Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T01:11:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Micas_AndreFernandoDitondo_M.pdf: 1496595 bytes, checksum: c51897315ae5950ced334700741f31cf (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A violaceína é um composto indol, de intensa cor violeta que é produzido por Chromobacterium violaceum, uma bactéria ubíqua de zonas tropicais e subtropicais. Esta molécula apresenta inúmeras propriedades antimicrobianas, tais como agente antimicótico, antiviral e atividade contra certos protistas. Observações importantes apontam para uma atividade bactericida considerável, tornando premente um estudo mais aprofundado a cerca desta propriedade. No presente trabalho sondou-se a sensibilidade a este composto para algumas bactérias de interesse médico e um fitopatógeno, sua cinética de inibição do crescimento bacteriano, assim como se obtiveram importantes pistas sobre o mecanismo de ação. Foi encontrada atividade inibitória considerável para Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis, com uma maior inibição durante a fase estacionária, assim como para Xanthomonas axonopodis p.v passifloraceae. Através de micrografias eletrônicas pôde-se constatar profundas alterações na parede celular em S. aureus, indicando esta estrutura como sítio de atuação da violaceína, assim como através de espectrometria de massa (MALDI-TOF) a identificação de proteínas diferencialmente expressas por S. aureus na presença ou ausência de violaceína, indicando uma grande perturbação no metabolismo bacteriano, com inibição a alguns fatores de patogenicidade e também inibição da síntese protéica / Abstract: Violacein is a deeply violet indol compound produced by Chromobacterium violaceum, an ubique tropical and subtropical bacterium. This molecule presents many antimicrobial properties, like antimycotic, antiviral and activity against some protists. Important reports pointed to a considerable bactericide activity, which brings an extremely necessary quest. This work evaluated the resistance of many clinical bacteria, the violacein kinetic of bacterial growth inhibition and some cues about the mechanism of action of this molecule. It was obtained significant inhibition activity against Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Xanthomonas axonopodis p.v passifloraceae. From transmission electron micrographs it was observed profound disturbs on S. aureus cell wall, which indicates this structure as violacein site of action. By using mass spectrometry (MALDI-TOF) of proteins differently expressed from bidimensional gel electrophoresis of S. aureus treated and not-treated with violacein, it was found a strong metabolic disturb, with inhibition of some pathogenical factors and inhibition of proteic synthesis / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Angela Maria Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-11T09:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_AnaPaula_D.pdf: 12266653 bytes, checksum: 0091b801b742b9245223c7939d5484c2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As membranas poliméricas destinadas ao tratamento de lesões cutâneas ou internas podem ser constituídas por vários tipos de polímeros, sendo a quitosana e o alginato compostos freqüentemente empregados para tal finalidade. Enquanto a quitosana é um aminopolissacarídeo derivado da quitina, o alginato é um polissacarídeo extraído de algas. Ambos são atóxicos, biocompatíveis e facilitam a cicatrização de feridas. Frente a isto, a obtenção de membranas de quitosana-alginato para serem utilizadas na terapia de lesões, como curativos, mostra-se de grande relevância. Neste contexto, este trabalho visou o desenvolvimento de metodologia escalonável de preparação e a caracterização de membranas de quitosana e alginato (contendo ou não bacitracina), empregando distintas condições controladas de vazão e agitação durante a mistura dos polissacarídeos. Em adição, o efeito da utilização do plastificante glicerol na preparação das membranas de quitosana-alginato, bem como a comparação das propriedades das mesmas às daquelas constituídas somente por quitosana, foi realizado. As membranas foram caracterizadas quanto à espessura, à capacidade máxima de absorção de diferentes soluções aquosas, à capacidade de drenagem de água, à perda de massa quando estocadas em água e em outros solventes, à resistência mecânica, à permeabilidade ao oxigênio e ao vapor d¿água, à eficácia na proteção contra permeação de bactérias, à eficiência de incorporação de bacitracina, à morfologia de superfície antes e após a exposição à bacitracina, ao desempenho quanto à formação de halo de inibição antes e após a incorporação do fármaco e quanto ao desempenho in vivo. Os resultados mostraram que membranas de quitosanaalginato isentas de glicerol, capazes de absorver em torno de 19,2 g H2O/g membrana seca, com capacidade de drenagem de água de até 14.343 g/m2-dia, resistência à tração em torno de 30 MPa, eficazes contra a permeação de bactérias, com permeabilidade ao vapor d_ água de 2.678 g/m2-dia, eficiência de incorporação de bacitracina de até 25% e desempenho adequado in vivo foram obtidas pelo procedimento proposto, sugerindo assim, que as membranas de quitosana-alginato obtidas neste trabalho apresentam bom potencial para serem utilizadas como curativos temporários na terapia de lesões / Abstract: Polymeric membranes developed to treat cutaneous or internal lesions can be constituted by several types of polymers, being chitosan and alginate frequently employed for this purpose. While chitosan is a deacetylated derivative of chitin, alginate is a natural linear polysaccharide obtained from seaweed. Both polysaccharides are nontoxic, biodegradable and biocompatible, and in addition, show healing properties. In this way, the production of chitosan-alginate membranes designed to be used on lesion terapy, as wound dressings, is particularly relevant. In this context, this work focused the development of a reproducible and easy to scale up methodology to prepare and characterize chitosan-alginate membranes (containing or not bacitracin). Different controlled conditions of flow rate and stirring rate were employed during the mixture of both polysaccharides. In addition, the effects of glycerol utilization on chitosan-alginate membrane characteristics, as well as the comparison of the properties of the obtained membranes to those of membranes containing only of chitosan, was performed. The membranes were characterized regarding thickness, maximum uptake capacity of different aqueous solutions, water drainage ability, percentage of mass loss when stored in water and in other solvents, tensile strength and strain at break, permeability to water vapor and oxygen, effectiveness of protection against bacterial permeation, bacitracin incorporation efficiency, morphology before and after exposure to bacitracin, formation of inhibition zone before and after bacitracin incorporation and in vivo performance. The results obtained showed that glycerol-free chitosan-alginate membranes, able to absorb around 19.2 g H2O/g membrane, with water drainage ability up to 14,343 g/m2-day, tensile strength around 30 MPa, effective against bacterial penetration, with water vapor permeability around 2,678 g/m2-day, bacitracin incorporation up to 25% and adequate performance in vivo can be obtained by the proposed procedure, suggesting that the chitosan-alginate membranes obtained in this work have good potential to be used as temporary dressings on lesions terapy / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T14:44:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Francesco Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 3313694 bytes, checksum: 5cb9779c379ed9f47de7c0d65abeb95b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T14:47:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Francesco Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 3313694 bytes, checksum: 5cb9779c379ed9f47de7c0d65abeb95b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T14:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Francesco Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 3313694 bytes, checksum: 5cb9779c379ed9f47de7c0d65abeb95b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The actinobacteria constitute a wide and diverse phylum of gram-positive bacteria with a high content of guanine and cytosine in their DNA, standing out by the production of secondary metabolites with antibiotic activity. The treatment of multi-drug resistant pathogens infections and cancer represents a major challenge for modern medicine and bioactive microbial metabolites constitute a rich source of antimicrobial and antitumor drugs. The main aim of this study was to analyse the potential antimicrobial and cytotoxic activities of actinobactéria isolated from various habitats. The evaluation of these bioactivities was accomplished by the application of a set of qualitative screening in vitro assays. From a total of 19 morphospecies, isolated from the goiano Cerrado soil, 16 were evaluated in the primary antimicrobial activity tests, of which 5 (31,25%) antagonized the growth of indicator microorganisms. The ECL of the morphospecie BC-A22 and the crude extracts of the strain ADU 1.3 stood out for their strong antibiotic action against MRSA. The most of the crude extracts exhibited lytic action on the staphylococcal cell wall. Only ECLs of morphospecies GUARA 1 and PEG 23 and extracts of the strain PEG 30 were cytotoxic against A. salina in low concentration. None of the extracts showed an intercalation effect on the DNA molecule. With exception of BC-A22, the other six isolates were morphologically characterized as members of the Streptomyces genus. The morphospecie ADU 1.3 was molecularly identified as Streptomyces sp., highly likely to consist of a new species. The results of this initial phase of microbial bioprospecting highlight that all the isolates are potential producers of antibiotics biomolecules, excelling the morphospecie BC-A22, which exhibited a strong antimicrobial activity against the clinical isolates of MRSA and most of gram-negative bacteria. / As actinobactérias compõem um amplo e diverso filo de bactérias gram-positivas com elevado conteúdo de guanina e citosina em seu DNA, destacando-se pela produção de metabólitos secundários com atividade antibiótica. O tratamento das infecções por patógenos multirresistentes aos antimicrobianos e do câncer representa um dos maiores desafios da medicina moderna e moléculas microbianas bioativas ainda constituem uma fonte rica de drogas antimicrobianas e antitumorais. O objetivo principal do presente estudo foi analisar as potenciais ações antimicrobiana e citotóxica de actinobactérias isoladas de vários habitats. A avaliação dessas bioatividades foi efetuada mediante aplicação de uma série de ensaios qualitativos de triagem in vitro. Do total de 19 morfoespécies, isoladas do solo de Cerrado goiano, 16 foram avaliadas nos testes primários de atividade antimicrobiana, das quais 5 (31,25%) antagonizaram o crescimento dos micro-organismos indicadores. O ECL da morfoespécie BC-A22 e os extratos brutos do isolado ADU 1.3 se sobressaíram quanto a sua alta ação antibiótica frente à MRSA. A maioria dos extratos brutos exibiu ação lítica sobre a parede celular estafilocóccica. Apenas os ECLs das morfoespécies GUARA 1 e PEG 23 e os extratos do isolado PEG 30 foram citotóxicos a A. salina em baixa concentração. Nenhum dos extratos mostrou efeito de intercalação sob a molécula de DNA. Com exceção de BC-A22, os seis isolados foram caracterizados morfologicamente como membros do gênero Streptomyces. A morfoespécie ADU 1.3 foi identificada molecularmente como Streptomyces sp., com alta probabilidade de consistir em uma espécie nova. Os resultados obtidos dessa etapa de bioprospecção inicial evidenciam que todos os sete isolados são potenciais produtores de biomoléculas antibióticas, notabilizando-se a morfoespécie BC-A22, que exibiu uma alta ação antimicrobiana frente aos MRSA hospitalares e a maior parte das bactérias gram-negativas. Palavras-chave: actinobactérias; bioprospecção microbiana; metabólitos bioativos; antibióticos.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T06:57:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Laurivê Antônio dos Santos Júnior - 2015.pdf: 5217600 bytes, checksum: 7f6935b2ba3d2fba5d6b3a116bca276f (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T07:08:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Laurivê Antônio dos Santos Júnior - 2015.pdf: 5217600 bytes, checksum: 7f6935b2ba3d2fba5d6b3a116bca276f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T07:08:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Laurivê Antônio dos Santos Júnior - 2015.pdf: 5217600 bytes, checksum: 7f6935b2ba3d2fba5d6b3a116bca276f (MD5) Previous issue date: 2015-09-28 / Antibiotics are widely used in human and veterinary medicine. After consumption, much of the drug is excreted unchanged or in the form of metabolites, and through the release of sewage treatment plants, agricultural waste and leaching, reach natural ecosystems. The occurrence of antibiotics in aquatic environments has become a growing concern worldwide mainly due to the emergence of resistance genes in pathogenic bacteria. The indiscriminate use and the use of subtherapeutic doses of antibiotics cause the emergence of resistance. In Goiás, a recent survey showed the presence of bacteria resistant to multiple antibiotics in hospital wastewater and Goiania sewage treatment plant. The wastewater treatment processes based on biological degradation have low efficiency of removal of residual drugs due to recalcitrant structure and biocide effect of antibiotics. The objective of this research was to evaluate the efficiency of hydrothermal decomposition of the antibiotic ampicillin, enrofloxacin, oxytetracycline, and tylosin sulphaquinoxaline. For this purpose, the antibiotic solutions were prepared at a concentration of 50 μg.mL-1 and pH correction to the range 3-7, with phosphoric acid solution for the hydrothermal carbonization treatment. Treatment by the hydrothermal carbonization process of oxytetracycline with pH adjustment made with phosphoric acid, pH 3, 170 ° C temperature and 90 minutes reaction time showed total decomposition as a result of this antibiotic (100%). The highest decomposition rate (98.37%) for enrofloxacin was observed when they were used the reaction time of 120 minutes, pH 3, 200 ° C temperature and phosphoric acid as a catalyst. The highest decomposition rate of ampicillin (94.86%) was observed when using time of 120 minutes reaction, pH 4, 200 ° C temperature and phosphoric acid as a catalyst. The most suitable conditions for the decomposition of sulphaquinoxaline, observing the greatest reduction rate (95.71%) was observed when they were used the reaction time of 120 minutes, pH 5, temperature 180 ° C and phosphoric acid as a catalyst. All conditions, except for the pH 7, led to complete decomposition of tylosin (100%) of the samples. The best condition for the decomposition of tylosin, observing a lower energy expenditure, and reaction time spent catalyst was one which was used 90 minutes reaction time, pH 4, 180 ° C temperature and phosphoric acid as a catalyst. In the germination test with Allium cepa, the solutions treated, except ampicillin, had similar germination rates found in the control group. The solutions of antibiotics with no treatment showed higher rates of growth of buds when compared to the control group. These results show that the hydrothermal carbonization process has potential for future applications decomposition of antibiotics in contaminated water and effluent. / Antibióticos são largamente utilizados na medicina humana e veterinária. Após o consumo, grande parte dos fármacos é excretada inalterada ou sob forma de metabólitos, e por intermédio dos lançamentos de estações de tratamento de esgotos, resíduos agrícolas e lixiviação, alcançam os ecossistemas naturais. A ocorrência de antibióticos nos ambientes aquáticos tem se tornado uma preocupação crescente em todo o mundo especialmente devido ao aparecimento de genes de resistência em bactérias patogênicas. O uso indiscriminado e a utilização de doses subterapêuticas de antibióticos provocam o surgimento de resistência. Em Goiás, uma pesquisa recente demonstrou a presença de bactérias resistentes a vários antibióticos em efluentes hospitalares e na estação de tratamento de esgotos de Goiânia. Os processos de tratamento de efluentes baseados na degradação biológica apresentam baixa eficiência de remoção de fármacos residuais devido à estrutura recalcitrante e ao potencial biocida dos antibióticos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficiência da decomposição hidrotermal dos antibióticos ampicilina, enrofloxacina, oxitetraciclina, sulfaquinoxalina e tilosina. Com este intuito, soluções dos antibióticos foram preparadas com concentração de 50 μg.mL-1 e com correção de pH para a faixa 3-7, com solução de ácido fosfórico, para o tratamento com carbonização hidrotermal. O tratamento pelo processo de carbonização hidrotermal da oxitetraciclina com correção de pH feita com ácido fosfórico, pH 3, temperatura de 170ºC e tempo de reação de 90 minutos apresentou como resultado a decomposição total deste antibiótico (100%). A maior taxa de decomposição (98,37%) para a enrofloxacina foi observada quando foram utilizados tempo reacional de 120 minutos, pH 3, temperatura de 200ºC e ácido fosfórico como catalisador. A maior taxa de decomposição da ampicilina (94,86%) foi observada quando se utilizou tempo de reação de 120 minutos, pH 4, temperatura de 200ºC e ácido fosfórico como catalisador. As condições mais adequadas para a decomposição da sulfaquinoxalina, observando a maior taxa de redução (95,71%), foi observada quando foram utilizados tempo reacional de 120 minutos, pH 5, temperatura de 180ºC e ácido fosfórico como catalisador. Todas as condições, exceto o pH 7, levaram a decomposição total da tilosina (100%) das amostras. A melhor condição para a decomposição da tilosina, observando menor gasto energético, tempo reacional e gasto de catalisador, foi aquela onde se utilizou tempo de reação de 90 minutos, pH 4, temperatura de 180ºC e ácido fosfórico como catalisador. No teste de germinação com Allium cepa, as soluções tratadas, exceto a ampicilina, apresentaram taxas similares de germinação as encontradas no Grupo Controle. As soluções dos antibióticos sem tratamento apresentaram taxas superiores de crescimentos dos brotos quando comparadas ao Grupo Controle. Esses resultados mostram que o processo de carbonização hidrotermal apresenta potencial para futuras aplicações de decomposição de antibióticos em águas e efluentes contaminados.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T17:21:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Paulo Roberto Faria - 2012.pdf: 1827212 bytes, checksum: 3a1276717070b5a5dcde3f3289329041 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T17:40:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Paulo Roberto Faria - 2012.pdf: 1827212 bytes, checksum: 3a1276717070b5a5dcde3f3289329041 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T17:40:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Paulo Roberto Faria - 2012.pdf: 1827212 bytes, checksum: 3a1276717070b5a5dcde3f3289329041 (MD5) Previous issue date: 2012-08-10 / In micropropagation, plant tissue fragments called explants are isolated aseptically, disinfected and cultured in culture medium. However, oxidation and contamination are the main problems in the initiation of the tissue culture plants. In order to initiate the establishment of in vitro methodologies for selected sugarcane varieties a series of decontaminating treatments were performed in shoot tips with different exposure times and concentrations of sodium hypochlorite, casugamicin, ethanol and mercuric chloride. There were no problems with oxidation in any treatment. The use of reagent concentrations and times tested showed not be phytotoxic. Treatment using longer times of exposure to casugamicin and sodium hypochlorite obtained the lowest levels of contamination by fungi and bacteria. However, bacterial contamination rates were high which indicates the necessity of using new procedures for the decontamination process. It is known that the sugarcane is associated with different endophytic bacteria. In order to better study these endophytic bacteria and their relationship with the host plant, promoted the isolation of bacteria in explants of five different varieties of sugarcane: RB98710, RB34068, RB034130, RB034120 and RB034041 to determinate of morphological and physiological characteristics. The thirteen isolates have diversity for morphological and biochemical staining and are characterized as gram-positive. All of them had a production capacity of plant growth factors, and after antimicrobial susceptibility testing, two antibiotics: Ciprofloxacin and Ceftazidime showed the greatest potential for controlling the growth of the isolates. With microbial contamination controlled, studies were conducted to evaluate the effect of growth regulators on in vitro multiplication of shoot tip culture and its roots in three sugarcane varieties: RB98710, RB034041 and RB034130. We used liquid MS medium containing BAP, KIN, NAA and GA3 in different combinations and concentrations. The results showed that, for the three varieties tested, MS medium with 0.2 mg.L-1 BAP and 0.1 mg L-1 KIN are most suitable for higher production of shoots and that the best rooting results were obtained in semi-solid ½ MS medium with 6% sucrose, 5.0 mg L-1 NAA and 0.2% activated charcoal. The plantlets were acclimatized and survivability under ex vitro conditions was 90%, three weeks after the transfer to the greenhouse. / Na micropropagação, fragmentos de tecidos vegetal chamados explantes são isolados, desinfetados e cultivados assepticamente em meio de cultura. Porém, a oxidação e a contaminação são os principais problemas no início do processo de cultura de tecidos de plantas. Com o objetivo de iniciar metodologias de estabelecimento in vitro de variedades selecionadas de cana-de-açúcar foram realizados tratamentos de descontaminação de ápices caulinares com diferentes tempos de exposição e concentrações de hipoclorito de sódio, casugamicina, etanol e bicloreto de mercúrio. Não houve problemas de oxidação em nenhum dos tratamentos. O uso dos reagentes nas concentrações e tempos testados não mostrou ser fitotóxico, no tratamento utilizando os maiores tempos de exposição à casugamicina e ao hipoclorito de sódio obteve os menores índices de contaminação por fungos e bactérias. Porém, os índices de contaminação bacteriana foram elevados, o que indica a necessidade de uso de novos procedimentos para o processo de descontaminação. Sabe-se que a cana-de-açúcar está associada a diferentes bactérias endofíticas. Com o objetivo de melhor estudar estas bactérias endofíticas e sua relação com a planta hospedeira, promoveu-se o isolamento de bactérias contaminantes de explantes de cinco diferentes variedades de cana-de-açúcar: RB98710, RB034068, RB034130, RB034120 e RB034041 visando à determinação de características morfológicas e fisiológicas. Os treze isolados obtidos possuem diversidade para características morfo-tintoriais e bioquímicas sendo caracterizados como bastonetes gram-positivos. Apresentaram capacidade de produção de fatores de crescimento vegetal e, após teste de sensibilidade a antimicrobianos, dois antibióticos: Ciprofloxacino e Ceftazidima apresentaram maior potencial de controle do crescimento dos isolados. Com as contaminações microbianas controladas, estudos foram realizados para avaliar o efeito de reguladores de crescimento na multiplicação in vitro de culturas de ápices caulinares e seu enraizamento em três variedades de cana: RB98710, RB034041 e RB034130. Utilizou-se meio MS líquido contendo BAP, KIN, ANA e GA3 em diferentes combinações e concentrações. Os resultados mostraram que, para as três variedades testadas, o meio MS com 0,2 mg.L-1 de BAP e 0,1 mg.L-1 de KIN são os mais apropriados para a maior produção de brotos e que os melhores resultados de enraizamento foram obtidos em meio ½ MS semissólido com 6% de sacarose, 5,0 mg.L-1 de ANA e 0,2% de carvão ativado. As plântulas foram aclimatizadas e a capacidade de sobrevivência sob condições ex vitro foi de 90%, três semanas após a transferência para a casa de vegetação.

A avicultura de corte brasileira tem apresentado elevados índices de crescimento. No intuito de garantir uma maior eficiência da produção de aves, medicamentos veterinários são administrados para tratamento e prevenção de doenças. A coccidiose é uma dessas doenças, a qual é causada por várias espécies do protozoário do gênero Eimeria. Os poliéteres ionóforos são antibióticos largamente administrados no controle desses microrganismos. No entanto, a administração contínua de doses subterapêuticas dessa classe de fármacos pode acarretar no acúmulo de resíduos nos tecidos dos frangos de corte. No intuito de garantir a segurança dos consumidores, são definidos Limites Máximos de Resíduos (LMRs) por órgãos internacionais como: Food and Drug Administration (FDA), Commission Regulation, Codex Alimentarius; e nacionais como Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Dessa forma, este estudo teve por objetivo o desenvolvimento, validação e aplicação de um método para determinação em peito de frango de resíduos de Lasalocida (LAS), Monensina (MON), Salinomicina (SAL) e Narasina (NAR) por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial com ionização por eletrospray (LC-ESI-MS/MS). Nigericina (NIG) foi utilizada como padrão interno do método analítico. As amostras foram liofilizadas, trituradas e tamisadas, sendo utilizadas no método amostras com tamanho de partículas entre 125 ?m e 250 ?m. Os resíduos foram extraídos com metanol e uma alíquota do extrato foi evaporada e reconstituída para análise em LC-ESI-MS/MS no modo positivo de monitoramento de reação selecionada (SRM). A etapa de clean up foi realizada por meio de filtração do extrato em membrana de PTFE 0,22 ?m. O método apresentou-se linear no intervalo de concentração de 0,0 a 40,0 ?g kg-1 para LAS, de 0,0 a 20,0 ?g kg-1 para MON, de 0,0 a 200,0 ?g kg-1 para SAL e de 0,0 a 30,0 ?g kg-1 para NAR. Para todos os antibióticos o coeficiente de correlação linear (r) esteve de acordo com as diretrizes para métodos bioanalíticos (r >= 0,98). A repetitividade foi avaliada em três concentrações de fortificação para cada antibiótico ionóforo, sendo realizada em três dias consecutivos. Foi obtida boa reprodutibilidade intralaboratorial, com coeficiente de variação (CV) de 4,5% para NAR (22,5 ?g kg-1) e 15,2% para LAS (10,0 ?g kg-1). A recuperação ficou acima de 90,0% para todos os antibióticos, sendo de 91,5% para LAS (10,0 ?g kg-1) e 99,1% para MON (15 ?g kg-1). Valores satisfatórios para o limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) foram obtidos, sendo CC? de 11,8 ?g kg-1 e 115,2 ?g kg-1 para MON e SAL, respectivamente, e CC? de 13,6 ?g kg-1 e 130,3 ?g kg-1 para os mesmos antibióticos. Os limites de detecção (LD) e os limites de quantificação (LQ) foram determinados a partir de dados da curva de calibração. Todos os antibióticos apresentaram LQ inferior ao seu respectivo LMR. O método foi aplicado em 18 amostras disponíveis comercialmente em Ribeirão Preto, SP. De todas as amostras analisadas apenas uma apresentou resíduo de NAR com concentração acima do seu respectivo LD. / The Brazilian poultry industry has shown high rates of growth. In order to ensure greater efficiency of poultry production, veterinary drugs are administered for the treatment and prevention of diseases. Coccidiosis is one of those diseases, which is caused by various species of protozoa of the genus Eimeria. Polyether ionophore antibiotics are widely administered to control these microorganisms. Continuous administration of subtherapeutic doses of this class of drugs may result in the accumulation of residues at low concentration levels in the tissues of broiler. In order to ensure consumer safety, are set Maximum Residue Limits (MRLs) by international organizations such as Food and Drug Administration (FDA), Commission Regulation (EU), Codex Alimentarius; and national such as Ministério da Agricultura e Pecuária (MAPA). Thus, this study aimed to develop, validate and apply a simple method for determination of residues of Lasalocid (LAS), Monensin (MON), Salinomycin (SAL) and Narasin (NAR) in chicken meat by liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Nigericin (NIG) was used as qualitative internal standard. Samples were lyophilized, powdered and sieved. Particles size between 125 ?m and 250 ?m were used. Residues were extracted with methanol and aliquots of the extracts were evaporated and reconstituted for injection in the LC-ESI-MS/MS operated in positive selected reaction monitoring (SRM). From the molecular ion were obtained two fragment ions and that of higher relative abundance was used in quantification process. Clean-up step was performed by filtration on 0.22 ?m PTFE membrane. In the validation process, this method showed linearity over the concentration range from 0.0 to 40.0 ?g kg-1 for LAS; 0.0 to 20.0 ?g kg-1 for MON; 0.0 to 200.0 ?g kg-1 for SAL and 0.0 to 30.0 ?g kg-1 for NAR. For all antibiotics the coefficient of linear correlation (r) was in accordance with the guidelines for bioanalytical methods (r >= 0.99). The intra-day precision was evaluated at three spiked concentrations for each ionophore antibiotic and was determined in three consecutive days. Good inter-day precision was obtained, with relative standard deviations from 4.5% for NAR (22.5 ?g kg-1) and 15.2% for LAS (10.0 ?g kg-1). For all antibiotics recovery above 90.0% was obtained, which were 91.5% for LAS (10.0 ?g kg-1) and 99.1% for MON (15.0 ?g kg-1). Satisfactory results of decision limit (CC?) and detection capability (CC?) were determined, which were CC? 11.8 ?g kg-1 and 115.2 ?g kg-1 for MON and SAL, respectively; CC? 13.6 ?g kg-1 and 130.3 ?g kg-1 for the same drugs. The limit of detection (LD) and limit of quantification (LQ) were determined from data of the calibration curve. All the LQs were remarkably below the MLRs for each antibiotic. The method was applied to 18 samples acquired in Ribeirão Preto, SP. Of all analyzed samples only one exhibited traces of NAR with concentration above its respective LD. Thus, the proposed method can be applied in routine analysis on samples of commercial chicken meat.

O presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar os microrganismos aeróbicos e a frequência de isolamento de Escherichia coli patogênica ao homem em fezes de cães sem sintomas de colibacilose e assim averiguar a participação do cão como fonte de infeção de colibacilose humana. No período de setembro de 2002 a outubro de 2004, foram coletadas 220 amostras de fezes de animais capturados pelos CCZ de Guarulhos, Cotia e Barueri, cidades do Estado de São Paulo. O método de coleta foi através de swabs estéreis profundamente ao intestino dos animais anestesiados, mantidos sob refrigeração e em caldo BHI. As bactérias foram isoladas por semeadura em Mac Conkey, ágar sangue e Sabouraud. Houve crescimento de microrganismos em 100% delas. Foram isolados os seguintes microrganismos: 120 (54,54%) estirpes de E. coli em cultura pura e 76 (34,54%) estirpes em associação com outros agentes, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2,27%), dentre outros microrganismos. Deve-se ressaltar ainda o isolamento de leveduras (Candida albicans) em associação com outros agentes a partir de 05 (2,27%) amostras de swabs retais. Uma vez isoladas, seus genes de virulência foram detectados por PCR. De um total de 196 estirpes de E. coli isoladas, 123 (62,75%) apresentaram um ou mais dos fatores de virulência estudados. Dessas 196 estirpes, 16 (8,16%) foram positivas para afa, 54 (27,55%) foram positivas para sfa, 38 (19,38%) foram positivas para pap, 66 (33,67%) foram positivas para aer, 31 (15,81%) foram positivas para cnf, 13 (6,63%) foram positivas para hly, 01(0,51%) foi positiva para VT2 e nenhuma das linhagens foi positiva para LT, STa e STb. Os cães aparentemente sadios, sem sintomas de colibacilose, poderiam estar participando da cadeia epidemiológica como reservatórios de E. coli uropatogênica ao homem, pois os genes encontrados com maior número foram aer, sfa e pap presentes em infecções extraintestinais, mais especificamente infecções urinárias. Os cães podem participar como reservatório de estirpes de E. coli resistentes a antimicrobianos. Das amostras de E. coli testadas, 85,64% apresentaram resistência à Cefalotina e 0% de resistência à Norfloxacina. Há a necessidade de mais pesquisas sobre o modo de transmissão das E. coli patogênicas entre o cão e o homem e dos fatores de virulência uropatogênicos encontrados com maior frequência tais como aer, sfa e pap. / The objective of the present study was to isolate and identify aerobic microorganisms and the isolation frequency of E. coli pathogenic to man in faeces of dogs without colibacillosis symptoms and thus to verify the participation of dog as a source of human colibacillosis infection. In the period between September 2002 to October 2004, 220 samples of faeces were collected from animals captured by the CCZ of Guarulhos, Cotia and Barueri, cities in the São Paulo state. The collection method used was barren swabs deeply to the intestine of anesthetized animals, which were kept under refrigeration and in a BHI broth. The bacteria were isolated through sowing in Mac Conkey, agar blood and Sabouraud. In 100% of them there was microorganism growth. The following microorganisms were isolated: 120 (54.54%) E. coli lineages in pure culture and 76 (34.54% lineages in association with other agents, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2.27%,) amongst other microorganisms. The isolation of yeasts (Candida Albicans) in association with other agents from 05 (2.27%) rectal samples swabs must be emphasized. Once isolated virulence genes were detected by PCR. Of a total of 196 isolated lineages of E.coli, 123 (62.75%) presented one or more of the studied virulence factors. Of these 196 lineages, 16 (8.16%) were positive for afa, 54 (27.55%) positive for sfa, 38 (19.38%) positive for pap, 66 (33.67%) positive for aer, 31 (15.81%) positive for caf, 13 (6.63%) positive for hly, 01 (0.51%) positive for VT2 and none of the lineages were positive for LT, Sta and STb. Apparently healthy dogs, without colibacillosis symptoms could be participating in the epidemiological chain as an E. coli reservoir uropathogenic to man, as the genes found with high frequency were aer, sfa and pap present in extraintestinal infections, more specifically urinary infections. The dogs can participate as a reservior of E. coli lineages resistant to antimicrobials. Of the E. coli samples tested, 85,64% presented resistance to Cefalotina and 0% resistance to Norfloxacina. More research is needed on how the transmission of pathogenic E. coli between the dog and man happens and also on the uropathogenic virulence factors found more frequently, such as aer, sfa and pap.

Considerando-se que a leptospirose pode ser transmitida pela inseminação artificial e a existência de possíveis falhas na Instrução Normativa vigente do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento-MAPA, quanto ao controle desta enfermidade em touros em serviço reprodutivo em Centrais de lnseminação Artificial -CIA, e ainda pelas baixas taxas na FIV em vista da presença de microbiota autóctone no sêmen industrializado, o presente trabalho propôs avaliar: l-a microbiota autóctone presente nas amostras de muco prepucial e sêmen quanto a sazonalidade e a idade (<4 e ≥4 anos) de touros de uma CIA; 2-0 efeito do tratamento com protocolos antibióticos adicionados ao extensor: A - gentamicina (250 ug/ml.), tilosina (50 ug/rnl.); lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.; B -penicilina (500 UI), estreptomicina (500 UI), lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.); CI- sulfato de amicacina (500 ug/rnl.); C2 - sulfato de amicacina (1500 ug/ml. ) e C3 - sulfato de amicacina (2500 ug/ml.) sobre a microbiota presente nas amostras de sêmen; 3-0 efeito dos protocolos de antibióticos (A, B, C I, C2, C3) sobre esperrnatozóide através do teste de integridade de membrana.; 4-0 efeito bactericida dos protocolos A, B e C2 adicionados ao extensor, sobre o sêmen experimentalmente contaminado com Leptospira spp. sorovares Hardjo (estirpes Hardjoprajitno e Hardjobovis) e Wolffi (estirpe 3705), pelo cultivo microbiológico e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), comparando-as entre si. Das amostras de sêmen e muco prepucial de oito touros de uma CIA, observou-se correlação entre os gêneros bacterianos detectados no cultivo bacteriológico das amostras de muco prepucial e sêmen na mesma colheita, não houve diferença entre a microbiota quanto à idade dos animais e a sazonalidade das colheitas; os protocolos antibióticos (A, B, Cl , C2, C3) não interferiram na integridade de membrana citoplasmática dos espermatozóides; protocolos A e C3 mostraram maior redução na microbita do sêmen, embora sem significado estatístico; PCR foi mais sensível que o cultivo na detecção de Leptospira spp. de amostras de sêmen experimentalmente contaminadas, entretanto a diminuição na freqüência de resultados positivos na PCR, em amostras de sêmen contaminadas com três estirpes de Leptospira spp e tratadas com os protocolos A, B ou C2, está relacionada a fatores intrínsecos da técnica e não ao efeito bactericida dos antibióticos empregados. O cultivo bacteriológico revelou baixa sensibilidade no isolamento de estirpes de Leptospira spp em sêmen experimentalmente contaminado com 106 bactérias/mL. A transmissão de leptospiras pelo sêmen industrializado de touros doadores em ClA é principalmente dependente da concentração de leptospiras excretadas no momento da colheita. A PCR confirma ser uma ferramenta fundamental na detecção da presença de leptospiras no sêmen de touros doadores em Centrais de Inseminação Artificial, devendo ser empregada em pelo menos duas colheitas na quarentena, e posteriormente no monitoramento do animal / Considering that leptospirosis can be transmitted by the artificial insemination route and the existence of possible fails on current Normative Instruction of the Ministerio de Agricultura, Pecuária e Abastecimento- MAPA, for the control of this disease in bulls in reproductive service in Artificial Insemination Centers-AIC, and still for the low rates due to the presence of autoctone microbiota in the industrialized semen affecting the production of embryos by in vitro fertilization, the present study aimed to evaluate the autoctone microbiota presented in preputial mucus and semen samples according to season (falls and dry) and bull ages (<4 e ≥4 years) from the AIC; the effect of the treatment with antibiotic protocols added to the semen extensor: A- gentamicine (250 ug/rnl.), tilosine (50 11gim L); lincomicine (150 ug/rnl.); espectinomicine (300 11gim L; B- penicillin (500 UI); estreptomicine (500 UI); lincomicine (150 ug/ml.); espectinomicine (300 ug/ml.); C 1 amicacine sulphate (500 ug/ml.); C2- amicacine sulphate (1500 ug/rriL) and C3- amicacine sulphate (2500 ug/ml.) on microbiota presents in the semen samples; the effect of the antibiotic protocols (A, B, C I, C2, C3) on spermatozoa by the test of membrane integrity; the bactericidal effect of the antibiotic protocols A, B and C2 added to the extensor, on the semen experimentally contaminated with Leptospira spp. serovars Hardjo (strains Hardjoprajitno and Hardjobovis) and Wolffi (strain 3705), for the bacteriological culture and polimerase chain reaction (PCR), comparing themselves. Of the samples of preputial mucus and semen samples of eight bulls of an AlC it was observed correlation among bacterial Genera detected by the bacteriological culture of preputial mucus and semen in the same collection; but it was not observed difference relative to animal age groups and seasons of the year. The antibiotic protocols (A, B, Cl, C2, C3) had no effect on the integrity of cytoplasmic membrane of the spermatozoa. C3 showed greater reduction on semen microbita, but no statistically significant. PCR was more sensible than the bacteriological culture in the detention of Leptospira spp. from semen samples experimentally contaminated, however the reduction on the frequency of positive results by PCR was not related to bactericidal effect of the antibiotic protocols, maybe it was due to intrinsic factors of this method. The bacteriological culture showed very low sensitivity to isolate Leptospira spp. from experimental contaminated semen with 106 bacterias/mL. The transmission of leptospires by industrialized semen from donor bulls of AlC depend mainly on the concentration of leptospires excreted at the moment of the semen collection. The PCR confirms to be a fundamental tool for the detention of leptospires in the semen of donor bulls in AlC, and must be used at least twice during the quarantine, and for the animal monitoring during service time

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação de diferentes associações de ácidos orgânicos como alternativa ao uso de antimicrobiano melhorador de desempenho em frangos de corte de 1 a 41 dias. Foram utilizadas 1296 aves distribuídas em blocos casualizados com seis tratamentos e seis repetições com 36 aves por unidade experimental. Os tratamentos foram: controle negativo - dieta basal sem adição de antimicrobiano ou ácidos orgânicos; controle positivo - dieta basal com 0,005% de Halquinol, sem adição de ácidos orgânicos; dieta basal com 0,2% da Mistura A (ácidos orgânicos protegidos); dieta basal com 0,2% da Mistura A e 0,2% da Mistura B (ácidos orgânicos e sal ácido livres); dieta basal com 0,2% da Mistura A e 0,04% da Mistura C (ácidos orgânicos livres) adicionada na água de bebida; dieta basal com 0,4% da Mistura A. Foram avaliadas características de desempenho e morfologia intestinal das aves. O índice de conversão alimentar (CA) dos tratamentos com ácidos orgânicos foi significativamente (P=0,042) melhor do que a CA do controle positivo no período de 1 a 21 dias de idade. No período de 1 a 35 dias, o ganho de peso (GP) dos animais tratados com ácidos orgânicos foi significativamente maior (P=0,031) quando comparado aos animais que receberam o antimicrobiano. Para o ciclo completo de produção de 1 a 41 dias de idade, a associação das misturas de ácidos orgânicos protegidos adicionados na ração e ácidos orgânicos livres adicionados na água foi a mais eficiente comparado aos demais tratamentos em relação a CA (P=0,05 e P<0,05). Quanto a viabilidade e o índice de eficiência produtiva (IEP), ambos foram significativamente superiores (P = 0,008 e P = 0,007, respectivamente) para os animais suplementados com ácidos orgânicos quando comparados aos que receberam antimicrobiano. Avaliando a morfometria intestinal aos 7 dias, apenas a associação da mistura de ácidos protegidos com a mistura de ácidos livres fornecidos via ração, apresentou maior relação vilo:cripta (V:C) no jejuno (P = 0,017) comparado ao controle positivo. Não houve diferença significativa no duodeno e jejuno entre os demais tratamentos quanto a altura dos vilos, profundidade de criptas e V:C. Portanto, conclui-se que a suplementação de ácidos orgânicos pode ser uma alternativa viável aos antimicrobianos melhoradores de desempenho. / The purpose of this study was to evaluate the effect of different associations of organic acids supplementation as alternative to antimicrobial growth promoter in broilers from 1 to 41 days. It was conducted an experiment with 1296 birds distributed in a randomized block design with six treatments and six replications of 36 chicks each. The treatments were: negative control basal diet without antimicrobial and acids; positive control basal diet with 0.005% of Halquinol without acids; basal diet with 0.2% of Mixture A (blend of protected organic acids); basal diet with 0.2% of Mixture A and 0.2% of Mixture B (blend of free organic acids and salt acid); basal diet with 0.2% of Mixture A and 0.04% of Mixture C (blend of free organic acids) added in drinking water; basal diet with 0.4% of Mixture A. Performance and intestinal morphometry were evaluated. The feed conversion ratio (FCR) of organic acids treatments were significantly better (P = 0.042) than positive control at 21 days. Evaluating the period from 1 to 35 days, the body weight gain (BWG) of the birds treated with organic acids were significantly higher (P = 0.031) than birds that received antibiotic. Considering the total period of rearing from 1 to 41 days, the association of protected organic acids added in feed with free organic acids added in drinking water was the most efficient in FCR compared to the others treatments (P=0.05 and P<0.05). Concerning viability and production efficiency index (PEI), both were significantly higher (P = 0.008 and P = 0.007, respectively) for the organic acid treatments than positive control. Evaluating intestinal morphometry at 7 days, only the association of protected blend with free organic acids blend supplied by feed had significantly higher villi:crypt ratio (V:C) (P = 0.017) in jejunum compared with positive control. There were no significantly differences in duodenum and jejunum between the other treatments concerning villi height, crypt depth and V:C. Therefore, it is possible to conclude that organic acids supplementation could be an feasible alternative to antimicrobials growth promoter.

O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 &#181;g/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.