Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Identifica genotípicamente los FV: Fimbria tipo 1, Fimbria P y α- Hemolisina en E. coli aisladas de urocultivos del Hospital Nacional San Bartolomé. Así mismo, determina la frecuencia de los genes fimH, papE/F y hlyA mediante la técnica de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) y describir la susceptibilidad antibiótica acompañante. Estudia un total de 269 aislados de E. coli en urocultivo durante el periodo de febrero y abril del 2015. A todos los aislados se les realizó la detección genotípica de los genes fimH, papE/F y hlyA a través de la técnica de PCR multiplex. Encuenta que de 269 aislados estudiados existe una frecuencia de 90% para el gen fimH, 33,5% para el gen papE/F y 18,2% para el hlyA. También se encuentra una relación entre FV y la susceptibilidad a algunos de los antibióticos evaluados; asi como diferencias significativas entre la susceptibilidad antibiótica de aislados ExPEC BLEE y no BLEE. Concluye en que existe una alta frecuencia del gen fimH, así como presencia de los genes papE/F y hlyA en los aislados de E. coli evidenciando el rol importante que cumple esta adhesina en las ITU. Existe relación entre FV y la susceptibilidad a algunos antibióticos evaluados. / Tesis

A Artrite Reumatóide (AR) é uma doença autoimune associada a poliartropatia inflamatória que acomete principalmente as articulações periféricas. Cerca de 1% da população mundial é afetada, sendo duas a três vezes mais prevalente em mulheres. Apresenta uma patogênese complexa e multifatorial. A sinóvia das articulações afetadas é infiltrada por linfócitos T e B, macrófagos e granulócitos. A sinóvia reumatóide adquire características proliferativas, formando o pannus, e invade a cartilagem articular e o osso, levando à destruição da arquitetura normal da articulação e perda de função. Em vários modelos de doenças autoimunes, a ausência ou diminuição da expressão de proteínas reguladoras do complemento tem sido observada, associada com o agravamento dos sintomas clínicos, sendo que, muitos destes casos, a superativação do sistema complemento pode ser a causa da exacerbação da doença. O presente artigo tem por objetivo revisar os principais aspectos relacionados à regulação do sistema complemento na artrite reumatóide, a fim de propiciar uma melhor compreensão do potencial papel desse sistema na fisiopatologia da doença. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease associated with polyarticular inflammatory synovitis that affects mainly the peripheral joints. About 1% of the world population is affected, and it is two to three times more prevalent in women. RA has a complex and multifactorial pathogenesis. The rheumatoid synovium acquires proliferative characteristics, forming the pannus, and invades cartilage and bone, leading to the destruction of normal architecture and loss of function. In several models of autoimmune diseases, the absence or decreased expression of complement regulatory proteins has been observed, associated with worsening of the clinical symptoms, and many of these cases the over-activation of the complement system is the cause of disease exacerbation. This article aims to review the main aspects related to regulation of the complement system in rheumatoid arthritis in order to provide a better understanding of the potential role of this system in the pathophysiology of the disease.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:08:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 204.pdf: 1337649 bytes, checksum: 244b0e0500a3148923b324ca08b898bf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O lúpus eritematoso sistêmico juvenil (LESJ) é uma doença inflamatória crônica causada pela produção de autoanticorpos, que reconhecem como estranhos antígenos próprios do organismo, e possuem alta morbidade e mortalidade em relação à doença no adulto. Em sua patogênese estão envolvidos fatores ambientais, hormonais, imunológicos e genéticos. Estudos de associação genética demonstraram que a susceptibilidade ao lúpus é poligênica, e entre os genes envolvidos está o HLA-G que é responsável pela regulação da resposta imune. No estudo, foi analisada a expressão de isoforma da molécula HLA-G e observamos o perfil de resposta imune em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico juvenil. Os pacientes que participaram do estudo foram selecionados no serviço de Reumatologia do Hospital das Clínicas e foi coletado sangue periférico de 10 pacientes no momento ativo e inativo do LESJ. O estudo comparou a expressão do mRNA do HLA-G5, IL-10 e TNF, os níveis plasmáticos de sHLA-G e citocinas Th1, Th2 e Th17 entre os grupos com a doença ativa, inativa e o grupo de crianças saudáveis aplicando os testes de Mann-Whitney U e Kruskal-Wallis. Os resultados mostraram que pacientes com LESJ ativo apresentaram níveis elevados das citocinas IL-10 (p=0,004) e IL-6 (p=0,011), além de apresentarem expressão de mRNA do TNF mais elevada em relação ao grupo inativo (p0,05). Mesmo com número reduzido, foi possível caracterizar que houve mudança do perfil de citocinas durante a ativação do LESJ, e a relação dessa ativação com a expressão de HLA-G solúvel, além de servir como base para proposta de um modelo de regulação imunológica, que poderá ser validado em futuros experimentos

A Artrite Reumatóide (AR) é uma doença autoimune associada a poliartropatia inflamatória que acomete principalmente as articulações periféricas. Cerca de 1% da população mundial é afetada, sendo duas a três vezes mais prevalente em mulheres. Apresenta uma patogênese complexa e multifatorial. A sinóvia das articulações afetadas é infiltrada por linfócitos T e B, macrófagos e granulócitos. A sinóvia reumatóide adquire características proliferativas, formando o pannus, e invade a cartilagem articular e o osso, levando à destruição da arquitetura normal da articulação e perda de função. Em vários modelos de doenças autoimunes, a ausência ou diminuição da expressão de proteínas reguladoras do complemento tem sido observada, associada com o agravamento dos sintomas clínicos, sendo que, muitos destes casos, a superativação do sistema complemento pode ser a causa da exacerbação da doença. O presente artigo tem por objetivo revisar os principais aspectos relacionados à regulação do sistema complemento na artrite reumatóide, a fim de propiciar uma melhor compreensão do potencial papel desse sistema na fisiopatologia da doença. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease associated with polyarticular inflammatory synovitis that affects mainly the peripheral joints. About 1% of the world population is affected, and it is two to three times more prevalent in women. RA has a complex and multifactorial pathogenesis. The rheumatoid synovium acquires proliferative characteristics, forming the pannus, and invades cartilage and bone, leading to the destruction of normal architecture and loss of function. In several models of autoimmune diseases, the absence or decreased expression of complement regulatory proteins has been observed, associated with worsening of the clinical symptoms, and many of these cases the over-activation of the complement system is the cause of disease exacerbation. This article aims to review the main aspects related to regulation of the complement system in rheumatoid arthritis in order to provide a better understanding of the potential role of this system in the pathophysiology of the disease.

A Artrite Reumatóide (AR) é uma doença autoimune associada a poliartropatia inflamatória que acomete principalmente as articulações periféricas. Cerca de 1% da população mundial é afetada, sendo duas a três vezes mais prevalente em mulheres. Apresenta uma patogênese complexa e multifatorial. A sinóvia das articulações afetadas é infiltrada por linfócitos T e B, macrófagos e granulócitos. A sinóvia reumatóide adquire características proliferativas, formando o pannus, e invade a cartilagem articular e o osso, levando à destruição da arquitetura normal da articulação e perda de função. Em vários modelos de doenças autoimunes, a ausência ou diminuição da expressão de proteínas reguladoras do complemento tem sido observada, associada com o agravamento dos sintomas clínicos, sendo que, muitos destes casos, a superativação do sistema complemento pode ser a causa da exacerbação da doença. O presente artigo tem por objetivo revisar os principais aspectos relacionados à regulação do sistema complemento na artrite reumatóide, a fim de propiciar uma melhor compreensão do potencial papel desse sistema na fisiopatologia da doença. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease associated with polyarticular inflammatory synovitis that affects mainly the peripheral joints. About 1% of the world population is affected, and it is two to three times more prevalent in women. RA has a complex and multifactorial pathogenesis. The rheumatoid synovium acquires proliferative characteristics, forming the pannus, and invades cartilage and bone, leading to the destruction of normal architecture and loss of function. In several models of autoimmune diseases, the absence or decreased expression of complement regulatory proteins has been observed, associated with worsening of the clinical symptoms, and many of these cases the over-activation of the complement system is the cause of disease exacerbation. This article aims to review the main aspects related to regulation of the complement system in rheumatoid arthritis in order to provide a better understanding of the potential role of this system in the pathophysiology of the disease.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La toxocarosis humana es una de las helmintiasis zoonóticas más reportada en el mundo. Dependiendo del órgano afectado, pueden distinguirse varias manifestaciones clínicas: toxocarosis sistémica, que afecta a la mayoría de los órganos; toxocarosis ocular; toxocarosis asintomática y toxocarosis encubierta. Esto hace muy complicado el diagnóstico de esta enfermedad. El propósito del presente estudio es contribuir al conocimiento de la toxocarosis humana en Chile, especialmente en el diagnóstico, mediante el reconocimiento de antígenos específicos para las diferentes manifestaciones clínicas de la enfermedad. Se usó la técnica de western blot y antígenos, tanto larvales somáticos (LS) como excretados-secretados (ES) de larvas de Toxocara canis, enfrentados a anticuerpos IgA e IgG. Los resultados muestran que existen antígenos definidos por su peso molecular (PM) que están presentes en ambos extractos antigénicos y que son reconocidos por las dos clases de inmunoglobulinas (27 y 20 kDa). El antígeno de 36 kDa presente en ambos extractos antigénicos y que sólo es reconocido por IgG. Otros antígenos sólo están presentes en LS (65 y 81 kDa), aunque también están presentes en otras parasitosis; o en ES (48 y 40 kDa). Algunos antígenos solamente fueron detectados cuando se utilizó un determinado extracto (LS o ES) con una clase de anticuerpos (101, 52, 45 y 15 kDa). Al seleccionar un antígeno específico en base a su PM, para cada una de las manifestaciones de toxocarosis humana, se observó que el mayor porcentaje de detección se obtuvo en la manifestación asintomática, con el antígeno de 40 kDa, en el sistema ES/IgA. También se analizó la presencia de antígenos específicos más frecuentes en una o dos manifestaciones de toxocarosis humana, determinándose paneles de antígenos específicos. Cuando se analizaron las 24 muestras de sueros de pacientes con otras parasitosis y negativas para toxocarosis humana, se observó reconocimiento cruzado de antígenos principalmente de PM superior a 50 kDa. Esto concuerda con lo reportado en literatura por otros autores y avala el uso de la técnica de western blot que permite diferenciar dichos antígenos. Se determinó que la correspondencia unívoca entre un determinado antígeno o panel de antígenos con una o dos manifestaciones clínicas de toxocarosis humana fluctúa entre 65% y 84%. Sin embargo, el hecho de encontrar antígenos específicos para algunas de las manifestaciones clínicas abre la posibilidad de optimizar las técnicas y utilizar antígenos purificados para maximizar la detección de tales antígenos / Financiamiento: Proyecto DID TNAC 24-02/02

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se describe la evolución de anticuerpos caninos contra Brucella canis, de dos perras inoculadas experimentalmente, mediante un ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA-I) usando como antígenos el lipopolisacárido rugoso (LPS-R) y proteínas citosólicas de Brucella abortus Cepa RB51. El objetivo fue discriminar el momento en que se hacen detectables los anticuerpos para cada ELISA-I y describir la evolución de éstos en el tiempo. Se utilizaron sueros de dos perras infectadas con B. canis, A y B, con un total de 20 y 16 muestras de sueros seriados, respectivamente. Para ambos ELISA-I se usaron líneas de corte obtenidas por metodología “Receiver-Operator Characteristic” (ROC), que determinaron la positividad o negatividad a la prueba. Ambos ELISA-I fueron capaces de detectar anticuerpos tempranamente y fue posible constatar su permanencia en el tiempo. La detección de anticuerpos mediante ELISA-I, tanto con antígeno de proteínas citosólicas como con antígeno LPS-R de B. abortus Cepa RB51, se mantuvo detectable, al menos, hasta la semana 38 post infección

Doctor en Ciencias mención Biología Molecular, Celular y Neurociencias / Cell adhesion to the extracellular matrix (ECM) is key to the regulation of cellular processes such as proliferation, survival, and migration. Mesenchymal cell adhesion requires the formation of focal adhesions, defined as multiprotein complexes that allow cell binding to the ECM. Focal adhesions involve the congregation of more than 150 proteins, which include integrins, the main ECM receptors, and the Focal Adhesion Kinase (FAK), which has as a fundamental role in the turnover of focal adhesions. Formation and disassembly of focal adhesions are dynamically regulated during cell migration, and numerous studies show that increased expression or activity of focal adhesion proteins is associated with many human diseases. For example, increased levels and/or activities of FAK have been associated with oncogenic transformation in a variety of tissues and organs. Aside the roles commonly described for FAK in activating integrins, such as integrin β1 (ITGB1), and modulating integrin downstream signaling, this kinase has been shown to behave as an intracellular effector of multiple signaling pathways, including Neogenin-1 (NEO1). NEO1 is a transmembrane receptor involved in tissue growth during embryogenesis, although it is also broadly expressed in adulthood. More recently, overexpression of NEO1 has been observed in a wide variety of human cancers including those of the breast, pancreas, cervix, colon and medulloblastoma. Despite the latter, its role in tumorigenesis is still controversial and remains to be elucidated. In the context of neural development NEO1 promotes neuronal migration and axonal guidance through interaction with the extracellular Netrin (NTN) ligand family. Interestingly, NEO1 is strongly expressed in neuroblastoma (NB), a cancer derived from neural progenitors of the sympathoadrenal lineage. Therefore, it will be relevant xii determining if NEO1, by interacting with NTNs, could promote the migration and metastasis of NB cells, and if this phenomenon is mediated through the activation of FAK, thus promoting the intracellular activation of the ITGB1. It was shown that both the NEO1 receptor and its main NTN ligands family members, Netrin-1 (NTN1) and Netrin-4 (NTN4), are expressed in NB patient samples. We reveal that NEO1, in addition to promoting chemotactic migration in association with NTN4 in vitro, promotes metastasis in vivo, as demonstrated in the chicken embryo model. Recent data from the literature supports our results and allow us to suggest that the interaction between NTN4 and NEO1 might not be direct, but rather mediated by a signaling complex also made up by laminin g1 and ITGB1. NTN1, on the other hand, acts as a chemoattractant molecule and binds directly to NEO1. In addition, we show that FAK is an downstream effector of NEO1, and that the NTN1/ NEO1 signaling complex interacts with ITGB1, in the SK-N-SH NB cells. Thus, our results suggest that NTN1/ NEO1 promotes the activation of ITGB1 through FAK, most likely through the formation of a macromolecular complex, driving cell migration. All these results are consistent with our in vivo observations, which show that NEO1 promotes the metastasis of SK-N-SH cells in an immunodeficient mouse model. In summary, this thesis shows that NEO1 promotes the migration of NB cells and that its mechanism of action is via interaction with ITGB1, with FAK being an intracellular mediator of this signaling pathway. NEO1, by promoting cell migration, could play a key role in the process of NB metastasis. Therefore, the signaling complex xiii conformed by NTNs / NEO1 is proposed as a possible prognostic marker of the progression of NB.

o autor avaliou a capacidade de retenção do anticorpo monoclonal22528S, o qual reconhece antígenos de alto peso molecular na. superficie de células de melanoma maligno humano, em 49 pacientes com confirmação histopatológica da neoplasia, após a administração endovenosa do anticorpo marcado com tecnécio, e posterior quantificação da captação tumor/tecido normal, através de imunocintilografia. Uma vez confirmada a segurança do método e a localização preferencial do imunoconjugado no tecido tumoral, o autor estudou o efeito do interferon alfa como modulador da expressão de antígenos de superficie e, por conseguinte, o seu potencial impacto na retenção do imunoconjugado no tecido tumoral. Utilizando o paciente como seu próprio controle, foi possível observar um incremento na retenção do imunoconjugado em sítios metastáticos pré-definidos em 8/10 pacientes. Dada a complexidade do fenômeno e o limitado número de casos estudados, optou-se pelo não tratamento estatístico dos dados e sim por sua discussão sob a forma preliminar. Pôde-se caracterizar uma tendência à maior concentração do imunoconjugado no tumor após o uso do interferon alfa. Cabe ressaltar que, em um caso, foi documentada conversão de uma metástase não-captante em uma lesão altamente captante após a administração do imunomodulador. Esta estratégia não havia sido estudada previamente em pacientes portadores desta neoplasia. Considerando a potencial aplicação diagnóstica e \ terapêutica do uso de anticorpos monoclonais em neoplasias malignas, esta observação de um efeito modulador da expressão de antígenos tumorais específicos, através da administração concomitante de interferon alfa, aumentando a retenção do anticorpo no tecido tumoral, poderá vir a representar um valioso recurso no futuro. / The author evaluated the ability of the monoclonal antibody 22825S, which recognizes high-molecular weight cell surfàce antigens in human malignant melanoma, of being retained preferentially in 49 patients with histopathologically-proven malignant melanoma, following the intravenous administration of the thecnecium-labelled monoclonal ,antibody. The retention of the immunoconjugate in the tumor versus normal tissues was measured using irrilllunocintilographic tools. Following the documentation of the safety, feasibility and preferential antibody retention in the tumor tissue of melanoma patients, the author studied the effect of alpha-interferon as a modulator of cell surface antigen expression and thus, its impact on the retention of the immunoconjugate in the tumor. Using each patient as his own control, an enhancement of antibody localization in the tumor was demonstrated in 8 out of 10 cases. Due to the complexity of this phenomenon and the limited number of patients, the author decided to describe the results as preliminary observations without application of statistical tools. Notably, the administration of alpha interferon was able to convert a "cold" but histopathologically-confirmed metastatic lesion in one patient in a highly positive site, as quantified by immunocintilography. To the knowledge of the author, the above strategy was never applied to malignant melanoma patients before. Considering the potential application of monoclonal antibodies in cancer \ diagnostic and therapy, the above mentioned provocative observation of a modulatory effect of tumor antigens expression by interferons in men, leading to an increased retention of the antibody at the tumor site, may have important applications in the future.

Orientador: Ricardo Andrade Rebelo. / Co-orientador: Caio Mauricio Mendes de Cordova. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.