O gênero Salvia L. (Lamiaceae), constituido de aproximadamente 900 espécies, possui 60 representantes no Brasil. Dentre suas propriedades medicinais destacam-se as atividades antitumoral, anti-inflamatória, cicatrizante e antibacteriana. Óleos essenciais e diterpenos de núcleos abietano, clerodano, primarano estão entre os principais constituintes químicos relatados para as espécies. O objetivo deste trabalho foi a caracterização química dos óleos essenciais obtidos por hidrodestilação de seis espécies de Salvia nativas da região Sul do Brasil (S. guaranitica, da Seção Coerulae; S. ovalifolia, S. cordata e S. borjensis, da Seção Rudes e S. procurrens e S. uliginosa, da Seção Uliginosae), utilizando cromatografia à gás/espectrometria de massas. A análise química dos óleos essenciais mostrou que todas as espécies apresentaram apenas sesquiterpenos, além de compostos alifáticos como aldeidos e ácidos graxos de cadeia longa. Entre estes últimos, nonadecanal estava presente em todas as espécies, sendo abundante (13% a 56%) em S. procurrens, S. ovalifolia e S. borjensis. Em relação à composição dos sesquiterpenos, observou-se que espatulenol estava presente em quantidades relativamente grandes (10% - 40%) nas espécies S. cordata, S. borjensis e S. ovalifolia. Estas espécies também apresentaram β-cariofileno, sesquiterpeno encontrado, ainda, em S. guaranitica. S. cordata apresentou o sesquiterpeno epi-globulol (32,3%) e 2E, 6Z-farnesol (11,4%). O óleo essencial de S. uliginosa apresentou ácido hexadecanóico (30,1%), n-nonadecano (17,5%) e nonadecanal (4,5%) como componentes majoritários. Os óleos essenciais e os extratos diclorometano das espécies da Seção Uliginosae (S. uliginosa e S. procurrens) mostraram atividade contra Staphylococcus aureus, quando testados pelo método de bioautografia. As analises preliminares sugerem a presença de diterpenos de núcleo abietano-quinona nos extratos orgânicos destas espécies. Os extratos diclorometano dessas duas espécies foram também avaliados quanto à atividade amebicida contra amebas de vida livre Acanthamoeba polyphaga. Entre estes, apenas o de S. uliginosa foi ativo, apresentando 100% de atividade nas concentrações de 7,5 e 5 mg/mL. / The genus Salvia L. (Lamiaceae) has about 900 species, 60 of them found in Brazil. Among the medicinal properties it is possible to highlight anti-tumor, anti-inflammatory, antioxidant and antibacterial activities. Essential oils and diterpenes with abietane, clerodane and primarane skeletons are the main componentes of these plants. In this sense, the purpose of this study was to characterize the essential oils obtained by hydrodistillation from Salvia species native to southern Brazil (S. guaranitica, Section Coerula; S. ovalifolia, S. cordata and S. borjensis, Section Rudes and S. procurrens and S. uliginosa, Section Uliginosae), using gas chromatography coupled to mass spectrometry. Chemical analysis of the essential oils showed that all species had only sesquiterpenes, and aliphatic compounds such as aldehydes and long chain fatty acids. Among the latter, nonadecanal was present in all species, being abundant (13% to 56%) in S. procurrens, S. borjensis and S. ovalifolia. Regarding the composition of the sesquiterpenes, it was observed that spathulenol was present in relatively large amounts (10% - 40%) in S. cordata, S. borjensis and S. ovalifolia oils. These species also showed β-caryophyllene, a sesquiterpene also found in S. guaranitica. S. cordata showed the sesquiterpene epi-globulol (32.3%) and 2E, 6Z-farnesol (11.4%). S. uliginosa essential oil presented hexadecanoic acid (30.1%), n-nonadecane (17.5%) and nonadecanal (4.5%) as the main compound. The essential oils and the dichloromethane extracts of of the species from the Section Uliginosae (S. uliginosa and S. procurrens) demonstrated antimicrobial activity against Staphylococcus aureus when investigated by the bioautography method. Preliminary analyses indicated theat the main compounds present in the organic extracts are diterpenes with the abietane type-diterpene quinone nucleous. The dichloromethane extracts of these two species were also evaluated for the activity against Acanthamoeba polyphaga. Only the extract of S. uliginosa was active, with 100% activity at concentrations of 7.5 and 5 mg/mL.

O estudo objetivou avaliar a atividade antibacteriana, in vitro, dos óleos essenciais de erva cidreira (Lippia alba (Mill) NEBr), hortelã-pimenta (Mentha x piperita L.), alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum L.), açafrão (Curcuma longa L.) e gengibre (Zingiber officinale Roscoe) cultivados nas condições de Manaus/AM frente a 20 amostras de Salmonella enterica isoladas de frango resfriado, carne mecanicamente separada de frango, farinha de vísceras e farinha de carne e ossos. A concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas empregando-se o método de microdiluição. Os óleos foram analisados quanto a composição química através de cromatógrafo à gás acoplado ao espectrômetro de massa (CG-EM). Além da atividade dos óleos essenciais a resistência a antimicrobianos fármacos também foi avaliada através da técnica de disco-difusão. Os compostos majoritários foram: para o óleo de Lippia alba (Mill) NEBr) (carvona 61,7% e limoneno 17,5%), Mentha x piperita L. (mentol 27,5%, mentofurano 22,5%, pulegona 12,8%, acetato de metila 12,5% e mentona 11%), Ocimum gratissimum L. (eugenol 43,3% e 1,8-cineol 28,2%), Curcuma longa L. (ar-tumerona 17,9%, alfa-tumerona 14,6% e 1,8- cineol 14,2%) e para Zingiber officinale Roscoe (geranial 23,9%, neral 17,2%, 1,8- cineol 16,0% e canfeno 11,4%). Os resultados deste estudo permitiram evidenciar a superioridade da atividade dos óleos de Lippia alba (Mill) NEBr, Ocimum gratissimum L. e Zingiber officinale Roscoe (média das CIM´s de 4821 a 5750 μg/mL e média das CBM´s de 6190,5 a 6500,1 μg/mL) frente às salmonelas isoladas, em comparação aos óleos de Mentha x piperita L. e Curcuma longa L., demonstrando o potencial como agente antibacteriano natural destas três espécies frente a diferentes sorovares do patógeno avaliado. Todos os isolados apresentaram resistência a pelo menos dois agentes antimicrobianos. Os isolados foram frequentemente resistentes à estreptomicina (95%), ácido nalidixico (75%) e gentamicina (70%) e sensíveis à norfloxacina (45%), ciprofloxacina (20%) e cloranfenicol (20%). Entre as 20 amostras de Salmonella enterica foram identificados oito sorovares diferentes com predomínio da Salmonella Mbandaka, Salmonella Enteritidis, Salmonella Agona e Salmonella Schwarzengrund, sendo que os sorovares Mbandaka e Enteritidis foram os que apresentaram maior resistência aos fármacos antimicrobianos. A resistência antimicrobiana significativa verificada em diferentes sorovares de Salmonella enterica indica que estratégias de prevenção devem ser adotadas, como estudos epidemiológicos e uso consciente de antimicrobianos tanto na alimentação animal, quanto no tratamento de pacientes, visando minimizar o aparecimento de sorovares ainda mais resistentes ou resistentes a princípios ativos atualmente eficazes. Neste sentido, os óleos essenciais de Ocimum gratissimum L., Lippia alba (Mill) NEBr e Zingiber officinale Roscoe, representam uma alternativa para o controle de Salmonella enterica, entretanto, demais estudos abordando o sinergismo com carne de frango e farinhas de origem animal são indicados. / The study aimed to evaluate the antibacterial activity in vitro of the essential oils of cidreira (Lippia alba (Mil) NEBr), peppermint (Mentha x piperita L.), alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum L.), turmeric (Curcuma longa L.) and ginger (Zingiber officinale Roscoe) grown under conditions of Manaus / AM front of 20 samples of Salmonella enterica isolates from chilled poultry, mechanically separated chicken meat, meat and bone meal and poultry viscera meal. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined employing a microdilution method. The oils were analyzed for chemical composition by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS). Besides the activity of essential oils, the resistance to antimicrobial drugs was also assessed by disk diffusion technique. The major compounds were: for Lippia alba (Mil) NEBr oil (carvone 61,7% and limonene 17,5%), Mentha x piperita L. (menthol 27,5%, menthofuran 22,5 %, pulegone 12,8 %, methyl acetate 12,5% and menthone 11%) Ocimum gratissimum L. (eugenol 43,3% and 1,8-cineole 28,2%), Curcuma longa L. (ar tumerona 17,9%, alphatumerona 14,6% and 1,8-cineole 14,2%) and Zingiber officinale Roscoe (geranial 23,9%, neral 17,2%, 1,8-cineole 16,0% and camphene 11,4%). The results of this study showed the superiority activity of Lippia alba (Mil) NEBr, Ocimum gratissimum L. and Zingiber officinale Roscoe oil (CIM's average from 4821 to 5750 and CBM's average from 6190.5 to 6500.1 μg/mL) against Salmonella isolated compared to Mentha x piperita L. and Curcuma longa L. oils, demonstrating the potential as natural antibacterial agent of these three species against different serovars of the pathogen evaluated. All isolates were resistant to at least two antimicrobial agents. The isolates were often resistant to streptomycin (95%), nalidixic acid (75%) and gentamicin (70%) and sensitive to norfloxacin (45%), ciprofloxacin (20%) and chloramphenicol (20%). Among the 20 strains of Salmonella enterica serovars were identified eight different with a predominance of Salmonella Mbandaka, Salmonella Enteritidis, Salmonella Agona and Salmonella Schwarzengrund, and the Enteritidis and Mbandaka serovars showed the highest antimicrobial resistance. The significant antimicrobial resistance occurs in different serovars of Salmonella enterica indicates that prevention strategies should be adopted, such as epidemiological studies and conscious use of antimicrobials both in animal feed, as in the treatment of patients in order to minimize the emergence of even more resistant serovars or resistant tho currently effective active principles. In this sense, the essential oil of Ocimum gratissimum L., Lippia Alba (Mill) NEBr and Zingiber officinale Roscoe represent an alternative for the control of Salmonella enterica, however, other studies addressing the synergism with chicken meat and animal meal are indicated.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T11:49:13Z No. of bitstreams: 1 Marcia Nieves Carneiro da Cunha.pdf: 873639 bytes, checksum: 110419134a2cc87e1cbcfafbb7b86801 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T11:49:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcia Nieves Carneiro da Cunha.pdf: 873639 bytes, checksum: 110419134a2cc87e1cbcfafbb7b86801 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bovine Mastitis is one of the main diseases that affect the dairy herds in the world and is considered one of the greatest obstacles to their operation profitable. The greatest losses from mastitis are due to the decrease in milk production, depreciation in nutritional quality, treatment cost, cost of veterinary care and laboratory losses in genetic potential. Several microorganisms are cited as agents of bovine mastitis and the species most frequently isolated are Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis and Escherichia coli. The β-lactam antibiotics are important antibacterial agents, but sensitive to β-lactamase enzymes capable of cleaving the β-lactam ring, rendering them inactive. Inhibitors of β-lactamases are an alternative for diseases treatment caused by resistant-penicillin bacteria. This study evaluated the ability to produce β-lactamase inhibitors by 71 actinomycetes isolated from lichens of the Amazonian and its antimicrobial activity using Staphylococcus aureus, penicillin-resistant isolates of bovine mastitis. The selection of actinomycetes that produced β-lactamases inhibitors was performed using the agar block technique against Klebsiella pneumoniae ATCC 29665 and selected actinomycetes were tested against Staphylococcus aureus penicillin resistant. The best producers of β-lactamase inhibitors were Streptomyces sp. DPUA 1542 and Nocardia sp DPUA 1571, which were subjected to submerged cultivation in the study of the growth curve, pH and antimicrobial activity. The largest inhibition zones using S. aureus, were obtained after 96 hours of culture for both Nocardia sp (13.5 and 12.0 mm) and for Streptomyces sp. (8.0 and 14.0 mm) with diffusion-tests on the discs and wells, respectively. Nocardia sp DPUA 1571 was used in the production of inhibitors of β-lactamases by factorial design where the influence of three variables: concentrations of carbon source (0.5, 1.0 and 1.0%), concentrations of nitrogen source (1.0, 2.5 and 4.0%) and pH (6.0, 6.5 and 7.0) were evaluated. The production carried out in 250mL flasks containing 100mL of culture medium MS-2 modified according to the experimental design, the flasks were incubated in an orbital shaker (200 rpm) at 28 ° C for 120 hours and each 24 hours, aliquots of 5 mL were withdrawn and centrifuged at 5000 rpm for 20 minutes at 4 ° C for the study of biological activity and dry weight. The biological activity of the liquid assay was performed using the diffusion-tests on the discs and wells, the best cultive conditions (test 3) with concentration of carbon source of 1.0% concentration of the soy bean flour 1% and pH 6,0, were obtained from the inhibition of up to 22mm diameter test against microorganisms used. The results showed that the actinomycetes are a promising source of β-lactamase inhibitors, demonstrated the potential application to pharmaceutical industry. / A mastite bovina é uma das principais enfermidades que acometem os rebanhos leiteiros no mundo, sendo considerada um obstáculo à sua exploração lucrativa. As maiores perdas causadas pela mastite são devidas à diminuição na produção de leite, depreciação na qualidade nutritiva, custo de tratamento, custo de atendimento veterinário e laboratorial e perdas no potencial genético. Vários microorganismos são citados como agentes etiológicos da mastite bovina sendo que as espécies mais frequentemente isoladas são Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli. Os antibióticos β-lactâmicos são importantes agentes antibacterianos, porém sensíveis às enzimas β-lactamases, capazes de clivar o anel β-lactâmico, tornando-os inativos. Os inibidores de β-lactamases são uma alternativa para o tratamento de doenças causadas por bactérias resitentes à penicilina. Neste estudo foi avaliada a capacidade de produzir inibidores de β-lactamases por 71 actinomicetos isolados de liquens da Região Amazônica e sua atividade antimicrobiana utilizando Staphylococcus aureus, resistentes à penicilina, isolados de mastite bovina. A seleção dos actinomicetos que produziram inibidores de β-lactamases foi realizada através da técnica de bloco de gelose contra Klebsiella pneumoniae ATCC 29665 e os actinomicetos selecionados foram testados contra Staphylococcus aureus resistentes. Os melhores produtores de inibidores de β-lactamases foram Streptomyces sp. DPUA 1542 e Nocardia sp DPUA 1571, os quais foram submetidos a cultivo submerso para o estudo da curva de crescimento, pH e atividade antimicrobiana. Os maiores halos de inibição, utilizando S. aureus, foram obtidos após 96 horas de cultivo tanto para Nocardia sp (13,5 e 12,0 mm) como para Streptomyces sp. (8,0 e 14,0 mm) com os testes-difusão nos discos e poços, respectivamente. Nocardia sp DPUA 1571 foi utilizado na produção de inibidores de β-lactamases por planejamento fatorial onde a influencia de três variáveis foi avaliada: concentrações da fonte de carbono (0,5, 1,0 e 1,0%), concentrações de fonte de nitrogênio (1,0, 2,5 e 4,0%) e pH (6,0, 6,5 e 7,0). A produção ocorreu em Erlenmeyers de 250mL contendo 100mL do meio de cultivo MS-2 modificado de acordo o modelo experimental, os frascos foram incubados em agitador orbital (200 rpm) a 28°C por um período de 120 horas e a cada 24 horas, alíquotas de 5mL foram retiradas e centrifugadas a 5.000 rpm por 20 minutos a 4ºC, para a determinação da atividade biológica e peso seco. A atividade biológica do líquido metabólico foi realizada através da técnica de difusão em disco e poço, nas melhores condições de cultivo (ensaio 3) com concentração da fonte de carbono de 1,0%, concentração do filtrado de soja de 1% e o pH 6,0, foram obtidos halos de inibição de até 22mm de diâmetro frente aos microrganismos teste utilizados. Os resultados permitiram concluir, que os actinomicetos isolados de liquens da Região Amazônica são uma fonte promissora de inibidores de β-lactamases, com potencial para aplicação futura na indústria farmacêutica.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-05T13:26:20Z No. of bitstreams: 1 Gileno Vitor Mota Lima.pdf: 2181747 bytes, checksum: c8dd011d95738d15e850b0e9be7650fd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T13:26:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gileno Vitor Mota Lima.pdf: 2181747 bytes, checksum: c8dd011d95738d15e850b0e9be7650fd (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Mangabeira (Hancornia speciosa Gomes) is a fruit tree found in various regions of Brazil. It features a large adaptive plasticity and is exposed to different environmental conditions that may confer abiotic stress induced by several factors, influencing the composition and production of secondary metabolites of the plant, including latex.The protein metabolites (oxidases and proteases) present in the latex, can act as a defense mechanism, which involves ranging from environmental fluctuations to attacks by pathogens and predators. The secondary metabolites in plants are related to most of these therapeutic properties, making them a great source of drugs which have shown an incredible healing power in its natural state or as a source of new antimicrobial agents. The proteases are a class of enzymes which represent about 60% of the world market for enzymes. Proteases originating from plants have particular significance for medicine and industry, as exhibit activity in a wide range of temperature and pH. Proteases are one of the major ingredients of a wide variety of detergents from those used for household cleaning, even those used for cleaning contact lenses and dentures. Being that the majority of these proteases is used in formulations of powder detergents, accounting for around 25% of the total market of enzymes. Most of the production costs for a biological product is in the purification strategy. The aqueous two-phase systems (ATPS) play a strategic role because the two phases are formed mainly (60-95%) by water which minimizes the possibility of denaturation and loss of biological activity, providing an effective and economically viable alternative to new bioprocesses. This study aimed to evaluate in vivo biochemical responses of three lattices access (PE, PB and RN) of mangabeira (Hancornia speciosa Gomes) compared to water deficit due to rainfall variation, but also evaluate the biotechnological potential of latex of this specie. The latex of mangaba tree was collected in Experimental Station José Irineu Cabral, unit belonging to the State Company for Agricultural Research of Paraíba SA (EMEPA-PB) located in João Pessoa (PB), through incisions in the stem with cutting stainless steel material and subsequently stored under refrigeration at -20 °C until analysis. The activity of SOD, APX, CAT, PPO enzymes and the content of H2O2 was determined. For evaluation of antimicrobial activity, we created a standard solution of latex mangaba tree protected under BR 102013018181-1 (Patent Registration Request) number nine strains of bacteria were used: Escherichia coli (UFPEDA 224), Staphylococcus aureus (02 UFPEDA), Klebsiella pneumoniae (UFPEDA 396), Candida albicans (UFPEDA 1007), Pseudomonas aeruginosa (UFPEDA 416), Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis (UFPEDA 138), Bacillus subtilis (UFPEDA 86) and Staphylococcus aureus (32) (isolated from goat mastitis ) and twenty-eight isolates of Staphylococcus, with fourteen causes of cattle mastitis and the other fourteen isolates causing goat mastitis that were kept in test tubes containing Mueller-Hinton broth for 24 hours at 37 º C for subsequent inoculation on plates Petri. We evaluated the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). For the pre-purification and characterization of proteases of mangabeira latex was used ATPS (PEG-phosphate). Subsequently, we evaluated the compatibility and stability of the crude extract and pre-purified with commercial detergents. From the results obtained, highlights the potential use of latex for understanding the antioxidant metabolism of plants mangaba tree subjected to conditions of oxidative stress, but also to obtain products for industrial purposes, allowing the strengthening of veterinary and chemical poles at the regional and nationally. / A mangabeira (Hancornia speciosa Gomes) é uma árvore frutífera encontrada em várias regiões do Brasil. Apresenta uma grande plasticidade adaptativa e está exposta a distintas condições ambientais que podem conferir estresse abiótico induzido por fatores diversos, exercendo influência na produção e composição dos metabólitos secundários do vegetal, dentre eles o látex. Os metabólitos proteicos (oxidases e proteases) presentes no látex, podem atuar como mecanismo de defesa, o qual envolve desde flutuações ambientais até ataques por patógenos e predadores. Os metabólitos secundários presentes nas plantas estão relacionados com a maioria das propriedades terapêuticas destas, tornando-as uma grande fonte de medicamentos os quais têm apresentado um incrível poder de cura no seu estado natural ou como fonte de novos agentes antimicrobianos. As proteases compõem uma classe de enzimas que representam cerca de 60% do mercado mundial de enzimas. As proteases originárias de vegetais possuem especial importância para a medicina e para a indústria, pois exibem atividade em ampla faixa de temperatura e pH. As proteases são um dos principais ingredientes de uma grande variedade de detergentes, desde aqueles usados para limpezas domésticas, até àqueles usados para limpeza de lentes de contato e próteses dentárias. Sendo que, a maior parte dessas proteases é utilizada em formulações de detergentes em pó, respondendo por aproximadamente 25% do mercado total de enzimas. A maioria dos custos de produção para um produto biológico reside na estratégia de purificação. Os sistemas de duas fases aquosas (SDFAs) desempenham um papel estratégico pois, as duas fases são formadas predominantemente (60-95%) por água o que minimiza a possibilidade de desnaturação ou perda da atividade biológica, constituindo uma alternativa eficaz e economicamente viável para novos bioprocessos. Este estudo, objetivou avaliar in vivo as respostas bioquímicas dos látices de três acessos (PE, PB e RN) de mangabeira (Hancornia speciosa Gomes) frente ao déficit hídrico decorrente da variação pluviométrica, como também avaliar o potencial biotecnológico do látex desta espécie. O látex de mangabeira foi coletado na Estação Experimental José Irineu Cabral, unidade pertencente à Empresa Estadual de Pesquisa Agropecuária da Paraíba S.A. (EMEPA-PB) localizada em João Pessoa (PB), através de incisões no caule com auxílio de material cortante de aço inoxidável, e posteriormente armazenado sob refrigeração à -20°C até o momento das análises. Determinou-se a atividade das enzimas SOD, APX, CAT, PPO e do teor de H2O2. Para avaliação da atividade antimicrobiana, foi elaborada uma solução padrão do látex de mangabeira protegida sob o número BR 102013018181-1 (Pedido de Registro de Patente); foram utilizadas nove cepas de bactérias: Escherichia coli (UFPEDA 224), Staphylococcus aureus (UFPEDA 02), Klebsiella pneumoniae (UFPEDA 396), Candida albicans (UFPEDA 1007), Pseudomonas aeruginosa (UFPEDA 416), Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis (UFPEDA 138), Bacillus subitilis (UFPEDA 86) e Staphylococcus aureus (32) (isolado de mastite caprina) e vinte e oito isolados do gênero Staphylococcus, sendo quatorze causadores da mastite bovina e os outros catorze isolados causadores da mastite caprina que foram mantidos em tubos de ensaio contendo caldo Mueller-Hinton por 24 horas em temperatura de 37ºC para posterior inoculação nas placas de Petri. Avaliou-se a concentração mínima inibitória (CMI) e concentração bactericida mínima (CBM). Para a caracterização e a pré-purificação de proteases do látex de mangabeira, utilizou-se SDFA (PEG-Fosfato). Posteriormente, avaliou-se a compatibilidade e estabilidade do extrato bruto e pré-purificado com detergentes comerciais. A partir dos resultados obtidos, evidencia-se a potencialidade da utilização do látex para a compreensão do metabolismo antioxidativo de plantas de mangabeira submetidas à condições de estresse oxidativo, como também a obtenção de produtos com fins industriais, possibilitando o fortalecimento dos pólos veterinário e químico em âmbito regional e nacional.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-04-06T14:53:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERT COM FICHA FINAL imprimir.pdf: 1883031 bytes, checksum: 5ef0ed7e1b300d25be7b0e8aac6f1886 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T14:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERT COM FICHA FINAL imprimir.pdf: 1883031 bytes, checksum: 5ef0ed7e1b300d25be7b0e8aac6f1886 (MD5) Previous issue date: 2009-09-04 / Syzygium cumini (L.) Skeels é uma planta nativa da Índia, pertencente à família das Myrtaceae. É reconhecida popularmente como jambolão, azeitona preta e usada no tratamento de inflamações, disenterias, úlceras digestivas e diabetes. Entretanto, sua atividade antimicrobiana foi menos investigada. Os objetivos deste estudo foram analisar qualitativamente e semi-quantitativamente a composição química de quatro diferentes extratos brutos (éter de petróleo, acetato de etila, metanol e aquoso) obtidos das folhas de S. cumini, determinar a atividade antimicrobiana in vitro frente bactérias e leveduras e, além disso, verificar se existe compatibilidade biológica do extrato aquoso de S. cumini com o tecido subcutâneo de ratos Wistar. Estudos fitoquímicos realizados nas folhas de S. cumini determinaram vários metabólitos secundários, em especial os taninos hidrolizáveis de reconhecida atividade antimicrobiana. Os extratos foram submetidos à avaliação da atividade antimicrobiana usando o método da microdiluição preconizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM). Foram utilizados 36 cepas de bactérias dos gêneros Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella enterica e 8 cepas de leveduras do gênero Candida albicans, multirresistentes a diversos antimicrobianos utilizados na clínica médica e do American Type Culture Collection (ATCC). Os resultados obtidos da CIM foram tratados estatisticamente através da Análise de Variância one-way (ANOVA). O extrato aquoso extraído das folhas de S. cumini foi o mais ativo obtendo uma CIM média de 0,46 mg mL-1. Os extratos obtidos demonstraram as maiores atividades contra a bactéria gram-positiva Staphylococcus aureus, particularmente o extrato aquoso mostrou-se ser mais ativos com uma CIM de desvio padrão de 0.41 mg mL-1 frente às linhagens. A Biocompatibilidade do extrato aquoso mostrou-se sem nenhuma alteração significativa nos elementos estruturais presentes no tecido subcutâneo. Os resultados obtidos aumentam o potencial da planta em aplicações fitoterápicas, sendo promissor o desenvolvimento de medicamentos inovadores baseado nas pesquisas com S. cumini. / Syzygium cumini (L.) Skeels is a native plant of India, belonging to the family of Myrtaceae . It is popularly recognized as jambolan, black olive and used in the treatment of inflammations, dysentery, digestive ulcers and diabetes. However, its antimicrobial activity was less investigated. The objectives of this study were to analyze qualitatively and semi - quantitatively the chemical composition of four different crude extracts (petroleum ether, ethyl acetate, methanol and aqueous) obtained from the leaves of S. cumini, determine the in vitro antimicrobial activity ahead bacteria and yeasts and, in addition , check for biological compatibility of the aqueous extract of S. cumini with the subcutaneous tissue of rats Wistar. Estudies phytochemicals performed on leaves of S. cumini determined several secondary metabolites, especially hydrolyzable tannins recognized antimicrobial activity. The extracts were evaluated for antimicrobial activity using the microdilution method recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC), 36 strains of the bacteria Enterococcus faecalis , Staphylococcus aureus, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enterica and 8 yeast strains of Candida albicans , multidrug resistant to several antimicrobials used in medicine and the American Type Culture Collection (ATCC) were used . The results of MIC were statistically analyzed by one-way (ANOVA) analysis of variance. The aqueous extract extracted from the leaves of S. cumini was the most active obtaining an average MIC of 0.46 mg mL- 1.The extracts showed the highest activities against gram positive bacterium Staphylococcus aureus, particularly aqueous extract proved be more active with a standard 0.41 mg mL- 1 strains facing the CIM deviation . The biocompatibility of the aqueous extract was found to be no significant change in the structural elements present in the subcutaneous tissue. The results increase the potential of the plant in herbal applications, and promising the development of innovative medicines based on research with S. cumini.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:55:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Jose Dilmar Obregon do Carmo.pdf: 12505165 bytes, checksum: af1796162335333199c5ad137e5f502d (MD5) Jose Dilmar Obregon do Carmo.pdf.jpg: 2961 bytes, checksum: 88959577b2ee0395315a4b7ca4bf32e4 (MD5) Previous issue date: 2009-05-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The titanium oxide (TiO2) is known as a material of excellent photocatalytic activity and its applications in fields that involve the removal of gases, decomposition of organic compounds, water purification and decomposition of pollutants. The nanotubes of titania and titanates have attracted particular attention in the scientific world because of its potential for application by submitting a larger surface area and number of hydroxyl groups when compared to the precursor oxide (TiO2), opening a new horizon for implementation, especially for photocatalysis. This study aimed to evaluate the photocatalytic performance of samples of inorganic nanotubes of formula NTTi, NTTiH, NTTiOx NTTi-Ag, NTTiH-Ag and Ag-NTTiH on effect of ultraviolet light, before the bacteria Escherichia coli (ATCC 12228) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538) as a model, well known for being the point genetic. The results found in this work, agree with most publications viewed until now. Samples NTTi-Ag, NTTiH-Ag and Ag-NTTiH, showed better photocatalytic effect, shown in the diffusion test on Mueller Hinton agar, when compared to the halo of inhibition of the antibiotic ampicillin. And there was a low performance of the titanates nanotubes (TTNT), specially of the show NTTi, NTTiH and NTTiOx front the bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus, probably due to structural form of nanotubes, probably favoring greater recombination of electron pair/gap (e¯/h+). The results at times 60/90/120 min, should be probably the effect of ultraviolet light (λ 365 nm) and not the effect of the nanotubes and ultraviolet light. The samples with silver showed a halo of inhibition around 1 to 3 mm, more than 5 mm of the hole where they were placed in 50μl solution of microorganisms Escherichia coli and Staphylococcus aureus. This part of the study observed the synergism of the nanotubes with silver and ultraviolet light at all times. / O óxido de titânio (TiO2) é conhecido como um material de excelente atividade fotocatalítica e suas principais aplicações envolvem a remoção de gases,a decomposição de compostos orgânicos e de poluentes, assim como a purificação da água. Os nanotubos de titanatos (ou titânia) têm atraído, em especial, a atenção do mundo científico, devido ao seu potencial de aplicação. São importantes por apresentarem uma maior área superficial e elevado número de grupos hidroxilas, quando comparados ao óxido precursor (TiO2), abrindo, assim, um novo horizonte para aplicação, principalmente da fotocatálise. Este trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho fotocatalítico das amostras de nanotubos inorgânicos de fórmulas NTTi, NTTiH, NTTiOx, NTTi-Ag, NTTiH-Ag e Ag-NTTiH, sob efeito da luz ultravioleta, frente às bactérias Escherichia coli (ATCC 12228) e Staphylococcus aureus (ATCC 6538) como modelo.Os resultados dos testes fotocatalíticos, encontrados nessa pesquisa, concordam com a maioria das publicações conhecidas até agora. As amostras NTTi-Ag, NTTiH-Ag e Ag-NTTiH demostraram melhor efeito fotocatalítico, comprovado no teste de difusão em Agar Mueller Hinton, quando comparado ao halo de inibição do antibiótico ampicilina. Observou-se um baixo desempenho dos nanotubos de titanatos (TTNT), principalmente das amostras NTTi, NTTiH e NTTiOx frente às bacterias Escherichia coli e Staphylococcus aureus. É muito provável que isso tenha acontecido devido à forma estrutural desses nanotubos, favorecendo uma maior recombinação do par elétron/lacuna (e¯/h+). Os resultados encontrados, nos tempos 60/90/120 minutos, acredita-se que seja devido ao efeito da luz ultravioleta ( 365 nm) e não ao efeito dos nanotubos e luz ultravioleta. As amostras com prata apresentaram um halo de inibição (1 a 3 mm) a mais do que os 5 mm do orifício onde foram colocados 50μl da solução dos microorganismos Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Nesta parte do estudo, notou-se o sinergismo dos nanotubos com prata e a luz ultravioleta em todos os tempos.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Flabio da Rosa Pons Junior.pdf: 1999620 bytes, checksum: e5045f0611ac73ef991604e04484fbb8 (MD5) Flabio da Rosa Pons Junior.pdf.txt: 174053 bytes, checksum: 8140591651031d4c7b893b3bc3ce8675 (MD5) Flabio da Rosa Pons Junior.pdf.jpg: 3814 bytes, checksum: 8bd8fcbd7817488781e11c3f2a9361f5 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fungal infections in humans occur in several ways, can this is superficial and systemic mycoses mycoses. The use of new antifungal made important progress in the treatment of different types of fungal infections. Among the drugs used to treat, there is ketoconazole, azole derivative, a synthetic molecule that acts by inhibiting biosynthesis of ergosterol molecule, exerting fungicidal. Treatment with ketoconazole requires frequent applications of the product, which causes skin irritation, the adherence to treatment. Initial studies have shown that drugs have nanocarrier improvement in selectivity, reducing side effects by modifying the release and increasing the effectiveness of the asset. This study aimed to characterize, evaluate the physical and chemical stability and antimicrobial activity of systems composed of nanoparticles or microparticles incorporated into formulations containing ketoconazole shampoo. All studies were carried out comparing ketoconazole as nanostructured and microstructured with the free form. The samples were stored under conditions of 25 ± 2 ° C, 4 ± 2 ° C and 40 ± 2 ° C and 75 ± 5% RH and exposed to UV light for 90 days and analyzed at 0, 7, 15, 30, 60 and 90 days in relation to the determination of pH, particle diameter, polydispersity index, zeta potential, rate of association and the drug dosing, antimicrobial activity and viscosity for the samples of shampoo. The average particle size for the nanocapsules was less than 370 nm, for microparticles less than 52 micrometers. All samples consist of the nanocarrier showed negative zeta potential. The values for the rate of association were 92.10% for the nanocapsules and 97.69% for the microparticles. Regarding the content of the suspensions and tested for stability, the samples comprising nanocapsules showed the loss of a smaller amount of assets (17.9% and 19.7%) in conditions of 25 ± 2 ° C and ± 4 2 ° C respectively. For formulations of shampoo made by nanocarrier systems, the same place, but with losses (9.3% and 13.6%) for the same conditions of suspension. In the analysis of antimicrobial activity, suspensions of nanocapsules had power of 98.15% and 100.25% of microparticles. Samples of shampoo were analyzed by microbiological assay sensitivity, which analyzed both qualitatively and showed that the samples have antifungal activity. The validation of analytical methodologies for the suspensions showed satisfactory results for all parameters. The results obtained, it can be concluded that the suspensions have demonstrated good stability, even when incorporated into a topical pharmaceutical vehicle, thus representing a better technological feasibility for the pharmaceutical area. / As infecções fúngicas nos seres humanos ocorrem de formas variadas, podendo tratar-se de micoses superficiais ou micoses sistêmicas. O uso de novos antifúngicos permitiu importantes progressos na terapêutica dos diferentes tipos de infecções micóticas. Dentre os fármacos utilizados para o tratamento, destaca-se o cetoconazol, derivado dos azóis, uma molécula sintética que age inibindo na biossíntese da molécula do ergosterol, exercendo ação fungicida. O tratamento com cetoconazol exige aplicações freqüentes do produto, o que provoca irritação cutânea, dificultando a adesão ao tratamento. Estudos iniciais têm demonstrado que fármacos nanocarreados apresentam melhora na seletividade, reduzindo efeitos colaterais, modificando a liberação e aumentando a eficácia do ativo. Este trabalho teve como objetivo, caracterizar, avaliar a estabilidade físico química e a atividade antimicrobiana de sistemas compostos de nanopartículas ou micropartículas contendo cetoconazol incorporadas em formulações de xampu. Todos os estudos foram realizados comparando-se o cetoconazol na forma nanoestruturada e microestruturada com a forma livre. As amostras foram armazenadas nas condições de 25 ± 2 °C, 4 ± 2 °C e 40 ± 2 °C e 75 ± 5% UR e expostas à luz UV, durante 90 dias, sendo analisadas em períodos 0, 7, 15, 30, 60 e 90 dias, em relação à determinação do pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, taxa de associação e doseamento do fármaco, atividade antimicrobiana e viscosidade para as amostras de xampu. O tamanho médio das partículas para as nanocápsulas foi inferior a 370 nm, para as micropartículas inferior a 52 μm. Todas as amostras compostas pelos nanocarreadores apresentaram potencial zeta negativo. Os valores para a taxa de associação foram de 92,10 % para as nanocápsulas e 97,69 % para as micropartículas. Em relação ao teor das suspensões submetidas aos testes de estabilidade, as amostras compostas por nanocápsulas foram as que apresentaram uma menor perda de quantidade do ativo (17,9 % e 19,7 %) nas condições de 25 ± 2 °C e 4 ± 2 °C respectivamente. Para as formulações de xampu compostas pelos sistemas de nanocarreadores, o mesmo ocorreu, porém com perdas de (9,3 % e 13,6 %) para as mesmas condições das suspensões. Na análise da atividade antimicrobiana, as suspensões de nanocapsulas apresentaram potência de 98,15 % e as de micropartículas 100,25 %. As amostras de xampu foram analisadas pelo ensaio microbiológico de sensibilidade, o qual analisado de forma qualitativa e demonstrou que as amostras possuem atividade antifúngica. As validações das metodologias analíticas para as suspensões apresentaram resultados satisfatórios para todos os parâmetros analisados. Através dos resultados obtidos, pode-se concluir que as suspensões demonstraram ter boa estabilidade, mesmo quando incorporadas em um veículo farmacêutico de uso tópico, representando assim, uma melhor viabilidade tecnológica para a área farmacêutica.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T14:17:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FlabioDaRosaPonsJunior.pdf: 2017674 bytes, checksum: ce2baac29e6f32b9170ceef6e8aa57e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FlabioDaRosaPonsJunior.pdf: 2017674 bytes, checksum: ce2baac29e6f32b9170ceef6e8aa57e7 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / The fungal infections in humans occur in several ways, can this is superficial and systemic mycoses mycoses. The use of new antifungal made important progress in the treatment of different types of fungal infections. Among the drugs used to treat, there is ketoconazole, azole derivative, a synthetic molecule that acts by inhibiting biosynthesis of ergosterol molecule, exerting fungicidal. Treatment with ketoconazole requires frequent applications of the product, which causes skin irritation, the adherence to treatment. Initial studies have shown that drugs have nanocarrier improvement in selectivity, reducing side effects by modifying the release and increasing the effectiveness of the asset. This study aimed to characterize, evaluate the physical and chemical stability and antimicrobial activity of systems composed of nanoparticles or microparticles incorporated into formulations containing ketoconazole shampoo. All studies were carried out comparing ketoconazole as nanostructured and microstructured with the free form. The samples were stored under conditions of 25 ± 2 ° C, 4 ± 2 ° C and 40 ± 2 ° C and 75 ± 5% RH and exposed to UV light for 90 days and analyzed at 0, 7, 15, 30, 60 and 90 days in relation to the determination of pH, particle diameter, polydispersity index, zeta potential, rate of association and the drug dosing, antimicrobial activity and viscosity for the samples of shampoo. The average particle size for the nanocapsules was less than 370 nm, for microparticles less than 52 micrometers. All samples consist of the nanocarrier showed negative zeta potential. The values for the rate of association were 92.10% for the nanocapsules and 97.69% for the microparticles. Regarding the content of the suspensions and tested for stability, the samples comprising nanocapsules showed the loss of a smaller amount of assets (17.9% and 19.7%) in conditions of 25 ± 2 ° C and ± 4 2 ° C respectively. For formulations of shampoo made by nanocarrier systems, the same place, but with losses (9.3% and 13.6%) for the same conditions of suspension. In the analysis of antimicrobial activity, suspensions of nanocapsules had power of 98.15% and 100.25% of microparticles. Samples of shampoo were analyzed by microbiological assay sensitivity, which analyzed both qualitatively and showed that the samples have antifungal activity. The validation of analytical methodologies for the suspensions showed satisfactory results for all parameters. The results obtained, it can be concluded that the suspensions have demonstrated good stability, even when incorporated into a topical pharmaceutical vehicle, thus representing a better technological feasibility for the pharmaceutical area. / As infecções fúngicas nos seres humanos ocorrem de formas variadas, podendo tratar-se de micoses superficiais ou micoses sistêmicas. O uso de novos antifúngicos permitiu importantes progressos na terapêutica dos diferentes tipos de infecções micóticas. Dentre os fármacos utilizados para o tratamento, destaca-se o cetoconazol, derivado dos azóis, uma molécula sintética que age inibindo na biossíntese da molécula do ergosterol, exercendo ação fungicida. O tratamento com cetoconazol exige aplicações freqüentes do produto, o que provoca irritação cutânea, dificultando a adesão ao tratamento. Estudos iniciais têm demonstrado que fármacos nanocarreados apresentam melhora na seletividade, reduzindo efeitos colaterais, modificando a liberação e aumentando a eficácia do ativo. Este trabalho teve como objetivo, caracterizar, avaliar a estabilidade físico–química e a atividade antimicrobiana de sistemas compostos de nanopartículas ou micropartículas contendo cetoconazol incorporadas em formulações de xampu. Todos os estudos foram realizados comparando-se o cetoconazol na forma nanoestruturada e microestruturada com a forma livre. As amostras foram armazenadas nas condições de 25 ± 2 °C, 4 ± 2 °C e 40 ± 2 °C e 75 ± 5% UR e expostas à luz UV, durante 90 dias, sendo analisadas em períodos 0, 7, 15, 30, 60 e 90 dias, em relação à determinação do pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, taxa de associação e doseamento do fármaco, atividade antimicrobiana e viscosidade para as amostras de xampu. O tamanho médio das partículas para as nanocápsulas foi inferior a 370 nm, para as micropartículas inferior a 52 μm. Todas as amostras compostas pelos nanocarreadores apresentaram potencial zeta negativo. Os valores para a taxa de associação foram de 92,10 % para as nanocápsulas e 97,69 % para as micropartículas. Em relação ao teor das suspensões submetidas aos testes de estabilidade, as amostras compostas por nanocápsulas foram as que apresentaram uma menor perda de quantidade do ativo (17,9 % e 19,7 %) nas condições de 25 ± 2 °C e 4 ± 2 °C respectivamente. Para as formulações de xampu compostas pelos sistemas de nanocarreadores, o mesmo ocorreu, porém com perdas de (9,3 % e 13,6 %) para as mesmas condições das suspensões. Na análise da atividade antimicrobiana, as suspensões de nanocapsulas apresentaram potência de 98,15 % e as de micropartículas 100,25 %. As amostras de xampu foram analisadas pelo ensaio microbiológico de sensibilidade, o qual analisado de forma qualitativa e demonstrou que as amostras possuem atividade antifúngica. As validações das metodologias analíticas para as suspensões apresentaram resultados satisfatórios para todos os parâmetros analisados. Através dos resultados obtidos, pode-se concluir que as suspensões demonstraram ter boa estabilidade, mesmo quando incorporadas em um veículo farmacêutico de uso tópico, representando assim, uma melhor viabilidade tecnológica para a área farmacêutica.

Orientador: Gláucia Maria Pastore / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T02:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_DianeTeode_D.pdf: 21600008 bytes, checksum: 9d2d940e83841a4b2fb091014e2703ef (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O lipoheptapeptídeo cíclico surfactina é produzido por diferentes cepas de Bacillus subtilis. Em uma concentração de 20 mM, a surfactina é capaz de reduzir a tensão superficial da água de 72 mN/m para 27 mN/m. Isto faz da surfactina o biossurfactante com maior potencial conhecido. O conjunto multienzimático, responsável pela síntese da surfactina, consiste de três grandes NRPSs: SrfA-A (402kDa), SrfA-B (401kDa) e SrfA-C (144 kDa), compreendendo um total de sete módulos. Os genes NRPSs correspondentes estão organizados no operon srfA. A produção de surfactina por B.subtilis é usualmente baixa e a produção em sistemas de expressão heterólogos como E.coli não é viável. Portanto, uma opção para aumentar a produção de surfactina seria o uso de sistemas de expressão utilizando o próprio Bacillus, colocando o operon srfA sob controle de um forte promotor que pode funcionar independentemente da regulação por feedback negativo endógeno. Para esta proposta, o promotor nativo do operon responsável pela síntese da surfactina em B.subtilis LB5a foi substituído pelo promotor Pgrac, o qual pode ser induzido por análogos de lactose. Este sistema de expressão é baseado em um forte promotor que não é inibido por fatores endógenos e, deve fornecer uma nova ferramenta para produzir altos níveis de surfactina em Bacillus subtilis. A eficácia do lipopeptídeo produzido pela cepa recombinante de B.subtilis pGrac-SrfA foi demonstrada usando testes de atividade hemolítica e avaliação da tensão superficial do meio. Os picos do lipopeptídeo obtido por HPLC para a cepa recombinante pGrac-SrfA apresentaram perfis semelhantes aos obtidos a partir da cepa selvagem. Análises de espectrometria de massas confirmaram a presença de uma série homóloga de lipopeptídeos com variações no tamanho da cadeia hidrocarbônica caracterizando o composto como surfactina. Verificou-se a predominância do homólogo de massa molecular de 1000,18 u. A produção de surfactina pela cepa de B.subtilis recombinante foi cerca de 57% superior ao da cepa selvagem, quando induzida por isopropil b-D-1-tiogalactopiranosídeo / Abstract: The cyclic lipoheptapeptide surfactin is produced by different Bacillus subtilis strains. At a concentration of 20µM, this biosusrfactant is able to reduce the surface tension of water from 72 mN/m to 27 mN/m. This makes surfactin one the most powerful biosurfactants known so far. The surfactin synthetase is a large multienzyme complex consisting of three enzymatic subunits, SrfA (402 kDa), SrfB (401 kDa), and SrfC (144 kDa), comprising of a total of seven modules. The corresponding NRPS genes are organized in the srfA operon. Surfactin production from Bacillus strains is usually low and production of such large proteins in a heterologous system such as E. coli is not viable. One option to improve surfactin production would be to use Bacillus subtilis itself as an expression system and to place the srfA operon under the control of a strong promoter that can function independently of endogenous negative feedback regulation. For this purpose, the native promoter of the surfactin operon in B.subtilis LB5a was replaced by the promoter Pgrac, which can be induced by lactose analogs. This expression system is based on a strong promoter and is not expected to be inhibited by endogenous factors and, should provide a new tool for producing higher levels of surfactin in Bacillus subtilis.The efficacy of the lipopeptide produced for the recombinant B.subtilis pGrac-SrfA was demonstrated using tests of hemolytic activity and evaluation of the surface tension of the medium. HPLC peaks of surfactin gotten of the genetically modified strain showed patterns of lipopeptides similar to those of the wild-type strain, and mass spectrometry analysis confirmed the presence of a lipopeptide homologous serie with variations in the hydrocarbon chain length, known as surfactin. Was verified the predominance of a homologue with a molecular mass of 1000.18 u. The surfactin production of the recombinant bacterium was up to about 57% greater than that of wild-type strain when it was induced by isopropyl b-D-1-thiogalactopyranoside / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Aspidosperma species belonging to the Apocynaceae family are restricted to the Americas. Ethnopharmacological studies have shown the use of these species as a potential agent against malaria and trypanosomatids, also used as antibiotics, anti-inflammatory and antitumor. The search for new chemical entities with antimicrobial activity has significant importance due to the versatility of microorganisms to acquire resistance to the therapeutic arsenal, and due to the prevalence of neglected diseases, such as leishmaniasis. These are endemic in developing countries have few therapeutic options, which are toxic and have limited effectiveness. The aim of this study was to evaluate the crude extracts and fractions from different parts of the species A. macrocarpon, A. tomentosum and A. pyrifolium, as the antimicrobial action and realize bioguided chemical study of the species with high activity against the microorganisms tested, and less toxic to mammalian cells. About antibacterial activity alkaloidal fraction from A. pyrifolium stem presented moderate minimal inhibitory concentration (MIC): 125 and 250 g/mL for Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis, respectively. The ethyl acetate fraction of A. macrocarpon stem had a weak MIC of 250 g/mL on Candida parapsilosis. The activity of the extract of the stem bark of A. macrocapon against Leishmania amazonensis promastigotes showed inhibitory concentration (IC50) of 151.5 g/mL and selectivity index (SI) of 6.52 on LLCMK2 cells, this species were considered the most promising for the bioguided chemical study. The chloroform and ethyl acetate fractions of the A. macrocarpon stem bark showed IC50 29.00  1.65 and 29.50  0.95 g/mL, respectively on promastigotes forms of L. amazonensis. The bioguided study with chloroform fraction led to subfraction of monoacylglycerols, wich were the most active on L. amazonensis, with IC50 2.31  0.08 and 2.29  0.14 g/mL on promastigotes and intracellular amastigotes, respectively. SI showed that this fraction were 42 fold more toxic to L. amazonensis than to macrophages. Studies related to the mechanism of action of monoacylglycerols evaluated by optical microscopy, scanning electron (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) showed abnormalities such as mitochondrial swelling, concentric membranes inside the mitochondria, presence of perforations on the cell surface of the parasite and autophagic vacuoles. These data together with results of flow cytometry showed necrosis and autophagy as a possible mechanism of cell death. Quercetin was identified as the active substance of the ethyl acetate fraction against evolutionary forms of L. amazonensis. This substance had, IC50 of 61.93  1.36 and 63.86  3.25 M/mL on promastigotes and intracellular amastigotes, respectively. Quercetin was evaluated in combination with amphotericin B (Q + A) and miltefosine (Q + M), the combinatorial effect of both was considered synergistic against all forms of L. amazonensis. The combinations Q+A and Q+M showed antagonistic action on macrophages and human erythrocytes. Evaluation of the combination using SEM and TEM associated with literature data indicate apoptotic cell death after treatment with both combinations. These findings are relevant as a first step in the search for new therapies for the treatment of cutaneous leishmaniasis. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As espécies do gênero Aspidosperma pertencentes à família Apocynaceae são restritas às Américas. Estudos etnofarmacológicos revelaram a utilização destas espécies como agente potencial contra a malária e tripanosomatídeos, como antimicrobianos, anti-inflamatórios e antitumorais. A pesquisa em busca de novas entidades químicas com ação antimicrobiana apresenta significativa importância devido à versatilidade dos micro-organismos em adquirir resistência ao arsenal terapêutico, e devido à prevalência de doenças consideradas negligenciadas, como as leishmanioses. Estas são endêmicas nos países em desenvolvimento e possuem poucas opções terapêuticas, sendo estas tóxicas e de eficácia limitada. O objetivo do estudo consistiu em avaliar os extratos brutos e frações de diferentes partes das espécies de A. macrocarpon, A. tomentosum e A. pyrifolium, quanto à ação antimicrobiana e realizar o estudo químico bioguiado da espécie mais ativa sobre os micro-organismos testados e menos tóxica para células de mamíferos. Sobre a atividade antibacteriana a fração alcaloídica da casca de A. pyrifolium apresentou concentração inibitória mínima (CIM) moderada de 125 e 250 μg/mL para Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis, respectivamente. A fração acetato de etila do caule de A. macrocarpon apresentou CIM fraca de 250 μg/mL sobre Candida parapsilosis. A atividade do extrato da casca do caule de A. macrocapon contra formas promastigotas de Leishmania amazonensis apresentou concentração inibitória (CI50) de 151,5 g/mL e índice de seletividade (IS) de 6,52 sobre células LLCMK2, sendo a espécie mais promissora para a realização do estudo químico bioguiado. As frações de clorofórmio e acetato de etila obtidas da casca do caule de A. macrocarpon demonstraram CI50 de 29,00  1,65 e 29,50  0,95 g/mL respectivamente, sobre as formas promastigotas de L. amazonensis. O estudo bioguiado do fracionamento da fração clorofórmio conduziu à obtenção da subfração com monoacilglicerois (MAG) como a mais ativa sobre as formas evolutivas de L. amazonensis, com CI50 2,31  0,08 e 2,29  0,14 g/mL sobre promastigotas e amastigotas intracelulares, respectivamente e IS sobre macrófagos J774-A1 de 42, para ambas as formas evolutivas. Estudos relacionados ao mecanismo de ação da fração MAG avaliados por microscopia óptica, eletrônica de varredura (MEV), e transmissão (MET) evidenciaram alterações como inchaço mitocondrial, membranas concêntricas dentro da mitocôndria, presença de perfurações na superfície celular do parasito e vacúolos autofágicos. Estes dados quando analisados em conjunto com resultados da citometria de fluxo indicaram a autofagia e necrose como provável mecanismo de morte celular. Após o fracionamento da fração acetato de etila foi identificada a quercetina como substância ativa sobre as formas evolutivas de L. amazonensis, com CI50 de 61,93  1,36 e 63,86  3,25 M/mL sobre promastigotas e amastigotas intracelulares, respectivamente. A quercetina foi avaliada em combinação com anfotericina B (Q+A) e miltefosina (Q+M), o efeito combinatório de ambas foi considerado sinérgico sobre as formas evolutivas de L. amazonensis. As combinações Q+A e Q+M demonstraram ação antagônica sobre macrófagos e eritrócitos humanos. A avaliação da combinação por MEV e MET associada aos dados da literatura indicaram provável morte celular por apoptose de ambas as combinações. Estes achados nos ensaios in vitro são relevantes como primeiro passo na busca por novas terapias para o tratamento da leishmaniose cutânea.