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Polissacarídeos sulfatados de macroalgas verdes: correlação com parâmetros ambientais e obtenção de glucogalactanas sulfatadas anticoagulantes

Costa, Mariana Santana Santos Pereira da 19 April 2016 (has links)
Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-30T20:49:07Z No. of bitstreams: 1 MarianaSantanaSantosPereiraDaCosta_TESE.pdf: 2604285 bytes, checksum: 563b33c5f5f7b6ae4ce07fe8a3655789 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-30T20:58:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarianaSantanaSantosPereiraDaCosta_TESE.pdf: 2604285 bytes, checksum: 563b33c5f5f7b6ae4ce07fe8a3655789 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-30T20:58:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaSantanaSantosPereiraDaCosta_TESE.pdf: 2604285 bytes, checksum: 563b33c5f5f7b6ae4ce07fe8a3655789 (MD5) Previous issue date: 2016-04-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Polissacarídeos de algas podem ter sua síntese, sua estrutura e propriedades farmacológicas modificadas devido a alterações de fatores ambientais. Contudo, poucas algas já foram analisadas com essa ótica. A alga verde C. cupressoides var. flabellata Børgesen é uma alga abundante na costa do Rio Grande do Norte e já foi demostrado que esta alga coletada na mesma época, mas em praias com grau de salinidade diferentes, sintetizava polissacarídeos sulfatados (PS) com propriedades diferentes, inclusive atividade anticoagulante. Dessa forma, o objetivo do presente foi avaliar a influência do período de coleta e de parâmetros ambientais na composição química e atividade anticoagulante de PS obtidos de algas verdes do litoral potiguar, bem como obter e avaliar o potencial anticoagulante de PS purificados da alga C. cupressoides. Inicialmente, foram obtidos extratos ricos em polissacarídeos sulfatados (ERPS), por proteólise seguido por precipitação com metanol, da alga C. cupressoides coletada mensalmente, durante um ano na praia de Búzios, Nísia Floresta/RN. Observou-se que havia variações no rendimento da extração, composição química e atividade anticoagulante dos ERPS da C. cupressoides de acordo com o mês de coleta, sendo o mês de março aquele em que se obteve ERPS com maior potencial anticoagulante, vale salientar que esta atividade foi maior que a do Clexane®, uma heparina de baixo peso molecular comercial. Ao se analisar a influência de fatores ambientais do local de coleta no rendimento, composição química e atividade anticoagulante observou-se que existe uma correlação positiva significativa (p < 0,05) entre o rendimento da extração dos ERPS e a salinidade da água do mar e a insolação; para a quantidade de sulfato observou-se uma correlação negativa significativa (p < 0,05) com a salinidade da água do mar. Já a quantidade de açúcares totais teve uma correlação negativa significativa (p < 0,05) com: sólidos totais, sódio, cloreto e insolação. Como o mês de março foi o mês com ERPS com maior potencial anticoagulante, resolveu-se purificar, caracterizar e avaliar o potencial anticoagulante de PS extraídos neste mês. Após proteólise e fracionamento com volumes crescentes de acetona obteve-se quatro frações polissacarídicas da C. cupressoides (CCB-0.3, CCB-0.5, CCB-1.0 e CCB-2.0), como a CCB-0.5 apresentou maior atividade anticoagulante, esta foi submetida a cromatografia de troca-iônica e eluída em duas novas frações (FI e FII), após eletroforese em gel de agarose, coloração da lâmina com azul de toluidina e descoloração, observou-se o aparecimento de uma única banda em ambas as subfrações, o que indica a presença de uma única população de PS, o que permite inferir que estes PS foram purificados. Análises por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) indicam que os PS FI e FII tratam-se de glucogalactanas. Estas glucogalactnas sulfatadas exibiram atividade anticoagulante pela via intrínseca (teste de aPTT), pela via extrínseca (teste PT) e pela via comum (teste TT) da cascata de coagulação. Um resultado interessante foi que a atividade no teste de aPTT das glucogalactanas sulfatadas foi similiar a atividade do Clexane®. Além disso, estes PS foram capazes de inibir parcialmente a trombina. Isto é indicativo que os PS da C. cupressoides podem estar agindo em diversas proteases da cascata de coagulação. Entretanto, mais estudos são necessários para explicar detalhadamente quais os alvos de ação destes polímeros. Por fim, analisou-se a influência do período de coleta e de fatores ambientais em ERPS de outras algas verdes do litoral do RN (Caulerpa prolifera, Caulerpa racemosa var. occidentalis, Caulerpa sertularioides e Codium isthmocladum) coletadas também mensalmente, durante um ano na praia de Búzios, Nísia Floresta/RN; e observou-se que, da mesma forma da C. cupressoides, houve variações no rendimento, composição química e atividade anticoagulante para os ERPS algas verdes C. prolifera, C. racemosa, C. sertularioides e C. isthmocladum. No entanto, um fato interessante é que cada alga responde de forma diferente as condições ambientais do local de coleta. Estes dados indicam que dependendo do período do ano que a alga é coletada, os PS extraídos destas espécies de algas podem ter suas estruturas químicas afetadas e, consequentemente, suas atividades biológicas poderão ser distintas. Estes tipos de estudos levam ao esclarecimento de quais seriam as melhores condições para se obter o PS com as características estruturais e biológicas de interesse, o que é fundamental para o uso destes polímeros na indústria. / Polysaccharides of seaweeds can have their synthesis, structure and pharmacological properties modified due to changes in environmental factors. But few algae have been analyzed in this light. The green seaweed C. cupressoides var. flabellata Børgesen is an abundant alga in the coast of Rio Grande do Norte and it was already shown that this seaweed collected at the same time in beaches with different degree of salinity synthesized sulfated polysaccharides (PS) with different properties, including anticoagulant activity. Therefore the objective of this study was to obtain and characterize PS of green seaweed of the coast of Rio Grande do Norte evaluating the influence of the collection period and environmental parameters in the chemical composition and anticoagulant activity of PS as well as purify, characterize and evaluate the anticoagulant potential of at least one PS of the seaweed C. cupressoides. Initially, extracts rich in sulfated polysaccharides (ERPS) were obtained by proteolysis followed by precipitation with methanol of the seaweed C. cupressoides collected monthly for one year on the beach in Búzios, Nísia Floresta/RN. It was noted that there were variations in performance of extraction, chemical composition and anticoagulant activity of ERPS C. cupressoides according to the month of collection, with the month of March being the one in which they obtained more anticoagulant potential of ERPS. It is worth noting that this activity was greater than that of Clexane®, a low molecular weight commercial heparin. When analyzing the influence of environmental factors in the collection site in regards to performance, chemical composition and anticoagulant activity it has been observed that there is a significant positive correlation (p < 0.05) between the performance of the extraction of ERPS and salinity of sea water and insolation; for the amount of sulfate it was observed a significant negative correlation (p < 0.05) with the salinity of the seawater. The amount of total sugars had a significant negative correlation (p < 0.05) with: total solids, sodium, chloride and insolation. Since the month of March was the month with ERPS with more anticoagulant potential, it was decided to purify, characterize and evaluate the PS anticoagulant potential extracted on that month. After proteolysis and fractionation with increasing volumes of acetone four fractions of polysaccharide C. cupressoides (CCB-0.3, CCB-0.5, CCB-1.0 e CCB2.0) were obtained. Since the CCB-0.5 had higher anticoagulant activity, it was submitted to a chromatography ion-exchange column and eluted in two new fractions (FI and FII) after agarose gel electrophoresis, slide staining with toluidine blue and discoloration it was observed the appearance of a single band on both SP which indicates the presence of a single population of PS, which allows inferring that these PS were purified. Analysis by high-performance liquid chromatography (HPLC) indicate that SP FI and FII are glucogalactanas. These sulfated glucogalactans exhibited by the intrinsic pathway anticoagulant activity (APTT assay) the extrinsic pathway (PT test) and common pathway (TT test) of the coagulation cascade. An interesting result was that activity in the aPTT test of sulfated glucogalactans was similiar activity of Clexane®. In addition, these PS were able to partially inhibit thrombin. This is an indicative that the PS C. cupressoides may be acting on various proteases of the coagulation cascade. But more studies are needed to explain in detail which are the targets of action of these polymers. Finally, we analyzed the influence of the period of collection and environmental factors in ERPS of other green seaweeds RN coast (Caulerpa prolifera, Caulerpa racemosa var. occidentalis, Caulerpa sertularioides and Codium isthmocladum) also collected monthly for one year on the beach of Búzios, Nísia Floresta/RN; and it was observed that, like the C. cupressoides, there were variations in the performance, chemical composition and anticoagulant activity for ERPs green seaweeds C. prolifera, C. racemosa, C. sertularioides and C. isthmocladum. However, an interesting fact is that each alga responds differently to environmental conditions of the collection site. These data indicate that depending on the time of the year that the algae are collected, the PS extracted from these species of algae may have their chemical structures affected hence its biological activity may be different. These types of studies lead to the clarification of which would be the best conditions to obtain the PS with the structural and biological characteristics of interest, which is essential for the use of these polymers in the industry.
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Caracterização estrutural e avaliação da atividade anticoagulante de condroitim sulfato de lula Doryteuthis (Loligo) plei

Carvalho, Rafael Guzella de 23 July 2015 (has links)
Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-10-11T14:26:18Z No. of bitstreams: 1 rafaelguzelladecarvalho.pdf: 5817882 bytes, checksum: 3cecfbefd0364ef85d5c3183dcbdfc47 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-10-16T14:07:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rafaelguzelladecarvalho.pdf: 5817882 bytes, checksum: 3cecfbefd0364ef85d5c3183dcbdfc47 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-16T14:07:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rafaelguzelladecarvalho.pdf: 5817882 bytes, checksum: 3cecfbefd0364ef85d5c3183dcbdfc47 (MD5) Previous issue date: 2015-07-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Glicosaminoglicanos (GAGs) são heteropolissacarídeos lineares ligados a um núcleo proteico dos proteoglicanos (PGs). Condroitim sulfato (CS) é GAG sulfatado composto por unidades dissacarídicas repetidas de ácido D-glucurônico e N-acetil-galactosamina, esse composto possui atividades biológicas associadas à interação com diferentes elementos da matriz. Estas ações têm sido relacionadas às suas características estruturais relativas ao elevado teor de grupos sulfato e carboxila que originam domínios estruturais que são conhecidos por participar de funções fisiológicas específicas. O presente trabalho teve por objetivo a identificação e caracterização estrutural dos GAGs extraídos de diferentes tecidos de lula (Doryteuthis plei) bem como a avaliação da atividade anticoagulante destes compostos. Para isso inicialmente determinamos a técnica de extração dos GAGs dos tecidos de manto, nadadeira, tentáculos e pele utilizando degradação com enzimas proteolíticas e purificação utilizando a técnica de cromatografia de troca iônica. Realizamos a identificação dos GAGs com degradações com liases específicas (chases AC e B de F. heparinum), em que ficou evidenciado que CS é o GAG majoritário dos tecidos de D. plei. Os CS encontrados tiveram peso molecular detectados na faixa de 30-50 kDa. A dosagem química de sulfato demonstrou que estes CS possuíam relação superior a 1,2 sulfato/hexosamina o que nos forneceu o indicativo que estas macromoléculas eram supersulfatadas. Este fato foi confirmado pela análise por FACE dos produtos da digestão de CS de manto e nadadeira com chase AC de A. aurescens em que a maior sulfatação foi relacionada à presença de alta proporção de resíduos di-sulfatados, ΔDi4,6S (≈55%). Técnicas espectroscópicas de Raman e RMN permitiram confirmar a maior substituição e sulfatação nas posições 4- e 6- da GalNAc, respectivamente. Os CS de manto e nadadeira ainda demonstraram atividade anticoagulante associada à inibição da via intrínseca da coagulação sendo detectada inibição dos fatores IIa e Xa. Desta forma concluímos que CS-E é o tipo de glicosaminoglicano constituinte nos tecidos de lula e que ele possui características tecido-específica, desempenhando sua atividade anticoagulante de acordo com o padrão de sulfatação. / Glycosaminoglycans (GAGs) are linear heteropolysaccharides attached to a core protein of proteoglycans (PGs). Chondroitin sulfate (CS) is sulfated GAG composed of repeating disaccharide units of D-glucuronic acid and N-acetyl-galactosamine, this compound has biological activities associated to their interaction with different components of the extracellular matrix. These activities have been related to their structural characteristics due to the high content of sulfate and carboxyl groups originating structural domains which are known to participate in specific physiological functions. This aim of this study was the identification and structural characterization of glycosaminoglycans extracted from squid different tissues (Doryteuthis plei) as well as evaluation of the anticoagulant activity of these compounds. Initially, we determined the procedures GAGs extraction in mantle tissue, fin, tentacles and skin using degradation with proteolytic enzymes and purification using ion exchange chromatography. We carried out the identification of GAG to degradation with specific lyases (chases AC and B from F. heparinum), wherein we evidenced that CS is the principal GAG of the D. plei tissues. Molecular weight of CS had a range of 30-50 kDa. Quantification of sulfate groups demonstrated that these CS had higher ratio of sulfate/hexosamine (1.2), a indicative that these macromolecules were oversulfated. This fact was confirmed by FACE analysis of CS from mantle and fin after digestion with chase AC from A. aurescens where most sulfation was related to the presence of high proportion of di-sulfated residues, ΔDi4,6S (≈55%). Raman spectroscopic and NMR techniques confirmed the increased substitution and sulfation in positions 4 and 6 of GalNAc, respectively. CS of the mantle and fin demonstrated anticoagulant activity associated with inhibition of the intrinsic coagulation pathway by inhibition of factors Xa and IIa. Thus, we conclude that CS-E is the kind of glycosaminoglycan constituent in squid tissues and it has tissue-specific characteristics, playing their anticoagulant activity according to the sulfation pattern.
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Produção de exopolissacarídeos pelos fungos endofíticos Neofusicoccum parvum, Fusarium sp e Colletotrichum gloeosporioides: caracterização química e atividade anticoagulante / Production of exopolysaccharides by endophytic fungi Neofusicoccum parvum, Fusarium sp and Colletotrichum gloeosporioides: chemical characterization and anticoagulant activity

Dominato, Angélica Augusta Grigoli [UNESP] 20 January 2017 (has links)
Submitted by ANGELICA AUGUSTA GRIGOLI DOMINATO null (angelica@unoeste.br) on 2017-02-16T18:51:51Z No. of bitstreams: 1 Angélica A. Grigoli Dominato.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-20T20:26:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dominato_aag_dr_sjrp.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T20:26:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dominato_aag_dr_sjrp.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) Previous issue date: 2017-01-20 / A atividade metabólica fúngica, especialmente nos endofíticos, favorece a secreção de moléculas como antibióticos, pigmentos, enzimas e polissacarídeos, que podem ser aplicadas nas indústrias alimentícia, cosmética, farmacêutica, entre outras. A diversidade química dos exopolissacarídeos (EPS) bem como a possibilidade de sua utilização como substrato para diferentes modificações químicas (carboxilação, sulfatação e metilação) aumentam seu espectro de aplicação. Realizar o cultivo submerso dos fungos endofíticos Neofusicoccum parvum, Fusarium sp e Colletotrichum gloeosporioides para a produção de EPS foi o primeiro objetivo deste trabalho. Uma vez obtidos, os EPS foram purificados e quimicamente caracterizados. Sulfatação e ensaio da atividade anticoagulante foram realizados. Os parâmetros concentração de inóculo e tempo de cultivo foram estabelecidos para maior produção dos EPS, por fermentação submersa. Etapas de purificação, por centrifugação, foram efetuadas após análises por cromatografia de exclusão estérica a alta pressão, com detecção por índice de refração (HPSEC/RID). Os EPS purificados [precipitado do C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) e os três sobrenadantes] mostraram-se praticamente isentos de proteínas. A hidrólise ácida e subsequente análise dos hidrolisados por cromatografia de troca aniônica a alta pressão com detecção por amperometria pulsada (HPAEC/PAD) indicaram que apenas o C. gloeosporioidesprec era uma glucana. A análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC/MS) mostrou um único derivado, 1,3,5 tri-O-acetil, 2,4,6-tri-O-metil glucitol com fragmentos de massa (m/z 118, 161, 203, 234.1) condizente com uma glucana do tipo (1→3). Os espectros de FT-IR apresentaram sinais na região de impressão digital, 926 cm-1 e 820 cm-1, típicos de polissacarídeos em configuração . Esses resultados foram confirmados por ressonância magnética nuclear bidimensional (HSQC), com um único acoplamento C1/H1, em 99,3/5,18 ppm e um sinal deslocado para campo baixo, 82,8/3,74 ppm, característico de C-3 substituído, indicando que o EPS é uma α-(1→3)-glucana. A sulfatação desta molécula resultou em α-(1→3)-D-glucanasulf com DS de 0,75 que foi utilizada nos ensaios de atividade anticoagulante. O aumento do tempo para a coagulação, nos testes do APTT (Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada) e TT (Tempo de Trombina), foi concentração-dependente, indicando que [α-(1→3)-D-glucanasulf] pode atuar como um inibidor da via intrínseca da coagulação sanguínea e da conversão do fibrinogênio em fibrina, caracterizando-a como um potencial anticoagulante. / Fungal metabolic activity, especially in the endophytic, favors secretion of molecules such as antibiotics, pigments, enzymes and polysaccharides, which can be applicable by food, cosmetic and pharmaceutical industries, and others. The chemical diversity of the exopolysaccharides (EPS), as well as the possibility of their use as substrate for different chemical modifications (carboxylation, sulfation and methylation) increases their application spectrum. Submerged cultivation of the endophytic fungi Neofusicoccum parvum, Fusarium sp and Colletotrichum gloeosporioides for the production of EPS was the first aim of this study. Once the EPS were obtained, they were purified and chemically characterized. Chemical modification by sulfation and anticoagulant activity assays were performed. Cultivation to obtain EPS were performed in submerged fermentation. The inoculum concentration and incubation time parameters were set in order to obtain a higher amount of EPS. Purification by centrifugation was performed after analysis by high pressure steric exclusion chromatography with refractive index detection (HPSEC / RID). Purified EPS [precipitate of C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) and the three supernatants] proved to be virtually free of protein polysaccharides. Acid hydrolysis and subsequent analysis of the hydrolysates with high performance anionic exchange chromatography with amperometric detection (HPAEC/PAD) indicated that only the C. gloeosporioidesprec was a glucan. Analysis from gas chromatography and mass spectrometry showed a single derivative, 1,3,5-tri-Oacetyl, 2,4,6-tri-O-methyl glucitol with mass fragments (m/z 118, 161, 203, 234.1) consistent with a (1→3)-glucan. FT-IR spectra showed absorption bands typical from carbohydrate and signals in the digital region at 926 cm-1 and 820 cm-1, typical of polysaccharides in the α- configuration. These results were confirmed by two-dimensional nuclear magnetic resonance (HSQC), with a single C1/H1, in 99.2/4.98 ppm, typical of one α bonding, and low-field 82.6/3.55 ppm signal displacement, characteristic of substituted C-3, indicating that EPS is an α-(1→3)-glucan. Sulfation of this molecule resulted in α- (1→3)-glucansulf with DS of 0.75 which was used in the anticoagulant activity assays. The increase in coagulation reaction time in the APTT (Activated Partial Thromboplastin Time) and TT (Thrombin Time) tests was concentration-dependent, indicating that [α-(1→3)-D-glucansulf] might act as an inhibitor of the intrinsic via of blood clotting and conversion of fibrinogen into fibrin, characterizing it as a potential anticoagulant.
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Homogalactanas sulfatadas da alga Codium isthmocladum com atividade anticoagulante

Farias, Eduardo Henrique Cunha de 07 July 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoHCF.pdf: 473372 bytes, checksum: 2fca55fdea3773bfb6942b7901966772 (MD5) Previous issue date: 2006-07-07 / Since the first description of sulfated polysaccharides from seaweeds, the biological activities of these compounds have been evaluated under different aspects and experimental procedures. Among the broad biological activities presented by seaweed polysaccharides, anticoagulant action appears as a promising function. In this present study we have obtained sulfated polysaccharides from the green seaweed Codium isthmocladium by proteolytic digestion, followed by separation into five fractions (0.3, 0.5, 0.7, 0.9 and 1.2) by sequential acetone precipitation. The chemical analyses have demonstrated that all fractions are composed mainly by sulfated polysaccharides. The anticoagulant activity of these fractions was determined by activated partial thromboplastin time (aPTT) and prothrombin time test (PT) using citrate normal human plasma. None fraction has shown anticoagulant activity by PT test. Furthermore, all of them have shown anticoagulant activity by aPTT test. These results indicated that the molecular targets of these sulfated polysaccharides are mainly in the intrinsic via of the coagulation cascade. Agarose gel electrophoresis in 1,3-diaminopropane acetate buffer, pH 9.0, stained with 0.1% toluidine blue showed the presence of two or three bands in several fractions while the fraction 0.9 showed a single spot. By anion exchange chromatography, the acid polysaccharides from the 0.9 acetone fraction were separated into two new fractions eluted respectively with 2.0 and 3.0 M NaCl. These compounds showed a molecular weight of 6.4 and 7.4 kDa respectively. Chemical analyses and infrared spectroscopy showed that Gal 1 and Gal 2 are sulfated homogalactans and differ one from the other in degree and localization of sulfate groups. aPPT test demonstrated that fractions 2,0 and 3,0M (Gal1 and Gal 2, respectively) have anticoagulant activity. This is the first time that anticoagulant sulfated homogalatans have been isolated from green algae. To prolong the coagulation time to double the baseline value in the aPTT, the required amount of sulfated galactan 1 (6,3mg) was similar to low molecular heparin Clexane?, whereas only 0,7mg of sulfated galactan 2 was needed to obtain the same effect. Sulfated galactan 2 in high doses (250mg) induces platelet aggregation. These results suggest that these galactans from C. isthmocladum have a potential application as an anticoagulant drug / Desde a primeira descri??o de polissacar?deos sulfatados em algas marinhas, as atividades biol?gicas destes compostos foram avaliadas sob diferentes aspectos e procedimentos experimentais. Dentre as diversas atividades biol?gicas apresentadas pelos polissacar?deos de algas marinhas, a a??o do anticoagulante aparece como sendo uma fun??o promissora. Neste presente estudo foram obtidas cinco fra??es de polissacar?deos sulfatados da alga Codium isthmocladium (F0.3, F0.5, F0.7, F0.9 e F1.2) , atrav?s de prote?lise seguida de fracionamento com volumes crescentes de acetona. An?lises qu?micas demonstraram que todas as fra??es s?o compostas por polissacar?deos sulfatados. A atividade anticoagulante destas fra??es cet?nicas foram determinadas por testes de tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) e tempo de protrombina (PT), utilizando plasma humano normal citratado. Nenhuma fra??o apresentou atividade via teste de PT. No entanto todas as fra??es demonstraram atividade anticoagulante para teste de aPPT. Estes resultados indicam que o(s) seus alvo(s) molecular(es) esta(?o) localizado(s) principalmente na via intr?nseca da cascata de coagula??o. Eletroforese em gel de agarose demonstrou a presen?a de 2 ou 3 bandas em varias fra??es cet?nicas, enquanto a F0.9, somente uma banda. Os polissacar?deos da F 0.9, quando submetidos a cromatografia da troca i?nica, foram separados em duas novas fra??es elu?das com 2,0 e 3,0 M de NaCl. Estes compostos apresentaram um peso molecular de 6.4 e 7.4 kDa respectivamente. Analises qu?micas e espectroscopia de infravermelho das Gal 1 e Gal 2 demonstraram que essas s?o homogalactanas sulfatadas e que diferenciavam uma da outra apenas no grau e localiza??o dos grupamentos sulfato. Teste de aPTT mostrou que as fra??es 2,0 e 3,0 M (Gal 1 e Gal 2, respectivamente) possuem atividade anticoagulante. Esta ? a primeira vez que homogalactanas sulfatadas anticoagulantes s?o extra?das de macroalgas verdes. A massa necess?ria de Gal 1 (6,3mg) para prolongar o tempo normal de coagula??o em duas vezes, via teste de aPTT, foi semelhante a Clexane?, no entanto somente 0,7mg da Gal 2 s?o necess?rios para se obter o mesmo efeito. A Gal 2 em altas doses (250mg) induziu a agrega??o plaquet?ria. Estes resultados sugerem que as galactanas da alga C. isthmocladum tem potencial aplica??o como f?rmacos anticoagulantes
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Bioprospec??o de polissacar?deos sulfatados de macroalgas marinhas do litoral do Rio Grande do Norte: caracteriza??o de uma heterofucana extra?da da alga marron Sargassum filipendula que induz apoptose em c?lulas HeLa

Costa, Leandro Silva 08 March 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeandroSC_DISSERT_1-68.pdf: 3005513 bytes, checksum: 4d385177273793fb97add8fa79a198b9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The coast of Rio Grande do Norte has more than 100 species of seaweed, mostly unexplored regarding their pharmacological potential. The sulfated polysaccharides (PS) are by far the more seaweed compounds studied, these present a range of biological properties, such as anticoagulant activity, anti-inflammatory, antitumor and antioxidant properties. In this study, we extract sulfated polysaccharide rich-extracts of eleven algae from the coast of Rio Grande do Norte (Dictyota cervicornis; Dictiopterys delicatula; Dictyota menstruallis; Dictyota mertensis; Sargassum filipendula; Spatoglossum schr?ederi; Gracilaria caudata; Caulerpa cupresoides; Caulerpa prolifera; Caulerpa sertularioides e Codim isthmocladum), and these were evaluated for the potential anticoagulant, antioxidant and antiproliferative. All polysaccharide extracts showed activity for anticoagulant, antioxidant and/or antiproliferative activity, especially D. delicatula and S. filipendula, which showed the most prominent pharmacological potential, thereby being chosen to have their sulfated polysaccharides extracted. By fractionating method were obtained six fractions rich in sulfated polysaccharides to the algae D. delicatula (DD-0,5V, DD-0, 7V, DD-1,0v, DD-1,3v, DD-1,5v and DD-2,0) and five fractions to the alga S. filipendula (SF-0,5V, SF-0,7V, SF-1,0v, SF-1,5v and SF-2,0v). For the anticoagulant assay only the fractions of D. delicatula showed activity, with emphasis on DD-1, 5v that presented the most prominent activity, with APTT ratio similar to clexane? at 0.1 mg/mL. When evaluated the antioxidant potential, all fractions showed potential in all tests (total antioxidant capacity, hydroxyl and superoxide radicals scavenging, ferrous chelation and reducing power), however, the ability to chelate iron ions appears as the main mechanism antioxidant of sulfated polysaccharides from seaweed. In antiproliferative assay, all heterofucanas showed dose-dependent activity for the inhibition of cell proliferation of HeLa, however, with the exception of SF-0,7V, SF- 1,0v and SF-1,5v, all fractions showed antiproliferative activity against MC3T3, a normal cell line. The heterofucana SF-1,5V had its antiproliferative mechanism of action evaluated. This heterofucan induces apoptosis in HeLa cells by a pathway caspase independent, promoting the release of apoptosis Inducing Factor (AIF) in the cytosol, which in turn induces chromatin condensation and DNA fragmentation into 50Kb fragments. These results are significant in that they provide a mechanistic framework for further exploring the use of SF-1.5v as a novel chemotherapeutics against human cervical cancer. / O litoral do Rio Grande do Norte apresenta mais de 100 esp?cies de macroalgas marinhas, a maioria delas ainda n?o explorada quanto ao seu potencial farmacol?gico. Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o de longe os compostos de macroalgas marinhas mais estudados, sendo atribu?da a estes uma gama de propriedades biol?gicas, como: atividade anticoagulante, antiinflamat?ria, antitumoral e antioxidante. Neste trabalho, obteve-se extratos ricos em polissacar?deos de onze algas do litoral do Rio Grande do Norte (Dictyota cervicornis; Dictiopterys delicatula; Dictyota menstruallis; Dictyota mertensis; Sargassum filipendula; Spatoglossum schr?ederi; Gracilaria caudata; Caulerpa cupresoides; Caulerpa prolifera; Caulerpa sertularioides e Codium isthmocladum), e estas foram avaliadas quanto ao seu potencial anticoagulante, antioxidante e antiproliferativo frente ? linhagem celular tumoral HeLa. Todos os extratos polissacar?dicos apresentaram atividades anticoagulante, antioxidante e/ou antiproliferativa, com destaque para os das algas D. delicatula e S. filipendula, que apresentaram os maiores ?ndices de potencial farmacol?gico, sendo, portanto, escolhidas para serem submetidos a passos posteriores de purifica??o de seus polissacar?deos sulfatados. Atrav?s do fracionamento com volumes crescentes de acetona foram obtidas seis fra??es ricas em polissacar?deos sulfatados da alga D. delicatula (DD-0,5v, DD-0,7v, DD-1,0v, DD-1,3v, DD-1,5v e DD-2,0v) e cinco fra??es da alga S. filipendula (SF-0,5v, SF- 0,7v, SF-1,0v, SF-1,5v e SF-2,0v). An?lises f?sico-qu?micas mostraram que estas s?o ricas em heterofucanas sulfatadas. Apenas as fra??es da alga D. delicatula apresentaram atividade anticoagulante, com destaque para DD-1,5v que apresentou a atividade mais proeminente com raz?o de APTT semelhante ? clexane?, f?rmaco anticoagulante comercial. Quando avaliadas com rela??o ao potencial antioxidante todas as fra??es apresentaram atividade em todos os testes realizados (Capacidade antioxidante total, sequestro de radicais super?xido e hidroxila, quela??o f?rrica e atividade redutora), entretanto, a capacidade de quela??o de ?ons ferro aparece como o principal mecanismo antioxidante dos polissacar?deos sulfatados dessas macroalgas marinhas. No ensaio antiproliferativo, todas as heterofucanas apresentaram atividades dose-dependente para a inibi??o da prolifera??o celular de HeLa, entretanto, as fra??es SF-0,7v, SF-1,0v e SF-1,5v apresentaram atividade espec?fica para esta linhagem celular, n?o inibindo a prolifera??o da linhagem celular normal MC3T3, sendo a heterofucana SF-1,5v escolhida para ter seu mecanismo de a??o antiproliferativo determinado. SF-1,5v induz a apoptose em c?lulas HeLa principalmente atrav?s de uma via independente da ativa??o das caspases, promovendo a libera??o do Fator Indutor da Apoptose (AIF) no citosol, que por sua vez induz a condensa??o da cromatina e fragmenta??o do DNA em fragmentos de 50Kb. Este trabalho ? o primeiro relato mostrando uma heterofucana cujo principal mecanismo antiproliferativo ? a libera??o de AIF mitocondrial para o citosol, o que torna SF-1,5v um promissor f?rmaco na terapia antitumoral, possibilitando uma alternativa aos quimioter?picos tradicionais.
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Bioprospec??o de extratos metan?licos de macroalgas marinhas do litoral do Rio Grande do Norte: avalia??o das atividades anticoagulante, antioxidante e antiproliferativa

Gomes, Dayanne Lopes 31 July 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DayaneLG_DISSERT.pdf: 2239805 bytes, checksum: 7c5ca3d63f1b06cc836a0c3ae876316c (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Seaweeds are organisms known to exhibit a variety of biomolecules with pharmacological properties. The coast of Rio Grande do Norte has over 100 species of seaweeds, most of them not yet explored for their pharmacological potential. Sugars and phenolic compounds are the most studied of these being assigned a range of biological properties, such as anticoagulant , antiinflammatory, antitumor and antioxidant activities. In this work, we obtained methanolic extracts from thirteen seaweeds of the coast of Rio Grande do Norte (Dictyota cervicornis; Dictiopterys delicatula; Dictyota menstruallis; D. mertensis; Sargassum filipendula; Spatoglossum schr?ederi; Acanthophora specifera; Botryocladia occidentalis; Caulerpa cupresoides; C. racemosa; C. prolifera; C. sertularioides e Codium isthmocladum). They were evaluated as anticoagulant and antioxidant drugs, as well as antiproliferative drugs against the tumor cell line HeLa. None of the methanolic extracts showed anticoagulant activity, but when they were evaluated as antioxidant drugs all of extracts showed antioxidant activity in all tests performed (total antioxidant capacity, sequestration of superoxide and hydroxyl radicals, ferric chelation and reductase activity), especially the algae D. mentrualis, D. cilliolata and C. prolifera, who had the greatest potential to donate electrons.In addition, the ability of iron ions chelation appears as the main antioxidant mechanism of the methanolic extracts of these seaweeds mainly for the extract of the C. racemosa seaweed, which reached almost 100% activity. In the MTT assay, all extracts showed inhibitory activity at different levels againts HeLa cells. Moreover, D. cilliolata (MEDC) and D. menstrualis (MEDM) extracts showed specific activity to this cell line, not inhibiting the viability of 3T3 normal cell line, so they were chosen for detailing the antiproliferative mechanism of action. Using flow cytometry, fluorescence microscopy and in vitro assays we demonstrated that MEDC and MEDM induced apoptosis in HeLa cells by activation of caspases 3 and 9 and yet, MEDC induces cell cycle arrest in S phase. Together, these results showed that the methanolic extracts of brown seaweed D. menstrualis and D. cilliolata may contain agents with potential use in combatting cells from human uterine adenocarcinoma. This study also points to the need for more in-depth research on phytochemical and biological context to enable the purification of biologically active products of these extracts / Macroalgas marinhas s?o organismos conhecidos por apresentar uma diversidade de biomol?culas com propriedades farmacol?gicas. O litoral do Rio Grande do Norte apresenta mais de 100 esp?cies de macroalgas marinhas, a maioria delas ainda n?o explorada quanto ao seu potencial farmacol?gico. A??cares e compostos fen?licos s?o os compostos de macroalgas marinhas mais estudados, sendo atribu?da a estes uma gama de propriedades biol?gicas, como: atividade anticoagulante, antiinflamat?ria, antitumoral e antioxidante. Neste trabalho, foram obtidos extratos metan?licos de treze algas do litoral do Rio Grande do Norte (Dictyota cervicornis; Dictiopterys delicatula; Dictyota menstruallis; Dictyota mertensis; Sargassum filipendula; Spatoglossum schr?ederi; Acanthophora specifera;Botryocladia occidentalis;Caulerpa cupresoides; C. racemosa; C. prolifera; C. sertularioides e Codium isthmocladum), e esses foram avaliados quanto ao seu potencial anticoagulante, antioxidante e antiproliferativo. Nenhum dos extratos metan?licos apresentaram atividades anticoagulante, por?m quando avaliados com rela??o ao potencial antioxidante todos os extratos apresentaram atividade em quase todos os testes realizados (capacidade antioxidante total, sequestro de radicais super?xido e hidroxila, quela??o f?rrica e atividade redutora). Os extratos apresentaram resultados mais expressivos no teste de quela??o f?rrica, principalmente para o extrato da alga C. racemosa que chegou a quase 100% de atividade. Destaca-se tamb?m a capacidade de doar el?trons dos extratos, em especial, dasalgas D. mentrualis,D. cilliolata e C. prolifera que apresentaram os maiores potenciais. Nosestudos de citotoxidade, todos os extratos apresentaram atividades em diferentes n?veis frente as c?lulas tumorais HeLa, entretanto, os extratos de D. cilliolata (MEDC) e D. menstrualis (MEDM) apresentaram atividade espec?fica para esta linhagem celular, n?o apresentando citotoxidadepara as c?lulas3T3. Estudos com estes dois extratos utilizando t?cnicas de citometria de fluxo, microscopia de fluoresc?ncia e testes in vitro mostraram que MEDC e MEDM induzem a apoptose em c?lulas HeLa atrav?s da ativa??o das caspases 3 e 9 e ainda, MEDC induz a parada do ciclo celular na fase S. Juntos, esses resultados mostraram que os extratos metan?licos de algas marrom D. mentrualis e D. cilliolata podem conter agentes com potencial utiliza??o no combate de c?lulas de adenocarcinoma uterino humano. O presente estudo tamb?m aponta para a necessidade de investiga??es mais aprofundadas no ?mbito fitoqu?mico e biol?gico para se identificar produtos biologicamente ativos presentes nos extratos
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Caracteriza??o estrutural de um novo condroitim antitromb?tico altamente sulfatado contendo o res?duo de GlcA 2,3-O-dissulfato do Litopenaeus vannamei

Cavalcante, R?mulo dos Santos 07 August 2015 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-26T19:16:13Z No. of bitstreams: 1 RomuloDosSantosCavalcante_DISSERT.pdf: 19913619 bytes, checksum: c0413e2c652526308cb5aab3f26e66c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T23:13:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RomuloDosSantosCavalcante_DISSERT.pdf: 19913619 bytes, checksum: c0413e2c652526308cb5aab3f26e66c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T23:13:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RomuloDosSantosCavalcante_DISSERT.pdf: 19913619 bytes, checksum: c0413e2c652526308cb5aab3f26e66c5 (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Por muitos anos as doen?as cardiovasculares e os dist?rbios tromboemb?licos v?m representando a principal causa de mortes por doen?as no mundo. Diante desta realidade e das complica??es do uso da heparina, v?rios estudos relatando a ocorr?ncia de glicosaminoglicanos com potencial antitromb?tico j? foram descritos. No entanto, com o aprimoramento e o surgimento de novas t?cnicas de caracteriza??o estrutural, tem sido poss?vel identificar novas mol?culas antitromb?ticas e compreender outros aspectos da rela??o estrutura-atividade destes compostos. Nesse contexto, este trabalho descreve a ocorr?ncia de um condroitim sulfato altamente sulfatado (CSAS) e com grande potencial terap?utico no cefalot?rax do camar?o Litopenaeus vannamei. Essa mol?cula foi isolada mediante prote?lise, tratamento com acetona e purificado por cromatografias de troca-i?nica e gel filtra??o. Estruturalmente, o CSAS do camar?o apresentou uma massa molecular m?dia de ~ 26 kDa e n?o foi completamente digerido pelas condroitinases AC e ABC liases. A partir dos espectros de RMN unidimensional TOCSY seletivo e bidimensional ?H/??C HSQC foi poss?vel identificar a presen?a do raro res?duo de ?cido glucur?nico 2,3-O-disulfatado (GlcA,2,3S), al?m dos 2-O- e 3-O-sulfatado. A avalia??o do CSAS do camar?o sobre o sistema de coagula??o mostrou uma grande capacidade de inibi??o da trombina (~ 94% de inibi??o) e uma insignificante atividade anticoagulante pelos m?todos de TTPA, TP e atividade anti-Xa. Esses dados, somados a incapacidade de estabiliza??o da antitrombina III pelo CSAS do camar?o, sugerem que sua atividade anticoagulante ? mediada pelo cofator II da heparina. Al?m disso, foi observado que esta mol?cula tamb?m apresenta um baixo efeito hemorr?gico e um grande potencial antitromb?tico observado pelos m?todos de indu??o de trombose venosa em ratos (~ 70% de redu??o dos trombos formados) e de est?mulo da s?ntese de GAGs antitromb?ticos em c?lulas endoteliais. Este trabalho relata pela primeira vez a ocorr?ncia de um CSAS
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Caracteriza??o estrutural e atividades farmacol?gicas do alginato obtido da alga Dictyopteris delicatula (J.V. Lamouroux., 1809) e seu derivado sulfatado

Florentin, Kahena de Quevedo 28 October 2015 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-25T23:07:30Z No. of bitstreams: 1 KahenaDeQuevedoFlorentin_DISSERT.pdf: 2361429 bytes, checksum: dc742ce59ccfacea57721d908c3a033e (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-04T20:32:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KahenaDeQuevedoFlorentin_DISSERT.pdf: 2361429 bytes, checksum: dc742ce59ccfacea57721d908c3a033e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-04T20:32:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KahenaDeQuevedoFlorentin_DISSERT.pdf: 2361429 bytes, checksum: dc742ce59ccfacea57721d908c3a033e (MD5) Previous issue date: 2015-10-28 / Alginate is a linear polymer compound of D-mannuronic acid(M) linked (1 ? 4) at its epimer in C-5 of L-guluronic acid (G). An alginate was isolated and partially purified from brown seaweed D. delicatula (DYN). DYN was chemically sufated (DYS). DYS showed 22% of sulfation and the rate of total sugars was around 66 and 59% for DYN and DYS respectively. DYN DYS and showed a ratio M G of 0.86 and 1.1, respectively. IR signals at 1221cm-1 confirmed the sulfation of DYS. DYN presented anticoagulant activity about intrinsic coagulation pathway, while DYS did not alter the clotting times for aPTT and PT. DYN and DYS also showed antioxidant properties especially ferric chelation where DYN reached about 97% and the OH sequestration where both averaged 85%. In 3T3 cells, DYN indicated proliferation in 24h and 48h of incubation and no cytotoxicity. For tumor lines HeLa and b16, and DYN and DYS decreased significantly the cell viability, especially after 48 hours (about 71% of inhibition). Given the results obtained in this study, it is clear that the sulfation is not decisive for the activity of D. delicatula alginate. In general, DYS and DYN shown as potential compounds to be used pharmacologically, and also in the food industry for revealing be great antioxidant. / Marine algae are rich sources of various structural compounds which recently has been increasingly studied as a new source of bioactive substances. The alginate, as come as fucans, are considered the main acidic polysaccharides found in brown seaweed. This molecule consists a linear natural polysaccharide, non-sulfated, and presents monosaccharides: acid ?-D-mannuronic (M) and ?-L-guluronic acid (G); in a vast amount compositions and threads. Alginate has been widely applied in food and pharmaceutical industries because of its ability to retain water, forming films and gels as well as thickening, stabilizing and form emulsions. In this work we aimed to extract, structurally characterize, compare and analyze the possible pharmacological activities of native alginate molecule obtained from brown seaweed Dyctiopteris delicatula (DYN), and its chemically sulfated derivative (DYS). The alginate structure and composition molecule can be proven through chemical dosing, that showed low protein contamination and high sugar level, existence and separation of M and G blocks in the descending paper chromatography, infrared spectroscopy and nuclear magnetic resonance. Molecule sulfation was proven with sulphate dosage, resulting in 28.56% sulphate in molecule; electrophoresis, verify metachromasia with toluidine blue; and infrared spectroscopy, that showed a characteristic band at 1221cm-1 corresponding a sulfate group vibration. For the pharmacological activities the tests was: antioxidant activity, changes in cell function (MTT test) and anticoagulant test. In the antioxidant activity we observed that DYN showed better results in the kidnapping of hydroxyl radicals and ferric chelation compared to DYS, this had the best result in the total antioxidant capacity. Both showed similar activity in reducing power and the kidnapping radicals DPPH. In MTT test DYN and DYS had not proliferative and cytotoxic activity in fibroblast cells (3T3) and showed antiproliferative and cytotoxic activity in cancer cell lines HeLa and B16 melanoma. In anticoagulant assay DYN showed good activity in the intrinsic pathway of blood coagulation, and a small activity in the extrinsic pathway, in the other hand DYS showed only a very small activity in the extrinsic pathway, but cannot come to be regarded as an anticoagulant agent. From these results it can be concluded that the alginate was extracted and sulfated, revealing a potential compound to be used in the pharmaceutical industry as an anticoagulant agent, antioxidant and antitumor and the sulfation has not been conclusively important to performance in the tested pharmacological activities
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Caracteriza??o parcial e atividades farmacol?gicas do extrato rico em polissacar?deos sulfatatos da angiosperma marinha Halodule wrightii

Costa, Leandro Silva 25 November 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaMCS.pdf: 573830 bytes, checksum: 9b4db031d8ca76bd1eed966ee42dfb5b (MD5) Previous issue date: 2008-11-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Sulfated polysaccharides (PS) are biomolecules with a great biotechnological potential. There are few data about PS from high plants. In addition, pharmacological activities of PS from plants have not been carrying out. The aim of this work was extract PS from the angiosperm Halodule wrightii and study their anticoagulant and antioxidant activities. Histological analysis showed the presence of the PS manly in the roots. A polysaccharide-rich extract was obtained from H. wrightii by proteolysis followed by methanol and TCA precipitation. Chemical, infra-red analysis and agarose gel electrophoresis in 1.3 diaminopropane acetate buffer confirmed the presence of sulfated polysaccharides made by glucose, galactose, xylose and sulfate residues in the proportion 1: 0,9: 1: 1. In addition polyacrilamide electrophoresis have shown that extract is mainly compose by 11kDa sulfated polysaccharides. Pharmacological analysis have shown total antioxidant capacity (CAT) that resulted in 15,21 &#956;g for equivalent of ascorbic acid, scavenging activity of the DPPH radical with 41,36 % of scavenging, activity of reducing power with the maximum of 0,290 nm (50 % of vitamin C activity) and scavenging activity superoxide radical (O2-) with a maximum of 32,23 %. Chelating activity of metal less than 4% and scavenging activity of the radical hydroxyl (OH-) less than 2%. Time of activated partial tromboplastin (aPTT) doubling the time of coagulation from 20&#956;g of and protrombin time (PT) was not present. The data indicate that PS from Halodule wrightii could be considered for future applications in medicine, food production or cosmetic industry / Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o biomol?culas com um grande potencial biotecnol?gico por apresentarem uma diversidade estrutural e farmacol?gica muito grande. Poucos s?o os relatos da exist?ncia destes pol?meros em vegetais superiores, al?m disso, ainda n?o se tem relatos da identifica??o de atividades antioxidantes e anticoagulantes com PS extra?dos destes vegetais. Com o intuito de verificar a presen?a destes polissacar?deos em angiospermas marinhas conhecidas popularmente como capim do mar, foi coletada a esp?cie marinha Halodule wrightii. As por??es vegetativas (folha, caule e raiz) n?o foram separadas sendo preparado inicialmente um extrato denominado de extrato bruto (EB). Ap?s descontamina??o prot?ica o material obtido foi chamado de extrato de polissacar?deos totais (EPT). A presen?a destes polissacar?deos foi investigada e confirmada por an?lises qu?micas, espectroscopia de infravermelho e eletroforese em gel de agarose sendo denominados de extrato rico em polissacar?deos sulfatados (EPS). A an?lise histol?gica da localiza??o dos PS resultou na presen?a destes polissacar?deos principalmente na epiderme da por??o vegetativa raiz. As an?lises qu?micas mostraram que os polissacar?deos contem glicose, galactose, xilose e sulfato na propor??o de 1: 0,9: 1: 1 e massa molecular de aproximadamente 11 kDa. Os grupos sulfatos est?o provavelmente ligados principalmente em C2 de um monossacar?deo. Testes de atividade antioxidante demonstraram que os PS de H. wrightii n?o apresentaram resultado para o teste de capacidade antioxidante total pelo m?todo CAT. Desta forma foi utilizada a atividade de seq?estro do radical DPPH indicado na literatura por dosar a capacidade antioxidante total que resultou em 41,36%. O seq?estro do ?on super?xido tamb?m foi realizado e resultou em 32,23% assim como o poder redutor que equivaleu a 50% da atividade da Vit. C. N?o houve atividade de seq?estro do radical hidroxila assim como atividade quelante de metal. O teste de atividade anticoagulante (aPTT) mostrou que EPS dobra o tempo de coagula??o com 20 &#61549;g, que ? apenas 2,5 vezes a quantidade da Clexane? (heparina de baixo peso molecular). Para o tempo de protrombina (PT) H.wrightii n?o apresentou atividade. Os dados indicam que EPS possuem um potencial biotecnol?gico anticoagulante e antioxidante e que futuras an?lises se fazem necess?rias para confirmarem esse potencial
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Atividades biol?gicas de polissacar?deos sulfatados extra?dos da alga vermelha Gracilaria caudata

Costa, Leandro Silva 23 December 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeandroSC.pdf: 650975 bytes, checksum: 6025a0ab11422614586386d571f936a6 (MD5) Previous issue date: 2008-12-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / In recent years, sulfated polysaccharides (SP) from marine algae have emerged as an important class of natural biopolymers with potential pharmacology applications. Among these, SP isolated from the cell walls of red algae have been study due to their anticoagulant,antithrombotic and anti-inflammatory activities. In the present study, three sulfated polysaccharides fractions denominated F1.5v, F2.0v and F3.0v were obtained from seaweed G. caudate by proteolysis followed to acetone fractionation. Gel electrophoresis using 0.05 M 1,3-diaminopropane-acetate buffer, pH 9,0, stained with 0.1% toluidine blue, showed the presence of SP in all fractions. The chemical analysis demonstrated that all the fractions are composed mainly of galactose. These compounds were evaluated in anticoagulant, antioxidant and antiproliferative activities. In anticoagulant activity evaluated through aPTT and PT tests, no one fractions presented anticoagulant activity at tested concentrations (0.1 mg/mL; 1.0 mg/mL; 2.0 mg/mL).The antioxidant activities of the three fractions were evaluated by the following in vitro systems: Total antioxidant capacity, superoxide and hydroxyl radical scavenging, ferrous chelating activity and reducing power. The fractions were found to have different levels of antioxidant activity in the systems tested. F1.5v shows the highest activity, especially in the ferrous chelating system, with 70% of ferrous inhibiting at 1.0 mg.mL-1. Finally, all the fractions showed dose-dependent antiproliferative activity against HeLa cells. The fractions F1.5v and F2.0v presented the highest antiproliferative activity at 2.0 mg/mL with 42.7% and 37.0% of inhibition, respectively. Ours results suggests that the sulfated polysaccharides from seaweed G. caudata are promising compounds in antioxidant and/or antitumor therapy / Nos ?ltimos anos, os polissacar?deos sulfatados de algas marinhas t?m emergido como uma importante classe de biopol?meros naturais com potenciais aplica??es farmacol?gicas. Dentre estas, os polissacar?deos sulfatados de algas vermelhas tem sido extensivamente estudados, principalmente devido seu potencial anticoagulante, antitromb?tico e antiinflamat?rio. Neste estudo, tr?s fra??es de polissacar?deos sulfatados, denominadas F1,5v, F2,0v e F3,0v, foram extra?das da alga vermelha Gracilaria caudata, atrav?s de prote?lise, seguida de fracionamento com acetona. Eletroforese em gel de agarose em Tamp?o PDA mostrou a presen?a de polissacar?deos sulfatados em todas as fra??es. As an?lises qu?micas demonstraram que todas as fra??es s?o compostas principalmente de galactose. Esses compostos foram testados para as atividades anticoagulante, antioxidante e antiproliferativa. Na atividade anticoagulante avaliada atrav?s de kits comerciais de aPTT e PT, nenhuma das fra??es apresentou atividade nas concentra??es testadas (0,1; 0,5 e 1,0 mg/mL). A atividade antioxidante das fra??es polissacar?dicas foi avaliada atrav?s de diversos ensaios in vitro: Capacidade antioxidante total, seq?estro de radical super?xido e hidroxila, quela??o f?rrica e poder redutor. As fra??es apresentaram diferentes n?veis de atividade antioxidante nos sistemas testados. A fra??o F1,5v apresentou a maior atividade antioxidante, principalmente no ensaio de quela??o f?rrica, com cerca de 70,00% de inibi??o na concentra??o de 1,0 mg/mL. Finalmente, todas as fra??es apresentaram atividade antiproliferativa dose-dependente frente a linhagem celular tumoral HeLa. As fra??es F1,5v e F2,0v apresentaram as maiores atividades antiproliferativa na concentra??o de 2,0 mg/mL, com 42,70% e 37,00% de inibi??o da prolifera??o celular em rela??o ao controle. Nossos resultados sugerem que os polissacar?deos sulfatados de G. caudata s?o promissores f?rmacos na terapia antioxidante e/ou antiproliferativa

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