As bactérias ácido lácticas (BAL) possuem papel importante em uma ampla variedade de alimentos, incluindo produtos lácteos e cárneos. Neste trabalho foram investigadas as atividades antimicrobiana e antioxidante, do sobrenadante bruto e do extrato intracelular, de 36 BAL isoladas de produtos lácteos e cárneos. Estas bactérias foram identificadas através do seqüenciamento do rRNA da região 16S. A análise através do GenBank BLAST revelou que todos os isolados pertencem ao gênero Enterococcus. Três isolados foram identificados como E. hirae, um isolado como Enterococcus sp., 17 como E. faecium e 15 como E. faecalis. A atividade antimicrobiana frente ao microrganismo indicador Listeria monocytogenes foi observado em 21 isolados, utilizando o sobrenadante bruto, destacando-se com os maiores halos de inibição os isolados IS 196 (10,7 mm) e IS 197 (11,0 mm) e, em 7 isolados, utilizando o extrato intracelular, os maiores halos de inibição foram obtidos com os isolados IS 196 (9,7 mm) e IS 197 (9,3 mm), sendo estes dois isolados identificados como E. faecium. A avaliação da atividade antioxidante foi realizada por três métodos distintos. Os 36 isolados apresentaram atividade antioxidante pela determinação às Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbiturico (TBARS), utilizando tanto o sobrenadante bruto quanto o extrato intracelular. A A capacidade antioxidante também foi verificada pelo seqüestro de radicais livres através do método de ABTS (2,2 azino-bis (3-•+etilbenzotiazolino-6-ácido sulfônico)) e pela captura do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). Nestes dois métodos verificou-se que apenas as amostras do sobrenadante bruto demonstraram capacidade antioxidante. A atividade antioxidante mais elevada foi observada nos isolados IS 196 e IS 197. Foi realizado também o enriquecimento das espécies de Enterococcus com selênio (Selenito de Sódio - Se(IV)). Neste estudo, selecionaram-se os isolados que bioacumularam maior concentração de Se(IV) na biomassa, BAL 14 e BAL 18, identificados como E. faecalis e E. faecium, respectivamente. Os isolados tiveram ótimo crescimento à 35ºC por 24 h (DO BAL 14=1,4 e BAL 18=1,5), a remoção 600ótima do selênio foi verificada com o pH inicial de 7,0 e temperatura de 25ºC. Através da curva de crescimento observou-se que após 8 h de incubação, as culturas BAL 14 e BAL 18 apresentaram a maior produção de biomassa (DO=1,42 e 1,41) e bioremoção do Se(IV) (14,89 e 14,79 mg L), 600-1respectivamente. Quantidade considerável de selênio foi detectada na biomassa de E. faecium (0,4599 mg g de peso seco e E. faecalis (0,4759 mg g de peso -1-1seco). Estes resultados mostram que estas bactérias podem auxiliar particularmente na redução ou inibição de microrganismos patogênicos, na inibição da oxidação de alimentos e ração animal, bem como reduzir os danos oxidativos provocados pela produção de radicais livres nos organismos vivos. A absorção significativa de Se(IV) pelas espécies de Enterococcus observados neste estudo, indicam que estes microrganismos podem ser utilizados para estudos posteriores visando à suplementação alimentar animal, através da utilização da biomassa produzida pelos Enterococcus enriquecidos com Se(IV). / The lactic acid bacteria (LAB) have an important role in a wide variety of foods, including dairy products, meat and fermented foods. In this study, antimicrobial and antioxidant activities of culture supernatants and intracellular extracts of 36 LAB isolated from meat and dairy products were investigated. These bacterial were identified by 16S rRNA sequencing. GenBank BLAST analysis revealed that all the isolates belong to the genus Enterococcus. Three isolates were identified as E. hirae, one isolate as Enterococcus sp., 17 as E. faecium and 15 as E. faecalis. Antimicrobial activity against the indicator microorganism Listeria monocytogenes was observed for 21 supernatants culture, it is highlighted with the largest inhibition zones the strains IS196 (10.7 mm) and IS197 (11.0 mm), and 7 strains using cell extracts, showed the highest inhibition zones. Strains IS196 (9.7 mm) and IS197 (9.3 mm) were identified as E. faecium. Evaluation of antioxidant activity was performed by three different methods. The 36 isolates showed antioxidant activity to determination Thiobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS) method with supernatant culture and cell-free extract. Antioxidant capacity was also observed for the scavenger of free radicals by the method of ABTS (2,2-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) and the capture of the •+radical DPPH (2,2-diphenyl-1 - picrylhydrazyl). These two methods showed that only supernatant culture samples had antioxidant capacity. The highest antimicrobial and antioxidant activities were observed by E. faecium, IS196 and IS197. It also was performed the enrichment of Enterococcus species with Selenium (Sodium selenite - Se(IV)). In these study, it was selected the isolates with highest selenium bioaccumulation capacity, LAB 14 and LAB 18, identified as E. faecalis and E. faecium, respectively. The isolates had high growth at 35ºC for 24 h (DO BAL 14=1.4 and BAL 18=1.5), and the Se(IV) removal was maximum 600at inicial pH 7.0 and 25ºC. Time course experiment showed that both LAB 14 and LAB 18 had highest biomass production (OD=1.42 and 1.41) and Se(IV) 600bioremoval (14.89 and 14.79 mg L) respectively -1after 8 h of incubation. Substantial amount of selenium was detected in biomass of E. faecium (0.4599 mg g-1 of dry weight and E. faecalis (0.4759 mg g-1 of dry weight). These results showed that these bacteria can particularly help to reduce or inhibit pathogenic microorganisms, in the inhibition of oxidative spoilage in foods and animal feed, as well as, reduce oxidative damage caused by free radical production in living organisms. The significant uptake of Se(IV) by the Enterococcus species observed in this study, indicate that they can be used to deliver dietary selenium through feed augmentation with Se(IV)-enriched Enterococcus biomass.

Infections caused by microorganisms are a serious public health problem, mainly due to the emergence of multi drug resistant bacteria and fungi. Thus, the search for new alternative therapeutic approaches remains, being the goal of several research groups worldwide. The World Health Organization (WHO) recognizes the value and encourages the use of traditional medicine knowledge. Brazil has a large number of plant species and many of them are considered medicinal. However, despite quite a lot of them are popularly used they were not scientifically validated yet. The Northeast region hosts an extensive native flora with many species showing therapeutic properties, but most of them scientifically unproven. As an example, there were representatives of the families Rubiaceae and Polygonaceae, the latter being the fourth largest family between angiosperms. Amongst Alagoas flora there are species of these two families, such as Coccoloba mollis Casaretto (1844) (Polygonaceae), Triplaris americana Linnaeus (Polygonaceae) and Coutarea hexandra Schum. (Rubiaceae), which genera have species cited by its ethnomedicinal uses. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of crude extracts and fraction obtained from these plant species. Tests were carried out in Petri dishes by the disk diffusion method to evaluate relative effectiveness of tested samples as antimicrobial agents, by measuring zones of inhibition on culture of Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Candida albicans (ATCC 10231). The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by microdilution in BHI broth (Brain Heart Infusion). Plant species were also tested against Artemia salina larvae for preliminary evaluation of its acute toxicity. Of the 69 samples tested, 17 were effective against S. aureus. The methanol fraction from the dichloromethane extract of the roots of C. hexandra was considered the most promising because it presented the highest percentage bacterial growth inhibition. Of the samples subjected to MIC determination all were active with values ranging from 125 to 500 μg/mL. None of the tested species were active against P. aeruginosa or C. albicans. Regarding the toxicity on A. salina, in preliminary tests 32 of the 69 tested samples were non-toxic. The others were submitted to quantitative test 10 of them exhibited non-toxic effects. Among the samples that showed toxicity LC50 values ranged from 2.68 to 953.9 g/mL. The three plant species showed antibacterial activity against S. aureus. For toxicity against A. salina, the 27 toxic samples, 17 are species of the family Polygonaceae, and the rest of the species C. hexandra were toxic / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / As infecções causadas por microrganismos são um sério problema de saúde pública, principalmente devido emergência de bactérias e fungos multiresistentes. Portanto, permanece a necessidade da busca de novas alternativas de tratamento, objetivo de vários grupos de pesquisa no mundo. A Organização Mundial de Saúde (OMS) reconhece o valor e incentiva o aproveitamento do conhecimento tradicional. O Brasil possui um grande acervo vegetal, e muitas plantas são consideradas medicinais. No entanto, apesar de várias delas serem utilizadas popularmente ainda não foram validadas cientificamente. A região Nordeste abriga uma vasta flora nativa com muitas espécies com propriedades terapêuticas, porém a maior parte ainda sem comprovação científica. Como exemplo, citam-se representantes das famílias Polygonaceae e Rubiaceae, sendo esta última a quarta família de maior diversidade entre as angiospermas. Na flora Alagoana encontram espécies destas duas famílias, como a Coccoloba mollis Casaretto (1844) (Polygonaceae), Triplaris americana Linnaeus (Polygonaceae) e Coutarea hexandra Schum. (Rubiaceae), cujos gêneros possuem espécies com registros sobre seu uso etnomedicinal. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos brutos e frações obtidas destas espécies vegetais. Os testes foram conduzidos em placas de Petri pelo método de difusão em disco para avaliar o potencial antimicrobiano das amostras testadas, pela formação de halo de inibição frente à cultivos de Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Candida albicans (ATCC 10231). A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pela técnica de microdiluição em caldo BHI (infusão de cérebro e coração). As espécies vegetais foram também testadas para avaliação preliminar de sua toxicidade aguda, frente a larvas de Artemia salina. Das 69 amostras testadas, 17 delas apresentaram atividade contra S. aureus, a fração em metanol proveniente de extrato em diclorometano da raiz de C. hexandra foi considerada a mais promissora por ter apresentado maior percentual de inibição do crescimento bacteriano. Submetidas a determinação da CIM todas foram ativas com valores entre 125 e 500 μg/mL. Nenhuma das espécies vegetais apresentou atividade contra P. aeruginosa, ou contra C. albicans. Com relação à toxicidade frente A. salina, das 69 amostras submetidas ao teste preliminar 32 foram atóxicas. As demais foram submetidas ao teste quantitativo sendo 10 atóxicas. Entre as amostras que apresentaram toxicidade os valores de CL50 variaram de 2,68 a 953,9 g/mL. As três espécies vegetais apresentaram atividade antibacteriana frente S. aureus, com relação a toxicidade frente A. salina, das 27 amostras tóxicas, 17 são das espécies da família Polygonaceae, e as demais da espécie C. hexandra foram tóxicas.

The main function of cuticular lipids in insects is to limit water loss through the surface. However they are also involved in various types of chemical communication between species and reduced penetration insecticides chemicals, and toxins as well as provide protection against the attack of microorganisms, parasites and predators. Numerous species of insect vectors of highly virulent diseases of plants, play a critical role as agricultural pests as in the case of Rhynchophorus palmarum which is vector in nematode transmitter red ring disease is responsible for causing damage to the agricultural economy of palm trees, in particular coconut in various regions of the country. However, the susceptibility or resistance of various insect species, infection can result from several factors, including differences in structure and composition of the exoskeleton, and the presence of antimicrobial compounds in the cuticle. The role of the host surface lipids in the pathogenesis of insects is still poorly understood. The determination of cuticular lipids profile is therefore of great importance to understanding insect susceptibility or resistance to infection. This study aimed to characterize the cuticular profile adult insect R. Palmarum male and female, and evaluate the presence of antimicrobial activity. The analyzes were performed by gas chromatography-mass spectrometry of the hexane fractions (extract I) and dichloromethane (extract II and III). the main cuticular components were identified as hydrocarbons, alcohols, ketone and aldehyde, both in male and in female, including the presence of alkanes (C25; C27; C43) trimethyl-alkane (C40) identified in the extract II female insect unsaturated hydrocarbons (C20:5) in the extract I female and male, and methyl branched alkene (C24:6) only in female extract II. They identified 10 fatty acid esters of C14 to C23, with variation between the sexes in C22:0, C18:1, C21:0 and C20:2. Showed relevant amounts of C16 and C18, the common cuticular lipids extract (II) and internal (III). The extracted chitin cuticle, chitosan and derivative thereof, in the study were characterized by IR and X-ray diffraction. The extracts of cuticle were satisfactory inhibition against Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Candida albicans and Candida tropicalis. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A principal função dos lipídios cuticulares em insetos é limitar a perda de água através da superfície. Porém também estão envolvidos em vários tipos de comunicação química entre espécies e redução da penetração de inseticidas, produtos químicos e toxinas além de fornecer proteção contra o ataque de microorganismos, parasitas e predadores. Numerosas espécies de insetos transmissores de doenças altamente virulentas de plantas, desempenham um papel crítico como pragas agrícolas, como é o caso do Rhynchophorus palmarum que é vetor no nematoide transmissor da doença Anel vermelho responsável por causar danos à economia agrícola de palmeiras, em especial o coqueiro, em diversas regiões do país. No entanto, a susceptibilidade ou resistência de várias espécies de insetos a infecção pode resultar de vários fatores, incluindo as diferenças de estrutura e composição do exoesqueleto, assim como a presença de compostos antimicrobianos na cutícula. O papel dos lipídios de superfície de acolhimento na patogênese de insetos ainda é pouco compreendida. A determinação do perfil de lipídeos cuticulares é, portanto, de grande importância para a compreensão da suscetibilidade do inseto ou a resistência à infecção. Este estudo teve como objetivo caracterizar o perfil cuticular do inseto adulto R. palmarum macho e fêmea, e avaliar a presença de atividade antimicrobiana. As análises foram executadas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa das frações cuticulares em hexano (extrato I) e diclorometano (extrato II e III). Foram identificados os principais constituintes cuticulares, como hidrocarbonetos, álcoois, cetona e aldeído, tanto em macho quanto em fêmea, incluindo a presença de alcanos (C25; C27; C43), trimetil-alcano (C40), identificado no extrato II do inseto fêmea, hidrocarboneto insaturado (C20:5) no extrato I fêmea e macho, e alceno metil- ramificado (C24:6) apenas no extrato II da fêmea. Foram identificados 10 ésteres de ácidos graxos de C14 a C23, com variação entre os sexos em C22:0, C18:1, C21:0 e C20:2. Apresentou quantidade relevante de C16 e C18, comum no extrato de lipídeos cuticulares (II) e internos (III). A quitina extraída da cutícula, e o seu derivado quitosana, foram caracterizados em estudo por infravermelho e por difração de raio- X. Os extratos da cutícula apresentaram inibição satisfatória contra Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Candida albicans e Candida tropicalis.

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biological and Medical Sciences Candidate: Dagmar Dolinská Supervisor: PharmDr. Ondřej Janďourek, Ph.D. Work title: Advanced methods for testing antimicrobial activity Goal: The aim of the work in the theoretical part was to summarize methods of antimicrobial screening focusing on antimycotics and in the practical part to evaluate the antifungal activity of 47 tested substances using the microdilution broth method. Methods: The substances were tested using quantitative microdilution broth method on eight strains of yeast and fibrous fungi. These were Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Absidia corymbifera and Trichophyton interdigitale. Results: The highest antimycotic activity was demonstrated by compound Ac-0a, where we recorded after 24 hours of incubation activity against all eight strains. However, it was not able to stop the growth of three strains after 48 hours of incubation, the strains concerned were Candida parapsilosis, Aspergillus fumigatus and Aspergillus flavus. Other samples which have shown activity were Cl-2, where activity was observed for Candida krusei, Aspergillus fumigatus and Trichophyton interdigitale strains, Cl-3 for...

Nos últimos anos, os metabólitos isolados de fungos marinhos vêm ganhando considerável atenção em razão de possuírem estruturas químicas únicas com diversas atividades biológicas já descritas, incentivando novas pesquisas na área. A tricomoníase é a doença sexualmente transmissível (DST) de origem não viral mais comum no mundo, estando associada a sérias consequências à saúde, sendo relatado um aumento no número de isolados clínicos resistentes ao tratamento de escolha. Infecções causadas por bactérias com diferentes mecanismos de resistência, representam um grande desafio para a saúde pública atual, acarretando em altas taxas de mortalidade e morbidade. As bactérias patogênicas dispõem de fatores de virulência, como a formação de biofilme, que agravam infecções tornando-as persistentes. Devido ao potencial biológico dos produtos de origem marinha e a importância dessas infecções, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-T. vaginalis, antimicrobiana e antibiofilme de moléculas obtidas da fermentação de fungos associados a organismos marinhos. As 14 cepas fúngicas foram isoladas de esponjas e corais marinhos, obtidos da costa do estado de Alagoas, Brasil. Após produção do metabólito, o micélio foi separado do meio. O micélio foi extraído com metanol e o meio com acetato de etila. As frações foram submetidas aos ensaios de atividade anti-T.vaginalis, antimicrobiana e antibiofilme (inibição da formação e erradicação). As frações que demonstraram atividade foram submetidas ao ensaio de hemólise, avaliação da citotoxicidade (HMVII e Vero) e toxicidade em modelo de Galleria mellonella. A fração que demonstrou os melhores resultados nos ensaios de atividade foi submetida ao fracionamento bioguiado. As frações orgânicas dos fungos Aspergillus niger (FMPV 03) e complexo Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii (FMPV 09) foram ativas frente ao T. vaginalis ATCC 30236, com valores de MIC de 2 mg/mL e 1 mg/mL, respectivamente. Quando investigadas, essas frações mantiveram a atividade frente ao isolado clínico resistente ao metronidazol (TV-LACM2R), apresentado os mesmo valores de MIC encontrados para o isolado ATCC. Para a atividade antimicrobiana, as frações orgânicas do Aspergillus niger (FMPV 03), Aspergillus tubingensis (FMPV 06), complexo Trichoderma harzianu/Hypocrea lixii (FMPV 09) e Aspergillus sydowii (FMPV 10) foram ativas contra S. epidermidis ATCC 35984. Ainda, frente a P. aeruginosa ATCC 27853 somente as frações orgânicas do Aspergillus niger (FMPV 03) e Aspergillus tubingensis (FMPV 06) demonstraram atividade. Neste ensaio, para ambas as bactérias, os valores de MIC não ultrapassaram 1,5 mg/mL. A atividade destas frações também foi observada frente às mesmas bactérias no ensaio de antiformação de biofilme, já que ocorreu a morte das células. A habilidade de erradicar biofilmes foi detectada somente para a fração orgânica do fungo Aspergillus flavus (FMPV 01), o qual foi capaz de remover 52% do biofilme já formado de S. epidermidis ATCC 35984. A ausência de hemólise dos eritrócitos foi observada em todas as frações ativas estudadas. Na avaliação da citotoxicidade in vitro frente às linhagens celulares HMVII e Vero, apenas a fração orgânica do Aspergillus niger (FMPV 03), não apresentou efeito citotóxico. No entanto, no ensaio de avaliação da toxicidade in vivo, nenhuma das amostras testadas causou redução na sobrevivência das larvas de Galleria mellonella. Então, a fração orgânica do fungo Aspergillus niger (FMPV 03) foi submetida ao fracionamento bioguiado utilizando coluna RP-18. Sete frações foram obtidas, sendo que a primeira (100% água), foi ativa contra T. vaginalis, S. epidermidis e P. aeruginosa. Quando submetida à Cromatografia em Camada Delgada (CCD), demonstrou quatro bandas que foram coradas com anisaldeído-ácido sulfúrico e ninhidrina. Além disso, a fração 100% água não demonstrou redução da sobrevivência das larvas de Galleria mellonella, nas três concentrações testadas. Portanto, a gama de atividades relatadas corrobora o potencial dos fungos marinhos na produção de moléculas bioativas. / In recent years, the isolated metabolites from marine fungi have been attracted considerable attention due to unique chemical structures with diverse biological activities, encouraging further research in the area. Trichomoniasis is the most prevalent non-viral sexually transmitted disease (STD) worldwide. This has been linked to serious health consequences and an increase in the number of clinical isolates resistant to the treatment of choice has been reported. Infections caused by bacteria with different resistance mechanisms represent a major challenge to the current public health, resulting in high rates of mortality and morbidity. Pathogenic bacteria present virulence factors, such as biofilm formation, which migth enhance the persistence of infections. Due to the biological potential of marine products and the importance of these infections, the aim of this study was to evaluate the anti-T. vaginalis, antimicrobial and antibiofilm activities of the obtained molecule from the fermentation of fungi associated with marine organism. The 14 fungal strains were isolated from sponges and corals marine obtained from the coast of Alagoas, Brazil. After production of the metabolite the mycelium was separated from the medium. The mycelium was extracted with methanol and the medium with ethyl acetate. The fractions were subjected to the assays anti-T. vaginalis, antimicrobial and antibiofilm (inhibition of the formation and eradication) activities. The fractions that showed activity were subjected to the assays of hemolysis, cytotoxicity evaluation (HMVII and Vero) and toxicity Galleria mellonella model. The fraction which showed the best results in activity assays was subjected to fractionation bioguided. The organic fraction of Aspergillus niger (FMPV 03) and Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii complex (FMPV 09) were active against T. vaginalis ATCC 30236 with MIC values of 2 mg/mL and 1 mg/mL, respectively. When investigated, these fractions maintained activity against resistant clinical isolate to metronidazole (TV-LACM2R), presented the same MIC values found to isolate ATCC. For the antimicrobial activity, the organic fractions of Aspergillus niger (FMPV 03), Aspergillus tubingensis (FMPV 06), Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii complex (FMPV 09) and Aspergillus sydowii (FMPV 10) were active against S. epidermidis ATCC 35984. Even, against P. aeruginosa ATCC 27853 only the organic fractions of Aspergillus niger (FMPV 03) and Aspergillus tubingensis (FMPV 06) demonstrated activity. In this test, for both bacteria, MIC values did not exceed 1.5 mg/mL. The activity of these fractions was also observed across the same bacteria in the antibiofilm formation assay, since cell death occurred. The ability to eradicate biofilms was detected only for the organic fraction of the fungus Aspergillus flavus (FMPV 01) which was able to remove 52% of the already formed biofilm of S. epidermidis ATCC 35984. The absence of hemolysis of red cells was observed in all active fractions studied. In the assessment of cytotoxicity in vitro against the cell lines HMVII and Vero, only the organic fraction of Aspergillus niger (FMPV 03), showed no cytotoxic effect. However, in the test evaluation of in vivo toxicity, none of the samples tested caused a reduction in the survival of the larvae of Galleria mellonella. Then, the organic fraction of the fungus Aspergillus niger (FMPV 03) was submitted to bioguided fractionation using RP-18 column. Seven fractions were obtained, of which the first (100% water), was active against T. vaginalis, S. epidermidis e P. aruginosa. When subjected to thin layer chromatography (TLC) showed four bands were stained with ninhydrin and anisaldehyde-sulfuric acid. In addition, 100% water fraction showed no reduction of the survival of larvae of Galleria mellonella at the three concentrations tested. Therefore, the range of activities reported corroborates the potential of marine fungi to produce bioactive molecules.

Infecções por bactérias do gênero Salmonella podem causar doenças em aves levando a perdas produtivas, como, queda de postura, diminuição do ganho de peso e mortalidade. Além disso, os produtos avícolas estão entre as principais causas de toxi-infecções alimentares em humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro dos óleos essenciais de Canela da China, Orégano, Pimenta Negra e Tomilho Branco frente a amostras de Salmonella enterica isoladas de aves, bem como comparar as técnicas de disco difusão e microdiluição em caldo. Para avaliar o efeito inibitório dos óleos essenciais no crescimento dos micro-organismos usou-se uma técnica de microdiluição em caldo empregando-se resazurina como indicador de viabilidade celular. Dos quatro óleos testados, apenas a pimenta negra não exibiu efeito inibitório sobre o crescimento das bactérias testadas e o óleo de orégano foi o único que apresentou atividade frente a todas as amostras com valores de concentração inibitória mínima (CIM) variando de 8-1% (v/v). Enquanto que, os óleos de tomilho e canela foram efetivos para 91,3% (42/46) e 80,43% (37/46) das amostras, respectivamente. Os valores de CIM para o tomilho variaram de 8-4% (v/v) e para a canela foram de 8-2% (v/v). Em relação às técnicas, pode-se observar que a técnica de microdiluição em caldo apresentou melhores resultados que a disco difusão, embora seja difícil comparar os resultados devido às características peculiares dos óleos, como a viscosidade, volatilidade e diferente afinidade com a água. Além disso, a microdiluição em caldo nos fornece valores semi-quantitativos, enquanto que o método de disco difusão os resultados são descritos qualitativamente. Embora não se tenha ainda hoje padronizações para avaliar o efeito inibitório dos óleos no crescimento dos micro-organismos, com este estudo podemos observar que os óleos, principalmente orégano, são uma alternativa natural para aplicações na indústria visando a redução de Salmonella nos produtos. / Infections with bacteria of the genus Salmonella can cause disease in poultry leading to production losses, as falling posture, decreased weight gain and mortality. Furthermore, poultry products are among the major causes of human alimentary toxinfections. The aim of this study was to evaluate the in vitro antimicrobial activity of essential oils of cinnamon from China, Oregano, Thyme and Black Pepper White against strains of Salmonella enterica isolated from poultry and compare the techniques disk diffusion and microdilution. To assess the inhibitory effect of essential oils on the growth of micro-organisms used was a broth microdilution technique employing resazurin as an indicator of cell viability. Of the four oils tested, only black pepper showed no inhibitory effect on the growth of bacteria and tested oregano oil was the only one that showed activity against all samples with values of minimum inhibitory concentration (MIC) ranging from 8-1% ( v / v). While the oils of thyme and cinnamon were effective in 91.3% (42/46) and 80.43% (37/46) of samples, respectively. MIC values for the peas ranged from 8-4% (v / v) and cinnamon were 8-2% (v / v). Regarding the techniques, one can observe that the microdilution broth showed better results than disk diffusion, although it is difficult to compare the results due to the peculiar characteristics of oils, as viscosity, volatility, and different affinity for water. Furthermore, the broth microdilution provides semi-quantitative values, while the disk diffusion method results are described qualitatively. Although no standardizations today to evaluate the inhibitory effect of oils on the growth of micro-organisms, with this study we can see that the oils, especially oregano, are a natural alternative for applications in industry for the reduction of Salmonella in products.

This dissertation describes the phytochemical study of Maytenus ilicifolia Mart species. ex Reissek belonging to Celastreceae family. Further, structural modification reactions were performed in β-sitosterol compound, in order to carry out a study of structure / activity against strains of micro-organisms. Through the root bark collected in the municipality of Santana do Livramento - RS was obtained crude extract methanol which gave different subfractions according to the polarity, as it was possible to isolate 4 secondary metabolites. In addition reactions were carried out using acetic anhydride, succinic anhydride and phthalic anhydride to obtain various derivatives of the metabolite isolated β-sitosterol. Ending with analysis of the antimicrobial activity of extracts, fractions and isolated compounds derived from β-sitosterol, carried out by microdilution method plates, opposite to five Gram-positive bacteria, six gram-negative and seven fungi. It was observed in this analysis that the extracts, fractions and isolated metabolites tested showed good results mainly against bacteria Enterococcus and Shigella sonnei, and front the fungus Candida krusei and Cryptococcus neoforman. In the study of structure / activity it has been observed that the addition of two carbolines β-sitosterol contribute to antimicrobial activity. / O presente trabalho de dissertação descreve o estudo fitoquímico da espécie Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek, pertencente a família Celastreceae. Além disso, foram realizadas reações de modificações estruturais no composto β-sitosterol, a fim de se realizar um estudo da relação estrutura/atividade frente a cepas de micro-organismos. Através das cascas da raiz coletas no município de Santana do Livramento RS foi obtido o extrato bruto metanólico o qual originou diferentes subfrações de acordo com a polaridade, a partir disto foi possível isolar 4 metabolitos secundários. Complementarmente foram realizadas reações utilizando anidrido acético, anidrido Succínico e Anidrido Ftálico para obtenção de diferentes derivados do metabolito isolado β-sitosterol. Findando com análise da atividade antimicrobiana dos extratos, frações, substâncias isoladas e derivados do β-sitosterol, realizadas através do método da microdiluição em placas, frente a cinco bactérias Gram-positivas, seis Gram-negativas e sete fungos. Observou-se nesta análise que os extratos, frações e metabólitos isolados testados apresentaram bons resultados principalmente contra as bactérias Enterococcus e Shigella sonnei, e frente os fungos Candida krusei e Cryptococcus neoforman. No estudo da relação estrutura/atividade observou-se que adição de duas carbolinas ao β-sitosterol contribuiu para atividade antimicrobiana.

Native species of the flora from South Brazil are the aim of the research of the Núcleo de Pesquisa de Produtos Naturais of Federal University of Santa Maria, Brazil. One of the most studied families is the Sterculiaceae and, in that family, there is the Waltheria douradinha Saint Hilaire specie, study purpose of this master degree work. W. douradinha, popularly known as douradinha do campo , is used to treat lung infections, cystitis, chronic ulcer and to wash syphilitic wounds. Secondary metabolites isolated from the bark of the roots from this specie, among the amide (O)-metiltembamide, three known quinolone alkaloids, Antidesmone, Waltherione-A and Waltherione-B, two cyclopeptide alkaloids also known, Waltherine-A and Chamaedrine, and a new quinolone alkaloid VG8. The structures of these substances are determined, principally, by spectroscopics methods, like Nuclear Magnetic Resonance 1H and 13 C (COSY, HMQC e HMBC), mass spectrometry and by the comparison with melting point and literature data. The alkaloids Waltherione-A (WA) and Waltherione-B (WB) are crystallized and analyzed by X-Ray Diffraction to determine their relative stereochemistries. The extracts obtained from several parts of W. douradinha, the fractions obtained from the division of the crude extract of the root and the pure alkaloids, Waltherine-A, VG8, WA, WB and their derivatives were submitted to microbiologic assays (fungus and Gram-positive and Gram-negative bacteria) by bioautography method and by Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The alkaloid VG8 was the most active upon the tested microorganisms, with a positive result of inhibition with 0.5 μg by bioautography assay and with 50 μg mL-1 by MIC assay. / Espécies nativas da flora do Sul do Brasil são alvo de pesquisa do Núcleo de Pesquisa de Produtos Naturais da Universidade Federal de Santa Maria. Uma das famílias mais estudadas é a Sterculiaceae e, dentro desta, encontra-se a espécie Waltheria douradinha Saint Hilaire, objetivo de estudo deste trabalho de mestrado. W. douradinha, conhecida popularmente como douradinha do campo , é utilizada no tratamento de afecções pulmonares, cistite, úlceras crônicas e também para lavar feridas de origem sifilítica. Metabólitos secundários foram isolados da casca da raiz desta espécie, dentre eles a amida (O)-metiltembamida, três alcalóides quinolônicos já conhecidos, Antidesmona, Waltheriona-A e Waltheriona-B, dois alcalóides ciclopeptídicos também já conhecidos, Waltherina-A e Chamaedrina, e um novo alcalóide quinolônico VG8. As estruturas destas substâncias foram determinadas, principalmente, por métodos espectroscópicos, como Ressonância Magnética Nuclear 1H e 13 C (COSY, HMQC e HMBC), espectrometria de massas e através da comparação dos dados obtidos a partir do ponto de fusão e dados da literatura. Os alcalóides Waltheriona-A (WA) e Waltheriona-B (WB) foram cristalizados e analisados por Difração de Raios-X a fim de se confirmar suas estereoquímicas relativas. Os extratos obtidos das várias partes da espécie, as frações obtidas do particionamento do extrato bruto da raiz do material vegetal e os alcalóides puros, Waltherina-A, VG8, WA, WB e seus derivados foram submetidos a ensaios Waltheria douradinha, alcalóides quinolônicos e ciclopeptídicos, atividade antimicrobiana.

Four previously known dihydrobenzophenanthridine alkaloids, Dihydrochelerythrine (39), Bocconoline (42), Chelerythrine (2) and 6- Acetonyldihydrochelerythrine (33), were isolated from the stem bark of Zanthoxylum rhoifolium, along with other three lignans and the triterpen Lupeol (11). One of the lignans was identified as being sesamine (114), common in Zanthoxylum and the other two, already known, called Kaerophyllin (117) and Gadain (120) belong to dibenzylbutyrolactones. However, Kaerophyllin (117) and Gadain (120) were isolated for the first time from the Zanthoxylum rhoifolium. The structures of these metabolites were determined, mainly through spectroscopic methods, such as Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 1H e 13 C (COSY, HMQC e HMBC), mass spectrometry and through the comparison of the data obtained from the melting point and data from the literature. The pure compounds and the hexane and eterea acid fractions, as well as chloroform basic fraction were tested for antitumor activity with nine cultured human tumor cell lines in vitro: MCF-7 (breast), NCI-ADR (breast with phenotype of the drug-resistant), UACC-62 (melanoma), NCI-460 (lung), PCO-3 (prostate), HT29 (colon), OVCAR (ovary), 786-0 (kidney) e K-562 (leukemia). The dihydrobenzophenanthridine alkaloids and the fractions showed more active, inhibiting the growth and provoking the death of several cell lines. On the other hand, the lignans showed no significant activity, being that, gadain (120) showed citostatic activity for all lines, only in the largest concentration tested. Through antimicrobial activity assays against Gram-positive bacteria: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilius; ramnegatives: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Salmonella setubal and fungi: Candida albicans, Candida dubliniensis, Sacharomyces cerevisiae and Cryptococcus neoformans, it was possible to observe that the alkaloids and the fractions were really active, mainly against bacteria. Chelerythrine (2) was the most active compound due to the growth inhibition of all the tested microorganisms, at the lowest concentration tested (0.15μg). The lignans were inactive against the tested microorganisms. The results found through the Microdilution Method showed that the alkaloid Chelerythrine presents a fungicide bacteriostatic property. / Quatro alcalóides benzofenantridínicos já conhecidos, Diidrocheleritrina (39), Bocconolina (42), Cheleritrina (2) e 6-Acetonildiidrocheleritrina (33), foram isolados da casca da raiz de Zanthoxylum rhoifolium, juntamente com outras três lignanas e o triterpeno Lupeol (11). Uma das lignanas foi identificada como sendo a Sesamina (114), comum no gênero Zanthoxylum e as outras duas pertencem à classe dibenzilbutirolactônica, denominadas de Kaerofilina (117) e Gadaina (120), ambas já conhecidas, porém foram isoladas pela primeira vez de Zanthoxylum rhoifolium. As estruturas destes metabólitos foram determinadas, principalmente, por métodos espectroscópicos, como a espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear 1H e 13 C (COSY, HMQC e HMBC), espectrometria de massas e através da comparação dos dados obtidos a partir do ponto de fusão e dados da literatura. Os compostos puros e as frações ácidas hexânica e etérea, bem como a fração clorofórmica básica foram submetidas a testes de atividade antitumoral com nove linhagens de culturas de células tumorais humanas in vitro: MCF-7 (mama), NCI-ADR (mama com fenótipo de resistência a múltiplas drogas), UACC-62 (melanoma), NCI-460 (pulmão), PCO-3 (próstata), HT-29 (cólon), OVCAR (ovário), 786-0 (rim) e K-562 (leucemia). Os alcalóides benzofenantridínicos e as frações apresentaram-se mais ativos, inibindo o crescimento e provocando a morte de diversas linhagens celulares. Já as lignanas apresentaram atividade pouco significativa, sendo que gadaina (120) exibiu atividade citostática para todas as linhagens, somente na maior concentração testada. Através dos ensaios de atividade antimicrobiana contra bactérias Grampositivas: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Bacillus subtilius; Gram-negativas: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Salmonella setubal e fungos: Candida albicans, Candida dubliniensis, Sacharomyces cerevisiae e Cryptococcus neoformans, observou-se que os alcalóides e as frações foram bastante ativos, principalmente, contra bactérias. Cheleritrina (2) foi o composto mais ativo, devido à inibição de rescimento de todos os microrganismos testados, na menor das concentrações testadas (0,15μg). As lignanas não foram ativas contra os microrganismos testados. Através dos resultados obtidos pelo Método de Microdiluição, observou-se que o alcalóide cheleritrina apresenta caráter bacteriostático e fungicida.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-02Bitstream added on 2014-06-13T18:26:30Z : No. of bitstreams: 1 fiorentino_fam_me_arafcf.pdf: 993041 bytes, checksum: 1b0b8ea09b16b4f6483f4923d9584e00 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os sabonetes são preparações destinadas à higiene e conhecidos há mais de 4000 anos. São constituídos por sais de ácidos graxos com propriedades detergentes, resultantes da saponificação entre ácidos graxos superiores e seus glicerídeos à custa de um material alcalino. Podem ser incorporados com diversas substâncias que possuem algum efeito terapêutico ou preventivo sobre a pele, por facilitarem o contato de tais substâncias com o tecido alvo. Porém, isto nem sempre é possível. Por tratar-se de um tensoativo aniônico carboxilado e ter elevada alcalinidade, muitos dos materiais ou ativos a serem incorporados a este tipo de preparação podem apresentar instabilidade. Com o advento dos detergentes sintéticos tal situação pode ser contornada, e apesar de constituírem-se também em tensoativos aniônicos, e por terem origem em ácidos fortes, permitem o preparo de sabonetes líquidos não alcalinos e apresentam maior compatibilidade frente a diversos ativos. Entre as diversas possibilidades de ativos, os agentes antimicrobianos, merecem atenção especial, uma vez que encontra nos sabonetes um excelente veículo para desempenhar sua função na assepsia da pele. A clorexidina é um anti-séptico de amplo espectro de ação, sendo ativo frente a bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, fungos, leveduras e vírus. Atua sobre a membrana celular causando perda de material intracelular, tais como ácido nucléico e potássio, inibição respiratória e coagulação citoplasmática. Pode apresentar-se na forma de diversos sais como acetato, cloridrato, gluconato e digluconato. Neste trabalho foram estudadas formulações contendo solução de digluconato de clorexidina. A solução amostra utilizada para preparação dos sabonetes foi avaliada quanto a alguns parâmetros como pH, densidade relativa, ponto de fusão, cromatografia em camada delgada, espectroscopia... / The soaps are preparation for hygiene and they are well known for 4000 years ago. They are constituited by salts of fatty acids with detergent properties, resulting from saponification of fatty acids superiorities and glycerides using an alkaline material. They may be incorporated with several substances that have a preventive or therapeutic effect on the skin, by facilitating the contact of such substances with the target tissue. However, this is not always possible. The soaps are anionic surfactant and carboxylic and they have high alkalinity, many of the materials or activities to be incorporated into this type of preparation may be instable. With the advent of synthetic detergents such situation can be avoided, and despite of they be also anionic surfactants, and are based on strong acids, allow the preparation of liquid soaps and alkali not have greater compatibility front of several assets. Among the various possibilities of active, antimicrobial agents deserve special attention, since the soap is an excellent vehicle to perform its function in the asepsis of the skin. The chlorhexidine is an antiseptic of wide spectrum of action, being active against the bacteria Gram-positive and Gram-negative, fungi, yeasts and viruses. Chlorhexidine is an excellent antiseptic of wide spectrum of action, being active against the bacteria Gram-positive and Gram-negative, fungi, yeasts and viruses. Acts on the cell membrane causing loss of intracellular material, such as nucleic acid and potassium, respiration inhibition and cytoplasmic coagulation. The salts of chlorhexidine can be acetate, hydrochloride, gluconate and digluconate. In this work formulation were studied with solution of chlorhexidine digluconate. The sample solution employed to prepare the liquid soaps was evaluated for some parameters such as pH, relative density, melting point, thin-layer chromatography... (Complete abstract click electronic access below)