Curativos utilizados no tratamento de feridas crônicas e queimaduras devem apresentar carac terísticas antimicrobianas. Sabe-se que compostos de prata são utilizados há muito tempo como antissépticos, mas apresentam alguns problemas relacionados ao modo de liberação. A fim de controlar essa liberação, os íons Ag+ podem ser imobilizados em suportes, como por exemplo, zeólitas, que por sua vez devem estar dispersas no filme que é utilizado como curativo. Nesse contexto, este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento e a caracterização de filmes à base de gelatina, adicionados de zeólita clinoptilolita impregnada com íons prata e a avaliação das propriedades antimicrobianas, visando à aplicação no tratamento de ferimentos. Filmes com 5,7 e 10% (m/v) de gelatina e 0, 5, 10, 15, 20 e 25% (v/v) de glicerol foram produzidos e caracterizados quanto à espessura, teor de umidade, capacidade de absorção de água (CAA), caráter hidrofílico, propriedades mecânicas, permeabilidade ao vapor de água (PVA), fluxo de permeação de vapor de água (FPVA), morfologia por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR). Com base nas características determinadas, foi possível selecionar três formulações para incorporação das zeólitas (10% de gelatina e 15, 20 e 25 % de glicerol). A zeólita comercial clinoptilolita foi caracterizada e impregnada com íons Ag+. Na sequência, por meio de um ensaio antimicrobiano preliminar, foi definido que as zeólitas seriam adicionadas aos filmes nas concentrações de 0,5; 1 e 2 % (m/v). Os filmes à base de gelatina com zeólitas foram caracterizados pelos mesmos ensaios citados e também por análise tennogravimétrica (TGA), calorimetria exploratória diferencial (DSC) e quantiticação de íons prata por espectrometria de absorção atômica com chama (FAAS). Através da avaliação antimicrobiana qualitativa, percebeu-se que a ação antimicrobiana é decorrente da presença dos íons Ag+, porém não foram identificadas diferenças expressivas entre o tamanho dos halos de inibição formados para as diferentes concentrações de clinoptilolita-Ag. Através do ensaio microbiológico quantitativo verificou-se que não havia carga bacteriana na solução onde o filme estava imerso. Os resultados obtidos mostram que os filmes desenvolvidos neste estudo têm potencial para serem aplicados como curativos, atuando como antimicrobiano, auxiliando, desta forma, na cicatrização dos ferimentos. / Dressings used in treatment of bums and chronic wound must present antimicrobial characteristics. It is known that silver compounels are used for long time as antiseptics, but they have some problems related to release mode. To control this release, Ag+ ions may be immobilized in supports, as zeolites, that must be disperseel in the film used as wound dressing. In this sense, this work objectives the development and characterization of gelatin based-films added of clinoptilolite zeolite impregnated with silver ions and antimicrobial properties evaluation, aiming the application in wound treatment, as burns, for example. Films with 5,7 anel 10% (w/v) of gelatin anel 0, 5, 10, 15, 20 anel 25 % (v/v) of glycerol were produced and characterized by the thickness, moisture content, water absorption capacity (CAA), hydrophilic character, mechanical properties, water vapor permeation (PVA), water vapor permeation flux (FPVA), morphology by scanning electron microscopy (MEV) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). Based on the determined characteristics, it was possible select three formulations for zeolites incorporation (10% of gelatin and 15, 20 and 25 % of glycerol). Commercial clinoptilolite zeolite was characterized and impregnated with Ag+ ions. Subsequently, by a preliminary antimicrobial assay, it was defined that the zeolites would be added to the films in the concentrations of 0.5, 1 and 2 % (w/v). Gelatin based films with zeolites were characterizeel by the same assays cited and, also, thermogravimetric analysis (TGA), differential scanning calorimetry (DSC) and silver ions quantification by flame atomic absorption spectroscopy (FAAS). Characterization tests demonstrated that the zeolite concentration of 0.5% resulted in films with properties more suitable for wound dressing application. By the qualitative antimicrobial evaluation, it was noticed that the antimicrobial action is due to the Ag+ ions, but no significant differences between the size of the inhibition halos formed were observed for the different concentrations of clinoptilolite-Ag. By the quantitative antimicrobial evaluation, it was found that there was no bacterial load in the solution where the film was submerged. The results show that the films developed in this stuely have potential to be applied as wound dressings, acting as an antimicrobial, thus helping the wound healing.

A Escherichia coli patogênica aviária (APEC), pertence à família Enterobacteriacea, é responsável por vários processos patológicos nas aves, atuando como agente primário ou secundário na aerossaculite, pericardite, perihepatite, peritonite, salpingite, onfalite, celulite, entre outros. O presente estudo aborda a resistência a antimicrobianos de amostras de E. coli (APEC) de uma forma inovadora, utilizando como ferramenta as redes neurais artificiais, metodologia inserida na linha de pesquisa do CDPA (Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária). A utilização de inteligência artificial, especificamente, as redes neurais artificiais (RNAs), está sendo crescentemente empregada como ferramenta para a análise de dados não lineares e multivariados, característica comum em fenômenos biológicos. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar que é possível predizer o uso de antimicrobianos, utilizando trinta e oito genes responsáveis por distintos fatores de virulência, oriundos das amostras de Escherichia coli isoladas de frango de corte, através das redes neurais artificiais (RNAs). Além disso, verificou-se a relação entre o índice de patogenicidade (IP) e a resistência aos quatorze antimicrobianos que fazem parte do banco de dados usado para o desenvolvimento deste estudo. Neste trabalho foram utilizados os dados disponíveis referentes a 256 amostras de E. coli isoladas de camas de aviários, lesões de celulite e quadros respiratórios de frangos de corte. Para a confecção das redes neurais artificiais as entradas escolhidas foram: os índices de patogenicidade, as lesões induzidas em pintos de um dia de idade, a caracterização dos genes associados à patogenicidade, o bioquimismo, a origem das amostras e por fim, a motilidade. As redes neurais artificiais foram criadas realizando associações entre as variáveis de entrada com o objetivo de encontrar o modelo mais ajustado. As saídas utilizadas de acordo com Salle (2009) foram o comportamento das cepas de Escherichia coli frente aos 14 antimicrobianos. Para verificar se existia diferença significativa entre as médias dos índices de patogenicidade (IP) e as amostras sensíveis e resistentes aos 14 antimicrobianos utilizados neste estudo, realizou-se análise estatística com o auxílio do software JMP® 9.0.1 (SAS Institute Inc., 2010). Os resultados obtidos demonstram que as redes neurais artificiais foram capazes de realizar a classificação correta do comportamento das amostras com amplitude de 74,22% a 98,44%, desta forma tornando possível predizer a resistência antimicrobiana da Escherichia coli, através de modelo das RNAs. A análise estatística realizada para verificar a relação entre o IP e a resistência aos 14 antimicrobianos demonstrou que estas são variáveis independentes. Ou seja, podem haver picos no IP sem alteração na resistência antimicrobiana, ou até mesmo o contrário, alterações na resistência antimicrobiana sem mudanças no IP. / The avian pathogenic Escherichia coli (APEC), belongs to the family Enterobacteriacea, is responsible for various pathological processes in poultry, acting as an agent in the primary or secondary lesion such as: sacculitis, pericarditis, perihepatitis, peritonitis, salpingitis, omphalitis, cellulitis, among others. This study addresses the antimicrobial resistance of E. coli (APEC) strains in an innovative way, using tools such as artificial neural networks, methodology embedded in the CDPA´s search line (Center for Diagnostics and Research in Avian Pathology). The use of artificial intelligence, specifically artificial neural networks (RNAs), is being increasingly used as a tool for data analysis and nonlinear multivariate, common feature in biological phenomena. The objective of this study was to demonstrate that it is possible to predict the use of antimicrobials, using thirty-eight distinct genes responsible for virulence factors, derived from Escherichia coli isolates from broiler, through artificial neural networks (ANNs). Besides, it was found the relationship between pathogenicity index (PI) and resistance to fourteen antimicrobial forming part of the database used for the development of this study. In this study was used the data available for 256 samples of E. coli isolated from broiler litter, lesion of cellulitis and respiratory symptoms in broilers. To make the neural network inputs have been chosen: the indices of pathogenicity, the induced lesions in chicks at day old, characterization of genes associated with pathogenicity, biochemism, the source of samples and finally motility. Artificial neural networks have been created making associations between the input variables in order to find the best adjusted model. The outputs used according Salle (2009) was the behavior of Escherichia coli strains compared to 14 antimicrobials. To check whether there was a significant difference between the average indices for pathogenicity (IP) and the sensitive and resistant samples to 14 antimicrobials used in this study, statistical analysis was performed with the help of software JMP ® 9.0.1 (SAS Institute Inc., 2010). The results show that artificial neural networks were able of performing correct classification of the behavior of the samples with an amplitude of 74.22% to 98.44%, thereby making it possible to predict the antibiotic resistance of Escherichia coli, using ANNs model. The statistical analysis performed to assess the relationship between IP and resistance to 14 antibiotics showed that these variables are independent. That is, it can happen peaks in IP without change in antimicrobial resistance, or even the opposite, changes in antimicrobial resistance without changes in IP.

Os sistemas de armazenamento de combustível podem apresentar vulnerabilidade á contaminação tanto química quanto microbiana, comprometendo a qualidade final do produto. Este trabalho teve como objetivo selecionar antimicrobianos para utilização no controle da contaminação microbiana de misturas diesel/biodiesel armazenadas e monitorar a degradação química deste combustível. Foram estudados dezoito diferentes produtos antimicrobianos indicados para utilização em combustíveis, quanto ao seu espectro de ação e dosagens contra diferentes grupos microbianos em diferentes tipos de misturas diesel/biodiesel, através de testes em laboratório e em campo. A degradação química da fase oleosa foi monitorada através de testes específicos para algumas características indicativas de qualidade e a análise da degradação microbiana foi acompanhada com espectrometria de infravermelho. Foi realizada a avaliação de um KIT comercial para a detecção de ATP por bioluminescência com a bactéria Pseudomonas e um inóculo não caracterizado ( ASTM1259-10) em fase aquosa (meio mineral e água de drenagem de tanques de estocagem). A toxicidade da fase aquosa que esteve em contato com a mistura B10 e um aditivo selecionado foi avaliada com o uso das espécies Lactuca sativa L. (alface) e Artemia salina Leach (micro-crustáceo), durante 30 dias. Um aditivo contendo 50% de oxazolidina como ativo antimicrobiano em sua formulação foi considerado efetivo para o controle preventivo da contaminação microbiana em misturas B10. Porém outras formulações contendo, isotiazolonas ou morfolinas podem constituir uma boa opção para tratamentos corretivos. O kit para determinação do ATP por bioluminescência testado neste estudo, na forma como está projetado, não é adequado para estimar o grau de contaminação microbiana da fase aquosa proveniente de tanques de combustíveis. Os resultados de toxicidade mostram que tanto a água que esteve em contato com o combustível tratado (com o aditivo) e não tratado apresentaram toxicidade para os organismos estudados. Porém, a água que esteve em contato com o combustível tratado com o biocida mostrou alta toxicidade aguda para ambos os organismos-teste utilizados. / The fuel storage systems may present vulnerability to chemical as well as microbial contamination, compromising final product quality. This goal was to select antimicrobials for use in the control of microbial contamination of diesel/biodiesel blends stored and monitor aspects of chemical degradation of the fuel. 18 different antimicrobial products suitable for use in fuels, as their spectrum of activity against different microbial groups and dosages, in different types of diesel/biodiesel blends by means of laboratory tests and field were studied. The chemical degradation of the oil phase was monitored using specific tests for certain characteristics indicative of quality and analysis of microbial degradation was monitored with infrared spectrometry. The evaluation of a commercial kit for the ATP bioluminescence detection in aqueous phase with Pseudomonas and a uncharacterized inoculum (ASTM1259 -10) (mineral medium and natural bottom water from storage tanks) was performed. The toxicity of aqueous phase which was in contact with the B10 blend and selected additive was evaluated with the use of the species Lactuca sativa L. (Lettuce) and Artemia salina Leach (microcrustacean) for 30 days. An additive containing 50% oxazolidine as antimicrobial agent in its formulation was considered effective for preventive control of microbial mixtures B10. But other formulations containing isothiazolones or morpholines could be a good option for corrective treatment. The kit for determination of ATP bioluminescence tested in this study as designed it’s unappropriate to estimate the degree of microbial contamination of the aqueous phase from the fuel tank. The toxicity results show that both the water that was in contact with the treated fuel (with additive) and untreated showed toxicity to studied organisms. However, the water that was in contact with the biocide treated fuel showed high acute toxicity to both test organisms used.

Objetivo: O objetivo geral deste trabalho foi avaliar o perfil farmacocinético para os compostos enrofloxacino (ENRO) e seu principal metabólito, ciprofloxacino (CIPRO), e cloranfenicol (CAP) em frangos de corte visando subsidiar a tomada de ações para controle de resíduos de medicamentos veterinários em produtos de origem animal e a produção de materiais de referência para fins de controle de qualidade analítica. Métodos: Frangos machos da linhagem Cobb-Vantress foram utilizados nos experimentos para determinação da farmacocinética plasmática e níveis teciduais para os compostos ENRO/CIPRO (10 mg/kg), CAP (100 mg/kg) após administração em dose única oral e administração contínua através da água de consumo simulando as condições reais de produção. As concentrações plasmáticas e teciduais foram determinadas utilizando a técnica de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) através de métodos desenvolvidos e validados in house. Análise farmacocinética nãocompartimental e modelagem compartimental dos dados foram realizadas utilizando o software WinNonlin e NONMEM v.6, respectivamente. Para determinação das concentrações teciduais os animais foram sacrificados em tempos pré-definidos e amostras de plasma, músculo e fígado coletadas para os compostos ENRO/CIPRO e plasma e músculo para CAP. Resultados e Discussão: Três métodos multirresíduos para determinação de medicamentos veterinários incluindo diferentes compostos pertencentes às classes químicas ou terapêuticas previstas nesse projeto foram desenvolvidos utilizando LCMS/ MS com limites de quantificação (LOQ) em acordo com os propósitos de aplicação das metodologias. Além disso, métodos específicos para a análise dos compostos individuais nas amostras de plasma foram desenvolvidos para a determinação dos perfis farmacocinéticos em plasma. Conclusões: com base nos dados gerados foi possível implementar novas metodologias para o controle de resíduos de medicamentos veterinários relevantes na produção de aves de corte, bem como o estudo dos perfis farmacocinéticos e depleção tecidual permitiram o delineamento correto das etapas de planejamento e predição de valores encontrados em amostras experimentais. De forma complementar, os dados gerados permitirão a produção de amostras naturalmente contaminadas contendo os fármacos em questão para a produção de materiais de referência com o objetivo de serem utilizados para controle de qualidade analítico. / Objective: The aim of this study was to evaluate the pharmacokinetic profile for compounds enrofloxacin (ENRO) and its major metabolite, ciprofloxacin (CIPRO), and chloramphenicol (CAP) in broilers in order to support the actions taken to vet drugs residues control in animal products and production of reference materials for purposes of analytical quality control. Methods: Cobb- Vantress male broilers were used in experiments to determine the plasma pharmacokinetics and tissue levels to ENRO / CIPRO (10 mg / kg) and CAP (100 mg / kg) after single oral dose administration and continuous administration compounds through drinking water simulating the production conditions. Plasma and tissue concentrations were determined using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) using inhouse developed and validated methods. The non-compartmental and compartmental pharmacokinetic data modeling was performed using WinNonlin software and NONMEM v.6, respectively. For determination of tissue concentrations, animals were sacrificed at predefined times and plasma, muscle and liver samples collected for ENRO/ CIPRO and plasma and muscle samples to CAP. Results and Discussion: Three mutiresidue methods for determination of veterinary drugs including compounds belonging to same chemical and therapeutic classes in this project were developed using LCMS/ MS with limits of quantification (LOQ) in accordance with the purposes of application of methodologies. Furthermore, specific for analyzing individual compounds in the plasma samples methods have been developed for determination of plasma pharmacokinetic profiles. Conclusions: Based on the data generated was possible to implement new methodologies for control of veterinary drug residues relevant in broiler production, as well as the study of pharmacokinetic profiles and tissue depletion allowed the correct delineation of planning and predicting values found in experimental samples. As a complement, the data generated will enable the production incurred samples containing the drugs for production of reference materials for analytical quality control purposes.

Pythium insidiosum é o oomiceto causador da pitiose uma doença de caráter crônico de difícil tratamento que acomete humanos e animais. Este microrganismo aquático semelhante aos fungos possui características distintas de parede celular e ausência de ergosterol na membrana celular, particularidades estas que dificultam o tratamento da doença com antifúngicos tradicionais. O presente estudo teve por objetivos: avaliar as interações sinérgicas das associações de antibacterianos, antifúngicos e compostos fenólicos sobre P. insidiosum; comparar, in vivo e in vitro, a monoterapia e combinação de azitromicina, claritromicina, minociclina e tigeciclina em coelhos com pitiose experimental. Para os testes in vitro de microdiluição em caldo foram utilizados 30 isolados de P. insidiosum, conforme o protocolo de M38-A2 do CLSI. Para os testes in vivo, os animais foram distribuídos nos grupos: Infectados com zoósporos de P. insidiosum, tratados com placebo (Controle positivo, n=6) e não infectados tratados com placebo (controle negativo, n=5), tratados com azitromicina; claritromicina; minociclina; e tigeciclina (n=6); e com as combinações minociclina com azitromicina; minociclina com claritromicina; minociclina com tigeciclina (n=6). Amostras de sangue, medidas da área da lesão, e tecidos foram coletados para análise antes, durante e ao término do tratamento. Índices mais elevados de sinergismo foram obtidos com a associação de claritromicina com micafungina (73,33%); minociclina com claritromicina ou azitromicina (93,33%); itraconazol com os compostos fenólicos timol ou carvacrol (96,60%) e minocilina com claritromicina, azitromicina (93,33%) ou tigeciclina (86,67%). Interações antagônicas das associações de timol ou carvacrol com antibacterianos ou antifúngicos, e antibiótico com antibiótico, não foram observadas. Porém nas associações de antibacterianos com antifúngicos os percentuais mais altos foram vistos em claritromicina ou azitromicina com itraconazol (6,67%) e minociclina com caspofungina (6,67%). A completa regressão da pitiose foi comprovada pela queda nos níveis de anticorpos, regressão das lesões e negatividade nos testes de detecção de hifas em tecido: PCR, histopatologia e isolamento. Nos tratamentos in vivo todos os grupos diferiram do controle positivo. Cura clínica e completa regressão da lesão foram obtidos nos tratamentos com azitromicina (n=5∕6), minociclina (n=1∕6), azitromicina com minociclina (n=4∕6), minociclina com claritromicicna (n=1∕6) e minociclina com tigeciclina (n=1∕6). A comparação in vitro das associações de minociclina com azitromicina ou claritromicina (93,33%), e tigeciclina (86,67) revelou percentuais de sinergismo elevados, no entanto a correlação destes dados com o in vivo demonstra o cuidado na escolha da associação, pois claritromicina (93,33%) e tigeciclina (86,67%) mesmo apresentando altos índices de sinergismo com minociclina nos testes in vivo tiveram um baixo percentual de regressão das lesões (16,66%). Além disso, os tecidos coletados submetidos à análise molecular e histopatológica revelaram que a tigeciclina mesmo em associação com minociclina não foi capaz de conter a metástase da pitiose para os pulmões. A azitromicina em monoterapia demonstrou ser a melhor terapia para a regressão completa das lesões causadas pela pitiose. / Pythium insidiosum is the cause of the oomycete pythiosis one chronic nature of the disease is difficult to treat that affects humans and animals. This water organism similar to fungi has distinct characteristics of cell wall and absence of ergosterol in the cell membrane, these peculiarities that make it difficult to treat the disease with traditional antifungal agents. This study aimed to: assess the synergistic interactions of antibiotics associations, antifungal and phenolic compounds on P. insidiosum; comparison, in vivo and in vitro, monotherapy and combination of azithromycin, clarithromycin, tigecycline with minocycline in rabbits with pythiosis experimental. For testing in vitro broth microdilution were used 30 strains of P. insidiosum as the M38-A2 CLSI protocol. For tests in vivo, the animals were divided into groups: Infected with zoospores of P. insidiosum treated with placebo (positive control, n = 6) and uninfected treated with placebo (negative control, n = 5) treated with azithromycin; clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6); and minocycline + azithromycin combinations; minocycline and clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6). Blood samples, the lesion area of measures, and tissues were collected for analysis before, during and after treatment. Higher rates of synergism were obtained with the clarithromycin association with micafungin (73.33%); minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%); itraconazole with phenolic compounds thymol or carvacrol (96.60%) and minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%) and tigecycline (86.67%). Antagonistic interactions of thymol or carvacrol associations with antibiotics or antifungal and antibiotic and antibiotic, were observed. However, the associations with antifungal antibiotics the highest percentages were seen in clarithromycin or azithromycin with itraconazole (6.67%) and minocycline with caspofungin (6.67%). The regression of lesions caused by pythiosis was confirmed by the fall in antibodies, regression of lesions and negativity in hyphae detection tests in tissue: PCR, histopathology and isolation. In treatments in vivo all groups differed from positive control. Clinical cure and complete regression of the lesion were obtained in the treatments with azithromycin (n = 5/6), minocycline (n = 1/6), azithromycin or minocycline (n = 4/6), clarithromycin and minocycline (n = 1/6) and tigecycline with minocycline (n = 1/6). In vitro comparisons of minocycline associations with azithromycin or clarithromycin (93.33%), and tigecycline (86.67) showed high percentages of synergism, however the correlation of these data with in vivo demonstrates the care in the association of choice, for clarithromycin (93.33%) and TIG (86.67%) even with high rates of synergism with minocycline in vivo tests had a low percentage of cure (16.66%). In addition, the collected tissues subjected to molecular and histological analysis revealed that even in tigecycline and tigecycline with minocycline association was not able to contain the disease metastasis to the lungs.The azithromycin monotherapy was shown to be the best therapy to the regression of lesions caused by pythiosis.

Introdução: As Infecções no trato urinário (ITU) estão entre as doenças infecciosas mais comumente diagnosticadas e são responsáveis por uma grande proporção do consumo de agentes antimicrobianos, sendo a Escherichia coli o microorganismo mais freqüentemente envolvido. Os antimicrobianos utilizados no tratamento das ITU sofrem concentração no processo de eliminação, ocasionando altos níveis de antimicrobiano na urina. No entanto, os testes que avaliam a susceptibilidade aos antimicrobianos são baseados em concentrações séricas. Assim, é de interesse a padronização de um teste que utilize níveis urinários (discos de alta potência) dos antimicrobianos frente aos uropatógenos. Objetivo: padronizar teste de susceptibilidade aos antimicrobianos para E. coli de ITU, com concentrações de antimicrobianos atingidas na urina. Métodos: foram utilizados 204 isolados bacterianos resistentes a pelo menos um dos seguintes antimicrobianos: ampicilina, cefalotina, ciprofloxacino, gentamicina, sulfametoxazol-trimetoprima(cotrimoxazol) para os quais foi determinada a MIC através de diluição em agar. Através da análise das MIC obtidas e das concentrações que os antimicrobianos atingem na urina, foram estabelecidas as concentrações dos discos de alta concentração. As seguintes concentrações de disco foram utilizadas: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotina (200, 100 μg) e ciprofloxacino (200, 150 μg). Resultados: a ampicilina apresentou MIC ≥ 512μg/mL para cerca de 50% dos isolados. Dos discos testados, o de 500 μg mostrou melhor coeficiente de correlação de Spearman (rs: -0,659) e foi escolhido para a determinação do ponto de corte através de curva ROC (receiver operating characteristic). Pela curva, um diâmetro de halo de 9 mm separaria as amostras resistentes (R) das susceptíveis (S) a altos níveis de ampicilina com 100% de sensibilidade e especificidade de 50%. A cefalotina apresentou MIC inferior a 256μg/mL para 78% dos isolados sendo que o “rs” para os discos de 100 e 200 μg foi o mesmo: -0,744. Pela curva ROC, halos de 17mm (disco de 200μg) e 13mm (disco de 100μg) discriminariam amostras R de S com 100% de sensibilidade e 96,9% de especificidade. O ciprofloxacino apresentou MIC ≤ 128 μg/mL para mais de 50% dos isolados, sendo que o “rs” foi melhor com o disco de 200μg (rs:-0,916). Um halo de 21mm separaria as amostras S e R com 100% de sensibilidade e 78,9% de especificidade. Para o cotrimoxazol, 95% das amostras se mostraram resistentes a altos níveis e os testes com disco de alta potência não foram realizados. Para a gentamicina o baixo nº de amostras (n=22) prejudicou a análise, mas cerca de 63% dos isolados seriam susceptíveis a altos níveis. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o uso de discos de alta concentração pode ser útil para avaliar a susceptibilidade de isolados urinários. Isto tem importância em laboratórios clínicos onde, embora haja dificuldade na realização da MIC, testes de disco-difusão estão incorporados na rotina. / Introduction: The urinary tract infections (UTI) are among the most common infectious diseases and are responsible for a high antimicrobial usage. The Escherichia coli is the main microorganism involved in UTI. The antimicrobials used for treatment of UTI concentrate in the urinary tract and this leads to high levels of them in the urine. However, the susceptibility tests are based on the serum levels of the antimicrobials. Therefore, it is of interest to develop a test which correlates the urinary levels of antibiotics (discs with high levels) with the uropathogens. Objective: to propose a susceptibility test of E. coli from UTI using doses of the antimicrobials reached in the urine. Methods: a total of 204 clinical isolates of E.coli resistant, according to conventional antimicrobial susceptibility test to, at least, one of the following antimicrobials: ampicillin, cefalotin, ciprofloxacin, gentamicin and trimetoprima- sulfametoxazol. The MIC was determined by the agar dilution technique. According to the results of the MICs and the urinary levels of the antimicrobials it was possible to establish the concentration of the high potency discs. The following concentration of discs were used: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotin (200, 100 μg) and ciprofloxacin (200, 150 μg). Results: ampicillin presented MIC ≥ 512μg/mL for around 50% of E. coli isolates. The disc containing 500 μg of ampicillin displayed the best coeficient of correlation (rs: -0,659) and it was chosen to establish diameter breakpoint according to the ROC curve. A diameter of 9 mm would discriminate high level ampicillin resistant isolates with 100% and 50% of sensitivity and specificity, respectively. Cefalotin presented MIC below 256 μg/mL for 78% of E. coli isolates. Its “rs” for discs containing 100 and 200μg was the same: - 0,744. According to the ROC curve zone diameters of 17mm (disk of 200μg) e 13mm (disk of 100μg) were able to discriminate isolates resistant with 100% and 96.9% of sensitivity and specificity, respectively. Ciprofloxacin presented MIC ≤ 128 μg/mL for more than 50% of isolates and the best “rs” was achieved with the 200μg (r:-0,916) disk. A zone diameter of 21mm would discriminate susceptible isolates with 100% and 78.9% of sensitivity and specificity. respectively. A total of 95% of E. coli isolates proved to be resistant to high levels of cotrimoxazole and, therefore, tests with high potency disks were not performed. Due to the small numbers of isolates resistant to gentamycin (n=22) we were not able to perform further analysis although 63% of E coli isolates proved to be susceptible to high levels of this antimicrobial. Conclusion: This study indicated that the susceptibility test with disks containing high levels of antimicrobials may be useful to evaluate the susceptibility of urinary tract isolates This may be of importance as the clinical laboratory may not be able to perform the MIC test for routine isolates.

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No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tatiana Santos Araújo - 2018.pdf: 2428189 bytes, checksum: df19f39a21998d1646d7679e34c5497e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Periodontal disease is a common and localized inflammatory disease caused by bacterial infection associated with dental biofilm and several pathological conditions, such as inflammation of the gingiva, degeneration of the periodontal ligament, root cementum and loss of alveolar bone, characterizing periodontitis. Chronic Periodontitis is one of the manifestations of Periodontal Disease, it stands out for the high prevalence and incidence, and still remains, throughout the world, as a public health problem, affecting the quality of life of these people. It can be considered a disease of high complexity as to the nature of its etiology, different forms of classification, treatment and maintenance. The major bacteria found include Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, P. intermedia, C. rectus, E. corrodens, Fusobacterium. nucleatum, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, P. micros, Treponema and Eubacterium species. Antimicrobials, by the inhibition of pathogenic microorganisms growth, are a prophylactic and therapeutic alternative for multiple diseases, as well as Chronic Periodontitis. The high capacity of developing resistance to antibiotics has steadily increased and its control is still a major challenge. Nanotechnology provides a new platform for developing important metal properties in the form of nanoparticles (NPs) with promising applications as antimicrobial agents. Since the last decade, silver NPs (Ag-NP) have demonstrated antimicrobial properties against gram-negative bacteria and gram-positive bacteria. In this work, the NPs of Ag and zinc oxide decorated with silver (ZnO-Ag- NP) were synthesized and analyzed for: I the final quality of NPs by X-ray Diffraction (XRD) and Transmission Electron Microscopy MET); II by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), the antimicrobial potential on Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953) and Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), in vitro for a period of 24 to 96 hours. The antimicrobial activity of Amoxicillin (AMX) and Metronidazole (MTZ) on the strains were evaluated in the same experimental conditions. DRX confirmed the synthesis of Ag-NPs in the face-centered cubic crystallographic phase and ZnO-Ag-NP in the Wurtzite hexagonal phase. MET images showed aspherical shape with an average size of about 2 nm (Ag-NP) and 8 nm (ZnO-Ag-NP) indicating the efficiency of the synthesis method to obtain colloidal suspensions. The CIM for Ag-NP (in the range of 32.4 to 4.05 and> 150 to 37.5 μg / mL) and ZnO-Ag-NP (> 150 to 37.5 and 150 μg / mL) F. nucleatum and P. gingivalis, respectively, point to the concentration-time dependent activity; with higher Ag-NP antimicrobial activity for the same exposure times, 24, 48, 72 and 96 hours. Comparatively, greater sensitivity of F. nucleatum than P. gingivalis to NPs is clearly observed. AMX (0.047 to 0.023 μg / mL) and MTZ (5.0 to 0.625 μg / mL) presented lower MIC values than NPs under microdilution test conditions under anaerobic conditions. The development of new drugs or nanomaterials is promising in the face of the propagation of bacterial resistance, since they have a low propensity to induce microbial resistance when compared to conventional antibiotics. / A Doença Periodontal é uma doença inflamatória localizada e bastante comum, causada por infecção bacteriana associada ao biofilme dental e à diversas condições patológicas, como a inflamação da gengiva, degeneração do ligamento periodontal, cemento radicular e a perda de osso alveolar, caracterizando às periodontites. A Periodontite Crônica é uma das manifestações da Doença Periodontal, destaca-se pela alta prevalência e incidência em todo o mundo, afetando a qualidade de vida dessas pessoas. Pode-se considerar uma doença de elevada complexidade quanto à natureza da sua etiologia, formas de classificação, tratamento e à sua manutenção. As principais bactérias encontradas incluem Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, P. intermedia, C. rectus, E. corrodens, Fusobacterium nucleatum, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, P.micros e espécies de Treponema e Eubacterium. Os antimicrobianos, por inibirem o crescimento de microrganismos patogênicos, são uma alternativa profilática e terapêutica de múltiplas doenças, assim como da Periodontite Crônica. A alta capacidade de desenvolvimento de resistência contra antibióticos tem aumentado continuamente e seu controle é ainda um grande desafio. A nanotecnologia fornece uma nova plataforma de desenvolvimento das propriedades importantes do metal sob a forma de nanopartículas (NPs) com aplicações promissoras como agentes antimicrobianos. Desde a última década, as NPs de prata (Ag-NP) têm demonstrado propriedades antimicrobianas contra as bactérias gram-negativas e bactérias gram-positivas. Neste trabalho, as NPs, de Ag e de óxido de zinco decoradas com prata (ZnO-Ag-NP), foram sintetizadas e analisadas quanto: I a qualidade final das NPs por Difração de Raios X (DRX) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET); II através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), o potencial antimicrobiano sobre sobre Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953) e Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), in vitro pelo período de 24 à 96h. Comparativamente foi avaliada a atividade antimicrobiana de Amoxicilina (AMX) e Metronidazole (MTZ) sobre as cepas nas mesmas condições experimentais. A DRX confirmou a síntese de Ag-NPs na fase cristalográfica cúbica de face centrada e de ZnO-Ag-NP na fase hexagonal do tipo Wurtzita. As imagens de MET revelaram formato esférico com tamanho médio de cerca de 2 nm (Ag-NP) e 8 nm (ZnO-Ag-NP) apontando a eficiência do método de síntese para a obtenção de suspensões coloidais. A CIM para as Ag-NP (na faixa de 32,4 a 4,05 e >150 a 37,5 μg/mL ) e de ZnO-Ag-NP (>150 a 37,5 e 150 μg/mL) sobre F. nucleatum e P. Gingivalis, respectivamente, apontam para a atividade tipo concentração-tempo dependente; com maior atividade antimicrobiana de Ag-NP para os mesmos tempos de exposição, 24, 48, 72 e 96h. Comparativamente, observa-se com clareza maior sensibilidade de F. nucleatum do que P. gingivalis às NPs. AMX (0,047 a 0,023 μg/mL) e MTZ (5,0 a 0,625 μg/mL) apresentaram valores de CIM menores do que as NPs, em condições de teste em microdiluição em condições anaeróbicas. O desenvolvimento de novos medicamentos ou nanomateriais é promissor diante a propagação da resistência bacteriana, por estes apresentarem baixa propensão de induzir resistência microbiana quando comparados aos antibióticos convencionais.

O crescimento cada vez maior da industrialização e a existência de um mercado globalizado vêm exigindo dos produtores rurais à utilização de modernas tecnologias ligadas à produção animal. O baixo custo de produção e o aumento da qualidade do produto final gerado têm sido a grande meta dos pecuaristas e centros de pesquisa voltados à agropecuária. Devido à necessidade de aumento na produção, propriedades agropecuárias têm recorrido ao uso de todo e qualquer recurso disponível que possa promover melhorias na atividade produtiva.O uso indiscriminado dos antimicrobianos com a intenção de aumentar a produção animal pode resultar em concentrações residuais nos produtos como carne, ovos e leite acima das doses aceitáveis para o consumo humano. Inicialmente, os antibióticos eram usados como medida terapêutica, mas com o avanço do conhecimento e desenvolvimento de novos compostos, passaram a ser utilizados também como medida preventiva e como promotores do crescimento.O que se deve questionar não é a presença destes resíduos, mas sim o tipo e as concentrações dos mesmos. De fato, as modernas tecnologias analíticas têm permitido a detecção de partes por bilhão de substâncias químicas, componentes ou metabólitos de medicamentos de uso veterinário em alimentos e, nestas quantidades, dificilmente elas representariam perigo à saúde dos consumidores. Portanto, há necessidade de se estabelecer metodologias analíticas mais eficientes que possam auxiliar os órgãos de fiscalização da agricultura no controle do uso desses antimicrobianos na produção animal. Assim como auxiliar no controle de qualidade, principalmente em indústrias exportadoras que almejam expansão de mercado, onde essa prática é quase uma imposição no contexto do comércio internacional de produtos pecuários \"in natura\" e processados. Devido a essas necessidades, o objetivo do presente foi padronizar e desenvolver reagentes imunoenzimáticos para a pesquisa da ciprofloxacina em produtos de origem animal. Os resultados obtidos no desenvolvimento desses imunoreagentes foram positivos quando correlacionado (r2 = 0,9588) com o kit referência RIDASCREEN® Enro/Cipro da R-Biopharm. Diante disso, é possível concluir que o Brasil possui infra-estrutura adequada para padronizar esses testes rápidos, evitando com isso um grande gasto na importação desses kits / The growth each time higher of industrialization and the existence of a global market forces the rural producers to use modern technologies related to animal production. The low production cost and the increasing of obtained final product quality have been the great aim of cattle farmers and cattle farming research centers. Due to the necessity of increasing the production, rural properties have required the use of any available source able to promote better productive activities. The indiscriminated antibiotics use aiming to increase animal production may result in residual concentrations found in products such as meat, eggs and milk over acceptable doses to the human consumption. Firstly, antibiotics were used as therapeutic prescriptions although the advances on knowledge and development of new compounds were also used as a preventive way and as growth promoters. What must be questionable its not the presence of these residuals but surely what kind of residual and their concentrations. In fact, the modern analytic technologies make possible the detection of parts per billions (ppb) of chemical substances, compounds or medicine metabolites of veterinary use in food and in these quantities, hardly they would be dangerous to the consumer health. However, it\'s necessary to establish more efficient analytic methodologies to help on agriculture supervising organs in the control of these antibiotics use in the animal production. Thus, how to help in the quality control, mainly in industries that export to get the market expansion, where this activity is almost an imposition at the international trade context of farming products \"in natura\" and industrialized ones. Due to these necessities, the goal of our present work was to standard and develop immunoenzymatics reagents to the ciprofloxacin researching from animal products. The results obtained on development of these immunoreagents were positive when correlated (r2= 0,9588) to the kit RIPASCREEN® Enro/Cipro from R-Biopharm reference. At the light of these knowledge, it?s possible to conclude that Brazil has adequate proper-structure to standardize these quick tests, to avoid in this way a high cost to import these kits.

Realizou-se a síntese de nanopartículas de Prata (AgNps) estabilizadas com Citrato de Sódio através de redução química utilizando Borohidreto de Sódio, com posterior avaliação da interação destas com o peptídeo antimicrobiano Dermaseptina 01. Para a caracterização da conjugação dos constituintes, foram empregadas técnicas dentre as quais espectroscopia no ultravioleta-visível (UV-Vis), espalhamento dinâmico de luz (DLS), medidas de potencial Zeta (ζ), espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIRS), espectroscopia de dicroísmo circular (CD), calorimetria de titulação isotérmica (ITC) e espectroscopia de fluorescência. Alterações em intensidade e posição das bandas no espectro de extinção, aumento dos diâmetros hidrodinâmicos das nanopartículas e transição do sinal do potencial Zeta apresentado sugerem uma interação dependente da razão das concentrações das espécies empregadas. Medidas de FTIRS sugerem alterações em bandas relacionadas ao grupo tiol presente no resíduo de Cisteína do C-terminal da DS 01, sugerindo uma interação covalente desta com as nanopartículas. Observou-se por ITC, qualitativamente, uma interação exotérmica de ambas as espécies, enquanto medidas de CD demonstraram alterações características de estrutura secundária da DS 01 quando em contado com superfícies hidrofóbicas. A espectroscopia de fluorescência, empregadas aqui em Nps menores, sugere supressão da fluorescência do Triptofano da DS 01 por formação de complexo, em detrimento de processo colisional. Ensaios antimicrobianos contra cepas de E. coli DH5-α realizados em diluição seriada do complexo sugerem ser este menos efetivo do que as AgNps livres, supomos em virtude da menor quantidade de íons Ag+ liberados. Ensaios de citotoxicidade com fibroblastos de fígado saudável (FCH3) demonstraram indução de apoptose e estado de necrose para o complexo e seus constituintes. / The chemical synthesis of Citrate stabilized Silver nanoparticles (AgNps) using Sodium Borohydride as a reducing agent was performed, with further evaluation of its interaction with the antimicrobial peptide Dermaseptin 01. For such, techniques as UV-Vis spectroscopy, Dynamic Light Scattering (DLS), Zeta Potential measurements (ζ), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIRS), Circular Dichroism spectroscopy (CD), Isothermal titration calorimetry (ITC) and Fluorescence Spectroscopy were employed. Changes in intensity and position of the plasmon band, increase in hydrodynamic diameter and Zeta potential signal transitions were observed in a concentration ratio-dependent fashion. FTIRS measurements showed displacement in bands related to the thiol group of the C-terminal Cysteine residue of the peptide, which suggests a covalent interaction between the DS 01 and the AgNps. Exothermic interactions and secondary structure changes commonly observed for the DS 01 in contact with hydrophobic surfaces resulted from ITC and CD analysis, respectively. Quenching of the peptide\'s Tryptophan residue fluorescence, performed with AgNps of smaller size, indicates the formation of a static complex rather than a collision-driven process. AgNps showed to be more effective against E. coli (DH5-α strain) than the complex AgNp-DS 01, probably due to the slower Ag+ release provided by the stabilizing effect of covalent attachment of the peptide. Increase in apoptosis and necrosis were observed as an outcome of exposing healthy liver fibroblast (FCH3) to the complex and, separately, to its constituents.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A cÃrie dental à conceituada como uma doenÃa infectocontagiosa, crÃnica e multifatorial na qual ocorre uma desmineralizaÃÃo progressiva das estruturas dentais com consequente dor e perda do elemento dental. à considerada um problema de saÃde pÃblica em todo mundo devido sua incidÃncia e consequÃncias orais e sistÃmicas. Dessa forma, novos mÃtodos de controle microbiano tÃm sido pesquisados com vista à reduÃÃo do nÃmero de casos. Os peptÃdeos antimicrobianos sÃo molÃculas presentes em diversos seres vivos e possuem uma alta atividade biocida frente a diversos microrganismos patogÃnicos. O peptÃdeo Lys-[Trp6]-Hy-A1 (Lys-a1), derivado sintÃtico do peptÃdeo Hy-A1, isolado inicialmente da espÃcie Hypsiboas albopunctatus, à uma molÃcula com atividade antimicrobiana descrita na literatura. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antibacteriano do peptÃdeo sintÃtico Lys-a1 sobre crescimento planctÃnico e em biofilme de bactÃrias orais. As metodologias utilizadas para avaliaÃÃo do potencial antimicrobiano foram: determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) e concentraÃÃo bactericida mÃnima (CBM) em placas de poliestireno para o crescimento em suspensÃo; e quantificaÃÃo de biomassa por cristal violeta e contagem de unidades formadoras para crescimento em biofilme. Os micro-organismos, S. oralis, S. sanguinis, S. parasanguinis, S. salivarius, S. mutans e S. sobrinus, foram cultivados em Brain Heart Inffusion caldo suplementado com 1% de sacarose (BHIs) a 37 ÂC sob atmosfera com 10% de CO2. O peptÃdeo foi solubilizado em Ãcido acÃtico 0,1% (v/v) em diferentes concentraÃÃes (500 a 1,9 Âg.mL-1). Os grupos controle dos ensaios foram meio de cultura BHIs (controle negativo) e Gluconato de Clorexidina 0,12% (controle positivo). O peptÃdeo testado apresentou um destacado efeito antimicrobiano, sendo capaz de inibir o crescimento planctÃnico e em biofilme de todas as cepas testadas mesmo em baixas concentraÃÃes. Assim, o peptÃdeo Lys-a1 à uma importante fonte para possÃveis agentes antimicrobianos, com Ãnfase no controle e prevenÃÃo de biofilmes microbianos, um dos fatores mais importantes para o desenvolvimento do processo cariogÃnico. / Dental caries is defined as an infectious, chronic and multifactorial disease, in which there is a progressive demineralization of tooth structure with consequent pain and dental loss. It is considered a major public health problem worldwide because its high incidence, besides its oral and systemic consequences. Thus, new methods of microbial control have been investigated to reduce the number of cases. Antimicrobial peptides are molecules present in many living beings and have a high biocidal activity against various pathogenic microrganisms. The peptide Lys-[Trp6]-Hy-A1 (Lys-a1) is a synthetic derivative of the peptide Hy-A1, initially isolated from the species Hypsiboas albopunctatus. According to previous research, it is a molecule with broad antimicrobial activity. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of the synthetic peptide Lys-a1 on the planktonic and biofilm growth of oral bacteria. The methods used to evaluate antimicrobial activity include the following: determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) in microtiter plates for growth in suspension and quantification of biomass by crystal violet staining and counting of colony forming units for biofilm growth. The microorganisms S. oralis, S. sanguinis, S. parasanguinis, S. salivarius, S. mutans and S. sobrinus were grown in Brain Heart Infusion broth supplemented with 1% sucrose (BHIs) at 37 ÂC under atmospheric pressure with 10% CO2. The peptide was solubilized in 0.1% acetic acid (v/v) at various concentrations (500 to 1.9 Âg.mL-1). Chlorhexidine gluconate 0.12% was used as the positive control, and BHIs culture medium was used as the negative control. The tested peptide demonstrated a remarkable antimicrobial effect, inhibiting the planktonic and biofilm growth of all strains tested, even at low concentrations. Thus, the peptide Lys-a1 is an important source for potential antimicrobial agents, especially for the control and prevention of microbial biofilms, which is one of the most important factors in cariogenic processes.