Neste trabalho foram estudadas duas abordagens para a obtenção de novos metabólitos secundários a partir de fungos. Na primeira, o ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA) e cinco análogos foram sintetizados. Sua atividade como modificadores epigenéticos foi avaliada em oito linhagens fúngicas do ambiente marinho. Os fungos Penicillium sp. e Acremonium sp. apresentaram modificações no seu perfil metabolómico quando foram crescidos em pequena escala em presença do derivado 4F-SAHA, enquanto Microphaeropsis sp. apresentou modificação em presença do 3AM-SAHA. O fungo P. decaturense foi crescido em maior escala e os compostos de interesse foram isolados. Na segunda abordagem, uma nova estratégia de extração utilizando mistura de resinas XAD 2-4-7 permitiu a extração e posterior isolamento de seis novos alcaloides peptídicos (72-77) e dois peptídeos (78-79) a partir da fração aquosa do meio de cultivo do fungo antártico Penicillium solitum IS1-A. Utilizando a mesma metodologia, o metabolismo secundário do fungo antártico Thelebolus globosus E2 foi estudado. A partir de seu extrato metanólico do meio liquido PDB foram isoladas a ciclopenina (86) e o ciclopenol (87) e foram detectados os alcaloides viridicatina (88) e viridicatol (89). O fungo Thelebolus globosus mostrou-se produtor de estatinas, sendo isoladas como composto majoritário a mevastatina (90). / In this work two approaches to obtain new secondary metabolites from fungi were studied. Suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA) and five analogues were synthesized and assessed as epigenetic modifiers in eight marine-derived fungi. The fungus Penicillium sp. and Acremonium sp. presented changes in their metabolomic profile when they were grown on a small scale in presence of 4F-SAHA derivative and Microphaeropsis sp. presented a modification in the presence of the 3 AM-SAHA. In the second approach a new extraction strategy using XAD 2-4-7 resin mixture allowed the extraction and subsequent isolation of six new peptide alkaloids (72-77) and two peptides (78-79) from the aqueous fraction of the culture medium of the Antarctic fungus Penicillium solitum IS1-A. Using the same methodology, the secondary metabolism of the Antarctic fungus Thelebolus globosus E2 was studied. From the methanolic extract of the PDB liquid medium cyclopenine (86) and cyclopenol (87) were isolated and the viridicatine (88) and viridicatol (89) alkaloids were detected. The fungus Thelebolus globosus was shown to be a producer of statins, mainly of mevastatin (90).

Alcaloides indolizidínicos, quinolizidínicos e piperidínicos poliidroxilados representam classes de compostos amplamente investigados atualmente. Este fato se deve às pronunciadas atividades biológicas como inibidores de glicosidases expressadas por estes heterociclos, o que significa um grande atrativo para que muitos grupos de pesquisas desenvolvam metodologias sintéticas para a sua obtenção de forma efetiva e em poucas etapas. Neste trabalho de dissertação é apresentada uma rota sintética para a preparação de alcaloides indolizidínicos e quinolizidínicos diidroxilados a partir de diazocetonas α,β-insaturadas. A estratégia para a síntese destes alcaloides baseia-se na mesma metodologia, tendo como etapas chaves: uma reação de olefinação de Horner-Wadsworth-Emmons (HWE) a partir de aminoaldeídos, seguida de um Rearranjo de Wolff. Como material de partida para o esqueleto indolizidínico foi empregado o Cbz-S-prolinal. Este aminoaldeído foi empregado como fonte do centro estereogênico e de um dos anéis presentes na estrutura final. O acoplamento (reação de HWE) entre o Cbz-S-prolinal e um diazofosfonato recentemente descrito por nosso grupo de pesquisa forneceu um composto diazocarbonílico α,β-insaturado (67%), que em seguida, foi submetido a um rearranjo de Wolff fornecendo um éster β,γ-insaturado (96%). Este intermediário avançado foi funcionalizado através de uma reação de diidroxilação, a qual forneceu uma lactona (66%). A síntese foi completada através de uma reação de ciclização intramolecular (94%) seguida de uma reação de redução para fornecer a indolizidina diidroxilada em 71% de rendimento. Para o esqueleto quinolizidínico, foi empregado o aminoaldeído racêmico Cbz-(±)-pipecolinal como material de partida. A partir da reação de olefinação, foi obtida uma diazocetona α,β-insaturada (91%), que após Rearranjo de Wolff (95%), diidroxilação (75%), ciclização (54-74%) e reação de redução (87-90%), forneceu duas novas quinolizidinas diidroxiladas. Estes alcaloides indolizidínicos e quinolizidínicos poderão ser avaliados como inibidores de glicosidases. / Polyhydroxylated Indolizidine, quinolizidine and piperidine alkaloids represent classes of compounds widely investigated in the chemical community. This fact is due to their pronounced biological activities as glycosidase inhibitors. Considering that, many research groups have been developing new synthetic methodologies to obtain these alkaloids and analogs effectively and in few steps. This work presents a synthetic route for the preparation of dihydroxylated indolizidine and quinolizidine alkaloids from α,β-unsaturated diazoketones. The strategy for the synthesis of these compounds is based on the same methodology to construct the indolizidine and quinolizidine skeleton. The key steps involve a Horner-Wadsworth-Emmons (HWE) olefination reaction from aminoaldehydes, followed by a Wolff Rearrangement. As the starting material to construct the indolizidine skeleton, Cbz-S-prolinal was employed. This aminoaldehyde is also the source of the stereogenic center and one of the rings present in the final structure. The coupling reaction (HWE reaction) between Cbz-S-prolinal and a diazophosphonate (methodology recently described by our research group) has provided an α,β-unsaturated diazoketone in 67% yield. This compound was then subjected to a Wolff Rearrangement, providing a β,γ-unsaturated ester in 96% yield. This advanced intermediate was functionalized through a high selective dihydroxylation reaction, furnishing a hydroxylated lactone in 66% yield. The synthesis was then completed employing an intramolecular cyclization reaction (94% yield), followed by lactam reduction to provide the dihydroxylated indolizidine (1,6-dideoxyepicastanospermine) in 71% yield. For the construction of the quinolizidine skeleton, was employed racemic Cbz-pipecolinal as the starting material. From the olefination reaction, the corresponding α,β-unsaturated diazoketone was obtained in 91% yield. After a Wolff Rearrangement (95%), dihydroxylation reaction (75%), cyclization (54-74%) and lactam reduction (87-90%), two novel dihydroxylated quinolizidines could be synthesized. These indolizidine and quinolizidine alkaloids may be evaluated as new inhibitors of glycosidases.

En la presente memoria se describe el empleo de sales de amonio derivadas de alcaloides de Cinchona como organocatalizadores quirales recuperables en diferentes transformaciones enantioselectivas. En el Capítulo I se han llevado a cabo cuaternizaciones enantioselectivas de B-cetoésteres cíclicos. Así, se han realizado adiciones Michael, alquilaciones y aminaciones enantioselectivas, en condiciones de reacción suaves. En el Capítulo II se describe el empleo de una sal de amonio dimérica derivada de la cinconidina como organocatalizador de transferencia de fase quiral en la alquilación enantioselectiva de oxazol-5-(4H)-onas. Finalmente, en el Capítulo III se ha profundizado en el estudio de la dependencia de la enantioselectividad con la temperatura en la cianoformilación enantioselectiva de aldehídos, empleando la anterior sal de amonio dimérica de cinconidina. Asimismo, se ha extendido la aplicación de esta metodología a un mayor rango de aldehídos. Estas sales de amonio diméricas han podido ser recuperadas mediante precipitación y posterior filtración, y reutilizadas sin pérdida de actividad.

Submitted by ISABELA CRISTINA GOMES HONÓRIO null (isabelagomeshonorio@gmail.com) on 2016-05-25T19:12:00Z No. of bitstreams: 1 ESTUDO DA DIVERSIDADE GENÉTICA E QUÍMICA DE Uncaria tomentosa Willd. ex Roem. & Schult. E Uncaria guianensis Gmell DE POPULAÇÕES NATURAIS LOCALIZADAS NA AMAZÔNIA..pdf: 2336644 bytes, checksum: 05f34f338ce3e8cd544dea281a52873d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-05-30T17:46:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 honorio_icg_dr_bot.pdf: 2336644 bytes, checksum: 05f34f338ce3e8cd544dea281a52873d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-30T17:46:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 honorio_icg_dr_bot.pdf: 2336644 bytes, checksum: 05f34f338ce3e8cd544dea281a52873d (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Uncaria tomentosa Willd. ex Roem. & Schult. e Uncaria guianensis Gmell. são plantas medicinais nativas da Amazônia, utilizadas na medicina tradicional com ação anti-inflamatória, sofrem pressão antrópica como o desmatamento e extrativismo predatório para uso e necessitam de cuidados em relação à conservação. U. tomentosa é uma das plantas medicinais que compõe a lista da relação nacional de medicamentos essenciais (RENAME) disponibilizada pelo Ministério da Saúde para os municípios brasileiros, através do Sistema Único de Saúde (SUS) e a U. guianensis apesar de não estar nesta lista apresenta também alcaloides oxindólicos pentacíclicos, como marcadores químicos, sendo utilizada popularmente como anti-inflamatória e sua ocorrência na natureza é maior quando comparada à U. tomentosa. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a diversidade genética e química entre os indivíduos de U. tomentosa e U. guianensis por marcador molecular SRAP (Sequence-Related Amplifield Polymosphism) e quantificar os alcaloides oxindólicos pentacíclicos mitrafilina e isomitrafilina em folhas por HPLC. A coleta do material foi feita nos estados do Acre, Amazonas, Amapá e Pará. Para ambas as espécies foram coletadas oito populações, em municípios distintos com 20 indivíduos cada. A genotipagem de U. tomentosa foi realizada utilizando três combinações de primers e os fragmentos submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida. A genotipagem de U. guianensis foi realizada usando quatro combinações de primers e os fragmentos analisados no equipamento 4300 DNA Analyser LI-COR®. A quantificação dos alcaloides oxindólicos pentacíclicos mitrafilina e isomitrafilina foi realizada de acordo com método já descrito na literatura com algumas modificações. Nas populações avaliadas de U. tomentosa a variabilidade genética foi maior dentro (75%) das populações do que entre elas (25%). O valor de Fst foi de 0,246, evidenciando que as populações estão estruturadas em Modelo de Ilhas. A maior porcentagem de locus polimórficos (95,68%) e a maior diversidade genética foram encontradas na população coletada no município de Mâncio Lima - AC. O fluxo gênico foi considerado restrito (Nm=1,57) e não houve correlação entre as distâncias geográfica e genética. Para a espécie U. guianensis, a variabilidade genética também foi maior dentro das populações (81%) do que entre elas (19%). O valor de Fst foi de 0,188, o que mostra que as populações estão se aproximando do Modelo de Ilhas. A maior porcentagem de locus polimórficos (90,21%) e a maior variabilidade genética foram verificadas na população coletada no município de Mazagão-AC. O fluxo gênico foi considerado baixo (Nm = 2,57) e houve fraca correlação entre as distâncias geográfica e genética, portanto considerada não significativa. A maior concentração dos alcaloides mitrafilina (11,17 mg.g-1.PS) e isomitrafilina (2,99 mg.g-1.PS) em U. tomentosa foram encontradas nos indivíduos da população de Tarauacá-AC e em U. guianensis foi de 1,09 mg.g-1.PS de mitrafilina e 0,29 mg.g-1.PS de isomitrafilina encontradas na população de Boca do Acre-AM. Além disso, para essa espécie, foi possível quantificar mitrafilina em apenas 24,8% dos indivíduos e a isomitrafilina em 20,4% dos indivíduos estudados. Conclui-se que a conservação de ambas as espécies deverá ser realizada com a coleta de um maior número de indivíduos nas populações com maiores variabilidades genética e química. / Uncaria tomentosa Willd. ex Roem. & Schult. and Uncaria guianensis Gmell. are medicinal plants natives from Amazonia state, used in the ocidental medicine for its anti-inflammatory effect, which are suffering from the actions of mankind by deforestation and predatory extraction, requesting care for their conservation. U. tomentosa is one of the medicinal plants that make up the national ratio of the list of essential drugs (RENAME) made available by the Ministry of Health to the municipalities through the Unified Health System (SUS) and U. guianensis although this is not list also features pentacyclic oxindole alkaloids, as markers, being popularly used as anti-inflammatory and its occurrence in nature is higher compared to U. tomentosa. The objectives of the present study were to evaluate the chemical and genetical diversity between individuals of U. tomentosa and U. guianensis by molecular marker SRAP (Sequence-Related Amplifield Polymosphism) and quantify pentacyclic oxindolic alkaloides mitraphylline and isomitraphylline in leaves via HPLC. Samples were collected in the states of Acre, Amazonas, Amapá and Pará. For both species, 20 samples were collected from each of the eight populations coming from different locations. The genotyping of U. tomentosa was realized by using the combination of three primers and the fractions submitted to an electrophoresis in acrylamide gel. The genotyping of U. guianensis was realized by using the combination of four primers and the fractions analyzed with a 4300 DNA Analyser LICOR®. The quantification of pentacyclic oxindole alkaloides mitraphylline and isomitraphylline were realized by using the existing method with some modifications. The U. tomentosa populations showed higher genetic variability inside the same population(75%) than between different populations (25%). The value of Fst was 0,246, showing that the populations are following the Island Model. The highest percentage of polymorphic locus (95,68%) and the highest genetic diversity were found in the population from Mâncio Lima - AC. The gene traffic was considered restrictive (Nm=1,57) and there was no correlation between geographic and genetic distances. For U. guianensis, the genetic variability was higher inside same populations (81%) than between different populations (19%). The value of Fst was 0,188, showing that the populations are coming close to the Island Model (modelo de ilhas). A higher percentage of polymorphic locus (90,21%) and a higher genetic variability were confirmed in the population colected in Mazagão - AC. The gene traffic was considered low (Nm = 2,57) and as having a weak correlation between geographic and genetic distances and, therefore, considered not significant. The highest alkaloid concentrations of mitraphylline (11,17 mg.g-1 .PS) and isomitraphylline (2,99 mg.g-1 .PS) in U. tomentosa were found in samples of the population from Tarauacá - AC and in U. guianensis samples showed alkaloid concentrations of 1,09 mg.g-1 .PS of Mitraphylline and 0,29 mg.g-1 .PS of Isomitraphylline in the population from Boca do Acre - AM. Besides that, to this species, it was possible to quantify mitraphylline in only 24.8% of individuals isomitraphylline and 20.4% of subjects studied. It’s concluded that the conservation of both species should be done with the collection of a greater number of individuals in populations with higher genetic and chemical variability.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3371563 bytes, checksum: 0f72f1a088caa63b4cd2bf4057752d08 (MD5) Previous issue date: 2012-02-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work describes the results of phytochemical studies from three species of the Erythroxylum genus: Erythroxylum caatingae Plowman, Erythroxylum subrotundum A. St.-Hil and Erythroxylum revolutum Mart, which were identified by the botany sector of the Laboratory of Pharmaceutical Technology, UFPB. The species were submitted to extraction process, followed by partition with hexane, chloroform and ethyl acetate, resulting in their respective phases. Four Tropane alkaloids were isolated by chromatography methods from the chloroformic phase of Erythroxylum caatingae, in which two were already isolated [3α, 6β dibenzoyloxytropane and 3α-(3 ,4 ,5 - trimethoxybenzoiloxi)-6β-benzoyloxytropane (Catuabine B)] and the other two were reported for the first time in the literature [3-(3 ,4 -dimethoxy)-6-hydroxytropane and 3α-(trans-3 ,4 ,5 trimethoxycinnamoyloxy)-6β-benzoyloxytropane]. From the ethyl acetate phase of Erythroxylum subrotundum, two flavonoids were isolated: Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside and 5,7,4 -trihydroxyflavone-3-O-α-L-rhamnoside. The study of the Erythroxylum revolutum hexanic phase resulted in the isolation of six diterpenes: ent-kauran-16-ene, 13-hydroxy-8(17),14-labdadien (Manool), ent-kaur-16- en-3β-ol, 3-oxo-13-hydroxi-8(17),14-labdadien, 3,13,19-trihydroxy-8(17),14-labdadien and ent-kauran-16β, 17-diol. All the species had their chemical constituents identified through data analysis obtained from spectroscopic methods such as Infrared and Nuclear Magnetic Resonance of 1H and 13C with uni-bidimensional techniques, besides comparison with literature data. Therefore, the given results of this work contributed to the chemical study of the species from Erythroxylaceae family. / Este trabalho descreve os resultados dos estudos fitoquímicos de três espécies do gênero Erythroxylum: Erythroxylum caatingae Plowman, Erythroxylum subrotundum A. St.- Hil e Erythroxylum revolutum Mart, identificadas pelo setor de botânica do Laboratório de Tecnologia Farmacêutica da UFPB. As espécies foram submetidas a processos de extração e posterior particionamento de seus extratos resultando nas fases hexânica, clorofórmica e acetato de etila. Do estudo da fase clorofórmica de Erythroxylum caatingae foram isolados, através de métodos cromatográficos, quatro alcaloides tropânicos, sendo dois destes alcaloides [3α,6β dibenzoiloxitropano e 3α-(3 ,4 ,5 - trimetoxibenzoiloxi)-6β-benzoiloxitropano (Catuabina B)], já isolados anteriormente e dois alcalóides inéditos na literatura [3-(3 ,4 -dimetoxi)-6-hidroxitropano e 3α- (trans-3 ,4 ,5 trimetoxicinamoiloxi)-6β-benzoiloxitropano]. Da fase acetato de etila de Erythroxylum subrotundum foram isolados dois flavonoides: a Quercetina-3-O-α-Lraminosídeo e 5,7,4 -trihidroxiflavona-3-O-α-L-raminosídeo. Do estudo da fase hexânica de Erythroxylum revolutum foram isolados seis diterpenos: ent-cauran-16-eno, 13-hidroxi-8(17),14-labdadieno (Manool), ent-caur-16-en-3β-ol, 3-oxo-13-hidroxi- 8(17),14-labdadieno, 3,13,19-trihidroxi-8(17),14-labdadieno e ent-cauran-16β, 17-diol. As espécies tiveram seus constituintes químicos identificados através da análise de dados obtidos por métodos espectroscópicos como Infravermelho e Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C uni-bidimensional, além de comparação com dados obtidos na literatura. Assim, os resultados obtidos neste trabalho contribuíram para o estudo químico de espécies da família Erythroxylaceae.

As doenças neurodegenerativas tais como as doenças de Alzheimer, Parkinson e desordens cerebrovasculares constituem-se em uma das principais causas de morbidade e de mortalidade na vida adulta. Além disso, o desequilíbrio entre os sistemas de geração e de proteção antioxidante celulares, chamado de estresse oxidativo, desempenha um papel importante nos danos neuronais causados pelos processos isquêmicos, provocando alterações funcionais em macromoléculas e promovendo a lipoperoxidação de membranas. Substâncias com dupla atividade anticolinesterásica e antioxidante vêm sendo consideradas como uma nova abordagem terapêutica para o tratamento farmacológico da doença de Alzheimer, incentivando a investigação e o estudo de produtos naturais para o desenvolvimento de fármacos novos e eficientes. Nesse estudo empregamos um modelo in vitro de fatias hipocampais de ratos, submetidas à privação de oxigênio e glicose (POG) e os métodos de avaliação da toxicidade dos alcalóides empregados foram a liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) citosólica e redução do MTT (viabilidade mitocondrial). Os alcalóides boldina e vincamina promoveram um aumento de 40 % na liberação de LDH nas fatias que sofreram POG na concentração de 100 μM, além de aumentos significativos na liberação desta enzima também nas fatias controles. Psicolatina e reserpina também tiveram efeitos neurotóxicos. Foi verificado que a POG em fatias hipocampais promove uma diminuição nas medidas do potencial antioxidante total (TRAP) e reatividade antioxidante total (TAR), de 63 % e 16,5 %, respectivamente, além de causar um aumento nos níveis de malonodialdeído liberado pelas fatias, detectado pelo ensaio de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS). Entretanto, este efeito foi revertido pela presença de boldina nas concentrações de 10 μM e de 50 μM. Este mesmo alcalóide, com reconhecida atividade antioxidante, também demonstrou ser um seqüestrador de radicais peroxila mais potente que o padrão Trolox. Além disso, os alcalóides indólicos monoterpênicos coronaridina, venalstonina, andrangina, vincadiformina e voacristina, além da boldina, exibiram potentes atividades antioxidante e anticolinesterásica em ensaios autobiográficos in vitro. / Neurodegenerative disorders, such as Alzheimer, Parkinson and cerebrovascular diseases are one of the major causes of morbidity and mortality in the middle aged and the elderly. Also, the imbalance between the activity of free radicals generation and scavenging systems, called oxidative stress, plays a important role in the neuronal damages caused by ischemia, leading to functional alterations in macromolecules and promoting lipoperoxidation in membranes. Acetylcholinesterase inhibitors and antioxidant compounds have been extensively investigated as new pharmacological strategies for the symptomatic treatment of Alzheimer disease. In this way, natural products are potentially important in an attempt to develope newer and safer drugs. In the present study, we selected the in vitro model of oxygen and glucose deprivation (OGD) in hippocampal slices and the methods used to assess the neurotoxicity of the alkaloids were cellular lactate dehydrogenase (LDH) release and reduction of MTT salt (mitochondrial activity). Both alkaloids boldine and vincamine 100 μM promoted a 40 % increase in LDH release in POG slices, as well as significant increases in the activity of this enzyme in control slices. Psychollatine and reserpine had also neurotoxic effects. It was also verified that OGD decreased the measurements of total antioxidant potential (TRAP) in 63 % and the total antioxidant reactivity (TAR) levels in 16.5 %, as well as an increase in the malondialdehyde levels by slices, which was detected by thiobarbituric acid-reactive substances (TBA-RS). However, this effect was prevented by the presence of boldine 10 μM and 50 μM. This alkaloid is a known antioxidant and it displayed a potent scavenger activity for peroxyl radicals, when compared with Trolox. Another finding is that the monoterpene indole alkaloids coronaridine, venalstonine, andrangine, vincadifformine, voacristine and also boldine exhibited both potent antioxidant and acetylcholinesterase inhibitor activities in in vitro autobiographic assays.

Evalúa la composición química, actividad antioxidante, actividad tóxica, citotóxica y actividad antibacteriana de los alcaloides y flavonoides aislados del extracto etanólico liofilizado de las hojas de Erythroxylum coca Lam y Erithroxylum novogranatense (Morris) Hieron. Las muestras de hojas son proporcionadas por la Empresa Nacional de la Coca S.A. Los ensayos biológicos se realizan en el Instituto de Ciencias Farmacéuticas y Recursos Naturales “Juan de Dios Guevara” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica UNMSM; así como en el Instituto de Investigación “Antonio Raimondi” de la Facultad de Ciencias Biológicas UNMSM. / Tesis

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:35:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331098.pdf: 3343639 bytes, checksum: 1aa3dc70f554a210df4d2516b5bbdff1 (MD5) Previous issue date: 2014 / O presente trabalho visou realizar um estudo fitoquímico analítico da espécie vegetal Senecio brasiliensis. Após o preparo do extrato bruto de diferentes partes da planta, foi desenvolvido um procedimento sistemático utilizando eletroforese capilar como guia para o subseqüente isolamento dos constituintes químicos. O procedimento aplicado permitiu verificar a presença de alcalóides, flavonóides e ácidos dicafeoilquinicos. Com o uso de técnicas espectroscópicas RMN, IV, EI-MS e ESI-MS foi possível identificar os alcalóides como senecionna, senecioina N-oxido, os ácidos x,y-dicafeoilquínicos 3,5, 3,4, 4,5 e 1,4, além dos flavonóides rutina e quercetrina. Para o estudo da distribuição dos alcalóides na planta, foi desenvolvido um método utilizando eletroforese capilar. A determinação de log P para os alcalóides foi efetuada através da EC, utilizando um mecanismo de separação em MEKC (cromatografia micelar capilar). O modelo obtido para os padrões foi log P = xlogk - y (n=6, R2 = 0.91) com log P variando de 0,4 ? 4,08. O valor de log P para a N-oxido senecionina foi determinado como < 0,4 e para a senecionina 0,7. Para a determinação da interação dos alcalóides pirrolizidinicos com albumina humana foi utilizado eletroforese capilar no modo PF-ACE. Ambos os compostos não apresentaram interação com a proteína humana. Para a determinação da permeabilidade em membrana paralela artificial (PAMPA) foi utilizada a técnica eletroforese capilar para as análises de permeabilidade. Com a finalidade de determinar alcalóides pirrolizidinicos em amostras de mel com diluição simples foi desenvolvido método utilizando HPLC-MS/MS.<br> / Abstract: This study aimed to carry out a phytochemical study of Senecio brasiliensis species under an analytical perspective. After preparation of the crude extract from different parts of plant, a systematic procedure using capillary electrophoresis (CE) as a guide for the subsequent isolation of the chemical constituents was developed. The procedure demonstrated the presence of alkaloids, flavonoids and dicaffeoylquinic acids. Using spectroscopic techniques (NMR, IR, EI-MS and ESI-MS) it was possible to identify the alkaloids senecionine[1] and N-oxide senecionine[2]; the x,y-dicaffeolylquinic acids (3,5)[3], (3,4)[4], (4,5)[5] and (1,4)[6] and also the flavonoids rutin[7] and quercetin[8]. To study the distribution of alkaloids in the plant, a novel method using CE was developed. For determining the log P for alkaloid, CE technique was used in MEKC (Micellar ElectrokineticChromatography) mode. The model obtained for the standards was logP=xlogk -y (n= 6, R2=0.91) with log P ranging from 0.4 to 4.08. The k values for senecionine and N-oxide senecionine were determined as0.7 and <0.4, respectively. To evaluate the interaction between pyrrolizidine alkaloids and human albumin (HSA), CE in PF-ACE (Partial-Filling Affinity Capillary Electrophoresis) mode was applied. The results suggest that both compounds do not present interaction with the studied protein. To determine the permeability of these alkaloids, experiments were carried out using parallel artificial membrane (PAMPA) and CE was used to analyze all solutions. In order to determine pyrrolizidine alkaloids in honey samples with simple dilution, a method using HPLC-MS/MS was developed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-26Bitstream added on 2014-06-13T20:42:44Z : No. of bitstreams: 1 morais_mcc_dr_arafcf.pdf: 1408212 bytes, checksum: c1d67dd20ca622443f0331dff47792b5 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A quimioprevenção do câncer é definida como o uso de produtos naturais ou sintéticos para atrasar, bloquear ou reverter o processo de carcinogênese. Produtos naturais apresentam uma diversidade de estruturas químicas que servem de modelo para o desenvolvimento de novos princípios ativos antitumorais e quimiopreventivos. Alcaloides guanidínicos presentes nas folhas de Pterogyne nitens apresentam atividade antitumoral e foram selecionados para os ensaios. O ácido gálico foi escolhido como modelo e seus derivados tiveram atividade quimiopreventiva descrita por ser produto natural antioxidante presente nas folhas de Alchornea glandulosa. Uma coleção de 70 substâncias foi classificada em 6 grupos de acordo com sua estrutura. Derivados de ácidos fenólicos, alcaloides guanidínicos, fenamatos, carvonas, xantonas, flavonas e chalconas preniladas foram avaliadas em ensaios de citotoxicidade por SRB em células MCF-7 e MDA-MB-231, e a atividade quimiopreventiva por meio de indução da enzima quinona-redutase (NQO1) em células Hepa 1c1c7, inibição in vitro de aromatase (CYP19), inibição de NF-κB ativado por TNFα e inibição da produção de NO em células RAW 264.7 estimuladas por LPS. Além disso, alcaloides guanidínicos nitensidina A (NTA), nitensidina B (NTB) e nitensidina T (NTT) foram avaliados pelo ensaio de MTT e a indução de apoptose por coloração com Hoechst 33342 e iodeto de propídio, ambos em células HepG2. A genotoxicidade do ácido gálico (GA) e galato de metila (G1) foi avaliada em células HepG2 pelo ensaio do cometa. GA e G1 apresentaram inibição de NF-κB (CI50 = 19,8 μM e 12,1 μM, respectivamente), sendo que GA provocou quebras de DNA significantes (P < 0,05) nas concentrações de 12 μM e 40 μM verificados pelo ensaio do cometa. Galato de propila (G3) e galato de butila... / Cancer chemoprevention is defined as the use of natural or synthetic products to delay, block or reverse the carcinogenesis process. Natural products presents a diversity of chemical structures that serve as template for the development of new active antitumor and chemopreventive agents. Guanidine alkaloids from the leaves of Pterogyne nitens have antitumor activity and were selected for the assays. Gallic acid, an antioxidant natural product present in the leaves of Alchornea glandulosa, was selected as template and its derivatives chemopreventive activity is reported. A collection of 70 compounds were classified into six groups according to their structure. Phenolic acid derivatives, guanidine alkaloids, fenamates, carvones, xanthones, prenylated flavones and chalcones were evaluated in cytotoxicity assays through SRB in MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines, and chemopreventive activity by means of quinone-reductase (NQO1) induction in Hepa 1c1c7 cell line, in vitro aromatase (CYP19) inhibition, TNFα-activated NF-κB inhibition and NO production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Guanidine alkaloids nitensidine A (NTA), nitensidine B (NTB) and nitensidine T (NTT) were evaluated through MTT assay and apoptosis induction with Hoechst 33342 and propidium iodide stain, both in HepG2 cell line. Genotoxicity of gallic acid (GA) and methyl gallate (G1) was evaluated in HepG2 cells by the comet assay. GA and G1 presented NF-κB inhibition (IC50 = 19.8 μM and 12.1 μM, respectively), and it resulted in significant (P < 0.05) DNA strand breaks at 12 μM and 40 μM as verified by the comet assay. Propyl gallate (G3) and butyl gallate (G4) inhibited NO production (IC50 = 7.9 μM e 2.0 μM, respectively). Butyl gallate and pentyl gallate (G5) inhibited CYP19 in approximately 60% at 90 μM, allowing a structure-activity... (Complete abstract click electronic access below)

As doenças neurodegenerativas tais como as doenças de Alzheimer, Parkinson e desordens cerebrovasculares constituem-se em uma das principais causas de morbidade e de mortalidade na vida adulta. Além disso, o desequilíbrio entre os sistemas de geração e de proteção antioxidante celulares, chamado de estresse oxidativo, desempenha um papel importante nos danos neuronais causados pelos processos isquêmicos, provocando alterações funcionais em macromoléculas e promovendo a lipoperoxidação de membranas. Substâncias com dupla atividade anticolinesterásica e antioxidante vêm sendo consideradas como uma nova abordagem terapêutica para o tratamento farmacológico da doença de Alzheimer, incentivando a investigação e o estudo de produtos naturais para o desenvolvimento de fármacos novos e eficientes. Nesse estudo empregamos um modelo in vitro de fatias hipocampais de ratos, submetidas à privação de oxigênio e glicose (POG) e os métodos de avaliação da toxicidade dos alcalóides empregados foram a liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) citosólica e redução do MTT (viabilidade mitocondrial). Os alcalóides boldina e vincamina promoveram um aumento de 40 % na liberação de LDH nas fatias que sofreram POG na concentração de 100 μM, além de aumentos significativos na liberação desta enzima também nas fatias controles. Psicolatina e reserpina também tiveram efeitos neurotóxicos. Foi verificado que a POG em fatias hipocampais promove uma diminuição nas medidas do potencial antioxidante total (TRAP) e reatividade antioxidante total (TAR), de 63 % e 16,5 %, respectivamente, além de causar um aumento nos níveis de malonodialdeído liberado pelas fatias, detectado pelo ensaio de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS). Entretanto, este efeito foi revertido pela presença de boldina nas concentrações de 10 μM e de 50 μM. Este mesmo alcalóide, com reconhecida atividade antioxidante, também demonstrou ser um seqüestrador de radicais peroxila mais potente que o padrão Trolox. Além disso, os alcalóides indólicos monoterpênicos coronaridina, venalstonina, andrangina, vincadiformina e voacristina, além da boldina, exibiram potentes atividades antioxidante e anticolinesterásica em ensaios autobiográficos in vitro. / Neurodegenerative disorders, such as Alzheimer, Parkinson and cerebrovascular diseases are one of the major causes of morbidity and mortality in the middle aged and the elderly. Also, the imbalance between the activity of free radicals generation and scavenging systems, called oxidative stress, plays a important role in the neuronal damages caused by ischemia, leading to functional alterations in macromolecules and promoting lipoperoxidation in membranes. Acetylcholinesterase inhibitors and antioxidant compounds have been extensively investigated as new pharmacological strategies for the symptomatic treatment of Alzheimer disease. In this way, natural products are potentially important in an attempt to develope newer and safer drugs. In the present study, we selected the in vitro model of oxygen and glucose deprivation (OGD) in hippocampal slices and the methods used to assess the neurotoxicity of the alkaloids were cellular lactate dehydrogenase (LDH) release and reduction of MTT salt (mitochondrial activity). Both alkaloids boldine and vincamine 100 μM promoted a 40 % increase in LDH release in POG slices, as well as significant increases in the activity of this enzyme in control slices. Psychollatine and reserpine had also neurotoxic effects. It was also verified that OGD decreased the measurements of total antioxidant potential (TRAP) in 63 % and the total antioxidant reactivity (TAR) levels in 16.5 %, as well as an increase in the malondialdehyde levels by slices, which was detected by thiobarbituric acid-reactive substances (TBA-RS). However, this effect was prevented by the presence of boldine 10 μM and 50 μM. This alkaloid is a known antioxidant and it displayed a potent scavenger activity for peroxyl radicals, when compared with Trolox. Another finding is that the monoterpene indole alkaloids coronaridine, venalstonine, andrangine, vincadifformine, voacristine and also boldine exhibited both potent antioxidant and acetylcholinesterase inhibitor activities in in vitro autobiographic assays.