A Leucose Enzoótica Bovina é uma doença crônica de ocorrência mundial que acomete bovinos. Seu agente etiológico é um retrovírus do mesmo grupo dos que causam a leucemia linfocítica crônica e a AIDS, importantes doenças que acometem humanos. Os retrovírus são vírus que se integram ao DNA do hospedeiro e desta forma são potencialmente mutagênicos. Os bovinos infectados podem desenvolver uma linfocitose persistente e/ou linfoma. A gênese das neoplasias está nas mutações de classes de genes como os proto-oncogenes, genes supressores de tumor, genes de reparo do DNA e genes que controlam a apoptose. O gene p53 acumula algumas funções como de parada do ciclo celular, estimulo ao reparo do DNA ou indução da célula a apoptose. O gene bcl-2 é conhecidamente um gene que regula a apoptose. A interferência no processo de apoptose através de mutações provocadas pelos retrovírus nos genes p53 e bcl-2 é um dos mecanismos carcinogênicos associados a LEB. As mutações no gene p53 acabam promovendo o aumento de sua meia vida e em bcl-2 o aumento em sua expressão. Devido a essas alterações o aumento na expressão do gene bcl-2 e o aumento da meia vida da p53 podem ser avaliadas pela técnica de imunoistoquímica. O presente trabalho avaliou as proteínas p53 e bcl-2 em amostras de bovinos infectados pelo VLB através da técnica de imunoistoquímica. Foram pré-definidos escores de imunomarcação em amostras de animais não infectados. Os escores apresentados pelos animais infectados pelo VLB foram significativamente maiores que os animais do grupo controle. Os valores percentuais de imunomarcação apresentados para bcl-2 foram de 50,26 ± 12,25 do grupo afetado contra 10,86 ± 3,30 do grupo controle. Para p53 somente o grupo afetado apresentou imunomarcação, ficando em zero a imunomarcação do grupo controle. O valor percentual médio do grupo afetado foi de 55,95 ± 7,07. A diferença significativa entre os percentuais dos grupos controle e afetado confirma que os genes p53 e bcl-2 podem estar envolvidos no processo de linfomagênese da LEB. / The Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is a chronic disease with mundial occurrence in bovines. Its etiologic agent is a retrovirus of the same group that promotes the chronic lymphocytic leukemia and HIV, that wich are important diseases in humans. The retrovirus integrates into the host DNA and thus they are potential mutagenic. The infected bovines can develop a persistent lymphocytosis and/or lymphoma. The neoplasm genesis is associated with genes mutation like the protooncogenes, tumor suppressor, DNA repair and apoptosis control. The p53 gene has some functions how cell cycle arrest, DNA repair stimulus or apoptosis induced. The interference in the apoptosis process through mutations stimulates about the retrovirus in the p53 and bcl-2 genes are the carcinogenic mechanisms associated to EBL. The mutations in the p53 gene promote the increase in its half life and increase of bcl-2 expression. Due this alterations the increase of bcl-2 gene expression and p53 half-life can be evaluate by immunohistochemistry. This work evaluated the bcl-2 and p53 proteins in EBL infected bovines tissue samples by immunohistochemistry. We determined scores of immunomarked in non-infected animal\'s samples. The scores showed by the EBL infected animals were significantly higher than in control group. The infected bovines showed 50.26 ± 12.25% of positive cells to bcl-2 while the control group showed 10.86 ± 3.3%. Only the infected animals presented reactivity against p53, whereas the control group no showed reaction. These results confirm that the p53 and bcl-2 genes can be involved in a process of EBL leukemogenesis.

Ras é uma proteína G monomérica que converte estímulos extracelulares em sinais bioquímicos intracelulares e controla uma variedade de processos biológicos, tais como, proliferação, diferenciação, adesão e morte celular por apoptose. Além da ativação mediada por fatores de crescimento e hormônios, Ras pode ser ativado pela interação com o óxido nítrico (NO·), um radical capaz de mediar processos de sinalização. Essa interação resulta na S-nitrosação do resíduo de cisteína 118 de Ras. Assim, propusemo-nos avaliar a participação da proteína Ras e das MAP quinases: ERK1/2, JNK e p38 no processo de apoptose de células THP-1 induzida pelo doador de NO·, S-nitrosoglutationa (SNOG). Para tanto, transfectamos células THP-1 com o plasmídeo que carrega o gene que codifica para a proteína Ras mutada, na qual o resíduo de cisteína 118 foi trocado por um resíduo de serina, o que tornou Ras não responsiva ao NO·. A apoptose foi evidenciada através da formação de corpos apoptóticos, exposição de fosfatidilserina e ativação de caspase-3. A modulação da apoptose via reação de S-nitrosação foi demonstrada através da diminuição estatisticamente significativa da exposição de fosfatidilserina nas células transfectadas com o plasmídeo p21 RasC118S quando comparadas com as células selvagens e parentais. A ativação da proteína Ras ocorreu após 5, 15 e 30 minutos da adição de SNOG nas células parentais; entretanto, nas células transfectadas com o plasmídeo p21 RasC118S não observamos resposta de ativação de Ras. A avaliação das MAP quinases revelou ativação de máxima de ERK após 4 horas e ativação máxima de JNK e p38 após 2 horas de incubação com SNOG. Em relação as MAP quinases nas células transfectadas, as células p21 RasC118S apresentaram diminuição apenas da ativação ERK, quando comparadas com as células p21RasWt. A utilização dos inibidores específicos de MEK, JNK e p38; PD09895, CEP11004 e SB22004, respectivamente demonstrou que apenas a inibição de ERK diminuiu significativamente a apoptose nas células THP-1. Concluímos que na apoptose de células THP-1 estimulada por NO·, o radical livre ativa Ras via S-nitrosação, que por sua vez, recruta ERK, MAP quinase participante desta cascata de sinalização. Finalmente, demonstramos que ERK exerce papel fundamental na condução do sinal de apoptose no modelo que estudamos. / Ras is a monomeric small G protein that converts intracellular stimulus into intracellular biochemical signals. Ras controls a myriad of biological processes such as, proliferation, differentiation, adhesion and cell death by apoptosis. In addition to growth factor-mediated activation of Ras, nitric oxide (NO·) directly interacts with and activates Ras via S-nitrosation on a single cysteine residue (Cys118). Therefore, we investigated the participation of Ras and of the MAP kinases (ERK, JNK and p38) in the apoptosis of THP-1 cells induced by the NO· donor S-nitrosoglutathione (SNOG). For that, we transfected THP-1 cells with a plasmid that contains the gene that codifies for the mutated Ras protein, in which the cysteine residue 118 was replaced by a serine. Apoptosis was evidenced by apoptotic bodies formation, phosphatidylserine exposition and caspase-3 activation. Parental and wild type Ras transfected-THP-1 cells (Wt) exposed phosphatidylserine upon treatment with 1.0 mM SNOG. The importance of the S-nitrosation reaction in the process was evidenced by a decrease on phosphatidylserine exposition in the cells transfected with the plasmid p21RasC118S, as compared to parental and wild type cells. Ras activation occurred within the first 30 minutes after SNOG addition to parental cells. However in p21RasC118S transfected cells, we were unable to detect activation of Ras. Regarding the MAP kinases located downstream on the Ras-mediated signaling cascade, ERK activity was maximum after 4 hours incubation with the NO· donor. JNK and p38 MAP kinase followed different kinetics, displaying maximum activity after 2 hours incubation with SNOG. The use of specific inhibitors to MEK, JNK and p38; PD09895, CEP11004 and S822004 respectively has shown that only ERK inhibition has significantly decreased THP-1 cells apoptosis. We concluded that NO· induced apoptosis in THP-1 cells activating Ras by S-nitrosation and recruiting the MAP kinase ERK, a downstream element of this signaling cascade. Furthermore, our findings support a major role for ERK in the NO· mediated apoptosis of THP-1 cells.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:18:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Carlos Alexandre Paula Goncalves.pdf: 1454724 bytes, checksum: 032bda4d175200a7de693f3e18dc6e4d (MD5) Previous issue date: 2009-08-21 / The goal of this study was identify whether the number of apoptotic cells in horse s lamellar tissues after carbohydrate overload-induced of laminitis were affected by non-steroidal anti-inflammatory. The TUNEL assay and morphological cells changes were used to identify cells that were dying by apoptosis. There was no significant difference between groups. The apoptotic rate was not affected by non-steroidal anti-inflammatories used after developmental phase of laminitis. / O objetivo deste trabalho foi identificar se a administra??o de anti-inflamat?rios n?o esteroidais influenciava no ?ndice apopt?tico de c?lulas epiteliais do tecido lamelar de cavalos com laminite induzida por administra??o de amido. O tecido lamelar foi coletado por bi?psia, fixado e corado pela t?cnica de TUNEL, utilizando-se igualmente a morfologia celular para identifica??o das c?lulas que estivessem em diferentes est?gios de morte por apoptose. N?o houve diferen?a significativa no ?ndice apopt?tico entre os diferentes grupos. Os antiinflamat?rios empregados aplicados na fase de desenvolvimento da laminite n?o influenciaram significativamente os ?ndices apopt?ticos.

A miosina Va é uma proteína motora envolvida no transporte e posicionamento de vesículas, organelas e mRNA. Além disso, postulou-se que a miosina-Va atua no seqüestro do fator pró-apoptótico, Bmf, no citoesqueleto de actina. Pesquisas realizadas em nosso laboratório demonstraram que um fragmento da miosina Va (MVaf), que corresponde ao sítio ligante de DLC2-Bmf, é capaz de induzir intensa apoptose em células de melanoma e de carcinoma in vitro. O presente trabalho teve por objetivo principal avaliar o potencial do MVaf como agente antitumoral, através de abordagens de terapia gênica em modelo animal. Foram geradas linhagens estabilizadas e com expressão controlada pelo sistema Tet-ON onde a expressão de EGFP ou EGFP-MVaf é induzida com a adição de doxiciclina. Essas linhagens foram testadas quanto à porcentagem de morte por apoptose e ativação de caspases. Tumores foram induzidos em camundongos C57BL/6 por inoculação subcutânea de células tumorigênicas positivas ou não para a expressão de EGFP-MVaf. Também foram utilizadas linhagens de fibroblasto embrionário murino selvagem (MEFs WT) e nocautes para os fatores Bim/Bmf e Bax/Bak (MEFsBim-/-,Bmf-/-; MEFsBax-/-,Bak-/-) para estudos do mecanismo de ação do fragmento da miosina Va. Observou-se que a adição de butirato de sódio potencializa a expressão de EGFP-MVaf e, conseqüentemente, o efeito pró-apoptótico desse fragmento e que essas células são mais sensíveis aos quimioterápicos etoposídeo e taxol, apresentando maior susceptibilidade à apoptose. Verificou-se que a expressão de EGFP-MVaf em células de tumores de melanoma induzidos em camundongos C57BL/6J dificulta o crescimento desses tumores. Quanto ao estudo com MEFs, observou-se que células nocautes para os fatores pró-apoptóticos Bim/Bmf e Bax/Bak são menos susceptíveis à morte induzida pelo fragmento da miosina Va. Indução da expressão de MVaf desencadeia a liberação da proteína proapoptótica Smac (fusionada ao repórter fluorescente Cherry) do espaço intermembranas da mitocôndria para o citoplasma sugerindo que a morte apoptótica induzida por MVaf requer a permeabilização da membrana mitocondrial externa (MOMP). Concluindo, os dados apresentados aqui nos permitem propor o MVaf como uma molécula promissora para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas contra o câncer. / Myosin Va is a motor protein involved in the transport and positioning of vesicles, organelles and mRNA. Additionally, myosin-Va has been implicated in the sequestering of a proapoptotic factor, Bmf, to the actin cytoskeleton. Research in our laboratory demonstrated that a fragment of myosin Va (MVaf), which corresponds to the binding site of DLC2-Bmf, is capable to induce intense apoptosis in melanoma and carcinoma cells in vitro. Here, our goal was to assess the potential of MVaf as antitumor agent, through gene therapy approaches in animal models. We generated Tet-ON controlled B16-F10 melanoma cells whose expression of EGFP or EGFP-MVaf is induced with the addition of doxycycline. These cells were tested for apoptotic death and activation of caspases, and were used to induce tumors in C57BL/6J mice by subcutaneous inoculation. We also used cell lines of murine embryonic fibroblasts, wild-type (MEFs WT) and knockouts for the proapoptotic proteins Bim/Bmf or Bax/Bak (MEFsBim-/-,Bmf-/-, MEFsBax-/-,Bak-/-), to study the mechanism by which MVaf induces apoptosis. We observed that addition of sodium butyrate to the cultures enhances the EGFP-MVaf expression and, consequently, the pro-apoptotic effect of this fragment. Treated cells were more sensitive to the chemotherapeutic drugs etoposide and taxol, showing a higher susceptibility to apoptosis. Moreover, in vivo induction of EGFP-MVaf expression retards growth of B16-F10 melanoma tumors in mouse model. As for the study with MEFs, we observed that cells knockout for the proapoptotic factors Bim/Bmf or Bax/Bak are less susceptible to death induced by MVaf than wild-type MEFs. Accordingly, we showed that MVaf expression triggers release of the proapoptotic protein Smac (tagged with the fluorescent protein Cherry) supporting the involvement of the mitochondrial outer membrane permeabilization (MOMP) in the MVaf-induced apoptotic death response. In conclusion, these data lead us to propose MVaf as a promising molecule for the development of new therapeutic approaches against cancer.

A imunidade inata é um mecanismo ativado rapidamente para permitir a defesa do organismo contra injúrias de diferentes origens. No entanto, a exacerbação do processo inato é prejudicial ao hospedeiro e pode levar a cronicidade do processo. Os neutrófilos são as células importantes na resposta inata, que após exercerem suas ações no processo, devem ser eliminadas para o retorno da homeostasia. Nesta fase, os neutrófilos entram em apoptose e são fagocitados por macrófagos residentes. O ácido clorogênico (ACG) é componente frequente de alimentos, em especial em grãos, e apresentam propriedades anticancerígenas, antimutagênicas, antipiréticas, antifúngicas, antioxidantes, analgésicas e anti-inflamatórias. Neste último contexto, as ações do ACG na instalação do processo têm sido bem demonstradas, mas seu potencial de interferir com a resolução da inflamação ainda é fragmentária. Desta forma, o presente trabalho visou avaliar os mecanismos de ação do ACG na resolução da inflamação, focando nos mecanismos de morte dos neutrófilos, de fagocitose e \"killing\" de macrófagos. Para tanto, foram empregados camundongos, adultos, machos da linhagem Swiss. Neutrófilos peritoneais foram recrutados 4 horas após injeção local de glicogênio de ostra 1% e macrófagos peritoneais foram obtidos 96 horas após a injeção local de tioglicolato de sódio a 3%. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento com ACG por 24 horas, na concentração 1, 10, 50 e 100 mM, aumentou a porcentagem de número de neutrófilos apoptóticos e não alterou a porcentagem de neutrófilos em necrose; a incubação de ACG por 1 hora, na concentração 1, 10, 50 e 100 mM, com macrófagos peritoneais aumentou a capacidade destas células fagocitarem neutrófilos apoptóticos; reduziu a secreção do tumor de necrose tumoral (TNF-alfa), não alterou a secreção de interleucina-10 e não interferiu com as expressões de MHC-II e de CD36. Em conjunto, os dados obtidos sugerem que o ACG pode controlar a resolução da inflamação por induzir a apoptose de neutrófilos e a fagocitose destes por macrófagos. / Innate immunity is a rapidly activated mechanism to allow the body\'s defense against injuries from different origins. However, exacerbation of innate process is detrimental to the host and can lead to chronic process. Neutrophils are important cells in innate response, which after performing their actions in the process, should be eliminated for the return of homeostasis. At this stage, the neutrophils undergo to apoptosis and are phagocytosed by resident macrophages. The chlorogenic acid (CGA) is a frequent component of foods, in particular grain, and it has anticancer, antimutagenic, antipyretic, antifungal, antioxidant, anti-inflammatory and analgesic properties. In this latter context, the actions of the ACG in the initial phases of the inflammatory process have been well documented, but its potential to interfere with the resolution of inflammation is still fragmented. Thus, the present study aimed to evaluate the mechanisms of action of ACG in the resolution of inflammation, focusing on mechanisms of neutrophil death and phagocytosis of macrophages. Hence, Swiss adult, male mice were employed as donor of neutrophils and macrophages. Peritoneal neutrophils were recruited 4 hours after local injection of 1% oyster glycogen and used for assessment of cell death mechanism, besides being used as apoptotic cells to be phagocyted. Peritoneal macrophages recruited 96 hours after the injection of 3% thioglycollate medium were used to 1) phagocytosis assay 2) Quantification of inflammatory mediators in the supernatant 3) quantification of MHC-II and CD36. The results showed that treatment with ACG, during 24 hours, at concentrations of 1, 10, 50 or 100 mM increased the percentage of apoptotic neutrophils and did not induced necrosis; incubation of macrophages during 1 hour with 1, 10, 50 or 100 mM increased the capacity of these cells to phagocyte apoptotic neutrophils; reduced tumor secretion of tumor necrosis factor (TNF-alpha) and did not alter the secretion of interleukin-10, and did not interfere with the expression of MHC-II and CD36. Together, these data suggest that the ACG can control the resolution of inflammation, by interfering with events in neutrophils and macrophages.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-04T17:21:32Z No. of bitstreams: 1 Lucian Del Fabbro.pdf: 1272289 bytes, checksum: 12f1723b46015bc56a5601039de65844 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T17:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucian Del Fabbro.pdf: 1272289 bytes, checksum: 12f1723b46015bc56a5601039de65844 (MD5) Previous issue date: 2014-03-02 / As micotoxicoses ocorrem através do consumo de alimentos contaminados, sendo uma questão de saúde pública em todo o mundo. A contaminação dos alimentos depende de crescimento fúngico, além de condições climáticas ideais para o desenvolvimento das micotoxinas. A ingestão de micotoxinas por seres humanos ocorre principalmente pela ingestão de produtos vegetais contaminados, bem como pelo consumo de produtos derivados destes alimentos. A Zearalenona (ZEA) é uma lactona do ácido fenólico resorcílico e pode ser produzida por várias espécies de Fusarium, sendo que Fusarium graminearum, proliferatum e culmorum são os principais produtores. A ZEA é um composto estrogênico, cujo os efeitos tóxicos e seus metabólitos têm sido atribuídos principalmente à sua estrutura química semelhante a dos estrógenos naturais. O sistema reprodutivo é um dos principais alvos de toxicidade da ZEA, sendo os órgãos reprodutores, como útero, ovários e testículos os principais órgãos afetados. Frente a esta problemática, o estudo de substâncias naturais capazes de prevenir tal micotoxicose se faz necessária. A crisina é um flavonoide da classe das flavonas. Possui hidroxila livre nos carbonos 5 e 7 do anel, está presente em níveis elevados no maracujá do mato, mel e no própolis. Possui conhecidos efeitos benéficos como atividades antioxidante e anti-inflamatória, além de aumentar níveis de testosterona. Este estudo teve por objetivo avaliar o efeito protetor da crisina frente aos efeitos tóxicos da micotoxina ZEA nos testículos de camundongos Swiss. Para isto, os camundongos foram tratados durante 10 dias consecutivos com crisina (5 e 20 mg/Kg, via gavagem), no 11° dia os animais receberam uma dose de ZEA (40 mg/Kg, via gavagem). Após 48 horas, os animais receberam uma dose de pentobarbital (180 mg/Kg, intraperitoneal, i.p.) e o sangue foi coletado por punção cardíaca e os testículos removidos, pesados e homogeneizados em tampão para as determinações dos níveis de testosterona, contagem e avaliação da motilidade dos espermatozoides, determinação de indicadores de estresse oxidativo por métodos colorimétricos: catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR), glutationa-S-transferase (GST) e não enzimáticos glutationa reduzida, TRAP (capacidade de reatividade antioxidante total) e TAR (capacidade antioxidante total) e 4-Hydroxynonenal (4-HNE). Foram determinados interleucinas (IL-1β, IL6 e IL10), o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e a enzima mieloperocidase (MPO). Foram determinados parâmetros apoptóticos, as atividades das Caspases 3 e 6 além de dos níveis de 8-hydroxy-2'-deoxyguanosina (8-OHdG). O tratamento com crisina reverteu a redução dos níveis de testorenona, da contagem e da motilidade dos espermatozoides. O tratamento com crisina reverteu a inibição das enzimas antioxidantes GPx, GR, e GST, além de normalizar os níveis de GSH e 4-HNE. A alteração nos parâmetros inflamatórios causados pela administração de ZEA foi prevenida pela administração da crisina restaurando os níveis xi de IL-1β e IL-6 e TNF-α e reduzindo os níveis de IL-10 e a atividade da MPO. O tratamento com crisina atenuou os danos apoptóticos causados pela ZEA, inibindo a atividade das caspases 3 e 6 e reduzindo os níveis de 8-OHdG. Desta forma o tratamento com crisina preveniu os danos causados pela micotoxina ZEA em camundongos swiss através da modulação do estresse oxidativo, acarretando em uma redução do processo inflamatório e consequentemente apoptótico. Desta forma espera-se que a crisina possa vir a ser um possível tratamento auxiliar no combate a micotoxicoses seja em humanos ou animais. / Ace mycotoxicoses occur through the consumption of contaminated food being a public health issue worldwide. Contamination of food depends on fungal growth beyond the ideal climatic conditions for the development of mycotoxins. The ingestion of mycotoxins by humans occurs primarily by ingestion of contaminated plant products, as well as the consumption of food products derived therefrom. Zearalenone (ZEA) is a phenolic resorcylic acid lactones and can be produced by various Fusarium species, and Fusarium graminearum, culmorum and proliferatum are the main producers. ZEA is an estrogenic compound, whose the toxic effects and its metabolites have been mainly attributed to their similar chemical structure of natural estrogens. The reproductive system is one of the main targets of toxicity of ZEA and the reproductive organs such as the uterus, ovaries and testes those most affected organs. Faced with this problem, the study of natural substances capable of preventing such mycotoxicosis is required. Chrysin is a flavonoid of the flavones class. It has free hydroxyl at carbons 5 and 7 ring, is present at high levels in passion fruit bush honey and propolis. Chrysin has known beneficial effects as an antioxidant activities and anti-inflammatory and it has increased testosterone levels. This study aimed to evaluate the protective effect of chrysin forward to the toxic effects of the mycotoxin ZEA in the testes of Swiss mice. For this, the mice were treated for 10 consecutive days with chrysin (5 and 20 mg / kg by gavage) on day 11, the animals received ZEA, a dose (40 mg / kg by gavage). After 48 hours, the animals received an overdose of pentobarbital (180 mg / kg, intraperitoneal, i.p.) and blood was collected by heart puncture and removed, weighed and homogenized testis for determination of testosterone, count and assessment of sperm motility, determination of oxidative stress indicators by colorimetric methods: catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx), glutathione reductase (GR), glutathione-S-transferase (GST) and non-enzymatic reduced glutathione, TRAP (reactivity total antioxidant capacity) and TAR (total antioxidant capacity) and 4-hydroxynonenal (4-HNE). Were determined, interleukins (IL-1β, IL-6 and IL-10), tumor necrosis factor (TNF-α) and mieloperoxidase enzyme (MPO). Apoptotic parameters were determined, Caspases 3 and 6 beyond the levels of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OHdG). The treatment with chrysin reversed the reduction of testorenone levels, count and motility of sperm. Treatment with chrysin reversed the inhibition of antioxidant enzymes GPx, GR, and GST, as well as normalizing levels of GSH and 4-HNE. The alteration in inflammatory parameters caused by the administration of ZEA was xiii prevented by administration of chrysin, restoring IL-1β and IL-6 and reducing IL-10 levels, and reduce TNF-α levels and MPO activity. Treatment with chrysin attenuated apoptotic damage ZEA, inhibiting the activity of caspases3 and 6, reducing levels and 8-OHdG. Thus, the treatment with chrysin prevented the damage caused by mycotoxins ZEA in Swiss mice probably through modulation of the oxidative stress, resulting in a reduction of the inflammatory process and hence apoptosis. Thus it is expected that chrysin may be a possible treatment support combat in mycotoxicosis both in humans and animals.

A encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal, ou simplesmente hipóxia-isquemia (HI) neonatal, é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em neonatos humanos. De 20% a 50% dos recém-nascidos com HI severa morrem no período perinatal. Quando sobrevivem, 25% apresentam deficiências neuropsicológicas, como dificuldade de aprendizado, epilepsia e paralisia cerebral. Devido a isso, a eficácia de possíveis agentes neuroprotetores tem sido testada em modelos animais. Há razão para se pensar que a progesterona tem um forte potencial para o tratamento da HI neonatal, já que a sua utilização tem se mostrado benéfica em pesquisas relacionadas com lesão cerebral traumática, lesão cerebral isquêmica e outros modelos de lesão do sistema nervoso central (SNC) em adultos. Inúmeros estudos têm mostrado que o modelo animal de HI de Rice e Vannucci (1981) em animais neonatos, utilizado no presente trabalho, pode produzir lesões no sistema nervoso central relativamente previsíveis, e que estas lesões encefálicas parecem semelhantes às observadas clinicamente em humanos (SALMASO et al., 2014). Para a realização do modelo de HI foram utilizados ratos Wistar com idade de 7 dias (P7). Após a oclusão da carótida esquerda, os animais foram colocados em câmaras para exposição à atmosfera hipóxica com 8% O2/92% N2 por 90 minutos. Os animais foram divididos em cinco grupos experimentais: SHAM, HI, HI+PROG-PRÉ (PRÉ), HI+PROG-PÓS (PÓS), HI+PROG-PRÉ/PÓS (PP). Os termos PRÉ e PÓS referem-se à administração de progesterona (na dose de 5 mg/kg) antes ou após o procedimento de HI neonatal . Dependendo do grupo experimental, os animais foram tratados com progesterona imediatamente antes da isquemia e/ou 6 e 24 horas após o início da hipóxia. Foram analisados o peso corporal dos animais (imediatamente antes da isquemia e 6, 24 e 48 horas após o início da hipóxia), o volume de lesão cerebral, além da expressão das proteínas p-Akt e caspase-3 pela técnica de Western blotting. / Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy or simply neonatal hypoxia-ischemia (HI) is a main cause of morbidity and mortality in human neonates. Moreover, 25% of survivors show neuropsychological dysfunctions such as learning difficulties, epilepsy and cerebral palsy. Because of this, the effectiveness of potential neuroprotective agents has been tested in animal models. There is a reason to suppose that progesterone has a strong potential for the treatment of neonatal HI since its use has been shown to be beneficial in researches related to traumatic brain injury, ischemic brain injury and other central nervous system injury models (CNS) in adults. Several studies have shown that the newborn animal model of HI developed by Rice and Vannucci (1981), and used in the present study, can produce lesions in the central nervous system which are predictable and similar to those observed clinically in humans. In order to perform the HI model we used 7 days old (P7) Wistar rats. After occlusion of the left carotid, the animals were placed in hypoxic chambers and exposed to the hypoxic atmosphere (8% O2/92% N2 for 90 minutes). The animals were divided into five groups: SHAM, HI, HI+PROG-PRÉ (PRÉ), HI+PROG-PÓS (PÓS), HI+PROG-PRÉ/PÓS (PP).The PRÉ and PÓS terms refer to the administration of progesterone (5 mg/kg) before and/or after the HI procedure. Progesterone was administered immediately before ischemia, 6 and 24 hours after the beginning of hypoxia, depending on the experimental group. Body weight was evaluated immediately before ischemia and/or 6 and 24 hours after the start of hypoxia. The volume of brain damage, in addition to the expression of p-Akt and caspase-3 were also evaluated.

Submitted by Verena Bastos (verena@uefs.br) on 2015-08-05T22:08:06Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o Mona Oliveira vers?o final Maio2003 PPGbiotec.pdf: 4793209 bytes, checksum: 5e62150796f4527c8d492f92de5041e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-05T22:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o Mona Oliveira vers?o final Maio2003 PPGbiotec.pdf: 4793209 bytes, checksum: 5e62150796f4527c8d492f92de5041e2 (MD5) Previous issue date: 2013-05-08 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Glioblastomas (GBMs) are the most common and aggressive primary tumors of the CNS. The survival of patients with this diagnosis remains very low, with poor prognosis even after surgical therapy associated with radiotherapy and chemotherapy. The present work carried out a screening for 24 synthetic ?alkaloid-like? to determine their effects on cell viability of quimioresistentes human (Gl-15 and U251) glioblastoma cells and murine (C6) glioma cells. Among the alkaloids tested (100?M) RLB87 was the most cytotoxic for transformed cells, inhibiting the viability in 75.0% 97.2% 76.6% of GL-15, U251 and C6 cells, respectively, after 72 h exposure, and it did not show toxicity to normal glial cells. It was also observed that RLB87 promoted apoptosis, 24 and 72 h after treatment, in a time-dependent manner. Moreover RLB87 also inhibited cell migration and proliferation with cells arrest at G0/G1 phase, since 24 h after treatment. Additionally, the cytotoxicity of four RLB87 analogues was tested in view to elucidate important aspects in chemical structure, required for its activity. We observed positive correlation between cytotoxic effect and isomeric of phenyl functions, with ester function and also lipophilicity. These finding suggest the ?alkaloid-like? RLB87 as a promising anticancer agent as well as a prototype for new agents for treatment of malignant and recurrent gliomas. / Glioblastomas (GBMs) s?o os tumores prim?rios mais comuns e agressivos do SNC. A sobrevida dos pacientes com esse diagn?stico continua muito baixa, tendo progn?stico ruim mesmo ap?s terapia cir?rgica seguida de radio e quimioterapia. No presente trabalho, foi realizada a prospec??o de 24 mol?culas de s?ntese, alkaloids-like, para determina??o de seus efeitos sobre a viabilidade de c?lulas quimioresistentes de glioblastoma humano (GL-15 e U251) e murina (C6). Entre os compostos testados ? (100JM), RLB87 foi o mais citot?xico para c?lulas transformadas, inibindo a viabilidade em 75,0%, 97,2%, 76,6% da GL-15, U251 e C6, respectivamente e o mesmo n?o apresentou toxicidade para c?lulas gliais normais. Observou-se, que o RLB87 promoveu apoptose 24 e 72 h ap?s o tratamento de forma tempo-dependente. O RLB87 igualmente inibiu a prolifera??o celular com acumulo na fase G0/G1 do ciclo celular ap?s 24 h. A migra??o das c?lulas de glioma foi tamb?m inibida ap?s tratamento com RLB87. Adicionalmente 4 an?logos do RLB87 foram tamb?m avaliados, elucidando aspectos importantes na estrutura qu?mica, requeridos para sua atividade, que possuem correla??o positiva com regioisomeria das fenilas, presen?a da fun??o ?ster e lipofilicidade. O RLB87 ? apresentado como promissor agente antineopl?sico assim como um prot?tipo para novos agentes terap?uticos para o tratamento de gliomas malignos e recidivados.

Submitted by Verena Bastos (verena@uefs.br) on 2015-10-08T12:18:43Z No. of bitstreams: 1 Jeanderson_Disserta??o_vers?o final.pdf: 369468 bytes, checksum: 851a8492d73fc0106bfe7784166fdf98 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-08T12:18:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jeanderson_Disserta??o_vers?o final.pdf: 369468 bytes, checksum: 851a8492d73fc0106bfe7784166fdf98 (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Exposure to genotoxic agents induces changes in the DNA molecule to commit that genes involved with the repair mechanisms and the control of cell proliferation and differentiation pathways or genes associated with apoptosis can lead to cancer development. Among the many chemicals that have been identified as mutagenic action, include the Androgenic Steroids (AAS), hormones widely used in the search for improved physical performance and increased muscle mass. Objective: In this context, the aim of the development of this study was to evaluate the potential of androgenic anabolic steroid nandrolone decanoate, testosterone propionate and testosterone cypionate to induce chromosome damage, apoptosis and necrosis, using the micronucleus test in exfoliated cells from the oral mucosa of users of AAS with a view to its application as a tool in cancer prevention. Method: The study sample consisted of 55 volunteers, male, divided into two (02) groups, matched for age: 25 subjects (G1) users of nandrolone decanoate, testosterone propionate and testosterone cypionate (alone or simultaneously ) and 30 subjects in the control group (G2). The collection methodology and cytological analysis followed the protocol of Tolbert et al. (1992) and Thomas et al. (2009), which includes, in addition to micronuclei, the computation of degenerative nuclear changes indicative of apoptosis (cariorr?xis, condensed chromatin and pyknosis) and necrosis (karyolysis, cariorr?xis, condensed chromatin and pyknosis). Statistical analysis of the endpoints analyzed (micronucleus, cariorr?xis, condensed chromatin, karyolysis, pyknosis and broken eggs) was performed using the conditional test to compare proportions in situations of rare events. Results: Statistical analysis revealed no significant difference in the occurrence of micronuclei, karyolysis and broken eggs between groups. The occurrence of apoptosis was significantly greater in cells from control individuals. Conclusion: The results show inhibition of apoptosis induced by EAA, suggesting that the described association between the use of these substances and the carcinogenic process can be permeated by this mechanism. / A exposi??o a agentes genot?xicos induz altera??es na mol?cula do DNA que ao comprometerem genes envolvidos com os mecanismos de reparo e com o controle da prolifera??o e diferencia??o celular ou genes associados ?s vias de apoptose, podem levar ao desenvolvimento de c?ncer. Entre os muitos agentes qu?micos que t?m sido identificados como de a??o mutag?nica, incluem-se os Ester?ides Anabolizantes Androg?nicos (EAA), horm?nios amplamente utilizados na busca da melhoria do desempenho f?sico e aumento da massa muscular. Objetivo: Neste contexto, objetivou-se com o desenvolvimento do presente estudo, avaliar o potencial dos ester?ides anabolizantes androg?nicos decanoato de nandrolona, propionato de testosterona e cipionato de testosterona em induzir danos cromoss?micos, apoptose e necrose, atrav?s do uso do Teste de Micron?cleo em c?lulas esfoliadas da mucosa oral de usu?rios de EAA com vista ? sua aplica??o como ferramenta na preven??o do c?ncer. M?todo: A amostra do estudo foi composta por 55 volunt?rios, do sexo masculino, distribu?dos em dois (02) grupos, pareados por idade: 25 indiv?duos (G1) usu?rios de decanoato de nandrolona, propionato de testosterona e cipionato de testosterona (isoladamente ou simultaneamente) e 30 indiv?duos no grupo controle (G2). A metodologia de coleta e an?lise citol?gica seguiu o protocolo de Tolbert et al. (1992) e Thomas et al. (2009), que inclui, al?m de micron?cleos, o computo de altera??es nucleares degenerativas indicadoras de apoptose (cariorr?xis, cromatina condensada e picnose) e necrose (cari?lise, cariorr?xis, cromatina condensada e picnose). A an?lise estat?stica dos endpoints analisados (micron?cleo, cariorr?xis, cromatina condensada, cari?lise, picnose e broken eggs) foi realizada com o uso do teste condicional para compara??o de propor??es em situa??es de eventos raros. Resultados: A an?lise estat?stica revelou que n?o houve diferen?a significativa na ocorr?ncia de micron?cleo, cari?lise e broken eggs entre os grupos. A ocorr?ncia de apoptose foi, significativamente, maior em c?lulas dos indiv?duos do grupo controle. Conclus?o: Os resultados obtidos mostram inibi??o da apoptose induzida pelo uso de EAA, sugerindo que a associa??o descrita entre uso destas subst?ncias e o processo carcinog?nico possa ser permeada por este mecanismo.

Introdução: Após o infarto agudo do miocárdio, inicia no coração um processo de remodelamento mal-adaptativo, ocasionando dilatação ventricular, perda da espessura de parede e prejuízo na função cardíaca. Este quadro culmina com o desenvolvimento de insuficiência cardíaca. Nesse processo, ocorre um aumento na geração de espécies reativas de oxigênio (EROs), uma diminuição na biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) e uma maior expressão de proteínas pró-apoptóticas no tecido cardíaco. Em relação a isso, muitos estudos demonstram um efeito benéfico dos hormônios da tireoide, atenuando os mecanismos envolvidos na progressão do infarto para a insuficiência cardíaca. No entanto, não existem trabalhos avaliando se estes hormônios poderiam modular a geração de EROs ou a biodisponibilidade de NO no tecido cardíaco infartado. Não existem também dados na literatura avaliando se estes hormônios poderiam modular o processo de apoptose em um período após o infarto. Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração dos hormônios da tireoide sobre a morfologia e a função cardíaca, sobre parâmetros de estresse oxidativo e sobre parâmetros que avaliam a biodisponibilidade do NO, ao longo de 28 dias após o infarto. Além disso, este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios da tireoide sobre a morfologia e a função cardíaca, sobre parâmetros de estresse oxidativo e sobre a expressão de proteínas relacionadas ao processo de apoptose no tecido cardíaco aos 14 dias pós-infarto. Materiais e Métodos: Ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos: grupo sham (SHAM), grupo infarto (IAM), grupo sham tratado (SHAMT) e grupo infarto tratado (IAMT). Os animais dos grupos IAM e IAMT foram submetidos à cirurgia de infarto através da ligadura da artéria coronária, ao passo que e os animais dos grupos SHAM e SHAMT foram submetidos a todas as etapas da cirurgia exceto à ligadura da artéria coronária. Os grupos SHAMT e IAMT receberam T3 e T4 nas doses de 2 e 8 μg/100g por dia, respectivamente, por gavagem, enquanto que os animais dos grupo SHAM e IAM receberam apenas salina. Aos 14 ou aos 28 dias após a cirurgia, os animais foram avaliados por ecocardiografia, foi realizada a coleta de sangue e os mesmos foram eutanasiados. O coração foi retirado para realização de análises morfométricas, bioquímicas e moleculares. Análise estatística: ANOVA de uma ou duas vias seguida dos pós-teste de Student-Newmann-Keuls. O projeto para a realização deste estudo foi aprovado pela Comissão de Ética No Uso de Animais da UFRGS sob o número de 23262. Resultados e Discussão: Os animais do grupo IAM apresentaram, tanto aos 14 como aos 28 dias pós-infarto, dilatação da câmara cardíaca, perda da espessura de parede e diminuição da fração de ejeção, indicando o desenvolvimento de um remodelamento cardíaco mal-adaptativo. Em relação aos parâmetros de estresse oxidativo, 28 dias pós-infarto, os animais infartados apresentaram um aumento de 38% nos níveis de EROs, além de desequilíbrio redox e dano oxidativo à lipídios. Analisando os parâmetros de biodisponibilidade do NO, não houve modificações na atividade da enzima óxido nítrico sintase (NOS), na expressão da isoforma endotelial desta enzima (eNOS) e nem nos níveis de nitritos no coração destes animais. Já aos 14 dias pós-infarto, os animais IAM apresentaram um aumento de 111% e de 71% na expressão das proteínas pró-apoptóticas p53 e JNK, respectivamente, indicando uma maior sinalização para a morte celular. A administração dos hormônios da tireoide no grupo IAMT promoveu efeitos benéficos sobre o remodelamento cardíaco, prevenindo a dilatação cardíaca e a perda da espessura de parede aos 28 dias pós-infarto. Além disso, o tratamento hormonal promoveu uma melhora em parâmetros de função cardíaca aos 14 e aos 28 dias pós-infarto. Em relação às análises de estresse oxidativo, o grupo IAMT não apresentou aumento nos níveis de EROs nem no dano oxidativo à lipídios. Nestes animais houve diminuição da expressão da enzima xantina oxidase, uma importante fonte de EROs no coração, 28 dias após o infarto. Além disso, este grupo apresentou aumento da atividade da NOS, bem como da expressão da eNOS, ocasionando um aumento nos níveis de nitritos no coração. O aumento nos níveis de NO juntamente com a diminuição nos níveis de EROs pode indicar uma melhora na biodisponibilidade do NO no coração dos animais IAMT, aos 28 dias pós-infarto. Além disso, estes animais apresentaram maior expressão da proteína PGC-1α, um importante fator regulador do metabolismo mitocondrial no coração. Já aos 14 dias, os animais IAMT apresentaram menor expressão das proteínas p53 e JNK no tecido cardíaco, indicando um efeito benéfico dos hormônios da tireoide sobre a sinalização para apoptose. Conclusão: O presente estudo demonstrou, pela primeira vez, que a administração dos hormônios da tireoide em ratos, ao longo de 28 dias após o infarto, apresenta efeitos positivos sobre parâmetros de estresse oxidativo no tecido cardíaco, além de melhorar parâmetros morfológicos e funcionais. Além disso, estes hormônios promovem um aumento na biodisponibilidade do NO no coração. Já em um período mais precoce pós-infarto (14 dias), essa administração hormonal também apresenta efeitos positivos sobre a morfologia e a função cardíaca, além de diminuir a expressão de proteínas envolvidas com a sinalização para apoptose. Estes resultados corroboram estudos prévios que demonstram efeitos benéficos da administração dos hormônios da tireoide no período pós-infarto. / Introduction: Myocardial infarction causes a remodeling process in the heart, leading to cardiac dilatation, loss of ventricular wall thickness and prejudice in the function. This scenario leads to the development of heart failure. In this process, there are an increased reactive oxygen species (ROS) levels, a decreased nitric oxide (NO) bioavailability and an induction of proapoptotic proteins expression in the heart. Several studies have demonstrated a positive effect of thyroid hormones, attenuating the progression of myocardial infarction to heart failure. However, there are no studies evaluating whether these hormones could modulate ROS generation or NO bioavailability in the heart tissue. Besides that, there are no data in the literature evaluating whether these hormones could affect the apoptotic process in an early period after infarction. Aim: The aim of the present study was to evaluate the effect of thyroid hormones administration on parameters of cardiac morphology and function, on oxidative stress and on NO bioavailability parameters, 28 days after myocardial infarction in rats. Besides that, this study also aims to evaluate the effect of thyroid hormones on parameters of cardiac morphology and function, on parameters of oxidative stress and on the expression of proapoptotic proteins in the heart tissue, 14 days after myocardial infarction. Material and Methods: Male Wistar rats were divided into four groups: Sham-operated (SHAM), infarcted (AMI), sham-operated + TH (SHAMT), and infarcted + TH (AMIT). The animals from SHAMT and AMIT received T3 (2 μg/100 g/day) and T4 (8 μg/100 g/day) by gavage. SHAM and AMI groups received saline by gavage. Echocardiographic parameters were assessed 14 and 28 days after the surgery. Blood was collected for hormonal measurements and heart was collected for morphometric, biochemical and molecular analisys. Statistic analysis: One or two way ANOVA with Student-Newmann-Keuls post-hoc test. The study and animal care procedures were approved by the Ethics Committee for animal research at UFRGS; process number 23262. Results and Discussion: The animals in the AMI group showed cardiac dilatation, loss of ventricular wall thickness and decreased ejection fraction, in 14 and 28 days after infarction, indicating the development of a maladaptive cardiac remodeling. Regarding oxidative stress parameters, AMI animals showed increased ROS levels (38%), redox imbalance and oxidative damage to lipids, 28 days after the injury. In terms of NO bioavailability parameters, there were no changes in nitric oxide synthase (NOS) enzymatic activity, in the endothelial isoform of NOS (eNOS) expression or in nitrites levels in the heart of these animals. In 14 days post-infarction, AMI animals showed an increase in p53 (111%) and JNK (71%) expression, indicating higher signaling for cell death. In AMIT rats, thyroid hormones administration promoted benefic effects on cardiac remodeling, preventing the dilatation and the loss of ventricular wall thickness, 28 days post-infarction. In addition, the hormonal treatment promoted an improvement in cardiac function parameters, 14 and 28 days post-infarction. In relation to oxidative stress, the AMIT group did not show increase in ROS levels or in oxidative damage to lipids, 28 days after the infarction. These animals showed decreased xanthine oxidase expression, which is an important source of ROS in the heart. In addition, these animals present an increase in NOS activity and in eNOS expression, leading to higher nitrite levels in the heart. The increase in NO and the decrease in ROS levels may indicate an improvement in NO bioavailability in the heart of AMIT animals at 28 days post-infarction. Moreover, these animals showed increased PGC-1α expression, which is an important factor related with mitochondrial metabolism in the heart. In 14 days after the infarction, the AMIT group showed lower expression of p53 and JNK proteins in the cardiac tissue, indicating a benefic effect of thyroid hormones on signaling to apoptosis. Conclusion: The present study showed, for the fist time, that thyroid hormones administration has positive effects in terms of oxidative stress in the heart tissue and improve morphological and functional parameters. In addition, these hormones promote and increase in NO bioavailability in the heart, 28 days after the infarction. In an early period of cardiac injury (14 days), the hormonal administration presents positive effects in terms of cardiac morphology and function and decrease proapoptotic proteins expression. These results corroborate previous studies that showed a benefic effect of thyroid hormones after myocardial infaraction.