Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2017. / Submitted by Raiane Silva (raianesilva@bce.unb.br) on 2017-07-20T17:50:06Z No. of bitstreams: 1 2017_ElanePriscillaMaciel​.pdf: 1934684 bytes, checksum: 86424beedbeaa3ca6047a04bf26106ab (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-06T23:00:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ElanePriscillaMaciel​.pdf: 1934684 bytes, checksum: 86424beedbeaa3ca6047a04bf26106ab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T23:00:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ElanePriscillaMaciel​.pdf: 1934684 bytes, checksum: 86424beedbeaa3ca6047a04bf26106ab (MD5) Previous issue date: 2017-09-06 / As infecções do trato urinário são uma das principais causas de busca por atendimento médico, se definem como a invasão microbiana de qualquer órgão do trato urinário, que tem natureza estéril, desde a uretra até os rins. Escherichia coli, uma bactéria gram-negativa, comensal aos humanos, é o agente mais comum isolado em torno de 75 a 95% das infecções urinárias agudas de origem bacteriana. As células dendríticas (DCs) são células apresentadoras de antígenos profissionais (APCs), essenciais nos eventos iniciais da infecção por atuarem como sentinelas e servirem de ponte entre a resposta imune inata e adaptativa do hospedeiro. Assim, realizamos experimentos para entender a interação de DCs e UPECs. Para tal, DCs foram obtidas de monócitos do sangue periférico de doadores saudáveis, cultivadas na presença de IL-4 e GM-CSF e infectadas com as cepas V27 e J96 de UPECs por 24 horas. Observamos a capacidade das UPECs em infectar as DCs. Então as células foram analisadas por citometria de fluxo para avaliação da expressão de moléculas de superfície CD11c, CD1a, CD83, CD62L, CCR7, CD209, HLA-DR, CD86, CD80, CD40 e CD274. Após a interação DCs-UPECs observou-se diminuição de CD11c, diminuição de CD209 (DC-SIGN), tendência à diminuição da porcentagem e MFI da expressão de HLA-DR, aumento de CD80 e diminuição da média de espressão de CD86. A avaliação de morte celular demonstra que aparentemente a cepa V27 induz a morte por apoptose ou um processo de apoptose mais tardio nas DCs. Já a cepa J96 parece estimular uma tendência à morte por necrose ou apoptose tardia. Em conclusão, as UPECs regulam negativamente a expressão de DC-SIGN, moléculas co-estimulatórias como o CD86, além de regularem de forma diferente, a sobrevivência dessas células. / Urinary tract infections are one of the main causes of seeking medical attention, defined as the microbial invasion of any organ of the urinary tract, which has a sterile nature, from the urethra to the kidneys. Escherichia coli, a gram-negative bacterium commensal to humans, is the most common agent isolated in 75-95% of acute urinary tract infections of bacterial origin. Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs), essential in the early events of the infection by acting as sentinels and bridging the innate and adaptive immune response of the host. Thus, we perform experiments to understand the interaction of DCs and UPECs. To that end, DCs were obtained from peripheral blood monocytes from healthy donors cultured in the presence of IL-4 and GM-CSF and infected with the VEC and J96 strains of UPECs for 24 hours. We observed the ability of UPECs to infect DCs. Cells were then analyzed by flow cytometry to evaluate the expression of surface molecules CD11c, CD1a, CD83, CD62L, CCR7, CD209, HLA-DR, CD86, CD80, CD40 and CD274. After the DCs-UPECs interaction, CD11c decreased, CD209 (DC-SIGN) decreased, tendency to decrease in percentage and MFI of HLA-DR expression, increase of CD80 and decrease in mean CD86 expression. Evaluation of cell death demonstrates that apparently the V27 strain induces death by apoptosis or a later apoptosis process in DCs. On the other hand, strain J96 seems to stimulate a tendency towards death by necrosis or late apoptosis. In conclusion, UPECs negatively regulate the expression of DC-SIGN, costimulatory molecules such as CD86, in addition to regulating the survival of these cells differently.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-10-29T17:52:02Z No. of bitstreams: 1 2006_Andresa Tumelero.pdf: 697821 bytes, checksum: 538dc26591a11803301f27e4a89bac0c (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-10-30T12:13:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Andresa Tumelero.pdf: 697821 bytes, checksum: 538dc26591a11803301f27e4a89bac0c (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-30T12:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Andresa Tumelero.pdf: 697821 bytes, checksum: 538dc26591a11803301f27e4a89bac0c (MD5) Previous issue date: 2006-06-12 / A epidemiologia da infecção urinária na infância varia dependendo da idade e gênero. O diagnóstico e manejo adequados desta patologia previnem seqüelas que levam ao desenvolvimento de hipertensão arterial sistêmica ou insuficiência renal crônica, ambas com alta morbimortalidade. Nessa perspectiva, foi realizado um estudo transversal com o objetivo de analisar as alterações encontradas no diagnóstico e manejo de crianças menores de dois anos de idade, com o primeiro episódio de infecção urinária; identificar os agentes etiológicos mais freqüentes, bem com o perfil de resistência antimicrobiana encontrado e verificar as alterações funcionais e morfológicas do trato urinário detectadas por meio da investigação diagnóstica tendo como campo de estudo o Hospital da Criança Santo Antônio (HCSA) de Porto Alegre/RS. Foram amostradas 92 crianças com idade mediana de 6 meses (3 - 10), 63% eram meninas. Com idade inferior a 3 meses, foram 27 (29%) pacientes, destes, 62% eram meninos. Quanto à análise qualitativa de urina, observou-se a presença de nitrito e leucocitúria, em 37% e 95,6% respectivamente. Na urocultura, o germe mais incidente foi a Escherichia coli, em 87 (94,6%) das amostras, foram encontrados também Proteus mirabilis (1%), Enterococcus (2%), Serratia sp (1%), Klebsiella (1%). Chamou atenção o alto índice de resistência para alguns antimicrobianos: ampicilina 57,6%, cefalosporinas de 1º geração 32,6%, sulfametoxazol/trimetoprim 43,5%; a resistência a cefalosporinas (2º geração), nitrofuratoína e ácido nalidíxico ficaram abaixo de 3,5%. A ecografia abdominal apresentou alterações em 43,5% dos casos, foi observado refluxo vesicoureteral em 34,7% dos pacientes, sendo que apenas 7,6% das crianças tiveram refluxo grau III ou mais. Através da cintilografia com DMSA, realizada entre o primeiro e quarto mês pós-infecção, detectaram-se 23 (25%) pacientes com hipocaptação do radioisótopo pelo parênquima renal, destes, 14 (60,9%) não apresentaram alterações na uretrocistografia. Ocorreram 8 (8,7%) reinfecções num período de 6 meses, o fator que mostrou relação significativa com esta ocorrência foi a presença de refluxo grau III ou mais. Conclusão: a Escherichia coli foi o agente etiológico mais freqüente. Foram encontrados altos índices de resistência bacteriana para antimicrobianos de uso freqüente, indicando a necessidade de um melhor planejamento na escolha da terapia. Ficou sugerida a necessidade de realização de cintilografia com DMSA em todos os casos, mesmo sem outras alterações nos exames de imagem para detectar alterações do parênquima que possam permanecer como cicatriz renal. A presença de refluxo vesicoureteral grau III ou mais aumenta o risco de reinfecção, mesmo com profilaxia antimicrobiana. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The epidemiology of urinary tract infection during childhood varies depending on age and gender. An adequate diagnostic and treatment of children after a urinary infection is necessary to prevent long-term medical problems, such as hypertension and reduced renal function. The aim of this study is to analyse clinical changes found in children younger than two years which experienced their first urinary infection, to identify the etiology agents and the resistence bacterial characters and the morphology changes followed by the establishment of diagnostics and evaluations in the Hospital da Criança Santo Antônio (HCSA) in Porto Alegre/RS. The study includes 92 children, with average age of 6 months (3-10) in which 63% were girls. There were 27 (29%) patients younger than 3 months in which 62% were boys. In relation to the urinalysis, there were 37% of positive nitrite and 95,6% of leukocytes in urine specimen. Regarding the urine culture, the most incident microorganism isolated was Escherichia coli, found in 87 (94,6%) of the urine specimens. Also, it was found isolated Proteus mirabilis (1%), Enterococcus (2%), Serratia (1%) and Klebsiella (1%). Through this study it is evident the high bacterial resistance for some of the antimicrobials: ampicillin 57,6%, cephalosporin (first generation) 32,6%, sulfamethoxazole/trimethopim 43,5%. In addition to that, the resistance to cephalosporin (second generation), nitrofuratoin and nalidixic acid were lower than 3,5%. The renal ultrasound has changed in 43,5% of the cases. It was observed vesicoureteral reflux in 34,7% of the patients, although only 7,6% of the children had reflux degree III or more. Throughout the dimercaptossuccinic acid scintilography done between the first and the forth year from infection, it was possible to diagnosed 23 (25%) of patients with renal changes. Fourteen (60,9%) did not show any alteration in the cystourethrography. There were 8 (8,7%) reinfections within a 6 months period, even with prophylaxis, and the presence of reflux degree III or more was the only one with significative relation. Conclusion: the Escherichia coli was the most frequent etiologic agent. There were high levels of bacterial resistance to the antimicrobials used frequently, therefore, it is evidence the need of a better planning before starting the therapy. It has been suggested the importance to accomplish dimercaptossuccinic acid scintilography for all urinary infection in children, even without other changes with the image exams to detect alteration of the parenchyma that could become a renal scar. The existence of vesicoureteral reflux degree III or more increases the risk of reinfection even with prophylaxis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-05-09T18:52:49Z No. of bitstreams: 1 2017_FlavianeBeatrizMarcelinoLara.pdf: 1346461 bytes, checksum: 01583701368e9d7b308ba6cc5d1928e1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-05-16T19:46:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_FlavianeBeatrizMarcelinoLara.pdf: 1346461 bytes, checksum: 01583701368e9d7b308ba6cc5d1928e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T19:46:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_FlavianeBeatrizMarcelinoLara.pdf: 1346461 bytes, checksum: 01583701368e9d7b308ba6cc5d1928e1 (MD5) Previous issue date: 2017-05-16 / Escherichia coli uropatogênica (UPEC) é marcada pela sua versatilidade genética, sendo capaz de causar infecções em diferentes níveis do trato urinário bem como sepse urinária. Este estudo teve por objetivo estudar cepas de E. coli isoladas de casos de infecção do trato urinário (ITU) e sepse urinária (SU) atendidos no Hospital Regional de Ceilândia do Distrito Federal. A presença de 15 preditores genéticos de 3 patotipos de E. coli (UPEC, EAEC e MNEC) foi testada em 401 cepas. Análises filogenéticas baseadas na determinação de filogrupos e de tipos de sequências (sequence type – ST) foram realizadas. Os preditores moleculares de UPEC foram detectados em mais de 70% das cepas. Preditores moleculares de EAEC (aatA e aggR) foram detectados em apenas 2,4% (9/377) das cepas envolvendo dois casos de cistite e um de sepse urinária (SU). Marcadores de UPEC foram estatisticamente associados a diferentes aspectos epidemiológicos e analíticos da uropatogênese. Os marcadores fyuA (sistema sideróforo), chuA (sistema sideróforo), vat (toxina vacuolizante) e pic (mucinase) foram estatisticamente associados (p < 0,05) aos casos de infecção adquiridos na comunidade. Cepas positivas para csgA (fímbria curli), chuA (sistema sideróforo) ou ag43 (adesina de agregação) mostraram associação estatística com os casos de SU. Cepas positivas para pap (pilus associado a pielonefrite) foram associadas a piúria (p = 0,000) e a presença de muco nas amostras de urina (p = 0,003). Cepas com genótipo fyuA-pap-csgA (p = 0,020) ou pap-csgA-ag43 (p = 0,000) foram associadas a casos de SU e predominantes no filogrupo D. Análises filogenéticas mostraram que duas das três cepas híbridas EAEC/UPEC estudadas foram posicionadas em um clado característico de cepas de UPEC compartilhado por cepas de filogrupo D e ST3 (filogrupo D-ST3). A outra cepa EAEC/UPEC foi classificada como filogrupo A-ST478 e posicionada em um clado distinto juntamente com uma cepa comensal. Nossos resultados endossam a heterogeneidade genética de cepas uropatogênicas mostrando padrões moleculares especificos associados a casos de SU (cepas de filogrupo D e genótipo fyuA-pap-csgA ou pap-csgA-ag43), como também a participação de cepas híbridas EAEC/UPEC de linhagens extraintestinais (filogrupo D-ST3) e intestinais (filogrupo A-ST478) como uropatógenos. / Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is marked by its genetic diversity and is responsible for infections in different levels of the urinary tract as well as urinary sepsis. This work aimed to study E. coli strains isolated from cases of urinary tract infections (UTI) and urosepsis that were attended in the Hospital Regional de Ceilândia in the Brazilian Federal District. Four hundred one strains were tested for the presence of 15 genetic predictors of 3 E. coli pathotypes (UPEC, EAEC and MNEC). Phylogenetic analysis based on the determination of phylogroups and sequence type (ST) were carried out. UPEC genetic predictors were detected in more than 70% of the strains. EAEC molecular predictors (aatA and aggR) were detected in only 2.4% (9/377) of the strains that were recovered from two cases of UTI and from one case of US. UPEC markers were statistically associated with distinct epidemiologic and analytic aspects of the uropathogenesis. The markers fyuA (siderophore system), chuA (siderophore system), vat (vacuolating toxin) and pic (mucinase) were statistically associated (p < 0.05) with community-onset infections. Strains positive for csgA (curli fimbria), chuA (siderophore system) or ag43 (aggregation adhesin) were associated with urosepsis cases. pap-positive strains were associated with pyuria (p = 0.000) and the presence of mucous in urine samples (p = 0.003). Strains displaying the genotype fyuA-pap-csgA (p = 0,020) or pap-csgA-ag43 (p = 0.000) were associated with urosepsis cases and were predominant in phylogroup D. Phylogenetic analysis show that two of out three studied hybrid EAEC/UPEC strains were positioned on a characteristic clade of UPEC strains that was shared by strains with phylogroup D and ST3 (phylogroup D-ST3). Another EAEC/UPEC strain was classified as phylogroup A-ST478 and was positioned on a different clade along with a commensal strain. Our findings endorse the genetic heterogeneity displayed by uropathogenic strains showing specific molecular pattern associated with urosepsis cases (strains displaying phylogroup D and genotype fyuA-pap-csgA or pap-csgA-ag43) as well as the participation of hybrid EAEC/UPEC strains from both extraintestinal (phygroup D-ST3) and intestinal lineages as uropathogens.

O Actinobaculum suis é um dos principais micro-organismos relacionados a infecções de trato urinário em fêmeas suínas. As características de crescimento deste agente dificultam o isolamento bacteriano tradicional, o que pode tornar a sua prevalência subestimada. Este estudo teve por objetivos desenvolver a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção do A. suis, avaliar a sensibilidade e especificidade desta técnica e comparar seu desempenho com o isolamento bacteriano. Além disso, as cepas isoladas foram caracterizadas através do polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados (AFLP) e submetidas à determinação da concentração inibitória mínima para caracterização dos perfis de susceptibilidade antimicrobiana. Foram analisados 45 suabes prepuciais de machos e 192 urinas de fêmeas suínas provenientes de três granjas. Os resultados indicaram que a PCR desenvolvida foi específica para o A. suis e apresentou limiar de detecção entre 1,0 X 101 UF/mL e 1,0 X 102 UFC/mL. A frequência de A. suis encontrada através da PCR foi de 82,2% (37/45) nos suabes prepuciais e de 8,9% (17/192) nas urinas de fêmeas. No que se refere ao isolamento, nenhuma das amostras de urina foi positiva para o agente, enquanto 31,1% (14/45) dos suabes foram positivos. A partir das amostras positivas isoladas dos suabes prepuciais foram selecionadas 20 cepas de A. suis. Os perfis de susceptibilidade entre estas cepas foram semelhantes, no entanto diferiram dos isolados utilizados como controle e provenientes de uma fêmea com infecção urinária. A técnica de PCR foi mais eficiente que o isolamento na identificação de amostras positivas para A. suis. Através do AFLP com uma única enzima foi possível caracterizar todos os isolados e relacionar os dados obtidos com a origem das cepas e o perfil de resistência. Até o presente não há relatos na literatura de caracterização genotípica de A. suis através do AFLP ou detecção do agente através da PCR. / Actinobaculum suis is an important agent related to urinary infection in swine females. The growth characteristics of this agent hamper the traditional bacterial isolation, which can make their prevalence underestimated. The purpose of this study was to develop the polymerase chain reaction (PCR) for Actinobaculum suis detection, to evaluate the sensitivity and specificity of this technique and compare the results with bacterial isolation. Moreover, the isolates were characterized by amplified fragment length polymorphism (AFLP) and subjected to determination of minimum inhibitory concentration for characterization of the antimicrobial susceptibility profiles. Forty-five preputial swabs from boars and a hundred and ninety-two urine samples from sows of three herds were analyzed. The results indicate that the developed PCR was specific for A. suis, presenting a limit detection between 1.0 X 101 UFC/ml and 1.0 X 102 UFC/ml. A.suis frequency by PCR was 82.2% (37/45) in male preputial swabs and 8.9% (17/192) in females urine. Through traditional isolation, none of the urine samples were positive, while A.suis growing was observed in 31.1% (14/45) of the swabs. From the positive samples of the preputial swabs were selected 20 A.suis strains. The susceptibility profiles among these strains were similar, but differed from the female isolates used as control. The PCR technique was more effective than isolation for the A.suis detection. The AFLP with a single enzyme was able to characterize all isolates and relate the data obtained with the strains origin and resistance profile. Until present, there are no reports of genotypic characterization of A. suis strains through AFLP or agent detection by PCR.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-04-05T15:41:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bianca Silva Vieira de Souza - 2018.pdf: 1725073 bytes, checksum: 7c51424462ee34f86259c875516fd2ef (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-04-06T12:12:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bianca Silva Vieira de Souza - 2018.pdf: 1725073 bytes, checksum: 7c51424462ee34f86259c875516fd2ef (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-06T12:12:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bianca Silva Vieira de Souza - 2018.pdf: 1725073 bytes, checksum: 7c51424462ee34f86259c875516fd2ef (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Staphylococcus saprophyticus is a coagulase negative bacteria that is part of the human microbiota and may also be present in surfaces, food and the environment. It can act as a pathogen causing urinary tract infections (UTIs) in humans. The ability to capture micro and macro nutrients is related to the ability to survive and establish infection in pathogenic microorganisms. One of the micronutrients is iron, which can be acquired by microorganisms through secret siderophores or iron-reducing system on the cell surface. When S. saprophyticus infection is initiated the bacteria causes changes in the medium, resulting in a change in the pH of the urine. Iron can be found in soluble form (Fe 2+) in higher concentration at acid pH, and insoluble (Fe 3+) in higher concentration at basic pH. In this study, the proteomic profile of S. saprophyticus when grown at acidic and basic pH was evaluated. The results demonstrate that S. saprophyticus respond to the instances of modulating the pH of proteins related to iron metabolism. A siderophores production capacity by S. saprophyticus was also investigated after culturing in minimal SSD medium without iron. The results demonstrate that this bacteria produces siderophores of the carboxylate type when cultivated in the absence of iron. Phagocytosis assays in macrophages demonstrate that S. saprophyticus is more susceptible to death after infection when they are deprived of iron, demonstrating that this element is important to ensure infection. The present study increased the knowledge of the proteomic and metabolic flexibility of S. saprophyticus in response to extracellular iron levels. / Staphylococcus saprophyticus é uma bactéria coagulase negativa que faz parte da microbiota humana, podendo tambémser encontrado em superfícies, alimentos e meio ambiente. Pode atuar como patógeno causando infecções de trato-geniturinário (ITU) em seres humanos. A capacidade de captar micro e macro nutrientes está relacionada com a habilidade de sobrevivência e estabelecimento de infecção em microrganismos patogênicos. Uma desses micronutrientes é o ferro, que pode ser adquirido por microrganismos através de sideróforos secretados ou sistema redutor de ferro na superfície celular. Quando a infecção por S. saprophyticus é iniciada a bactéria ocasiona mudanças no meio, tendo como consequência a variação do pH da urina. O ferro pode ser encontrado na forma solúvel (Fe 2+) em maior concentração em pH ácido, e insolúvel (Fe3+) em maior concentração em pH básico. Neste estudo o perfil proteômico de S. saprophyticus quando cultivado em pH ácido e básico foi avaliado. Os resultados demonstram que S. saprophyticus responde às alterações de pH modulando proteínas relacionadas ao metabolismo de ferro. Foi investigada também a capacidade de produção de sideróforos por S. saprophyticus após cultivo em meio mínimo SSD sem ferro. Os resultados demonstram que esta bactéria produz sideróforos do tipo carboxilato quando cultivado na ausência de ferro. Ensaios de fagocitose em macrófagos demonstram que S. saprophyticus é mais suscetível à morte após infecção quando previamente privado de ferro, demonstrando que este elemento é importante para garantir a infecção. O presente estudo amplia o conhecimento da flexibilidade proteômica e metabólica de S. saprophyticus em resposta às alterações de níveis de ferro extracelular.

Introdução: As Infecções no trato urinário (ITU) estão entre as doenças infecciosas mais comumente diagnosticadas e são responsáveis por uma grande proporção do consumo de agentes antimicrobianos, sendo a Escherichia coli o microorganismo mais freqüentemente envolvido. Os antimicrobianos utilizados no tratamento das ITU sofrem concentração no processo de eliminação, ocasionando altos níveis de antimicrobiano na urina. No entanto, os testes que avaliam a susceptibilidade aos antimicrobianos são baseados em concentrações séricas. Assim, é de interesse a padronização de um teste que utilize níveis urinários (discos de alta potência) dos antimicrobianos frente aos uropatógenos. Objetivo: padronizar teste de susceptibilidade aos antimicrobianos para E. coli de ITU, com concentrações de antimicrobianos atingidas na urina. Métodos: foram utilizados 204 isolados bacterianos resistentes a pelo menos um dos seguintes antimicrobianos: ampicilina, cefalotina, ciprofloxacino, gentamicina, sulfametoxazol-trimetoprima(cotrimoxazol) para os quais foi determinada a MIC através de diluição em agar. Através da análise das MIC obtidas e das concentrações que os antimicrobianos atingem na urina, foram estabelecidas as concentrações dos discos de alta concentração. As seguintes concentrações de disco foram utilizadas: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotina (200, 100 μg) e ciprofloxacino (200, 150 μg). Resultados: a ampicilina apresentou MIC ≥ 512μg/mL para cerca de 50% dos isolados. Dos discos testados, o de 500 μg mostrou melhor coeficiente de correlação de Spearman (rs: -0,659) e foi escolhido para a determinação do ponto de corte através de curva ROC (receiver operating characteristic). Pela curva, um diâmetro de halo de 9 mm separaria as amostras resistentes (R) das susceptíveis (S) a altos níveis de ampicilina com 100% de sensibilidade e especificidade de 50%. A cefalotina apresentou MIC inferior a 256μg/mL para 78% dos isolados sendo que o “rs” para os discos de 100 e 200 μg foi o mesmo: -0,744. Pela curva ROC, halos de 17mm (disco de 200μg) e 13mm (disco de 100μg) discriminariam amostras R de S com 100% de sensibilidade e 96,9% de especificidade. O ciprofloxacino apresentou MIC ≤ 128 μg/mL para mais de 50% dos isolados, sendo que o “rs” foi melhor com o disco de 200μg (rs:-0,916). Um halo de 21mm separaria as amostras S e R com 100% de sensibilidade e 78,9% de especificidade. Para o cotrimoxazol, 95% das amostras se mostraram resistentes a altos níveis e os testes com disco de alta potência não foram realizados. Para a gentamicina o baixo nº de amostras (n=22) prejudicou a análise, mas cerca de 63% dos isolados seriam susceptíveis a altos níveis. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o uso de discos de alta concentração pode ser útil para avaliar a susceptibilidade de isolados urinários. Isto tem importância em laboratórios clínicos onde, embora haja dificuldade na realização da MIC, testes de disco-difusão estão incorporados na rotina. / Introduction: The urinary tract infections (UTI) are among the most common infectious diseases and are responsible for a high antimicrobial usage. The Escherichia coli is the main microorganism involved in UTI. The antimicrobials used for treatment of UTI concentrate in the urinary tract and this leads to high levels of them in the urine. However, the susceptibility tests are based on the serum levels of the antimicrobials. Therefore, it is of interest to develop a test which correlates the urinary levels of antibiotics (discs with high levels) with the uropathogens. Objective: to propose a susceptibility test of E. coli from UTI using doses of the antimicrobials reached in the urine. Methods: a total of 204 clinical isolates of E.coli resistant, according to conventional antimicrobial susceptibility test to, at least, one of the following antimicrobials: ampicillin, cefalotin, ciprofloxacin, gentamicin and trimetoprima- sulfametoxazol. The MIC was determined by the agar dilution technique. According to the results of the MICs and the urinary levels of the antimicrobials it was possible to establish the concentration of the high potency discs. The following concentration of discs were used: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotin (200, 100 μg) and ciprofloxacin (200, 150 μg). Results: ampicillin presented MIC ≥ 512μg/mL for around 50% of E. coli isolates. The disc containing 500 μg of ampicillin displayed the best coeficient of correlation (rs: -0,659) and it was chosen to establish diameter breakpoint according to the ROC curve. A diameter of 9 mm would discriminate high level ampicillin resistant isolates with 100% and 50% of sensitivity and specificity, respectively. Cefalotin presented MIC below 256 μg/mL for 78% of E. coli isolates. Its “rs” for discs containing 100 and 200μg was the same: - 0,744. According to the ROC curve zone diameters of 17mm (disk of 200μg) e 13mm (disk of 100μg) were able to discriminate isolates resistant with 100% and 96.9% of sensitivity and specificity, respectively. Ciprofloxacin presented MIC ≤ 128 μg/mL for more than 50% of isolates and the best “rs” was achieved with the 200μg (r:-0,916) disk. A zone diameter of 21mm would discriminate susceptible isolates with 100% and 78.9% of sensitivity and specificity. respectively. A total of 95% of E. coli isolates proved to be resistant to high levels of cotrimoxazole and, therefore, tests with high potency disks were not performed. Due to the small numbers of isolates resistant to gentamycin (n=22) we were not able to perform further analysis although 63% of E coli isolates proved to be susceptible to high levels of this antimicrobial. Conclusion: This study indicated that the susceptibility test with disks containing high levels of antimicrobials may be useful to evaluate the susceptibility of urinary tract isolates This may be of importance as the clinical laboratory may not be able to perform the MIC test for routine isolates.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:23:33Z : No. of bitstreams: 1 feitosa_dca_me_botfm.pdf: 543769 bytes, checksum: c2e2d554f89a0f563903448bfcc98985 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Ministério da Saúde / Hospital Das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu / Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo / Alterações anatômicas e fisiológicas da gravidez predispõem gestantes a infecções do trato urinário (ITU). O não tratamento ou o tratamento inadequado dessas infecções pode levar a complicações obstétricas e neonatais, como amniorexe prematura, trabalho de parto e parto prematuros. Considerando a relevância das complicações, a possibilidade de ocorrência de bacteriúria assintomática e a demora para obtenção do resultado da urocultura, padrão-ouro para diagnóstico de ITU, muitos profissionais optam por iniciar o tratamento de ITU em gestantes, caso o exame de urina simples mostre-se alterado, mesmo na ausência de sinais clínicos inequívocos. Identificar a acurácia do exame de urina simples para diagnóstico de infecção do trato urinário em gestantes de baixo risco. Material e Método: Foi realizado estudo analítico e transversal no município de Botucatu/SP. A propedêutica de atendimento incluiu a realização do exame de urina simples e urocultura, os dados foram colhidos de outubro de 2006 a março de 2008 nos serviços de atenção básica. Resultados: Foram incluídas no estudo 230 gestantes, com mediana de idade de 25,2 anos (14 - 43), 79,2% casadas ou em união estável. A prevalência de ITU foi de 10%, sendo o microrganismo de maior freqüência a Escherichia coli (47,8%). A sensibilidade foi 95,6% e a especificidade 63,3% do exame de urina simples em relação ao diagnóstico de ITU. A acurácia foi de 66,5%. A análise dos valores preditivos positivo e negativo (VPP e VPN) mostrou que na vigência de exame de urina simples normal, a chance de haver ITU foi pequena (VPN 99,2%), frente ao resultado alterado deste exame, a probabilidade de haver ITU foi baixa (VPP 22,4%). Conclui-se que a acurácia do exame de urina simples como meio diagnóstico de infecção urinária foi baixa; alterações no exame de urina simples, mesmo na presença... / Anatomic and physiological alterations during pregnancy predispose pregnant women to urinary tract infections (UTI). Poor treatment or no treatment at all of these infections may lead to neonatal and obstetric complications like premature amniorexis, premature labor and delivery. Considering complications relevance and the possibility of asymptomatic bacteriuria occurrence and the delay from uroculture results, gold standard for UTI diagnosis, many professionals choose to begin UTI treatment in the pregnant woman, if simple urine examination is altered even in the absence of clear clinical signals. Objective: Identify simple urine examination accuracy to diagnose urinary tract infection in low risk pregnant women. Material and Methods: An analytical and transversal study was performed in Botucatu/SP. The service began with simple urine examination and uroculture, data collected from October 2006 to March 2008 in the basic health service. Results: 230 pregnant women were included in the study with an average age of 25,2 years (14 - 43), 79,2% married or under stable relationship. UTI prevalence was 10%, Escherichia coli as a more frequent organism (47, 8%). Sensitiveness was 95,6% and specificity 63,3% of simple urine examination related to UTI diagnosis. Accuracy was 66,5%. The analysis of predictive positive and negative values (PPV e NPV) showed that during a normal and simple urine examination UTI occurrence was lower (NPV 99,2%), against the altered result of this examination the likely of UTI occurrence was low (PPV 22,4%). One conclude that simple urine examination accuracy as a way of urinary infection diagnosis was low; alterations in simple urine examination, even in the presence of clinical signals do not necessarily means UTI and uroculture is extremely necessary for a right diagnosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-07Bitstream added on 2014-06-13T20:11:38Z : No. of bitstreams: 1 meister_ar_me_jabo.pdf: 286547 bytes, checksum: e9bc3ab4d6f06ec0fdb7ea88faaca642 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As infecções urinárias (IU) em porcas estão entre as principais causas de falhas reprodutivas que influem na produtividade do rebanho, proporcionando grandes prejuízos econômicos. No presente trabalho foram testados dois acidificantes urinários - o ácido cítrico e o cloreto de amônio e cloreto de sódio, de modo a comparar a atividade destes produtos, no controle de cistites em matrizes suínas. Utilizaram-se 53 porcas adultas, gestantes ou não, de linhagens comerciais, portadoras ou não de cistite, sendo identificados os animais sadios ou afetados com base nos resultados de urinálises e cultivos bacterianos. O primeiro ensaio foi constituído de duas fases - fase 1 - realizada com 25 fêmeas em início de gestação (20 com cistite e 5 sadias), alimentadas com ração de gestação e fase 2 - realizada com 20 animais em final de gestação (16 com cistite e 4 sadias), alimentadas com ração de lactação. O pH, a densidade e a contagem bacteriana nas amostras de urina foram as variáveis estudadas. No segundo ensaio foram utilizadas 8 porcas, todas com cistite e não gestantes. A quatro delas administrou-se ração com cloreto de amônio e outras quatro receberam ração não suplementada com o produto. Avaliou-se o consumo de água, a produção de urina, os pH da urina e do sangue. Os resultados demonstraram que o ácido cítrico determinou diminuição do número de unidades formadoras de colônias, porém não interferiu no pH e densidade urinária dos animais. O cloreto de amônio reduziu o pH urinário demonstrando ação acidificante mesmo colhendo a urina 24 horas após o arraçoamento, porém não interferiu nas densidade e contagem bacteriana. Com relação o cloreto de sódio (1,5% ou 52,5 g/Kg de ração) não se observou qualquer efeito sobre os parâmetros estudados (pH urinário, densidade e contagem bacteriana). / The urinary infections(IU) in sows are among the main causes of reproductive imperfections that influence in the productivity of the flock, providing great economic damages. In the present work two acidifiers were tested out - acid citric and the chloride of ammonium and sodium chloride, in order to compare the activity of these products, in orther to control the cystitis in swine. 53 adult, pregnants and non pregnant sows were used , of tradeable ancestries, bearing, donþt bearing cystitis being identified the healthy or affected animals on the basis of the bacterial results of urinalysis culture. The first assay was carried out into two phases - phase 1 - carried through with 25 females in theirs early gestation (20 with cystitis and 5 healthy ones), fed gestation diet and phase 2 - carried through with 20 animals in gestation end (16 with cystitis and 4 healthy ones), fed with lactation ration. pH, the density and the number of CFUs in the urinary samples were the studied. As the assay 8 sows had been held envolving, all cystitis and not pregnant. Four out of 8 sows were fed with chrolide ammonium based rations. The remnants 4 were fed with no supplemented feed. The consumption of water, urinary output, urinary pH and the blood were also evaluated. The results showed that the citric acid determined a decrease in the CFU. However, it didnþt interfere at both pH and urinary density in the animals. The ammonium chloride reduced the urinary pH showing acidifying action even while collecting the urine after a period of 24 hours after the feeding time. Both density and CFU were not changed. Regarding the sodium chloride (1.5% or 52.5g/kg) nothing was found out within the complying parameters (pH urinary, dendity and CFU).

Introdução: As Infecções no trato urinário (ITU) estão entre as doenças infecciosas mais comumente diagnosticadas e são responsáveis por uma grande proporção do consumo de agentes antimicrobianos, sendo a Escherichia coli o microorganismo mais freqüentemente envolvido. Os antimicrobianos utilizados no tratamento das ITU sofrem concentração no processo de eliminação, ocasionando altos níveis de antimicrobiano na urina. No entanto, os testes que avaliam a susceptibilidade aos antimicrobianos são baseados em concentrações séricas. Assim, é de interesse a padronização de um teste que utilize níveis urinários (discos de alta potência) dos antimicrobianos frente aos uropatógenos. Objetivo: padronizar teste de susceptibilidade aos antimicrobianos para E. coli de ITU, com concentrações de antimicrobianos atingidas na urina. Métodos: foram utilizados 204 isolados bacterianos resistentes a pelo menos um dos seguintes antimicrobianos: ampicilina, cefalotina, ciprofloxacino, gentamicina, sulfametoxazol-trimetoprima(cotrimoxazol) para os quais foi determinada a MIC através de diluição em agar. Através da análise das MIC obtidas e das concentrações que os antimicrobianos atingem na urina, foram estabelecidas as concentrações dos discos de alta concentração. As seguintes concentrações de disco foram utilizadas: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotina (200, 100 μg) e ciprofloxacino (200, 150 μg). Resultados: a ampicilina apresentou MIC ≥ 512μg/mL para cerca de 50% dos isolados. Dos discos testados, o de 500 μg mostrou melhor coeficiente de correlação de Spearman (rs: -0,659) e foi escolhido para a determinação do ponto de corte através de curva ROC (receiver operating characteristic). Pela curva, um diâmetro de halo de 9 mm separaria as amostras resistentes (R) das susceptíveis (S) a altos níveis de ampicilina com 100% de sensibilidade e especificidade de 50%. A cefalotina apresentou MIC inferior a 256μg/mL para 78% dos isolados sendo que o “rs” para os discos de 100 e 200 μg foi o mesmo: -0,744. Pela curva ROC, halos de 17mm (disco de 200μg) e 13mm (disco de 100μg) discriminariam amostras R de S com 100% de sensibilidade e 96,9% de especificidade. O ciprofloxacino apresentou MIC ≤ 128 μg/mL para mais de 50% dos isolados, sendo que o “rs” foi melhor com o disco de 200μg (rs:-0,916). Um halo de 21mm separaria as amostras S e R com 100% de sensibilidade e 78,9% de especificidade. Para o cotrimoxazol, 95% das amostras se mostraram resistentes a altos níveis e os testes com disco de alta potência não foram realizados. Para a gentamicina o baixo nº de amostras (n=22) prejudicou a análise, mas cerca de 63% dos isolados seriam susceptíveis a altos níveis. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o uso de discos de alta concentração pode ser útil para avaliar a susceptibilidade de isolados urinários. Isto tem importância em laboratórios clínicos onde, embora haja dificuldade na realização da MIC, testes de disco-difusão estão incorporados na rotina. / Introduction: The urinary tract infections (UTI) are among the most common infectious diseases and are responsible for a high antimicrobial usage. The Escherichia coli is the main microorganism involved in UTI. The antimicrobials used for treatment of UTI concentrate in the urinary tract and this leads to high levels of them in the urine. However, the susceptibility tests are based on the serum levels of the antimicrobials. Therefore, it is of interest to develop a test which correlates the urinary levels of antibiotics (discs with high levels) with the uropathogens. Objective: to propose a susceptibility test of E. coli from UTI using doses of the antimicrobials reached in the urine. Methods: a total of 204 clinical isolates of E.coli resistant, according to conventional antimicrobial susceptibility test to, at least, one of the following antimicrobials: ampicillin, cefalotin, ciprofloxacin, gentamicin and trimetoprima- sulfametoxazol. The MIC was determined by the agar dilution technique. According to the results of the MICs and the urinary levels of the antimicrobials it was possible to establish the concentration of the high potency discs. The following concentration of discs were used: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotin (200, 100 μg) and ciprofloxacin (200, 150 μg). Results: ampicillin presented MIC ≥ 512μg/mL for around 50% of E. coli isolates. The disc containing 500 μg of ampicillin displayed the best coeficient of correlation (rs: -0,659) and it was chosen to establish diameter breakpoint according to the ROC curve. A diameter of 9 mm would discriminate high level ampicillin resistant isolates with 100% and 50% of sensitivity and specificity, respectively. Cefalotin presented MIC below 256 μg/mL for 78% of E. coli isolates. Its “rs” for discs containing 100 and 200μg was the same: - 0,744. According to the ROC curve zone diameters of 17mm (disk of 200μg) e 13mm (disk of 100μg) were able to discriminate isolates resistant with 100% and 96.9% of sensitivity and specificity, respectively. Ciprofloxacin presented MIC ≤ 128 μg/mL for more than 50% of isolates and the best “rs” was achieved with the 200μg (r:-0,916) disk. A zone diameter of 21mm would discriminate susceptible isolates with 100% and 78.9% of sensitivity and specificity. respectively. A total of 95% of E. coli isolates proved to be resistant to high levels of cotrimoxazole and, therefore, tests with high potency disks were not performed. Due to the small numbers of isolates resistant to gentamycin (n=22) we were not able to perform further analysis although 63% of E coli isolates proved to be susceptible to high levels of this antimicrobial. Conclusion: This study indicated that the susceptibility test with disks containing high levels of antimicrobials may be useful to evaluate the susceptibility of urinary tract isolates This may be of importance as the clinical laboratory may not be able to perform the MIC test for routine isolates.

Introdução: As Infecções no trato urinário (ITU) estão entre as doenças infecciosas mais comumente diagnosticadas e são responsáveis por uma grande proporção do consumo de agentes antimicrobianos, sendo a Escherichia coli o microorganismo mais freqüentemente envolvido. Os antimicrobianos utilizados no tratamento das ITU sofrem concentração no processo de eliminação, ocasionando altos níveis de antimicrobiano na urina. No entanto, os testes que avaliam a susceptibilidade aos antimicrobianos são baseados em concentrações séricas. Assim, é de interesse a padronização de um teste que utilize níveis urinários (discos de alta potência) dos antimicrobianos frente aos uropatógenos. Objetivo: padronizar teste de susceptibilidade aos antimicrobianos para E. coli de ITU, com concentrações de antimicrobianos atingidas na urina. Métodos: foram utilizados 204 isolados bacterianos resistentes a pelo menos um dos seguintes antimicrobianos: ampicilina, cefalotina, ciprofloxacino, gentamicina, sulfametoxazol-trimetoprima(cotrimoxazol) para os quais foi determinada a MIC através de diluição em agar. Através da análise das MIC obtidas e das concentrações que os antimicrobianos atingem na urina, foram estabelecidas as concentrações dos discos de alta concentração. As seguintes concentrações de disco foram utilizadas: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotina (200, 100 μg) e ciprofloxacino (200, 150 μg). Resultados: a ampicilina apresentou MIC ≥ 512μg/mL para cerca de 50% dos isolados. Dos discos testados, o de 500 μg mostrou melhor coeficiente de correlação de Spearman (rs: -0,659) e foi escolhido para a determinação do ponto de corte através de curva ROC (receiver operating characteristic). Pela curva, um diâmetro de halo de 9 mm separaria as amostras resistentes (R) das susceptíveis (S) a altos níveis de ampicilina com 100% de sensibilidade e especificidade de 50%. A cefalotina apresentou MIC inferior a 256μg/mL para 78% dos isolados sendo que o “rs” para os discos de 100 e 200 μg foi o mesmo: -0,744. Pela curva ROC, halos de 17mm (disco de 200μg) e 13mm (disco de 100μg) discriminariam amostras R de S com 100% de sensibilidade e 96,9% de especificidade. O ciprofloxacino apresentou MIC ≤ 128 μg/mL para mais de 50% dos isolados, sendo que o “rs” foi melhor com o disco de 200μg (rs:-0,916). Um halo de 21mm separaria as amostras S e R com 100% de sensibilidade e 78,9% de especificidade. Para o cotrimoxazol, 95% das amostras se mostraram resistentes a altos níveis e os testes com disco de alta potência não foram realizados. Para a gentamicina o baixo nº de amostras (n=22) prejudicou a análise, mas cerca de 63% dos isolados seriam susceptíveis a altos níveis. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o uso de discos de alta concentração pode ser útil para avaliar a susceptibilidade de isolados urinários. Isto tem importância em laboratórios clínicos onde, embora haja dificuldade na realização da MIC, testes de disco-difusão estão incorporados na rotina. / Introduction: The urinary tract infections (UTI) are among the most common infectious diseases and are responsible for a high antimicrobial usage. The Escherichia coli is the main microorganism involved in UTI. The antimicrobials used for treatment of UTI concentrate in the urinary tract and this leads to high levels of them in the urine. However, the susceptibility tests are based on the serum levels of the antimicrobials. Therefore, it is of interest to develop a test which correlates the urinary levels of antibiotics (discs with high levels) with the uropathogens. Objective: to propose a susceptibility test of E. coli from UTI using doses of the antimicrobials reached in the urine. Methods: a total of 204 clinical isolates of E.coli resistant, according to conventional antimicrobial susceptibility test to, at least, one of the following antimicrobials: ampicillin, cefalotin, ciprofloxacin, gentamicin and trimetoprima- sulfametoxazol. The MIC was determined by the agar dilution technique. According to the results of the MICs and the urinary levels of the antimicrobials it was possible to establish the concentration of the high potency discs. The following concentration of discs were used: ampicilina (500, 400, 300 μg), cefalotin (200, 100 μg) and ciprofloxacin (200, 150 μg). Results: ampicillin presented MIC ≥ 512μg/mL for around 50% of E. coli isolates. The disc containing 500 μg of ampicillin displayed the best coeficient of correlation (rs: -0,659) and it was chosen to establish diameter breakpoint according to the ROC curve. A diameter of 9 mm would discriminate high level ampicillin resistant isolates with 100% and 50% of sensitivity and specificity, respectively. Cefalotin presented MIC below 256 μg/mL for 78% of E. coli isolates. Its “rs” for discs containing 100 and 200μg was the same: - 0,744. According to the ROC curve zone diameters of 17mm (disk of 200μg) e 13mm (disk of 100μg) were able to discriminate isolates resistant with 100% and 96.9% of sensitivity and specificity, respectively. Ciprofloxacin presented MIC ≤ 128 μg/mL for more than 50% of isolates and the best “rs” was achieved with the 200μg (r:-0,916) disk. A zone diameter of 21mm would discriminate susceptible isolates with 100% and 78.9% of sensitivity and specificity. respectively. A total of 95% of E. coli isolates proved to be resistant to high levels of cotrimoxazole and, therefore, tests with high potency disks were not performed. Due to the small numbers of isolates resistant to gentamycin (n=22) we were not able to perform further analysis although 63% of E coli isolates proved to be susceptible to high levels of this antimicrobial. Conclusion: This study indicated that the susceptibility test with disks containing high levels of antimicrobials may be useful to evaluate the susceptibility of urinary tract isolates This may be of importance as the clinical laboratory may not be able to perform the MIC test for routine isolates.