Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T19:31:30Z No. of bitstreams: 1 Gilberto Ferreira da Silva_Tese.pdf: 10525757 bytes, checksum: fed4f4587ca5231f5b7517d0ec5bee91 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T19:31:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gilberto Ferreira da Silva_Tese.pdf: 10525757 bytes, checksum: fed4f4587ca5231f5b7517d0ec5bee91 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Vice Direção de Ensino, Informação e Comunicação. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Doenças autoimunes abrangem uma grande variedade de desordens inflamatórias, até hoje consideradas incuráveis, tais como Artrite Reumatoide, Asma, Colite Ulcerativa, Doença de Crohn, Esclerose Múltipla, Hepatite Autoimune, e outras. Elas são caracterizadas pelo acúmulo exagerado e desmotivado de leucócitos em alguns órgãos, atacando células sadias do próprio organismo, lesionando e destruindo tecidos importantes. As integrinas, receptores glicoproteínicos expressos na superfície dos leucócitos, têm papel importante nesse processo: elas modulam a adesão dos leucócitos através da interação com seus ligantes primários, VCAMs (Vascular Cell Adhesion Molecules), expressos no tecido afetado. A interação integrina/ligante é que viabiliza a migração do leucócito do vaso sanguíneo para o interior do tecido. Sendo assim, uma alternativa terapêutica promissora, ainda sob investigação, para essas doenças é a administração de antagonistas, moléculas que tenham afinidade pelas integrinas de modo a se ligar a elas preferencialmente aos ligantes primários, dessa maneira inibindo a passagem dos leucócitos para o sítio da inflamação. No caso de Artrite Reumatoide, Asma e Esclerose Múltipla, a integrina de maior importância é a α4β1, para a qual uma boa quantidade de antagonistas já foi identificada. Infelizmente, porém, por variados motivos, nenhuma dessas drogas tem viabilidade para aplicação a seres humanos. Um indicador quantitativo da capacidade, exibida por uma droga, de inibir determinado processo biológico ou bioquímico é o índice IC50, definido pelo FDA como "a concentração (dessa droga) requerida para a inibição de 50% do processo in vitro". A partir, pois, de uma lista, compilada da literatura, de moléculas com capacidade, já experimentalmente quantificada, de antagonismo à integrina α4β1, nós participamos da busca de novos antagonistas construindo e aplicando modelos estatísticos de estimativa do índice IC50 para novas moléculas. As ferramentas que usamos são oriundas da Topologia Molecular, um campo de pesquisas da Teoria dos Grafos em Química, que busca inferir quantitativamente características importantes das moléculas a partir da topologia (vértices, arestas, adjacências, etc.) de grafos correspondentes a essas moléculas. / Autoimmune diseases cover a large variety of inflammatory disorders like Rheumatoid Arthritis, Asthma, Ulcerative Colitis, Crohn Disease, Multiple Sclerosis, Autoimmune Hepatitis, and others. To date, all them seem to be incurable. They are characterized by excessive and unnecessary accumulation of leukocytes in healthy organs, attacking the body's own healthy cells, injuring and destroying important tissues. Integrins, glycoprotein receptors expressed on the surface of leukocytes, play an important role in this process: they modulate leukocyte adhesion and migration from the blood vessel into the tissue through interaction with its ligands primary VCAMs (Vascular Cell Adhesion Molecules), expressed in the affected tissue. Thus, a promising alternative treatment for those diseases, still under investigation, is the administration of antagonists: molecules that bind to integrins with affinity comparable to that of their primary ligands, thereby inhibiting the migration of leukocytes to the site of inflammation. For rheumatoid arthritis, asthma and multiple sclerosis, the most important integrin is α4β1, for which several antagonists have been identified and published. Unfortunately, for various reasons, none of these drugs is feasible for application to humans; this way, the search for new antagonists is still active. A quantitative indicator of the ability of a drug to inhibit a biological or biochemical process is the IC50 index, defined by the FDA as "the concentration (of the drug) required for 50% inhibition of process in vitro". We perform participate in the search for new α4β1 antagonists by: starting with a list of antagonists compiled from the literature with their experimentally evaluated IC50 evaluated experimentally compiled from the literature, we build and apply statistical models to estimate the IC50 index for new molecules. We use tools derived from molecular topology, a research field of research of Chemical Graph Theory, which aims to infer quantitatively important characteristics of the molecules from the topology (vertices, edges, adjacencies , etc.) of the graphs corresponding to these molecules.

Submitted by LUIZA JACQUELINE COSTA NICOLAU BERRIEL null (luizanicolau22@yahoo.com.br) on 2017-08-28T21:49:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação mestrado Luiza.pdf: 1392856 bytes, checksum: 0591e0781faaae724df2bc48264274a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-29T18:07:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 berriel_ljcn_me_bot.pdf: 1392856 bytes, checksum: 0591e0781faaae724df2bc48264274a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T18:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 berriel_ljcn_me_bot.pdf: 1392856 bytes, checksum: 0591e0781faaae724df2bc48264274a5 (MD5) Previous issue date: 2017-07-14 / Introdução: O câncer de bexiga é a neoplasia maligna mais comum do trato urinário, sendo o carcinoma urotelial o subtipo histológico mais comum. No momento do diagnóstico, cerca de 75% dos tumores não são invasivos. Entretanto esses tumores são caracterizados por alta frequência de recorrência e frequente progressão para tumor invasivo, com piora significativa no prognóstico. A incapacidade de prever com precisão sua evolução dificulta a escolha terapêutica adequada gerando um impacto na sobrevida dos pacientes. Objetivo: Avaliar a imunoexpressão de XIAP, Survivina e Smac/DIABLO em tecido tumoral. Correlacionar os resultados com o índice apoptótico, proliferação celular e imunoexpressão da proteína p53 nestes mesmos tecidos, e com o prognóstico dos pacientes. Métodos: Estudo do tipo coorte retrospectiva, que avaliou pacientes diagnosticados com carcinoma urotelial de bexiga no período de 1980 a 2000, provenientes do serviço de Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Cortes de 3 µm do bloco de TMA foram submetidos à reação de imuno-histoquímica para XIAP, Survivina e Smac/DIABLO. As lâminas foram analisadas por dois patologistas, sendo obtidos escores de intensidade de imunoexpressão. Esses escores foram correlacionados entre si e com o índice apoptótico (obtido com o uso de anticorpo anti-caspase-3-clivada), índice de proliferação celular, imunoexpressão da proteína p53 e dados de sobrevida dos pacientes obtidos em prontuário médico. Foi usado o Teste de Associação de Goodman envolvendo contrastes entre e dentro de populações multinomiais considerando o nível de 5% de significância, na avaliação do grau histológico dos carcinomas uroteliais vesicais e seu status de invasão da camada muscular da bexiga, com os marcadores da apoptose estudados (XIAP, Smac/DIABLO, Survivina) e local de prevalência do Índice Apoptótico. O Teste não-paramétrico de Mann-Whitney foi usado para avaliação da porcentagem do Índice Apoptótico (caspase-3-clivada) e sobrevida em meses com status de invasão da camada muscular da bexiga. Para avaliar as associações entre p53, Survivina nuclear e citoplasmática, Smac/DIABLO, e entre a porcentagem do Índice Apoptótico (caspase-3-clivada) e o índice de proliferação celular (Ki-67), foi usado o Teste não paramétrico de Kruskal-Wallis complementando o Teste de comparações múltiplas de Dunn. Na associação entre a porcentagem do Índice Apoptótico (caspase-3-clivada) e a sobrevida em meses foi usada a Medida de Associação de Spearman. Resultados: Dos 210 casos selecionados, 67 foram incluídos. Verificamos uma relação inversa entre a porcentagem do Índice Apoptótico obtido pela reação imuno-histoquímica com a caspase-3-clivada (IA%) e entre a sobrevida em meses dos pacientes da casuística. A sobrevida é significativamente maior entre os pacientes sem invasão da camada muscular da bexiga pelo carcinoma urotelial (mediana de 76,5 meses, e valor máximo de 334 meses), comparados àqueles com camada muscular infiltrada pela neoplasia (mediana de sete meses, tempo máximo de 129 meses). A imunoexpressão nuclear da Survivina é mais significativamente negativa nos carcinomas invasivos que nos não invasivos. Quanto à imunoexpressão de Smac/DIABLO, os carcinomas não invasivos têm significativamente mais reações fortes que os invasivos. O mesmo acontece com a reação para XIAP, com mais carcinomas não invasivos positivos comparados aos invasivos. A localização dos “hot-spots” do índice apoptótico (reação positiva para caspase-3-clivada) nas superfícies das papilas neoplásicas é significativamente maior nos carcinomas de baixo grau que nos de alto grau. Carcinomas uroteliais com imunoexpressão forte para Smac/DIABLO têm significativamente menor proliferação celular. Em relação ao coeficiente e valores mínimo e máximo da sobrevida em meses dos pacientes da casuística segundo a imunoexpressão das proteínas XIAP, Survivina e Smac/DIABLO, em nenhuma das avaliações o valor de p foi menor que 0,05, indicando a falta de significância desses resultados. Conclusão: Índice apoptótico obtido pela caspase-3-clivada é inversamente proporcional a sobrevida dos pacientes. A survivina é mais expressada nos carcinomas invasivos, podendo ser utilizada como marcador de mau prognóstico. O Smac/DIABLO e XIAP, por sua vez, são mais expressados nos tumores não invasivos. A localização dos “hot spots” do índice apoptótico pode ser útil para diferenciar carcinomas de alto e baixo grau. / Background: Bladder cancer is the most common malignant neoplasm of the urinary tract, with urothelial carcinoma being the most common histological subtype. At the time of diagnosis, about 75% of the tumors are non-invasive. However, these tumors are characterized by high frequency of recurrence and frequent progression to invasive tumor, with significant worsening of the prognosis. The inability to accurately predict their progress makes it difficult to choose the appropriate therapy that has an impact on patient survival. Objective: To evaluate the immunoexpression of XIAP, Survivin and Smac/DIABLO in tumor tissue. Correlate the results with the apoptotic index, cell proliferation and immunoexpression of the p53 protein in these same tissues, and with the prognosis of the patients. Methods: A retrospective cohort study, which evaluated patients diagnosed with bladder urothelial carcinoma from 1980 to 2000, from the Department of Pathology of Botucatu Medical School (UNESP). Three μm sections of the TMA block were submitted to the immunohistochemical reaction for XIAP, Survivin and SMAC / Diablo. The slides were analyzed by two pathologists, and immunoexpression intensity scores were obtained. These scores were correlated with each other and with the apoptotic index (obtained with the use of cleaved anti-caspase-3 antibody), cell proliferation index, immunoexpression of p53 protein and survival data of patients obtained in medical records. Results: Out of the 210 selected cases, 67 were included. We found an inverse relation between the percentage of apoptotic index obtained by the immunohistochemical reaction with caspase-3-cleaved (IA%) and between the survival in months of patients in the series. Survival was significantly higher among patients without invasion of the bladder muscle by urothelial carcinoma (median 76.5 months, and maximum value 334 months), compared to those with muscle layer infiltrated by neoplasia (median of seven months, maximum time of 129 months). Nuclear immunoexpression of Survivin is generally more significantly negative in invasive than noninvasive carcinomas. Regarding the immunoexpression of Smac/DIABLO, non-invasive carcinomas have significantly stronger reactions than invasive ones. The same happens with the reaction for XIAP, with more non-invasive positive carcinomas compared to invasive ones. The localization of the apoptotic index hot spots (caspase-3-cleaved positive reaction) on the surfaces of the neoplastic papillae is significantly higher in low-grade carcinomas (more than 85%, 6 cases versus 1). Urotelial carcinomas with strong immunoexpression for Smac/DIABLO have significantly lower cell proliferation. Regarding the coefficient and the minimum and maximum survival values in months of the patients according to the immunoexpression of the XIAP, Survivin and Smac/DIABLO proteins, in none of the evaluations the p value was lower than 0.05, indicating a lack of significant results. Conclusion: The apoptotic index obtained by caspase-3-cleaved is inversely proportional to patient survival. Survivin is more expressed in invasive carcinomas and may be used as a marker of poor prognosis. Smac/DIABLO and XIAP, on the other hand, are more expressed in non-invasive tumors. The localization of apoptotic index 'hot spots' may be useful in differentiating between high and low grade carcinomas.

Durante situações aversivas, como choque nas patas, imobilidade ou restrição dos movimentos, há um aumento nos níveis de acetilcolina no hipocampo de ratos. Além disso, o aumento desse neurotransmissor está envolvido com a modulação comportamental do MCC, principalmente em sua porção dorsal, HD. Diante disso, é proposto neste estudo que os receptores muscarínicos presentes no HD de ratos, modulam a expressão da REC, no modelo do MCC. Ratos wistar foram submetidos às sessões de condicionamento aversivo contextual, sendo divididos nos grupos: condicionado (6 choques de 3s; 1,5 mA) e não condicionado (sem choques) . Quarenta e oito horas após esta sessão foram avaliadas a comportamental (congelamento) e respostas autonômicas (PAM, FC e queda da TC). Além disso, foi verificada a distribuição de receptores M1 e M3 nas subáreas do HD e a quantificação dos mesmos em animais condicionados, não condicionados e naive, 48 após a sessão de condicionamento. A microinjeção bilateral de hemicolínio, inibidor da captação de colina, no HD promoveu uma redução do tempo de congelamento durante a reexposição ao contexto aversivo, caracterizando um efeito do tipo ansiolítico. Além disso, este tratamento inibiu o aumento da PAM, FC e a queda da TC induzidos pelo MCC. O mesmo ocorreu com a administração de atropina, antagonista não seletivo de receptores muscarínicos, de forma dose-dependente em todas as respostas observadas. Adicionalmente, a microinjeção de diferentes doses de J104129 fumarate bloquearam o tempo de congelamento (de forma dose-dependente, semelhante a atropina), a elevação da PAM, FC e a queda da TC durante a re-exposição ao contexto aversivo. Como o J104129 fumarate bloqueia receptores muscarínicos tanto M1 quanto M3, foi utilizado um antagonista de maior afinidade para receptores do tipo M1, pirenzepina. Todas as doses utilizadas de pirenzepina inibiram as respostas autonômicas, sem afetar o tempo de congelamento induzidos pelo MCC. A análise de imunofluorescência, por duplamarcação, mostrou que receptores M1 e M3 estão distribuídos nos mesmos compartimentos celulares nas subáreas do HD. A quantificação dos receptores 48 horas após o condicionamento evidencia apenas o aumento de receptores M3 no hipocampo de ratos, sem alteração na população de receptores M1. Com este conjunto de resultados podemos concluir que a ACh no HD é essencial para a expressão da REC. Especificamente, eles sugerem que os receptores muscarínicos do tipo M1 presentes nesta estrutura estão envolvidos com as respostas autonômicas e somente os receptores M3 participam das respostas comportamentais. / During aversive and stressful situations, such as footshock, stillness and restriction of movements, there is an increase in the levels of acetylcholine in rat hippocampus. Moreover, the increasing in the synaptic level of this neurotransmitter is involved with behavioral modulation of contextual fear conditioning (CFC), especially in the dorsal portion, DH. Therefore, this study investigated the involvement of muscarinic receptors in DH of rats in the expression of conditioned emotional response (CER) in the CFC. Moreover, we verified the expression of these receptors in the DH by double labeling immunofluorescence. Male Wistar rats were subjected to aversive contextual conditioning sessions and were divided into two groups: conditioned and unconditioned. Forty-eight hours after this session were evaluated autonomic (mean arterial pressure, MAP, heart rate, HR and tail temperature, TT) and behavioral (freezing) responses. Moreover, the distribution of M1/M3 receptors in subareas of DH was observed and the quantification of these receptors were performed 48 hours after the conditioning session in conditioned, unconditioned and naive animals. The bilateral microinjection of hemicholinium, inhibitor of choline reuptake, in DH, caused a decrease of freezing during re-exposure to the aversive context, featuring an anxiolytic-like effect. Furthermore, this treatment inhibited the increase in MAP, HR and TT drop by CFC. DH muscarinic receptors antagonism evoked by atropine, a non-selective muscarinic antagonist, reduced the freezing, in a dose-dependent manner. Similar reduction was observed in autonomic responses. The selective antagonism of M1/M3 receptors evoked by J104129 fumarate also reduced freezing, in a dose-dependent manner, when compared with control animals. The same effect was observed with autonomic responses in all the tested doses. As J104129 fumarate blocks both M1 muscarinic as M3 muscarinic, was used a higher-affinity M1 antagonist, pirenzepine. All doses inhibited cardiovascular responses and decrease the TT drop, without affecting the freezing induced by CFC. The immunofluorescence analysis revealed that M1 and M3 receptors are distributed in the same cellular compartments in DH. The quantification of receptors showed an increase of M3 receptors in rat hippocampus, while no change in the density of receptors M1 was detected. These findings support that cholinergic neurotransmission present in DH is involved with the expression of responses evoked by fear contextual conditioning, through muscarinic receptors activation. In particular, M3 muscarinic receptors modulate behavioral responses, M1 and M3 muscarinic receptors modulate the autonomic responses.

O rebanho ovino brasileiro tem se intensificado, o que predispõe à maior incidência de transtornos digestivos, como a úlcera de abomaso. A ranitidina é utilizada na prevenção e tratamento desta afecção, no entanto há pouca informação sobre a indicação parenteral deste fármaco para a espécie ovina. São escassas as informações a respeito das alterações metabólicas concomitantes, assim como do comportamento do sistema digestório. Nesse estudo foram utilizados cinco ovinos, machos, hígidos, providos de cânula ruminal e abomasal em delineamento experimental Quadrado Latino 5 x 5, com arranjo fatorial de tratamentos 2 x 2 + 1. Foram testadas as doses de 1mg/kg e 2mg/kg, administradas por via intravenosa, (IV) a cada 12 (BID) e a cada 8 horas (TID) em relação ao grupo controle, tratado com 1 mL de solução fisiológica por 25 kg, IV, BID. Maiores concentrações de proteína total, cálcio, sódio e hemoglobina, maiores atividades de AST e aumento do pH abomasal por 150 minutos foram observados em todos os animais que receberam o fármaco, independentemente de dose e frequência. No grupo tratado BID houve diminuição do número de leucócitos. Na frequência TID houve aumento das concentrações de creatinina e diminuição do cortisol plasmático. Os tratamentos 1 mg/kg TID e 2 mg/kg BID aumentaram o número de hemácias, diminuíram o intervalo entre as contrações reticulares e as concentrações séricas de pepsinogênio. Não foram observadas alterações na dinâmica dos fluidos, no pH ruminal, nas funções vitais e na amplitude das contrações reticulares. A radiografia contrastada foi útil para a avaliação da motilidade abomasal e intestinal. A ultrassonografia em modo-M revelou-se de grande valia na avaliação da amplitude e duração da curva de contração reticular e do intervalo entre as contrações. / The brazilian sheep production intensified, predisposing to increased incidence of digestive disorders such as abomasal ulcers. Ranitidine is used to prevent and treat this disease, however there is little information about the use of parenteral form of the drug in sheep. Data about the concomitant metabolic changes, as well as the behavior of the digestive system is scant. In this study, we used five healthy male sheep with ruminal and abomasal cannula. A Latin Square experiment 5 x 5 with 2 x 2 + 1factorial arrangement of treatments was run. Four levels of 1mg/kg and 2mg/kg administered intravenously (IV) every 12 (BID) and every 8 hours (TID) was compared to the control group, treated with 1 mL of saline per 25 kg, IV, BID. Higher concentrations of total protein, calcium, sodium and hemoglobin, increased AST activity and increased pH abomasum for 150 min were observed in all animals receiving the drug, regardless of dose and frequency. The BID treatment groups showed decrease the number of leukocytes. Increase of creatinine concentrations and decrease of plasma cortisol were observed in the TID group. Treatments 1 mg/kg TID and 2 mg/kg BID increased the number of red blood cells, decreased the interval between reticular contractions and serum pepsinogen. No changes were observed in fluid dynamics, the ruminal pH, vital functions and amplitude of reticular contractions. Contrast administered through abomasal cannula allowed the evaluation of abomasal and intestinal motility by radiography. The M-mode ultrasonography proved valuable in characterizing reticular contraction by the interval of contractions and a contraction curve correlating amplitude and time and.

O exercício resistido dinâmico é recomendado para hipertensos, mas a pressão arterial (PA) se eleva muito durante sua execução. Este estudo investigou o efeito do antagonista do canal de cálcio diidropiridínico, anlodipina, sobre a resposta da PA ao exercício resistido de diferentes intensidades. Onze hipertensos essenciais foram estudados após 4 semanas de uso de placebo e anlodipina, num desenho aleatório e duplo cego. Os voluntários realizaram o exercício de extensão de joelhos até a exaustão, seguindo os seguintes protocolos: a) 1 série em 100% de 1RM, b) 3 séries em 80% de 1RM; e c) 3 séries em 40% de 1RM. Antes e durante os exercícios, a PA foi medida diretamente na artéria radial. A anlodipina reduziu os valores absolutos da PA sistólica (225±6 vs 207±6 mmHg em 100%, 289±8 vs 273±10 mmHg em 80% e 289±10 vs 271±11 mmHg em 40%) e da PA diastólica (141± 3 vs 130±6 mmHg em 100%, 178±5 vs 169±6 mmHg em 80% e 176±8 vs 154±6 mmHg em 40%) em todas as intensidades. Ela também minimizou o aumento da PA diastólica que ocorreu na 2ª e 3ª séries do exercício realizado em 40% de 1 RM. Em conclusão, anlodipina é capaz de diminuir os valores máximos da PA atingidos durante a realização de exercícios resistidos de diferentes intensidades e minimizar o aumento progressivo da PA diastólica em exercícios mais prolongados.Estes efeitos podem reduzir o risco cardiovascular durante a execução de esforços resistidos em hipertensos / Dynamic resistance exercise is recommended for hypertensives. However, during its execution blood pressure (BP) presents a huge increase. This study investigated the effects of dyhidropyridine calcium channel antagonist, amlodipine, on BP responses during resistance exercises executed at different intensities. Eleven essential hypertensives were studied after 4 weeks of placebo and amlodipine administered at a random double blinded order. Volunteers were evaluated during the execution of the knee extension exercise performed with three different protocols: a) 1 set at 100% of 1RM (repetition maximum), b) 3 sets at 80% of 1RM, and c) 3 sets at 40% of 1RM. Before and during exercise, BP was directly measured at the radial artery. Amlodipine reduced the absolute values of systolic BP (225±6 vs 207±6 mmHg at 100%, 289±8 vs 273±10 mmHg at 80% e 289±10 vs 271±11 mmHg at 40%) and diastolic BP (141± 3 vs 130±6 mmHg at 100%, 178±5 vs 169±6 mmHg at 80% e 176±8 vs 154±6 mmHg at 40%) during all the exercise intensities. In addition, it mitigated diastolic BP increase that happened at the second and third sets of the exercise at 40% of 1 RM. In conclusion, amlodipine was able to decrease BP maximal values achieved during resistance exercise at different intensities, and minimizes diastolic BP increase in prolonged resistance exercises. These effects may confer some cardiovascular protection for hypertensives during the execution of resistance efforts

Atualmente, é crescente o interesse em estudar o potencial do Sistema Nervoso Central (SNC) como alvo de medicamentos antidiabéticos, uma vez que ele possui receptores de insulina e desempenha papel crítico na regulação da homeostase glicêmica. Nesse sentido, o Cycloset® (mesilato de bromocriptina de liberação rápida), um medicamento de ação central aprovado nos Estados Unidos para o tratamento do DMT2, atende a essa tendência atual. Trabalhos prévios mostram efeitos benéficos da bromocriptina (Bromo) sobre a hiperglicemia e hiperlipidemia em modelos de animais obesos tratados com essa droga. Por ser um agonista dopaminérgico, um dos possíveis mecanismos de ação dessa droga pode ser bloqueando a liberação e produção de prolactina (Prl). Níveis elevados de prolactina na circulação sanguínea, observados tanto em indivíduos com prolactinomas como em pessoas tratadas com medicamentos que causam hiperprolactinemia, geram anormalidades no metabolismo de carboidratos e lipídeos, o que pode levar a um quadro de síndrome metabólica. Na presente tese, testamos a hipótese de que ao menos parte dos efeitos antidiabéticos da Bromo seja mediada pela inibição da secreção de prolactina. Avaliamos os efeitos do tratamento com Bromo em camundongos machos e fêmeas geneticamente obesos e resistentes à insulina (ob/ob), bem como testamos se os efeitos benéficos do medicamento seriam revertidos com a reposição de Prl. Machos tratados com Bromo apresentaram maior sensibilidade à insulina, enquanto que a reposição de Prl manteve os animais menos sensíveis, tais como os animais do grupo controle. As fêmeas tratadas com Bromo apresentaram tendência à melhora de sensibilidade à insulina, bem como foram mais tolerantes à glicose, sendo que a reposição de Prl em animais tratados com Bromo também reverteu o efeito benéfico do medicamento. Dessa forma, demonstramos que ao menos parte dos efeitos antidiabéticos da Bromo é mediada pela inibição da secreção basal de Prl. Em um segundo conjunto de experimentos, testamos se a administração de antagonistas de prolactina (G129R-hPrlR) em machos ob/ob, por vias centrais ou periféricas, produziria efeito antidiabético. Observamos que tanto o tratamento periférico como o central diminui a curva glicêmica dos animais em testes de tolerância à glicose e melhoram a sensibilidade à insulina, embora ainda não tenhamos obtido valores significativos devido a nossa amostragem. Por fim, investigamos se a ação da Prl sobre o metabolismo ocorre por meio da interação com o receptor de estrógeno alfa (ERα). Verificamos que receptores de prolactina e de ERα são expressos em áreas comuns no SNC e que variações nos níveis circulantes de estrógeno causam mudanças na sensibilidade à prolactina. Portanto, no presente trabalho, identificamos o possível mecanismo pelo qual a Bromocriptina promove melhorias no controle glicêmico e, de forma inédita, produzimos evidências que o uso de antagonistas de prolactina pode ter potencial no tratamento do DMT2. / Type 2 Diabetes mellitus (T2DM) is a syndrome characterized by dysfunctions in the metabolism of glucose, amino acids and free fat acids. Although most of the drugs currently used to treat T2DM targets peripheral organs, a growing interest in studying the Central Nervous System (CNS) as a potential target of antidiabetic drugs is appearing. The CNS possesses insulin receptors and plays a critical role in regulating glucose homeostasis. In this sense, Cycloset® (quick release bromocriptine mesylate) a drug that acts on CNS, was recently approved in United States to treat T2DM. Previous studies have shown beneficial effects of bromocriptine (Bromo) on hyperglycemia and hyperlipidemia in obese animal models. As a dopaminergic agonist, a possible mechanism of action of this drug could be caused by a decreased prolactin (Prl) production and release. High serum prolactin levels, as observed in patients bearing prolactinomas or individuals using drugs that induce hyperprolactinemia, generate abnormalities in carbohydrate and lipid metabolism, which can lead to metabolic syndrome. In the current thesis, we tested the hypothesis that part of bromocriptine antidiabetic effects is due to an inhibition of prolactin secretion. We evaluated Bromo effects in genetically obese and insulin resistant male and female mouse (ob/ob), as well as we tested whether replacing Prl could reverse the beneficial effects of Bromo. Males treated with Bromo showed lower insulin resistence, whereas Prl replacement decreased insulin sensitivity. Females treated with Bromo showed tendency towards an improvement in their insulin sensitivity and glucose tolerance. Prl replacement also reversed the beneficial effects of Bromo in this group. Thus, we demonstrated that at least part of the antidiabetic effects of Bromo is due to inhibition of Prl secretion. In another set of experiments, we tested whether central or peripheral treatment with prolactin antagonists (G129R-hPrlR) causes antidiabetic effects in ob/ob male mice. Both peripheral and central treatment decreased the glycemic curve during glucose and insulin tolerance tests, although we still did not obtain statistically significant values with our sample size. Lastly, we investigated whether metabolic Prl action occurs due to a putative interaction with estrogen receptor alpha (ERα). We found a wide co-expression between Prl receptor and ERα in the CNS. Additionally, changes in estrogen levels decrease prolactin sensitivity. Therefore, in the present study we identified the possible mechanism by which bromocriptine promotes improvements in glycemic control, and for the first time, we obtained evidence that the use of prolactin antagonists can have a potential effect in the treatment of T2DM.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-08-17T13:45:07Z No. of bitstreams: 1 2010 - Emmer?s Ivan Q. Quintero.pdf: 1261300 bytes, checksum: 0078bde3a7d0a80eea89948870dd7901 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T13:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Emmer?s Ivan Q. Quintero.pdf: 1261300 bytes, checksum: 0078bde3a7d0a80eea89948870dd7901 (MD5) Previous issue date: 2010-03-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Studies were performed in the experimental area of Embrapa Agrobiologia, region - RJ, in order to evaluate the association of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) with a variety of banana ?Grand nine ", and the potential antagonist in AMF biocontrol nematodes. We also tested biological indicators and products as alternatives to monitoring and restoration of ecosystems with bananas. The first study evaluated the microbial activity in soil samples from two management systems with bananas in the municipality of Casimiro de Abreu, RJ. In the second study, was evaluated the AGAS organic product for the control of nematodes in banana. In the third, was evaluated the potential antagonist in AMF biocontrol nematode Radophulus similis and their contribution in the development of banana plants in the greenhouse. In the fourth study was estimated the effect of using two management systems with bananas in the community of soil fauna in Casimiro de Abreu, RJ. The indices of diversity, richness and density of macrofauna groups was calculate in each system. The results indicated no significant differences between management systems in relation to carbon and nitrogen levels of microbial biomass and soil organic carbon ratio vs. carbon microbial biomass in each season, while the variables soil basal respiration and metabolic quotient indicated that the organic farming system was greater efficiency of microbial biomass and the use of substrate by soil microorganisms than the system with conventional tillage. The organic product AGAS showed significant difference in population of the nematode Meloidogyne spp. and Radophulus similis both in samples of roots after 60 days of treated. In the field was control to phytoparasitic R. similis with the AGAS treatment showing a decrease in soil at 120 days. In the laboratory tests were performed with R. similis and the results demonstrated that the effects of exposure of nematodes to organic product showed a high percentage of control, especially in higher dosages with a 100% with respect to the nematicide effect in Radophulus. Regarding the development of plants in treatments with species of arbuscular mycorrhizal fungi inoculated in banana no significant difference. The foliar phosphorus analyzed varied significantly in the treatment with the fungus Scutellospora calospora, and foliar calcium and magnesium for the treatments with fungi: S. calospora, Entrhopospora colombiana and S. calospora + Glomus clarum. AMF reduced the population of the nematode R. similis in roots of banana plants in a greenhouse, and S. calospora and G. clarum were the most efficient. In soil macrofauna results indicated a reduction in the banana organic system, with lower density and lower richness of taxonomic groups when compared with the conventional system. The group of decomposers and predators showed better soil quality in organic farming system especially in the summer due to its greater diversity and density at this season of year. / Os trabalhos foram realizados com o objetivo de avaliar a associa??o de fungos micorr?zicos arbusculares (FMAs) com a variedade de banana ?Grand nine?, e o potencial antagonista dos FMAs no biocontrole dos nemat?ides. Tamb?m foram testados indicadores e insumos biol?gicos como alternativas para recupera??o e monitoramento de ecossistemas pertubados com bananeiras. O primeiro estudo avaliou a atividade microbiana do solo em amostras de dois sistemas de manejo com bananeiras no municipio de Casimiro de Abreu, RJ. No segundo estudo avaliou-se o insumo org?nico com ?cido glut?mico e saponinas (AGAS) para o controle de nemat?ides em bananeiras na Pesagro, Serop?dica, RJ. O terceiro avaliou o potencial antagonista dos FMAs no biocontrole do nemat?ide Radophulus similis e seu aporte no desenvolvimento de plantas de bananeira em casa de vegeta??o da Embrapa Agrobiologia. No quarto estudo se estimou o efeito do uso de dois sistemas de manejo com bananeiras na comunidade da macrofauna ed?fica em Casimiro de Abreu, RJ. Foram calculados os ?ndices de biodiversidade, riqueza e densidade dos grupos de macrofauna em cada sistema. Os resultados indicaram que n?o houve diferen?a significativa entre sistemas de manejo com rela??o a valores de carbono e nitrog?nio da biomassa microbiana, e rela??o carbono org?nico vs carbono da biomassa microbiana nas ?pocas de ver?o e inverno, enquanto que as vari?veis respira??o basal do solo e quociente metab?lico indicaram que no sistema com cultivo org?nico houve uma maior efici?ncia da biomassa microbiana e do uso do substrato pelos microorganismos do solo do que o sistema com cultivo convencional. O produto org?nico AGAS proporcionou uma redu??o nos ?ndices populacionais de Meloidogyne spp nas doses de 1,51 e 2,02 ml.cm?? e de Radophulus similis na dose de 2,02 ml.cm?? ambos nas amostras de ra?zes ap?s 60 dias das plantas serem tratadas. No campo houve redu??o da popul??o de R. similis no solo aos 120 dias ap?s o tratamento com AGAS nas doses de 0,5 e 1,0 ml.cm??. No laborat?rio, quando diferentes estadios de R. similis foram expostos ao produto AGAS nas doses 1,0; 1,5 e 2,0 ml.m?? observou-se uma alta taxa de mortalidade chegando a 100% nas doses mais altas demonstrando efeito nematicida ?in vitro?. Com rela??o ao desenvolvimento das plantas, nos tratamentos com esp?cies de fungos micorr?zicos arbusculares inoculadas em plantas de bananeiras n?o houve diferen?a significativa. Por?m o teor de f?sforo foliar analisado aumentou significativamente no tratamento com o fungo Scutellospora calospora, e nos teores foliares de c?lcio e magn?sio para os tratamentos com os fungos: S. calospora, Entrhopospora colombiana e S. calospora+Glomus clarum. Os FMAs reduziram a popula??o do nemat?ide R. similis nas ra?zes das plantas de bananeira em casa de vegeta??o, sendo que S. calospora e G. clarum foram as mais eficientes. Na macrofauna do solo os resultados indicaram uma redu??o no sistema org?nico com bananeira, apresentando menor densidade e menor riqueza de grupos taxon?micos quando comparado com o sistema convencional. Os grupos decompositores e predadores apresentaram no ver?o a maior diversidade e densidade indicando uma melhor qualidade do solo no sistema com cultivo org?nico.

Durante situações aversivas, como choque nas patas, imobilidade ou restrição dos movimentos, há um aumento nos níveis de acetilcolina no hipocampo de ratos. Além disso, o aumento desse neurotransmissor está envolvido com a modulação comportamental do MCC, principalmente em sua porção dorsal, HD. Diante disso, é proposto neste estudo que os receptores muscarínicos presentes no HD de ratos, modulam a expressão da REC, no modelo do MCC. Ratos wistar foram submetidos às sessões de condicionamento aversivo contextual, sendo divididos nos grupos: condicionado (6 choques de 3s; 1,5 mA) e não condicionado (sem choques) . Quarenta e oito horas após esta sessão foram avaliadas a comportamental (congelamento) e respostas autonômicas (PAM, FC e queda da TC). Além disso, foi verificada a distribuição de receptores M1 e M3 nas subáreas do HD e a quantificação dos mesmos em animais condicionados, não condicionados e naive, 48 após a sessão de condicionamento. A microinjeção bilateral de hemicolínio, inibidor da captação de colina, no HD promoveu uma redução do tempo de congelamento durante a reexposição ao contexto aversivo, caracterizando um efeito do tipo ansiolítico. Além disso, este tratamento inibiu o aumento da PAM, FC e a queda da TC induzidos pelo MCC. O mesmo ocorreu com a administração de atropina, antagonista não seletivo de receptores muscarínicos, de forma dose-dependente em todas as respostas observadas. Adicionalmente, a microinjeção de diferentes doses de J104129 fumarate bloquearam o tempo de congelamento (de forma dose-dependente, semelhante a atropina), a elevação da PAM, FC e a queda da TC durante a re-exposição ao contexto aversivo. Como o J104129 fumarate bloqueia receptores muscarínicos tanto M1 quanto M3, foi utilizado um antagonista de maior afinidade para receptores do tipo M1, pirenzepina. Todas as doses utilizadas de pirenzepina inibiram as respostas autonômicas, sem afetar o tempo de congelamento induzidos pelo MCC. A análise de imunofluorescência, por duplamarcação, mostrou que receptores M1 e M3 estão distribuídos nos mesmos compartimentos celulares nas subáreas do HD. A quantificação dos receptores 48 horas após o condicionamento evidencia apenas o aumento de receptores M3 no hipocampo de ratos, sem alteração na população de receptores M1. Com este conjunto de resultados podemos concluir que a ACh no HD é essencial para a expressão da REC. Especificamente, eles sugerem que os receptores muscarínicos do tipo M1 presentes nesta estrutura estão envolvidos com as respostas autonômicas e somente os receptores M3 participam das respostas comportamentais. / During aversive and stressful situations, such as footshock, stillness and restriction of movements, there is an increase in the levels of acetylcholine in rat hippocampus. Moreover, the increasing in the synaptic level of this neurotransmitter is involved with behavioral modulation of contextual fear conditioning (CFC), especially in the dorsal portion, DH. Therefore, this study investigated the involvement of muscarinic receptors in DH of rats in the expression of conditioned emotional response (CER) in the CFC. Moreover, we verified the expression of these receptors in the DH by double labeling immunofluorescence. Male Wistar rats were subjected to aversive contextual conditioning sessions and were divided into two groups: conditioned and unconditioned. Forty-eight hours after this session were evaluated autonomic (mean arterial pressure, MAP, heart rate, HR and tail temperature, TT) and behavioral (freezing) responses. Moreover, the distribution of M1/M3 receptors in subareas of DH was observed and the quantification of these receptors were performed 48 hours after the conditioning session in conditioned, unconditioned and naive animals. The bilateral microinjection of hemicholinium, inhibitor of choline reuptake, in DH, caused a decrease of freezing during re-exposure to the aversive context, featuring an anxiolytic-like effect. Furthermore, this treatment inhibited the increase in MAP, HR and TT drop by CFC. DH muscarinic receptors antagonism evoked by atropine, a non-selective muscarinic antagonist, reduced the freezing, in a dose-dependent manner. Similar reduction was observed in autonomic responses. The selective antagonism of M1/M3 receptors evoked by J104129 fumarate also reduced freezing, in a dose-dependent manner, when compared with control animals. The same effect was observed with autonomic responses in all the tested doses. As J104129 fumarate blocks both M1 muscarinic as M3 muscarinic, was used a higher-affinity M1 antagonist, pirenzepine. All doses inhibited cardiovascular responses and decrease the TT drop, without affecting the freezing induced by CFC. The immunofluorescence analysis revealed that M1 and M3 receptors are distributed in the same cellular compartments in DH. The quantification of receptors showed an increase of M3 receptors in rat hippocampus, while no change in the density of receptors M1 was detected. These findings support that cholinergic neurotransmission present in DH is involved with the expression of responses evoked by fear contextual conditioning, through muscarinic receptors activation. In particular, M3 muscarinic receptors modulate behavioral responses, M1 and M3 muscarinic receptors modulate the autonomic responses.

L'inhibidor de carboxipeptidasa de patata (PCI) és un antagonista de l'EGF. Un dels problemes del PCI, però, és la baixa afinitat per l'EGFR en comparació amb el lligand natural. En aquest treball s'han dissenyat nous bloquejadors de la via ErbB partint de l'estructura de l'EGF per tal d'augmentar l'afinitat d'unió. S'ha determinat que les variants tenen reduïda la capacitat d'activació del receptor però segueixen promovent la proliferació cel·lular. Tot i així, s'ha obtingut una variant, l'EGF Truncat, que tot i no estar correctament plegada, és la que ofereix uns millors. També s'ha dut a terme un tractament combinat entre el PCI i un inhibidor de tirosin quinases d'aquesta mateixa via, l'Iressa. Els resultats han posat de manifest que hi ha un antagonisme entre els dos tractaments. Aquesta és la primera vegada que s'associa de forma directa un tipus de tractament amb una resistència associada a l'activació de la producció autocrina de lligands, i representa un avenç molt important en la recerca oncològica. / Potato carboxypeptidase inhibitor (PCI) is an EGF antagonist. One of the main problems of PCI is its low affinity for EGFR in comparison to the natural ligand. In this study, blockers of the ErbB pathway have been designed taking as a model the EGF structure, in order to increase binding affinity. It has been observed that the variants have less ability to activate the receptor but they still promote cell proliferation. Nevertheless, the variant called Truncated EGF, although being unfolded, is the one that shows best perspectives.A combined treatment using PCI and a tyrosine kinase inhibitor of the same pathway, Iressa, has also been carried out. Results have shown that there is an antagonism between both treatments. This is the first time that a treatment is associated to resistance involving autocrine loop activation of ligands, and it represents a very important finding in the oncologic research.

The cowpea, Vigna unguiculata (L.) Walp., is known as feijão-de-corda and feijão-verde , among others, is one of the main cultures exploited by small producers of the Northeast region of Brazil. Among the phytopathogens that affects its productivity, Sclerotium rolfsii Sacc. is noteworthy, causing the stem rot in several cultures around the world. The objective of this work was to evaluate the alternative control of S. rolfsii Sacc. in saplings of V. unguiculata (L.) Walp. trough the biocontrol of antagonists, organic residues incorporation to the soil, utilization of essential oils, plant extracts and mineral nutrition. The work was developed in the Laboratory de Phytopathology and in the vegetation house of CECA/UFAL. The pathogen was obtained trough the isolations of cowpea with symptoms of the disease and, afterwards, it was cultivated in sterilized rice. For in vitro control, the antagonists isolates were matched with the pathogen in PDA medium, for the purpose of evaluating the reduction of growth and the hyperparasitism. For the biofumigations of the soil, the organic materials poultry litter, mussel, sugar cane bagasse, bean residue, cassava scuff were dehydrated in stove at 55ºC for 96h, grinded in the concentrations of 10% and 20% (v/v) and incorporated to the substrate, infested for 20 days and compared to the group treated with methyl thiophanate and to the control. After thirty days, the seedlings were evaluated about the incidence and the suppression of the disease. In the in vivo control the seeds were microbiolized with antagonists (C110, C21, ENF24, R14 and Trichoderma harzianum), the fungicide and saline solution for the control. The substrate was infested with the pathogen, two days after the sow, and after 30 days were evaluated. For the natural substances, 21 days old seedlings were pulverized with cassava flour wastewater extract (40%), eucalyptus oil (1%), peppermint (1%), Ecolife® (2%), methyl thiophanate (0,7 g/L) and water for the control and after two days, the substrate was infested with the pathogen. Six days after the inoculation, a new pulverization was done. The mineral fertilization was done in the sow trough Sarruge solution and doses of calcium silicate and sodium, 50, 100, 500 and 1000mg/L-1 and water for the control. The substrate was infested two days after that and a second fertilization was done 10 days after the sow. After 30 days the evaluations took place. The antagonists R14, C16, ENF 24 and T. harzianum inhibited the pathogen with RC from 42 up to 57%. Trichoderma has the hyperparasitic capacity. The incorporation of organic material was not efficient in the control of the disease. The in vivo antagonists reduced the incidence of the disease, but it was effective in the suppression. The oils and plant extracts were not efficient in reduced the incidence. The mineral fertilizations was not able to suppress the disease. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O feijão-caupi, Vigna unguiculata (L.) Walp., é conhecido como feijão-de-corda e feijão-verde sendo uma das principais culturas exploradas pelos pequenos produtores no Nordeste brasileiro. Dentre os fitopatógenos que afetam sua produtividade, destaca-se Sclerotium rolfsii Sacc. que causa a podridão de colo em diversos cultivos do mundo. O objetivo do trabalho foi avaliar o controle alternativo de S. rolfsii Sacc. em mudas de V. unguiculata (L.) Walp. através do uso de antagonistas, incorporação de resíduos orgânicos ao solo, utilização de óleos essenciais, extratos vegetais e ecolife® e nutrição mineral. O trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Fitopatologia e em casa de vegetação do CECA/UFAL. O patógeno foi obtido pelo isolamento de folhas de feijão-caupi com sintomas da doença e depois cultivados em arroz esterilizado. Para controle in vitro , os isolados de antagonistas foram pareados com o patógeno em meio de BDA, para avaliar a redução de crescimento micelial (RC) e o hiperparasitismo. Para a biofumigação do solo, as matérias orgânicas cama de frango, marisco, bagaço de cana, resíduo de feijão, raspa de mandioca foram desidratadas em estufa 55ºC por 96h, moídas e incorporadas ao substrato infestado, em concentrações de 10% e 20% (v/v) por 20 dias e comparadas ao tiofanato metílico e a testemunha. Após 30 dias, as plantas foram avaliadas quanto à incidência da doença e desenvolvimento da planta. No controle in vivo as sementes foram microbiolizadas com os antagonistas (C110, C21, ENF24, R14 e Trichoderma harzianum), o fungicida e água salina para testemunha. O substrato foi infestado com o patógeno, dois dias após o semeio foram avaliadas com 30 dias. Para as substâncias naturais, plantas de feijão-caupi, com 21 dias de idade foram pulverizadas com extrato de manipueira (40%), óleo de eucalipto (1%), hortelã pimenta (1%), Ecolife® (2%), tiofanato metílico (0,7 g/L) e água para a testemunha. Após dois dias, o substrato foi infestado com o patógeno. Ao completar seis dias da infestação, uma nova pulverização foi realizada. A adubação mineral foi realizada no semeio através de solução de Sarruge e doses de silicato de cálcio e sódio, 50, 100, 500 e 1000mg/L-1 e água para testemunha. O substrato foi infestado dois dias depois e uma segunda adubação foi feita 10 dias após o semeio. Os antagonistas R14, C16, ENF 24 e T. harzianum inibiram o patógeno com RC de 42 a 57%. Trichoderma teve capacidade hiperparasitária. A incorporação da matéria orgânica não foi eficiente no controle da doença. Os antagonistas in vivo reduziram a incidência da doença e contribuiu para o desenvolvimento das plantas. Os óleos e extratos vegetais não foram eficientes em reduzir a incidência da doença. A adubação mineral não foi capaz de suprimir a doença.