois grupos de compostos, 26 compostos derivados do ácido cinâmico e 25 isobenzofuranonas, frente ao comportamento metastático de células de melanoma cutâneo murino B16-F10. Inicialmente, determinou-se a concentração não citotóxica de derivados destes dois grupos químicos frente à linhagem B16-F10. Como a concentração de 100 μmol L −1 foi aquela considerada não citotóxica, todos os ensaios subsequentes foram realizados utilizando concentrações inferiores ou iguais a esta. Posteriormente, os compostos derivados do ácido cinâmico e as isobenzofuranonas foram avaliados quanto ao efeito antimigratório sobre células B16-F10. Os compostos 9a e 1f foram mais efetivos nas concentrações de 100 μmol L −1 e 50 μmol L −1 . Tanto o composto 9a, um derivado do ácido cinâmico com porção 1,2,3-triazólica contendo um grupo fenilo, quanto o composto 1f, uma isobenzofuranona funcionalizada na posição C3 contendo hidroxilas nas posições C-2' e C-6' do anel aromático, apresentaram atividade antimetastática e antiproliferativa significativa contra células B16-F10. No caso do composto 9a, seu efeito biológico foi atribuído à sua interação com o sítio ativo das metaloproteinases -9 e -2 pelo estudo de docking molecular. Já para o composto 1f, sugerimos que seu efeito inibidor é devido à sua interação com proteínas PKC. Os dois compostos derivados apresentam uma característica em comum, que é a presença de estruturas químicas heterocíclicas na sua composição. Em conclusão, nossos resultados mostraram que derivados do ácido cinâmico podem inibir o comportamento metastático de células B16-F10 in vitro, possivelmente por interferir na atividade de metaloproteinases de matriz. Adicionalmente, nossos resultados mostraram pela primeira vez que isobenzofuranonas sintéticas podem inibir a invasividade de células B16-F10 in vitro. Portanto, os compostos 9a e 1f apresentam potencial para o uso no desenvolvimento de novos candidatos para o tratamento do melanoma cutâneo. / Cutaneous melanoma is a worldwide public health problem because it is a highly metastatic solid tumor. Synthetic compounds have been developed in order to inhibit activities of tumor cells, such as migration, invasion, adhesion and proliferation. Among them, compounds derived from cinnamic acid and isobenzofuranones have shown important antimetastatic activity. Therefore, the objective of this study was to evaluate the in vitro antimetastatic activity of two groups of compounds, 26 compounds derived from the cinnamic acid and 25 isobenzofuranones, against the metastatic behavior of murine cutaneous melanoma cells B16- F10. Initially, the non-cytotoxic concentration of the derivatives was determined against the B16-F10 cells. As the concentration of 100 μmol L −1 was non-cytotoxic, all subsequent assays were performed using concentrations below or equal to this. Subsequently, the compounds derived from cinnamic acid and isobenzofuranone were evaluated for the anti-migratory activity on B16-F10 cells. Compounds 9a and 1f were more effective at 100 μmol L −1 and 50 μmol L −1 concentrations. Both compound 9a, a 1,2,3-triazolic-cinnamic acid derivative containing a phenyl group, and compound 1f, a isobenzofuran derivative functionalized at C-3 position, showed significant antimetastatic and antiproliferative activities against B16-F10 cells. In the case of compound 9a, its biological effect was attributed to its interaction with the active site of metalloproteinases -9 and -2 by the molecular docking study. For compound 1f, we suggest that its inhibitory effect is due to its interaction with PKC proteins. Both derivatives have one feature in common, which is the presence of heterocyclic chemical structures in their composition. In conclusion, our results showed that cinnamic acid derivatives can inhibit the metastatic behavior of B16-F10 cells in vitro, possibly by interfering with the activity of matrix metalloproteinases. In addition, our results showed for the first time that synthetic isobenzofuranone derivatives can inhibit the invasiveness of B16- F10 cells in vitro. Therefore, compounds 9a and 1f have potential structures for the development of novel candidates for the treatment of cutaneous melanoma. / O autor não colocou seu nome completo na ficha catalográfica. Faltou "de Almeida".

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / El presente trabajo propone el diseño de un Programa de Orientación para el personal Técnico Paramédico del Instituto Nacional del Cáncer (INC), el cual se realizó a través del análisis de los medicamentos que componen el Arsenal Farmacológico de la Institución. La redacción del programa se realizó por medio del diagnóstico de un programa piloto ya existente, que además fue complementado a partir de la observación participante y búsqueda bibliográfica de los medicamentos en cuestión. Para la evaluación del conocimiento previo del personal Técnico Paramédico, se creó un material de apoyo y pautas de evaluación en donde se seleccionaron 15 medicamentos por criterio de bajo consumo y por observación de problemática en el ejercicio de la dispensación. Se observó que los funcionarios de la Subunidad de Farmacia Ambulatoria, que además era el grupo de funcionarios que más años de trabajo en la institución llevaban, son los que mayor conocimiento base poseían. Luego del material de apoyo, se incrementó el conocimiento por parte de todos los funcionarios de la Unidad de Farmacia, lo que lleva a pensar que una vez realizado el Programa de Orientación al personal podrán adquirir conocimiento con respecto a la utilización de los medicamentos. Con todos los antecedentes recopilados, se diseñó el nuevo Programa de Orientación, que constaba de 12 módulos distintos donde se incluyó un alto porcentaje de los medicamentos que componen el Arsenal Farmacológico (312 medicamentos), indicando dosis utilizada en hospital, vía de administración, efectos adversos, uso intrahospitalario, contraindicaciones e indicando la Subunidad de dispensación. El Programa de Orientación aquí planteado, será un aporte, ya que permitirá cumplir con el ámbito R.H.2.2, logrando así obtener un 75% en su umbral de cumplimiento, valor mínimo necesario para calificar

GONDIM, A. C. S. Atividade antitumoral e antiviral de lectinas de leguminosas (tribo Phaseoleae, subtribo Diocleineae): ConBr, ConM, DLasiL e DSclerL. 2014. 135 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-12-03T10:56:53Z No. of bitstreams: 1 2014_tes_acsgondim.pdf: 4061405 bytes, checksum: 9553740277f9cb8e23f6fc7c6697bd11 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-20T17:06:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tes_acsgondim.pdf: 4061405 bytes, checksum: 9553740277f9cb8e23f6fc7c6697bd11 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-20T17:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tes_acsgondim.pdf: 4061405 bytes, checksum: 9553740277f9cb8e23f6fc7c6697bd11 (MD5) Previous issue date: 2014 / Several compounds isolated from plants, including proteins called lectins, have exhibited many types of biological activities. These proteins are specific recognizing and binding to carbohydrates found onto the cell surface. During the last decades, lectins have become promising sources for antitumor and antiviral studies. This study aimed to investigate legumineous lectins, ConBr (Canavalia brasiliensis), ConM (Canavalia maritima), DLasiL (Dioclea lasiocarpa) and DSclerL (Dioclea sclerocarpa) as potential anti-cancer and anti-viral agents, as well as studying structurally DLasiL using fluorescence, circular dichroism and its initial mechanism of anticancer activity. DLasiL lectin was characterized showing 237 amino acid residues with high similarity to lectin from the Diocleinae subtribe. Electron paramagnetic resonance of DLasiL showed a typical signal for manganese (Mn+2), while ICP-MS provided its actual amount along with calcium (Ca2+), whose values were below those found for the other lectins. Intrinsic fluorescence studies using three quenchers showed a better accessibility of neutral species to tryptophans of DLasiL, while extrinsic fluorescence using bis-ANS exhibited a dose-dependent conformational changes promoted by sugars. Circular dichroism showed very expressive thermal stability of DLasiL with mid-point for thermal denaturation at 72 °C. These lectins were used to treat human ovarian carcinoma (A2780), Human Lung Carcinoma (A549), Human Breast Carcinoma (MCF7), Human Prostate Carcinoma (PC3) and cell viability was determined. These proteins showed potent activity on inhibiting cell growth at nanomolar concentrations. Among these lectins, DLasiL was the most effective showing potent cytotoxicity against A2780 cell line with IC50 of 52 nM. The mechanism of cytotoxicity action of DLasiL was investigated by specific apoptosis assay. Cell cycle studies showed DLasiL causes significant changes in the levels of S and G2/M. A virus screening investigation was carried out showing promissing antiviral activity. / Muitos compostos isolados de plantas apresentam diversos tipos de atividades biológicas, como tem sido o caso de proteínas conhecidas como lectinas. Essas proteínas fazem parte de um grupo de moléculas que reconhecem e se ligam a carboidratos contidos na superfície das células de forma específica e reversível. Nas últimas décadas as lectinas vêm se tornando ferramentas promissoras com ação antitumoral e antiviral. Esse trabalho objetivou investigar a possível ação anticancerígena e antiviral das lectinas isoladas das sementes de Canavalia brasiliensis (ConBr), Canavalia marítima (ConM), Dioclea lasiocarpa (DLasiL) e Dioclea sclerocarpa (DSclerL), o possível mecanismo inicial de ação anticancerígena da lectina DLasiL, além de estudar a estrutura da DLasiL através das técnicas de fluorescência e dicroísmo circular e seu mecanismo para atividade anticâncer. A lectina DLasiL foi particularmente caracterizada, apresentando 237 resíduos de aminoácidos com alta similaridade com as lectinas da subtribo Diocleinae. Ressonância paramagnética de elétrons mostrou sinal característico da presença do íon manganês (Mn2+), enquanto medidas de ICP-MS confirmaram a quantidade deste íon, além de cálcio (Ca2+), cuja quantidade foi inferior ao medido nas outras lectinas. Estudos de fluorescência intrínseca indicaram melhor acessibilidade aos triptofanos por moléculas neutras, provando que a vizinhança possuui caráter não carregado, enquanto que fluorescência extrínseca usando Bis-ANS ilustrou a alteração conformacional provocada pela interação a açúcares, concluindo que é possível utilizar esse tipo de medida para a constatação desse fenômeno. Medidas de Dicroísmo Circular confirmam a significativa estabilidade térmica da DLasiL no qual perdeu 50% de sua atividade a 72 oC. Para investigar a ação antitumoral das lectinas em estudo, células de carcinoma de ovário humano (A2780), carcinoma caucasiano de pulmão humano (A549), carcinoma de mama humano (MCF7), carcinoma de próstata humano (PC3) foram cultivadas com DLasiL. Além disso, foi determinada a viabilidade celular. Os resultados mostraram que as lectinas foram efetivas em inibir o crescimento celular das linhangens testadas utilizando concentração nanomolar. Dentre as lectinas testadas, a mais efetiva em inibir o crescimento celular foi a DLasiL, demonstrando um maior índice de citotoxicidade contra células da linhagem A2780 com IC50 de 52 nM. O mecanismo de ação da DLasiL foi investigado através de ensaios específicos de apoptose. Dados de ciclo celular mostraram que a DLasiL apresenta mudanças significativas nos níveis S e G2/M. Adicionalmente, ensaios com uma série de conjuntos de vírus apresentaram resultados bastante promissores.

Tesis presentada para optar al grado de Magíster en Química, área de especialización Tópicos de Química Medicinal y Memoria para optar al Título de Químico Farmacéutico / La mitocondria ha emergido como un promisorio blanco para eliminar selectivamente células tumorales en función de sus alteraciones bioquímicas y funcionales respecto a sus contrapartes no-tumorales, abriendo la posibilidad de obtener nuevas moléculas que desestabilicen la mitocondria tumoral para producir muerte celular selectiva en dichas células. En esta tesis, se sintetizaron 6 sales de fosfónio derivadas de la 5,8-dihidroxi-4,4-dimetilnaftalen-1(4H)-ona unidos al catión lipofílico trifenilfosfonio con diversos largos de cadena alquílica separando ambos grupos. Uno de ellos, el compuesto D4, exhibió un efecto anti-tumoral selectivo, produciendo detención de la progresión del ciclo celular en la fase G1, e induciendo muerte celular en células de cáncer de mama humano. Es reconocido que la unión de un catión trifenilfosfonio a compuestos puede otorgar una acumulación orgánulo-especifica en la mitocondria dependiendo del potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm), produciendo una alteración selectiva de parámetros funcionales mitocondriales. Consistente con esto, el compuesto D4 produjo un aumento de la respiración en presencia de oligomicina, disminución de la respiración asociada a la síntesis de ATP, caída el ΔΨm y una disminución de los niveles intracelulares de ATP en células tumorales MDA-MB-231 y MDA-MB-468. Estos resultados sugieren que una crisis bioenergética podría ser la causante del efecto antiproliferativo producido por D4. En conjunto nuestros resultados sugieren que el compuesto D4, es un promisorio compuesto líder con acción mitocondrial que puede ser utilizado para el diseño de nuevos derivados con un mejorado perfil de selectividad hacia células malignas / Mitochondria has emerged as a promising target to selectively kill cancer cells base on the many existing biochemical differences between cancer and normal cell mitochondria. The possibility of developing new molecules that could selectively produce mitochondrial destabilization in cancer cells has become very attractive. Here, we chemically synthetized a series of six phosphonium salts derivates of the 5,8-dihydroxy-4,4-dimethylnaphthalen-1(4H)-one using short and long alkyl chains to link the hydroquinone moiety with the lipophilic cation. From the synthetized compounds only compound D4 showed selective antitumor activity against triple negative breast cancer cells, by producing cell cycle arrest in G1 phase and by causing apoptotic cell death, without significant effects on normal MCF10A cells. It’s well documented that triphenylphosphonium salts could be used as an organelle specific directing groups, because this kind of molecules selectively accumulate within mitochondria driven by the mitochondrial membrane potential. Thus, accumulation of this molecules could selectively affect mitochondrial functional parameters. As predicted, compound D4 consistently produces an increase on the “proton leak driven respiration”, and a strong decrease in the “ATP-linked respiration”. This phenomenon was associated with a drop in the mitochondrial membrane potential (ΔΨm) and a decrease in the intracellular ATP levels in two triple negative breast cancer cell lines (MDA-MB-231 and MDA-MB-468) without affecting MCF10A normal cells at the studied concentrations. Taken together our results suggest that compound D4 is a promising lead compound with mitochondrial action that could be used for the design of new derivates with the aim of improving the selectivity against cancer cells / Fondecyt; Fondap / 31/12/2019

A própolis vermelha brasileira tem atraído interesses científicos e econômicos devido às suas variadas atividades biológicas. Este produto natural possui composição química diferente de acordo com a região na qual é encontrado, sendo necessária uma completa caracterização química para cada tipo de própolis, a fim de se elucidar os compostos presentes e possivelmente responsáveis por estas atividades. Dentre as atividades biológicas mais investigadas, destacam-se as atividades antioxidante e antitumoral. Neste trabalho, buscou-se caracterizar quimicamente o extrato hidroalcoólico da própolis vermelha brasileira, avaliar as atividades antioxidantes e antitumorais, além de investigar o padrão proteico de células tumorais de laringe tratadas e não tratadas com extratos da própolis vermelha através da análise proteômica comparativa. A caracterização química realizada através de espectrometria de massas com ionização por electrospray mostrou que a própolis apresenta moléculas complexas, principalmente isoflavonoides, compostos com importantes atividades biológicas. Os extratos hidroalcoólicos obtidos a partir da própolis vermelha revelaram um significante conteúdo de polifenóis associados a uma habilidade de sequestrar radicais livres DPPH·. Os extratos também apresentaram atividades superóxido-dismutase-/ike e catalase-/ike, indicando que podem exercer um papel fundamental na manutenção fisiológica do equilíbrio redox quando em um organismo. A atividade citotóxica dos extratos da própolis foi avaliada nas linhagens tumorais Hep-2, HeLa e não tumoral Hek-293, sendo que os valores de IC50 foram menores para a linhagens tumorais em relação a não tumoral. Desta forma, sugere-se uma seletividade da própolis vermelha quanto às linhagens tumorais. A análise proteômica, usando eletroforese bidimensional associada à cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massa, permitiu a comparação dos mapas proteicos da linhagem Hep-2, na ausência ou presença de extratos da própolis vermelha, nas concentrações 6 f.1g/mL (não citotóxica) e 120 f.lg/mL (IC50). A excisão manual de 325 spots foi efetuada nos géis 2D- SDS-PAGE, em que 177 proteínas foram identificadas. Estas proteínas foram relacionadas com diversos processos metabólicos e estruturais como produção e conversão de energia, transporte e metabolismo de carboidratos, modificação pós-traducional, reciclagem de proteínas e chaperonas, proteínas do citoesqueleto, proteínas de reparo, entre outros. Das proteínas identificadas com expressão diferencial, cinco apresentaram expressão reduzida na presença do extrato da própolis, este em sua maior concentração (120 f.lg/mL). Apenas duas proteínas identificadas neste estudo mostraram expressão aumentada na concentração não citotóxica (6 f.lg/mL) do extrato da própolis vermelha. Os resultados da proteômica comparativa mostram que a própolis interfere em um conjunto de eventos intracelulares e, assim, passa a ser uma candidata promissora para inibir o crescimento celular e contribuir para os diferentes passos relacionados com o processo de carcinogênese. Embora os mecanismos moleculares pelos quais a própolis vermelha interaja com o metabolismo das células permaneçam ainda desconhecidos, estudos adicionais servirão para melhor elucidar as atividades antioxidantes e antitumorais aqui observadas. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-11T12:18:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Caroline Olivieri da Silva Frozza.pdf: 43747 bytes, checksum: ca596fd367a149df47e208c279da85cb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-11T12:18:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Caroline Olivieri da Silva Frozza.pdf: 43747 bytes, checksum: ca596fd367a149df47e208c279da85cb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brazilian red propolis has attracted scientific and economic interests because of its varied biological activities. This natural product has different chemical compositions according to the region in which it is found, requiring a robust chemical characterization to elucidate the compounds responsible for the activities in each type of propolis investigated. So far antioxidant and antitumor properties are amongst the most studied biological activities. This study aimed to characterize chemically the hydroalcoholic extract of Brazilian propolis from the state of Sergipe, evaluate the antitumor and antioxidant activities, and to investigate the pattern o f proteins in tumor cells o f the larynx treated o r not with extracts of propolis through comparative proteomic analysis. The chemical characterization by mass spectrometry with electrospray ionization showed that propolis presents complex molecules, especially isoflavones, which has important biological and antioxidant capacity. The hydroalcoholic extracts obtained from propolis revealed a significant content of polyphenols associated with the ability to scavenge DPPH. radicais. The extracts also showed significant activities for superoxide dismutase-like and catalase-like, indicating an important role in maintaining physiological redox equilibrium, decreasing oxidative stress. Cytotoxic activity was assessed for tumor cell !ines Hep-2, HeLa and non-tumor cell line Hek-293, showing IC50 values greater for Hek-293 compared to Hep-2 and HeLa cells, which suggests a selectivity of propolis for the tumor !ines. The proteomic analysis using two-dimensional electrophoresis associated with high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometer allowed the comparison of the protein maps of Hep-2 cell line in the absence or presence of propolis extracts in concentrations of 6 f.lg/mL (not cytotoxic) and 120 f.lg/mL (IC50). 325 spots were manually excised from the gels 2D SDS-PAGE and 177 proteins were identified. These proteins have been linked to various structural and metabolic processes, such as production and energy conversion, transport and carbohydrate metabolism, post-translational modification, protein tumover and chaperones, cytoskeletal proteins, repair proteins, among others. From the identified proteins that showed differential expression five were downregulated in the presence of propolis extract in the highest concentration (120 J.lg/mL). Only . two proteins identified in this study showed increased expression in the no cytotoxic concentration (6 J.tg/mL) ofthe red propolis extract. The results of comparative proteomic showed that the propolis interacts with a series of intracellular events and hence becomes a promising candidate to inhibit cellular growth and contribute to the different steps related to the process of carcinogenesis. Although the molecular mechanisms by which propolis interacts with the metabolism of the cells remain unknown, additional studies will better elucidate the antitumor and antioxidant activities here observed.