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Ação antitumoral in vitro do extrato da folha de oliveira (Olea europae L.) e dos flavonoides morina, naringina e rutina em linhagens de células carcinogênicas / Antitumoral action in vitro of the olive leaf extract (Olea europaea L.) and flavonoids morin, naringin, and rutin in cell lines carcinogenicPereira, Wander Lopes 25 July 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer é uma doença crônica que atinge milhares de pessoas ao redor do mundo, sendo responsável por elevadas taxas de morbidade e mortalidade. No Brasil, em 2012, foram registrados 321 mil novos casos de câncer e 190 mil óbitos em decorrência desta patologia. Por se tratar de uma doença que acomete a população mundial, o câncer produz impactos na saúde pública e na economia, pois o tumor atinge uma parcela da população economicamente ativa, podendo ser de rápido desenvolvimento e de altas taxas de metástase e de complicações físicas e psicológicas. O aumento da incidência de câncer no mundo e de suas repercussões sociais, econômicas e na saúde pública instiga a comunidade científica de vários países, inclusive do Brasil, a desenvolver pesquisas com o propósito de investigar quais compostos naturais seriam potencialmente considerados drogas terapêuticas no combate e prevenção ao câncer. Os flavonoides são compostos orgânicos, extraídos de plantas, conhecidos pelas suas propriedades farmacológicas, dentre elas, a atividade anticarcinogênica. A família da Olea europaea L. conhecida como oliveiras, possui aplicação medicinal na região onde é cultivada. Neste trabalho foi avaliada a atividade citotóxica de três flavonoides (morina, naringina, rutina) e do extrato da folha de oliveira contra às linhagens leucêmicas: U937, THP-1 e linhagens de tumores sólidos: B16F10, SK-MEL-5, H460 via ensaio colorimétrico MTT e pelo índice da lactase desidrogenase (LDH) liberada pela célula opôs 48 horas de incubação. Estes ensaios mostraram que o composto morina e o extrato de oliveira reduziram a viabilidade celular de maneira concentração dependente nas linhagens tumorais. A análise por microscopia de fluorescência mostrou que o flavonoide morina e o extrato de oliveira foram os únicos efetivos em induzir morte por apoptose de maneira tempo e concentração dependentes nas linhagens U937, THP-1, SK-MEL-5, B16F10 e H460. O mecanismo de morte celular por apoptose foi confirmado por análise do potencial de membrana mitocondrial e por caspases. Sendo assim, investigação das propriedades anticarcinogênicas e terapêuticas dos compostos morina, e do extrato de folha de oliveira como inibidores de proliferação celular e promotor de apoptose de células tumorais, bem como, interferências no metabolismo da celular sugerem a utilização destes compostos como fármaco na prevenção e tratamento do câncer. / Cancer is a chronic disease that affects thousands of people around the world, being aggressive and lethal, which justifies its high prevalence and can provide high rates of morbidity and mortality.
In Brazil, in 2012, there were 321.000 new cancer cases and 190.000 deaths due to this disease. Because it is a disease that affects the world's population, produces cancer impacts on public health and the global economy, because the tumor reaches a portion of the economically active population, being of rapid development and high rates of metastasis and physical complications and psychological. The increased incidence of cancer in the world and its social, economic and public health encourages the scientific community in several countries, including Brazil, to develop research in order to investigate natural compounds which would be considered potentially therapeutic drugs to combat cancer. Flavonóids are organic compounds extracted from plants, known for their pharmacological properties, among them the anticarcinogenic activity. The family of Olea europaea L. known as olive, has medical applications in the region where it is grown. In this study, we evaluated the cytotoxic activity of three flavonoids (morin, naringin, rutin) and extract of olive leaf front of leukemic lines: U937, THP-1 and strains of solid tumors: B16F10, SK-MEL-5, H460 via MTT colorimetric assay and the index of lactase dehydrogenase (LDH) released by the cell objected 48 hours of incubation. These tests showed that the compound morin and olive extract decreased the cell viability of concentration- dependent manner in tumor cell lines. Analysis by fluorescence microscopy showed that the flavonoid extract of olive and morin were the only effective in inducing apoptotic death of time and concentration dependent manner the lines U937, THP-1 and SK-MEL-5. The mechanism of cell death by apoptosis was confirmed by analysis of mitochondrial membrane potential and caspases. Thus, research and therapeutic anticarcinogenic properties of the compounds morin, and olive leaf extract as inhibitors of cell proliferation and a promoter of tumor cell apoptosis, as well as interference in cellular metabolism suggest the use of these compounds as a medicine for the prevention and cancer treatment.
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Avaliação do alendronato de sódio, atorvastatina cálcica, ipriflavona e óleo de linhaça no tratamento da osteoporose induzida com dexametasona / Evaluation of alendronate of sodium, atorvastatin calcic, ipriflavone and flexsed oil in the treatament of dexamethasone osteoporosis inducedFerreira Junior, Davilson Bragine 07 November 2016 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-10T11:21:46Z
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Previous issue date: 2016-11-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo desse trabalho foi estudar os efeitos do alendronato de sódio, da atorvastatina cálcica, da ipriflavona e do óleo de linhaça no tratamento da osteoporose induzida com dexametasona. A indução da osteoporose consistiu na administração de dexametasona na dose de 7,5mg/kg de peso corporal, por via IM, uma vez por semana durante quatro semanas, à exceção dos animais do grupo controle (G1). Os animais submetidos à indução da osteoporose foram então distribuídos aleatoriamente, recebendo os seguintes denominações e tratamentos: G2 (controle com osteoporose), G3 (Alendronato de Sódio 0,2mg/kg), G4 (Atorvastatina Cálcica 1,2mg/kg), G5 (Ipriflavona 100mg/kg) e G6 (Óleo de Linhaça 2,0ml). Após o período de 30 e 60 dias do início do tratamento os animais foram eutanasiados e então coletadas amostras de sangue para as dosagens dos níveis séricos de cálcio, fósforo, fosfatase alcalina (FAL), fosfatase alcalina óssea (FAO), paratormônio (PTH), glicose e insulina. Além disso, foram coletados os fêmures esquerdos para avaliação biométrica e histomorfométrica. O ensaio biológico foi realizado segundo delineamento inteiramente casualizado com 6 tratamentos e 6 repetições. A princípio foi verificada a existência de distribuição normal com o teste de Shapiro-Wilk (p<0,05). Os grupos foram comparados entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Através das avaliações biométrica e histomorfométrica foi possível verificar a perda estrutural óssea induzida pela dexametasona, assim como a influência positiva na manutenção tecidual de todos os tratamentos, apesar de somente os grupos tratados com alendronato de sódio obterem valores equiparáveis ao grupo normal. Os valores séricos de cálcio, fósforo e PTH demonstraram alterações decorrentes do uso da dexametasona, não apresentando nenhuma alteração significativa relativa aos tratamentos. Os níveis séricos de FAO apresentaram alterações positivas nos grupos tratados com atorvastatina cálcica, ipriflavona e óleo de linhaça. Os níveis séricos de FAL, afetados pelas variantes intestinal, renal e hepática, não apresentaram correspondência à FAO. Os valores dos níveis séricos da glicose e insulina puderam demonstrar o quadro de hiperglicemia consequente do aumento da resistência à insulina, presentes no processo de indução da osteoporose pela dexametasona. A atorvastatina cálcica ocasionou agravamento da hiperglicemia e hiperinsulinemia potencializando o quadro de resistência a insulina levando à instalação do diabetes melittus tipo 2. Tanto a ipriflavona como óleo de linhaça foram capazes de ocasionar queda significativa da hiperglicemia com resultados bioquímicos que caracterizam, principalmente, diminuição do quadro de resistência à insulina. / The aim of this study was to investigate the influence of sodium alendronate, atorvastatin calcium, the ipriflavone and linseed oil in the osteoporosis induction process with dexamethasone. The induction of osteoporosis was the administration of dexamethasone at a dose of 7.5mg/kg body weight IM once a week for four weeks, except for the control animals (G1). The animals subjected to induction of osteoporosis were then randomly assigned, receiving the following names and treatments: G2 (control with osteoporosis), G3 (Alendronate Sodium 0.2mg/kg), G4 (Atorvastatin Calcium 1.2 mg/kg), G5 (Ipriflavone 100 mg/kg) and G6 (Flaxseed Oil 2.0ml). Between 30 and 60 after the start of treatment blood samples were collected for measurements of serum levels of calcium, phosphorus, alkaline phosphatase (FAL), bone specific alkaline phosphatase (FAO), parathyroid hormone (PTH), glucose and insulin. In addition, they collected the left femurs for biometric and histomorphometric measurement. The biological assay was performed according to a completely randomized design with 6 treatments and 6 repetitions. The principle was checked for normal distribution with the Shapiro-Wilk test (p <0.05).The groups were compared by Tukey test at 5% probability. Through histomorphometric and biometric evaluations it was possible to verify the structural bone loss induced by dexamethasone, as positive influence on tissue maintenance of all treatments, although only the group treated with alendronate sodium obtain values comparable to the control group. The serum calcium, phosphorus and PTH demonstrated changes resulting from the use of dexamethasone, showing no significant change on the treatments. Serum FAO had positive changes in the groups treated with calcium atorvastatin, ipriflavone and linseed oil. Serum FAL affected by intestinal, renal and hepatic variants showed no correspondence to FAO not recommended its use as a marker of bone remodeling. The values of serum glucose and insulin were able to demonstrate the consequent hyperglycemia within the increased insulin resistance present in the process of induction of osteoporosis by dexamethasone, and treatment with sodium alendronate no change to the glycemia and insulinemia. The atorvastatin calcium resulted in worsening of the hyperglycemia and hyperinsulinemia potentiating insulin resistance leading to installation of the above diabetes mellitus type 2. Both ipriflavone as linseed oil were able to cause a significant drop in hyperglycemia biochemical results mainly characterized decrease the insulin resistance above.
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Efeito do flavonóide naringina associado à fármaco sinvastatina no metabolismo lipídico de coelhos hipercolesterolêmicos / Evaluation of the narigin flavonoid effect associated with the drug simvastatin in the lipidic metabolism of hypercholesteraemic habitsSoares Júnior, Duílio Teixeiras 30 July 2015 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-03-21T15:37:12Z
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Previous issue date: 2015-07-30 / A Hiperlipidemia é considerada uma dos mais importantes fatores no desenvolvimento da doença arterial coronariana, principal causa de morte de indivíduos adultos no mundo. A dislipidemia é um quadro clínico caracterizado por concentrações anormais de lipídios ou lipoproteínas no sangue, que é determinada por fatores genéticos e ambientais. A Sinvastatina é um fármaco com potencial ação hipocolesterolêmica. Estudos demonstraram que a Naringina possui ação antiinflamatória, impede a oxidação da LDL-c e previne formação de placa aterosclerótica. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do flavonóide Naringina associado ao fármaco Sinvastatina, em diferentes concentrações, no metabolismo lipídico de coelhos hipercolesterolêmicos. A hiperlipidemia nos coelhos foi alcançada suplementando a dieta com 20 ml diários de gordura animal via oral. Os níveis de colesterol e triacilglicerol aumentaram consideravelmente quando comparados ao grupo que recebeu apenas ração, 86,52% e 83,96% respectivamente. Os tratamentos com naringina 25mg associada a sinvastatina 1,2 mg foi a formulação que apresentou os melhores resultados, diminuindo em 60,08% os níveis de colesterol e 65,35% os níveis de triacilglicerol com 28 dias de tratamento. Contudo, apenas no grupo dos animais tratados com 5 mg de Naringina e 0,3 mg de sinvastatina tiveram os valores de Hdl-c aumentados. Os resultados de glicose, ureia e creatinina sofreram poucas variações ao longo do experimento. Já os valores de AST e ALT tiveram uma redução de seus níveis plasmáticos em todos os grupos. De maneira geral os compostos associados de naringina e sinvastatina apresentam ação farmacológicasinérgica no metabolismo lipídico de coelhos hipercolesterolêmicos, contudo não se pode afirmar que os tratamentos utilizados e resultados obtidos de ureia, creatinina, AST e ALT foram capazes de causar nefrotoxicidade e ou hepatotoxicidade nos animais. Testes para avaliação toxicológicas e avaliação de cortes histológicos seriam necessários para avaliar qualquer dano hepático e ou renal nos animais em teste. / Dyslipidaemia is a clinical condition characterized by the abnormal concentrations of lipids or lipoproteins in the blood, which is determined by genetic and environmental factors. Simvastatin is a pharmaceutical drug with hypocholesterolemic action. Studies have shown that the naringin has an anti-flammatory action, which stops the oxidation of the LDL-c and prevents the formation of the atherosclerotic board. The aim of the present study was to evaluate the effect of the flavonoid Naringin associated with the drug Simvastatin in different concentrations, on the lipid metabolism of hypercholesteraemic habits. The hyperlipidaemia on habits was achieved by supplementing their diet with 20ml of daily oral doses of animal fat. The cholesterol levels and triglycerides considerably increased when compared with the group that was only fed, showing the percentages of 86,52% and 83,96% respectively. The treatments with naringin 25 mg associated with simvastatin 1.2 mg was the formula that presented the best results, decreasing in 60,08 % the levels of cholesterol and 65.35% the levels of triacylglycerol with 28 days of treatment. However, only the group of the animals treated with 5mg of Naringin and 03.mg of simvastatin had the values of Hdl-c raised. The results of glycose, urea and creatine suffered low variations along the experiment. Nonetheless, for the AST and ALT values, a reduction was observed on the plasmatic levels of all groups. In general, the associated compounds of Narigin and Simvastatin showed a synergistic pharmacological action in the lipid metabolism of hypercholesteraemic habits, yet it cannot be stated that the chosen treatments and found results of urea, creatinine, AST and ALT were capable of causing nephrotoxicity and or hepatotoxicity on the animals. Further tests for toxicological evaluations of histological cuts could be necessary to assess any possible hepatic or nephric damage on the tested animals.
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Efeito hipolipidêmico e toxicológico do arroz fermentado por Monascus ruber , CCT 1236, em coelhos / Hypolipidemic and toxicological effects of rice fermented by Monascus rubber, CCT 1236, in rabbitsFonseca, Cristiane Sampaio 05 August 2002 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T10:47:19Z
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Previous issue date: 2002-08-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Produtos fermentados por fungos, em especial o “ang-kak” (arroz fermentado por fungos do gênero Monascus) são tradicionalmente usados na culinária asiática como corantes e condimentos. Estes fungos produzem uma substância denominada mevinolina, utilizada na redução da concentração do colesterol sérico. Essa substância inibe a enzima hidroximetilglutaril coenzima A redutase (HMG-CoA redutase), enzima chave na biossíntese do colesterol. Foi realizada a caracterização do arroz fermentado analisando as concentrações de proteínas, lipídios, carboidratos, cinzas e umidade. Posteriormente, foram realizados dois ensaios biológicos com o objetivo de avaliar os efeitos hipolipidêmicos e toxicológicos do arroz fermentado pelo fungo Monascus ruber. Utilizaram-se 36 coelhos machos da raça Nova Zelândia Branco, com hiperlipidemia induzida por colesterol 1% administrado na ração juntamente com o arroz fermentado que foi seco e triturado e adicionado nas concentrações de 1, 5 e 10%. Da análise do arroz fermentado verificou-se que houve um aumento nas concentrações de proteínas, lipídios e redução na concentração de carboidratos. O arroz fermentado na concentração de 10% foi mais eficaz no controle da hiperlipidemia, promovendo redução de colesterol total (37,14%), LDL-c (37,73%), VLDL-c (51,44%), triacilgliceróis (51,44%). O arroz fermentado a 10% promoveu aumento da lipoproteína HDL em 33,85% . O segundo ensaio foi realizado com a finalidade de avaliar a toxicologia aguda deste produto. Foram dosados as concentrações de creatinina, proteínas totais, albumina, bilirrubina total, bilirrubina direta, ácido úrico, fosfato, ferro, cloro, cálcio, e as atividades de gama glutamil-transferase (gama-GT), transaminase glutâmico- pirúvica (TGP), transaminase glutâmico-oxaloacética (TGO) e fosfatase alcalina no 1 o , 15 o , 30 o dias do experimento. No estudo toxicológico não foi observada variação significativa nos parâmetros bioquímicos analisados. No estudo histopatológico constatou-se que a adição de arroz fermentado na dieta dos animais não alterou a morfologia das células do coração. Quando adicionou-se o arroz fermentado juntamente com o colesterol, verificou-se que esse arroz impediu a formação de áreas extensas de lesões decorrentes da adição de colesterol. Quanto ao fígado, devido às características inerentes desse órgão em coelhos, o efeito da adição do arroz fermentado na dieta dos animais não levou a resultados conclusivos. O arroz fermentado por Monascus ruber se mostrou, promissor na modulação dietética de lipídios sanguíneos, embora estudos em outros modelos animais e humanos sejam necessários para resultados mais conclusivos. / Products fermented by fungus, especially the “ang-kak” (fermented rice by fungus of gender Monascus) are used traditionally in the Asian cookery as colorings and condiments. These fungus produce a substance denominated mevinoline, used in the reduction of the concentration of blood cholesterol. That substance inhibits the enzyme 3-hidroxy – 3- metilglutaryl coenzime A reductase (HMG-CoA reductase), the principal enzyme in the biosynthesis of cholesterol. The characterization of the fermented rice was accomplished investigating concentrations of proteins, fat, carbohydrates, ash and moisture. Biological assays were carried out with the objective of evaluating the hypolipidemic and toxicological effects of fermented rice by fungus Monascus ruber. Thirty six male rabbits of New Zealand White strain were used, with hyperlipidemia induced by 1% cholesterol administered in the animals feed, together with the fermented rice that was dryed and triturated and added in the concentrations of 1, 5 and 10%. It was verified an increase in the concentrations of proteins, fat and reduction in the carbohydrates concentration. The rice fermented in the concentration of 10% was more effective in the control of the hyperlipidemia, lowering total cholesterol by 37,14%, LDL-c 37,73%, VLDL-c 51,44% and triglycerides 51,44%. The 10% fermented rice promoted an increase of 33,85% on the level of HDL-c. The second assay was accomplished with the purpose of evaluating the sharp toxicological of this product on the levels of creatinine, total proteins, albumin, total bilirubin, direct bilirubin, uric acid, phosphate, iron, chlorine, calcium, glutamil gamma transferase (gama-GT), alanine aminotransferase (GPT), aspartate aminotransferase (GOT) and alkaline fosfatase in the 1 st , 15 th and 30 th days of the experiment. For the constituents any significant variation was not observed. Heart histopathology showed that the addition of fermented rice in the diet of the animals didn't alter the morphology of the its cells. When the rice was added fermented together with the cholesterol, it was verified that that rice reduced the lesions promoted by cholesterol addition. In relation to the liver, due to the inherent characteristics of that organ of the rabbits, the effect of the addition of the fermented rice in the diet of the animals was not conclusive. The fermented rice with Monascus ruber was shown in that study to be an alternative choice in the dietary modulation of blood lipids / Dissertação copiada do Alexandria
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Efeito de formulação fitoterápica contendo Calendula officinalis no metabolismo lipídico em ratos Wistar alimentados com dieta de cafeteria / Herbal formulation containing Calendula officinalis effect on lipid metabolism in Wistar rats fed with cafeteria dietFontes, Gleide Gatti 26 March 2015 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-03T13:41:26Z
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Previous issue date: 2015-03-26 / Calendula officinalis (Asteraceae) é uma planta medicinal popularmente conhecida como malmequer. O extrato de suas flores é fonte de flavonoides, compostos que apresentam propriedades principalmente antioxidantes. Há indícios da atividade hipolipidêmica desta planta na literatura, mas sem estudos de comprovação. Fármacos utilizados atualmente nas dislipidemias apresentam muitos efeitos adversos e alto custo de aquisição, justificando a busca de novos medicamentos dentro deste contexto. O estudo teve como objetivo avaliar o efeito hipolipidêmico de uma formulação fitoterápica contendo extrato de Calendula officinalis, na forma de ensaio biológico, utilizando Rattus norvegicus linhagem Wistar albina alimentados com dieta de cafeteria. O extrato liofilizado da planta foi obtido por processo de maceração com etanol. A partir deste extrato foi realizada a quantificação de flavonoides totais por espectrofotometria (415nm), atividade antioxidante pelo método colorimétrico de redução do ABTS+ (734nm) e o perfil cromatográfico qualitativo através da CLAE. Ratos Wistar com aproximadamente quarenta dias de idade foram divididos em sete grupos de acordo com o tratamento recebido: G1 (Controle basal): Ração comercial; G2: Dieta cafeteria (CAF), sem tratamento; G3: CAF+ Atorvastatina (10 mg/Kg); G4: CAF+ veículo formulação; G5, G6 e G7: CAF+ tratamento com formulação fitoterápica contendo o extrato liofilizado nas doses 50, 100 e 150 mg/Kg respectivamente. O tempo total do experimento foi de setenta e sete dias, sendo doze dias de adaptação, quarenta e cinco dias de indução e vinte dias de tratamento. Foi realizado controle da massa corporal dos animais, assim como do consumo alimentar e os parâmetros bioquímicos séricos foram dosados utilizando-se kits comerciais. Foi realizada também a avaliação histopatológica qualitativa do fígado dos animais, através da coloração com hematoxilina/eosina. Para as análises estatísticas utilizou-se ANOVA com pós-teste de Tukey para múltiplas comparações (p<0.05). O extrato das flores de C. officinalis apresentou teor de flavonoides de 0,42% e no ensaio do ABTS, o extrato apresentou um valor de atividade antioxidante equivalente ao Trolox (TEAC) de 0,011. O perfil cromatográfico qualitativo, através da comparação com padrões, sugeriu a presença dos flavonoides rutina, quercetina e morina. No ensaio biológico, os tratamentos com a formulação contendo o extrato não afetaram estatisticamente os níveis sanguíneos de glicose, colesterol total, triacilgliceróis e VLDL, no entanto impactou positivamente nos níveis de LDL e HDL, bem como na relação LDL/HDL, sendo este um índice de risco cardiovascular mensurado. O tratamento, aparentemente, promoveu a redução da quantidade das gotículas de lipídios no tecido hepático. Concluiu-se que o tratamento com a formulação contendo extrato de C. officinalis, na presente condição experimental, foi eficaz na modulação do perfil lipídico e a planta medicinal estudada apresenta possibilidade de utilização no controle e prevenção das dislipidemias e doenças associadas, podendo atuar positivamente na redução do risco cardiovascular, sendo os resultados obtidos bastante vantajosos. Esta planta medicinal está contida no RENISUS (Relação nacional de plantas medicinais de interesse ao SUS), havendo grande valorização de seu potencial no Brasil. / Calendula officinalis (Asteraceae) is a medicinal plant popularly known as marigold. The extract of its flowers is a source of flavonoids, compounds which have mainly antioxidant properties. There is evidence of hypolipidemic activity of this plant in the literature, but unproven studies. Drugs currently used in dyslipidemia have many adverse effects and high cost, justifying the search for new drugs within this context. The study aimed to evaluate the hypolipidemic effect of a herbal formulation containing Calendula officinalis extract in the form of biological assay using Rattus norvegicus Wistar albino strain fed with cafeteria diet. The lyophilized plant extract is obtained by maceration with ethanol process. From this extract was carried out quantification of total flavonoids by spectrophotometry (415 nm), antioxidant activity by the colorimetric method of reducing the ABTS+ (734nm) and the qualitative chromatographic profile by HPLC. Wistar rats with about forty days of age were divided into seven groups according to the treatment received: G1 (Basal Control): Commercial diet; G2: cafeteria diet (CAF) without treatment; G3: CAF + Atorvastatin (10 mg / kg); G4: CAF + vehicle formulation; G5, G6 and G7: + CAF treatment with the lyophilized formulation containing herbal extract in doses 50, 100 and 150 mg / kg respectively. The total experiment time was seventy-seven days, twelve days of adaptation, forty five days of induction and twenty days of treatment. It was held control of animal body weight, and food consumption and serum biochemical parameters were measured using commercial kits. It also performed a qualitative histopathological evaluation of the liver of animals, by staining with hematoxylin / eosin. For statistical analysis we used ANOVA with Tukey's post-test for multiple comparisons (p <0.05). The extract of C. officinalis flowers presented flavonoid content of 0.42%, and ABTS assay, the extract showed a value of antioxidant activity equivalent to Trolox (TEAC) of 0.011. The qualitative chromatographic profile by comparison with standards, has suggested the presence of flavonoids rutin, quercetin and morin. In biological assay, treatment with the formulation containing the extract does not statistically affect the blood levels of glucose, total cholesterol, triglycerides and VLDL, however positively impacted in LDL and HDL, as well as the LDL / HDL ratio, which is a cardiovascular risk measured. The treatment apparently promoted to reduce the amount of lipid droplets in liver tissue. It was concluded that treatment with the formulation containing C. officinalis extract, in this experimental condition, was effective in modulating the lipid profile and the medicinal plant study presents can be used in the control and prevention of dyslipidemia and related diseases, it can act positively in the reduction of cardiovascular risk and the results obtained very advantageous. This medicinal plant is contained in RENISUS (National List of medicinal plants of interest to SUS), with great appreciation potential in Brazil.
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Extrato foliar de Anonáceas: citotoxicidade, fluxo de íons e marcadores tumorais em células hepatocarcinogênicas / Leaf extract of Annonaceae: citotoxicity, íon flux and tumor markers in hepatic carcinogenic cellsFilardi, Marcelo Augusto 02 July 2014 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-10T11:06:55Z
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Previous issue date: 2014-07-02 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O carcinoma hepatocelular é o mais frequente câncer primário do fígado e já se tornou a quinta neoplasia mais comum no mundo e a segunda causa de óbitos relatados por câncer. Estima-se que 2/3 das neoplasias humanas poderiam ser prevenidos pela modificação do estilo de vida, incluindo a dieta. Estudos farmacológicos intensificaram-se nos últimos anos com plantas da família Annonaceae, cujo interesse científico está nas acetogeninas, uma classe de compostos derivados de ácidos graxos com forte atividade antitumoral. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Infectologia Molecular Animal, do Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, na Universidade Federal de Viçosa, para avaliar in vitro as propriedades antitumorais de extratos foliares de 11 Anonáceas (9 espécies de 4 gêneros). Para isso, células tumorais hepáticas humanas da linhagem HepG2 (ATCC HB-8065 ) foram expostas a três concentrações dos extratos foliares de Anonáceas e do quimioterápico 5- Fluoruracil (5-FLU), em três períodos de tempo (24, 48 e 72 h), com análise espectrofotométrica da viabilidade celular pela metodologia do corante vermelho neutro. Foram conduzidos ensaios para avaliar o efeito dos extratos vegetais e do quimioterápico sobre o fluxo químico celular no meio de cultura durante os cultivos através da análise por Espectrometria de Emissão Atômica de diferentes especies químicas, e sobre o metabolismo e integridade celular, através da análise de marcadores tumorais e intermediários metabólicos. Todos os ensaios induziram à morte celular, com resultados distintos entre plantas da mesma espécie, com até 100% de citotoxicidade, sendo que nove Anonáceas exibiram efeito citotóxico com até 1/8 da concentração daquela utilizada para o quimioterápico 5-FLU. Nenhum dos ensaios com extratos foliares exibiu retomada da proliferação celular após 48 ou 72 h, o que foi verificado para os cultivos com o quimioterápico, clara evidência de quimiorresistência tumoral. O mecanismo de morte celular por apoptose foi confirmado através da citometria de fluxo para dois dos extratos escolhidos, incluindo 5-FLU. Não houve um padrão no efeito dos extratos sobre o fluxo de íons ou dos marcadores tumorais durante os cultivos das células hepatocarcinogênicas, que se mostrou variável dentro da espécie ou entre elas, ou dentro de um mesmo gênero ou entre eles, com interferência na absorção de alguns íons especialmente, Ca, Na, P, S e depleção intracelular total de outros (Se, Zn) para alguns dos tratamentos. Marcadores bioquímicos como aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e lactato desidrogenase (LDH) tiveram seus níveis elevados para alguns dos extratos utilizados, incluindo 5-FLU, resultado coincidente com a redução na absorção da glicose pelos hepatócitos tumorais, indícios da alteração no metabolismo e integridade celular. / The hepatocellular carcinoma is the most common primary liver cancer and has become the fifth most common cancer worldwide and the second leading cause of cancer deaths reported. It is estimated that two thirds of human cancers could be prevented by changes in lifestyle, including diet. Pharmacological studies have intensified in recent years with the Annonaceae plant family, whose scientific interest is in the acetogenins, a class of compounds derived from fatty acids with strong antitumor activity. The experiments were conducted at the Laboratory of Molecular Animal Infectious Diseases, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Federal University of Viçosa, to evaluate the in vitro antitumor properties of leaf extracts of 11 annonaceae (9 species of 4 genera). For this, human liver cancer cells HepG2 line (ATCC HB-8065 ) were exposed to three different concentrations of leaf extracts of Annonaceae and of the chemotherapeutic 5-fluorouracil (5-flu) in three time periods (24, 48 and 72 h), with spectrophotometric analysis of cell viability by the neutral red dye method. Assays were conducted to evaluate the effect of plant extracts and chemotherapeutic chemical flow cell on the culture medium during the cultivation by atomic emission spectrometry analysis of different chemical species, and the cellular integrity and metabolism, by analysis of tumor markers and metabolic intermediates. All assays induced cell death, with results between different plants of the same species, with up to 100% cytotoxicity, nine annonacea exhibited cytotoxic effect up to one eighth of the concentration of that used for the chemotherapeutic 5-flu. None of the trials with leaf extracts exhibited recovery of cell proliferation after 48 or 72 h, which was observed in cultures with chemotherapy, clear evidence of tumor chemoresistance. The mechanism of cell death by apoptosis was confirmed by flow cytometry for two extracts selected, including 5-flu. There was no pattern in the effect of the extracts on the flow of ions or of tumor markers during the cultivation of hepatic ocarcinogenic cells, which was variable within species or between or within the same genus or between them, interfering with the absorption of especially some ions, Ca, Na, P, S, and total depletion of other intracellular (Se, Zn) for some treatments. Biochemical markers such as aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and lactate dehydrogenase (LDH) had their elevated levels for some of the extracts used, including 5-flu coincident result with a reduction in glucose uptake by tumor hepatocytes, evidence of changes in metabolism and cellular integrity.
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Determinação da atividade citotóxica do extrato vegetal de Croton urucurana Baill em linhagens de células tumorais / Ascertainment of the cytotoxic activity of the Croton urucurana Baill vegetal extract in tumour cells lineageMonteiro, Luana Pereira 15 July 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-07-15 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O câncer é uma doença caracterizada pelo aumento descontrolado da proliferação celular. Em geral ocorrem paralelamente ao aumento do crescimento e perda da diferenciação celular. Assim as células cancerígenas perdem suas características originais de diferenciação e se tornam atípicas. As leucemias são neoplasias malignas que acometem as células do sangue e tem origem na medula óssea. São cânceres de grande incidência e de difícil tratamento, havendo, portanto, uma constante procura por terapias mais eficientes. O presente trabalho investigou a ação citotóxica do extrato hidroalcóolico de Croton urucurana em células leucêmicas humanas U937 e THP-1. As linhagens de células U937, THP-1 foram plaqueadas em volume de 100 μL/poço (1x10 6 cels/mL) em placas de 96 poços, tratadas com extrato nas concentrações finais de 50 μM, 100 μM, 200 μM e 400 μM e 800 μM para os testes de viabilidade celular com MTT (-3-(4,5-dimetil-2-tiazol) 2,5-difenil-2-H-brometo de tetrazom). Após 48h a viabilidade foi avaliada pelo MTT e o sobrenadante utilizado para dosagem da enzima Lactato Desidrogenase (LDH). Microscopia de fluorescência foi usada para avaliar a apoptose. O extrato foi capaz de induzir apoptose em ambas as linhagens de células testadas nas concentrações 400 e 800 μg/mL (p≤0,05). O aumento percentual da morte celular por apoptose foi associado a alterações no potencial de membrana mitocondrial sugerindo o envolvimento da via intrínseca de ativação da apoptose. / Cancer is a disease characterized by the uncontrolled rise of in the cellular proliferation. In general, it occurs in parallel to the increased growth and loss of cellular differentiation. Thus, the cancer cells lose their original properties of this cellular differentiation and become atypical. The leukaemia is a malign bone neoplasia, which affects the blood cells and have its source in the bone marrow. They are called cancers with great incidence and tough treatment, being, therefore a constant search for more efficient therapies.Thepresent study investigated the toxic action of the hydro alcoholic extract of the Croton urucuranain leukaemic cells U937, THP-1 which were plated in volume of 100 μL/pool (1x106 cels/mL) in plaques of 96 pools, treated in extracts in the final concentrations of 50 μM, 100 μM, 200 μM, 400 μM and 800 μM for the tests of cellular viability with MTT (-3- (4,5-dimethyl-2-thyazole) 2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide). After 48h the viability was tested by the MTT and the supernatant used to dosage the lactate dehydrogenase (LDH). The fluorescent microscopy was used to evaluate the apoptosis. The extract was capable to induce the apoptosis in both lineages of the tested cells, in the concentrations of 400 and 800 μg/mL (p≤0,05). The percentage increase of the cellular death by apoptosis was associated with alterations in the mitochondrial membrane potential, which suggests an involvement in the intrinsic activation path of the apoptosis.
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Efeito do kefir de água no estresse oxidativo, na inflamação e na esteatose hepática em ratos wistar / Effect of water kefir in oxidative stress, inflammation and hepatic steatosis in wistar ratsSilveira, Carlos Mário Martins 28 November 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-11-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A obesidade é uma doença multifatorial, e o acúmulo excessivo de gordura no tecido adiposo está na gênese de distúrbios metabólicos e inflamatórios. O kefir de água é uma bebida fermentada que contém micro-organismos com potencial ação probiótica. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do kefir de água no metabolismo lipídico e na inflamação, no fígado e no tecido adiposo, em ratos alimentados com dieta de cafeteria. O experimento teve duração de 15 semanas e os animais foram divididos em seis grupos: G1-Dieta comercial; G2–Dieta comercial e 1 mL de kefir de água; G3–Dieta de cafeteria; G4–Dieta de cafeteria e 1 mL de kefir de água administrado antes da indução da obesidade; G5–Dieta de cafeteria e 1 mL de kefir de água administrado após a indução da obesidade e G6–Dieta de cafeteria e 2 mL de kefir de água administrado após a indução da obesidade. O kefir de água foi administrado 1 vez ao dia por gavagem. Ao final do experimento foram coletados o sangue, o fígado e o tecido adiposo. Analisou- se enzimas antioxidantes e da peroxidação lipídica no plasma, a expressão de genes envolvidos na inflamação e no metabolismo lipídico no fígado e no tecido adiposo, os teores de lipídeos no fígado e a histomorfometria no fígado e no tecido adiposo. O kefir de água aumentou a atividade da glutationa S-transferase (GST) e reduziu a concentração de malondialdeído (MDA) no plasma, quando administrado após a indução da obesidade, na dose de 2 mL, reduziu a expressão de TNFα no fígado e no tecido adiposo nos ratos obesos, aumentou a expressão dos genes envolvidos na oxidação de ácidos graxos hepáticos ADIPO R2, PPARα e CPT 1A, reduziu o teor de triacilglicerol e o percentual de gordura hepática quando administrado antes da indução da obesidade, e os teores de colesterol em todos os ratos obesos. Além disso, o kefir de água foi capaz de reduzir a expressão do gene adipogênico Fas e aumentar as expressões de LpL e adiponectina no tecido adiposo. Estes resultados demonstram potenciais efeitos benéficos do kefir de água nas complicações metabólicas relacionadas à obesidade e esteatose hepática. / Obesity is a multifactorial disease, and the excessive fat accumulation in adipose tissue is at the genesis of metabolic and inflammatory disorders. Water kefir is a fermented beverage that contains microorganisms with potential probiotic action. The objective of this study was to evaluate the effect of water kefir on lipid metabolism and on inflammation, liver and adipose tissue in rats fed by a cafeteria diet. The experiment lasted 15 weeks and the animals were divided into six groups: G1 - commercial diet; G2 - commercial diet and 1 mL water kefir; G3 - Cafeteria diet; G4 - Cafeteria diet and 1 mL water kefir administered before the induction of obesity; G5 - Cafeteria diet and 1 mL water kefir administered after the induction of obesity and G6 - Cafeteria diet and 2 mL water kefir administered after the induction of obesity. Weight and food consumption were monitored weekly. Water kefir was given once a day by gavage. At the end of the experiment, the blood, liver and adipose tissue were collected. Analyses of antioxidant enzymes and lipid peroxidation in plasma, expression of genes involved in inflammation and lipid metabolism in liver and adipose tissue, lipid levels in the liver and Histomorphometry in liver and adipose tissue were performed. Water kefir increased the activity of the glutathione S-transferase (GST) enzyme and reduced the concentration of malondialdehyde (MDA) in plasma, when administered after the induction of obesity at the dose of 2 mL, reduced TNFα expression in liver and adipose tissue in all groups of obese rats increased the expression of the genes involved in the oxidation of fatty liver fatty acids ADIPO R2, PPAR and CPT 1A, reduced the triacylglycerol ester and the percentage of hepatic fat when administered before the induction of obesity, and the cholesterol levels in all groups of obese rats. In addition, water kefir could reduce the expression of the adipogenic Fas gene and increase the expressions of LpL and adiponectin in adipose tissue. These results demonstrate potential beneficial effects of water kefir on metabolic complications related to adipogenesis and inflammation in obesity and hepatic steatosis.
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Atividade antimelanótica de compostos fenólicos e extratos hidroalcoólicos de Inga subnuda e Rollinia dolabripetala e ação antibacteriana e antioxidante / Antimelanomic activity of phenolic compounds and hydroalcoolic extracts of Inga subnuda and Rollinia dolabripetala and antioxidant and antibacterial activityCampos, Mateus Gandra 31 July 2013 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-06T13:56:13Z
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Previous issue date: 2013-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diante do contínuo aumento mundial de doenças como o câncer do tipo melanoma e infecções causadas por Staphylococus aureus resistentes à meticilina, a pesquisa por novos fármacos tem ganhado importância cada vez maior no mundo científico. O Brasil é um dos países com maior biodiversidade vegetal no mundo. Entretanto, muito pouco ainda se sabe sobre as propriedades terapêuticas desse patrimônio vegetal. O objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, o potencial citotóxico dos extratos hidroalcoólcios de Inga subnuda subsp. Luschnathiana (Benth.) T.D.Penn. (ingá) e Rollinia dolabripetala (Raddi) R.E. Fr. (araticum, marolo), dos flavonóides naringina e morina e de xantonas, sobre o câncer de pele do tipo melanoma, realizando um comparativo com a atividade do fármaco comercial 5-Fluoracil (5-FU). Os extratos também tiveram sua eficácia testada, in vitro, quanto ao seu potencial antioxidativo e potencial bactericida principalmente em cepas Gram-positivas. A avaliação da citotoxicidade foi baseada na linhagem B16F10 submetida ao ensaio colorimétrico do MTT. O extrato de I. subnuda apresentou ação bactericida contra todas as cepas bacterianas testadas, enquanto o extrato de R. dolabripetala apresentou atividade apenas contra S. aureus ATCC 29213. O extrato de I. subnuda desempenhou atividade antioxidante estatísticamente maior (p < 0,05) que os extratos de Gingko biloba (controle) e R. dolabripetala, tanto no teste do DPPH quanto no de peroxidação lipídica. No teste de citotoxicidade, a naringina foi considerada uma substância inativa para este tipo de câncerpatologia e a morina promoveu maior citotoxicidade no período de 72 horas (98,48% ± 0,71) com diferença significativa em relação ao controle (α < 0,05). Contudo, assim como a 1,7- dihidroxixantona, o potencial uso terapêutico da morina dificilmente será considerado devido a alta concentração necessária para desempenhar atividade citotóxica relevante (1,25x103 μg/mL). Assim, o extrato de ingá foi considerado o mais efetivo por, no tempo de 24, 48 e 72 horas, desencadear mais de 80% de citotoxicidade com a menor concentração (78,13 μg/mL). Os resultados indicam que ambos os extratos apresentam atividade antioxidante, antibacteriana e citotóxica, mas estudos posteriores são necessários para uma melhor compreensão das promissoras atividades biológicas dos extratos. / The increasing world-wide rates of deseases such as melanoma skin cancer and infections caused by methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus has historically attracted the attention of researchers about the development of new drugs. Brazil has one of the world's greatest biodiversity; nevertheless, the majority of plants with therapeutic potential still unclear. The aim of present study was to evaluate the in vitro antiproliferative activity of naringin, morin, xanthones and hydroalcoholic extracts of Inga subnuda subsp. Luschnathiana (Benth.) T.D.Penn. and Rollinia dolabripetala (Raddi) R.E. Fr., compared of Fluorouracil (5-FU). Both extracts were evalueted about their antioxidant capability and about their antimicrobial activity mainly against Gram- positive bacterias. The cytotoxicity test methodology was based on the MTT colorimetric assay and was performed on B16-F10 melanoma cells. The I. subnuda extract was effective against the three strains of bacteria, whereas the R. dolabripetala extract was effective just against S. aureus ATCC 29213. The I. subnuda extract performed a statistical higher antioxidant activity (p < 0,05) than the Gingko biloba (control) and R. dolabripetala extracts in both antioxidative tests. The naringin was considered as inactive substance against this cancer cell and the morin bring about the higher citotoxity in 72 hours (98,48% ± 0,71) with statistically significant difference compared to the control group (α < 0,05). On the other hand, as 1,7-dihydroxyxanthone, the therapeutic use of the morin for this porpose could be disregarded due the high concentration required for relevant citotoxity activity (1,25x10 3 μg/mL of both). Thus, the I. subnuda extract was regarded as the most effective tested substance by his up to 80% citotoxity capability under all treatment periodo (24, 48, 72 hours). Moreover, the citotoxity test of I. subnuda extract required the lowest concentration for a effective result (78,13 μg/mL). The experiments reported tha both extracts play a role as an antioxidant, an antibacterial and a cytotoxic agent. However, further studies are required for a better understanding about their biological activities.
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Potencial do pseudocaule de bananeira (cultivar Prata anã) para a produção de etanol de segunda geração / Potential use of banana pseudostem for second-generation ethanol productionSilva, Isadora Ferreira da 21 November 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-11-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nas últimas décadas, tem-se observado um crescente interesse nas biomassas residuais de composição lignocelulósica para produção de energia, destacando-se o etanol de segunda geração. Entre a biomassa lignocelulósica disponível se encontra os resíduos provenientes da bananicultura, cultura importante nas regiões tropicais e subtropicais. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou estudar o potencial do pseudocaule de bananeira (Prata Anã) para a produção do etanol de segunda geração. No primeiro capítulo do trabalho foram realizados pré-tratamentos hidrotérmico e alcalino utilizando micro-ondas. O pré-tratamento hidrotérmico foi realizado sob diferentes temperaturas (130 ° a 210 ° O pré-tratamento alcalino C C). foi realizado de acordo com um delineamento composto central, cujas variáveis estudadas foram: temperatura (190 ° - 210 ° e concentração de hidróxido de C C) sódio (0,5 % - 1,5 %, m/v). A eficiência dos pré-tratamentos foi verificada através da comparação de análises químicas dos materiais in natura e pré-tratados e da conversão de celulose em glicose por hidrólise enzimática, além de sacarificação e fermentação simultânea de alguns pré-tratados. As variáveis temperatura e concentração de NaOH apresentaram efeitos lineares significativos. Como melhores resultados dessa etapa, foram obtidos 77 % de conversão enzimática para o pré- tratado hidrotérmico (210 ° 40 minutos), 78,3 % para o alcalino (190 ° 0,5 % C, C, NaOH) e 56 % para material não tratado. Em relação aos resultados de SSF, foram obtidos rendimentos de etanol de 86,5 % para pré-tratado hidrotérmico, 85,3 % para alcalino e 70,5 % para o material não tratado. Esses ensaios de hidrólise enzimática e SSF foram realizadas em tubos de 20 mL, utilizando 2,5 % (p/v) de concentração de sólidos, 50 FPU/g de Cellic Ctec 2, Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826, por 120 dias sob 120 rpm de agitação, sendo que a hidrólise foi realizada a 25 ° e SSF C à 37 ° No segundo capítulo foi realizado um pré-tratamento hidrotérmico utilizando C. reator Parr de 18 litros, sendo as condições determinadas por delineamento composto central: temperatura (170 ° - 210 ° tempo de reação (10 min - 20 min) C C), e razão sólido/líquido (1/10 - 1/15). Os efeitos lineares das variáveis foram significativas, além do efeito quadrático da variável razão sólido/líquido. A hidrólise enzimática foi realizada à 50 ° por 72 horas, utilizando enzima Cellic Ctec (5,4 %, C, p/p) com 8 % (p/v) de sólidos. O pré-tratamento hidrotérmico em reator Parr mostrou-se eficiente no aumento do rendimento de glicose após hidrólise enzimática, alcançando rendimento máximo de glicose de 98 % na condição do ensaio 6 (210 ° 10 minutos, S/L de 1/15). / In recent decades, there has been a growing interest in the residual biomass of lignocellulosic material for energy production, especially second-generation ethanol. Among the available lignocellulosic biomass are residues from banana cultivation, an important crop in tropical and subtropical regions. In this context, the present work aimed to study the production of second-generation ethanol using banana pseudostem as raw material. In the first chapter of this work, hydrothermal and alkaline pretreatments were carried out for 10 minutes of reaction time using a microwave. The hydrothermal pretreatment was performed under different temperatures (130 ° to 210 ° C C). The alkaline pre-treatment was performed according to a central composite design, of which the studied variables were: temperature (190 ° - 210 ° and sodium hydroxide concentration (0.5 % - 1.5 %, C C) m/v). The efficiency of the pretreatments was verified by comparing chemical analyzes of the in natura and pretreated materials and their conversion of cellulose to glucose after enzymatic hydrolysis and their ethanol yield after simultaneous saccharification and fermentation. The variables NaOH concentration and temperature showed significant linear effects. As best results of this step, were obtained 77 % of enzymatic conversion using hydrothermal pretreated (210 ° 40 C, minutes), 78.3 % using alkaline pretreated (190 ° 0.5 % NaOH) and 56 % using the C, untreated material. Regarding SSF results, 86.5 % of ethanol yields were obtained using hydrothermal pretreated, 85.3 % using alkaline and 70.5 % using untreated material. These enzyme hydrolysis and SSF assays were performed in 20 mL tubes using 2.5 % (w/v) solid concentration, 50 FPU/g Cellic Ctec 2 and Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826 at 25 ° for 120 days under 120 rpm of stirring. The C enzymatic hydrolysis was performed at 25 ° and SSF at 37 °C. In the second C chapter, hydrothermal pretreatment was performed using 18 liters Parr reactor with the conditions determined by central composite design: temperature (170 ° - 210 C ° C), reaction time (10 min - 20 min) and solid/liquid ratio (1/10 - 1/15). The linear effects of the variables were significant, in addition to the quadratic effect of the variable solid/liquid ratio. The enzymatic hydrolysis was performed at 50 °C for 72 hours using Cellic Ctec enzyme (5.4 %, w/w) and 8 % (w/v) solid. Hydrothermal pre- treatment in Parr reactor proved to be efficient in increasing glucose yield after enzymatic hydrolysis, achieving maximum glucose yield of 98 % under assay 6 condition (210 ° 10 minutes, 1/15 S/L).
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