Os melanomas correspondem a 7% de todas as neoplasias malignas em cães e são principalmente encontrados em cavidade oral e lábios, correspondendo a 33% dos tumores de boca, possuem um prognóstico ruim devido ao fato de serem diagnosticados tardiamente, por sua grande capacidade de invasão local e formação de metástases, além de altas taxas de recidiva após o tratamento cirúrgico. A Galectina-3 (Gal-3) é uma proteína responsável por diversas funções fisiológicas como adesão, apoptose, angiogênese, proliferação e diferenciação. Em medicina veterinária existem poucos estudos relacionando à expressão da Gal-3 com prognóstico e a progressão da neoplasia. Realizamos imuno-histoquímica para Gal-3 em 27 melanomas orais caninos que foram avaliados de maneira semiquantitativa e quantitativa, e comparamos os resultados obtidos com a sobrevida, outros marcadores prognósticos (Ki67, índice mitótico e atipia nuclear), expressão de proteínas relacionadas à apoptose (BCL2 e CASP3) e parâmetros histopatológicos (grau de pigmentação e tipo histológico). Detectamos alta expressão de Gal-3 em melanomas com maior sobrevida pós-cirúrgica e uma alta expressão nuclear de Gal-3 em melanomas com menor sobrevida pós-cirúrgica. Além disso, houve correlação entre as expressões de Gal-3 e BCL2, assim como entre atipia nuclear e sobrevida pós-cirúrgica. É sabido que a Gal-3 é capaz de formar heterodímeros com a BCL2 no citoplasma para atuar na evasão da morte por apoptose, impedindo a liberação da citocromo C. Já no núcleo, a Gal-3 induz à parada do ciclo celular, reduzindo a taxa da proliferação. Apesar do reduzido número amostral devido à dificuldade nos acompanhamentos clínicos nossos dados permitem sugerir que a Gal-3 é possui potencial para ser um marcador prognóstico de sobrevida em casos de melanomas orais caninos. Novos estudos devem ser realizados afim de confirmar nossas observações e elucidar o papel da Gal-3 nesta neoplasia. / Melanomas are almost 7% of all malignant neoplasms in dogs. They are mainly found in the oral cavity and lips, corresponding to 33% of tumors of the oral cavity. They carry a poor prognosis because of late diagnoses, local invasiveness, high metastatic and recurrence rates after surgical treatment. Galectin-3 (Gal-3) is a protein with a variety of biological roles such as in adhesion, apoptosis, angiogenesis, proliferation and differentiation. In veterinary medicine, there are few studies comparing the expression of Gal-3 with prognosis and tumor progression. We performed immunohistochemistry for Gal-3 in 27 canine oral melanomas and evaluated the immunolabelling both semi-quantitatively and quantitatively. The results were compared with survival, other prognostic markers (Ki67, mitotic index and nuclear atypia), expression of proteins related to apoptosis (BCL2 and CASP3) and histopathological parameters (degree of pigmentation and histological type). We detected higher expression of Gal-3 in cases of melanoma that presented longer post-surgical survival and a higher nuclear expression of Gal-3 in dogs with melanoma that had shorter post-surgical survival. In addition, there was correlation between the Gal-3 and BCL2 expressions, as well as between nuclear atypia and post-surgical survival. It is known that Gal-3 is able to form heterodimers with BCL2 in the cytoplasm leading to evasion of apoptosis, through preventing mitochondrial cytochrome C release. Nuclear Gal-3 induces the cell cycle arrest, reducing the proliferation rate. Despite the small sample size due to the difficulty in clinical follow-up, our data suggest that Gal-3 has the potential to be a prognostic marker for survival in cases of canine oral melanomas. Further studies should be performed to confirm our observations and elucidate the role of Gal-3 in this neoplasm.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T15:51:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoImunohistoquimicaAtividade.PDF: 1932325 bytes, checksum: 69c3e8a8eb0bb294e0d6240088b6bbb0 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2014-03-10T16:23:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_AvaliacaoImunohistoquimicaAtividade.PDF: 1932325 bytes, checksum: 69c3e8a8eb0bb294e0d6240088b6bbb0 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-10T16:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_AvaliacaoImunohistoquimicaAtividade.PDF: 1932325 bytes, checksum: 69c3e8a8eb0bb294e0d6240088b6bbb0 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2008 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve por objetivo avaliar a correlação entre a atividade de macrófagos e a apoptose nas formas polares da hanseníase. Para tal foram analisadas amostras constituídas de 29 biopsias de pele de pacientes com as formas polares da hanseníase. Para a medida da atividade macrofágica e da apoptose, utilizou-se o método imunohistoquímico, visando os marcadores lisozima, CD68, iNOS (para atividade de macrófago) e caspase 3 (para apoptose). No tratamento estatístico, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney e a Correlação linear de Spearman. Os resultados obtidos sugerem que a taxa de apoptose sofre influência direta da atividade macrofágica nas lesões de pacientes TT, contudo nas lesões LL, notou-se que outros fatores devem estar induzindo a morte celular programada, possivelmente o TGF-β. / The present study had for objective to evaluate the correlation between the activity of macrophage and the apoptosis in the polar forms of the leprosy. For such constituted samples of 29 biopsies of patients' skin were analyzed with the polar forms of the leprosy. For the measure of the activity of macrophage and of the apoptosis, the method immunohistochemistry was used, seeking the markers lysozyme, CD68, iNOS (for activity of macrophage) and caspase 3 (for apoptosis). In the statistical treatment, it was used the test non parametric of Mann-Whitney and the lineal Correlation of Spearman. Do the obtained results suggest that the apoptosis rate suffers direct influence of the activity of macrophages in the lesions of patient TT, however in the lesions what was LL, noticed other factors they must it is inducing the programmed cellular death, possibly TGF-β.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-06-22T19:27:40Z No. of bitstreams: 1 TES_TALITA_CARNEIRO_BRANDAO_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 639031 bytes, checksum: 5fa4cd79fd277a716b47890fcca5b580 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T19:27:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_TALITA_CARNEIRO_BRANDAO_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 639031 bytes, checksum: 5fa4cd79fd277a716b47890fcca5b580 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / First identified in Saccharomyces ceresvisie, the sirtuins (SIRTs) are a diverse family of histones deacilases that act as deacetilases, ADP-ribosil transferases, desuccinilases and demalonilases; using nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) as co-substrate. Their regulatory involvement targeting histones, structural proteins and transcription factors implicate them in a broad range of biological processes and raised promising roles as therapeutic targets in apoptosis, oxidative stress and inflammation, among many others. These processes in turn, can be easily modeled in zebrafish (Danio rerio), a model organism with great developmental, genetic and economical advantages. Despite growing interest in this fresh water teleost as model organism and the regulatory and therapeutical potential of sirtuins in inflammation and associated processes, next to nothing is known about sirtuins in zebrafish. In order to contribute to this scenario and accelerate zebrafish potential as screening platform for sirtuins modulators, this work aimed to characterize sirtuins roles in a copper-induced inflammation model in zebrafish larvae. Alterations in locomotor behavior, sirtuin-related genes expression pattern and gene expression of inflammation, oxidative stress and apoptosis markers were observed after copper exposure. In order to further evaluate SIRT1 contribution to this scenario, a SIRT1 knockout line was developed using CRISPR-Cas9 technology, which showed an exarcebated inflammatory response after copper exposures. Additional studies will help to elucidate sirtuin roles in inflammation and associated processes, taking advantage of zebrafish?s translational potential. / Inicialmente identificadas em Saccharomyces cerevisie como reguladores de silenciamento de informa??o, as sirtu?nas (SIRTs) s?o uma diversa fam?lia de histonas desacilases da classe III (HDACs) que atuam como desacetilases, mono-ADP-ribosil transferases, desuccinilases e demalonilases; todas dependentes de nicotinamida adenina dinucleot?deo (NAD+). Presentes em todos os dom?nios de vida e tamb?m em v?rus, as sirtu?nas se tornaram promissores alvos terap?uticos devido seu envolvimento em diversos processos biol?gicos, incluindo apoptose, estresse oxidativo e inflama??o. Estes por sua vez s?o considerados denominadores comuns de diversas patologias e podem ser facilmente estudados utilizando os transl?cidos embri?es e larvas do zebrafish (Danio rerio) como organismo modelo. Apesar do crescente uso deste pequeno tele?steo de ?gua doce em diversas ?reas de estudo, e das sirtu?nas terem um promissor, mas pouco esclarecido, papel em eventos de inflama??o, apoptose e estresse oxidativo, pouco se sabe sobre as sirtu?nas no zebrafish - retardando seu uso como ferramenta de screening de drogas potencialmente moduladoras das SIRTs. Sob este cen?rio, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o papel das sirtu?nas em modelo de inflama??o induzido por sulfato de cobre em larva de zebrafish. Altera??es em comportamento explorat?rio da larva, express?o de genes associados a sirtu?nas, bem como em marcadores de inflama??o, estresse oxidativo e apostose foram observados ap?s a exposi??o ao cobre. Para investigar o papel do mais conhecido e abrangente membro das sirtu?nas, desenvolvemos uma linhagem nocaute para SIRT1 utilizando a tecnologia CRISPR/Cas9, a qual apresentou reposta inflamat?ria exarcebada quando exposta ao cobre. Estudos adicionais neste modelo podem contribuir com descobertas sobre a biologia e modula??o das SIRTs ao usufruir do potencial translacional do zebrafish.

Submitted by DIOGO SOUSA ZANONI (zanoni_19@hotmail.com) on 2019-01-31T11:46:22Z No. of bitstreams: 1 Defesa Doutorado - entrega Pós.pdf: 2160080 bytes, checksum: a016ec7f20ec85dc0433f4452821780e (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Lucia de Grava Kempinas (algkempinas@fca.unesp.br) on 2019-01-31T19:07:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zanoni_ds_dr_botfmvz.pdf: 2160080 bytes, checksum: a016ec7f20ec85dc0433f4452821780e (MD5) / Made available in DSpace on 2019-01-31T19:07:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zanoni_ds_dr_botfmvz.pdf: 2160080 bytes, checksum: a016ec7f20ec85dc0433f4452821780e (MD5) Previous issue date: 2018-12-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O glaucoma é a principal causa global de cegueira irreversível e o número de pessoas com glaucoma em todo o mundo aumentará para 111,8 milhões em 2040, mesmo com os tratamentos vigentes. Deste modo, enseja uma necessidade de desenvolver terapias neuroprotetoras que possam ser usadas para reduzir os efeitos perniciosos do glaucoma, como a morte de células ganglionares da retina (CGR). Avanços na compreensão da fisiopatologia do glaucoma é um fator chave na compreensão da patogênese da neuropatia glaucomatosa. Neste contexto a isquemia retiniana desempenha um papel central em várias doenças da retina. A patogênese da isquemia retiniana envolve alterações temporais da morfologia e morfometria da retina assim como mudanças na expressão gênica e protéica. O Citrato de Sildenafila (SC) mostrou efeito protetor nos modelos de isquemia/reperfusão (I/R) com efeitos neuroprotetores. Contudo, a administração oral de CS, em humanos, encontra inúmeros efeitos colaterais, tais como redução da pressão arterial, dores de cabeça, rubor e congestão nasal são concomitantes, assim como pacientes com moderada a grave doença cardiovascular ou aqueles submetidos a terapia a base de nitrato apresentam riscos secundários aumentados para efeitos cardiovasculares adversos. Deste modo, propomos que a administração tópica de CS pode ser uma alternativa à via oral e também ser igualmente neuroprotetor no glaucoma e podem minimizar os riscos indesejados no uso sistêmico desse fármaco, além de oferecer uma nova abordagem para a intervenção terapêutica na patogênese da neuropatia glaucomatosa. Caso nossos resultados sejam positivos, em um estudo tão abrangente, pode levar a um ensaio clínico deste fármaco seguro e promissor em pacientes com glaucoma. / Glaucoma is the leading global cause of irreversible blindness and the number of people with glaucoma worldwide will increase to 111.8 million by 2040, even with current treatments. Thus, there is a need to develop neuroprotective therapies that can be used to reduce the deleterious effects of glaucoma, such as retinal ganglion cell death (RBC). Advances in understanding the pathophysiology of glaucoma are a key factor in understanding the pathogenesis of glaucomatous neuropathy. In this context, retinal ischemia plays a central role in various diseases of the retina. The pathogenesis of retinal ischemia involves temporal changes in retinal morphology and morphometry as well as changes in gene and protein expression. Sildenafil Citrate (SC) showed protective effect in the ischemia / reperfusion (I / R) models with neuroprotective effects. However, oral administration of CS in humans finds numerous side effects such as reduced blood pressure, headaches, flushing and nasal congestion are concomitant, as well as patients with moderate to severe cardiovascular disease or those undergoing nitrate therapy have increased secondary risks for adverse cardiovascular effects. Thus, we propose that the eye drops administration of CS may be an alternative to the oral route and also be equally neuroprotective in glaucoma and may minimize the undesirable risks in the systemic use of this drug, as well as offer a new approach for the therapeutic intervention in the pathogenesis of neuropathy glaucomatous. If our results are positive, in such a comprehensive study, it may lead to a clinical trial of this safe and promising drug in patients with glaucoma. / 142471\2015-1

Submitted by DIOGO SOUSA ZANONI (zanoni_19@hotmail.com) on 2019-02-01T17:03:15Z No. of bitstreams: 1 Defesa Doutorado - entrega Pós.pdf: 2159159 bytes, checksum: c32db30aea42543516cc0f930e17164d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Lucia de Grava Kempinas (algkempinas@fca.unesp.br) on 2019-02-01T18:10:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zanoni_ds_dr_botfmvz.pdf: 2159159 bytes, checksum: c32db30aea42543516cc0f930e17164d (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-01T18:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zanoni_ds_dr_botfmvz.pdf: 2159159 bytes, checksum: c32db30aea42543516cc0f930e17164d (MD5) Previous issue date: 2018-12-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O glaucoma é a principal causa global de cegueira irreversível e o número de pessoas com glaucoma em todo o mundo aumentará para 111,8 milhões em 2040, mesmo com os tratamentos vigentes. Deste modo, enseja uma necessidade de desenvolver terapias neuroprotetoras que possam ser usadas para reduzir os efeitos perniciosos do glaucoma, como a morte de células ganglionares da retina (CGR). Avanços na compreensão da fisiopatologia do glaucoma é um fator chave na compreensão da patogênese da neuropatia glaucomatosa. Neste contexto a isquemia retiniana desempenha um papel central em várias doenças da retina. A patogênese da isquemia retiniana envolve alterações temporais da morfologia e morfometria da retina assim como mudanças na expressão gênica e protéica. O Citrato de Sildenafila (SC) mostrou efeito protetor nos modelos de isquemia/reperfusão (I/R) com efeitos neuroprotetores. Contudo, a administração oral de CS, em humanos, encontra inúmeros efeitos colaterais, tais como redução da pressão arterial, dores de cabeça, rubor e congestão nasal são concomitantes, / Glaucoma is the leading global cause of irreversible blindness and the number of people with glaucoma worldwide will increase to 111.8 million by 2040, even with current treatments. Thus, there is a need to develop neuroprotective therapies that can be used to reduce the deleterious effects of glaucoma, such as retinal ganglion cell death (RBC). Advances in understanding the pathophysiology of glaucoma are a key factor in understanding the pathogenesis of glaucomatous neuropathy. In this context, retinal ischemia plays a central role in various diseases of the retina. The pathogenesis of retinal ischemia involves temporal changes in retinal morphology and morphometry as well as changes in gene and protein expression. Sildenafil Citrate (SC) showed protective effect in the ischemia / reperfusion (I / R) models with neuroprotective effects. However, oral administration of CS in humans finds numerous side effects such as reduced blood pressure, headaches, flushing and nasal congestion are concomitant, as well as patients with moderate to severe cardiovascular disease or those undergoing nitrate therapy have increased secondary risks for adverse cardiovascular effects. Thus, we propose that the eye drops administration of CS may be an alternative to the oral route and also be equally neuroprotective in glaucoma and may minimize the undesirable risks in the systemic use of this drug, as well as offer a new approach for the therapeutic intervention in the pathogenesis of neuropathy glaucomatous. If our results are positive, in such a comprehensive study, it may lead to a clinical trial of this safe and promising drug in patients with glaucoma. / 142471\2015-1

Orientadores: Ilza Maria Urbano Monteiro, Cristina Laguna Benetti Pinto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-11-07T13:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wolff_LuisPauloGalvao_D.pdf: 1651290 bytes, checksum: b102ec5f367b936722957672ca1edc59 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Introdução: Após a menopausa, o ganho de peso e a distribuição dos depósitos de gordura podem estar alterados com o predomínio da gordura abdominal, favorecendo o aparecimento de doenças metabólicas e neoplásicas. O mecanismo pelo qual a obesidade promove o aparecimento destas doenças ainda não está totalmente esclarecido. No entanto, sugere-se que a produção de estrogênios, decorrentes da conversão dos andrógenos no tecido adiposo e os efeitos metabólicos relacionados à hiperinsulinemia, mediados pelo IGF-1, possam estar relacionados. Embora se espere que o endométrio após a menopausa esteja atrófico, existe uma proporção que mantém padrão proliferativo fraco, provavelmente como resposta ao baixo e constante estímulo estrogênico. O objetivo deste estudo é avaliar a associação existente entre a expressão de receptores esteróides, IGF-1, Bcl-2 e Ki-67 no endométrio, correlacionando-os com índice de massa corporal e resistência tecidual insulínica. Sujeitos e Métodos: Foi realizado estudo de corte transversal, sendo selecionadas 85 mulheres após a menopausa, do Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (Caism - Unicamp) e do Hospital Dr. José de Carvalho Florence (São José dos Campos-SP). Foram avaliados os receptores endometriais para estrogênio (RE), progesterona (RP), fator de crescimento insulinóide 1 (IGF-1), Ki-67 e Bcl-2 na amostra endometrial obtida correlacionando-os com a resistência tecidual insulínica (RI) e índice de massa corporal (IMC). Os dados foram analisados através dos testes de Pearson e de Spearman, considerando-se o valor ? de 0,05. Resultados: Obtivemos 36,5% de mulheres com sobrepeso e 40% com obesidade. Não foi encontrada correlação estatística entre IMC com variável estudada. Observou-se expressão moderada e intensa para os RE (94,1%), RP (80%) e IGF-1R (78,8%) nas glândulas endometriais. A expressão do Ki-67 foi moderada e intensa em 75,3% e Bcl-2 em 65,9% das amostras. O índice HOMA-IR correlacionou-se com os RE (p=0,0402) e RP (p=0,0034). Os IGF-IR e RP se correlacionaram com CA (p=0,0189 e 0,0170) respectivamente. Observou-se correlação entre RE, RP e Ki-67 e Bcl-2. Conclusão: Mulheres após a menopausa apresentam grande expressão endometrial dos receptores estrogênicos, progestogênicos e IGF-1, independentemente do seu peso corporal ou do índice de massa corporal. Houve correlação entre os RE, RP e IGF-1R com marcadores de resitência tecidual insulínica / Abstract: Introduction: After menopause, weight gain and the distribution of fat deposits may be altered with a predominance of abdominal fat, favoring the development of metabolic diseases and cancer. The mechanism by which obesity promotes the onset of these diseases is not fully understood. However it is suggested that the production of estrogens, resulting from the conversion of androgens in adipose tissue and metabolic effects associated with hyperinsulinemia, mediated by IGF-1, may be related. While is hoped that the postmenopausal endometrium is atrophic, there is a proportion that maintains low proliferative index, probably in response to low estrogen and constant encouragement. The aim of this study is to evaluate the association between the expression of steroid receptors, IGF-1, Bcl-2 and Ki-67 in the endometrium, correlating them with body mass index and insulin resistance tissue. Subjects and Methods: Was conducted cross-sectional study, were 85 selected women after menopause, in the Center for Integral Attention to Women's Health (Caism - Unicamp) and the Hospital Dr. José de Carvalho Florence (São José dos Campos-SP). We evaluated the endometrial receptors for estrogen (ER), progesterone (PR), IGF-1, Ki-67 and Bcl-2 in endometrial sample obtained by correlating them with tissue insulin resistance (IR) and body mass index (BMI). Data were analyzed using Pearson tests and Spearman, considering ? value of 0.05. Results: We obtained 36.5% of overweight women and 40% were obese. We don't found statistical correlation between body mass index with no variable studied. We observed moderate to intense expression for ER (94.1%) PR (80%) and IGF-1R (78.8%) in the endometrial glands. The expression of Ki-67 was moderate and severe in 75.3% and Bcl-2 in 65.9% of samples. The index of HOMA-IR was correlated with the ER (p = 0.0402) and PR (p = 0.0034). The IGF-IR and PR were correlated with CA (p = 0.0189 and 0.0170) respectively. There was a correlation between ER, PR and Ki-67 and Bcl-2. Conclusion: Women after menopause have a great expression of endometrial estrogen, progestin and IGF-1 receptors, independent of their BMI. There was a correlation between the ER, PR and IGF-1R with tissue insulin resistance markers / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutor em Tocoginecologia

A integridade da cromatina espermática é fundamental para a transmissão das informações genéticas paternas, sendo que alterações de DNA podem levar a falhas no processo reprodutivo. Danos na cromatina espermática podem ocorrer por diversos motivos, sendo que os mais importantes são a apoptose, a deficiência de protamina e os danos causados pelas espécies reativas de oxigênio (EROs). Os danos de DNA espermático não impedem que o espermatozóide fecunde o oócito, entretanto podem causar perda embrionária por apoptose. A importância da integridade da cromatina espermática no desenvolvimento embrionário já foi descrita em humanos, sendo que pode ser atribuída como uma das causas de infertilidade masculina, quando está alterada. Contudo, as informações sobre a influência da integridade do DNA espermático no processo de fecundação e do desenvolvimento embrionário na espécie bovina são muito escassas. Devido à falta de informação sobre a relação da fragmentação de DNA e conseqüente alteração nos índices de desenvolvimento embrionário nessa espécie, este trabalho teve como objetivo avaliar o índice de fragmentação de DNA espermático em uma população de touros e verificar a influência dos possíveis danos de DNA espermático na produção in vitro (PIV) de embriões. Para isto, o sêmen congelado de 221 touros foi avaliado pelo ensaio de estrutura de cromatina espermática (SCSA). Após o ensaio, os animais foram divididos em seis grupos experimentais de acordo com o índice de fragmentação de DNA apresentado, sendo sete animais de cada grupo, escolhidos aleatoriamente para as avaliações espermáticas: motilidade, fragmentação de DNA espermático pelos ensaios SCSA e Cometa Alcalino e estresse oxidativo pelo ensaio de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Posteriormente foi realizada a PIV de embriões, sendo avaliados os índices de clivagem e de blastocisto e realizado o ensaio de TUNEL para a avaliação da apoptose dos blastocistos produzidos. Em relação à motilidade espermática, o grupo 1 apresentou menor motilidade em relação ao grupo 4 (p<0,05). Não foi verificada diferença significativa da motilidade entre os outros grupos experimentais. O ensaio SCSA revelou que o grupo 1 apresentou menor susceptibilidade à fragmentação de DNA espermático quando comparado com o grupo 5 (p< 0,05). O grupo 2 apresentou susceptibilidade à fragmentação de DNA espermático inferior, quando comparado aos grupos 3, 4, 5 e 6 (p<0,05). Em relação ao ensaio Cometa Alcalino, a avaliação do estresse oxidativo e a PIV de embriões, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais. Além disso, foi observada correlação negativa entre a intensidade média do Cometa e o índice de blastocisto produzido in vitro. O índice de blastocisto também apresentou correlação negativa com a intensidade média da cabeça do Cometa e ao ensaio TBARS. O ensaio TBARS apresentou correlação negativa com o índice de clivagem dos embriões PIV. Por outro lado, o ensaio TBARS apresentou correlação positiva com os ensaios SCSA e TUNEL. Considerando as condições experimentais, a fragmentação de DNA espermático não influenciou a PIV de embriões bovinos. / Sperm chromatin integrity is essential for the transmission of paternal genetic information. Changes in sperm DNA can lead to failures in the reproductive process. Loss of chromatin integrity may occur for several reasons, and the most important are apoptosis, protamine deficiency and damages caused by reactive oxygen species (ROS). The sperm DNA damage does not prevent the sperm to fertilize the oocyte, however it can cause embryonic loss by apoptosis. The importance of sperm chromatin integrity in embryonic development has been described in humans, and can be considered a cause of male infertility when it is disrupted. However, information on the influence of sperm DNA integrity in the process of fertilization and embryonic development in cattle are very scarce. Due to the lack of information on the relationship between DNA fragmentation and its consequence on embryonic development rates in this species, this study aimed to evaluate the sperm DNA fragmentation rate in a population of bulls and the influence of possible sperm DNA damage on in vitro production (IVP). For this, frozen semen from 221 bulls was evaluated by sperm chromatin structure assay (SCSA). After that, animals were divided into six groups, according to the DNA fragmentation rate observed. Then seven animals from each group were randomly chosen for sperm evaluation: motility, sperm DNA fragmentation by the SCSA and Alkaline Comet assay and oxidative stress by tiobarbituric acid reactive substances (TBARS). After sperm evaluations embryo IVP was performed. Cleavage and blastocyst rates were assessed and the obtained blastocysts were submitted to TUNEL assay for apoptosis evaluation. Regarding sperm motility, group 1 had lower motility compared to group 4 (p <0.05). There was no significant difference in motility between the other experimental groups. The SCSA revealed that group 1 showed lower susceptibility to sperm DNA fragmentation when compared to group 5 (p <0.05). Group 2 was less susceptible to sperm DNA fragmentation, when compared to groups 3, 4, 5 and 6 (p <0.05). For the alkaline comet assay, the assessment of oxidative stress and embryo IVP, no significant difference was shown between en experimental groups. Moreover, there was a negative correlation between the comet mean intensity and the blastocyst rate. The blastocyst rate also negatively correlated to the comet head mean intensity and TBARS. The TBARS was negatively correlated to cleavage rate. In addition, TBARS correlated positively to TUNEL assay and SCSA. Considering the experimental conditions, the sperm DNA fragmentation did not influence the IVP of bovine embryos.

Orientador: Prof. Dr. Alexandre Hiroaki Kihara / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Neurociência e Cognição, 2013.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-18Bitstream added on 2014-06-13T18:41:08Z : No. of bitstreams: 1 peron_mcc_dr_arafcf.pdf: 971260 bytes, checksum: b130fbae5d9dc40c7aae26eafe9d69b4 (MD5) / O etanol obtido da cana-de-açúcar tem sido considerado um combustível alternativo. Entretanto, em países em desenvolvimento, a colheita de cana é realizada manualmente depois da queima, sendo responsável pela emissão sazonal de poluentes atmosféricos. A mutagenicidade dos resíduos de queima de cana (RQCA) e as partículas presentes na ROFA (residual oil fly ash) foram observados nos ensaios de micronúcleo em células sanguíneas de camundongos e de células mãe de grão de pólen de Tradescantia pallida (TRAC-MCN) particulado. O estudo também verificou a citotoxicidade, apoptose e genotoxicidade nas células tratadas com extrato orgânico contendo grande quantidade de HPAs e suspensão na biomassa do período de safra e entressafra. Uma alta freqüência de MN foi observada no TSP do período de safra que na entressafra e a porcentagem de células mortas foi maior em células tratadas com extrato orgânico contendo grande quantidade de HPAs e particulado. Elevada expressão de Bcl-2 e baixa expressão de p53 fosforilado foi verificado em células tratadas com extrato orgânico contendo grande quantidade de HPAs no período de safra e entressafra e em 24 e 48h pós-tratamento. É possível concluir que os HPAs presentes no período de safra e entressafra são genotóxicos e citotóxicos. Políticas públicas deveriam ser discutidas para se buscar alternativas que diminuam a emissão desse poluente. / Ethanol obtained from sugar cane has been considered an alternative fuel. However, in developing countries, the handly harvesting is usually done after to sugar cane burning which is responsible for seasonal emission of air pollutants. The genotoxicity of sugar cane burning residues (SCBRs) and particle surrogates of residual oil fly ash (ROFA) were observed in micronuclei (MN) assay in mouse peripheral blood and bone marrow cells as well as in the pollen mother cells of Tradescantia pallida (TRAC-MCN). The study also verified cytotoxicity and genotoxicity of cells treated with polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) and suspension, in harvesting and non-harvesting particulated biomass. Higher frequency of MN was observed in harvesting TSP than non-harvesting and the cell death was higher in cells treated with PHAs in both particulates. Bcl-2 overexpression of p53 phosphorylated low expression was verified in the cells treated with PHAs in harvesting and non-harvesting in 24 and 48 hours after treatment. We can conclude that PHAs presenting in harvesting time, which represents burning sugar cane biomass and non-harvesting time (fuel fossil combustion) are cytotoxic and genotoxic. Public politics should be discussed to found alternatives which could decrease air pollution emissions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-09-20Bitstream added on 2014-06-13T20:01:08Z : No. of bitstreams: 1 tsuboy_msf_dr_rcla.pdf: 1212895 bytes, checksum: 9511db2b8e0900d7c7fd2b17f95c0530 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente, principalmente devido aos avanços na área de Nutrigenômica, sabe-se que a dieta tem grande influência na saúde e bem estar das pessoas. Uma dieta adequada pode contribuir para a prevenção de diversas doenças crônicas, dentre elas, o câncer. Estudos epidemiológicos apontam que as populações de países asiáticos sofrem menos com estas doenças, e o alto consumo de soja (e suas isoflavonas daidzeína e genisteína) está associado a este fato. As isoflavonas da soja daidzeína e genisteína possuem grande potencial de prevenção do câncer, uma vez que muitos estudos já demonstraram que elas interferem em diversos estágios do processo de carcinogênese. A modulação da proliferação e morte celular é um dos efeitos quimiopreventivos das isoflavonas mais investigados, porém a maioria dos estudos utiliza-se de concentrações fisiologicamente irrelevantes, ou seja, concentrações que não são encontradas no organismo humano. Portanto, o objetivo do nosso estudo foi analisar os efeitos da máxima concentração fisiologicamente relevante dessas isoflavonas em células humanas in vitro. Três linhagens celulares foram utilizadas: MCF-7 (tumoral de mama), HB4a (não tumoral de mama) e OVCAR-3 (tumoral de ovário). O efeito citotóxico, a expressão gênica (CASP-3, CASP-7, BAX, BCL-xL e COX-2) e a indução de apoptose foram investigadas nas três linhagens celulares. Além disso, foi estudado o efeito das isoflavonas sobre o ciclo celular das linhagens MCF-7 e HB4a. Somente uma concentração alta de genisteína (100 μM) após 72h de tratamento induziu citotoxicidade na linhagem OVCAR-3. Ambas as isoflavonas em concentração de 10 μM não induziram apoptose nesta linhagem, e a expressão dos genes analisados não mudou significativamente frente ao tratamento com daidzeína ou genisteína. O tratamento das... / Nowadays, mainly because of Nutrigenomics advances, it is known that diet has a major influence on health and welfare of people. A proper diet can contribute to the prevention of several chronic diseases, including cancer. Epidemiological studies indicate that Asian populations suffer less from these diseases, and high intake of soy (and its isoflavones daidzein and genistein) is associated with this fact. The soy isoflavones daidzein and genistein have great potential for cancer prevention, since many studies have shown that they interfere with several stages of carcinogenesis. Modulation of cellular proliferation and death is one of the most investigated chemopreventive effects of isoflavones, but in most of the studies, physiological irrelevant concentrations are used, i.e., concentrations that are not found in human body. The objective of our study was to analyze the effects of maximal physiological relevant concentration of these isoflavones in in vitro human cell lines. Three cell lineages were used: MCF-7 (from breast carcinoma), HB4a (breast non-tumoral cell) and OVCAR-3 (from ovarian carcinoma). Cytotoxic effect, gene expression (CASP-3, CASP-7, BAX, BCL-xL and COX-2) and induction of apoptosis were investigated in all cell lines. In addition, it was studied the effect of the isoflavones on the cell cycle of MCF-7 and HB4a. Only the highest concentration of genistein (100 μM) was cytotoxic to OVCAR-3 after 72 hours of treatment of the cells. Both isoflavones at 10 μM did not induce apoptosis in this cell line and expression of the studied genes did not change in front of daidzein or genistein treatment. Daidzein treatment of HB4a cells was not cytotoxic in none of the experimental conditions. Daidzein 10 or 25 μM also was not able to induce apoptosis or to arrest cell cycle of nontumoral HB4a. Also in this lineage, concentration of 10... (Complete abstract click electronic access below)