Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-02T18:29:34Z No. of bitstreams: 1 leticiastephantavares.pdf: 3190443 bytes, checksum: 26aa58db0ef5c5e3bfe0caaaf2d8671e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-03T15:35:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leticiastephantavares.pdf: 3190443 bytes, checksum: 26aa58db0ef5c5e3bfe0caaaf2d8671e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-03T15:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leticiastephantavares.pdf: 3190443 bytes, checksum: 26aa58db0ef5c5e3bfe0caaaf2d8671e (MD5) Previous issue date: 2015-04-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso incorreto de antibióticos vem se tornando, nos últimos anos, um grande problema de acordo Organização Mundial da Saúde, uma vez que tem aumentado o número de microrganismos resistentes aos medicamentos mais frequentemente utilizados. Em contrapartida a este problema de saúde pública, novos antibióticos com diferentes vias de ação têm sido pesquisados. Muitos destes antimicrobianos têm sido descobertos a partir da primeira linha de defesa de vegetais e de animais. Estas moléculas são denominadas Peptídeos Antimicrobianos (AMPs). No intuito de encontrar novos compostos com atividade antimicrobiana foram desenvolvidos 3 peptídeos com ação bactericida a partir do transcriptoma de Lippia rotundifolia e L. alba. O RNA normalizado foi sequenciado utilizando-se a plataforma 454 GS e a partir do mesmo foram gerados e modelados in silico peptídeos com estrutura e ação semelhantes a AMPs. Em seguida os peptídeos foram sintetizados e sua atividade validada por testes antimicrobianos. Os peptídeos Lalb1 e Lrot3 apresentaram resultados promissores e foram remodelados a partir de um desenho racional visando obter a melhor estrutura e atividade dos mesmos. Os peptídeos L.rot3.5 e L.rot3.6 apresentaram os resultados mais promissores contra os patógenos testados. Os resultados aqui demonstrados sugerem que o uso de transcriptomas é uma importante ferramenta para a descoberta de novos AMPs com ação contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. / Misuse of antibiotics has become, in recent years, worldwide problem according to the World Health Organization, since the number of resistant microorganisms for most commonly used drugs has increased. In contrast to this public health problem, new antibiotics with different courses of action have been researched. Many of these antibiotics have been discovered from the first line of plant and animal defense. This is a group of molecules called Antimicrobial Peptides (AMPs). In the present work three antimicrobial peptides showing bactericidal activity were developed from the transcriptome of Lippia rotundifolia and L. alba. The normalized RNA was sequenced in 454 GS platform and the RNA library was used for in silico searching and modeling peptides showing similar structure and action to AMP. The peptides were synthesized and their activity was validated by antimicrobial tests. The L.alb1 and L.rot3 peptides showed promising results and were modelled again by the use of rational design methodology to inbreed structure and activity. The L.rot3.5 and L.rot3.6 peptides showed the most promising results against the tested pathogens. The results reported here demonstrated that the discovery of new AMPs from transcriptome against Gram-positive and Gram-negative bacteria is an important tool for this purpose.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-29T12:36:04Z No. of bitstreams: 1 sarasalomaosalles.pdf: 1082471 bytes, checksum: d6da8553ca94e46e9009c917347d9549 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-07-05T14:46:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sarasalomaosalles.pdf: 1082471 bytes, checksum: d6da8553ca94e46e9009c917347d9549 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T14:46:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sarasalomaosalles.pdf: 1082471 bytes, checksum: d6da8553ca94e46e9009c917347d9549 (MD5) Previous issue date: 2012-05-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A melhoria da qualidade da alimentação pode desempenhar efeitos fisiológicos benéficos e reduzir o risco a certas doenças. O leite contribui para a ingestão recomendada de nutrientes e promove a saúde através de seus componentes biologicamente ativos que a ele agregam inúmeras funcionalidades além da nutrição. A busca por novos antibióticos de amplo espectro de ação tem aumentado nas últimas décadas devido ao número crescente de bactérias resistentes aos antibióticos convencionais. Neste sentido, as proteínas do leite bovino, após fragmentação, podem ser promissoras fontes de peptídeos antimicrobianos (PAMs), que ficam inativos quando internalizados em uma sequência protéica maior e podem ser liberados a partir de enzimas digestivas durante o trânsito gastrointestinal. Neste trabalho, sequências protéicas provenientes do leite foram obtidas em banco de dados e sumariamente clivadas in silico por enzimas gastrointestinais (pepsina, tripsina e quimotripsina). Esta clivagem virtual disponibilizou inúmeros peptídeos que foram analisados e selecionados com relação a inúmeras características inerentes à AMPs, tais como tamanho, carga, composição, hidrofobicidade, momento hidrofóbico e estruturação. Cinco peptídeos (lactof01, lactof02, A_lacto01, serumA01 e serumA02) foram selecionados e tiveram sua estrutura tridimensional construída teoricamente por meio de modelagem molecular por homologia sendo estas validadas através de servidores web. Estes peptídeos foram sintetizados manualmente e testados in vitro contra microrganismos Gram-positivos (Staphylococcus aureus) e Gram-negativos (Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae). Os peptídeos exibiram baixa atividade antimicrobiana. Entretanto foi verificado que lactof02 foi o mais ativo contra Gram-negativas e A_lact01 foi o mais ativo contra Gram-positivas. Os ensaios hemolíticos indicaram que os peptídeos apresentaram atividade hemolítica variável. Através da análise dos testes in vitro foi possível verificar que a hidrofobicidade global e intrínseca dos peptídeos pode ter sido determinante na modulação da atividade antimicrobiana e hemolítica. / The nutrition quality improvement may play beneficial physiological effects and also reduce the risk of certain diseases. Milk contributes to the recommended nutrients intake and could promote health through its biologically active components, adding many features to nutrition. Otherwise, the search for a new broad-spectrum antibiotic action has increased in last decades due to to the increased number of bacteria resistant to conventional antibiotics. In this view, bovine milk proteins are promising antimicrobial peptides (AMPs) sources, which are inactive when are located inside of a large protein sequence and could be released by digestive enzymes during gastrointestinal transit. Here, those peptide sequences were obtained from free databases and summarily cleaved by gastrointestinal enzymes (pepsin, trypsin and chymotrypsin). This virtual cleavage provided a wide number of peptides that were analyzed and selected according to the inherent AMPs properties, such as size, charge, composition, hydrophobicity, hydrophobic moment and structuring. Five peptides (lactof01, lactof02, A_lacto01, serumA01 e serumA02) were selected, being their three-dimensional struture construted by homology modeling and validated through web servers. These peptides were synthesized and in vitro tested against Gram-positives (Staphylococcus aureus) and Gram-negatives (Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae) microorganims. The peptides exhibited low antimicrobial activity. Nevertheless it was found that lactof02 was the most active against Gramnegatives and A_lact01 was the most active against Gram-positives. The hemolytic assays indicated that the peptides showed variable hemolytic activity. Through in vitro analisys of tests it was possible to verify that global and intrinsic peptides hydrophobicity seems to be crucial for modulation of antimicrobial and hemolytic activities.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-10-02T14:48:12Z No. of bitstreams: 1 marianasilvalopesneves.pdf: 523366 bytes, checksum: 2c33e978d12652cf1b17217fe3509198 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-10-09T19:44:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marianasilvalopesneves.pdf: 523366 bytes, checksum: 2c33e978d12652cf1b17217fe3509198 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T19:44:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marianasilvalopesneves.pdf: 523366 bytes, checksum: 2c33e978d12652cf1b17217fe3509198 (MD5) Previous issue date: 2013-04-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A prata é conhecida por sua atividade antibacteriana e tem se mostrado eficiente como alternativa no contexto da resistência bacteriana a drogas, sobretudo na forma de nanopartículas (AgNPs). Nossos objetivos foram a avaliação da susceptibilidade de bactérias representativas contra AgNPs e pesquisa de efeito sinérgico ou antagônico quando associadas a quitosana (QIT) e antimicrobianos de uso terapêutico humano. Foram utilizadas oito linhagens bacterianas de referência, representativas de: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, S. epidermides e Enterococcus faecalis. O perfil de susceptibilidade foi determinado através do método de microdiluição em caldo, de acordo com as recomendações do CLSI. A concentração inibitória mínima (CIM90) das AgNPs para as amostras testadas foi de 64μg/mL, enquanto que para a combinação AgNPs-QIT foi de 16μg/mL. Considerando-se atividade antimicrobiana somente da QIT, a CIM90 foi de 16 μg/mL. Entre os antimicrobianos testados (meropenem, amicacina, gentamicina, levofloxacina, rifampicina, sulfametoxazol-trimetropim, tetraciclina, e oxacilina e vancomicina, estes apenas para Gram positivos), apesar de a CIM para cada linhagem bacteriana estar de acordo com os valores determinados pelo CLSI observou-se diminuição significativa para todas as drogas testadas quando combinadas com AgNPs-QIT. De modo geral, para todas as espécies bacterianas avaliadas, a associação de AgNPs com QIT ou drogas antimicrobianas apresentaram grande potencial inibitório que pode estar relacionado a estabilidade das AgNPs associadas ao polímero ou a interação positiva das nanopartículas com os antimicrobianos. O ensaio de Checkerboard foi realizado para estabelecer os efeitos sinérgicos ou antagônicos em cada combinação. A possibilidade da interação das AgNPs e da QIT com antimicrobianos já existentes é altamente relevante e reforça as recomendações da literatura acerca da reformulação de uso de antimicrobianos tradicionais, além da pesquisa de novas drogas e estratégias para sobrepujar o crescente fenômeno da resistência bacteriana aos antimicrobianos. / Silver is known for its antibacterial activity and has been shown to be effective as a potential alternative in the context of bacterial resistance to drugs, particularly in the form of nanoparticles (AgNPs). Our objectives were to evaluate the susceptibility of bacteria against AgNPs and representative survey of synergistic or antagonistic when combined with chitosan (QIT) and antimicrobials for human therapeutic use. A total of eight reference strains were evaluated of Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, S. epidermidis and Enterococcus faecalis. The susceptibility patterns were determined by broth microdilution method, according to the CLSI guidelines. The minimum inhibitory concentration (MIC90) of AgNPS to the samples tested was 64μg/mL, while for the combination AgNPs-QIT was 16μg/mL. Considering only antimicrobial activity of QIT, the MIC90 was 16 mg / mL. Among the antimicrobials (meropenem, amikacin, gentamicin, levofloxacin, rifampicin, sulfamethoxazole- trimethoprim, tetracycline, and vancomycin and oxacillin, these only to Gram positive), while the MIC for each bacterial strain is in accordance to the reference CLSI, significant decrease was observed for all tested drugs when combined with AgNPs-QIT. In general, association of AgNPs with QIT or with antimicrobial drugs showed higher inhibitory potential, which may be related to the stability of the polymer associated AgNPs or positive interaction of nanoparticles with antibiotics. The Checkerboard assay was then performed to establish antagonistic or synergistic effects in each combination. The possibility of interaction of AgNPs and QIT with existing antimicrobials is highly relevant and reinforces the recommendations of the literature on the reformulation of traditional antimicrobial use, as well as research into new drugs and strategies to overcome the growing phenomenon of bacterial resistance to antimicrobials.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-10-09T20:37:27Z No. of bitstreams: 1 tamiryssilvabarino.pdf: 1193174 bytes, checksum: 4ad4ca2cfdc016bc7f65fda94a5fb98d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-10-10T12:20:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tamiryssilvabarino.pdf: 1193174 bytes, checksum: 4ad4ca2cfdc016bc7f65fda94a5fb98d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-10T12:20:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tamiryssilvabarino.pdf: 1193174 bytes, checksum: 4ad4ca2cfdc016bc7f65fda94a5fb98d (MD5) Previous issue date: 2017-02-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Microrganismos patogênicos são responsáveis pelo desenvolvimento de diversas infecções, e em ambientes hospitalares, levam muitos pacientes ao óbito. Modificar esse quadro é necessário, todavia as bactérias apresentam distintos mecanismos de resistência após mutações em seu DNA. Além disso, o uso indiscriminado de antibióticos gera continuamente a seleção natural e propagação de cepas mais resistentes fazendo com que os antibióticos percam sua eficácia com o passar dos anos. Diante desse panorama, a elaboração de um nanocarreador contendo peptídeos antimicrobianos (PAMs ou AMPs do inglês Antimicrobial Peptides) tornase uma interessante alternativa contra bactérias patogênicas. O objetivo deste trabalho foi sintetizar nanoesferas de alginato de sódio pelo método de Gelificação Ionotrópica para a entrega de AMPs Lrot3 às células bacterianas de Escherichia Coli 25922 e Staphylococcus epidermidis 12228. A atividade antimicrobiana dos peptídeos livres e nanoestruturados (128, 64, 32, 16, 8 e 4µg/mL), foi avaliada por meio da concentração mínima inibitória (MIC), e o potencial citotóxico investigado em células HEK 293 humanas utilizando o ensaio de MTT (Tetrazólio de azul de tiazolilo). Os dados foram avaliados por ANOVA e as médias comparada pelo teste de Tukey. Para a bactéria E. coli 25922, o peptídeo livre na concentração de 64 µg/mL destacou-se por ser a única concentração com atividade antimicrobiana significativa (P˂0,01), apresentando ação similar ao do cloranfenicol (128 µg/mL e 64 µg/mL). As nanopartículas contendo AMPs, por sua vez, mostraram-se eficazes em todas as concentrações (P˂0,01). Diferentemente se deu no S. epidermidis 12228, onde observou-se maior resistência da bactéria a todos tratamentos. Os resultados do MTT sugerem que as nanopartículas de alginato não apresentam citotoxicidade in vitro, motivando a continuidade deste estudo. Concluindo, os AMPs nanoestruturados tem potencial para serem utilizados no combate a infecções ocasionadas por E. coli. / Pathogenic microorganisms are responsible for the development of various infections, particularly in hospital environment, leading to death in many patients. It is therefore necessary to change this scenario, it is difficult, however, because the bacteria have very distinct resistance mechanisms after mutations in their DNA. Furthermore, the indiscriminate use of antibiotics continuously generates the selection and propagation of more resistant strains, causing loss of effectiveness of antibiotics over the years. In this case, the development of a nanocarrier containing Antimicrobial Peptides (AMPs) becomes an interesting alternative against pathogenic bacteria. This paper aims to synthesize the delivery of AMPs to bacterial cells of Escherichia coli 25922 and Staphylococcus epidermidis 12228 through the use of nanospheres of sodium alginate by ionotropic gelation method. Alginate stands out for being a polyanionic, biodegradable and biocompatible polymer, which show interaction with Lrot3 cationic AMP. The antimicrobial activity of free and nanostructured peptides (128, 64, 32, 16, 8 e 4 µg/mL) was evaluated by the minimum inhibitory concentration (MIC) and the cytotoxic potential investigated in human HEK 293 cells using the MTT Assay (Tetrazolium thiazolyl blue). The data were evaluated by ANOVA and the means compared by Tukey test. For Gramnegative E. coli 25922 bacteria, the free peptide at concentration of 64 µg/mL stood out for being the only concentration with significant antimicrobial activity (P˂0,01), showing similar action to the chloramphenicol, at concentrations of 128 µg/mL and 64 µg/mL, respectively. NPs, in turn, showed inhibitory activity at all concentrations (P˂0,01). Unlike occurred in S. epidermidis 12228, which was observed more bacterial resistance to all treatments. The MTT data suggest that alginate nanoparticles do not exhibit in vitro cytotoxicity, encouraging the continuation of this study. In conclusion, the nanostructured AMPs has the potential to be used to fight infections caused by E. coli.

Orientador: Marcos Antonio Machado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo / Made available in DSpace on 2018-08-26T04:12:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 InuiKishi_RosangelaNaomi_D.pdf: 6372359 bytes, checksum: 51a90b9672af7cb590a1b270d3bc5d18 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A cultura do citros tem sido afetada por diversos patógenos como Xylella fastidiosa (Xf), Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) e Candidatus Liberibacter asiaticus (CaLas). Para o controle desses são necessárias grandes quantidades de defensivos agrícolas. Neste contexto, são importantes novas estratégias de manejo sustentável, como o uso de peptídeos antimicrobianos (PAM), que podem controlar o crescimento desses patógenos. Assim, foi realizada uma prospecção de sequências codificantes de peptídeos no banco de sequências expressas de citros (CitEST), e além disso, peptídeos descritos na literatura com atividade antimicrobiana foram utilizados. Para verificar a ação dos PAMs sobre os micro-organismos deste estudo, testes in vitro contendo os PAMs e patógenos foram realizados. Entre os PAMs avaliados in vitro CJ0714, EC0604, SC0902 e o PAM de citros PE1105 apresentaram atividade bactericida sobre Xcc e S. meliloti (bactéria utilizada por ser filogenéticamente próxima a CaLas) e bacterioestática para Rhizobium radiobacter. Todos os peptídeos avaliados in vitro para Xcc, tiveram suas atividades avaliadas em folha destacada, sob condições controladas, e em plantas acondicionadas em casa de vegetação. Os resultados em folha destacada corroboram com os dados obtidos in vitro. Em casa de vegetação os resultados com os PAMs CJ0714, AR0610 e PE1105 não foram semelhantes com os obtidos em testes in vitro e em folhas destacadas. Apesar disso, houve redução de sintomas em comparação com o controle positivo (somente a bactéria). Isso pode ter ocorrido devido a fatores e compostos presentes na planta e a instabilidade dos PAMs em condições mais próximas às naturais. Os PAMs que apresentaram resultados promissores in vitro e em folha destacada ou em trabalhos prévios foram clonados no vetor do CTV (Vírus da tristeza do citros) para avaliação da expressão transiente e sua ação sobre CaLas. Apesar dos resultados satisfatórios nos experimentos anteriores, não foram verificados efeitos destes PAMs sobre a população de CaLas quando expressos através do vetor viral do CTV. No entanto, pode-se observar redução da frequência de CaLas no inseto vetor Diaphorina citri alimentado em plantas com o PAM PE1106, já que o patógeno pode ser transmitido de modo transovariano de uma geração à outra do inseto. Nenhum peptídeo avaliado foi eficiente sobre o crescimento de Xf. Para avaliar o efeito dos PAMs sobre micro-organismos endofíticos foi utilizado Methylobacterium sp., sendo observado que os PAMs apresentaram atividade sobre esta bactéria. Testes para verificar a citotoxicidade dos PAMs para humanos foram realizados. O teste de hemólise permite verificar a atividade do peptídeo sobre eritrócito humano. Os PAMs que apresentaram as menores atividades hemolíticas foram SC0902, PE1105 e PE1106. Além disso, foi verificada a proliferação de linfócitos e desgranulação de mastócitos. Os PAMs CJ0714 e EC0604 apresentaram linfoproliferação e somente os PAMs PE1105 e PE1106, obtidos de citros, não induziram desgranulação de mastócitos. O PAM SC0902 apresentou bons resultados para a atividade antimicrobiana, mas induziu a desgranulação de mastócitos. Dessa forma, este trabalho apresenta o PAM, PE1105 como potencial para o controle desses patógenos bacterianos de citros, pois este apresentou atividade antimicrobiana e nenhum efeito citotóxico sobre células humanas / Abstract: The citrus culture has been affected by various pathogens such as, Xylella fastidiosa (Xf), Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) and Candidatus Liberibacter asiaticus (CaLas).To control these pathogens, large quantities of pesticides are needed. In this context, are important new strategies for sustainable management, such as the use of antimicrobial peptides (PAM), which can control the growth of these pathogens. Here we have prospected at coding peptide sequences in the citrus database of expressed sequence (CitEST) and used other peptides previously tested. To verify the AMPs action on the microorganisms, in vitro tests were performed. Among the peptides evaluated in vitro, CJ0714, EC0604, SC0902 and PE1105 - citrus peptide showing bactericidal activity against Xcc and S. meliloti (phylogenetically close to CaLas) and bacteriostatic effect on Rhizobium radiobacter. All peptides evaluated in vitro for Xcc, had their activities evaluated in a detached leafs, under controlled conditions, and plants placed in the greenhouse. The results in detached leaf results corroborated with the in vitro data. In the greenhouse, results for CJ0714, AR0610 and PE1105 peptides were not similar with those obtained in vitro and in detached leaf. Nevertheless, the presence of symptoms was reduced as compared with the positive control (bacteria only). This may be due to factors and compounds present in the plant and to the instability of the peptide at conditions close to the natural ones. Peptides that showed promising results in vitro and in detached leaf or in previous works were cloned into the CTV (Citrus Tristeza Virus) vector to evaluate the transient expression and its action on CaLas. Despite the satisfactory results in previous experiments, it was not possible to observe the PAM effect on CaLas population when expressed through CTV vector. Nevertheless, reduction of the frequency of the bacteria in the insect vector was observed when Diaphorina citri fed on plants with AMP PE1106, since the pathogen can be transmitted from one generation to another by transovarial mode. None peptides evaluated was efficiently on the growth of Xf. To evaluate the effects of the AMPs on endophytic microorganisms, Methylobacterium sp. was used and it was observed that peptides exhibit activity against this bacterium. Tests to check the cytotoxicity of these AMPs for humans were performed. The hemolysis test allows checking the activity of the peptide on human erythrocyte. The AMPs that showed the lowest hemolytic activities were SC0902, PE1105 and PE1106. Furthermore, we noticed the proliferation of lymphocytes and mast cell desgranulation. Thus, this work presents PAM, PE1105 as potential for the control of these bacterial pathogens of citrus because it showed antimicrobial activity and no cytotoxic effect on human cells / Doutorado / Bioquimica / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-18T22:31:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Carla_Daiane_Lubke_Ucker.pdf: 1869629 bytes, checksum: faefabb4e99813c029587cc3088d97be (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-18T22:44:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Carla_Daiane_Lubke_Ucker.pdf: 1869629 bytes, checksum: faefabb4e99813c029587cc3088d97be (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-18T22:44:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Carla_Daiane_Lubke_Ucker.pdf: 1869629 bytes, checksum: faefabb4e99813c029587cc3088d97be (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-18T22:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Carla_Daiane_Lubke_Ucker.pdf: 1869629 bytes, checksum: faefabb4e99813c029587cc3088d97be (MD5) Previous issue date: 2016-10-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Óleos essenciais obtidos de plantas podem apresentar propriedades antimicrobianas e antioxidantes, possibilitando sua utilização em alimentos e medicamentos. O jambolão (Syzygium cumini) e a Melaleuca alternifolia, ambos pertencentes à família Myrtaceae, podem ser utilizados na obtenção de óleo essencial. O forte odor característico e a insolubilidade dos óleos essenciais são fatores limitantes para sua aplicação, devido a isso uma alternativa para ampliar o uso é o processo de desodorização. Dessa forma o objetivo do presente trabalho foi avaliar as características do óleo essencial de jambolão e óleo desodorizado de Melaleuca alternifolia, microencapsular o óleo desodorizado de Melaleuca alternifolia e avaliar suas propriedades. O óleo essencial de jambolão, extraído das sementes, apresentou como principal constituinte o β-cariofileno e não apresentou atividade antioxidante no método DPPH. Os óleos essenciais das folhas e sementes de jambolão apresentaram atividade antimicrobiana frente a Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes, Trichoderma spp. e Rizhopus spp. O óleo desodorizado de Melaleuca alternifolia apresentou baixo teor de compostos fenólicos e ausência de terpenos. Entretanto, apresentou atividade antibacteriana frente a Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes e ausência de atividade antifúngica. Obteve-se alta eficiência de encapsulação do óleo desodorizado de Melaleuca alternifolia pela técnica de coacervação simples utilizando quitosana e ácido tânico, os resultados foram confirmados pela técnica de Calorimetria Diferencial de Varredura. As micropartículas apresentaram formato irregular, tamanho distinto e inibição frente aos microrganismos avaliados, devido à propriedade antimicrobiana da quitosana, porém sem atividade antioxidante. Não foi observada influência quanto a presença do ácido tânico nas micropartículas. O óleo desodorizado de Melaleuca alternifolia apresenta potencial de aplicação em hambúrguer em função de ter apresentado atividade antimicrobiana in situ frente à Escherichia coli, já os óleos essenciais de jambolão não puderam ser analisados in situ devido ao baixo rendimento. / Essential oils obtained from plants may have antimicrobial and antioxidant properties, allowing its use in food and medicine. The jambolan (Syzygium cumini) and Melaleuca alternifolia, both belonging to the Myrtaceae family can be used to obtain an essential oil. The strong characteristic odor and the insolubility of the essential oils are limiting factors for its use due to it an alternative to extend the use is the deodorization process. Thus the objective of this study was to evaluate the essential oil characteristics jambolan and deodorized oil Melaleuca alternifolia, microencapsulating the deodorized oil Melaleuca alternifolia and evaluate their properties. The essential oil jambolan, extracted from the seeds, presented as the main constituent the β-caryophyllene and did not show antioxidant activity in the DPPH method. Essential oils from the leaves and seeds jambolan showed antimicrobial activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes, Trichoderma spp. and Rizhopus spp. The deodorized oil Melaleuca alternifolia showed low content of phenolic compounds and absence of terpenes. However, the oil showed antibacterial activity and no antifungal activity. It was obtained high encapsulation efficiency of deodorized oil Melaleuca alternifolia by simple coacervation technique using chitosan and tannic acid, the results were confirmed by Calorimetry Differential Scanning technique. The microparticles presented irregular size and distinctive shape. The microparticles showed potent inhibition compared to the microorganisms evaluated due to the antimicrobial property of chitosan, but no antioxidant activity. No significant differences were observed for the presence of tannic acid in the microparticles. The deodorized oil Melaleuca alternifolia has potential application in burger due to present antimicrobial activity against the Escherichia coli.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-18T16:42:00Z No. of bitstreams: 1 Fleming, Maria Emília de Castro Kling [Dissertação, 2011].pdf: 3850457 bytes, checksum: 76e7a64373d2898f956190ecd2aa26c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T16:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fleming, Maria Emília de Castro Kling [Dissertação, 2011].pdf: 3850457 bytes, checksum: 76e7a64373d2898f956190ecd2aa26c3 (MD5) / Introdução: As infecções de corrente sanguínea estão entre as mais graves infecções, principalmente se causadas por microrganismos resistentes a antimicrobianos. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e o perfil de resistência de microrganismos isolados em hemoculturas em um hospital público e outro privado localizados em Niterói, Rio de Janeiro, Brasil. MÉTODOS: O estudo foi conduzido em um hospital geral de natureza pública com 227 leitos e um hospital geral, privado contendo 123 leitos, entre Agosto de 2009 a Agosto de 2010. Todas as amostras provenientes de pacientes maiores de 18 anos foram consecutivamente coletadas após identificação por métodos de rotina de cada laboratório de microbiologia. As cepas de E. coli, K. pneumoniae, K. oxytoca e P. mirabilis foram testadas quanto a produção de ESBL (Extended Spectrum Betalactamase) de acordo com as recomendações do CLSI. As enterobactérias foram testadas quanto a produção de carbapenemases pelo teste modificado de Hodge (CLSI). As amostras de P. aeruginosa foram testadas para a produção de MBLs pelo teste fenotípico de disco combinado. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para a detecção dos genes (blaIMP, blaVIM, blaSPM), relacionados com a produção de metalo-beta-lactamases (MBLs). A similaridade genética entre as cepas de P. aeruginosa foi avaliada pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). RESULTADOS: Foram coletadas 195 amostras de microrganismos isolados em hemoculturas no hospital público e 123 amostras no hospital privado. Os nãofermentadores foram a maior causa de bacteremias na unidade de terapia intensiva (UTI) da instituição pública. As enterobactérias foram os microrganismos mais prevalentes nas enfermarias da unidade privada. No hospital público foram detectadas amostras produtoras de ESBL, enquanto no hospital privado foram identificadas cepas produtoras de carbapenemases. Dentre as cepas de P. aeruginosa, 40 amostras foram testadas para a produção de MBLs. Treze cepas (32,5%) foram positivas no teste fenotípico e no PCR, todas positivas para o gene blaSPM-1, sendo que apenas uma foi proveniente da instituição pública e 12 do hospital particular. Nenhuma amostra carreadora dos genes blaIMP-1 e blaVIM-2 foram detectadas. Os resultados de PFGE mostraram que todas as cepas carreadoras do gene blaSPM-1, isoladas no hospital privado, foram geneticamente relacionadas (Pulsotipo A), o que pode indicar uma transmissão cruzada entre os pacientes e profissionais de saúde. CONCLUSÕES: As características dos microrganismos isolados em hemoculturas variou entre as unidades de internação e entre os hospitais, demonstrando que os dados locais podem orientar a terapia antimicrobiana e as medidas de controle e prevenção das infecções. Devido ao impacto das infecções de corrente sanguínea e a presença de microrganismos resistentes no ambiente hospitalar, estudos adicionais e medidas de vigilância são necessárias / Introduction: Bloodstream infections are one of the most serious bacterial infections, especially if caused by resistant microorganisms. The purpose of this study was to assess the prevalence and resistance profile of pathogens isolated from blood cultures in a public and a private hospital of Niterói, Rio de Janeiro, Brazil. METHODS: A case-series of patients with blood stream infection was conducted at a 227-bed public general hospital and at a 123-bed private general hospital from August 2009 to August 2010. All isolates were consecutively detected from patients minimum age of 18 years and identified by the routine methodology used at each laboratory. Every E. coli, K. pneumoniae, K. oxytoca and P. mirabilis isolates were tested for ESBL (Extended Spectrum Beta-lactamase) production using the CLSI guidelines. The Enterobacteriaceae was tested for carbapenemase production using the Modified Hodge test (CLSI). Every P. aeruginosa were tested for metallo-betalactamases (MBLs) producing by the phenotypic method of combined disk. The polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the MβLs genes (blaIMP, blaVIM, blaSPM). The genetic similarity between the strains was evaluated in samples which were positive for MBLs using the pulsed field gel electrophoresis technique (PFGE). RESULTS: Were collected 195 samples of microorganisms isolated in blood cultures in the public hospital and 123 samples in the private hospital. The non-fermentatives were the major cause of bacteremia in the ICU of public hospital. The Enterobacteriaceae were the most prevalent in the the wards of private hospital. In the public hospital, we found strains producing ESBL and in the private hospital, strains producing carbapenemase. Forty samples of P. aeruginosa were tested for MBL producing. Thirteen strains (32,5%) were positive in phenotypic test and in PCR, every sample were positive for blaSPM-1, and only one was from the public institution and 12 of the particular hospital. No blaIMP-1 and blaVIM gene were detected. The PFGE analysis showed that all blaSPM-1 gene-carrying strains isolated in private hospital were genetically related (Pulsetype A), suggesting a cross transmission between patients and health professionals. CONCLUSIONS: The characteristics of the microorganisms isolated from blood culture varied from hospital to hospital and between inpatient units, showing that local data can help with therapeutic choices and with the prevention and control of infection. Due to the impact of bloodstream infections and the presence of resistant microorganisms in the hospitals, additional studies and monitoring measures are necessary

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Denise da Fontoura Prates.pdf: 535436 bytes, checksum: c3acb08e8f12a05440096b13c688b6f2 (MD5) Previous issue date: 2010-12-17 / Listeria monocytogenes is a Gram-positive of ubiquitous natural, psychrotropic pathogen which colonizes the surfaces of equipment and utensils in food processing industries. Milk and dairy products, especially cheeses with medium and high humidity have been implicated in listeriosis cases and outbreaks. Microbial contamination could be originated in raw material or be incorporated during the development stages of the product, coupled with inadequate hygiene practices. The general aim of this study was to evaluate the occurrence of Listeria spp. along the processing line of cheese with middle and high humidity, in three dairy subjected to different levels of sanitary survey located in Southern Brazil. From 208 samples tested Listeria spp. were isolated 7.69%, being isolated 43.75%, 25%, 31.25%, respectively, in dairy products A, B and C. From these isolates, 25% were found in raw milk, 18.75% in contact surfaces with the product, 50% in areas without contact with the product and 6.25% in the final product. L. innocua and L. monocytogenes were the only species identified between the isolates being L. innocua the prevalent species (68.7%). Among the serotypes of L. innocua, the serotype 6a was prevalent (72.7%) and between L. monocytogenes serotype 4b was prevalent (55.6%). All Listeria strains isolated from raw material and final product showed multiresistance to five antibiotics (penicillin, amoxicillin, chloramphenicol, cefaclor and clindamycin) of the fifteen antibiotics tested. Among the samples of raw material assessed microbiologically, the raw milk showed the highest levels of contamination and the highest levels found between them were > 1.1x106 MPN/mL for fecal Overall, 1.1x105 MPN/mL for fecal coliform, 4x105 CFU/ml for coagulase-positive staphylococci and Salmonella spp. in one of the samples. Among six samples of the final product, only one showed himself at odds with the existing regulatory standard, exceeding the allowed limit for ECP. Listeria spp. and L. monocytogenes were present along the lines of the three dairy processing plants, regardless of the size of the industry, highlighting the risk of contamination during food manufacturing. Therefore, it becomes necessary to introduce effective measures to reduce such contamination or improvements in the practices already adopted by the industry, because of the risks to public health. / Listeria monocytogenes é uma bactéria Gram-positiva de natureza ubíqua, psicrotrófica, que coloniza superfícies de equipamentos e utensílios dentro de indústrias processadoras de alimentos. Leites e derivados lácteos, em especial queijos com média e alta umidade, têm sido incriminados em casos e surtos de listeriose, por serem alimentos que favorecem o desenvolvimento microbiano, além de serem prontos para o consumo. A contaminação microbiana pode ter origem na matéria-prima, ou ser incorporada durante as etapas de elaboração do produto, associada a práticas inadequadas de higiene. O objetivo geral neste trabalho foi avaliar a ocorrência de Listeria spp., em especial de L. monocytogenes, ao longo da linha de processamento de queijos de média e alta umidade, em três laticínios, localizados na região sul do Rio Grande do Sul, submetidos a diferentes níveis de inspeção sanitária. Das 208 amostras avaliadas 7,69% apresentaram Listeria spp., sendo isoladas, 43,75%, 25%, 31,25%, respectivamente, nos laticínios A, B e C. Destes isolados, 25% foram encontrados no leite cru, 18,75% em superfícies de contato com o produto, 50% em superfícies sem contato com o produto e 6,25% no produto final. L. innocua e L. monocytogenes foram as únicas espécies identificadas entre os isolados, sendo L. innocua a espécie prevalente (68,7%). Entre os sorotipos de L. innocua, o prevalente foi 6a (72,7%) e entre L. monocytogenes o sorotipo prevalente foi 4b (55,6%). Todas as cepas de Listeria isoladas da matéria-prima e do produto final apresentaram multirresistência a cinco (penicilina, amoxilina, cloranfenicol, cefaclor e clindamicina) dos 15 antibióticos testados. Dentre as amostras de matéria-prima avaliadas microbiologicamente, as de leite cru, foram as que apresentaram os maiores níveis de contaminação, sendo que, os níveis mais elevados encontrados entre as amostras de leite cru foram: >1,1x106 NMP.mL-1 para coliformes totais, 1,1x105 NMP.mL-1 para coliformes termotolerantes, 4x105 UFC.mL-1 para estafilococos coagulase positiva (ECP) e a presença de Salmonella spp. em uma das amostras avaliadas. Entre as seis amostras de produto final, apenas uma apresentou-se em desacordo com o padrão regulamentar vigente, excedendo o limite permitido para ECP. Listeria spp. e L. monocytogenes foram isoladas ao longo das linhas de processamentos nos três laticínios, independente do porte da indústria, evidenciando risco de contaminação durante a fabricação dos dois tipos de queijo, os quais são produtos prontos para o consumo. Dessa forma, torna-se necessária a implantação de medidas eficazes para redução dessas contaminações, ou melhorias nas práticas já adotadas pelas indústrias, em virtude dos riscos à saúde pública.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present research describes the use of b-alcoxyvynil trihalomethyl ketones [CX3C(O)CR2CR1R, where X= Cl, F; R= OMe, OEt; R1: H, Me, Ph, 4-MePh, 4-MeOPh, 4-BrPh, 4-ClPh, 4-FPh; R2= H, Ph] in the regiospecific synthesis of 16 new 3(4)-alkyl(aryl) substituted 5-trihalomethyl-5-hydroxy-4,5-dihydro-1H-1-tosylpyrazoles. These pyrazolines were obtained from the reaction of b-alcoxyvinyl trihalomethyl ketones with tosyl hydrazine (63-92%). In a following phase, aiming to develop an efficient methodology of dehydration. Two 4-methoxy-4-(4-fluorophenyl)-1,1,1-trihalo-3-buten-2-ones were submitted to the reactions with four dinucleophile: semicarbazide hydrochloride, thiosemicarbazide, methyl hydrazinocarboxylate and 2-furoic hydrazide furnishing, eigth new 1-substituted-3-(4-fluorophenyl)-5-trihalomethyl-5-hydroxy-4,5-dihydro-1H-pyrazoles (63-98%). The dehydration reactions carried out in thionyl chloride/pyridine/benzene gave the best yields of 3-(4-fluorophenyl)-5-trihalomethyl-1H-pyrazoles (41-75%). The inhibitory activities of pyrazolinic compounds were tested using the autobiography technique for bacteria and fungis. The tosyl pyrazolinic compounds exhibit a significant activity for gram-positive bacteria and low activity to fungi. Among the tested compounds, 3-(4-fluorphenyl)-5-hydroxy-5-trifluoromethyl-4,5-dihydro-1H-1-tosylpyrazole exhibited the best inhibitory activity against Staphylococcus aureus (0,78 μg/μL). All the compounds were characterized by spectral and analytical experiments 1H s and 13C s NMR, and the purity was demostrated by elemental analyzes and CG/MS. / O presente trabalho descreve a utilização de b-alcoxivinil trialometil cetonas [CX3C(O)CR2CR1R, onde X: Cl, F; R: OMe, OEt; R1: H, Me, Ph, 4-MePh, 4-MeOPh, 4-BrPh, 4-ClPh, 4-FPh; R2: H, Ph] na síntese regioespecífica de 16 novos 3(4)-alquil(aril)-5-trialometil-5-hidroxi-4,5-diidro-1H-1-tosilpirazois. As tosilpirazolinas foram obtidas a partir da reação das b-alcoxivinil trialometil cetonas com tosilhidrazina (63-92%). Em uma segunda etapa, visando desenvolver uma eficiente metodologia para desidratação das pirazolinas trialometil substituídas. Duas 4-metoxi-4-(4-fluorfenil)-1,1,1-trialo-3-buten-2-onas foram submetidas a reações com quatro dinucleófilos: cloridrato de semicarbazida, tiosemicarbazida, carboximetilhidrazina e 2-furanoilhidrazina, originando inicialmente 8 novos 3-(4-fluorfenil)-5-trialometil-5-hidroxi-4,5-diidro-1H-pirazóis (63-98%). As reações de desidratação realizadas em meio cloreto de tionila/piridina/benzeno produziram os melhores rendimentos para 6 novos 3-(4-fluorfenil)-5-trialometil-1H-pirazóis (41-75%). As atividades inibitórias dos compostos foram avaliadas frente bactérias e fungos, utilizando a técnica de autobiografia. Os compostos tosil pirazolínicos evidenciaram significante atividade frente a bactérias gram-positivas e pouco ativas para fungos. Dentre os compostos avaliados, o composto 3-(4-fluorfenil)-5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-tosilpirazol apresentou o melhor resultado, inibindo o crescimento de Staphylococcus áureus (0,78 μg/μL). Os compostos foram caracterizados por experimentos de RMN de 1H e 13C, e sua pureza determinada via Análise Elementar e CG/MS.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The phytochemical research of crude extract of the bark metanólico and stem fractions of Helietta apiculata Benth, Rutaceae, led to the isolation of four alkaloids furoquinoline (γ-fagarine (9), Maculine (24), Kokusaginine (17) and Isodictamnine (11)), a limonoids known as Limonin (42), a coumarin called Chalepin (27), two derivatives of cinnamic acid in mixture, 4-hydroxy-3,5-dimetoxicinamato methyl (69) and 3, 4, 5- trimetoxicinamato methyl (55), In addition to a mixture of three neolignans (T26). Through the hidrodestilação was the extraction of essential oils of the species H. apiculata in different seasons, with the aim of comparison of chemically the same as seasonality. Being that the main constituents were the gifts, the elemeno, γ-elemol, elemol and espatulenol. While limonene was not biosynthesized during the spring, being present in significant quantities in summer, autumn and winter. The crude extract, fractions and isolated substances were tested as to their antimicrobial, antioxidant activity and inhibition of the enzyme Acetylcholinesterase. When tested against microbial agents, metabolites γ-fagarine, limonin, isodictamnine, derivatives of cinnamic acid and neolignans mixture on demonstrated antimicrobial activity. When testing the antioxidant potential through screening substances γ-fagarine, isodictamnine and maculine, neolignans were more active as antioxidants. To test the ability of inhibition of the enzyme Acetylcholinesterase none of isolated proved with substantial potential inhibitor, since they do not have overcome the pMIQ threshold value of 10,5 established as required value for a substance to be considered such inhibiting enzyme. / A investigação fitoquímica do extrato bruto metanólico e frações da cascas do caule de Helietta apiculata Benth, Rutaceae, levou ao isolamento de quatro alcalóides furoquinolínicos (γ-fagarina (9), Maculina (24), Kokusaginina (17) e Isodictamina (11)), de um limonóide conhecido como Limonina (42), uma cumarina denominada Chalepina (27), dois derivados do ácido cinâmico em mistura, 4-hidroxi-3,5-dimetoxicinamato de metila (69) e 3,4,5- trimetoxicinamato de metila (55), além de uma mistura de três neolignanas (T26).Através da hidrodestilação, fez-se também, a extração dos óleos essenciais da espécie H. apiculata nas diferentes estações do ano, visando à comparação da constituição química do mesmo quanto à sazonalidade. Sendo que os principais constituintes presentes foram o elemeno, o γ-elemol, o elemol e o espatulenol. Ao passo que limoneno não foi biosintetizado pela planta durante a primavera, estando presente em quantidades apreciáveis no verão, outono e inverno. O extrato bruto, as frações e as substâncias isoladas foram testadas quanto à suas atividades antimicrobiana, antioxidante e de inibição da enzima Acetilcolinesterase. Quando testadas frente a agentes microbianos, os metabólitos γ-fagarina, limonina, isodictamina, derivados do ácido cinâmico e a mistura de neolignanas demonstraram relativa atividade antimicrobiana. Ao se testar o potencial antioxidante através de screening as substâncias γ-fagarina, maculina, isodictamina e as neolignanas se mostraram as mais ativas como antioxidantes. Quando testada a capacidade de inibição da enzima Acetilcolinesterase nenhuma das substâncias isoladas se mostrou com potencial inibidor, visto que as mesmas não superaram o valor limite de pMIQ de 10,5 estabelecido como valor necessário para uma substância ser considerada inibidora de tal enzima.