Orientador: Taís Maria Bauab / Banca: Sérgio Aparecido Torres / Banca: Daisy Nakamura Sato / Resumo: O Brasil apresenta uma grande diversidade de plantas medicinais, cuja utilização pela população vem aumentando cada vez mais. Byrsonima (Malpighiaceae) e Alchornea (Euphorbiaceae) que são plantas do Bioma-Cerrado do estado de São Paulo apresentam compostos com grande potencial de atividade biológica, sendo entretanto, pouco estudadas. A atividade antimicrobiana é uma etapa de extrema importância na caracterização biológica de produtos naturais com potencial farmacológico. Nossos objetivos foram investigar a atividade antibacteriana de extratos metanólicos e clorofórmicos de Byrsonima spp. e Alchornea spp empregando as técnicas de diluição em tubos e em microplacas com leitura espectrofotométrica e visual utilizando resazurina como revelador. Foram utilizadas as bactérias: Escherechia coli, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica e Aeromonas hydrophila. Nos ensaios em microplacas e em tubos foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) dos extratos vegetais testados à concentração de 1000æg/mL a 31,25æg/mL. Objetivou-se também comparar a eficácia das metodologias empregadas. Nosso estudo demonstrou maior atividade antibacteriana dos extratos metanólicos tanto de Byrsonima quanto de Alchornea, ressaltando os dados obtidos com B. crassa (MeOH) e B. basiloba (MeOH) que apresentaram acentuada atividade antibacteriana frente aos diferentes microrganismos testados. As metodologias empregadas foram eficazes para essa finalidade sendo as de diluição em microplacas mais vantajosas, pelo emprego de pequenos volumes principalmente os de extratos vegetais que são obtidos em pequenas quantidades. Dentre os dois métodos de microdiluição, a que empregava leitura espectrofotométrica apresentou-se mais sensível, porém a de leitura visual mostrou-se mais prática na leitura final e na interpretação dos resultados. / Abstract: Brazil presents a great diversity of medicinal plants, whose use by people increases more and more. Byrsonima (Malpighiaceae) and Alchornea (Euphorbiaceae) are plants of Bioma-Cerrado of the state of São Paulo and present composites with great potential of biological activity, but, however, they are little studied. The antimicrobial activity is a stage of extreme importance in the biological characterization of natural products with pharmacological potential. Our objectives were to investigate the antibacterial activity of methanolic and chlorophormic extracts of Byrsonima spp and Alchornea spp using the techniques of dilution in tubes and in microplates with spectrophotometric and visual readings using resazurin. Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica and Aeromonas hydrophila were tested. In the microplate and tubes assays, the minimum innhibitory concentration (MIC) of plant extracts were tested in concentrations between 1000æg/mL and 31.25æg/mL. It was also compared the effectiveness of the methodologies employed. Our study demonstrated greater antibacterial activity of methanolic extracts of both Byrsonima and Alchornea, standing out the data obtained for B. crassa (MeOH) and B. basiloba (MeOH), which presented accented antibacterial activity against the different tested microrganisms. The methodologies employed were efficient for this purpose and the microplate dilution assay is more advantageous, for the fact it uses smaller volumes, mainly for those vegetal extracts that normally are obtained in small amounts. Amongst the two methods of microdilution, the one that used spectrophotometric reading proved to be more sensitive, however, the visual reading procedure was shown to be more practical in the final reading and interpretation of the results. / Mestre

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana dos materiais reparadores de uso endodôntico MTA/Bio Angelus, cimento Portland branco, MTA Angelus branco e MTA ProRoot branco sobre os microorganismos Enterococcus faecalis, Escherichia coli e Staphylococcus aureus pelos os testes de difusão em ágar e de contato direto. Os dados experimentais foram obtidos através da mensuração do halo de inibição formado e pela contagem de unidades formadoras de colônia, respectivamente. Para análise dos dados empregaram-se os testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA) e de Comparações Múltiplas de Tukey. De posse dos resultados, foi possível verificar que o MTA/Bio Angelus apresentou atividade antimicrobiana sobre todas as espécies bacterianas testadas no teste de difusão em ágar e no teste por contato direto, o material reparador demonstrou atividade antimicrobiana superior aos demais materiais testados e que este último teste demonstrou ser uma metodologia segura, reproduzível e confiável. / The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of repair materials of endodontic use MTA/Bio Angelus, white Portland cement, white MTA Angelus and white MTA ProRooton Enterococcus faecalis, Escherichia coli and Staphylococcus aureus by the agar diffusion test and the direct contact test. Data was retrieved by measuring the zones of inhibiton and by counting colony-forming units, respectively. Statistical analysis was performed using the ANOVA test followed by Tukey Multiple Comparisons test. The results showed that MTA/Bio Angelus presented antimicrobial activity against all bacteria in the agar diffusion test and in the direct contact test, MTA/Bio Angelus presented superior antimicrobial activity. In addition, our results suggest that the use of the direct contact test is a safe, reproducible and trustable method.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2989767 bytes, checksum: e5a6e33dba538e841daa3ab381de7b1e (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The natural products represent a rich source of bioactive compounds and are an example of molecular diversity, with a well-known potential on the discovery and development of new drugs. Erythroxylum pulchrum, (Erythroxylaceae) is an exclusive species from the brazilian flora, distributed on the northeast and southeast regions of the country; which can be found in Paraíba in a particular area of Pico do Jabre PB . A voucher specimen is deposited at the Professor Lauro Pires Xavier (JPB) herbarium with the code 4947. On this phytochemical study the dried powder of the aerial parts was submitted to an extraction with methanol, followed by partition. The ethyl acetate fraction was submitted to a Medium Pressure Liquid Chromatography. Therefore, it was possible to identify four flavonoids: epicatechin, quercetin-3-O-α-Lrhamnoside, ombuin-3-rutinosideand ombuin-3-rutinoside-5-glucoside. The hexanic fraction was also submitted to a Medium Pressure Liquid Chromatography which led to the identification of one terpenoid - lupeol and one steroid - β- sitosterol. These substances were identified by analysis of data obtained from spectroscopic methods such as infrared, mass spectrometry and NMR of 1H and 13C, with the aid of two dimensional techniques, besides comparison with literature data. It was also evaluated the antimicrobial activity from its crude extract against bacterial strains of clinical matter by measuring the minimum inhibitory concentration for each bacterial strain tested by the microdilution assay. So, the crude extract inhibited the growth of the following bacterial strains: Bacillus subtilis CCT 0516, Escherichia coli ATCC 2536, Pseudomonas aeruginosaA TCC 8027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619, Staphylococcus aureusATCC 6538, Staphylococcus aureusATCC 25925, Streptococcus sanguíneos, Streptococcus salivares, Streptococcus mutansand Streptococcus ATCC. However, the genus Staphylococcus aureus ATCC 25925 was the most sensible, but on the other hand, the species Streptococcus sanguíneos e Streptococcus salivares was the most resistant against the antimicrobial effect of the crude extract. The results obtained on this research contributed to the phytochemical and pharmacology study of Erythroxylum pulchrum and to the chemotaxonomic knowledge of the genus Erythroxylum, as well as the Erythroxylaceae family. / Os produtos naturais representam uma rica fonte de compostos biologicamente ativos e são um exemplo de diversidade molecular, com reconhecido potencial na descoberta e desenvolvimento de novos medicamentos. Erythroxylum pulchrum, (Erythroxylaceae) é exclusiva da flora brasileira, com distribuição no Nordeste e Sudeste do país, só foi encontrada na Paraíba em uma área do Pico do Jabre PB. Uma exsicata encontra-se depositada no Herbário Prof. Lauro Pires Xavier (JPB), sob o n° 4947. Neste estudo fitoquímico, as partes aéreas secas e pulverizadas foram submetidas a uma extração com metanol e em seguida, particionados. A fase acetato de etila foi submetida à cromatografia líquida de media pressão. Desta maneira, foi possível isolar quatro flavonoides: epicatequina, quercetina-3-O-α-L-raminosídeo, ombuin-3- rutinosídeo e ombuin-3-rutinosideo-5-glicosídeo. A fase hexânica também foi submetida à cromatografia líquida de media pressão, em que foi possível isolar um terpenoide lupeol e um esteróide β-sitosterol. Essas substâncias tiveram sua identificação estrutural baseada na análise de dados espectrais de IV, EM, RMN 1H e 13C, incluindo técnicas bidimensionais homonucleares e heteronucleares, além de comparação com dados da literatura. Foi avaliado também, o efeito antibacteriano do extrato metanólico bruto de Erythroxylum pulchrum frente a cepas de bactérias de importância clínica, determinando a concentração inibitória mínima do extrato metanólico para cada linhagem de bactéria testada pela técnica de microdiluição. Assim, o extrato inibiu o crescimento das linhagens bacterianas de Bacillus subtilis CCT 0516, Escherichia coli ATCC 2536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 8027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus aureus ATCC 25925, Streptococcus sanguíneos, Streptococcus salivares, Streptococcus mutans e Streptococcus ATCC. No entanto, a espécie Staphylococcus aureus ATCC 25925 foi a mais sensível, e espécies as Streptococcus sanguíneos e Streptococcus salivares foram as mais resistentes á ação antibacteriana do extrato metanólico bruto. Os resultados obtidos neste trabalho contribuíram para o conhecimento fitoquímico e farmacológico de Erythroxylum pulchrum e para a o conhecimento quimiotaxonômico do gênero Erythroxylum e da família Erythroxylaceae.

O gênero Salvia L. (Lamiaceae), constituido de aproximadamente 900 espécies, possui 60 representantes no Brasil. Dentre suas propriedades medicinais destacam-se as atividades antitumoral, anti-inflamatória, cicatrizante e antibacteriana. Óleos essenciais e diterpenos de núcleos abietano, clerodano, primarano estão entre os principais constituintes químicos relatados para as espécies. O objetivo deste trabalho foi a caracterização química dos óleos essenciais obtidos por hidrodestilação de seis espécies de Salvia nativas da região Sul do Brasil (S. guaranitica, da Seção Coerulae; S. ovalifolia, S. cordata e S. borjensis, da Seção Rudes e S. procurrens e S. uliginosa, da Seção Uliginosae), utilizando cromatografia à gás/espectrometria de massas. A análise química dos óleos essenciais mostrou que todas as espécies apresentaram apenas sesquiterpenos, além de compostos alifáticos como aldeidos e ácidos graxos de cadeia longa. Entre estes últimos, nonadecanal estava presente em todas as espécies, sendo abundante (13% a 56%) em S. procurrens, S. ovalifolia e S. borjensis. Em relação à composição dos sesquiterpenos, observou-se que espatulenol estava presente em quantidades relativamente grandes (10% - 40%) nas espécies S. cordata, S. borjensis e S. ovalifolia. Estas espécies também apresentaram β-cariofileno, sesquiterpeno encontrado, ainda, em S. guaranitica. S. cordata apresentou o sesquiterpeno epi-globulol (32,3%) e 2E, 6Z-farnesol (11,4%). O óleo essencial de S. uliginosa apresentou ácido hexadecanóico (30,1%), n-nonadecano (17,5%) e nonadecanal (4,5%) como componentes majoritários. Os óleos essenciais e os extratos diclorometano das espécies da Seção Uliginosae (S. uliginosa e S. procurrens) mostraram atividade contra Staphylococcus aureus, quando testados pelo método de bioautografia. As analises preliminares sugerem a presença de diterpenos de núcleo abietano-quinona nos extratos orgânicos destas espécies. Os extratos diclorometano dessas duas espécies foram também avaliados quanto à atividade amebicida contra amebas de vida livre Acanthamoeba polyphaga. Entre estes, apenas o de S. uliginosa foi ativo, apresentando 100% de atividade nas concentrações de 7,5 e 5 mg/mL. / The genus Salvia L. (Lamiaceae) has about 900 species, 60 of them found in Brazil. Among the medicinal properties it is possible to highlight anti-tumor, anti-inflammatory, antioxidant and antibacterial activities. Essential oils and diterpenes with abietane, clerodane and primarane skeletons are the main componentes of these plants. In this sense, the purpose of this study was to characterize the essential oils obtained by hydrodistillation from Salvia species native to southern Brazil (S. guaranitica, Section Coerula; S. ovalifolia, S. cordata and S. borjensis, Section Rudes and S. procurrens and S. uliginosa, Section Uliginosae), using gas chromatography coupled to mass spectrometry. Chemical analysis of the essential oils showed that all species had only sesquiterpenes, and aliphatic compounds such as aldehydes and long chain fatty acids. Among the latter, nonadecanal was present in all species, being abundant (13% to 56%) in S. procurrens, S. borjensis and S. ovalifolia. Regarding the composition of the sesquiterpenes, it was observed that spathulenol was present in relatively large amounts (10% - 40%) in S. cordata, S. borjensis and S. ovalifolia oils. These species also showed β-caryophyllene, a sesquiterpene also found in S. guaranitica. S. cordata showed the sesquiterpene epi-globulol (32.3%) and 2E, 6Z-farnesol (11.4%). S. uliginosa essential oil presented hexadecanoic acid (30.1%), n-nonadecane (17.5%) and nonadecanal (4.5%) as the main compound. The essential oils and the dichloromethane extracts of of the species from the Section Uliginosae (S. uliginosa and S. procurrens) demonstrated antimicrobial activity against Staphylococcus aureus when investigated by the bioautography method. Preliminary analyses indicated theat the main compounds present in the organic extracts are diterpenes with the abietane type-diterpene quinone nucleous. The dichloromethane extracts of these two species were also evaluated for the activity against Acanthamoeba polyphaga. Only the extract of S. uliginosa was active, with 100% activity at concentrations of 7.5 and 5 mg/mL.

Tradicionalmente, no tratamento de feridas graves o antimicrobiano tópico deve ser aplicado uma a duas vezes ao dia na área lesada para reduzir as infecções. No entanto, os pacientes geralmente sofrem desconforto com a aplicação de drogas tópicas e com a troca de curativos. Nesse contexto, o desenvolvimento de sistemas curativos biodegradáveis contendo fármaco antimicrobiano são fundamentais para a promoção de ações terapêuticas, reduzindo as infecções causadas por microrganismos e podendo substituir os curativos convencionas que não possuem polímeros biodegradáveis em sua composição. Para ir de encontro com essa necessidade, filmes de PBAT e PBAT/gentamicina foram preparados por meio de duas abordagens. Na primeira abordagem filmes de PBAT obtidos por casting foram funcionalizados por radiação UV durante 90 minutos na presença de O2 atmosférico para posterior inserção de gentamicina na superfície através de soluções tampões contendo EDC e gentamicina. A superfície das amostras foi analisada pelo WCA, FTIR-ATR e XPS. A análise antimicrobiana dos filmes também foi realizada. Os resultados para os filmes de PBAT por casting mostram que o tempo de irradiação produziu superfícies altamente hidrofílicas com grupos oxigenados enxertados na superfície do polímero (C=O e C-OH). A análise antimicrobiana indicou que a gentamicina não ligou covalentemente com o PBAT, porém observou-se a presença de nitrogênio na superfície das amostras pela análise de XPS Na segunda abordagem foram preparadas fibras de PBAT e PBAT/gentamicina a partir da eletrofiação. As soluções utilizadas no processo de eletrofiação foram preparadas com diferentes concentrações de gentamicina e passaram por análises de condutividade e viscosidade. As fibras de PBAT e PBAT/gentamicina foram caracterizadas quanto a suas propriedades físico-químicas, morfológicas, térmicas, antimicrobianas e biológicas. Nos resultados obtidos para as fibras de PBAT e PBAT/gentamicina observou-se que não houve mudança nos espectros após a mistura dos materiais, uma vez que as bandas de absorção foram preservadas e não houve o aparecimento de novos picos. A presença da gentamicina modificou a morfologia das amostras, diminuindo o diâmetro das fibras. O grau de intumescimento foi alterado com o acréscimo de gentamicina e houve modificação da morfologia das fibras após 48 horas de imersão em PBS, porém as fibras mantiveram-se presentes. A gentamicina aumentou o grau de molhabilidade das fibras PBAT. As fibras de PBAT/gentamicina possuem atividade antimicrobiana frente às cepas de E. coli e não apresentaram citotoxicidadede acordo com o padrão ISO 10993-5. Estes resultados reforçam que o PBAT pode ser usado como um sistema curativo com incorporação de fármaco, mostrando ser uma alternativa interessante de curativo/adesivo para uso tópico. / Traditionally in the treatment of serious wounds, topical antimicrobial should be applied 1–2 times daily to the injured area to reduce infections. However, patients often suffer from discomfort with the application of topical drugs and with the exchange of dressings. In this context, the development of biodegradable curative systems containing antimicrobial drug are fundamental for the promotion of therapeutic actions, reducing the infections caused by microorganisms and being able to substitute conventional dressings that there aren’t biodegradable polymers in their composition. To meet this need, PBAT and PBAT/gentamicin films were prepared using two approaches. In the first approach PBAT films obtained by casting were functionalized by UV radiation for 90 minutes in the presence of atmospheric O2 for subsequent insertion of gentamicin on the surface through buffer solutions containing EDC and gentamicin. The surface of the samples was analyzed by the WCA, FTIR-ATR and XPS. Antimicrobial analysis of the films was also performed. The results for the PBAT films by casting show that the irradiation time produced highly hydrophilic surfaces with oxygenated groups grafted onto the polymer surface (C=O and C-OH). Antimicrobial analysis indicated that gentamycin did not bind covalently with PBAT, but nitrogen was observed on the surface of the samples by XPS analysis In the second approach, PBAT and PBAT/gentamicin fibers were prepared from the electrospun. The solutions used in the electrospun process were prepared with different concentrations of gentamicin and underwent conductivity and viscosity analyzes. The PBAT and PBAT/gentamicin fibers were characterized as their physical-chemical, morphological, thermal, antimicrobial and biological properties. In the results obtained for the PBAT and PBAT/gentamicin fibers, it was observed that there was no change in the spectra after the materials were mixed, since the absorption bands were preserved and there were no new peaks. The presence of gentamicin modified the morphology of the samples, reducing the diameter of the fibers. The degree of swelling was altered with the addition of gentamicin and there was a change in the morphology of the fibers after 48 hours of immersion in PBS, but the fibers remained present. Gentamicin increased the degree of wettability of PBAT fibers. PBAT/gentamicin fibers have antimicrobial activity against E. coli strains and did not present cytotoxicity according to ISO 10993-5 standard. These results reinforce that PBAT can be used as a curative system with drug incorporation, proving to be an interesting dressing/adhesive alternative for topical use.

O estudo objetivou avaliar a atividade antibacteriana, in vitro, dos óleos essenciais de erva cidreira (Lippia alba (Mill) NEBr), hortelã-pimenta (Mentha x piperita L.), alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum L.), açafrão (Curcuma longa L.) e gengibre (Zingiber officinale Roscoe) cultivados nas condições de Manaus/AM frente a 20 amostras de Salmonella enterica isoladas de frango resfriado, carne mecanicamente separada de frango, farinha de vísceras e farinha de carne e ossos. A concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas empregando-se o método de microdiluição. Os óleos foram analisados quanto a composição química através de cromatógrafo à gás acoplado ao espectrômetro de massa (CG-EM). Além da atividade dos óleos essenciais a resistência a antimicrobianos fármacos também foi avaliada através da técnica de disco-difusão. Os compostos majoritários foram: para o óleo de Lippia alba (Mill) NEBr) (carvona 61,7% e limoneno 17,5%), Mentha x piperita L. (mentol 27,5%, mentofurano 22,5%, pulegona 12,8%, acetato de metila 12,5% e mentona 11%), Ocimum gratissimum L. (eugenol 43,3% e 1,8-cineol 28,2%), Curcuma longa L. (ar-tumerona 17,9%, alfa-tumerona 14,6% e 1,8- cineol 14,2%) e para Zingiber officinale Roscoe (geranial 23,9%, neral 17,2%, 1,8- cineol 16,0% e canfeno 11,4%). Os resultados deste estudo permitiram evidenciar a superioridade da atividade dos óleos de Lippia alba (Mill) NEBr, Ocimum gratissimum L. e Zingiber officinale Roscoe (média das CIM´s de 4821 a 5750 μg/mL e média das CBM´s de 6190,5 a 6500,1 μg/mL) frente às salmonelas isoladas, em comparação aos óleos de Mentha x piperita L. e Curcuma longa L., demonstrando o potencial como agente antibacteriano natural destas três espécies frente a diferentes sorovares do patógeno avaliado. Todos os isolados apresentaram resistência a pelo menos dois agentes antimicrobianos. Os isolados foram frequentemente resistentes à estreptomicina (95%), ácido nalidixico (75%) e gentamicina (70%) e sensíveis à norfloxacina (45%), ciprofloxacina (20%) e cloranfenicol (20%). Entre as 20 amostras de Salmonella enterica foram identificados oito sorovares diferentes com predomínio da Salmonella Mbandaka, Salmonella Enteritidis, Salmonella Agona e Salmonella Schwarzengrund, sendo que os sorovares Mbandaka e Enteritidis foram os que apresentaram maior resistência aos fármacos antimicrobianos. A resistência antimicrobiana significativa verificada em diferentes sorovares de Salmonella enterica indica que estratégias de prevenção devem ser adotadas, como estudos epidemiológicos e uso consciente de antimicrobianos tanto na alimentação animal, quanto no tratamento de pacientes, visando minimizar o aparecimento de sorovares ainda mais resistentes ou resistentes a princípios ativos atualmente eficazes. Neste sentido, os óleos essenciais de Ocimum gratissimum L., Lippia alba (Mill) NEBr e Zingiber officinale Roscoe, representam uma alternativa para o controle de Salmonella enterica, entretanto, demais estudos abordando o sinergismo com carne de frango e farinhas de origem animal são indicados. / The study aimed to evaluate the antibacterial activity in vitro of the essential oils of cidreira (Lippia alba (Mil) NEBr), peppermint (Mentha x piperita L.), alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum L.), turmeric (Curcuma longa L.) and ginger (Zingiber officinale Roscoe) grown under conditions of Manaus / AM front of 20 samples of Salmonella enterica isolates from chilled poultry, mechanically separated chicken meat, meat and bone meal and poultry viscera meal. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined employing a microdilution method. The oils were analyzed for chemical composition by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS). Besides the activity of essential oils, the resistance to antimicrobial drugs was also assessed by disk diffusion technique. The major compounds were: for Lippia alba (Mil) NEBr oil (carvone 61,7% and limonene 17,5%), Mentha x piperita L. (menthol 27,5%, menthofuran 22,5 %, pulegone 12,8 %, methyl acetate 12,5% and menthone 11%) Ocimum gratissimum L. (eugenol 43,3% and 1,8-cineole 28,2%), Curcuma longa L. (ar tumerona 17,9%, alphatumerona 14,6% and 1,8-cineole 14,2%) and Zingiber officinale Roscoe (geranial 23,9%, neral 17,2%, 1,8-cineole 16,0% and camphene 11,4%). The results of this study showed the superiority activity of Lippia alba (Mil) NEBr, Ocimum gratissimum L. and Zingiber officinale Roscoe oil (CIM's average from 4821 to 5750 and CBM's average from 6190.5 to 6500.1 μg/mL) against Salmonella isolated compared to Mentha x piperita L. and Curcuma longa L. oils, demonstrating the potential as natural antibacterial agent of these three species against different serovars of the pathogen evaluated. All isolates were resistant to at least two antimicrobial agents. The isolates were often resistant to streptomycin (95%), nalidixic acid (75%) and gentamicin (70%) and sensitive to norfloxacin (45%), ciprofloxacin (20%) and chloramphenicol (20%). Among the 20 strains of Salmonella enterica serovars were identified eight different with a predominance of Salmonella Mbandaka, Salmonella Enteritidis, Salmonella Agona and Salmonella Schwarzengrund, and the Enteritidis and Mbandaka serovars showed the highest antimicrobial resistance. The significant antimicrobial resistance occurs in different serovars of Salmonella enterica indicates that prevention strategies should be adopted, such as epidemiological studies and conscious use of antimicrobials both in animal feed, as in the treatment of patients in order to minimize the emergence of even more resistant serovars or resistant tho currently effective active principles. In this sense, the essential oil of Ocimum gratissimum L., Lippia Alba (Mill) NEBr and Zingiber officinale Roscoe represent an alternative for the control of Salmonella enterica, however, other studies addressing the synergism with chicken meat and animal meal are indicated.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As plantas sintetizam proteÃnas que possuem propriedades antimicrobianas, podendo ser utilizadas em substituiÃÃo aos defensivos quÃmicos no campo e como fonte de novas drogas para o controle de infecÃÃes bacterianas em humanos. Dentre as diversas estruturas vegetais, ÃrgÃos reprodutivos como as flores parecem ser uma fonte promissora de tais molÃculas ativas contra patÃgenos, particularmente se considerado o seu relevante papel fisiolÃgico, o qual deve ser preservado. Nesse contexto, a presente pesquisa experimental teve como objetivos a prospecÃÃo de proteÃnas com aÃÃo antimicrobiana em flores silvestres e posterior purificaÃÃo, caracterizaÃÃo bioquÃmica e avaliaÃÃo da atividade antimicrobiana de um inibidor de tripsina presente em flores de Cassia fistula Linn. (Chuva-de-ouro). O extrato total das flores de C. fistula foi preparado em tampÃo fosfato de sÃdio 50 mM, pH 7,5. Esse extrato apresentou atividade inibitÃria de tripsina (42,41 Â 0,35 UI/mgP) e de papaÃna (27,10 Â 0,23 UI/mgP), alÃm de mostrar a presenÃa de peroxidase (20,0 Â 0,18 UAP/mgP) e quitinase (1,70 Â 0,21 ηkatal/mgP), estando ausentes as atividades hemaglutinante, β-1,3-glucanÃsica, ureÃsica e proteÃsica. O inibidor de tripsina de C. fistula, denominado CfTI, foi purificado do extrato total por fracionamento com Ãcido tricloroacÃtico (2,5%), seguido de cromatografias de afinidade (anidrotripsina-Sepharose-4B) e fase reversa (Vydac C-18TP 522). CfTI Ã uma glicoproteÃna com massa molecular aparente de 22,2 kDa, pI 5,0 e sequÃncia NH2-terminal exibindo alta similaridade com o inibidor de tripsina da soja do tipo Kunitz (SBTI). O inibidor mostrou-se pouco estÃvel ao calor, reduzindo sua atividade inibitÃria para 23,4% quando incubado a 60 ÂC, durante 15 minutos. No entanto, ele se mostrou bastante estÃvel a variaÃÃes no pH. CfTI (100 Âg/mL) retardou o crescimento dos fungos fitopatogÃnicos de importÃncia agrÃcola, Colletotrichum lindemuthianum e Fusarium solani, alÃm de apresentar atividade antibacteriana frente Ãs bactÃrias patogÃnicas ao homem, Staphylococcus aureus e Enterobacter aerogenes. Os resultados obtidos demonstram o potencial das flores como fonte diversificada de proteÃnas bioativas, evidenciando o inibidor de tripsina presente em flores de C. fistula, fomentando sua aplicaÃÃo biotecnolÃgica frente a fungos e bactÃrias de relevÃncia para a Agricultura e SaÃde. / Plants synthesize proteins that have antimicrobial properties, which can be used to substitute chemical pesticides in agriculture and as new drugs for the control of bacterial infections in humans. Among the various plant structures, the flowers seem to be a promising source of active molecules against pathogens, particularly if considered its important physiological role, which should be preserved. Therefore, this experimental research aimed at the prospection of novel proteins with antimicrobial activity in wild flowers and to subsequent purification, biochemical characterization and evaluation of antimicrobial activity of a trypsin inhibitor present in flowers of Cassia fistula Linn (the golden shower tree). The total extract of C. fistula flowers was prepared in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.5. This extract presented trypsin inhibitory activity (42.41 Â 0.35 IU/mgP) and papain (27.10 Â 0.23 IU/mgP), besides to the presence of peroxidase (20.0 Â 0.18 UAP/mgP) and chitinase (1.70 Â 0.21 ηkatal/mgP). On the other hand, the hemagglutinating, β-1,3-glucanase, protease and urease activities were not detected. The trypsin inhibitor of C. fistula, named CfTI, was purified by fractionating the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity (anidrotripsina-Sepharose-4B) and reverse phase (Vydac C-18TP 522) chromatographies. CfTI is a glycoprotein with an apparent molecular mass of 22.2 kDa, pI 5.0 and NH2-terminal sequence showing high similarity with Kunitz soybean trypsin inhibitor (SBTI). The inhibitor was not stable to heat, and loss 23.4% when incubated at 60 ÂC for 15 minutes. However, it proved to be stable to changes of pH. CfTI (100 Âg/mL) slowed the growth of pathogenic fungi of agricultural importance, Colletotrichum lindemuthianum and Fusarium solani, and also presented antibacterial activity against the human pathogenic bacteria, Staphylococcus aureus and Enterobacter aerogenes. The results demonstrate the potential of the flowers as a source of diverse bioactive proteins, as the trypsin inhibitor present in C. fistula flowers, promoting its biotechnological potential application against fungi and bacteria of relevance to Agriculture and human health.

A Mitracapus (Rubiacea) à um gÃnero neotropical, com trÃs centros de diversidades no MÃxico, Brasil e Caribe. Em relaÃÃo à Mitracarpus baturitensis, ainda nÃo existe relatos na lieratura de estudos fitoquÃmicos e biolÃgicos, devido à mesma ser uma espÃcie recÃm-descoberta. Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana dos compostos obtidos do extrato etanÃlico das partes aÃreas de Mitracarpus baturitensis contra a bactÃria Streptococcus mutans. Os triterpenos Ãcido 3β-hidroxi-urs-12-en-28-oico (Ãcido ursÃlico â AU) e o Ãcido 28- O-β-D-glucopiranosil-ester (Ãcido pomÃlico) foram isolados do extrato etanÃlico empregando tÃcnicas cromatogrÃficas usuais como: cromatografia gravitacional em gel de sÃlica, cromatografia flesh e cromatogrÃfia de camada delgada. A caracterizaÃÃo estrutural destes compostos foi realizado pelo uso de RNMâH e 13C, alÃm de comparar mÃtodos espectroscÃpico IV, reaÃÃes com base na literatura. ApÃs a identificaÃÃo foram realizados teste de ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM), ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM), Curva do Tempo de Morte, aÃÃo antibiofilme e ensaio de ataque ao biofilme. O Ãcido ursÃlico inibiu o crescimento bacteriano nas concentraÃÃes de 500-62,5 μg. mL-1 sendo bactericida na concentraÃÃo de 500 μg. mL-1. AlÃm disso, o mesmo teve aÃÃo sobre a morte de S. mutans em apenas 30 minutos de contato. Ãcido ursÃlico tambÃm apresentou efeito sobre a formaÃÃo do biofilme reduzindo a biomassa em 97,37%, nÃo obtendo o mesmo resultado sobre o biofilme formado por 24 horas. NÃo foram obtidos resultados semelhantes para o Ãcido pomÃlico. Assim, Ãcido ursÃlico pode ser considerado como um candidato à insumo biotecnolÃgico com impacto na pesquisa de antimicrobianos. / The Mitracapus (Rubiaceae) is a neotropical genus with three centers of diversity in Mexico, Brazil and the Caribbean. Regarding Mitracarpus baturitensis, there is still no report in lieratura phytochemical and biological studies due to it being a newly discovered species. Therefore the aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of the ethanolic extract obtained composts of parts of flights Mitracarpus bauritensis against the bacteria Streptococcus mutans. Compounds ursolic acid (3β-hidroxi-urs-12-en-28-oico acid) and pomolic acid (28- O-β-D-glucopiranosil- Ãcido pomÃlico ester) were isolated from the ethanolic extract by chromatographic assays, CCD and identified through the RNM. After identification were performed testing the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (CBM), curve of the time of the death, action antibiofilm, assay attack of the biofilm. The increase inhibited bacterial growth at concentrations from 500 to 62,5 Âg. mL-1 and bactericide concentration of 500 Âg. mL-1. Furthermore, the AU had an effect on biofilm formation by reducing the biomass 97,37% same result is not obtained on the biofilm for 24 hours. Similar results were not obtained for the AP. Thus, AU can be analized as a candidate for biotechnological inputs impacting on research antimicrobial

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Currently, there is a demand for natural antimicrobials for use in the food industry. Some tropical fruits have a promising potential , not investigated at the moment. This study aimed to identify and quantify resveratrol, quercetin and coumarin in pulps and byproducts of tropical fruits, develop nanoparticles with extracts that showed higher levels of these compounds and evaluate the antimicrobial activity against Listeria sp. and E. coli K12. The Surinam cherry and mango byproducts, as well as caja, acerola and Surinam cherry pulps showed higher levels of quercetin, representing sources of this substance. Guava and Surinam cherry byproducts showed resveratrol in their content, may be considered as sources of this compound. Similarly, for coumarin, passion fruit, guava and Surinam cherry byproducts, as well as mango pulp, can be considered natural sources. Among the analyzed material, the acerola pulp and passion fruit and guava byproducts were selected for further characterization and nanoencapsulation. Nanoparticles synthesized using co-glycolide (PLGA) 65:35 poly lactide showed higher particle sizes (from 153.37 to 376.70 nm), as compared with the synthesized PLGA 50:50 (136.53 to 369.25 nm). All samples showed low polydispersity index, corresponding to a heterogeneous distribution in the emulsion analyzed for particle size obtained. The nanoparticles synthesized with PLGA 65:35 showed higher encapsulation efficiency, with the exception of the sample containing acerola (best EE % for PLGA 50:50) and for the release analysis, all samples showed similar behavior, providing maximum release compound within 30 minutes, with constant release thereafter during 72 hours analysis. In general, nanoparticles synthesized with PLGA 65:35 had lower minimum inhibitory concentration for E. coli K12 and L. monocytogenes compared with the 50:50 PLGA nanoparticles synthesized. The synthesis of PLGA nanoparticles using extracts of fruits (especially using PLGA 65:35) may have important applications in the food industry to inhibit microorganisms (E. coli K12 and L. monocytogenes). Besides antimicrobial activity, these compounds show various fruits with antioxidant properties, which are responsible for reducing the risk of various diseases. / Atualmente hà uma demanda por antimicrobianos naturais para uso na indÃstria de alimentos e, neste sentido, as frutas tropicais apresentam, um potencial promissor, porÃm ainda pouco investigado. Este trabalho teve como objetivo identificar e quantificar resveratrol, quercetina e cumarina em polpas e subprodutos de frutas tropicais, elaborar nanopartÃculas com os extratos que apresentaram maiores teores destes compostos e avaliar a atividade antimicrobiana contra os microrganismos Listeria sp. e E. coli K12. Os subprodutos de pitanga roxa e manga, assim como as polpas de cajÃ, acerola e pitanga roxa apresentaram maiores teores de quercetina, representando fontes desta substÃncia. Subprodutos de goiaba e pitanga apresentaram resveratrol em suas constituiÃÃes, podendo ser considerados fontes deste composto. Para a cumarina, os subprodutos de maracujÃ, goiaba e pitanga, assim como a polpa de manga, podem ser considerados fontes naturais. Entre os materiais analisados, a polpa de acerola e os subprodutos do maracujà e da goiaba foram selecionados para posterior caracterizaÃÃo e nanoencapsulaÃÃo. As nanoparticulas sintetizadas utilizando Ãcido poli lactÃdeo co-glicolÃdeo (PLGA) 65:35 apresentaram maiores tamanhos de partÃcula (153,37 a 376,70 nm), quando comparadas Ãs sintetizadas com PLGA 50:50 (136,53 a 369,25 nm). Todas as amostras apresentaram baixo Ãndice de polidispersidade, correspondendo a heterogÃnea distribuiÃÃo na emulsÃo analisada quanto ao tamanho das partÃculas obtidas. As nanopartÃculas sintetizadas com PLGA 65:35 apresentaram maior eficiÃncia do encapsulamento (%EE), com exceÃÃo da amostra contendo acerola, a qual apresentou melhor EE% para PLGA 50:50. Em relaÃÃo à anÃlise de liberaÃÃo, todas as amostras avaliadas apresentaram comportamento semelhante, obtendo liberaÃÃo mÃxima do composto nos primeiros 30 minutos, apresentando liberaÃÃo constante apÃs esse perÃodo, durante 72 horas de anÃlise. De uma maneira geral, as nanopartÃculas sintetizadas com PLGA 65:35 apresentaram menor concentraÃÃo inibitÃria minima para E. coli K12 e L. monocytogenes quando comparadas Ãs nanopartÃculas sintetizadas com PLGA 50:50. A sÃntese de nanopartÃculas de PLGA utilizando extratos fenÃlicos de frutas, especialmente utilizando PLGA 65:35, pode apresentar importantes aplicaÃÃes, como na indÃstria de alimentos, a conservaÃÃo desses produtos, considerando seu efeito na inibiÃÃo de microrganismos (E. coli K12 e L. monocytogenes). AlÃm do efeito antimicrobiano, essas frutas apresentam diversos compostos com propriedades antioxidantes, que sÃo responsÃveis pela reduÃÃo do risco de diversas doenÃas.

A resistência bacteriana aos antibióticos tem se disseminado mais rapidamente do que a introdução de novos compostos, portanto, a investigação e desenvolvimento de novas moléculas para o controle microbiano é necessário. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de diferentes óleos de copaíba OC(S), OC(C) e OC(E), do gel de quitosana/gelatina (QG) e de emulsões de quitosana/gelatina/óleo de copaíba (QGOC) frente às linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27873. A quitosana foi obtida a partir de gládios de lula por desmineralização, desproteinização e desacetilação e uma solução a 2% foi preparada em ácido acético 1%. O gel de gelatina 2% foi obtido por dissolução de gelatina comercial (Sigma) em água, sendo gelatinizada a 60ºC por 30 min. O gel QG e as emulsões QGOC(S), QGOC(C) e QGOC(E) foram preparadas pela mistura dos géis de quitosana e gelatina na proporção 2:1 sob agitação constante. A concentração das emulsões QGOC foi ajustada de acordo com a concentração inibitória mínima (CIM) encontrada para o gel QG e para os óleos individualmente. Os ensaios de atividade antimicrobiana foram realizados utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo para a determinação da CIM e da concentração bactericida mínima (CBM). O efeito citotóxico dos compostos também foi investigado sobre células VERO. Os valores de CIM e CBM para o gel QG sobre S. aureus, E. coli e P. aeruginosa foram de 31, 2; 62,5 e 31, 2 &#956g/mL, respectivamente, no entanto para P. aeruginosa observou-se que o gel mostrou atividade bacteriostática. Os óleos de copaíba apresentaram atividade apenas para S. aureus, com CIM e CBM de 2000 &#956g/mL para OC(S), 500 &#956g/mL para OC(C) e 62,5 &#956g/mL para OC(E), com caráter bactericida. A interação entre os antimicrobianos na forma da emulsão QGOC(E) sugere efeito sinérgico para S. aureus. As demais emulsões não apresentaram efeito sinérgico, entretanto, a atividade antimicrobiana e o efeito bactericida foram mantidos com a adição dos óleos no gel QG, com exceção da bactéria P. aeruginosa em que a adição dos óleos reduziu a eficácia do gel QG. Os óleos de copaíba apresentaram efeito citotóxico sobre as células VERO, enquanto o gel QG e a combinação na forma de emulsões não mostraram citotoxicidade. Os resultados desse estudo evidenciam que a combinação QGOC pode ser uma fonte em potencial para o desenvolvimento de um novo agente antimicrobiano seletivo no controle de infecções bacterianas. / Antibiotic resistance increases faster than the introduction of new compounds thus, the research and development of new drugs and antimicrobial systems is required. This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of different copaiba oils CO(S), CO(C) and CO(E), chitosan/gelatin gel (CG) and chitosan/gelatin/copaiba oil (CGCO) emulsions against the strains of Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27873. Chitosan was obtained from squid pens by desmineralization, desproteinization and deacetylation and a 2% solution was prepared in 1% acetic acid. A 2% gelatin gel was obtained by dissolution of commercial gelatin (Sigma) in water and gelatinized at 60ºC for 30 min. CQ gel and CQCO emulsions were prepared by mixing chitosan and gelatin gels at 2:1 (w/w) ratio under constant stirring. The concentration of CGCO emulsions were adjusted according to the minimum inhibitory concentration (MIC) for CG gel and oils separately. MIC and minimum bactericidal concentrations (MBC) with oils, CG gel and CGCO emulsions were determined using the micro-broth dilution technique. The cytotoxicity effect of compounds on VERO cell line was also evaluated using the MTT assay. CG gel inhibited S. aureus, E. coli and P. aeruginosa growth showing a MIC and a MBC of 31.2; 62.5 and 31.2 &#956g/mL, respectively except for P. aeruginosa, that showed bacteriostatic effect. Copaiba oils inhibited only S. aureus with MIC and MBC of 2,000 &#956g/mL to CO(S), 500 &#956g/mL to CO(C) and 62.5 &#956g/mL to CO(E). The combined emulsion CGCO(E) suggesting synergistic effect to S. aureus. However, the other emulsions showed not synergistic effect, but showed the same MIC and MBC values as those obtained for the isolated compounds, except for P. aeruginosa where the addition of oils reduced the effectiveness of CQ gel. The copaiba oils showed toxicity to VERO cells, while the CG gel and the CGCO were not cytotoxic. The results of this study demonstrated that the combination of CGCO may be a potential source for the development of a new selective agent to control these important bacterial pathogens.