Doctor en farmacología / La enfermedad de Chagas es causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi y afecta aproximadamente, a 8 millones de personas en América Latina. Se estima que cerca de 28 millones de personas están en riesgo de contraerla, entre el sur de California en Estados Unidos, hasta la sexta región en Chile. Alrededor del 30% de los pacientes desarrollan la fase crónica de la enfermedad, caracterizada por la llamada cardiomiopatía chagásica, con falla cardiaca y arritmias potencialmente fatales, originando una alta morbilidad en la población afectada. Se ha propuesto que el Tromboxano A2 (TXA2) y la prostaglandina E2 (PGE2) participarían activamente en el desarrollo de las alteraciones presentes en la cardiopatía chagásica. El TXA2 produce activación endotelial al aumentar la expresión de moléculas de adhesión como ICAM-1 y VCAM-1. Este mediador también promueve la activación/agregación y degranulación plaquetaria como parte de su actividad protrombótica. La PGE2, participa en algunos de los mecanismos que el T. cruzi utiliza para evadir la respuesta inmune innata y contribuye al remodelamiento cardiaco y a la alteración de la función cardiaca (procesos fibróticos). La síntesis de TXA2 y PGE2 es inhibida por aspirina (AAS) y otros fármacos antiinflamatorios no esteroidales (AINEs). El tratamiento actual de la enfermedad de Chagas, con los nitroderivados nifurtimox, benznidazol (Bz), es efectivo en la fase aguda, pero los efectos adversos de estos fármacos y la diferente susceptibilidad de las distintas cepas de parásitos pueden afectar la terapia. Trabajos preliminares de nuestro laboratorio, mostraron que la aspirina redujo la infección de T. cruzi en células RAW 264.7 y presenta un efecto sinérgico con nifurtimox y benznidazol. Asimismo, en un modelo agudo en ratones BALB/c infectados, la aspirina redujo la parasitemia, la extensión de miocarditis y la mortalidad. De acuerdo a estos antecedentes, en este trabajo se estudió el efecto antichagásico de un tratamiento asociado de AAS y Bz en un modelo de infección crónica con T. cruzi en ratones BALB/c. Los animales infectados con 500 tripomastigotes de la cepa Dm28c, fueron tratados con AAS a una dosis antiagregante plaquetaria (2 mg/kg/día) o una dosis antiinflamatoria (40 mg/kg/día) y/o con Bz (30 mg/kg/día o 100 mg/kg/día) durante 20 días. Los ratones infectados desarrollaron altas parasitemias, una mortalidad de un 50% y lesiones características de una cardiomiopatía chagásica. Estos animales además, presentaron una expresión aumentada de ICAM-1 en tejido cardiaco y niveles plasmáticos elevados de TXA2, sICAM-1 y sE-selectina, los cuales son reconocidos como marcadores de disfunción endotelial. Durante la etapa aguda de la infección, el tratamiento con AAS 2 y 40 mg/kg/día, no disminuyó los niveles de parasitemia y sobrevida de los animales infectados con T. cruzi. Por otro lado, en el tejido cardiaco de los ratones tratados con AAS, es posible observar una disminución del infiltrado inflamatorio; sin embargo, la presencia de nidos de amastigotes no fue diferente a la del grupo control. Por el contrario, los animales tratados con Bz 30 mg/kg, presentaron bajos niveles de parasitemia y pequeños focos de infiltrado inflamatorio. Este efecto fue superior con la administración de Bz 100 mg/kg/día, ya que estos animales no presentaron parasitemia, ni tampoco se observaron nidos de amastigotes e infiltrado inflamatorio en el tejido cardiaco. Respecto de la sobrevida, ambas dosis de benznidazol fueron igualmente eficaces. Durante la etapa crónica, ambas dosis de AAS como de Bz, disminuyeron las lesiones del tejido cardiaco y la expresión de ICAM-1. Respecto de los niveles plasmáticos de marcadores de disfunción endotelial, AAS 2 y 40 mg/kg normalizó los niveles sICAM-1 y TXA2. De manera similar, ambas dosis de Bz disminuyeron los niveles plasmáticos de estos marcadores. Los resultados de los estudios de combinación mostraron que la adición de AAS 2 o 40 mg/kg a los animales tratados con Bz 30 mg/kg, no aumenta el efecto de Bz sobre los marcadores de disfunción endotelial. En conclusión, en nuestro modelo de infección, si bien el tratamiento con AAS 2 y 40 mg/kg es capaz de prevenir las lesiones cardiacas características de la fase crónica, no presenta los efectos tripanocidas observados con ambas dosis de Bz. Por otro lado, la combinación de AAS y Bz no mostró efecto superior sobre parasitemias, mortalidad y presencia de amastigotes en el tejido cardiaco, cuando se compara con los animales que recibieron sólo Bz 30 mg/kg. Más aún, el tratamiento sólo con Bz 30 mg/kg/día moduló la inflamación cardiaca y el desarrollo de disfunción endotelial, efectos que tampoco fueron mejorados con la combinación con AAS 2 o 40 mg/kg/día. / Chagas’ disease, caused by the flagellated protozoa Trypanosoma cruzi, affects 8 million people in Latin America. It has been estimated that 28 million people are at risk to get infected, from south California in United States, to sixth region in Chile. Approximately, 30% of patients develop the chronic phase of the disease, characterized by the Chronic Chagasic Cardiomyopathy, with heart failure and severe/fatal arrhythmias, originating a high morbidity in affected population. It has been proposed that Thromboxane A2 (TXA2) and Prostaglandin E2 (PGE2) participate actively in the development of cardiac alterations in the chronic phase. TXA2 activates the endothelium by increasing cellular adhesion molecules expression, such as ICAM-1 and VCAM-1. This mediator promotes also the platelet activation/aggregation and degranulation as part of its pro-thrombotic activity. PGE2 participates in some of the mechanisms that T. cruzi uses to avoid innate immune response and contribute to cardiac remodeling and functional alterations (fibrosis). Synthesis of TXA2 and PGE2 in inhibited by aspirin (ASA) and other non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs). Current Chagas’ disease treatment, with the nitroderivatives nifurtimox or benznidazol (Bz), is effective in acute phase of the disease, but therapy is highly compromised by adverse effects related to these drugs and the variable susceptibility of different T. cruzi strains to antichagasics. Preliminary work from our group shows that ASA reduced T. cruzi infection in RAW 264.7 cells and elicited a synergistic effect with nifurtimox and Bz. In a similar way, ASA reduced parasitemia, myocarditis and mortality, in an acute infection model in BALB/c mice. According with this information, in this work we studied the antichagasic effect of ASA and Bz treatment in a model of chronic infection with T. cruzi in BALB/c mice. Animals infected with 500 trypomastigotes of Dm28c strain, were treated with ASA using an antiplatelet dose (2 mg/kg/day) or a higher dose as anti-inflammatory (40 mg/kg/day) and/or with Bz (30 mg/kg/day or 100 mg/kg/day) for 20 days. Infected mice developed high parasitemia, 50% mortality and characteristic lesions of chagasic cardiopathy. In addition, these animals presented augmented expression of ICAM-1 in cardiac tissue and elevated plasma levels of TXA2, sICAM-1 and sE-selectin, which are recognized endothelial dysfuncion markers. During acute phase of infection, treatment with ASA 2 and 40 mg/kg/day did not decrease parasitemia levels and mortality of infected animals. On the other hand, the cardiac tissue obtained from ASA treated animals presented diminished inflammatory infiltrate; however, amastigote nests were still present in the infected control group. Conversely, Bz 30 mg/kg/day treated animals, presented low levels of parasitemia and small and focalized inflammatory infiltrates. This effect was higher with Bz 100 mg/kg administration, since in these animals parasitemia, inflammatory infiltrate and amastigote nests were not detected. Respect to survival, both Bz doses were equally effective. During chronic phase, treatment with ASA and Bz were able to prevent the cardiac lesions and ICAM-1 expression. Regarding to plasma levels of dysfunction endothelial markers, ASA 2 and 40 mg/kg normalized sICAM-1 and TXA2 levels. In a similar way, both Bz doses decreased plasma levels of these markers. In the drugs combination studies, the addition of ASA 2 mg/kg or 40 mg/kg to Bz 30 mg/kg treatment, did not potentiate the Bz effects. In conclusion, in our chronic infection model, administration of ASA 2 mg/kg and 40 mg/kg prevented chronic cardiac lesions, but these treatments did not present trypanocidal effects as observed with Bz. On the other hand, combination of ASA with Bz showed no superior effect on parasitemia, mortality and amastigote nests presence as compared with Bz treated animals. Moreover, Bz 30 mg/kg/day administration modulates cardiac inflammation and the development of endothelial dysfunction, effects that were not improved with AAS 2 mg/kg or 40 mg/kg. / Fondecyt

Se ha estudiado la cinética de la hidrólisis del ácido acetilsalicílico por actividad esterásica eritrocitaria frente al ácido acetilsalicílico in vitro, en niños de dos pisos altitudinales de la provincia de Huamanga a 2,746 y 3,550 msnm, siguiendo la metodología de Trinder. Se ha encontrado que el tipo de cinética para esta hidrólisis catalizada corresponde a una de pseudo primer orden, rastreándose la reacción en un tiempo comprendido entre 0 y 55 minutos, a pH 7,4 y 37ºC en buffer fosfato salino 0,1 M, se halló para la población total un valor promedio para la constante de velocidad de reacción, (k), de 6,16 x 10-3 ± 0,00043 min-1 y un tiempo de vida media, (t1/2), de 117,26 ± 5,142 min. La media de la actividad enzimática reportada en umol de ASA consumidos/mg de eritrocitos lisados /min fue de 1,129 x 10-4 ± 0,0035. La correlación más importante se observó entre el tiempo de vida media y los niveles de hematocrito para ambos pisos altitudinales (p menor que 0,05), siendo para la población de 3,550 msnm -0,421 y -0,286 para 2,746 msnm, lo que ratifica la presencia de la(s) esterasa(s) en el paquete globular. De otro lado, la cinética enzimática de la hidrólisis del ácido acetilsalicílico, fue de tipo michaeliana; siendo el valor de Km de 1,6 mM y la Vmáx de 0,662 umol x L-1 x min-1 x mg-1. Se concluye que no existe diferencia estadística significativa de la actividad de esta(s) hidrolasa(s) eritrocitaria(s) frente al ácido acetilsalicílico en niños de ambos pisos altitudinales para una (p menor que 0.05). Palabras claves: esterasas eritrocitaria, ácido acetilsalicílico, altitudes. / The kinetics of the hydrolysis of the acetylsalicylic acid, has been studied by activity esterasic of the lysate erythrocyte in front of the acetylsalicylic acid in vitro, in children of two floors altitudinals of the province of Huamanga to 2,746 and 3,550 msnm; following the methodology of Trinder. It has been that the kinetics type for this catalyzed hydrolysis corresponds one of pseudo first order, being raked the reaction at one time understood between 0 and 55 minutes, to pH 7,4 and 37ºC in buffer saline phosphate 0,1 M, it was for the total population a value average for the constant of reaction velocity, (k), of 6,16 x 10-3 ± 0,00043 min-1 and a time of half life, (t1/2), of 117,26 ± 5,142 min. The value average of the enzymatic activity reported in umol of ASA consumed /mg of lysate erythrocytes/min was of 1,129 x 10-4 ± 0,0035. The most important correlation was observed between the time of half life and the hematocrit levels for both floors altitudinals (p maj 0,05), being for the population of 3,550 msnm -0,421 and -0,286 for 2,746 msnm, what ratifies the presences esterasa(s) in the globular package. Of another side, the enzymatic kinetics of the hydrolysis of the acetylsalicylic acid, was of type michaeliana; being the value of Km of 1,6 mM and the Vmáx of 0,662 umol x L-1 x min-1 x mg-1. not existing significant statistical differences (p minor that 0,05) for both kinetic parameters in the two floors altitudinals. It is concluded, that does not exist difference significant statistic of the esterase activity of lysate erythrocyte in front of the acetylsalicylic acid in children of both floors altitudinal for a (p minor that 0.05). Key words: esterase activity, acetylsalicylic acid, altitudinal.

Se ha estudiado la cinética de la hidrólisis del ácido acetilsalicílico por actividad esterásica eritrocitaria frente al ácido acetilsalicílico in vitro, en niños de dos pisos altitudinales de la provincia de Huamanga a 2,746 y 3,550 msnm, siguiendo la metodología de Trinder. Se ha encontrado que el tipo de cinética para esta hidrólisis catalizada corresponde a una de pseudo primer orden, rastreándose la reacción en un tiempo comprendido entre 0 y 55 minutos, a pH 7,4 y 37ºC en buffer fosfato salino 0,1 M, se halló para la población total un valor promedio para la constante de velocidad de reacción, (k), de 6,16 x 10-3 ± 0,00043 min-1 y un tiempo de vida media, (t1/2), de 117,26 ± 5,142 min. La media de la actividad enzimática reportada en umol de ASA consumidos/mg de eritrocitos lisados /min fue de 1,129 x 10-4 ± 0,0035. La correlación más importante se observó entre el tiempo de vida media y los niveles de hematocrito para ambos pisos altitudinales (p menor que 0,05), siendo para la población de 3,550 msnm -0,421 y -0,286 para 2,746 msnm, lo que ratifica la presencia de la(s) esterasa(s) en el paquete globular. De otro lado, la cinética enzimática de la hidrólisis del ácido acetilsalicílico, fue de tipo michaeliana; siendo el valor de Km de 1,6 mM y la Vmáx de 0,662 umol x L-1 x min-1 x mg-1. Se concluye que no existe diferencia estadística significativa de la actividad de esta(s) hidrolasa(s) eritrocitaria(s) frente al ácido acetilsalicílico en niños de ambos pisos altitudinales para una (p menor que 0.05). Palabras claves: esterasas eritrocitaria, ácido acetilsalicílico, altitudes. / The kinetics of the hydrolysis of the acetylsalicylic acid, has been studied by activity esterasic of the lysate erythrocyte in front of the acetylsalicylic acid in vitro, in children of two floors altitudinals of the province of Huamanga to 2,746 and 3,550 msnm; following the methodology of Trinder. It has been that the kinetics type for this catalyzed hydrolysis corresponds one of pseudo first order, being raked the reaction at one time understood between 0 and 55 minutes, to pH 7,4 and 37ºC in buffer saline phosphate 0,1 M, it was for the total population a value average for the constant of reaction velocity, (k), of 6,16 x 10-3 ± 0,00043 min-1 and a time of half life, (t1/2), of 117,26 ± 5,142 min. The value average of the enzymatic activity reported in umol of ASA consumed /mg of lysate erythrocytes/min was of 1,129 x 10-4 ± 0,0035. The most important correlation was observed between the time of half life and the hematocrit levels for both floors altitudinals (p maj 0,05), being for the population of 3,550 msnm -0,421 and -0,286 for 2,746 msnm, what ratifies the presences esterasa(s) in the globular package. Of another side, the enzymatic kinetics of the hydrolysis of the acetylsalicylic acid, was of type michaeliana; being the value of Km of 1,6 mM and the Vmáx of 0,662 umol x L-1 x min-1 x mg-1. not existing significant statistical differences (p minor that 0,05) for both kinetic parameters in the two floors altitudinals. It is concluded, that does not exist difference significant statistic of the esterase activity of lysate erythrocyte in front of the acetylsalicylic acid in children of both floors altitudinal for a (p minor that 0.05). Key words: esterase activity, acetylsalicylic acid, altitudinal.

Submitted by Antonio Geraldo Couto Barreto (ppgms@ufba.br) on 2013-09-03T11:31:00Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado.pdf: 786865 bytes, checksum: 0b3355dd710231ae8c1e53e6e44dd992 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-03T13:04:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado.pdf: 786865 bytes, checksum: 0b3355dd710231ae8c1e53e6e44dd992 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-03T13:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado.pdf: 786865 bytes, checksum: 0b3355dd710231ae8c1e53e6e44dd992 (MD5) / Introdução - Ainda existem controvérsias em relação a melhor estratégia de terapia antitrombótica nos três meses iniciais de pós-operatório de implante de bioprótese valvar cardíaca. Assim, os autores consideram relevante determinar a incidência contemporânea de episódios de isquemia cerebral nos meses iniciais (primeiros 90 dias de pós-operatório), e realizar uma comparação entre a aspirina isolada (ASA) versus a não-terapia antiplaquetária no mesmo contexto. Métodos e Resultados - Entre o período de janeiro de 2010 a julho de 2012, consecutivamente todos pacientes reumáticos com ritmo sinusal basal, que realizaram a substituição da válvula mitral, e ou aórtica, por bioprótese (pericárdio bovino), foram incluídos neste estudo de coorte prospectivo, totalizando 184 pacientes. O desfecho primário avaliado foi a ocorrência de eventos embólicos. Nos primeiros 30 dias, três eventos isquêmicos cerebrais foram observados em pacientes do grupo ASA (5,2%), em comparação com dois eventos em pacientes sem terapia ASA (1,7%), RR = 3,18, 95% IC 0,5-19,6; P = 0,33. Entre 31 e 90 dias do pós-operatório, nenhum paciente apresentou episódios de embolia cerebral ou periférica. A sobrevida livre de eventos embólicos, sangramentos e a sobrevida geral não foram estatisticamente significativas entre os grupos ASA e não ASA. Conclusões - Constatou-se uma baixa incidência de eventos embólicos durante os primeiros 90 dias de pós-operatório de troca valvar por bioprótese envolvendo a posição mitral, e uma ainda menor para mesma situação para troca aórtica isolada. O uso da aspirina não influenciou de maneira significativa na redução de episódios tromboembólicos.

Unidad de Práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / A través del presente informe se describen las actividades realizadas durante el periodo de práctica prolongada que se desarrolló en el laboratorio farmacéutico Synthon Chile, durante el periodo de Agosto 2014 a Febrero de 2015, en el Departamento de Control de Calidad, en particular la sección de material de envase empaque (MEE). El objetivo principal de la unidad de práctica fue elaborar y actualizar documentos de material de envase empaque para los productos farmacéuticos que produce y comercializa el laboratorio, generar un procedimiento operativo estándar de muestreo y análisis de material de envase empaque, metodologías, especificaciones técnicas, boletines de análisis para cada material de envase empaque. La metodología de trabajo utilizada se resume en el levantamiento de información, revisión de información y/o documentos disponibles y en base a esto se elaboraron los documentos requeridos por el laboratorio. Una vez elaborados los documentos, se sometían a revisión, aprobación y posterior implementación de cada documento elaborado. Por cada documento aprobado por el Departamento de Aseguramiento de Calidad, se debió realizar su correspondiente capacitación al personal competente, dicha capacitación fue llevada a cabo por la alumna en práctica. La estructura de los documentos elaborados se ajusta a la definida por el laboratorio. Los resultados obtenidos fueron la elaboración de doscientos veinte y tres documentos, de los cuales ciento cuatro corresponden a especificaciones técnicas, ocho a metodologías de análisis, ciento diez a boletines de análisis y un procedimiento operativo estándar de muestreo y análisis para material de envase empaque

Orientador: Luiz Carlos Spolidorio / Banca: Marcelo Nicola Muscará / Banca: Ana Paula de Souza Falloni / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Pedro Chaves de Souza / Resumo: As plaquetas são um reservatório natural de diversos mediadores biológicos e, uma vez ativadas, expressam fatores de crescimento pró e anti-angiogênicos, quimiocinas e monoaminas, modulando a ativação e manutenção dos processos inflamatório e de reparo. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o impacto do tratamento com drogas antiplaquetárias, aspirina (Asp) e clopidogrel (Clop), sobre a doença periodontal e o processo de reparação dos tecidos periodontais após indução de periodontite experimental em ratos. Para a avaliação do processo inflamatório foram realizadas análise microscópica, análise da expressão das quimiocinas CXCL4 e CCL5 por ELISA e da atividade de mieloperoxidase (MPO). Para avaliação do reparo dos tecidos periodontais, foram realizadas análise microscópica, análise da expressão de CXCL12, CXCL4, CCL5 e PDGF por ELISA, contagem de osteoclastos e vasos sanguíneos através de reações de imunohistoquímica e caracterização das células mesenquimais indiferenciadas por imunohistoquímica para CD 271 e imunofluorescência de dupla marcação utilizando CD 271 associado ao CD45, KI67 e TUNEL. Células mesenquimais indiferenciadas derivadas da medula óssea de humanos foram utilizadas in vitro para avaliação da proliferação celular por imunocitofluorescência. Três dias após a instalação da ligadura, verificou-se que o tratamento com as drogas antiplaquetárias abreviou o processo inflamatório, observado através dos aspectos microscópicos, da redução da atividade da enzima mieloperoxidase (p<0.001), e queda da expressão de CXCL4 (p<0.05), entretanto o tratamento com Clop de forma mais acentuada que o da Asp. Após retirada da ligadura, o tratamento com Clop acelerou o processo de reparo através da redução significativa da expressão de CXCL12, CXCL4, PDGF, número de vasos sanguíneos e osteoclastos; por outro lado, o tratamento com Asp... / Abstract: Platelets are a natural reservoir of several biological mediators and once activated, express growth factors, pro- and anti-angiogenic factors, chemokines and monoamines modulating the activation and maintenance of the inflammatory and repair process. The aim of this study was to evaluate the impact of antiplatelet drugs, aspirin (Asp) and clopidogrel (Clop) on periodontal disease and the repair of periodontal tissues after induction of experimental periodontitis in rats. For the evaluation of the inflammatory process, microscopic evaluation, analysis of the expression of the chemokines CXCL4 and CCL5 by ELISA and myeloperoxidase activity (MPO) were realized. To evaluate periodontal tissue repair we performed microscopic examination, analysis of the expression of CXCL12, CXCL4, CCL5 and PDGF by ELISA, and blood vessels and osteoclast count by immunohistochemistry. Also, characterization of undifferentiated mesenchymal stem cells by immunohistochemical staining for CD 271 (stem cell marker) and immunofluorescence double labeling using CD 271 associated with CD45, Ki67 and TUNEL were realized. Undifferentiated mesenchymal stem cells derived from human bone marrow were used for in vitro evaluation of cell proliferation by immunocitofluorescence. Three days after ligature placement, we found that treatment with antiplatelet drugs abbreviated the inflammatory process observed by the microscopic analysis, reduction of myeloperoxidase activity (p <0.001) and decreased the expression of CXCL4 (p <0.05), but treatment with Clop more pronounced than Asp. After removal of the ligature, Clop treatment accelerated the repair process by significantly reducing the expression of CXCL12, CXCL4, PDGF number of blood vessels and osteoclasts, on the other hand, treatment with Asp only showed significant effects in reducing the expression of CXCL12 and CXCL4. In turn, Clop treatment increased the number of osteoblasts... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-26Bitstream added on 2014-08-13T18:01:14Z : No. of bitstreams: 1 000734413.pdf: 1931480 bytes, checksum: 03ac87da72efc421641409ff157d3184 (MD5) / As plaquetas são um reservatório natural de diversos mediadores biológicos e, uma vez ativadas, expressam fatores de crescimento pró e anti-angiogênicos, quimiocinas e monoaminas, modulando a ativação e manutenção dos processos inflamatório e de reparo. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o impacto do tratamento com drogas antiplaquetárias, aspirina (Asp) e clopidogrel (Clop), sobre a doença periodontal e o processo de reparação dos tecidos periodontais após indução de periodontite experimental em ratos. Para a avaliação do processo inflamatório foram realizadas análise microscópica, análise da expressão das quimiocinas CXCL4 e CCL5 por ELISA e da atividade de mieloperoxidase (MPO). Para avaliação do reparo dos tecidos periodontais, foram realizadas análise microscópica, análise da expressão de CXCL12, CXCL4, CCL5 e PDGF por ELISA, contagem de osteoclastos e vasos sanguíneos através de reações de imunohistoquímica e caracterização das células mesenquimais indiferenciadas por imunohistoquímica para CD 271 e imunofluorescência de dupla marcação utilizando CD 271 associado ao CD45, KI67 e TUNEL. Células mesenquimais indiferenciadas derivadas da medula óssea de humanos foram utilizadas in vitro para avaliação da proliferação celular por imunocitofluorescência. Três dias após a instalação da ligadura, verificou-se que o tratamento com as drogas antiplaquetárias abreviou o processo inflamatório, observado através dos aspectos microscópicos, da redução da atividade da enzima mieloperoxidase (p<0.001), e queda da expressão de CXCL4 (p<0.05), entretanto o tratamento com Clop de forma mais acentuada que o da Asp. Após retirada da ligadura, o tratamento com Clop acelerou o processo de reparo através da redução significativa da expressão de CXCL12, CXCL4, PDGF, número de vasos sanguíneos e osteoclastos; por outro lado, o tratamento com Asp... / Platelets are a natural reservoir of several biological mediators and once activated, express growth factors, pro- and anti-angiogenic factors, chemokines and monoamines modulating the activation and maintenance of the inflammatory and repair process. The aim of this study was to evaluate the impact of antiplatelet drugs, aspirin (Asp) and clopidogrel (Clop) on periodontal disease and the repair of periodontal tissues after induction of experimental periodontitis in rats. For the evaluation of the inflammatory process, microscopic evaluation, analysis of the expression of the chemokines CXCL4 and CCL5 by ELISA and myeloperoxidase activity (MPO) were realized. To evaluate periodontal tissue repair we performed microscopic examination, analysis of the expression of CXCL12, CXCL4, CCL5 and PDGF by ELISA, and blood vessels and osteoclast count by immunohistochemistry. Also, characterization of undifferentiated mesenchymal stem cells by immunohistochemical staining for CD 271 (stem cell marker) and immunofluorescence double labeling using CD 271 associated with CD45, Ki67 and TUNEL were realized. Undifferentiated mesenchymal stem cells derived from human bone marrow were used for in vitro evaluation of cell proliferation by immunocitofluorescence. Three days after ligature placement, we found that treatment with antiplatelet drugs abbreviated the inflammatory process observed by the microscopic analysis, reduction of myeloperoxidase activity (p <0.001) and decreased the expression of CXCL4 (p <0.05), but treatment with Clop more pronounced than Asp. After removal of the ligature, Clop treatment accelerated the repair process by significantly reducing the expression of CXCL12, CXCL4, PDGF number of blood vessels and osteoclasts, on the other hand, treatment with Asp only showed significant effects in reducing the expression of CXCL12 and CXCL4. In turn, Clop treatment increased the number of osteoblasts...

p. 1-50 / Submitted by Antonio Geraldo Couto Barreto (ppgms@ufba.br) on 2013-10-03T12:51:10Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado André Durães.pdf: 553280 bytes, checksum: 959d5f12a34df56f7195e3b230138b7a (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-10-03T17:55:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado André Durães.pdf: 553280 bytes, checksum: 959d5f12a34df56f7195e3b230138b7a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T17:55:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado André Durães.pdf: 553280 bytes, checksum: 959d5f12a34df56f7195e3b230138b7a (MD5) Previous issue date: 2013 / Introdução - Ainda existem controvérsias em relação a melhor estratégia de terapia antitrombótica nos três meses iniciais de pós-operatório de implante de bioprótese valvar cardíaca. Assim, os autores consideram relevante determinar a incidência contemporânea de episódios de isquemia cerebral nos meses iniciais (primeiros 90 dias de pós-operatório), e realizar uma comparação entre a aspirina isolada (ASA) versus a não-terapia antiplaquetária no mesmo contexto. Métodos e Resultados - Entre o período de janeiro de 2010 a julho de 2012, consecutivamente todos pacientes reumáticos com ritmo sinusal basal, que realizaram a substituição da válvula mitral, e ou aórtica, por bioprótese (pericárdio bovino), foram incluídos neste estudo de coorte prospectivo, totalizando 184 pacientes. O desfecho primário avaliado foi a ocorrência de eventos embólicos. Nos primeiros 30 dias, três eventos isquêmicos cerebrais foram observados em pacientes do grupo ASA (5,2%), em comparação com dois eventos em pacientes sem terapia ASA (1,7%), RR = 3,18, 95% IC 0,5-19,6; P = 0,33. Entre 31 e 90 dias do pós-operatório, nenhum paciente apresentou episódios de embolia cerebral ou periférica. A sobrevida livre de eventos embólicos, sangramentos e a sobrevida geral não foram estatisticamente significativas entre os grupos ASA e não ASA. Conclusões - Constatou-se uma baixa incidência de eventos embólicos durante os primeiros 90 dias de pós-operatório de troca valvar por bioprótese envolvendo a posição mitral, e uma ainda menor para mesma situação para troca aórtica isolada. O uso da aspirina não influenciou de maneira significativa na redução de episódios tromboembólicos. / Salvador

O uso de aspirina em baixa dosagem é recomendado como estratégia de prevenção primária e secundária de doença cardiovascular em pacientes com diabete melito. Entretanto, em decorrência do risco de eventos hemorrágicos cerebrais e digestivos, e da hipótese de que poderia haver um agravamento das complicações microvasculares associadas ao uso da aspirina, tem havido importante subutilização dessa terapia. Atualmente está definido que o uso de aspirina não piora a retinopatia diabética e existem algumas evidências de que também não afeta a função renal em doses usuais (150 mg/dia). Por outro lado, doses maiores do agente antiplaquetário poderão ser necessárias já que evidências recentes sugerem que cerca de 20% dos indivíduos com diabete melito apresentam a chamada resistência à aspirina. Este fenômeno é caracterizado pela diminuição do efeito da droga quando usada nas doses recomendadas para profilaxia de eventos cardiovasculares. Os mecanismos dessa resistência ainda não estão completamente esclarecidos, estando provavelmente relacionados à atividade plaquetária intrínseca anormal. O emprego de terapêuticas antiplaquetárias alternativas ou a administração de doses maiores de aspirina (150-300 mg/ dia) deverão ser melhor avaliadas em relação à eficácia na prevenção da doença cardiovascular no diabete melito, assim como no que diz respeito aos possíveis efeitos sobre as complicações microvasculares, especialmente sobre o rim.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) tulio_pinto_ioc_mest_2007.pdf: 1186917 bytes, checksum: e706fc53fa372ea502331c68d3529a78 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os cisteinil-leucotrienos (CisLT) são importantes mediadores da asma, que induzem broncoconstrição, secreção de muco e efeitos regulatórios no infiltrado de populações leucocitárias, especialmente de eosinófilos. A asma sensível à aspirina, ou induzida por aspirina (AIA), tem sido vista como resultante de um aumento da produção de CisLT conseqüente ao desvio do ácido araquidônico para a via da 5-lipoxigenase (5-LO), na ausência de ciclo-oxigenase (COX) ativa. Como os inibidores de COX, aspirina e indometacina, aumentam a eosinopoiese dependente de IL-5 em cultura de medula óssea murina, nós avaliamos a participação dos CisLT no mecanismo de ação destes moduladores em cultura líquida de medula óssea. As culturas foram estabelecidas com medula óssea de camundongos BALB/c, C57BL/6 e deficientes do receptor de CisLT do tipo 1 (CysLT1R - em background BALB/c e C57BL/6) na presença de IL-5, por 7 dias. CisLTs (LTC4, LTD4 and LTE4) aumentaram a produção de eosinófilos com eficiência comparável (efeito máximo entre 10-7 e 10-8M). Estes efeitos foram comparáveis, tanto nos números como na morfologia dos eosinófilos, aos obtidos com aspirina (10-8M) e indometacina (10-7M). O inibidor da proteína ativadora de 5-lipoxigenase (FLAP), MK-886, bloqueou o efeito de ambas, aspirina e indometacina, mas não dos CisLT. Por outro lado, os antagonistas competitivos de CysLT1R, MK-571 e Montelukast, bloquearam os efeitos do LTD4, da indometacina e da aspirina Todos os três agentes foram capazes de proteger eosinófilos em desenvolvimento da apoptose induzida por Prostaglandina E2 (PGE2). A medula óssea de camundongos CysLT1R (-/-) não respondeu ao LTD4, à indometacina e à aspirina. A capacidade dos inibidores de COX de proteger eosinófilos em desenvolvimento dos efeitos do produto pré-formado da COX, PGE2, indicam que estas drogas atuam pela promoção da produção de CisLT, mais do que pelo bloqueio à sintese de PGE2. Além disso, o efeito citoprotetor é abolido se a medula óssea é incubada com inibidores de COX associados com o MK-886 e Montelukast. Em conjunto, estes resultados sugerem que, na presença dos inibidores de COX, CisLT são formados e promovem eosinopoiese atuando em CisLT1R. CisLT igualmente medeiam os efeitos citoprotetores dos inibidores de COX. O mecanismo de ação dos inibidores de COX na eosinopoiese murina é, portanto, basicamente semelhante ao mecanismo de desvio proposto para AIA / Cysteinyl-Leukotrienes (CysLT) are impor tant mediators of asthma, which induce bronchoconstriction, mucus secretion and a variety of regulatory effects on the infiltrating leukocyte populations, especially eosinophils. Increased CysLT production resulting from the shunting of arachidonic acid towards the 5-lipoxygenase (5-LO) pathway in the absence of acti ve cyclooxygenase (COX) is a one mechanism proposed to explain the fisiopatology of Aspiri n-sensitive, or aspirin-induced, asthma (AIA). Because the COX inhibitors, aspi rin and indomethacin, increase Interleucin-5- dependent eosinophilopoiesis in murine bone-ma rrow culture, we evaluated the participation of CysLT in the mechanism of action of both agents in this model. Liquid bone-marrow cultures were establis hed from BALB/c, C57BL/6 and CysLT 1 R deficient mice (in both the BALB/c and C57B L/6 genetic background) in the presence of interleucin-5, for 7 days. CysLTs (LTC 4 , LTD 4 and LTE 4 ) increased eosinophil production (maximum effect at 10 -7 -10 -8 M). Their effects were comparable, in number as well as morphology of the eosi nophils, to those of aspirin (10 -8 M) and indomethacin (10 -7 M). The 5-lipoxygenase activating pr otein (FLAP) inhibitor, MK- 886, blocked the effects of both aspiri n and indomethacin, but not those of the CysLT. On the other hand, t he competitive antagonists of t he CysLT receptor type 1 (CysLT 1 R), MK-571 and Montelukast, bl ocked the effects of LTD 4 , indomethacin and aspirin. All three agents were capable of protecting developing eosinophils from the apoptosis-inducing actions of prostaglandin E 2 (PGE 2 ). Bone-marrow from CysLT 1 R deficient mice did not respond to LTD 4 , indomethacin or aspirin. The ability of COX inhibitors to protect developing eosinophils from the effects of a preformed COX derivative (PGE 2 ) further indicates that these drugs act by promoting CysLT production rather than preventing synthesis of PGE 2 . Furthermore, this cytoprotective effect is abolished if bone-marrow is incubated with COX inhibitors in association with FLAP or CysLT 1 R inhibitors, or with LTD 4 in association with CysLT 1 R inhibitors. Taken together, these findings suggest that, in the presence of COX inhibitors, CysLT are formed which promote eosinophil opoiesis by acting on high affinity CysLT 1 R. CysLT equally mediate the cytoprotecti ve effects of COX inhibitors. The mechanism of action of COX inhibitors on murine eosinophilopoiesis is, therefore, similar in its essential features to the shunting mechanism, one of mechanisms involved with fisiopatology of AIA.