Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 112846 bytes, checksum: f260bcc7fb2e9aa227782fd9e02a5c86 (MD5) Previous issue date: 2006-10-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The diversity of resistance mechanisms to antimicrobial compounds was investigated in E. coli strains isolated from poultry. All 30 isolates were resistant to ampicillin and 26 of them were resistant to at least two antibiotics. Multi-resistance profiles were confirmed, including intermediate levels. Forty percent of the strains presented four resistance markers and 93% of the isolates were resistant to tetracycline, an antibiotic commonly used in poultry farms. The β-lactamase diversity among the strains was probed against seven compounds. Among strains bearing the same resistance profile for other groups of antimicrobial drugs, it was possible to observe different β-lactamases activity against the tested substrates. This fact suggests either a pool of resistance genes or regulatory differences. The isolate that displayed confirmed activity against six of the β-lactamic antibiotics bears a large molecular mass plasmid that confers the AmpR phenotype. A fragment of this plasmid with approximately 5 kb was subcloned in the pCCR9 vector which is commonly used to detect β-lactamase genes. The amino acid deduced from nucleotide sequencing displayed 100% of identity to TEM-1, a class A serine β-lactamase. Next to the gene encoding TEM-1 was found putative transposon related to the Tn3 family, albeit with some differences in the order and direction of transcription of the genes. / A diversidade dos mecanismos de resistência a antimicrobianos foi investigada em Escherichia coli, originadas de frangos de corte. Dos 30 isolados, todos resistentes à ampicilina, 26 apresentaram mais de uma marca de resistência. Foram confirmados modelos de multirresistência, incluindo níveis intermediários de resistência. Em 40% dos casos, ocorreram quatro marcas e 93% dos isolados resistiram à ação de tetraciclina, um promotor de crescimento usual na agropecuária. A diversidade de β-lactamases entre os isolados foi demonstrada pela ação direta contra sete β-lactâmicos. Os isolados com mesmo modelo de resistência possuíam, sob mesmas condições, espectro de ação e de atividade diferentes, mostrando que há amplo pool de genes de resistência, ou diferenças regulatórias nessas bactérias. O isolado com maior espectro de ação, confirmado sobre seis β-lactâmicos, contém um plasmídeo de alta massa molecular, que confere resistência a ampicilina. Um fragmento deste plasmídeo, com aproximadamente 5 kb, foi clonado em pCCR9, vetor usado para detecção de genes de resistência a β-lactâmicos. As análises das seqüências obtidas revelaram 100 % de identidade com TEM-1, uma serina β-lactamase da classe A. Próximo ao gene codificador da TEM-1, foi encontrado um transposon putativo relacionado com os da família Tn3, porém com particularidades na ordem e direção de transcrição dos genes componentes.

Submitted by SIMONE QUINTÃO SILVA null (simoneufv@yahoo.com.br) on 2016-10-30T01:55:31Z No. of bitstreams: 1 TeseDoutSimone. formatada.pdf: 2246390 bytes, checksum: b288a3f3113eb32b94654ad3a16d2bf5 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-04T16:06:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_sq_dr_sjrp.pdf: 1772331 bytes, checksum: a34c0157ef2af5f8408f13fd3ce9368c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-04T16:06:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_sq_dr_sjrp.pdf: 1772331 bytes, checksum: a34c0157ef2af5f8408f13fd3ce9368c (MD5) Previous issue date: 2016-10-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A resistência bacteriana aos antimicrobianos é um importante problema de saúde pública. Nos últimos anos tem sido frequente o isolamento de bactérias resistentes a partir de animais de produção e alimentos de origem animal. O objetivo desse estudo é identificar em Enterococcus spp. isolados de carnes (suína, bovina e frango) e de queijo Minas Frescal, o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e a diversidade de genes de resistência aos antimicrobianos e de genes de virulência. Os resultados são comparados ao perfil observado em Enterococcus spp. isolados de pacientes internados em um hospital terciário no estado de São Paulo. Foram avaliados 102 Enterococcus spp. isolados de alimentos e 46 isolados clínicos. Entre os isolados de alimentos, 39% apresentaram resistência à tetraciclina, 32% à eritromicina, 17,5% à estreptomicina, 13% à norfloxacina, 10% ao cloranfenicol, 8% à ciprofloxacina e à fosfomicina, 6% à levofloxacina, 5,5% à quinupristina-dalfopristina, 4% à linezolida e à penicilina, 3,5% à moxifloxacina, 3% à ampicilina e 2% à gentamicina. Todos os Enterococcus spp. isolados de alimentos foram sensíveis à teicoplanina e à tigeciclina. Entre os isolados clínicos, 67,5% apresentaram resistência à ciprofloxacina, 56,5% à penicilina, 43,5% à ampicilina, 37% à estreptomicina, 24% à vancomicina e à teicoplanina, e 11% à gentamicina. Cepas multirrestentes foram detectadas entre os isolados de alimentos e de amostras clínicas. Nos Enterococcus isolados de alimentos resistentes à tetraciclina foram detectados os genes tet M, tet L, tet K e tet C. Os genes ant6-Ia e aac(6’)-Ie/aph(2”)-Ia foram detectados em cepas de alimentos e de origem clínica. Com relação aos genes de virulência, entre os Enterococcus isolados de alimentos, 48% apresentaram o gene efaA, 42% o gelE, 37,5% o ace, 15% o as, 13% o esp e 11% o cyl. Entre os isolados clínicos, 61% apresentaram o gene ace, 56,5% o efaA, 43,5% o gelE, 11% o cyl e o esp e 6,5% o as. O gene hyl não foi detectado nesse estudo. Fenotipicamente, 63,5% foram positivos para gelatinase e 45% para citolisina entre os isolados de alimentos e 55% e 44,55% para gelatinase e citolisina, respectivamente, entre os clínicos. Entre os 102 isolados de alimentos, 62 foram identificados quanto à espécie, 59,5% foram identificados como E. faecalis, 22,5% como E. faecium e 18% como E. durans. Após análise do perfil de restrição de DNA de Enterococcus por PFGE, não foi observado similaridade entre as cepas de alimentos e clínicas. Esses alimentos podem representar um risco para a saúde dos consumidores, pois podem veicular Enterococcus spp. multirresistentes via cadeia alimentar, que além de causar infecções de difícil tratamento podem atuar como reservatórios para genes de resistência e de virulência. / Bacterial resistance to antibiotics is a major public health. In recent years there has often been the isolation of resistant bacteria from production and animal food animals. The aim of this study is to identify in Enterococcus spp. isolated from meat (pork, beef and chicken) and Frescal Minas cheese, susceptibility profile to antimicrobials and the diversity of antimicrobial resistance genes and virulence genes. The results are compared to the profile observed in Enterococcus spp. isolated from patients admitted to a tertiary hospital in São Paulo. One hundread two Enterococcus spp. were isolated from food and 46 were from clinical isolates. Resistances to different classes of antimicrobials has been observed, and among the isolates of food were resistant to tetracycline (39%), erythromycin (32%), Streptomycin (17.5%), norfloxacin (13%), chloramphenicol (10%), ciprofloxacin and fosfomycin (8%), levofloxacin (6%), quinupristin-dalfopristin (5.5%), penicillin and linezolid (4%), moxifloxacin (3.5%), ampicillin (3%) and gentamicin (2%). All Enterococcus spp. isolates from foods were sensitive to teicoplanin and tigecycline. Among clinical isolates, were resistant to ciprofloxacin (67.5%), penicillin (56.5%), ampicillin (43.5%), streptomycin (37%), vancomycin and teicoplanin (24%) and gentamicin (11%). Multidrug-resistant strains were detected among isolates from food and clinical samples. In Enterococcus spp. tetracycline resistant, the genes tet M, tet L, tet K and tet C were detected. The genes ant6-la and aac(6')-Ie/aph(2")-Ia were detected in strains of food and clinical origin. Regarding the virulence genes among Enterococcus isolates from food, 48% had the gene efaA, 42% the gelE, 37.5% the ace, 15% the as, 13% the esp and 11% the cyl. Among the clinical isolates, 61% had the ace, 56.5% the efaA, 43.5% the gelE, 11% the cyl and esp, and 6,5% the as. The hyl gene was not detected in this study. Phenotypically, 63.5% were positive for gelatinase and 45% for cytolysin A isolated from food and 55% and 44.55% for gelatinase and cytolysin, respectively, among clinicals. Among the 102 isolated from foods, 62 were identified as the species, 59.5% were identified as E. faecalis, E. faecium (22.5%) and E. durans (18%). After analysis of DNA restriction profile by PFGE, similarity between the strains of food and clinical was not observed. These foods may pose a risk to the health of consumers because they may serve of source of Enterococcus spp. multiresistant, which in addition to a cause infections difficult to treat can act as reservoirs for resistance genes and virulence.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA176.pdf: 1054714 bytes, checksum: 2d3299e450871e4e4ade3ebea0deb419 (MD5) Previous issue date: 2015-07-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Staphylococcus aureus is the major causative agent of bovine mastitis, the main disease affecting dairy cattle. The use of antibiotics is highly relevant for the control of mastitis cases in the properties, and the beta-lactam antibiotics (especially penicillin) and tetracycline are commonly used in animal and human health. Therefore, study of resistance is very important. For this test were selected 90 S. aureus isolated from subclinical mastitis to the characterization of ampicillin, penicillin and tetracycline through the disk diffusion test. Phenotypic characterization of the three antibiotics was determined by the minimum inhibitory concentration using the E-Test® and production of beta-lactamase by cefinase discs. Five resistance genes, blaZ, tet(K), tet(L), tet(M), tet(O) were investigated in all samples. PCR products were sequenced to confirm the results. The resistance was observed in 71%, 77% and 72% of the samples to ampicillin, penicillin and tetracycline, respectively. The MIC90 of the three antibiotics were 2 μg/mL (ampicillin), 1 μg/mL (penicillin), 64 μg/mL (tetracycline). Eighty six percent of beta-lactamase producing samples were identified. Of the 90 samples investigated, 97% amplified blaZ, 84% tet(K), 9% tet(L) and 2% tet(O) 1% tet(M). Four samples showed together tet(L) and tet(K), one sample showed tet(K), tet(M) and tet(O) and 80 samples showed blaZ together with at least one tet gene. The results suggest high resistance rate for the three antimicrobials in the S. aureus samples and high values of MIC50 and MIC90. The blaZ and tet(K) genes investigated were widespread in the herds studied. More studies about phenotypic and molecular character of antimicrobial resistance in S. aureus should be done to provide appropriated control and therapeutic measures / Staphylococcus aureus é o principal agente causador de mastite bovina, principal doença que acomete bovinos leiteiros. O uso de antimicrobianos é de grande relevância para o controle dos casos de mastite nas propriedades, e os antimicrobianos betalactâmicos (principalmente penicilina) e tetraciclina são comumente usados em saúde animal e humana. Dessa forma, o estudo da resistência a esses princípios ativos é de grande importância. Neste trabalho, para caracterizar a resistência à ampicilina, penicilina e tetraciclina foram selecionadas através do teste de disco-difusão 90 amostras de S. aureus isoladas de mastite subclínica resistentes à penicilina ou/e ampicilina ou/e tetraciclina. A caracterização fenotípica aos três antimicrobianos foi determinada pela concentração inibitória mínima - método de E-TEST® - e produção de betalactamase através de discos de cefinase. Foram pesquisadas em todas as amostras cinco genes de resistência, blaZ, tet(K), tet(L), tet(M) e tet(O). Os produtos de PCR foram sequenciados para confirmação dos resultados. Foi observada a resistência em 71 %, 77 % e 72 % das amostras à ampicilina, penicilina e tetraciclina, respectivamente. A MIC90 dos três antimicrobianos foram 2 μg/mL (ampicilina), 1 μg/mL (penicilina), 64 μg/mL (tetraciclina). Foram identificadas 86 % de amostras produtoras de betalactamase. Do total, 97 % amplificaram blaZ, 84 % tet(K), 9 % tet(L), 2 % tet(M), 1 % tet(O). Quatro amostras apresentaram conjuntamente tet(K) e tet(L), uma amostra apresentou tet(K), tet(M) e tet(O) e 80 amostras apresentaram blaZ juntamente com pelo menos um dos genes tet estudados. Os resultados da CIM apontam para um alto índice de resistência dos isolados de S. aureus para os três antimicrobianos e altos valores de CIM50 e CIM90. Os genes blaZ e tet(K) encontram-se amplamente disseminados nos rebanhos estudados. Mais estudos sobre o caráter fenotípico e molecular da resistência aos antimicrobianos em S. aureus devem ser realizados para estabelecer medidas de controle e terapêuticas adequadas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:59:11Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_dmf_me_botfmvz.pdf: 227151 bytes, checksum: 465fea91869886c5190fbb61d8e36275 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / No presente estudo foram avaliadas carcaças de frangos convencionais (originárias de aves que recebem promotores de crescimento) e alternativos (que não recebem promotores de crescimento), com o objetivo de: a) avaliar o efeito da não utilização de tais drogas sobre a prevalência de Salmonella spp. em frangos alternativos, comparando-a com a dos convencionais; b) determinar e comparar o perfil de resistência a antimicrobianos das cepas de Salmonella spp. isoladas de ambos os tipos de frangos; c) avaliar o efeito das operações de abate sobre a contaminação das carcaças, tanto em frangos convencionais quanto nos alternativos. Foram avaliadas 50 carcaças convencionais e 48 alternativas, as quais apresentaram prevalências de Salmonella spp. de 58% e 56,3%, respectivamente, ao longo da linha de abate. Na entrada dos frangos no abatedouro, não houve diferença significativa (p > 0,05) nas prevalências entre os dois grupos testados (38% nos convencionais e 47,9% nos alternativos), sendo que ao final do processamento os convencionais apresentaram 47,9% de positividade contra 14,6% dos alternativos, diferença essa significativa (p < 0,05). S. Enteritidis foi o sorotipo predominante entre as cepas identificadas. Quanto ao perfil de resistência, nossos resultados mostraram que, quando observada, ela foi maior nas cepas oriundas dos frangos convencionais. Conclui-se que: a) a não utilização dos promotores de crescimento não levou a um aumento da prevalência de Salmonella spp. nas aves alternativas; b) as cepas oriundas de frangos alternativos revelaram uma tendência a um menor nível de resistência aos antimicrobianos testados quando comparadas às dos convencionais; c) as operações de abate, no caso das aves alternativas, foram responsáveis por uma diminuição na contaminação inicialmente observada no tocante à Salmonella spp, sendo que no caso das convencionais, pelo seu aumento. / Conventional chicken (receiving growth promoters) and alternative chickens (not receiving growth promoters) carcasses had been valuated in the present study, with the following objectives: a) to estimate the effect of no utilization of such drugs on the prevalence of Salmonella spp. in alternative chicken as compared to that of the conventional ones; b) to determine and to compare the resistance profile to antimicrobial agents of Salmonella spp. strains isolated from both types of chickens; c) to valuate the effect of the slaughter operations on the carcasses contamination in conventional chickens and in alternative ones. Fifty conventional and 48 alternative carcasses had been valuated, with Salmonella spp. prevalences of 58% and 56.3%, respectively, along the slaughter line. At the entry of the chickens in the slaughter-house there was no significant difference (p > 0.05) in the prevalences between the two tested groups (38% in the conventional and 47,9% in the alternative), at the end of the processing the conventional presenting 47,9% of positiveness compared to 14,6% of the alternative, this difference being significant (p < 0,05). S. Enteritidis was the predominant serotype among the identified strains. In relation to the resistance profile, our results showed that when it had been observed, it was larger in the strains originated from the conventional chicken. It had been concluded that: a) the removal of the growth promoters did not produce an increase in the Salmonella spp. prevalence in the alternative chicken; b) the strains originated from alternative chicken showed a trend toward a smaller resistance level to the tested antimicrobial agents compared to those from the conventional ones: c) the slaughter operations in the case of the alternative chickens were responsible for a decrease in the contamination initially observed regarding Salmonella spp. and for its increase in the case of the conventional.

Orientador: Daniela Leal Zandim-Barcelos / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Flávia Aparecida Chaves Furlaneto Messora / Resumo: Os peptídeos antimicrobianos são componentes da resposta imune inata, que apresentam propriedades imunomodulatórias adjuntas às propriedades antimicrobianas e, portanto, podem ter um papel chave na susceptibilidade ou resistência a doenças na cavidade oral.O propósito deste estudo foi investigar a influência do tabagismo sobre os níveis dos peptídeos antimicrobianos, alfa-defensinas (HNP 1-3) e LL-37, no fluido crevicular gengival de pacientes com periodontite crônica, e avaliar a relação destes peptídeos com saúde e doença periodontal. Um total de 40 pacientes com periodontite crônica, sendo 20 fumantes e 20 não fumantes, e 20 pacientes periodontalmente saudáveis foram incluídos no estudo. Os parâmetros clínicos avaliados foram: profundidade de sondagem, sangramento à sondagem, nível clínico de inserção, Índice de placa visível e Índice de sangramento gengival. Amostras de fluido crevicular gengival foram coletadas com tiras de papel absorvente e o volume mensurado com Periotron. Nos pacientes com periodontite crônica, foram coletadas amostras de sítios sadios e doentes. A quantificação da LL-37 e HNP 1-3 foi realizada pela técnica ELISA sanduíche.Os níveis de LL-37 e HNP 1-3 foram menores tanto nos sítios sadios como nos sítios doentes de pacientes fumantes em comparação com os não fumantes, sendo essas diferenças significativas exceto para os níveis de LL-37 nos sítios sadios (p<0,05). Os sítios doentes dos pacientes fumantes e não fumantes com periodontite crônica mostrar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Antimicrobial peptides are components of the innate immune response that have immunomodulatory properties adjuncts to the antimicrobial properties and, therefore, may have a key role in susceptibility or resistance to diseases in the oral cavity. The purpose of this study was to investigate the influence of smoking on the levels of antimicrobial peptides, alpha-defensins (HNP 1-3) and LL-37 in the gingival crevicular fluid of patients with chronic periodontitis, and evaluate the relationship of these peptides with health and periodontal disease. A total of 40 patients with chronic periodontitis, 20 smokers and 20 non-smokers, and 20 periodontally healthy patients were included in the study. The clinical parameters evaluated were probing depth, bleeding on probing, clinical attachment level, visible plaque index and gingival bleeding index. Samples of gingival crevicular fluid were collected with absorbent paper strips and the volume measured on Periotron. In patients with chronic periodontitis, samples of healthy and diseased sites were collected. The quantification of LL-37 and HNP 1-3 was carried out by sandwich ELISA tecnique. The levels of LL-37 and HNP 1-3 were lower both in healthy sites such as diseased sites in smokers compared to non-smokers, those with significant differences except for the LL-37 levels in healthy sites (p<0.05). Diseased sites of smokers and non-smokers with chronic periodontitis patients showed higher levels of LL-37 and lower levels of HNP 1-3 th... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Reinaldo Marchetto / Banca: Carla Raquel Fontana / Banca: Ilana Lopes Baratella da Cunha Camargo / Banca: Kátia Regina Perez / Resumo: Versões diméricas dos peptídeos antimicrobianos (PAMs) Aureína 1.2 (AU) e Magainina 2 (MG2) foram sintetizadas e avaliadas em relação à influência da dimerização e da posição do linker (N- ou C- terminal) na estrutura e atividade biológica. Em solução aquosa, o peptídeo AU não apresentou estrutura secundária definida. Por sua vez, os dímeros (AU)2K e E(AU)2 apresentaram uma estrutura helicoidal. Em presença de miméticos de membrana, os três peptídeos adquiriram uma estrutura tipo α-hélice. Estudos preliminares de atividade hemolítica e vazamento de carboxifluoresceína mostraram que a atividade do peptídeo AU é dependente da concentração. No entanto, para as versões diméricas este efeito foi menos pronunciado. Isto sugeriu que a dimerização muda o mecanismo de ação, o que logo foi confirmado por diferentes técnicas biofísicas (microscopia de contraste, calorimetria de titulação isotérmica, dicroísmo circular e vazamento de carboxifluoresceína). Em relação à atividade antimicrobiana, as versões diméricas tiveram uma diminuição da atividade contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Càndida albicans quando comparadas com o monômero. Entretanto, os dímeros apresentaram a capacidade de agregar células de C. albicans. Empregando técnicas espectroscópicas (dicroísmo circular e fluorescência), foi evidenciado que o dímero (AU)2K interage com mananos, o principal componente da parede celular de C. albicans. Esta interação não foi observada para o monômero. Em função destes resultados, foi proposto um modelo pelo qual o dímero interage com os mananos, levando à agregação das células de levedura. Em um segundo bloco o peptídeo MG2 foi estudado. Em solução aquosa, o peptídeo MG2 e as duas versões diméricas não apresentaram estrutura secundária definida. Por sua vez, em presença de miméticos de membrana, os três peptídeos adquiriram... / Abstract: Dimeric versions of the antimicrobial peptides (AMPs) Aurein 1.2 (AU) and Magainin 2 (MG2) were synthesized and evaluated for the influence of dimerization and the position of the linker (N- or C-terminal) in the structure and biological activity. In aqueous solution, AU showed no defined secondary structure. On the other hand, the dimers (AU)2K and E(AU)2 showed a helical structure. In the presence of membrane mimetics, the three peptides acquired a α-helix structure. Preliminary studies of hemolytic activity and leakage of carboxyfluorescein showed that the activity of AU is concentration dependent. However, this effect was less pronounced for the dimeric versions. This suggested that dimerization would change the mechanism of action, a fact that was confirmed by different biophysical techniques (contrast microscopy, isothermal titration calorimetry, circular dichroism and leakage of carboxyfluorescein). Regarding antimicrobial activity, dimeric versions had a marked decrease in activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Càndida albicans when compared to the monomer. However, dimers showed the ability to aggregate cells of Candida albicans. Using spectroscopic techniques (circular dichroism and fluorescence), it was shown that (AU)2K interacts with mannans molecules, the main component of the cell wall of C. albicans. This interaction was not observed for the monomer. Based on these results, a model has been proposed by which the dimer interacts with mannans, leading to aggregation of the yeast cells. In a second part, MG2 was studied. In aqueous solution MG2 and the two dimeric versions showed no defined secondary structure. However, in the presence of membrane mimetics, all three peptides have acquired helical structure. The results showed that the N-terminal dimerization did not affect the biological activity of the peptide MG2. On the other hand, the peptide (MG2)2K showed... / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os enterococos estão amplamente distribuídos no ambiente. Nos seres humanos, compõem a microbiota do trato gastrintestinal, da cavidade oral e do trato geniturinário. Nas últimas décadas, esses microrganismos se tornaram importantes agentes etiológicos de infecções hospitalares. Uma característica marcante desses microrganismos é a resistência intrínseca a vários antimicrobianos utilizados habitualmente no tratamento de infecções, além de alguns fatores que tem sido relacionado à virulência de enterococos. Este estudo investigou a presença de enterococos em amostras de infecção e colonização de pacientes hospitalizados, profissionais de saúde, dietas hospitalares e manipuladores de alimentos. Foram analisadas 276 amostras de colonização, de quadros de infecção, dietas orais e manipuladores de alimento. Não foram recuperadas amostras dos profissionais de saúde. Todas as amostras foram submetidas a testes convencionais de caracterização do gênero e espécies. Testes de susceptibilidade aos antimicrobianos foram empregados pelo método de disco difusão, além da CIM para vancomicina e teicoplanina. A produção de biofilme e a expressão da gelatinase também foram avaliadas. Os genes de resistência a gentamicina, estreptomicina e vancomicina e os genes de virulência cylA, esp e fsr foram pesquisados pela técnica de PCR. O polimorfismo genético foi determinado por PFGE. A espécie E. faecalis foi a prevalente nas amostras isoladas de colonização e infecção (42,2% e 81,9%, respectivamente). E. casseliflavus (58,9%) foi a mais freqüente dentre as amostras das dietas hospitalares e E. faecium (46,7%) de manipuladores. Dentre as amostras de colonização as maiores taxas de resistência foram observadas para eritromicina (76,3%) e ciprofloxacina (53,9%). Dentre as amostras de infecção, >70% foram resistentes a eritromicina, ciprofloxacina e tetraciclina. Resistência a níveis elevados de gentamcina (HLR-GE) e estreptomicina (HLR-ST) foi detectada em 24,6% e 20,4% das amostras, respectivamente, e todas foram portadoras dos respectivos genes. A maioria das amostras de colonização (52,6%) e infecção (55,7%) foram multirresistentes. A taxa para resistência a níveis elevados de vancomicina foi de 5,2% e todas eram portadoras do gene vanA. Em relação a formação de biofilme, 70,2% foram produtoras, com uma maior freqüência dentre as de infecção. A expressão de gelatinase foi detectada em 28,9% e 44,3% das amostras de colonização e infecção, respectivamente. Nenhuma das amostras isoladas das dietas hospitalares e de manipuladores expressou gelatinase. Nas amostras pertencentes as espécies E. faecalis e E. faecium (n=109) 16,5%, 51,4% e 48,6% apresentaram produtos de amplificação referentes aos genes cylA, esp e fsr, respectivamente. A análise do polimorfismo genético revelou uma extensa diversidade dentre as amostras pertencentes as espécies E. faecalis e E. faecium, não acarretando um perfil eletroforético prevalente. Entretanto, foi observado um perfil único dentre as amostras de E. gallinarum resistentes a vancomicina (vanA). Este estudo mostrou que amostras de enterococos isoladas de diferentes fontes, não só de quadros infecciosos, podem representar um risco para a população, apontando para uma maior reflexão quanto ao papel desses microrganismos nas infecções humanas, particularmente no ambiente hospitalar. / Enterococci are widespread in the nature. In humans, as in the other animals, gastrointestinal tract, the oral cavity and the genitourinary tract. In recent decades, these microorganisms have emerged as one important of the most pathogen associated with nosocomial infections. They shows intrinsic resistance to several antimicrobial commonly used for treatment of the infections. Several potential virulence factors have been identified in enterococci, but none has been established as having a major contribution to virulence in humans, as well as some factors that has been linked to the virulence of enterococci. We analyzed 276 isolates obtained from colonization, infection, hospital diets and food handlers. The isolates were identified by conventional physiological tests for characterization at genus and species level. Antimicrobial susceptibilities were determined by the disk diffusion test method. CIM to vancomycin and teicoplanin were avayable by E-test. The biofilm production and the expression of gelatinase were also evaluated. The genes for resistance to gentamicin, vancomycin, streptomycin resistance genes as code as determinants virulence cylA, esp and fsr were investigated by PCR. The genetic polymorphism was determined by PFGE. E. faecalis was prevalent species recovered from colonization and infection (42.2% and 81.9%, respectively). E. casseliflavus (58.9%) was frequent species among the hospital diets samples. On the other hand, E. faecium (46.7%) was prevalent in food handlers. Among the colonization isolates the highest rates of resistance were observed to erythromycin (76.3%) and ciprofloxacin (53.9%). Although, >70% of infection isolates were resistant to erythromycin, tetracycline and ciprofloxacin. High level resistance to gentamicin (HLR-GE) and streptomycin (HLR-ST) were detected in 24.6% and 20.4% of the samples, respectively, and these isolates harboured the genes aac(6)-Ie-aph(2)-Ia and aph(2)-Ic. Most strains of colonization (52.6%) and infection (55.7%) were multidrug resistant. High level resistance to vancomycin were detected in 5.2% of isolates harbouring vanA gene. 70.2% of the isolates were biofilm producers, were greater frequency among of infection. The expression of gelatinase was detected in 28.9% and 44.3% of colonization and infection isolates, respectively. None of the isolates recovered from the hospital diets and food handlers expressed gelatinase. In E. faecalis and E. faecium strains (n = 109) 16.5%, 51.4% and 48.6% showed amplification products related cylA, esp and fsr genes, respectively. The analysis of genetic polymorphism showed a wide diversity among the isolates belonging to the E. faecalis and E. faecium species. None prevalent profile was observed. The E. gallinarum vanc1/vanA isolates showed identical PFGE profiles. This study showed that enterococci strains isolated from diferents sources, also represents a potential risk for population, particularly those in hospital environment.

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Considerando a elevada frequ?ncia de atendimentos de c?es com otite externa bacteriana, objetivou-se identificar a frequ?ncia etiol?gica da otopatia e tra?ar o perfil de resist?ncia dos Staphylococcus Meticilina Resistentes (SMR) e enterobact?rias produtoras de Beta-Lactamases de Espectro Estendido (ESBL) em pacientes ambulatoriais e de internamento. As amostras foram submetidas a isolamento prim?rio, testes de susceptibilidade ? antimicrobianos e de resist?ncia bacteriana. Para os Staphylococcus sp. aplicou-se o Teste D (Disk Test) e o teste de Resist?ncia ? Meticilina (Met-25). Nas cepas positivas para o Met-25 foi feita Rea??o em Cadeia da Polimerase (PCR) para detec??o do gene mecA. Para estirpes positivas na PCR foi determinada a Concentra??o Bactericida M?nima (CBM) do gluconato de clorexidina. Os grupos bacterianos isolados das 140 amostras coletadas foram: Staphylococcus sp. (122 ? 49,38%), Pseudomonas sp. (22 ? 8,91%), enterobact?rias (19 ? 7,69%), Enterococcus sp. (17 ? 6,88%) e Acinetobacter sp. (12 ? 4,86%). Foram isoladas 14 cepas de SMR (11,47%) e todas continham o gene mecA. Observou-se que 14 Staphylococcus sp. foram Teste D positivo. Para os Staphylococcus coagulase positiva (SCP) a CBM foi de 500.000?g/mL (0,5%) enquanto que para os Staphylococcus coagulase negativa (SCN) o valor da CBM foi de 62.500?g/mL (0,0625%). Detectou-se 3 cepas de enterobact?rias ESBL. Os antimicrobianos mais efetivos para Staphylococcus sp. foram: Linezolida (100%), Rifampicina (94,26%) e Cloranfenicol (92,62%). Para Pseudomonas sp.: Cefepime (100%), Imipenem (100%) e Meropenem (100%). Para as enterobact?rias: Ertapenem (100%), Imipenem (100%) e Cefotaxima (84,21%). Para Enterococcus sp.: Cloranfenicol (100%), Linezolida (94,12%) e Vancomicina (88,24%). Para Acinetobacter sp.: Imipenem (100%), Meropenem (100%) e Ticarcilina com Clavulanato (91,67%). Apesar do gene mecA e de enterobact?rias produtoras de ESBL terem baixa ocorr?ncia neste estudo, existe a necessidade de um monitoramento constante em cepas isoladas de animais dom?sticos. Cultura bacteriol?gica e os testes de suscetibilidade aos agentes antimicrobianos s?o de grande import?ncia na rotina cl?nica veterin?ria para garantir o sucesso do tratamento de infec??es otol?gicas caninas. / The canine external otitis is a relevant disease regarding veterinary clinic. Considering the high frequency of treatment of dogs with external bacteria otitis, this research aims to identify the etiological frequency of otopathy and trace the resistance profile of the Methicillin Resistant Staphylococcus (MRS) and enterobacteria that produce Extended Spectrum Beta-Lactamase (ESBL) in outpatients and internment patients. The samples were submitted to primary isolation, tests of antimicrobial susceptibility and bacterial resistance. For the Staphylococcus sp. the Disk Test was applied along with the resistance test to Methicillin (Met-25). In the positive strains for Met-25, a Polimerase Chain Reaction (PCR) was applied to detect the mecA gene. For the PCR positive strains, a Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of chlorhexidine gluconate was determined. The isolated bacterial groups of the 140 samples collected were: Staphylococcus sp. (122 ? 49.38%), Pseudomonas sp. (22 ? 8.91%), enterobacteria (19 ? 7.69%), Enterococcus sp. (17 ? 6.88%) and Acinetobacter sp. (12 ? 4.86%). 14 MRS strains (11.47%) were observed and all off them had the mecA gene. 14 Staphylococcus sp. were Disk Test positive. Concerning the positive Staphylococcus coagulase, the MBC was 500.00?g/mL (0.5%) whereas for the negative Staphylococcus coagulase the MBC value was 62.500?g/mL (0.0625%). 3 ESBL enterobacteria strains were detected. The more effective antimicrobial for the Staphylococcus sp. were: Linezolid (100%), Rifampicin (94.26%) and Chloramphenicol (92.62%). Regarding the Pseudomonas sp.: Cefepime (100%), Imipenem (100%) and Meropenem (100%). Regarding the enterobacteria: Ertapenem (100%), Imipenem (100%) and Cefotaxime (84.21%). Regarding the Enterococcus sp.: Chloramphenicol (100%), Linezolid (94.12%) and Vancomycin (88.24%). Regarding the Acinetobacter sp.: Imipenem (100%), Meropenem (100%) and Ticarcillin with Clavulanate (91.67%). Although the mecA gene and the enterobacteria that produce ESBL are briefly presented in this research, there is a need for constant monitoring of isolated strains in domestic animals. The bacteriological growth and the susceptibility tests in the antimicrobial agents are of great importance in the veterinary clinic routine in order to insure the success in treating canine otological infections.

Pseudomonas aeruginosa is a gram negative bacillus with cosmopolitan distribution. Considered opportunistic pathogen, rarely causes disease in healthy persons. Has naturals and acquireds mechanisms of resistance, doing the clinical handling to be hard. The resistance of multiple drugs have been related in several studies becoming a problem in the hospitals. The proposal of this study was to know the epidemiology of occurrence and antimicrobial resistance of clinical samples of Pseudomonas aeruginosa at a teaching hospital in the countryside of Brazil.Treated from the retrospective analytic observation study, with cases series, P.aeruginosas were studied from the several sites from patients hospitalized in the Clinical Hospital from the Uberlandia`s University Federal (HC-UFU) between 01 April 2010 and March 2011. Positive cultures and patients related to them were identified by searching records of the Clinical Analysis Laboratory of the Hospital de Clinicas, Federal University of Uberlândia. Patient data were obtained from medical records and from the hospital system, \"Hospital Information Service\". It was considered only the first strain from the each patient. The last strain from the patients who isolated more than one strain was used to evaluate the resistance development, even in different sites. Used to statistical analysis the X squared test, calculated in Epi Info program version 3.5.2 and was considered p value of less than 0.05 like statistically significant. 251 patients were assessed. Mean age was 40 years old, male sex prevailed (67.7%). The most common sites were respiratory tract (70; 27.7%), blood/vascular catheter (55; 22.0%) and urine (54; 21.5%). One hundred and twenty (47.8%) patients died, 128 (51.0%) were discharged, two (0.8%) were transferred to another hospital and one (0.4%) was chronically hospitalized until the end of study. Eighty-one (32.2%) patients had more than one positive culture. Except for colistin (sensitivity 100.0%), amikacin was the antibiotic with a higher sensitivity percentage (86.1%).Pseudomonas aeruginosa is a bacterium mainly isolated in the airway, blood/vascular catheter and urine, especially in patients hospitalized for a long time. Almost half of the patients progressed to death. In the hospital studied, there was no colistin-resistant strain, but there were strains exclusively sensitive to this antimicrobial. Other strains were mainly sensitive to amikacin. / Pseudomonas aeruginosa é um bacilo gram negativo de distribuição cosmopolita. Considerado patógeno oportunista, raramente causa infecções em indivíduos saudáveis. Possui mecanismos naturais e adquiridos de resistência, que tornam o manejo clínico difícil. A resistência a múltiplas drogas tem sido relatada em vários estudos, tornando-se um problema nos hospitais. Este estudo teve como objetivo o conhecimento da epidemiologia da ocorrência e a resistência de P.aeruginosa aos antimicrobianos em um hospital de ensino do interior do Brasil. Tratou-se de um estudo retrospectivo, observacional analítico do tipo série de casos, no qual foram avaliadas P. aeruginosas de diversos sítios de pacientes internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU) entre 01 de abril de 2010 a 31 de março de 2011. As culturas positivas e os pacientes a elas relacionados foram identificados por busca nos registros do Laboratório de Análise Clínicas do HC-UFU. Os dados dos pacientes foram obtidos dos prontuários e do sistema Serviço de Informação Hospitalar do referido hospital. Considerou-se apenas a primeira amostra de cada paciente. A última amostra daqueles dos quais se isolou mais de uma amostra foi utilizada para avaliar o desenvolvimento de resistência, mesmo de diferentes sítios. Utilizou-se para análise estatística teste Chi-quadrado, efetuado no programa Epi Info versão 3.5.2 e considerou o valor de p<0,05 como indicação de significância estatística. Foram avaliados 251 pacientes. A média de idade foi de 40 anos, predominaram aqueles do sexo masculino (67,7%). Os sítios mais comuns foram: trato respiratório (70; 27,7%), sangue/cateter vascular (55; 22,0%) e urina (54; 21,5%). Cento e vinte (47,8%) pacientes faleceram, 128 (51,0%) receberam alta, 2 (0,8%) foram transferidos para outro hospital e 1 (0,4%) cronicamente hospitalizado assim permaneceu até o final do estudo. Oitenta e um (32,2%) pacientes tiveram mais de uma cultura positiva. Exceção a colistina (sensibilidade de 100,0%), amicacina foi o antibiótico com o maior percentual de sensibilidade (86,1%). Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria isolada principalmente das vias aéreas, sangue/cateter vascular e urina, sobretudo de pacientes hospitalizados por longo tempo. Quase a metade evolui para o óbito. No hospital estudado não existe cepa resistente à colistina, mas sim sensíveis apenas a este antimicrobiano. Entre os demais, a maior sensibilidade é à amicacina. / Mestre em Ciências da Saúde

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Enterococcus tem emergindo como um dos mais importantes patógenos em infecções relacionadas à assistência à saúde no mundo. Estes microrganismos apresentam habilidade de adquirir genes de resistência a vários antimicrobianos, incluíndo à vancomicina, além de possuir diversos fatores associados à virulência, que contribuem sobremaneira para a sua permanência no hospedeiro, facilitando sua disseminação, particularmente, no ambiente hospitalar. Os objetivos deste estudo foram caracterizar, por testes fenotípicos e genotípicos, amostras de Enterococcus isoladas de quadros infecciosos em pacientes atendidos em quatro instituições de saúde localizadas na cidade do Natal, RN, no período de setembro de 2010 a junho de 2011. As espécies de Enterococcus foram caracterizadas por testes fisiológicos convencionais e por reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex, utilizando oligonucleotídeos específicos para caracterização do gênero e espécies. O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos foi avaliado por testes de difusão em ágar. Os valores de concentração inibitória mínima (CIM) para vancomicina, teicoplanina e linezolida foram determinados pelo emprego do teste E; e o genótipo de resistência à vancomicina foi analisado por PCR. Genes associados à virulência (asa1, cylA, esp, gelE e hyl) foram detectados por ensaios de PCR multiplex. O polimorfismo genético das amostras bacterianas foi avaliado por metodologia de eletroforese em campo pulsado (PFGE), com a utilização da enzima SmaI. Foram obtidas 117 amostras, a partir de quadros infecciosos em 116 pacientes. Os resultados revelaram que a espécie E. faecalis foi a prevalente (91,4%). Os testes de susceptibilidade revelaram que as taxas de resistência mais elevadas estiveram associadas à tetraciclina (58,2%) e a níveis elevados de estreptomicina (36,7%). A resistência à vancomicina foi detectada em uma amostra de E. faecium, portadora do genótipo vanA, correspondendo ao primeiro isolamento de amostra com essa característica de resistência no RN. Esta amostra foi isolada em um caso de co-infecção com E. faecalis sensível à vancomicina. Adicionalmente, susceptibilidade intermediária a linezolida foi identificada em três amostras de E. faecalis. Dentre os determinantes de virulência identificados, gelE foi o prevalente (83,8%). De acordo com as espécies E. faecalis o perfil mais detectado foi gelE + esp (31,6%), na espécie E. faecium foi o perfil esp (28,6%) e a única amostra de E. gallinarum apresentou dois determinantes de virulência (asa1 + cylA). O gene hyl não foi identificado em nenhuma das amostras. A análise do polimorfismo genético das amostras por PFGE evidenciou uma elevada policlonalidade. Diante das características de resistência e de virulência observadas e da sinalização da emergência de mecanismos de resistência importantes no Estado do RN, este estudo chama atenção para a necessidade de rastreamento, particularmente entre portadores sadios, e estabelecimento de políticas de controle da disseminação dessas amostras nas instituições de saúde, mesmo em regiões onde tais características ainda sejam pouco frequentes. / Enterococcus has emerged worldwide as one of the most important pathogens related to health care. They have ability to acquire resistance genes, including vancomycin, and have several virulence-associated factors, which contribute greatly to their permanence in the host, facilitating its dissemination, particularly in the hospital environment. The aim of this study was to characterize, by phenotypic and genotypic tests, strains of Enterococcus isolated from infections occurred in patients enrolled in four health-care institutions located in the city of Natal, in the period September 2010 to June 2011. Enterococcus species were characterized by conventional physiological tests and polymerase chain reaction (PCR) multiplex, using specific primers for the characterization at genus and species level. The antimicrobial susceptibility profiles were evaluated by agar diffusion testing. MIC values for vancomycin, teicoplanin and linezolid were determined by E-test, and the vancomycin resistance genotype was analyzed by PCR. Virulence (asa1, cylA, esp, gelE and hyl) were detected by multiplex PCR assays. The genetic polymorphism was evaluated by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) using the SmaI. 117 samples were obtained from 116 patients. The results revealed that the species E. faecalis was prevalent (91.4%). The susceptibility testing revealed that the highest resistance rates were associated with tetracycline (58.2%) and high-levels of streptomycin (36.7%). The resistance to vancomycin was detected in one isolate of E. faecium carrying the vanA genotype, corresponding to the first detection of this resistance trait in RN State. This sample was isolated from a case of co-infection with E. faecalis susceptible to vancomycin. Additionally, intermediate resistance to linezolid was found in three isolates of E. faecalis. Among the virulence encoding genes, gelE was the prevalent (83.8%). According to the species, the prevalent genotype among E. faecalis isolates was the concomitant presence of esp and gelE (31.6%). While in E. faecium isolates the presence of esp (28.6%) was prevalent. E. gallinarum isolate harbored both asa1 and cylA. The hyl gene was not detected. Analysis of genetic polymorphism of the strains by PFGE showed a high polyclonality. Given the characteristics of resistance and virulence observed in this study and the emergence of vancomycin-resistance, this study calls the attention to the need for screening, particularly among healthy carriers, and establishing policies to control the spread of these strains in health institutions, even in areas where such features are still uncommon.