Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 5 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2005. / Härtill 5 uppsatser.

The entire thesis text is included in the research.pdf file; the official abstract appears in the short.pdf file; a non-technical public abstract appears in the public.pdf file. Title from PDF of title page (University of Missouri--Columbia, viewed on March 23, 2010). Thesis advisor: Dr. Mengshi Lin. Includes bibliographical references.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The prevalence of Candida spp. as commensal of the oral cavity can reach 70%. However, oral cavity colonization not always culminates in oral candidiasis, however it can be considered a preliminary condition for the development of it. Oral candidiasis is the most common fungal infection among individuals with HIV, due the result of immune deficiency. Considering the importance of this type of infection in HIV-positive, we proposed to carry out this work with the following objectives: determine the frequency of HIV positive individuals colonized by Candida spp., Candida species isolated; determine the main predisposing factors for oral colonization by Candida spp., to relate the microbial load of colonization with the count of lymphocytes TCD4+, viral load and antiretroviral therapy used at the time of collection; determine the sensitivity of isolates of Candida spp. antifungal fluconazole, itraconazole, voriconazole, amphotericin B and nystatin, by the methodology of disk diffusion and search for the exoenzymes proteinases, phospholipases, hemolysin and DNase in isolates of Candida spp. From May to October 2012 saliva samples from HIV patients attended at Clinical Hospital - Federal University of Uberlândia and HIV negative individuals were collected, which were seeded onto plates containing Sabouraud Dextrose Agar and CHROMagar Candida plates and incubated in a bacteriological incubator at 30ºC for 72 hours. The identification of the isolates was done by classical methodology, using chromogenic agar and assimilation of carbon sources and nitrogen, the differentiation between C. dubliniensis and C. albicans was made by PCR. Candida spp. were isolated from 89 of the 147 patients studied, a total of 111 isolates, C. albicans the most common species among the isolates (67.6%). The average colony count was 8.8x10³ CFU/mL. In the control group 51 of the 150 saliva samples were positive for Candida, obtained 57 isolates, of which 77.2% were C. albicans. The average of CFU/mL was 9.8x10². The predisposing factors for oral colonization were use of antibiotics and oral prosthesis and a low CD4 + cells count and high viral load. The combined use of antiretroviral class of reverse transcriptase inhibitors had a greater protective effect on the colonization than the use of these drugs associated with protease inhibitors. The nystatin antifungal, voriconazole and amphotericin B showed the highest number of samples of Candida spp. sensitive in both groups followed by fluconazole and itraconazole. The phospholipase production was observed in 69.3% and 72.6% of the isolates from the group of patients and HIV negative, respectively. The production of haemolysin by isolates of HIV positive and non-positive patients, respectively, was to 98.2% and 96.5%, DNAse was produced by 27% and 21% of the isolates from patients and non-patients of HIV. Finally, with the exception of DNAse, there was no statistically significant difference between isolates from the two study groups in the characters studied. / A prevalência de Candida spp. como comensal da cavidade oral pode chegar a 70%. Entretanto, a colonização da cavidade oral nem sempre culmina na candidíase bucal, porém pode ser considerada uma condição preliminar para o desenvolvimento da mesma. A candidiase bucal é a infecção fúngica mais comum entre os indivíduos portadores do HIV, resultado do comprometimento imunológico dos mesmos. Considerando a importância desse tipo de infecção em HIV positivos, propusemos a realização do presente trabalho com os seguintes objetivos: determinar a frequência de indivíduos HIV positivos colonizados por Candida spp., bem como as espécies de Candida isoladas; determinar os principais fatores predisponentes para a colonização oral por Candida spp., relacionar a carga microbiana de colonização com a contagem de linfócitos T CD4+, carga viral e terapia antirretroviral utilizada no momento da coleta; determinar a sensibilidade dos isolados de Candida spp. aos antifúngicos fluconazol, itraconazol, voriconazol, anfotericina B e nistatina, pela metodologia de difusão de disco e pesquisar as exoenzimas proteinases, fosfolipases, DNAse e hemolisina nos isolados de Candida spp. No período de maio a outubro de 2012 foram coletadas amostras de saliva de portadores do HIV atendidos no HC-UFU e de indivíduos HIV negativos, as quais foram semeadas em placas contendo Ágar Sabouraud Dextrose e em placas com CHROMágar Candida e incubadas em estufa bacteriológica à 30ºC por 72 horas. A identificação dos isolados foi feita pela metodologia clássica, utilização de ágar cromogênico e assimilação de fontes de carbono e nitrogênio, sendo a diferenciação de C. albicans e C. dubliniensis feita através de PCR. Os testes de sensibilidade e pesquisa de fatores de virulência foram feitos conforme descrito no documento da CLSI (2009) e na literatura. Candida spp. foram isoladas de 89 dos 147 pacientes estudados, totalizando 111 isolados, sendo C. albicans a espécie mais freqüente entre os isolados (67,6%). A contagem média de colônias foi de 8,8x103 UFC/mL. Já no grupo controle 51 das 150 amostras de saliva foram positivas para gênero Candida, obtendo 57 isolados, dos quais 77,2% eram C. albicans. A média de UFC/mL foi de 9,8x10². Os fatores predisponentes para colonização bucal foram uso de antibióticos e prótese oral, bem como uma baixa contagem de CD4+ e alta carga viral. O uso combinado de antirretrovirais da classe dos inibidores de trancriptase reversa apresentou um maior efeito protetor para a colonização do que o uso desses medicamentos associados com inibidores de protease. Os antifúngicos nistatina, voriconazol e anfotericina B apresentaram o maior número de amostras de Candida spp. sensíveis em ambos os grupos, seguidos pelo fluconazol e itraconazol. A produção de fosfolipase foi observada em 69,3% e 72,6% dos isolados provenientes do grupo de pacientes e de HIV negativos, respectivamente. Proteinase foi produzida por 77,5% e 90,7% das espécies de Candida obtidas do grupo de pacientes e de HIV negativos, respectivamente. A produção de hemolisina pelos isolados do grupo de HIV positivos e não portadores, respectivamente, foi igual a 98,2% e 96,5%. DNAse foi produzida por 27% e 21% dos isolados proveniente dos pacientes e dos não HIV. Por fim, com exceção da DNAse, não houve diferença estatisticamente significativa entre os isolados dos dois grupos de estudo em relação às características estudadas. / Mestre em Ciências da Saúde

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:55:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 527726 bytes, checksum: 9d9d888b1040d17c42f2b3e23c69fcd7 (MD5) Previous issue date: 2010-08-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This research aimed to study the antifungal properties of essential oil of Cymbopogon winterianus Jowitt associated with synthetic antifungals against strains of Aspergillus. The parameters used for this purpose were based on the determination of Minimum Inhibitory Concentration, Fractional Inhibitory Concentration Index (method of association - Checkerboard) as well as in microbial death curve. Amphotericin B and fluconazole antifungal synthetic were used as positive controls, and is also used in combination with tests of the natural product. All tests were performed in triplicate. The present study allowed further our understanding about the therapeutic effects of essential oil of C. winterianus, when used in isolation or drug related alluded to earlier. In addition, we attempted to find viable alternatives to the treatment of Aspergillus infections, currently based on the prolonged use of allopathic drugs, where the observed side effects are a limiting factor to its full success. / Esta pesquisa se propôs a estudar as propriedades antifúngicas do óleo essencial de Cymbopogon winterianus Jowitt associado a antifúngicos sintéticos contra cepas de Aspergillus. Os parâmetros utilizados para esse fim se basearam na determinação da Concentração Inibitória Mínima, Índice de Concentração Inibitória Fracionada (método de associação Checkerboard), bem como na curva de morte microbiana. A anfotericina B e o fluconazol, antifúngicos sintéticos de uso consagrado, foram empregados como controles positivos, sendo também utilizados nos testes de combinação com o produto natural. Todos os ensaios foram realizados em triplicata. A realização desse estudo possibilitou aprofundar os conhecimentos acerca dos efeitos terapêuticos do óleo essencial de C. winterianus, quando usado de forma isolada ou se relacionado às drogas aludidas anteriormente. Além disso, buscou-se encontrar alternativas viáveis ao tratamento das infecções por Aspergillus, atualmente baseados no uso prolongado de drogas alopáticas, onde os efeitos colaterais observados representam um fator limitante para seu pleno sucesso.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1141533 bytes, checksum: 1957d82e424f5486f37aed0075ae0a7b (MD5) Previous issue date: 2011-08-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The majority fungal species identified in the food industry environment were Aspergillus flavus, Aspergillus niger and Penicillium spp., the latter being identified with higher relative frequency (71.70%) the Penicillium gender. The microbiological screening on 14 essential oils against 14 Penicillium spp. strains was performed in order to facilitate safe alternatives for control and/or elimination of this fungus. The average results for inhibition halos were 13.30 to 42.20 mm, whose oils from Cinnamomum zeylanicum, Cymbopongon citratus, Syzygium aromaticum, Origanum vulgare showed greater activity and those from Rosmarinus officinalis, Eucalyptus globulus, Laurus nobilis and Sassafras albidum showed no significant activity against tested strains. The essential oil of Cinnamomum zeylanicum Blume (OE) showed greater effectiveness and was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) to assess its effect on mycelial growth and spore germination by using EO and chlorine solution Vega® (VG), commonly used in industry. MIC values obtained range from 256 to 512μg/mL both for EO and VG. The observed effect on the radial growth was concentration dependent for both products. On the spores germination, EO showed higher effectiveness compared to VG interfering with conidia germination. The EO emerges as an excellent alternative to be used for Penicillium control, since VG needed higher concentration though not having the same EO effectiveness. / As espécies majoritárias de fungos identificadas no ambiente da indústria de alimentos foram dos gêneros Aspergilus flavus, Aspergilus niger e Penicillium spp., sendo identificado posterirmente como de maior freqüência, 71,7% o gênero Penicillium. Com o objetivo de viabilizar alternativas seguras para controlar e/ou eliminar estes fungos foi realizada a triagem microbiológica com 14 óleos essenciais frente a 14 cepas do gênero Penicillium. Os resultados médios de halos de inibição revelaram que os óleos de Cinnamomum zeylanicum, Cymbopongon citratus, Syzygium aromaticum e Origanum vulgare apresentaram maior significância. Por outro lado, os de Rosmarinus officinalis, Eucalyptus globulus, Laurus nobilis e Sassafras albidum não apresentaram atividade significativa contra as cepas testadas. O óleo essencial (OE) de Cinnamomum zeylanicum apresentou maior efetividade e com ele foram realizados ensaios para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), para a avaliação do efeito sobre o crescimento micelial e a germinação de esporos, utilizando o OE e uma solução clorada Vega® (VG), comumente utilizada na indústria. Para a CIM os valores encontrados variaram de 256 a 512 μg/mL tanto para o OE quanto para o VG. O efeito observado sobre o crescimento radial foi concentração dependente para os dois produtos. Sobre a germinação dos esporos, o OE demonstrou maior efetividade em relação ao VG, interferindo na germinação dos conídios. O OE desponta como uma excelente alternativa a ser utilizada no controle de um representante do fungo filamentoso como Penicillium, visto que o VG necessitou de uma maior concentração de aplicação e, ainda assim, não apresentou a mesma efetividade do OE.

Orientador: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Um dos principais mecanismos de resistência microbiana são os sistemas de efluxo, que transportam medicamentos antimicrobiano para fora da célula. A eficácia de alguns agentes de inibição dos sistemas de efluxo tem sido reportada para reverter a resistência microbiana e também para potencializar as terapias antimicrobianas. Além disso, métodos alternativos aos agentes antimicrobianos convencionais têm sido investigados, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). O objetivo desse estudo foi avaliar in vitro o efeito da aPDT e de dois inibidores de sistemas de efluxo microbiano (curcumina e verapamil) na resistência à inativação de C. albicans. Foram utilizadas duas cepas de C. albicans, uma susceptível (CaS) e outra resistente (CaR) a fluconazol. Os parâmetros de inativação fúngica foram determinados submetendo-se culturas planctônicas de ambas as cepas à curcumina, ao verapamil, ao fluconazol e também à aPDT (mediada pela curcumina 40 μM (14,73 μg/mL) e luz de LED azul de ≅455 nm a 5,28 J/cm2). As duas cepas foram cultivadas e tratadas associando-se os agentes de inibição do efluxo ao fluconazol em concentrações não letais. Os dados de UFC/mL foram analisados pelos testes paramétricos t de Student, ANOVA/Welch e post-hoc de Games-Howell e pelo teste não paramétrico de Mann-Whitney (α=0,05; n=12). Os resultados demostraram que aPDT promoveu uma redução significativa (p<0,001) de 4,5 e 4,42 log10 para CaS e CaR, respectivamente. Para CaS, os valores de Concentrações Ini... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the major mechanisms of microbial resistance is the efflux systems, or efflux pumps, present in the plasma membrane of microorganisms that carry an antimicrobial drug out of the cell. The efficacy of some inhibitors of efflux systems has been reported to reverse microbial resistance, including C. albicans, and also to potentiate antimicrobial therapies. In addition, alternative methods to conventional antimicrobial agents have been investigated, such as antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). The objective of this study was to evaluate in vitro the effect of aPDT and two inhibitors of microbial efflux systems (curcumina and verapamil) on the resistance to inactivation of C. albicans. For this, two strains of C. albicans, one susceptible (CaS) and another resistant (CaR) to fluconazol were used. Fungal inactivation parameters were determined by subjecting planktonic cultures of both strains to curcumina, verapamil, fluconazol, and also aPDT (mediated by curcumin at 40 μM (14.73 μg/mL) and blue LED light of ≅455 nm and 5.28 J/cm2). These strains were then cultured and treated associating one of the efflux inhibitors with fluconazole using non-lethal concentrations. For the statistical analysis, the normality and the homogeneity of variances were evaluated by the Shapiro-Wilk and Levene tests, respectively. Data were analyzed by Student's t-tests, Welch-corrected ANOVA and Games-Howell post-hoc and Mann-Whitney non-parametric test (α = 0.05) (n = 12). aPDT promoted a s... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Cumarinas são estruturas promissoras e diversas atividades biológicas têm sido atribuídas a esses metabólitos secundários vegetais. Estudos sugerem que o mecanismo antifúngico desses compostos esteja correlacionado com a atividade antioxidante. A reação da tirosinase, que produz radicais livres, está envolvida no processo de melanização do fungo Sporothrix schenckii, o causador de micose subcutânea de maior incidência no sul do Brasil. A inibição dessa enzima foi recentemente reportada para extrato de Pterocaulon (Asteraceae), planta rica em cumarinas e usada na medicina tradicional do Brasil para tratamento tópico de micoses e na medicina popular da Argentina como anticâncer. O objetivo desse trabalho foi investigar in vitro a atividade antifúngica, correlacionando-a com atividade antioxidante, de extratos de espécies de Pterocaulon e de 6,7-metilenodioxicumarinas isoladas e também de 4-metilcumarinas obtidas por síntese, bem como a investigação da atividade citotóxica de algumas destas moléculas. As 6,7-metilenodioxicumarinas foram isoladas de P. balansae e P. lorentzii, enquanto que as 4-metilcumarinas foram sintetizadas via Pechmann por micro-ondas. A atividade antifúngica contra Sporotrix schenckii foi realizada conforme manual do Clinical and Laboratory Standards Institute. O estudo das propriedades eletroquímicas foi obtido por voltametria cíclica e a capacidade antioxidante pelo método espectofotométrico DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazil) e pelo método fluorimétrico ACAP contra radicais peroxil. A análise dessa atividade mostrou que os extratos metanólicos de espécies de Pterocaulon (P. polystachyum, P. balansae, P. lorentzii, P. lanatum e P. cordobense) foram ativos frente às cepas do fungo S. schenckii, sendo o extrato de P. polystachyum o mais ativo, apresentando Concentração Inibitória Mínima (CIM) compreendida entre 156 e 312 μg/mL. O fracionamento dos extratos lipofílicos de P. balansae e P. lorentzii levou ao isolamento de três metilenodioxicumarinas. Dados cristalográficos da 5-metóxi-6,7-metilenodioxicumarina, inéditos, foram depositados no Cambridge Crystallographic Data Centre 779123. As cumarinas sintéticas foram obtidas em rendimentos satisfatórios (98-30%) e em reduzido tempo de reação (5-20 min). O screening destas cumarinas frente às cepas do fungo S. schenckii revelou que 5-carboxi-6,7-diidroxi-4-metilcumarina, com CIM de 66 μM e Concentração Fungicida Mínima de 246 μM, foi o composto mais ativo. Essa cumarina apresentou sinergismo com a Anfotericina B, sendo sua CIM reduzida para 15 μM. A atividade antifúngica desses compostos pode estar correlacionada com a atividade antioxidante. O composto 5-carboxi-6,7-diidroxi-4-metilcumarina foi o mais ativo mostrando elevada capacidade antioxidante frente aos radicais DPPH com valores de IC50 de 17,49 μM e elevada atividade frente ao radical peroxil. Além disso, apresentou um potencial de oxidação de 0,4 V sugerindo atividade antioxidante. Baseado nos ensaios antioxidante e antifúngico foi possível observar que a presença de grupamentos hidroxilas no C-7 e C-8 do anel cumarínico, assim como a adição de grupamento polar no C-5 favoreceu ambas as atividades antifúngica e antioxidante. Na segunda etapa desse trabalho foi avaliada a citotoxicidade das cumarinas isoladas e algumas cumarinas simples, disponíveis comercialmente, pelo método Metil Tiazol Tetrazólio (MTT) usando linhagens de glioma humano (U138-MG) e de ratos (C6). Foi observado que as 6,7-metilenodioxicumarinas causaram uma significativa redução na viabilidade celular, sugerindo uma influência positiva do grupamento metilenodioxi sobre essa atividade. O composto 5-metóxi-6,7-metilenodioxicumarina foi o mais promissor (IC50= 34,6 μM e IC50= 31,6 μM para C6 e U-138 MG, respectivamente). Como desfecho desse trabalho, pode-se concluir que as cumarinas apresentaram uma atividade inibitória frente ao crescimento celular de linhagens de glioma e um efeito fungicida sobre S. schenckii, resultados estes que corroboram com o uso popular dessas plantas. / Coumarins are promising structures and diverse biological activities have been attributed to these secondary plant metabolites. Studies suggest that the mechanism of antifungal compounds is correlated with antioxidant activity. The reaction of tyrosinase, which produces free radicals, is involved in the process of melanization of the fungus Sporothrix schenckii, the agent of subcutaneous mycosis with the highest incidence in southern Brazil. The inhibition of this enzyme has recently been reported to extract Pterocaulon (Asteraceae) This plant is rich in coumarins and used in traditional medicine in Brazil for topical treatment of fungal infections and in folk medicine of Argentina as anticancer. The aim of this study was to investigate the in vitro antifungal activity and correlation with its antioxidant properties and cytotoxic activities of extracts of some species of Pterocaulon, as well as the isolated coumarins, and 4-methylcoumarin analogs obtained by synthesis. The 6.7-methylenedioxycoumarins were isolated from P. balansae and P. lorentzii, while the 4-methylcoumarins were synthesized via Pechmann reaction using microwave. The antifungal activity against Sporothrix schenckii was performed as indicated in the Manual of Clinical and Laboratory Standards Institute. A study of the electrochemical properties of coumarins was performed by cyclic voltammetry, by the method of 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) and against peroxyl radicals (ACAP) by fluorometric method. The analysis showed that the antifungal activity of the methanol extracts of Pterocaulon species (P. polystachyum, P. balansae, P. lorentzii, P. lanatum and P. cordobense) were active against the strains of the fungus S. schenckii, being the extract of P. polystachyum the most active, presenting Minimum Inhibitory Concentration (MIC) compressed between 156 and 312 μg/mL. The fractionation of lipophilic extracts of P. balansae and P. lorentzii led to the isolation of three methylenedioxycoumarins. The crystallographic data of 5-methoxy-6,7-methylenedioxycoumarin were deposited at the Cambridge Crystallographic Data Center 779123. The synthetic coumarins were obtained in satisfactory yields (98-30%) and reduced reaction time (5-20 min). The screening of these coumarins against strains of the fungus S. schenckii revealed that the 5-carboxy-6,7-dihydroxy-4-methylcoumarin was the most active compound, presenting MIC of 66 μM and Minimum Fungicidal Concentration of 246 μM. This coumarin showed synergism with Amphotericin B, and its MIC was reduced to 15 μM. The antifungal activity of phenolic compounds could be related to its antioxidant activities. The compound 5-carboxy-6,7-dihydroxy-4-methylcoumarin was again the most active with IC50 value of 17.49 μM, showing the highest capacity to deplete the radicals DPPH and ACAP, moreover present a oxidation potential of 0.4 V suggesting antioxidant activity. Based on the antioxidant and antifungal tests it was observed that the presence of hydroxyl groups at C-7 and C-8 of the coumarin ring and the addition of polar grouping at C-5 favored both antifungal and antioxidant activities.In the second part of this work, it was evaluated the cytotoxicity of the Pterocaulon compounds and some commercially available coumarins, with simple structure. The cytotoxic potential was determined by Methyl Thiazole Tetrazolium (MTT) test using strains of human glioma (U138-MG) and rat (C6). It was observed that the 6,7-methylenedioxycoumarins caused a significant reduction in cell viability, suggesting a positive influence of the methylenedioxy group in this activity. The compound 5-methoxy-6,7-methylenedioxycoumarin was the most promising (IC50 = 34.6 μM and IC50 = 31.6 μM for C6 and U-138 MG, respectively). In conclusion, this work it was demonstrated that some coumarins showed an inhibitory activity against the growth of glioma cell lines and a fungicidal effect on the S. schenckii. These results corroborate the popular use of these plants.

Objetivos: O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um modelo farmacocinético/farmacodinâmico (PK/PD) para descrever o efeito antifúngico voriconazol (VRC) contra espécies de Candida. Método: Para alcançar este objetivo as seguintes etapas foram realizadas: i) foi adaptado e padronizado modelo de candidíase disseminada em ratos Wistar imunocompetentes e imunocomprometidos com Candida sp.; ii) foram validados métodos analíticos de LC-MS/MS e LC-UV para o doseamento do VRC em amostras de plasma e microdialisado de tecido; iii) foram estabelecidas as condições para microdiálise do VRC e as taxas de recuperação in vitro, por perda e ganho, e em tecido renal in vivo, por retrodiálise, foram determinadas; iv) foi avaliada a PK não-linear do VRC após administração i.v. bolus das doses de 2,5, 5 e 10 mg/kg e a biodisponibilidade oral foi determinada em roedores; v) a penetração renal do VRC após administração oral das doses de 40 e 60 mg/kg foi determinada em ratos Wistar sadios e infectados com C. albicans ou C. krusei; e (vi) o perfil fungistático do VRC contra C. albicans e C. krusei foi determinado utilizando modelo de infecção experimental in vitro onde foram simuladas as concentrações livres renais do VRC esperadas em humanos após administração oral e i.v. de diferentes posologias. Os dados de cinética e dinâmica obtidos foram modelados com equação de Emax modificada, com auxílio do Scientist®. Resultados e Conclusões: i) O modelo de candidíase disseminada foi adaptado com sucesso para ratos Wistar. C. albicans apresentou maior virulência com Log UFC/g de tecido renal de 5,51 ± 0,56 e 7,29 ± 0,26, após 2 e 7 dias de infecção em animais imunocompetentes, respectivamente. Em animais imunocomprometidos a contagem foi de 6,43 ± 0,59 Log UFC/g após 2 dias de infecção, com morte de todo o grupo dentro de 4 dias. As espécies não-albicans (C. krusei e C. glabrata) apresentaram um perfil de infecção semelhante em animais imunocompetentes (Log UFC/g = 2,98 ± 0,27 para C. krusei e 2,48 ± 0,46 para C. glabrata). Entretanto, nos animais imunocomprometidos, C. krusei promoveu morte de todo o grupo em até 7 dias, enquanto C. glabrata causou apenas um aumento no grau de infecção (Log UFC/g = 6,98 ± 0,48). ii) Os métodos analíticos por LC-UV e LCMS/ MS para quantificação do VRC foram validados. As curvas de calibração foram lineares na faixa de 50 a 2500 ng/mL (r > 0,98) para ambos os métodos. Os ensaios de precisão intra e inter-dia foram > 94,9 e 95,8 %, para microdialisado por HPLC-UV e > 87,5 e 92,3 % para LC-MS/MS em plasma, respectivamente. A exatidão foi > 89,1 % para HPLC-UV e > 88,4 % para LC-MS/MS. iii) A avaliação do VRC por microdiálise mostrou que a recuperação é concentração independente (0,1–2,0 μg/mL). O VRC entretanto, devido a sua moderada lipofilia, liga-se às tubulações do sistema de microdiálise, gerando diferenças entre a recuperação determinada pelo método de perda (retrodiálise) e de ganho (diálise) in vitro, as quais puderam ser corrigidas após o cálculo do coeficiente de ligação do fármaco ao sistema. A recuperação in vivo após correção da ligação ao sistema foi de 24,5 ± 2,8 % iv) A análise dos perfis de plasmáticos do VRC obtidos em ratos Wistar após administração oral mostrou comportamento não-linear, compatível com saturação de eliminação. A avaliação compartimental dos perfis i.v. de diferentes doses, utilizando modelo de três compartimentos com eliminação de Michaelis-Menten, permitiu a determinação da constante de Michaelis (KM) de 0,58 μg/mL e da velocidade máxima da eliminação (VM) de 2,63 μg/h, em média. A modelagem simultânea dos dados plasmáticos (40 mg/kg) e i.v. (10 mg/kg) permitiu a determinação da biodisponibilidade oral do VRC em ratos, que foi de 82,8%. v) A fração de penetração renal do VRC, determinada por microdiálise em ratos sadios e infectados, foi de 0,34 ± 0,01, similar a fração livre do fármaco no plasma (0,34), indicando que as concentrações livres renais de VRC são semelhantes às concentrações livres plasmáticas e que as mesmas não se modificam devido a infecções causadas por Candida sp. vi) Os parâmetros da modelagem PK/PD do efeito do VRC contra espécies de Candida em modelo de infecção experimental in vitro obtidos foram: CE50 de 2,96 μg/mL e Kmax = 0,26 h-1 para C. albicans e CE50 de 3,47 μg/mL e Kmax = 0,51 h-1 para C. krusei. Houve diferença estatística apenas no Kmax para as duas espécies (α = 0,05) indicando uma maior suscetibilidade da C. krusei ao VRC. O modelo PK/PD de Emax modificado utilizado foi capaz de descrever adequadamente os perfis de inibição do crescimento de Candida sp em função do tempo, para todos os regimes terapêuticos do VRC avaliados, podendo ser usado para otimização da terapia com esse fármaco. / Objectives: The aim of this work was the development of a pharmacokineticpharmacodynamic model (PK/PD) to describe the fungistatic effect of voriconazole (VRC) against Candida species. Method: To reach this objective, the following steps were done: i) a disseminated candidiasis model to immunocompetent and immunocompromised Wistar rats with Candida sp was adapted and standardized; ii) analytical methods of LC-MS/MS and LC-UV for measurement of VRC in plasma and microdialysate tissue samples were validated; iii) microdialysis conditions of VRC and the recoveries rate in vitro, by loss and gain, in renal tissue in vivo, by retrodialysis, were determined; iv) the non-linear PK of VRC after i.v. bolus administration of 2.5, 5 e 10 mg/kg doses were evaluated and the oral bioavailability in rodents was estimated; v) tissue penetration of VRC after oral administration of 40 and 60 mg/kg was determined in healthy and infected by C. albicans or C. krusei Wistar male rats; vi) the fungistatic profile of VRC against C. albicans and C. krusei was determined using a experimental infection model in vitro, where the free renal concentrations of VRC expected in humans after oral and iv administration of different dosing regimens were simulated. The kinetic and dynamic data obtained were modeled using an Emax modified model, with aid of Scientist®. Results and Conclusions: i) The disseminated candidiasis model was successfully adapted to Wistar rats. C. albicans showing high virulence with Log CFU/g of renal tissue of 5.51 ± 0.56 and 7.29 ± 0.26, after 2 and 7 days of infection in immunocompetent animals, respectively. In immunocompromised animals, the counting was 6.43 ± 0.59 Log CFU/g after 2 days of infection, with whole group death within 4 days. Non-albicans especies (C. krusei e C. glabrata) showed a similar infection profile in immunocompetent and immunocompromised animals (Log CFU/g = 2.98 ± 0.27 to C. krusei e 2.48 ± 0.46 to C. glabrata). However, in immunocompromised animals, C. krusei causes death in the whole group up to 7 days, instead, C. glabrata causes only a low increase in the infection degree (Log CFU/g = 6.98 ± 0.48). ii) The analytical methods of HPLC-UV and LC-MS/MS to VRC quantification were validated. Linearity was between 50 - 2500 range ng/mL (r > 0.98) for both methods. The intra and inter-day precision assays were > 94.9 e 95.8 %, for microdialysate using LC-UV and > 87.5 e 92.3 % using LCxx MS/MS for plasma, respectively. The accuracy was > 89.1 % for HPLC-UV and > 88.4 % for LC-MS/MS. iii) The evaluation of VRC by microdialysis showed that recovery is concentration independent (0.1–2 μg/mL). VRC, however, due to its moderate lipophilic characteristic, binds to the microdialysis system tubing’s, generating differences between recoveries determined by loss (retrodialysis) and gain (dialysis) in vitro methods, which could be corrected after determination of drug’s binding coefficient to the system. The in vivo recovery determined after correction of system binding was 24.5 ± 2.8 %. iv) VRC plasma profiles analysis obtained from Wistar rats after oral administration showed a nonlinear behavior, compatible with saturable elimination. The compartmental evaluation of i.v. profiles in different doses, employing the a compartment model with Michaelis-Menten elimination, allowed to determine the Michaelis-Menten constant (KM) of 0.58 μg/mL and the maximum velocity (VM) of 2.63 μg/h, in average. The simultaneous modeling of oral (40 mg/kg) and iv (10 mg/kg) plasma data allowed the determination of the oral bioavailability of VRC in rats, equal to 82.8%. v) The VRC renal penetration fraction, determined by microdialysis in healthy and infected rats, was 0.34 ± 0.01, similar to the free unbound fraction in plasma (0.34), showing that VRC free renal concentration levels are similar to the unbound plasma concentrations and that did not change due the infection associated to Candida sp. vi) The parameters of PK-PD modeling of VRC effect against Candida species in the in vitro experimental infection model obtained were: EC50 de 2.97 μg/mL and Kmax = 0.203 h−1 to C. albicans and EC50 of 3.47 μg/mL and Kmax = 0.51 h−1 to C. krusei. There is a statistical difference only in Kmax value for the two species (α = 0.05), showing a higher susceptibility of C. krusei to VRC. The PK/PD Emax modified model employed was able to describe adequately the growth inhibition profiles of Candida sp in function of time, for all VRC dosing regimens evaluated, and can be used for therapy optimization with this drug.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-04-23T13:09:37Z No. of bitstreams: 2 Paulo Silva P2.pdf: 7012001 bytes, checksum: ac02584f36ed9b11322782dedd7f3d27 (MD5) Paulo Silva P1.pdf: 6123162 bytes, checksum: 481a802fdab0d1220341da009f60cb4f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-23T13:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Paulo Silva P2.pdf: 7012001 bytes, checksum: ac02584f36ed9b11322782dedd7f3d27 (MD5) Paulo Silva P1.pdf: 6123162 bytes, checksum: 481a802fdab0d1220341da009f60cb4f (MD5) Previous issue date: 2007 / O presente trabalho descreve o estudo fitoquímico da fase em diclorometano dos componentes fixos das folhas de Myrcia hiemalis, bem como os ensaios biológicos realizados com o extrato etanólico, fases em diclorometano e hexano e substâncias isoladas. A espécie M. hiemalis está sendo estudada quimicamente pela primeira vez. Do estudo fitoquímico da fase em diclorometano das folhas de Myrcia hiemalis foram isolados e identificados sete componentes não-voláteis: miricitrina, daucosterol, 2?,4?-diidróxi-3?,5?-dimetil-6?-metóxichalcona, 2?,6?-diidróxi-3?-metil-4?-metóxichal-cona, 2?,3?,4?-diidróxi-5?-metil-6?-metóxichalcona, 7-hidróxi-6,8-dimetil-5-metóxi-flavanona e 5,7-diidróxi-6,8-dimetilflavanona. As estruturas das substâncias foram determinadas através das análises de diversas técnicas de RMN de 1H e 13C. Foram realizados testes antimicrobianos utilizando a técnica de Concentração Inibitória Mínima (CIM) com os microorganismos: Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus,Streptococcus mutans, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella, choleraesuis, Aspergillus niger, Cladosporium cladosporioides, Candida albicans e Crinipellis perniciosa. A fase em diclorometano apresentou atividade contra as bactérias Gram-positivas testadas e contra o fungo Crinipellis perniciosa. Das substâncias isoladas, apresentaram atividade antimicrobiana a 2?,4?-diidróxi-3?,5?-dimetil-6?-metóxichalcona contra Micrococcus luteus e a 7-hidróxi-6,8-dimetil-5-metóxiflavanona contra Bacillus subtilis e Micrococcus luteus.Testes anti-Trypanosoma cruzi e anti-Leishmania amazonensis foram realizados com substâncias isoladas utilizando a técnica desenvolvida pela FIOCRUZ, sendo que a 2?,4?-diidróxi-3?,5?-dimetil-6?-metóxichalcona apresentou atividade contra os parasitos (anti-T. cruzi: IC50 13,12 mM; anti-L. amazonensis: 100% inibição a 50 mM) e a 2?,6?-diidróxi-3?-metil-4?-metóxichalcona apresentou atividade contra T. cruzi (IC50 35,95 mM). / Salvador