Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Neurociências, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 271857.pdf: 6399717 bytes, checksum: be2ed821b753eb2b0c221d6e1b89c80c (MD5) / Avaliação do efeito neuroprotetor de guanosina-5'-monofosfato (GMP) e guanosina frente à excitotoxicidade induzida por glutamato ou N-metil-D-aspartato (NMDA) e do possível efeito tóxico de altas concentrações de GMP em fatias de hipocampo de ratos. Investigação do efeito neuroprotetor da guanosina frente a um modelo de estresse oxidativo mitocondrial e frente ao peptídeo beta-amilóide em cultura de células de neuroblastoma humano (SHSY-5Y).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:45:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013Bitstream added on 2014-09-24T20:22:44Z : No. of bitstreams: 1 318939.pdf: 1271951 bytes, checksum: ed5d9989c7ba6d32a2bd129ebd586437 (MD5) / Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos presentes em glicoconjugados podendo regular diversas funções celulares em eventos fisiológicos e patológicos. No sistema nervoso central, galectina-1 uma lectina com afinidade por ß-galactosídeos, pode mediar diversas funções neurais importantes e produzir neuroproteção. Lectinas isoladas de plantas tem sido aplicadas como ferramentas no estudo da função neural. VML é uma lectina isolada das sementes de Vatairea macrocarpa, que similar a galectina-1 possui afinidade por galactose. Contudo o efeito de VML sobre o SNC é desconhecido. O objetivo desse estudo foi verificar se VML é capaz de alterar a função neural, modulando parâmetros comportamentais, bem como a expressão de proteínas gliais e pró-inflamatórias em camundongos. VML administrada por via intracerebroventricular (i.c.v) aumentou o tempo de imobilidade de camundongos adultos no teste do nado forçado (TNF), 1 e 24 h após a administração da lectina. Este efeito foi dependente das interações entre a lectina com carboidratos e da estrutura tridimensional nativa de VML. VML aumentou o conteúdo de COX-2, GFAP e S100B no hipocampo dos animais 1 h após a administração da lectina. Contudo, essas alterações não foram encontradas 24 h após. Entretanto, neste período tardio foi observado um aumento na fosforilação de p38MAPK. A fosforilação de ERK1/2, JNK1/2/3, AKT e GSK-3ß no hipocampo não foram alteradas 1, 6 ou 24 h após a administração da lectina. Desta forma, pode-se verificar que VML é capaz de induzir um comportamento do tipo depressivo e aumentar a expressão de proteínas relacionadas à inflamação. Em conjunto, esses resultados indicam efeitos potencialmente tóxicos de VML no hipocampo de camundongos, aparentemente envolvendo respostas neuroinflamatórias. Esses achados comparados às ações neuroprotetoras descritas para galectina-1, sugerem um papel duplo de lectinas com afinidade por galactose na função neural <br> / Abstract: Lectins are carbohydrate-binding proteins that can recognize glycoconjugates, regulating many cell functions, and physiopathological events. In the central nervous system (CNS) galectin-1, a ß-galactosidebinding lectin, can mediate many neural functions and induce neuroprotection. Lectins isolated from plants have been applied as a tool to study neural function. VML is a galactose-binding lectin isolated from Vaitairea macrocarpa seeds that have ß-galactose-binding activity like galecin-1. However, VML effects on the CNS are largely unknown. The aim of this study was to verify that VML is able to alter the neural function, evaluating behavior parameters and glial and inflammatory proteins in adult mice hippocampus. VML administered by intracerebrovetricular route induces an increase in the immobility time in the Forced-Swimming-Test 1 and 24 h after injection of lectin and that effect was dependent on protein-carbohidrate interaction and native VML tridimensional structure. VML induces the enhancement of COX2, GFAP expression in mice hippocampus 1 h after i.c.v administration. However, 24 h after, no changes were found after VML i.c.v. administration. By the way, in the same time was observed an increase in p38MAPK phosphorylation. The ERK1/2, JNK1/2/3, AKT and GSK-3ß phosphorylation in hippocampus were no change after lectin administration. These results reported here demonstrated that the lectin from V. macrocarpa seeds was able to induce a depressive-like behavior and increase inflammatory proteins expression. VML may exert some neurotoxic effects in the mice hippocampus and appears to be involved with neuroinflammatory responses. These findings compared the neuroprotective actions described for galectin-1, suggest a dual role for ß-galactoside-binding lectins in neural function.

Memoria para optar al titulo de Bioquímico / La nanotecnología, en la biomedicina, trabaja desarrollando herramientas, tanto de diagnóstico, como estrategias terapéuticas, menos invasivas y más eficientes que las actualmente en uso. Entre estas herramientas, se encuentran el uso de las nanopartículas metálicas (NPM), las cuales, siendo tan pequeñas tienen la propiedad de poder difundir a través de barreras biológicas, siendo capaces de llegar al sitio de interés terapéutico. Las nanopartículas de oro (AuNP) poseen potenciales aplicaciones en el campo de la biomedicina, siendo una de ellas el diagnóstico y la terapia de la enfermedad de Alzheimer (EA). Recientemente, en nuestro laboratorio se demostró que es posible producir la desagregación de agregados tóxicos (AT) de la proteína β-amiloide (Aβ) involucrada en la EA mediante el uso de AuNP y la aplicación de campos magnéticos oscilantes. Para unir las AuNP a los AT de Aβ, las mismas se conjugaron al péptido CLPFFD-NH2, que presenta afinidad por Aβ, obteniendo los conjugados AuNP-CLPFFD-NH2 (AuNP-Pep) . En este trabajo de memoria se evaluó su neurotoxicidad. Para ello se realizaron ensayos de viabilidad, frente a cultivos de neuronas hipocampales extraídas de embriones de rata (E18) y Neuroblastoma SH-SY5Y. Para el caso de las AuNP se encontró una leve disminución de la viabilidad respecto de los controles. Contrariamente, para AuNP-Pep, existe un aumento de la viabilidad celular que implica neuroprotección. Asimismo se evaluaron los efectos de los tratamientos en los mecanismos de muerte celular. Por otra parte, se determinaron los niveles de ROS producidos por las AuNP y las AuNP-Pep observándose que estas últimas presentan a tiempos tempranos de incubación un aumento de estas especies. También se estudió la producción de proteínas, en cultivos de neuronas, y se encontró un aumento en ciertas proteínas que, darían cuenta, de un efecto de “preacondicionamiento”, que contribuye a activar mecanismos de defensa que convierten a las neuronas en más resistentes / The nanotecnology, in biomedicine, works in pursuit to develop diagnosis as therapeutic tools, with strategies less invasive and more efficient than nowadays in use. We can find the use of the metallic nanoparticles (MNP), which, being so small have the property of being able to spread across biological barriers, being capable of coming to the place of therapeutic interest. The gold nanoparticles (AuNP) possess potential applications in the field of biomedicine, being one of them, the diagnosis and the therapy of Alzheimer's disease (AD). Recently, in our laboratory there was demonstrated that it is possible to produce the disaggregation of toxic attachés (TA) of the protein β-amyloid (Aβ) involved in the AD using AuNP and the application of magnetic oscillating fields. To join the AuNP to this TA of Aβ, the same ones were conjugated to the peptide CLPFFD-NH2, which presents affinity for Aβ. Obtaining the conjugate AuNP-CLPFFD-NH2 (AuNP-Pep). In this report, there neurotoxicity was evaluated. For this assays of viability were realized, cultures of hippocampal neurons extracted from embryos of mice (E18) and Neuroblastome SH-SY5Y. For the case of the AuNP a slight decrease of the viability was reported, respect of the controls. Opposited of that, for AuNP-Pep, there exists an increase of the cellular viability that it implies neuroprotección. Likewise the effects of this treatments were evaluated in the mechanisms of cellular death. On the other hand, ROS levels produced by the AuNP and the AuNP-Pep were determined, being observed an increase of these species at early times of incubation Also the synthesis of proteins, in cultures of neurons, was studied and one found an increase in certain proteins that, they would realize, of an effect of "preaconditioning", that helps to activate mechanisms of defence that it will make the neurons in more resistant to injurys

A exposição a agentes químicos neurotóxicos pode concorrer para o desenvolvimento ou potencialização de dificuldades de aprendizagem. A investigação dos níveis de concentração de metais pesados em escolares com tais dificuldades pode auxiliar no planejamento terapêutico, bem como orientar órgãos de saúde competentes para promoção de prevenção e de desintoxicação. Foi realizado um estudo com o objetivo de verificar as concentrações remotas de chumbo em escolares com dificuldades de aprendizagem, a fim de avaliar a prevalência de exposição precoce a este agente, bem como correlacionar os níveis encontrados com resultados de desempenhos em avaliações de processamento fonológico, leitura, escrita e aritmética, além de descrever estatisticamente a amostra quanto a aspectos relevantes do histórico clínico e identificar os bairros de origem ao nascimento. Participaram escolares na faixa etária de 9 a 14 anos, regularmente matriculados no Ensino Básico de instituições públicas ou privadas do município de Bauru (SP) e região, em atendimento na Clínica de Linguagem Escrita da FOB-USP. Foram utilizadas amostras de esmalte dentário superficial como biomarcador de exposição remota ao chumbo. Foram realizadas análises por espectrometria de absorção atômica de forno de grafite (GF AAS) para determinação do chumbo e espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES) para determinação do fósforo, necessário para o cálculo da massa de esmalte. O estudo teve 17 participantes. Os resultados indicam a prevalência de 100% de exposição precoce ao chumbo, média da concentração de 46,56 g Pb/g esmalte, DP = 47,09. Não houve correlações estatisticamente significativas com os desempenhos avaliados. Quanto ao perfil amostral, as meninas representam 17,6% e os meninos 82,4%. Um total de 35,3% dos participantes sofreram intercorrências gestacionais ou neonatais, 23,5% tem QI limítrofe ou rebaixado, 94,1% tem histórico de distúrbios de linguagem oral, 41,2% alterações psicomotoras, 5,9% diagnosticados com TDAH. A análise descritiva qualitativa dos bairros de origem revela que a distribuição dos mesmos está dispersa pelo município, além de participantes de outras localidades da região. / Exposure to neurotoxic chemical agents may contribute to the development or enhancement of learning disabilities. The investigation of concentration levels of heavy metals in schoolchildren with such difficulties can aid in therapeutic planning as well as guide competent health agencies to promote prevention and detoxification. A study was carried out with the objective of verifying the remote concentrations of lead in students with learning disabilities in order to evaluate the prevalence of early exposure to this agent, as well as to correlate the levels found with results of performances in phonological processing evaluations, reading, writing and arithmetic, in addition to statistically describing the sample regarding relevant aspects of clinical history and identifying origin neighborhoods at birth. Participants were students aged 9 to 14 years, regularly enrolled in Basic Education of public or private institutions of the municipality of Bauru (SP) and region, attending the Clinic of Written Language of FOB-USP. Surface dental enamel samples were used as a biomarker for remote lead exposure. Analyzes were performed by atomic absorption spectrometry of graphite furnace (GF AAS) for determination of lead and inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP OES) for determination of phosphorus, necessary for the calculation of enamel mass. The study had 17 participants. The results indicate the prevalence of 100% early exposure to lead, mean concentration of 46.56 g Pb / g enamel, SD = 47.09. There were no statistically significant correlations with the evaluated performances. The sample profile reveals that girls represent 17.6% and boys 82.4%. A total of 35.3% of the participants had gestational or neonatal intercurrences, 23.5% had borderline or reduced IQ, 94.1% had a history of oral language disorders, 41.2% had psychomotor disturbances, 5.9% had ADHD. The qualitative descriptive analysis of the origin neighborhoods reveals that its distribution is dispersed by the municipality, besides participants of other localities of the region.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T19:18:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T04:26:55Z : No. of bitstreams: 1 139357.pdf: 1947063 bytes, checksum: c79d4ff869eafd074d0303fb2c2fb61c (MD5)

O desenvolvimento de um equipamento de eletroforese capilar com detecção condutométrica sem contato e hifenizado a um sistema de amostragem de gases é apresentado. Ele foi construído a partir de chapas de poli(metacrilato de metila) por ablação a laser de CO2, mesclando métodos convencionais com os de microfabricação. Este protótipo traz como inovações: (1) a refrigeração em estado sólido da coluna capilar, (2) a inclusão de eletrólise separada em microdispositivos e (3) a montagem de uma válvula embutida no microchip, baseada em servomotor. O equipamento é portátil (31 × 29 × 25 cm) e projetado para ser utilizado em bancada ou embarcado num robô para análises remotas de agentes neurotóxicos e outros gases ionizáveis em contato com a fase aquosa. O sistema de termostatização permitiu o controle da temperatura interna do capilar de sílica fundida entre 12 e 50 °C utilizando uma elemento Peltier a a partir da temperatura ambiente de 21 °C. A amostragem de gases é feita utilizando-se uma membrana tubular porosa acoplada ao sistema microfluídico. Ela possui 10 cm de comprimento com 300 micrometros de diâmetro externo e 3,1 microlitros de volume interno. Como prova de conceito, foram feitas amostragens de ar contendo ácidos fórmico, acético e propiônico, separação por eletroforese capilar dos respectivos ânions e detecção com relação sinal-ruído de 414, 150 e 115, respectivamente. A amostragem foi realizada por 30 s e a injeção eletrocinética, por 2 s a 1 kV. A corrida eletroforética foi concluída em 4 min. / The development of a capillary electrophoresis equipment with contactless conductivity detection coupled to a gas sampling system is described. It was constructed from poly(methyl methacrylate) by carbon dioxide laser ablation, using conventional methods and microfabrication. The innovations are: (1) solid-state cooling system of the silica capillary, (2) the inclusion of separate electrolysis on a microdevices, and (3) a valve assembly embedded in the microchip based servomotor. It is portable (31 × 29 × 25 cm) and designed to be used on a workbench or embedded in a robot for remote analysis of nerve agents and other ionized gases. The thermostating system allowed the temperature control of the fused silica capillary between 12 and 50 °C using a Peltier chip from ambient temperature of 21°C. Gas sampling is performed using a tubular porous membrane coupled to the microfluidic system. It is 10 cm long with outer diameter of 300 micrometers and 3.1 microliters of internal volume. Air containing formic, acetic, and propionic acids were sampled, and the corresponding anions were separated and detected in the equipment as a proof of concept. The signal-to-noise ratio were, respectively, 414, 150, and 115, after sampling by 30 s and electrokinetic injection by 2 s at 1 kV. The electrophoretic run was accomplished in 4 min.

O desenvolvimento de um equipamento de eletroforese capilar com detecção condutométrica sem contato e hifenizado a um sistema de amostragem de gases é apresentado. Ele foi construído a partir de chapas de poli(metacrilato de metila) por ablação a laser de CO2, mesclando métodos convencionais com os de microfabricação. Este protótipo traz como inovações: (1) a refrigeração em estado sólido da coluna capilar, (2) a inclusão de eletrólise separada em microdispositivos e (3) a montagem de uma válvula embutida no microchip, baseada em servomotor. O equipamento é portátil (31 × 29 × 25 cm) e projetado para ser utilizado em bancada ou embarcado num robô para análises remotas de agentes neurotóxicos e outros gases ionizáveis em contato com a fase aquosa. O sistema de termostatização permitiu o controle da temperatura interna do capilar de sílica fundida entre 12 e 50 °C utilizando uma elemento Peltier a a partir da temperatura ambiente de 21 °C. A amostragem de gases é feita utilizando-se uma membrana tubular porosa acoplada ao sistema microfluídico. Ela possui 10 cm de comprimento com 300 micrometros de diâmetro externo e 3,1 microlitros de volume interno. Como prova de conceito, foram feitas amostragens de ar contendo ácidos fórmico, acético e propiônico, separação por eletroforese capilar dos respectivos ânions e detecção com relação sinal-ruído de 414, 150 e 115, respectivamente. A amostragem foi realizada por 30 s e a injeção eletrocinética, por 2 s a 1 kV. A corrida eletroforética foi concluída em 4 min. / The development of a capillary electrophoresis equipment with contactless conductivity detection coupled to a gas sampling system is described. It was constructed from poly(methyl methacrylate) by carbon dioxide laser ablation, using conventional methods and microfabrication. The innovations are: (1) solid-state cooling system of the silica capillary, (2) the inclusion of separate electrolysis on a microdevices, and (3) a valve assembly embedded in the microchip based servomotor. It is portable (31 × 29 × 25 cm) and designed to be used on a workbench or embedded in a robot for remote analysis of nerve agents and other ionized gases. The thermostating system allowed the temperature control of the fused silica capillary between 12 and 50 °C using a Peltier chip from ambient temperature of 21°C. Gas sampling is performed using a tubular porous membrane coupled to the microfluidic system. It is 10 cm long with outer diameter of 300 micrometers and 3.1 microliters of internal volume. Air containing formic, acetic, and propionic acids were sampled, and the corresponding anions were separated and detected in the equipment as a proof of concept. The signal-to-noise ratio were, respectively, 414, 150, and 115, after sampling by 30 s and electrokinetic injection by 2 s at 1 kV. The electrophoretic run was accomplished in 4 min.