A própolis vermelha brasileira tem atraído interesses científicos e econômicos devido às suas variadas atividades biológicas. Este produto natural possui composição química variada de acordo com a região na qual é encontrado, sendo necessária uma completa caracterização química para cada tipo de própolis, a fim de se elucidar os compostos presentes e responsáveis pela atividade biológica observada. Neste trabalho, buscou-se caracterizar quimicamente os extratos da própolis vermelha brasileira, avaliar sua atividade antitumoral, bem como alguns mecanismos de morte celular, além de investigar o padrão proteico de células tumorais de laringe (Hep-2) e não tumorais de rim (Hek-293) tratadas e não tratadas com extratos da própolis vermelha através da análise proteômica comparativa. A caracterização química mostrou que a própolis apresenta moléculas complexas, principalmente isoflavonoides, que possuem importantes atividades biológicas, dentre elas a atividade antitumoral. A atividade citotóxica de duas frações e do extrato hidroalcoólico da própolis foi avaliada na linhagem tumoral Hep-2, a qual se revelou mais citotóxica nos tratamentos com as frações investigadas. Os ensaios de citometria mostraram que as células que receberam tratamento apresentaram menor potencial de membrana mitocondrial, maior quantidade de células em apoptose tardia (TUNEL e Anexina-V/PI), menor geração de espécies reativas do oxigênio e o aumento de fragmentação do DNA. Além disto, as colorações revelaram a presença de corpos apoptóticos e condensação de cromatina. A análise proteômica permitiu a comparação dos mapas proteicos da linhagem Hep-2, na ausência ou presença de extratos da própolis vermelha, com a linhagem não tumoral Hek-293. Estas proteínas foram classificadas de acordo com os processos biológicos as quais estão envolvidas. Além disto, doze proteínas identificadas na linhagem Hep-2 apresentaram expressão reduzida comparada ao grupo controle, dentre as quais muitas estão presentes em grande quantidade em outros tumores e são consideradas biomarcadores tumorais. Os resultados, de forma geral, mostram que a própolis interfere em um conjunto de eventos intracelulares e, assim, passa a ser uma candidata promissora para inibir o crescimento celular e contribuir para os diferentes passos relacionados com o processo de carcinogênese. Embora os mecanismos moleculares pelos quais a própolis vermelha interaja com o metabolismo das células permaneçam ainda desconhecidos, estudos adicionais servirão para melhor elucidar a atividade antitumoral da própolis vermelha brasileira e de suas frações. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / The Brazilian red propolis has attracted scientific and economic interests due to its varied biological activities. This natural product has diversify chemical composition according to the region in which it is found, then it is necessary a complete chemical characterization for each type of propolis, in order to elucidate the present compounds and responsible for the biological activity observed. In this work, we attempted to chemically characterize the extracts of Brazilian propolis, evaluate their antitumor activity as well as some cell death mechanisms, and to investigate the protein profile of larynx tumor cells treated and not treated with propolis extracts through comparative proteomic analysis. The chemical characterization showed that propolis has complex molecules, particularly isoflavones, which present significant biological activities, such as antitumor activity. The cytotoxic activity of two fractions and of the hydroalcoholic extract of propolis was assessed in Hep-2 tumor cell line, which proved to be more cytotoxic treatments in the investigated fractions. Flow cytometric assays showed that treated cells had lower mitochondrial membrane potential, increased amount of cells in late apoptosis (TUNEL and Annexin-V / PI), less generation of reactive oxygen species and increase in DNA fragmentation. Furthermore, the staining revealed the presence of apoptotic bodies and chromatin condensation. The proteomic analysis has allowed comparison of the maps of the protein Hep-2 cell line, in the absence or presence of propolis extracts, with non-tumor cell line Hek-293. These proteins were classified according to the biological processes which they are related. Besides, twelve identified proteins in Hep-2 showed reduced expression from the control group. Between them, many are presented in large quantities in other tumors and are considered tumor biomarkers. The results in general show that propolis interferes with a series of intracellular events and hence becomes a promising candidate to inhibit cell growth and contribute to the different steps relating to the process of carcinogenesis. Although the molecular mechanisms by which propolis interact with the metabolism of the cells remain unknown, further study will serve to better elucidate the antitumor activity of Brazilian propolis and its fractions.

Orientadores: Gustavo Antonio de Souza, José Vassallo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:53:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baptista_MauricioZuccolotto_M.pdf: 8709827 bytes, checksum: 83a90faa4c0b3ee087444229cb9deee0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Introdução: Evidências pré-clínicas implicam GRP78 como um possível marcador de resistência em quimioterapia baseada em antracíclicos em câncer de mama. Objetivos: O presente estudo avalia a relação entre a expressão de GRP78 no retículo endoplasmático (RE) e na membrana celular (MC) e a sobrevida global (SG) e a sobrevida livre de progressão (SLP) em pacientes tratadas com antracíclicos na adjuvância. Sujeitos e Métodos: Foram selecionadas 106 pacientes com estádios II e III de câncer de mama. Os dados clínicos foram obtidos de prontuários médicos. O microarranjo de tecidos (TMA) foi construído com blocos de parafina de tumores de mama. A expressão de GRP78 foi avaliada por imuno-histoquímica utilizando quatro cenários distintos: os cenários de alto e baixo limiar para o RE e os cenários de alto e baixo limiar para a MC. Resultados: O follow-up médio foi de 7.54 anos. Nos cenários de alto-limiar, 16% dos casos resultaram em GRP78-positiva para o RE e 40% em GRP78- positiva para a MC. Nos cenários de baixo-limiar, 74% dos casos resultaram em GRP78-positiva para o RE e 87% em GRP78-positiva para a MC. 10% dos casos mostraram nível forte (3+) de intensidade de coloração para GRP78 na MC. Ao término do seguimento não foi encontrada nenhuma relação entre a expressão de GRP78, a progressão de doença e o risco relativo de morte. O mesmo ocorreu com as probabilidades de sobrevida livre de progressão, exceto para mulheres acima de 50 anos de idade e pós-menopausadas, que tiveram um risco reduzido (RR=0.03; IC95% 0.01 a 0.40) de progressão de doença se positivas para GRP78. Não houve diferença estatisticamente significante entre as probabilidades de sobrevida em nenhum dos cenários examinados. Conclusões: Em nossa coorte, a superexpressão de GRP78 não foi significativamente associada à SG e à SLP das mulheres que receberam quimioterapia adjuvante baseada em antracíclicos. Este estudo fornece evidência que sustenta a forte atividade de GRP78 na membrana celular de células de câncer de mama. / Abstract: Introduction: Preclinical evidence implicates GRP78 as one possible marker of resistance to anthracycline-based adjuvant chemotherapy in breast cancer patients. Objectives: The present study assessed the relation between GRP78 expression in the endoplasmic reticulum (ER) and cell membrane (CM) of breast malignancies and overall (OS) and progression-free survival (PFS) of patients treated with anthracyclines in the adjuvant setting. Subjects and Methods: 106 stage II/III breast cancer patients were selected. Clinical data were retrieved from medical reports. Tissue Microarray was constructed from paraffin blocks of breast tumors. GRP78 expression was assessed by immunohistochemistry using four distinct scenarios: low and high GRP78 expression thresholds for ER and CM. Results: The median follow-up was 7.54 years. In the high-threshold scenarios, 16% of our cases were GRP78-positive for ER, and 40% were GRP78-positive for CM. In the low-threshold scenarios, 74% of our cases were GRP78-positive for ER, and 87% were GRP78-positive for CM. 10% of all cases showed strong (3+) CM staining of GRP78. By the end of the follow-up, no relation was found between GRP78 expression and disease progression and the relative risk of death. The same was true for the PFS probabilities, except for women above fifty years and postmenopausal, who had a reduced risk (RR=0.03; 95%CI 0.01 to 0.40) of disease progression if positive for GRP78. There was no statistically significant difference between the survival probabilities in any scenarios examined. Conclusions: In our cohort, GRP78 overexpression was not a predictor of OS or PFS of patients receiving anthracycline adjuvant chemotherapy. This study provides evidence supporting strong GRP78 activity in the CM of breast cancer cells. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T17:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Madjarof_Cristiana_D.pdf: 1735987 bytes, checksum: 696cbfdb2d89fba67710fa58c64078fa (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A própolis é uma resina coletada por abelhas da espécie Apis mellifera e atualmente esse produto vem se destacando por apresentar propriedades biológicas interessantes, como atividade antimicrobiana, antiinflamatória, antiulcerogênica, antiviral, antioxidante e anticâncer. A própolis brasileira apresenta uma constituição química diferenciada principalmente pela diversidade de espécies vegetais para a retirada de resina; variação esta que aponta para a necessidade de novas investigações tanto da composição química quanto das propriedades biológicas das própolis encontradas em diferentes regiões do país. Neste trabalho, duas novas variedades de própolis, a vermelha (Alagoas) e a pertencente ao grupo 6 (Bahia), foram avaliadas quanto às atividades antitumoral, antiinflamatória e antiulcerogênica revelando resultados diferenciados e promissores com relação a essas atividades. Ambos os extratos brutos das própolis demonstraram atividade antiproliferativa nos ensaios in vitro em cultura de células tumorais, bem como suas frações e compostos isolados; mas quando avaliadas in vivo, observou-se que a própolis vermelha demonstrou maior potência e baixa toxicidade. O mesmo foi observado nos ensaios in vivo para atividade antiinflamatória, podendo essa atividade, estar relacionada à atividade antitumoral. Já para a atividade antiulcerogênica ambas as própolis reduziram o volume de secreção gástrica, sendo esse o provável mecanismo de ação para essa atividade. / Abstract: Propolis is a resinous product collected by Apis mellifera bees and has been used as a pharmaceutical because of its antimicrobial, antiinflammatory, antiulcer, antiviral, antioxidant and anticancer activities. Depending on the region, Brazilian propolis has presented a different chemical composition has a composition reflecting the rich biodiversity of vegetal species to collect the resins. This suggests that further studies are needed to investigate biological properties and chemical composition of each regional propolis. The aim of this study was to investigate antitumoral, antiinflamatory and antiulcerogenic activities of two new types of propolis, collected in Alagoas (called Red Propolis) and in Bahia (a propolis from Group 6). Both propolis etanolic crude extracts had demonstrated an antiproliferative activity in vitro in human tumoral cells, as well their fractions and isolated compounds, although in vivo evaluation pointed out that red propolis was more efficient and less toxic. The same result was observed to antiinflamatory activity and probably there is a relationship with antitumoral activity. Antiulcerogenic activity of both própolis was significative and probably due to gastric secretion reduction as the pharmacological mechanism of action. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_VanessaHelenadaSilva_M.pdf: 2374598 bytes, checksum: e4b1046468b0d7343de5f3a6147c3f2c (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A utilização de plantas medicinais simboliza muitas vezes o único recurso terapêutico para muitas comunidades e grupos étnicos. A espécie Imperata brasiliensis Trin. (Poaceae), com ampla distribuição no Brasil, é utilizada na medicina popular como analgésico e diurético, porém pouco se conhece sobre seu potencial farmacológico. Este trabalho propôs trabalhar com o Extrato Bruto Hidroetanólico e Frações originadas por procedimentos fitoquímicos de partição e fracionamentos, a fim de identificar possíveis classes de compostos responsáveis pela ação antiproliferativa em cultura de células tumorais humanas e murinas, bem como avaliar sua atividade anticâncer e antiedematogênica em modelos in vivo. Nos ensaios de atividade antiproliferativa in vitro a Fração FAE demonstrou atividade e portanto foi fracionada originando as principais Frações I e J que após análises cromatográficas e de refracionamento demonstraram ser mais ativas que a Fração de origem (FAE) com maior seletividade para linhagens de melanoma e a atividade citotoxica in vitro foi atribuída a presença de compostos fenólicos e terpênicos atuando sinergicamente. Em modelo anticâncer de tumor de Ehrlich em camundongos a Fração FAE se mostrou ineficiente. Foi avaliado também a atividade antiedematogênica in vivo para das Frações FAE, I e J que demonstraram potencial atividade, especialmente para a FAE 100mg/Kg e Fração J 100mg/Kg. Posteriormente a Fração FAE foi submetida a avaliação antinociceptiva em três protocolos distintos para avaliação de dor inespecífica, dor neurogênica de origem periférica e central onde observou-se um comportamento analgésico inespecífico da Fração FAE sem nenhuma atividade sobre dor de origem neurogênica, resultado que sustentou a possível ação antinflamatória de substâncias presentes nas frações de I. brasiliensis / Abstract: The use of medicinal plants often simbolizes the only therapeutic source for many comunities and ethnic groups. The plant species Imperata brasiliensis Trin. (Poaceae), broad distributed in Brazil, is used in popular medicine as analgesic and diuretic, although little is known about its pharmacological potential. This project proposed to work with the hidroethanolic crude extract and the active fractions originated from pthytochemical procedures of biomonitored fractioning and partioning, in order to identify possible classes of compounds responsible for the antiproliferative activity in human and murine cancer cell lines, and also its anticancer and antiedematogenic activity in vivo models. In vitro antiproliferative assays demonstrated that the fraction FAE is active, which was further fractionated yielding fractions I and J, which after chromatographic analysis proved to be more active than the origin fraction (FAE), presenting selectivity for melanoma cell lines. The in vitro citotoxic activity was attributed to the presence of fenolic and terpenic compounds acting sinergically. In the murine model Solid Ehrlich Tumor, fraction FAE demonstrated to be inefficient. The antiedematogenic activity was also evaluated in vivo for fractions FAE, I and J, which showed potential interesting results, especially for FAE 100mg/kg and fraction J 100mg/kg. Posteriorly, fraction FAE was submitted to an antinociceptive evaluation, in three distinct protocols of inespecific, periferic and central neurogenic pain, in which an inespecific analgesic behavior was observed with the fraction FAE. No other neurogenic pain was observed, suggesting the possible antiinflamatory acitivity of the substances present in the active fractions of I. brasiliensis / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T10:12:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jankowsky_Luciana_M.pdf: 15004319 bytes, checksum: b642a2ac8b5c75f4b7f3bfba253b8688 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: o conhecimento sobre plantas medicinais constitui, inúmeras vezes, o único recurso terapêutico de diversas comunidades e a busca de novos compostos bioativos a partir da rica biodiversidade brasileira é uma estratégia com reflexos econômicos e sociais reconhecidamente positivos. Adicionalmente, parte da floresta tropical é explorada para a produção de madeira, gerando anualmente cerca de 10 milhões de toneladas de resíduos, nos diversos processos industriais de manufatura. Unindo a busca de princípios ativos com a possibilidade de uso dos rejeitos da indústria madeireira, a presente pesquisa teve por principal objetivo avaliar a potencial aplicação farmacológica do extrato bruto diclorometânico (EDB) e do extrato bruto etanólico (EBE), obtidos a partir dos resíduos de quatro espécies tropicais (Tabebuia sp, Bowdichia nitida, Dipteryx odorata e Myroxy/on balsamum). Inicialmente todos os extratos foram testados para averiguar possível atividade anticâncer, em cultura de células tumorais humanas. O EBD de Tabebuia sp, na concentração de 2,5 ug/mL, apresentou ação citocida para as linhagens tumorais representativas de adenocarcinoma ovariano, melanoma e leucemia. O EBE da B. nitida demonstrou atividade citocida, na concentração de 25 ug/mL para as linhagens tumorais representativas de adenocarcinoma prostático, leucemia e melanoma. O EBD de D. odorata, na concentração de 25 ug/ml,apresentou atividade citocida seletiva para leucemia e carcinoma ovariano. O EBD de M. balsamum demonstrou ação citocida, na concentração de 25 ug/mL, para as linhagens tumorais representativas de melanoma, adenocarcinoma colorretal, prostático e renal, carcinoma mamário e mamário-resistente, leucemia. Entre os extratos ativos o EBD de M. balsamum foi selecionado para estudos em outros modelos experimentais. No teste geral de atividade em camundongos esse extrato apresentou atividade depressora do sistema nervoso central (SNC), chegando a produzir hipnose profunda, e atividade antinociceptiva. Em modelos de úlcera gástrica reduziu as ulcerações produzidas por antiinflamatório e etanol e, em ligadura de piloro reduziu a secreção ácida. A atividade farmacológica do EBD de M. balsamum observada em diversos modelos experimentais pode ser conseqüência da variedade de compostos químicos presente no extrato, indicando a necessidade de estudos para determinação do mecanismo de ação e identificação dos princípios ativos / Abstract: The knowledge about the use of medicinal plants is, innumerable times, the only therapeutic resource for several communities; and to search new bioactive compounds from Brazilian biodiversity is one strategy with positive economic and social consequences. Additionally, part of the tropical forest is explored for lumber and wood based products, generating annually about 10 million tons of residues, in the industrial manufacture processes. Joining the search of active principies with the possibility to use of lumber industry reject, the present research had as main objective to evaluate the potential for pharmacologic application of dichloromethane gross extract (EDB) and ethanol gross extract (EBE), extracted from residues of four tropical species (Tabebuia sp, Bowdichia Nitida, Dipteryx odorata e Myroxy/on ba/samum). Initially all the extracts had been tested to anticancer activity, in cultured human tumor cells. The EBD of Tabebuia sp, at concentration of 2,5 ug/mL, presented cytocide activity to ovarium carcinoma, melanoma and leukemia. The EBE of B. nitida at 25 ug/mL concentration showed cytocide activity to prostate adenocarcinoma, leukemia and melanoma. The EBD of D. odorata, at concentration of 25 ug/ml, presented selective cytocide activity for leukemia and ovarium carcinoma. EBD of M. balsamum demonstrated cytocide action, at concentration of 25 ug/mL,to melanoma, leukimia, breast and breas tresistant carcinoma, prostate, colon and kidney adenocarcinoma. The EBD of Myroxylon balsamum was experimented in other models, resulting depressing activity on central nervous system (CNS), such as hypnosis; antinoceptive action and untiulcer action. The wide range of M. balsamum EDB could be attributed to its particular chemical composition. Those results stimulate the continuity of studies with lumber residues, in the search of new therapeutic drugs / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sacoman_JulianaLessa_M.pdf: 21702719 bytes, checksum: 1522ff705d917fd77eec5e23216a58ea (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os primeiros registros históricos da humanidade já relatavam o uso.de plantas para tratamento de diversos males e, com o aprimoramento dos estudos e técnicas de purificação, isolamento e identificação dos princípios ativos, foi possível o desenvolvimento de medicamentos para utilização em diversas patologias, inclusive na quimioterapia do câncer. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade anticâncer de duas espécies da flora brasileira, Anacardium humile St. Hil. e Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, de uso medicinal popular. Os extratos brutos diclorometânico (EBD) e etanólico (EBE) das folhas dessas espécies foram avaliados em ensaio de citotoxicidade in vitro em cultura de células tumorais humanas. Como o EBD de P. umbellata apresentou o melhor perfil de atividade in vitro, foi selecionado para avaliação em modelo de câncer murino, o tumor ascítico de Ehrlich. Nesse modelo, esse extrato apresentou atividade anti-tumoral dose dependente e, com isso, a identificação dos princípios responsáveis por essa atividade tomou-se fundamental. Desse modo, o EBD foi submetido a diversos procedimentos cromatográficos, sendo as frações obtidas biomonitoradas pelo teste de citotoxicidade. Esse procedimento permitiu a identificação de duas frações com elevada potência e seletividade anticâncer, sendo que na primeira fração (A) foram identificados derivados do ácido oxálico e na segunda (C), esteróides e triterpenos. A indução de morte celular por apoptose, avaliada por imunocitoquímica, foi significativa nas células UACC-62, OVCAR-3 e NCIADR/ RES quando tratadas pela fração A e nas células UACC-62, OVCAR-3 e 786-0, quando tratadas pela fração C. Uma outra fração (B), constituída principalmente do composto 4-nerolidilcatecol, não apresentou atividade anticâncer significativa. Esses resultados estimulam a continuidade dos estudos com a P. umbellata, com o objetivo de identificar os princípios ativos, determinar o mecanismo de ação anticâncer e comprovar sua atividade em modelos experimentais de câncer in vivo / Abstract: Plants are used in folk medicine since old times of human history, and improvements in techonology, research, purification techniques, isolation and identification of active principIes have allowed the discovery and development of new molecules as drugs for terapheutics of many diseases, such as cancer. This work aimed the evaluation of the anticancer activity of two Brazilian species, Anacardium humile St. Hil. and Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, used in folk medicine. Dichlorometanic (DCE) and ethanolic (ECE) crude extracts obtained from leaves of both species were tested in an in vitro citotoxicity assay against human cancer celllines. As long as P. umbellata's DCE showed the best anticancer activity profile, it was also evaluated in a murine cancer model, the Ehrlich Ascite Tumor (EAT). In this experiment, DCE also demonstrated a dose response relationship anticancer activity; therefore the isolation and identification of the active principIe responsible for that activity became the major focus of this work. As a result, DCE was submitted to many cromatographic procedures which were bioguided by the anticancer assay in vitro. This chromatographic purifications permitted identification of two main fractions with high potency and selectivity: fraction A consitituted by oxalic acid derivatives, and fraction C by steroids and triterpenes. The quantification of apoptosis induction by immuncytochemical analysis were significant for UACC-62, OVCAR-3 and NCI-ADR/ RES celllines treated with fraction A, whereas UACC-62, OVCAR-3 and 786- o cells lines went to apoptosis when exposed to fraction C. A third fraction, denominated fraction B, was rich in 4-nerolidylcathecol, widely knowm for this plant specie, and did not show any significative anticancer activity. These results encouraged following up on studies with P. umbellata, priorizing the identification of active principIes, the determination of anticancer mechanism of action and to prove the anticancer activity in experimental cancer models in vivo / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Tese ( doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T13:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marchetti_GabrielaMenezes_D.pdf: 5720320 bytes, checksum: c6c2d23bcc3202544d0784d655107680 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A pesquisa fitoquímica de espécies vegetais tem originado um grande número de novas substâncias e trabalha em conjunto com a pesquisa farmacológica que é responsável porá apontar o potencial terapêutico dessas moléculas e ou de seus derivados. Trabalhos anteriores revelaram que o extrato bruto diclorometânico das folhas de Calea pinnatifida(Asteraceae) apresenta atividade antiproliferativa, em cultura de células tumorais humanas e antitumoral em modelos in vivo de Tumor Ascítico e Sólido de Ehrlich. Os estudos fitoquímicos revelaram a presença de germacranolídeos (lactonas sesquiterpênicas) entre os princípios ativos responsáveis pela atividade antitumoral. Este trabalho teve como objetivo isolar e determinar o mecanismo de ação do arucanolídeo. Primeiramente o arucanolídeo foi obtido através do fracionamento do extrato bruto diclorometânico e precipitação de graxas e clorofila com o uso de uma solução de acetato básico de chumbo. Em cultura de células tumorais humanas de diferentes origens o arucanolídeo apresentou atividade citocida para todas, com seletividade para melanoma e rim. Os estudos sobre o tipo demorte celular revelaram que o arucanolídeo é capaz de induzir apoptose, pela via intrínseca,através da ativação de caspases, com geração de radicais livres em células de glioblastoma U-118 MG e de melanoma SK-MEL-2. Já nas células HeLa (adenocarcinoma de cervix) o mecanismo pelo qual o arucanolídeo atua pode ser diferente, pois a via intrínseca não é tão importante, nem a geração de radicais livres, sugerindo o envolvimento da via extrínseca de apoptose. O uso de células HeLa transfectadas com o gene de Bcl-xl, não interferiu na indução de apoptose pelo arucanolídeo, comprovando a pouca importância da mitocôndriano processo apoptótico nessa linhagem, enquanto nas células SK-MEL-2 Bcl-xL a indução de apoptose foi significativamente reduzida. Nas células melanoma murino B16-F10, o arucanolídeo induziu apoptose através da ativação das caspases. No entanto, em modelo animal utilizando essa linhagem, a redução do desenvolvimento tumoral não foi dependente do processo apoptótico, sugerindo que outro mecanismo de ação está envolvido na atividade in vivo. No modelo de metástase onde as células de melanoma B16-F10 foram inoculadas diretamente na corrente sanguínea, foi observada uma tendência na redução das metástases pulmonares no grupo tratado com arucanolídeo, com poucos sinais de toxicidade hepática. Com tudo isso, pode-se concluir que o arucanolídeo é capaz de induzir apoptose em células tumorais humanas e murinas, podendo atuar pela via intrínseca e ou extrínseca de apoptose, dependendo do tipo celular avaliado. A atividade antitumoral in vitro foi confirmada com a redução do crescimento tumoral in vivo, comprovando o potencial farmacológico desse composto / Abstract: Plants have provided a large number of new substances and many drugs have based for the synthesis of them. The dichloromethane crude extract presented antiproliferative activity inhuman tumor cell culture and in vivo antitumor activity against ascitic and solid Ehrlich tumor models. The results obtained with Calea pinnatifida, species from Asteraceae family,may result in the development of new chemotherapeutic agents by the presence of germacranolides (sesquiterpene lactones) in their chemical composition. The arucanolide was obtained by the fractionation of crude dichloromethane extract after the precipitation of chlorophyll and graxes using a lead acetate basic solution. Arucanolide shows antiproliferative activity in vitro against human tumor cells lines with selectivity for melanoma and kidney. It was proved that the arucanolide is capable of inducing apoptosis,by the intrinsic pathway, through caspase avtivation, generating free radicals in U-118 MG glioblastoma and SK-MEL-2 melanoma cells. At the adenocarcinoma of cervix cells HeLa the mechanism by which arucanolide acts may be different, because the intrinsic pathway seems to be not as important as in the others cells, suggesting the involvement of the extrinsic pathway of apoptosis. The use of HeLa cells transfected with the gene of Bcl-xl, has not hindered the induction of apoptosis in these cells, showing the lack of importance of mitochondria in this apoptotic process, while in SK-MEL-2 Bcl-xL cells, the arucanolide treatment significantly reduced the apoptosis induction. In the B16-F10 cells, the arucanolide induces caspase-dependent apoptosis in vitro and has antitumor activity in vivo against the same cell line, in a subcutaneous melanoma model. The apoptosis induction was not detected in vivo, suggesting that arucanolide could act by preventing the tumor cell proliferation in vivo. At the model of experimental metastasis with the melanoma cell lineB16-F10 there is a tendency to reduce lung metastasis in mice treated with arucanolide, showing few signs of liver toxicity. With all this results, we conclude that the arucanolídeois able to induce apoptosis in human and murine tumor cells lines, and its death pathway, depends on the cell type evaluated. This compound may act by intrinsic or extrinsic apoptosis pathways. The arucanolide also reduces tumor growth in vivo and it is a promising new chemotherapic for clinical research / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-06T13:56:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4206218 bytes, checksum: 1ab8811fdfb49e96c8403829a66a38e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-06T13:56:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4206218 bytes, checksum: 1ab8811fdfb49e96c8403829a66a38e2 (MD5) Previous issue date: 2013-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diante do contínuo aumento mundial de doenças como o câncer do tipo melanoma e infecções causadas por Staphylococus aureus resistentes à meticilina, a pesquisa por novos fármacos tem ganhado importância cada vez maior no mundo científico. O Brasil é um dos países com maior biodiversidade vegetal no mundo. Entretanto, muito pouco ainda se sabe sobre as propriedades terapêuticas desse patrimônio vegetal. O objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, o potencial citotóxico dos extratos hidroalcoólcios de Inga subnuda subsp. Luschnathiana (Benth.) T.D.Penn. (ingá) e Rollinia dolabripetala (Raddi) R.E. Fr. (araticum, marolo), dos flavonóides naringina e morina e de xantonas, sobre o câncer de pele do tipo melanoma, realizando um comparativo com a atividade do fármaco comercial 5-Fluoracil (5-FU). Os extratos também tiveram sua eficácia testada, in vitro, quanto ao seu potencial antioxidativo e potencial bactericida principalmente em cepas Gram-positivas. A avaliação da citotoxicidade foi baseada na linhagem B16F10 submetida ao ensaio colorimétrico do MTT. O extrato de I. subnuda apresentou ação bactericida contra todas as cepas bacterianas testadas, enquanto o extrato de R. dolabripetala apresentou atividade apenas contra S. aureus ATCC 29213. O extrato de I. subnuda desempenhou atividade antioxidante estatísticamente maior (p < 0,05) que os extratos de Gingko biloba (controle) e R. dolabripetala, tanto no teste do DPPH quanto no de peroxidação lipídica. No teste de citotoxicidade, a naringina foi considerada uma substância inativa para este tipo de câncerpatologia e a morina promoveu maior citotoxicidade no período de 72 horas (98,48% ± 0,71) com diferença significativa em relação ao controle (α < 0,05). Contudo, assim como a 1,7- dihidroxixantona, o potencial uso terapêutico da morina dificilmente será considerado devido a alta concentração necessária para desempenhar atividade citotóxica relevante (1,25x103 μg/mL). Assim, o extrato de ingá foi considerado o mais efetivo por, no tempo de 24, 48 e 72 horas, desencadear mais de 80% de citotoxicidade com a menor concentração (78,13 μg/mL). Os resultados indicam que ambos os extratos apresentam atividade antioxidante, antibacteriana e citotóxica, mas estudos posteriores são necessários para uma melhor compreensão das promissoras atividades biológicas dos extratos. / The increasing world-wide rates of deseases such as melanoma skin cancer and infections caused by methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus has historically attracted the attention of researchers about the development of new drugs. Brazil has one of the world's greatest biodiversity; nevertheless, the majority of plants with therapeutic potential still unclear. The aim of present study was to evaluate the in vitro antiproliferative activity of naringin, morin, xanthones and hydroalcoholic extracts of Inga subnuda subsp. Luschnathiana (Benth.) T.D.Penn. and Rollinia dolabripetala (Raddi) R.E. Fr., compared of Fluorouracil (5-FU). Both extracts were evalueted about their antioxidant capability and about their antimicrobial activity mainly against Gram- positive bacterias. The cytotoxicity test methodology was based on the MTT colorimetric assay and was performed on B16-F10 melanoma cells. The I. subnuda extract was effective against the three strains of bacteria, whereas the R. dolabripetala extract was effective just against S. aureus ATCC 29213. The I. subnuda extract performed a statistical higher antioxidant activity (p < 0,05) than the Gingko biloba (control) and R. dolabripetala extracts in both antioxidative tests. The naringin was considered as inactive substance against this cancer cell and the morin bring about the higher citotoxity in 72 hours (98,48% ± 0,71) with statistically significant difference compared to the control group (α < 0,05). On the other hand, as 1,7-dihydroxyxanthone, the therapeutic use of the morin for this porpose could be disregarded due the high concentration required for relevant citotoxity activity (1,25x10 3 μg/mL of both). Thus, the I. subnuda extract was regarded as the most effective tested substance by his up to 80% citotoxity capability under all treatment periodo (24, 48, 72 hours). Moreover, the citotoxity test of I. subnuda extract required the lowest concentration for a effective result (78,13 μg/mL). The experiments reported tha both extracts play a role as an antioxidant, an antibacterial and a cytotoxic agent. However, further studies are required for a better understanding about their biological activities.

Orientadores: Alan Roger dos Santos Silva, Ana Lúcia Carrinho Ayroza Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T10:30:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Iachinski_TatianaSantosAssumpcao_D.pdf: 1245874 bytes, checksum: 0e426f4d5b6b5c707e92933df790258a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O tratamento do câncer pode provocar efeitos colaterais que limitam a efetividade da terapia e ter grande impacto na qualidade de vida do paciente. A dor orofacial em pacientes oncológicos é comum e pode estar relacionada à quimioterapia. A neurotoxicidade periférica e a dor neuropática são complicações de diversos agentes quimioterápicos, como a Oxaliplatina, que apresenta alta incidência de efeitos colaterais por toxicidade aguda e crônica. O objetivo deste estudo foi pesquisar as manifestações sensitivas e motoras orofaciais causadas pela neurotoxicidade do esquema quimioterápico FOLFOX 4. Na avaliação clínica prospectiva, foram avaliados 23 pacientes com câncer de cólon e reto, submetidos ao esquema quimioterápico FOLFOX 4 - FOL: Ácido Folínico (Leucovorina), F: Fluorouracil (5-FU), OX: Oxaliplatina. Os pacientes foram avaliados em quatro momentos da quimioterapia: no ciclo 1, entre o ciclo 2 e 3, entre o ciclo 6 e 8 e no último ciclo (12). Exame clínico e questionário foram aplicados para pesquisar ocorrência e as características clínicas da neuropatia periférica, incluindo: dor orofacial, parestesia perioral, disgeusia, disfagia, disartria, câimbra nos músculos mastigatórios, perda de sensibilidade tátil, disestesia, e a ocorrência de odontalgia neuropática. O acompanhamento durante os ciclos da quimioterapia buscou avaliar fatores desencadeantes, de piora e melhora, para intervenções dirigidas à dor. A manifestação da neurotoxicidade orofacial ocorreu no sintoma de parestesia em lábio, língua ou perioral, em 13% dos pacientes, e disgeusia, em 57% dos pacientes. Dor neuropática em face, boca ou dentes não foram detectadas na pesquisa. Os sintomas foram transitórios, caracterizando uma toxicidade aguda. Pode-se concluir que o esquema quimioterápico FOLFOX 4 está associado a neurotoxicidades orofaciais transitórias como parestesia e disgeusia, sugerindo neuropatia aguda. Contudo, o protocolo de tratamento em questão não desencadeou dor orofacial / Abstract: The treatment of cancer can produce side effects, which are dose-limiting and provoke a great impact on patient's quality of life. Orofacial pain often affects cancer patients, and it may be related to chemotherapy. The peripheral neurotoxicity and the neuropathic pain are complications of chemotherapeutic agents, such as oxaliplatin, which leads to a high incidence of acute and chronic side effects. The aim of this study was to investigate the orofacial sensory and motor manifestations of neurotoxicity induced by FOLFOX 4 chemotherapy in the treatment of colon cancer. Twenty-three patients were enrolled in this clinical prospective study, treated by FOLFOX 4 - FOL: Folic Acid (Leucovorin), F: Fluorouracil (5-FU), OX: Oxaliplatin (Eloxatin). The assessment was conducted in four stages of chemotherapy: cycle 1, between cycle 2 and 3, between cycle 6 and 8, and in the last cycle (12). The symptoms of the peripheral neuropathy manifestation were investigated using a questionnaire and clinical examination, in order to determine the occurrence and the clinical characteristics of the following symptoms: orofacial pain, perioral paresthesia, dysgeusia, dysphagia, dysarthria, cramps, loss of tactile sensitivity, dysesthesia, and the neuropathic dental pain. The monitoring during cycles of chemotherapy aimed to identify trigger points, worsening and improvement factors for interventions oriented toward the pain. The manifestation of neurotoxicity occurred as paresthesia in lips, tongue or perioral region, in 13% of patients, while dysgeusia affected 57% of the patients during the treatment. In this research, neuropathic pain in the face, oral region or teeth was not detected. The manifested symptoms were transient, remaining about three days, suggesting an acute toxicity. This study demonstrated that FOLFOX 4 is related to oral symptoms, such as paresthesia and dysgeusia, which decreased at the end of treatment, charactering acute neuropathy. Conversely, this protocol did not triggered orofacial pain / Doutorado / Estomatologia / Doutora em Estomatopatologia

A própolis vermelha é uma resina natural produzida por abelhas do gênero Apis a partir de exsudados vegetais e tem atraído a atenção dos pesquisadores de todo o mundo devido à sua potente atividade em diversos modelos biológicos. Essa resina natural é rica em polifenóis e compostos voláteis, sendo que mais 300 compostos químicos já foram identificados em amostras de diferentes regiões. Técnicas de identificação química de alta precisão são imprescindíveis para a correta elucidação dos compostos químicos presentes nas amostras e para o entendimento dos efeitos biológicos. Neste estudo, buscou-se utilizar técnicas de fracionamento como uma metodologia capaz de ser explorada em estudos envolvendo amostras de própolis vermelha, buscando-se a identificação e caracterização de frações ativas, bem como o uso de modelos celulares de câncer de cólon para o screening de moléculas bioativas. As frações ativas foram identificadas por meio HPLC-MS e ESI-MS/MS, evidenciando uma composição química complexa baseada em compostos fenólicos e flavonoides. Entre os resultados obtidos, destacam-se as frações 05 e 06, as quais foram capazes de produzir inibição significativa sobre as linhagens tumorais HT-29 e HCT-116, respectivamente, com menores efeitos sobre as células não-tumorais. As frações obtidas no estudo apresentaram menor diversidade química do que a encontrada no extrato total da própolis, favorecendo a sua bioatividade in vitro, e, como resultado, esta técnica pode favorecer a descoberta e o desenvolvimento de novos fármacos utilizando a própolis como fonte de potencial de moléculas contra o câncer. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Red propolis is a natural resin produced by bees of the genus Apis from plant exudates and has attracted the attention of researchers worldwide due to its potent activity in several biological models. This natural resin is rich in polyphenols and volatile compounds and more than 300 chemical compounds have been identified in samples from different regions. High precision chemical identification techniques are essential for the correct elucidation of the chemical compounds present in the samples and for the understanding of the biological effects. In this study, we sought to use fractionation techniques as a methodology able to be explored in studies involving samples of red propolis, seeking the identification and characterization of active fractions, as well as the use of cellular models of colon cancer for screening of bioactive molecules. The active fractions were identified by techniques of HPLC-MS and ESI-MS/MS, evidencing a complex chemical composition based on phenolic compounds an flavonoids. Among the obtained results, we highlight the fractions 05 and 06, which are able to produce significant inhibition on the HT-29 and HCT-116 tumor lines.The fractions obtained in this study showed lower chemical diversity than that found in the total extract of propolis, favoring its bioactivity, and as a result, this technique may favor the discovery and development of new drugs using propolis as a potential source of molecules against cancer.