A técnica de transferência nuclear é uma ferramenta que possibilita a produção de embriões clones que podem ser utilizados tanto na clonagem reprodutiva, proporcionando o nascimento de produtos, como modelo para o estudo de diversos mecanismos fisiológicos durante o desenvolvimento embrionário. Este trabalho teve como objetivos a otimização da técnica de clonagem no Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução (FAVET, UFRGS), avaliar a taxa de sucesso da clonagem interespécie, e testar e eficiência da utilização de oócitos vitrificados como citoplasmas receptores para a reconstrução dos embriões clones, sendo realizado em três etapas. A primeira teve por objetivo o estabelecimento da técnica de clonagem, bem como sua otimização nas nossas condições, dando condições para que os experimentos subseqüentes pudessem ser realizados. Para isto foram realizados experimentos in vitro comparando diferentes meios de manipulação, sistemas de ativação química, meios de cultivo e fontes protéicas no cultivo dos embriões, e células oriundas de diferentes origens e animais como doadores de núcleo. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24), e foram observadas 54,2% de prenhezes aos 35 dias, 8,3% de prenhezes aos 260 dias e 4,2% de nascimentos. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24), e foram observadas 54,2% de prenhezes aos 35 dias, 8,3% de prenhezes aos 260 dias e 4,2% de nascimentos.A segunda parte dos experimentos teve por objetivo a produção de clones interespécies utilizando o citoplasma bovino como receptor para células ovinas, caprinas e suínas. As taxas de clivagem nos grupos NTSCi ovino (60,3%), caprino (68,4%) e suína (57,1%) não diferiram dos grupos controles NTSC bovino. A taxa de blastocisto observada nos embriões NTSCi ovinos (10,3%) foram semelhantes às taxas observadas no grupo NTSC bovino (12,7%). No grupo NTSCi caprino, 5,3% dos embriões chegaram ao estádio de blastocisto, enquanto que no grupo NTSCi suíno não houve desenvolvimento até o estádio de blastocisto. Na terceira parte do trabalho, experimentos visando a utilização de oócitos vitrificados imaturos com citoplasma receptor foram realizados. Foram submetidos a maturação 764 complexos cumuli-oócitos vitrificados, e 73,0% destes foram recuperados após o desnudamento e 46,8% apresentavam corpúsculo polar, taxas significativamente inferiores às observadas nos oócitos não vitrificados (91,4% e 65,8%, respectivamente). As taxas de sobrevivência após a micromanipulação (77,8%), taxa de fusão (82,1%) e de sobrevivência após a ativação (79,9%) do grupo vitrificado não apresentaram diferença significativa com o grupo controle não vitrificado. As taxas de blastocistos também não apresentaram diferença entre os grupos vitrificado e não vitrificado (16,7% e 23,4%) respectivamente. Em resumo, os resultados deste trabalho demonstraram que oócitos bovinos frescos ou vitrificados, nas nossas condições estabelecidas, foram capazes de suportar o desenvolvimento de embriões clones bovinos até o estádio de blastocisto ou a termo, e proporcionam citoplasmas compatíveis para o desenvolvimento de embriões clones interespécie até o estádio de blastócito. / Somatic cell nuclear transfer (NTCS) procedures is a valuable tool for the production of clone embryos for use in reproductive cloning, by providing the birth of live animals, and for use as a research model, allowing the study of physiologic mechanisms during the embryonic development. This work aimed to optimize cloning procedures at the Embryology and Reproductive Technology Laboratory (FAVET, UFRGS), to evaluate the success rate of interspecies cloning, and to test the effectiveness of vitrified oocytes as recipient cytoplasm for embryo reconstruction, being carried out in three stages. The first stage was focused on the establishment of the cloning technique and the optimization of procedures and conditions in the lab so that the subsequent experiments could be accomplished. Thus, in vitro experiments were performed to compare different manipulation media, chemical activation systems, manipulating media, source of protein supplementation to the embryo culture media, and distinct cell types and genotypes. The mean cleavage and blastocyst rates obtained after conditions were optimized were 64.7% and 9.5%, respectively. Pregnancy rates on Days 35 and 260 of gestation and calving rate at term following the transfer of a group of embryos to synchronous recipient cows (n=24) were 54.2%, 8.3% and 4.2%, respectively. The second stage of the study evaluated the success rate of the production of interspecies clones (NTSCi) using the bovine oocyte as recipient cytoplasm for transferred nuclei from ovine, caprine or porcine cells. Cleavage rates using ovine (60.3%), caprine (68.4%) and porcine (57.1%) nuclei did not differ from controls (bovine nuclei). Blastocyst rates observed for NTSCi embryos using ovine nuclei (10.3%) were similar to those observed in the bovine NTSC group (12.7%). The NTSCi-caprine group reached a 5.3% blastocyst rate, whereas no development to the blastocyst stage was observed when using porcine cells as nucleus donor. In the third stage of this work, experiments evaluated the efficiency of vitrified bovine oocytes as recipient cytoplasms for cloning by TNCS. Following vitrification and warming, 764 cumulus-oocyte complexes were in vitro-matured. A total of 73.0% was recovered after cumulus removal, with 46.8% presenting visible polar bodies, which were significantly lower than rates observed in non-vitrified oocytes (91.4% and 65.8%, respectively). However, survival rates following micromanipulation (77.8%), fusion rates (82.1%) and survival after activation (79.9%) of oocytes were not different from the control group (non-vitrified oocytes). In addition, blastocyst rates did not differ between vitrified and non-vitrified groups (16.7% and 23.4%, respectively). In summary, results from this study demonstrated that fresh or vitrified bovine oocytes, under our optimized conditions, were able to support development of bovine clone embryos to the blastocyst stage or to term, and provided a compatible cytoplasm for the development of interspecies clone embryos to the blastocyst stage.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-26T13:57:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 322031 bytes, checksum: 737ceaf2648e03ae5ebf5a043dcbcc4c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-26T13:57:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 322031 bytes, checksum: 737ceaf2648e03ae5ebf5a043dcbcc4c (MD5) Previous issue date: 2001-09-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Avaliaram-se o consumo de matéria seca (CMS), o ganho de peso vivo (GPV), a conversão alimentar da matéria seca (CAMS), os pesos de carcaça quente (PCQ) e fria (PCF), do dianteiro (DI), do traseiro especial (TE) e da ponta de agulha (PA), da porção comestível, aparas de gordura e ossos da 1⁄2 carcaça direita e dos seus respectivos quartos (DI, TE e PA) e dos cortes comerciais, os rendimentos de carcaça quente (RCQ) e fria (RCF), os rendimentos dos quartos DI, TE e PA, da porção comestível, aparas e ossos da 1⁄2 carcaça direita e o rendimento dos cortes comerciais, além da área de olho de lombo (AOL) e espessura de gordura (EG) em experimento realizado na Estação Central do Instituto de Zootecnia de Nova Odessa-SP. Foram utilizados 27 bovinos machos sendo nove da raça Nelore (NN) inteiros, nove 3⁄4 Nelore x 1⁄4 Canchim (NC) e nove 3⁄4 Nelore x 1⁄4 Caracu (NK), castrados, apresentando no início do experimento, em média, peso vivo de 307, 312 e 303 kg, respectivamente, e idade de 22 meses. Os animais foram confinados e distribuídos de acordo com o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3X3 (grupo genético x categoria de peso ao abate), com três repetições, alimentados à vontade com dieta à base de silagem de sorgo e concentrado (43:57 % na MS, respectivamente),composto de milho grão moído, farelo de algodão e uréia. Os animais foram pesados a intervalos de quatro semanas, após serem submetidos a jejum completo de 18 horas e abatidos à medida que alcançavam a categoria de peso preestabelecida (430, 470 e 530 kg). Após o abate, procedeu-se evisceração e a separação simétrica das duas metades da carcaça (direita e esquerda) onde as mesmas foram pesadas quentes e resfriadas, sendo estabelecidos os rendimentos de carcaça quente e fria. As 1⁄2 carcaças direitas foram separadas entre a 5a e 6a costelas em dianteiro (com 5 costelas), traseiro especial e ponta de agulha e posteriormente, tomados seus pesos. O TE esquerdo foi seccionado entre a 11a e 12a costelas e a AOL (músculo Longissimus dorsi) e a EG foram medidos. Em seguida os quartos da 1⁄2 carcaça direita foram desossados, sendo separados os cortes comerciais: contrafilé, filé- mignon, alcatra, patinho, coxão-mole, coxão-duro, lagarto, paleta e acém. Cada corte foi aparado do excesso de gordura de cobertura para um máximo de 5 milímetros de espessura, sendo pesados a porção comestível, aparas de gordura e ossos. Os diferentes componentes da carcaça foram transformados em porcentagem do peso da carcaça fria e analisados por meio da análise de variância e comparação das médias. Não houve efeito de grupo genético sobre o CMS, nas suas diversas formas de expressão (kg/dia, %PV e g/kg 0,75 ), porém o GPV e a CAMS foram influenciados pelo grupo genético, tendo o grupo NN inteiro apresentado maiores valores para GPV (1,08 vs 0,94 e 0,85 kg/dia) e melhores valores para CAMS (7,61 vs 9,35 e 10,65) que os mestiços NC e NK, respectivamente, castrados. O PVA, PCQ, PCF, RCQ, RCF, AOL, AOL%, EG e EG% não foram influenciados pelo grupo genético, assim como o peso e rendimento de aparas e ossos da carcaça. Foram observados maiores rendimentos do TE, maiores rendimentos de alcatra, contra filé, filé mignon e da porção comestível do TE, nos animais dos grupos NC e NK que no grupo NN, mostrando grande potencial desses cruzamentos para produção de carne de alto valor comercial. O grupo NN, por sua vez, foi superior no peso e rendimento do dianteiro. Já entre as categorias de peso ao abate, foram encontradas diferenças para CMS expresso em %PV e em g/kg 0,75 , sendo observado um decréscimo no CMS à medida que se elevou o peso de abate de 430 para 530 kg, entretanto, o GPV e CAMS não foram influenciados pela categoria de peso ao abate, assim como os rendimentos de carcaça. A AOL ajustada para 100 kg de carcaça fria e a EG (mm) foram influenciadas pela categoria de peso ao abate. A categoria de peso ao abate influenciou o peso dos quartos, da porção comestível, aparas de gordura e ossos da carcaça, o rendimento da PA, mas não o rendimento dos quartos TE e DI. A decisão na escolha do peso de abate, portanto, dependerá de uma avaliação econômica do sistema produtivo, já que, em termos médios, os animais abatidos com 430 kg permaneceram no confinamento durante 109 dias, os abatidos aos 470 kg, 146 dias e os abatidos aos 530 kg, 198 dias. Os animais abatidos com 530 kg de peso vivo, em média, produziram carcaças excessivamente acabadas, o que contribui para o aumento na proporção de aparas de gordura produzidas. / The dry matter intake (DMI), the live weight gain (LWG), the feed: gain ratio of the dry matter (FGDM), the weights of hot carcass (HCW) and cold carcass (CCW), of forequarter (FQ), of the pistol style cut (PSC) and of the spare ribs (SR), of the edible portion, fat trims and bones of the 1⁄2 right carcass and of its respective quarters (FQ, PSC and SR) and of the Brazilian commercial cuts, the hot carcass yield (HCY) and cold carcass yield (CCY), the FQ, PSC and SR yield, of the edible portion, fat trims and bones of 1⁄2 right carcass and of the Brazilian commercial cuts yields, besides the of loin eye area (LEA) and fat thickness (FT) were evaluated in a experiment carried out at Estação Central do Instituto de Zootecnia de Nova Odessa-SP. Twenty seven bovine males, nine from the genetic group Nellore (NN) bulls, nine from 3⁄4 Nellore x 1⁄4 Canchim (NC) and nine 3⁄4 Nellore x 1⁄4 Caracu (NK), steers, presenting, on average, a initial live weight of 307, 312 and 303 kg, respectively, and 22 months of age. The animals were confined and allotted to a completely randomized design, in a 3 X 3 factorial arrangement (genetic groups and weight categories at the slaughter time), with three replicates. The animals were full fed with 43:57 forage to concentrate ratio, dry based diet, based on sorghum silage and concentrate constituted by ground corn grain, cottonseed meal and urea. The animals were weighted at four weeks intervals and fasted for 18 hours and slaughtered as they reached the pre-established weights (430, 470 and 530 kg). After the slaughter, the animals were eviscerated and the carcass was symmetricaly separated of the two halves (right and left) and were hot and cold weighted and the hot and cold carcass yield were established The 1⁄2 right carcasses were separate among to 5th and 6th ribs in forequarter (with 5 ribs), pistol style cut and spare ribs, and were weighted. The left PSC was separated among to 11th and 12th ribs and LEA (Longissimus dorsi muscle) and the FT were measured. The quarters of 1⁄2 right cold carcass was boned and the Brazilian commercial cuts were separated: contra filé, filé mignon, alcatra, patinho, coxão mole, coxão duro, lagarto, paleta e acém. Each cut was trimmed for the excess of covering fat for a maximum of 5 mm of thickness and weighted the edible portion and fat and bone trims. The different components of the carcass were transformed in percentage of the weight of the cold carcass and analyzed by analysis of variance and the means compared. There was no effect of the genetic group on the DMI, expressed kg/day, %LW and g/kg LW 0,75 , even so the LWG and FGDM were influenced by the genetic group, with the genetic group NN, bulls presented larger values for LWG (1.08 vs 0.94 and 0.85 kg/day) and better values for FGDM (7.61 vs 9.39 and 10.65) than the crossbreds 3⁄4 Nellore x 1⁄4 Canchim and 3⁄4 Nellore x 1⁄4 Caracu, steers, respectively. The live weight at the slaughter time, HCW, CCW, HCY, CCY, LEA and FT were not influenced by the genetic group, as well as the weight and yield of fat and bone trims of the carcass. Larger PSC yield, larger yields of contrafilé, alcatra and filé mignon and of the edible portion of the PSC were observed in the animals from the genetic groups 3⁄4 Nellore-1⁄4 Canchim and 3⁄4 Nel l ore-1⁄4 Caracu than the Nellore group, showing great potential of those crossings for meat production of high commercial value. The Nellore group, for its time, was superior in the weight and yield of the forequarter. Among the weight categories at the slaughter time, it was found differences for DMI expressed in %LW and in g/kg LW 0,75 , being observed a decrease in the DMI as weight categories at the slaughter time increase from 430 to 530 kg. However, the LWG and FGDM were not influenced by the weight categories at the slaughter time as the carcass yield. The loin eye area adjusted for 100 kg of cold carcass and the FT (mm) were influenced by the weight categories at the slaughter time. The weight category at the slaughter time influenced the weight of the FQ, PSC and SR, of the edible portion, fat and bone trims of the carcass and the yield of the SR, but not the of the PSC and FQ yields. The decision in the choice of the slaughter weight, therefore, it will depend on an economic evaluation of the productive system, since, in a average, the animals slaughtered with 430, 470 and 530 kg remained in the confinement for 109, 146 and 198 days, respectively. The animals slaughtered with 530 kg of live weight, on the average, produced carcasses excessively finished, what contributes to the increase in the proportion of fat trimmed. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-05T14:05:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 148274 bytes, checksum: 7adc5a6b35939acf27313f34dfadc26d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-05T14:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 148274 bytes, checksum: 7adc5a6b35939acf27313f34dfadc26d (MD5) Previous issue date: 2001-10-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O experimento foi realizado no Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa, objetivando avaliar o efeito da amonização de fenos de capim-tifton 85, na dieta de bovinos, sobre o consumo; as digestibilidades aparentes totais e parciais de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), extrato etéreo (EE), carboidratos totais (CHO) e fibra em detergente neutro (FDN); a degradabilidade da FDN; a eficiência de síntese microbiana; o balanço de compostos nitrogenados; o pH ruminal; as concentrações de amônia; e as taxas de passagem da digesta ruminal. Foram utilizados quatro novilhos, fistulados no rúmen e abomaso, com peso variando de 286 a 463 kg, distribuídos em um quadrado latino 4 x 4. Cada período experimental teve duração de 21 dias, sendo 10 dias de adaptação, seis dias para coleta de amostras de fezes e digesta de abomaso, um dia para coleta de urina, dois dias para coleta de digesta de rúmen para determinação da taxa de passagem, um dia para coleta de líquido ruminal para determinação do pH e das concentrações de N-NH 3 e um dia para coleta de digesta ruminal para isolamento viiide bactérias. Os tratamentos (T) consistiram de: T1 – controle: feno com adição de 1% de uréia com base na matéria natural, a uréia foi diluída em um litro de água e aplicada no momento da oferta; T2 – feno amonizado com 5% de uréia; T3 – feno de amonizado com 6% de uréia; e T4 – feno amonizado com 3% de amônia anidra. A uréia e amônia nos T2, T3 e T4 foram aplicadas com base na matéria seca. Observaram-se maiores consumos de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), carboidratos totais (CHO), fibra em detergente neutro (FDN) e nutrientes digestíveis totais (NDT) para os fenos amonizados, que, por sua vez, não diferiram entre si. Por outro lado, registraram- se menores digestibilidades aparentes totais de MS, MO, PB, CHO e FDN para o feno com 1% de uréia, no momento da alimentação. Para a digestibilidade aparente ruminal dos nutrientes, apenas a PB foi influenciada pelos tratamentos, registrando-se o menor valor para o feno não-amonizado. O balanço de nitrogênio foi maior nos fenos amonizados, que, por sua vez, não diferiram entre si. A produção de biomassa microbiana e as quantidades de carboidratos degradados no rúmen foram maiores para os animais alimentados com feno amonizado, porém, a eficiência de síntese microbiana, expressa em diferentes formas, não foi influenciada pelos tratamentos. O pH ruminal e a taxa de passagem da digesta também não foram influenciados pelos tratamentos, apresentando valor máximo de pH, de 6,78, 3,1 horas após alimentação, e valor médio da taxa de passagem de 3,0%/h. Para as concentrações de amônia ruminal, houve efeito dos tratamentos e da interação entre tratamento e tempo de coleta, em que as concentrações máximas de N-NH 3 estimadas foram de 8,44 (controle); 18,33 (5% uréia); 22,42 (6% uréia) e 13,57 mg/100 mL (3% amônia anidra), respectivamente, às 3,62; 4,53; 4,32; e 3,96 horas após a alimentação. / The experiment was carried out at the Animal Science Department of Federal University of Viçosa, to evaluate the effect of diets with ammoniated Tifton 85 grass hay, fed to steers, on the intake; total and partial apparent digestibility dry matter, organic matter (OM), crude protein (CP), ether extract (EE), total carbohydrates (CHO) and neutral detergent fiber (NDF); NDF degradability; microbial synthesis efficiency; nitrogen compounds balance; ruminal pH; ammonia concentrations; and passage rates of ruminal digesta. Four steers fistulated in the rumen and abomasum, with weight from 286 to 463 kg, were assigned to a 4 x 4 Latin square. Each experimental period lasted 21 days, 10 days of adaptation, six days for samples collection of feces and abomasum digesta, one day for urine collection, two days for rumen collection to determine the passage rate, one day for ruminal fluid to determine pH and N-NH 3 concentrations and one day for ruminal digesta collection to bacteria isolation. The treatments (T) consisted of: T1 – control: hay plus 1% urea, on as fed basis, the urea was diluted in one liter of water and fed in the moment of offer; xT2 – ammoniated hay with 5% urea; T3 – ammoniated hay with 6% urea; and T4 – ammoniated hay with 3% anhydrous ammonia. Urea and ammonia in T2, T3 and T4 were used according to dry matter basis. Higher intakes of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), total carbohydrates (CHO), neutral detergent fiber (NDF) and total digestible nutrients (TDN) were observed for the ammoniated hays, that did not differ. However, smaller total apparent digestibility of DM, OM, CP, CHO and NDF were recorded for the hay with 1% urea, during feeding. For the ruminal apparent digestibility of nutrients, only CP content was affected by the treatments, where the smaller value was recorded for the non ammoniated hay. The nitrogen balance was higher for the ammoniated hays, that did not differ. The microbial biomass production and the ruminal degraded carbohydrates amounts were higher for the animals fed ammoniated hay, however the microbial synthesis efficiency, express on different ways, was not influenced by treatments. The ruminal pH and the digesta passage rate also were not affected by the treatments, with maximum pH value, of 6.78, 3.1 hours after feeding, and average passage rate of 3.0%/h. There was effect of treatments and of interaction among treatment and collection time on the ruminal ammonia concentrations, where the maximum estimated N-NH 3 concentrations were 8.44 (control), 18.33 (5% urea), 22.42 (6% urea) and 13.57 mg/100 mL (3% anhydrous ammonia), respectively, at 3.62, 4.53, 4.32, and 3.96 hours after feeding.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-06T11:22:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 194800 bytes, checksum: 973020d382154e4aaf4710e42ced651b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T11:22:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 194800 bytes, checksum: 973020d382154e4aaf4710e42ced651b (MD5) Previous issue date: 2000-03-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O trabalho foi composto por dois experimentos, realizados no Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa. O primeiro teve o objetivo de avaliar o efeito de dois níveis de lipídios (3 e 7%) na dieta de vacas em lactação e, dentro do nível de 7%, o de duas de fontes de lipídios (grão de soja moído e óleo de soja) sobre a produção e composição do leite, os parâmetros ruminais, como ácidos graxos voláteis (AGV), pH ruminal e amônia, a atividade de produção de amônia pela população microbiana ruminal e o consumo de MS. Foram usadas seis vacas multíparas com grau de sangue variando de 1⁄2 holandês- zebu até HPC, com aproximadamente 30 dias pós-parto, peso vivo médio de 500 kg e produção média de 20 litros de leite/dia, distribuídas em dois quadrados latinos 3 x 3. Cada período experimental teve duração de 23 dias, e as vacas tiveram 16 dias para adaptação à dieta e sete para coleta de amostras ruminais. A produção de leite foi medida diariamente duas vezes, durante os períodos de coleta do 15 0 ao 23 0 dia de cada período experimental, fazendo-se uma amostragem do leite para análises de proteína e gordura. Para determinação da concentração de amônia, pH e AGV do líquido ruminal, as amostras foram coletadas manualmente, através de sonda esofágica, e filtradas em gaze. O pH foi determinado através de potenciômetro, as análises de amônia foram analisadas por colorimetria e os ácidos graxos voláteis por cromatografia gasosa. As produções de leite e leite corrigido para 4%, proteína, gordura, lactose, sólidos totais, sólidos desengordurados e densidade não foram afetadas pelo aumento de lipídios na dieta e nem pelas diferentes fontes de lipídios. Houve efeito depressivo do aumento de lipídios sobre a porcentagem de butirato e o consumo de MS, sendo o óleo de soja o que causou maior efeito. O pH sofreu acréscimo somente com a inclusão de grão de soja moído na dieta. Os níveis de acetato, propionato, A:P, isobutirato, isovalerato, amônia e atividade de produção de amônia também não sofreram efeito dos lipídios na dieta. O segundo experimento buscou avaliar a inclusão de óleo de soja (500 m l/animal/dia) e Rumensin ® (3 g/animal/dia) na dieta de animais que receberam níveis crescentes de concentrado (0, 25, 50 e 75%), tendo cana-de-açúcar como volumoso. Foram avaliados os efeitos sobre os parâmetros ruminais, como ácidos graxos voláteis (AGV), pH ruminal e amônia, a atividade de produção de amônia e o consumo de MS. Foram utilizados quatro bovinos 7/8 holandês-zebu, com peso vivo médio de 400 kg, fistulados no rúmen. Cada um dos quatro períodos teve duração de 15 dias, sendo 12 para adaptação à dieta e três para coletas de amostras. A determinação do consumo foi feita pesando-se as dietas fornecidas e as sobras no dia seguinte. A determinação da concentração de amônia, pH e AGV do líquido ruminal foi feita em amostras coletadas através da fístula e filtradas em gaze, nos tempos de 0, 3 e 6 horas após a alimentação. A leitura do pH foi feita com potenciômetro, as análises de amônia foram feitas por colorimetria, e as de ácidos graxos voláteis, por cromatografia gasosa. O teor de acetato decresceu, mas os teores de isobutirato, isovalerato e amônia e o consumo de matéria seca aumentaram com o aumento do nível de concentrado. O propionato aumentou e a relação acetato:propionato diminuiu com a presença de monensina. O óleo aumentou o butirato quando a dieta continha somente volumoso e diminuiu com o aumento de concentrado. O pH diminuiu com o tempo de coleta, e a atividade de produção de amônia decresceu com o aumento do nível de concentrado e aumentou na presença de óleo. / The experiment performed in the Departament of Zootechny at the Universidade Federal de Viçosa. The objective is evaluate the effect of two levels of lipids (3% and 7%) on the diet of cows in lactation, and within the level evaluate two the lipids sources (ground soybeans grain and soybean oil), on the production and composition of milk, the rumen parameters, such as, volatile fatty acids (VFA), rumen pH and ammonia, The ammonia production activity by the rumen microbial population and the comsumption of DM. Six multiparous cows were used, having blood degreesvarying from 1⁄2 Holstein-Zebu to HPC, at approximately 30 days after giving birth, with average live weight of 500kg and average production of 20 litres of milk/day, distributed in two 3x3 latin square. Each experimental period was of a 23-day duration, such that the cow had 16 days for adaptation to the diet and seven days for the collection of rumen samples. Milk production was measured twice daily during the collection periods from the 15 th to the 23 rd day of each experimental period, with samples taken for protein and fat analyses. To determine the ammonia, pH and VFA concentration of the rumen liquid, the samples were collected manually, through esophageal xfistula and filtered through gauze. The ph was determined using a potentiometer, the ammonia analyses were analyzed through colourimetry and the volatile fatty acid by gas chromatography. Milk production and milk corrected to 4%, proteins, fats, lactose, total solids, non-fatty solids and density were not affected by the increase of lipids in the diet and neither by the different lipid sources. There was a depressive effect of the lipids increase upon the butyrate porcentage and consumption of DM, with the soybean oil causing the greater effect. The pH showed na increase only with the inclusion of the ground soybeans grains in the diet. The levels of acetate, propionate, A:P, isobutyrate, isovalerate, ammonia and ammonia production activity also revealed no effect from the lipids in the diet.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T11:15:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 226655 bytes, checksum: 6e328391cab6caf62bbccfae7c01eb85 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T11:15:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 226655 bytes, checksum: 6e328391cab6caf62bbccfae7c01eb85 (MD5) Previous issue date: 2003-02-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivando avaliar, no Experimento 1, o efeito de suplementos de auto controle de consumo sobre o desempenho e parâmetros da cinética ingestiva e digestiva de novilhos mestiços recriados em pastagem de Brachiaria decumbens durante o período das águas, utilizaram-se 24 animais mestiços não - castrados, com idade e peso médios iniciais de 12 meses e 172 kg, respectivamente, para o ensaio de desempenho; além de quatro novilhos mestiços fistulados no rúmen, abomaso e esôfago, para estudo dos parâmetros nutricionais. Forneceram-se sal mineral (SAL) e suplementos à base de: uréia, mistura mineral, milho grão triturado e farelo de soja (MFS); uréia, mistura mineral, farelo de soja e farelo de glúten de milho (FGFS); e, uréia, mistura mineral, farelo de trigo e farelo de soja (FTFS), com teor protéico médio de 53,60% de PB. Não se verificou efeito da suplementação sobre os ganhos médios diários (P>0,05), que foram de: 0,820; 0,950; 1,020 e 0,970 kg/animal/dia, respectivamente, para SAL, MFS, FGFS e FTFS. Não houve diferenças (P>0,05) entre os consumos de MS, MO, MS do pasto, MO do pasto, CT, FDN e CNF, que apresentaram valores médios de 9,66; 9,14; 8,19; 7,33; 6,18 e 1,24 kg/dia. Entretanto, verificaram-se efeitos significativos (P<0,05) para o consumo de PB, sendo que os animais suplementados apresentaram consumo de PB superior (51%) aos animais controle (SAL). Não houve influência da suplementação sobre a taxa de passagem ruminal (L) e o tempo médio de retenção total no trato gastrointestinal (TMRT), sendo os valores médios encontrados para L e TMRT de 0,0251 h -1 e 88,00 horas, respectivamente. Verificou-se efeito da suplementação sobre a concentração de amônia ruminal (NH 3 ) (P<0,05) e interação tratamento x tempo (P<0,05), sendo que a suplementação propiciou maiores concentrações de NH 3 (27,71 mg NH 3 /dl) em relação ao tratamento controle (SAL). A suplementação não influenciou as digestibilidades aparente total, ruminal e intestinal da MS, MO, CT, FDN e CNF (P>0,05). Verificou-se efeito da suplementação sobre a digestibilidade aparente da PB (P<0,05), sendo que as dietas contendo suplementos apresentaram maiores digestibilidade aparente da PB em relação ao controle. Verificou-se que os animais suplementados excretaram maiores quantidades de N – uréia na urina (95,28 g/dia)(P<0,05) em relação aos animais controle (46,90 g/dia). Não se verificou efeito dos tratamentos sobre a eficiência de síntese de proteína microbiana expressa nas diferentes formas. Objetivou-se, no Experimento 2, avaliar a influência de suplementos de auto controle de consumo sobre o desempenho e parâmetros ingestivos e digestivos de novilhos recriados em pastagens de Brachiaria decumbens durante o período de transição águas-seca. Utilizaram-se 28 novilhos mestiços, não castrados, com idade e pesos médios iniciais de 14-15 meses e 249 kg, respectivamente, para o ensaio de desempenho além de quatro novilhos mestiços fistulados no rúmen, abomaso e esôfago, para estudo dos parâmetros nutricionais. Forneceram-se sal mineral (SAL) e suplementos à base de: mistura mineral, sal comum e milho grão triturado (MGS); mistura mineral, uréia e milho grão triturado (UMG); e, mistura mineral, uréia, milho grão triturado e farelo de soja (UMGFS), com diferentes teores protéicos. Houve efeito da suplementação (P<0,05) sobre os ganhos médios diários, que foram de: 0,385; 0,380; 0,454 e 0,538 kg, respectivamente, para os tratamentos SAL, MGS, UMG e UMGFS. Os suplementos não propiciaram diferenças significativas para os consumos de MS, MO, MS do pasto, MO do pasto, CT; FDN e CNF, que apresentaram valores médios de 9,01; 7,85; 8,09; 7,39; 6,86; 5,69 e 1,23 kg/dia. Contudo, observaram-se efeitos significativos (P<0,05) quanto ao consumo de PB, sendo os maiores consumos de PB obtidos com a utilização dos suplementos UMGFS e UMG. Não se verificou efeito dos tratamentos (P>0,05) quanto aos parâmetros de cinética de trânsito de partículas, sendo os valores médios encontrados para L e TMRT de 0,018 h -1 e 106,93 horas, respectivamente. Verificou-se efeito da suplementação sobre a concentração de amônia ruminal (P<0,05) e interação suplementação x tempo (P<0,05). Obtiveram-se maiores valores de NH 3 para os suplementos UMGFS (31,25 mg/dl) e UMG (24,22 mg/dl). A suplementação não influenciou as digestibilidades aparente total, ruminal e intestinal da MS, MO, CT, FDN e CNF (P>0,05). Verificou-se efeito da suplementação sobre a digestibilidade aparente da PB (P<0,05), sendo que as dietas contendo o suplemento UMGFS apresentaram maiores digestibilidade da PB em relação aos demais tratamentos. Verificou-se maiores excreções de N-uréia e eficiência microbiana (P<0,05) para o suplemento UMGFS. Com o Experimento 3, objetivou-se avaliar a influência do fornecimento de suplementos múltiplos em diferentes freqüências, sobre o desempenho de novilhos recriados em pastagens de capim Mombaça durante o período das águas e período de transição águas - seca. Utilizaram-se 24 novilhos mestiços, não castrados, com idade e pesos médios iniciais de 10 meses e 138 kg, respectivamente, para o 1o ensaio (período das águas) e 20 novilhos mestiços, não castrados, com idade e pesos médios iniciais de 13 meses e 218 kg, respectivamente, para o 2o ensaio (período de transição águas-seca). No 1o ensaio forneceram-se o suplemento (10% mistura mineral, 40% milho grão triturado e 50% farelo de soja), em quantidades de 500g/animal, em diferentes freqüências semanais e o tratamento controle (SAL). No 2o ensaio forneceram-se o suplemento (10% mistura mineral; 5% uréia/sulfato de amônio; 42,5% farelo de trigo e 42,5% promil 21), em quantidades de 500g/animal, em diferentes freqüências semanais e o tratamento controle (SAL). Em ambos ensaios, não se verificou efeito da suplementação e das freqüências de suplementação sobre o desempenho dos animais (P>0,05). / Twenty four crossbred steers, with average initial age and weight of 12 months and 172 kg, respectively, grazing Brachiaria decumbens, in the rainy season, were used in the performance essay to evaluate, in the Experiment 1, the effect of supplements of self feed on the performace and parameters of ingestive kinetic, besides four crossbred steers, fistulated in the rumen, abomasum and esophagus were used for evaluating nutritional parameters. Mineral salt (SAL) and supplements based on: urea, mineral mix, grounded corn grain and soybean meal (MFS); urea, mineral mix, soybean meal and corn gluten meal (FGFS); and urea, mineral mix, wheat bran and soybean meal (FTFS), with average protein content of 53.60% CP, were fed. It was not observed effect (P>0.05) of supplementation on the average daily gain, of 0.820, 0.950, 1.020 and 0.970 kg/animal/day, respectively, for SAL, MFS, FGFS e FTFS. No differences (P>0.05) were observed for the intakes of DM, OM, DM of pasture, OM of pasture, TC, NDF and NFC, that presented average values of 9.66, 9.14, 8.19, 7.33, 6.18 and 1.24 kg/day. However, significant (P>0.05) effects were observed for CP intake, and the supplemented animals showed CP intake higher (51%) than the control animals (SAL). There was no effect of supplementation on the ruminal passage rate (L) and the average total retention time in the gastrointestinal tract (TMRT), with average values of L and TMRT of 0.0251 h -1 and 88.00 hours, respectively. There was effect (P> 0,05) of supplementation on the ruminal ammonia concentration (NH 3 ) and interaction treatment x time (P>0.05), and the supplementation presented higher NH 3 concentrations (27.71 mg NH 3 /dl) in relation to the control treatment (SAL). There was no xeffect (P>0,05) of supplementation on the total, ruminal and intestinal apparent digestibility of DM, OM, TC, NDF and NFC. There was effect (P>0,05) of supplementation on the CP apparent digestibility (P>0.05), and the diets with supplements showed higher values of CP appant digestibility than the control. The animals supplemented excreted higher N contents-urea in the urine (95.28 g/day) (P>0,05) than the control animals (46.90g/day). No effect of treatments on the efficiency of microbial protein synthesis express by different forms was observed. In the Experiment 2, twenty-eight four crossbred steers, with average initial age and weight of 14-15 months and 249 kg, respectively, grazing Brachiaria decumbens, in the rainy-dry season, were used in the performance essay to evaluate the effect of supplements of self feed on the performance and ingestive and digestive parameters, besides four crossbred steers, fistulated in the rumen, abomasum and esophagus were used for evaluating nutricional parameters. Mineral salt (SAL) and supplements based on: mineral mix, salt, and grounded corn grain (MGS); mineral mix, salt, and grounded corn grain (MGS); mineral mix, urea and grounded corn grain (UMG), and mineral mix, urea, grounded corn grain and soybean meal (UMGFS), with different protein contents, were fed. There was effect of supplementation (P>0.05) on the average daily gains of: 0.385, 0.380, 0.454 and 0.538 kg, respectively, for the treatments SAL, MGS, UMG and UMGFS. The supplements showed no significant differences for the intakes of DM, OM, DM of pasture, OM of pasture, TC, NDF and NFC, that showed average values of 9.01; 7.85; 8.09; 7.39; 6.86; 5.69 and 1.23 kg/day. However, significant (P>0.05) effects were observed for the CP intake, with greater values when the supplements UMGFS and UMG were used. No effect (P>0.05) of treatments were used for the parameters of particulate transit kinetic, with average values of L and TMRT of 0.018 h -1 and 106.93 hours, respectively. There was effect (P<0.05) of supplementation on the ruminal ammonia concentration and interaction supplementation x time (P<0.05). Greater values of NH 3 were obtained for the supplementation UMGFS (31.25 mg/dl) and UMG (24.22 mg/dl). There was no effect (P>0.05) for supplements UMGFS (31.25 mg/dl) and UMG (24.22 mg/dl). There was no effect (P>0.05) of supplementation on the apparent total, ruminal and intestinal digestibility of DM, OM, TC, NFC. There was effect (P>0.05) of xisupplementation on the CP apparent digestibility (P<0.05), and the diets with supplement UMGFS showed higher CP digestibility than the other treatments. Higher values of N-urea excretions and microbial efficiency (P<0,05) were observed for the supplement UMGFS. Twenty-four crossbred steers, with average initial age and weight of 10 months and 138 kg, respectively, in the first essay (rainy season); twenty crossbred steers, with average initial age and weight of 13 months and 218 kg, respectively, in the second essay (rainy-dry season) grazing Mombaçagrass, in the rainy season and rainy-dry season, were used to evaluate, in the Experiment 3, the effect of multiple supplements, fed at different frequency, on the performance. In the 1 st essay, 500 g/animal of supplement (10% mineral mix, 40% grounded corn grain and 50% soybean meal) were fed at different weekly frequency and the control treatment (SAL). In the 2 nd essay, 500 g/animal of supplement (10% mineral mix; 5% urea/ammonio sulfate; 42,5% wheat bran and 42.5% promil 21) were fed at different weekly frequency and the control treatment (SAL). In both essays, no effect (P>0.05) of supplementation and frequencies of supplementation on the animal performance was observed.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-16T16:53:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 418906 bytes, checksum: bcaa02b8bd99215a9c11c0022a49257a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-16T16:53:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 418906 bytes, checksum: bcaa02b8bd99215a9c11c0022a49257a (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Os peptídeos recombinantes rBmseq1 e rBmseq4 foram avaliados como imunógenos para o controle do carrapato R. (B.) microplus em teste de estábulo. Foram utilizados 17 bovinos mestiços com média de sangue 7/8 (H/Z), os quais foram mantidos sob o manejo rotineiro no Setor de Isolamento de Bovinos do Departamento de Veterinária – UFV. Os animais foram separados em quatro grupos constituídos por quatro animais cada: grupo vacinal rBmseq1,grupo vacinal rBmseq4, grupo controle e grupo P. pastoris, sendo os grupos vacinais imunizados nos dias 0, 30 e 60 com 2 mg de peptídeo recombinante associado ao adjuvante saponina. Os animais do grupo controle foram inoculados com solução fisiológica e o grupo Pichia pastoris com 2 mg de extrato bruto de P. pastoris não transformada. Foram realizadas coletas de sangue seriadas e semanais até a 14o semana do estudo. Após 21 dias da terceira inoculação, os animais foram submetidos a infestação artificial com um total de 4.500 larvas/animal de R. (B). microplus (amostra “Viçosa”). A partir do 19° dia após a infestação os animais foram observados diariamente quanto ao desenvolvimento larval. A partir do 21° dia foi realizada lavagem, duas vezes ao dia, das baias e coletas manuais das teleóginas desprendidas, as quais foram contadas, pesadas, identificadas e incubadas em estufa B.O.D. por quinze dias à 28oC±2oC e 80% de umidade relativa, quando seus respectivos ovos foram pesados. Foram analisados números de teleóginas desprendidas, peso dos ovos, relação peso larvas/grama de ovos e sua viabilidade. A cinética da produção de anticorpos foi acompanhada através de ELISA, obtendo-se títulos maiores para os grupos vacinais, estatisticamente diferentes aos grupos controle e Pichia pastoris (p 0,05) Os parâmetros biológicos foram analisados levando-se em consideração o viii número e peso das teleóginas, peso e fertilidade dos ovos. A eficácia calculada foi 52,72% para o grupo vacinal rBmseq1 e de 72,40% para o grupo vacinal rBmseq4. Quanto à avaliação do número de carrapatos, houve diferença estatística entre os grupos testados, entre si e quando comparados ao grupo controle, sendo marcadamente acentuada no grupo rBmseq4. Os parâmetros peso das teleóginas ao desprendimento e peso médio da oviposição dos grupos vacinais não diferiram estatisticamente quando comparados ao grupo controle. Os resultados obtidos mostram que os peptídeos recombinantes rBmseq1 e rBmseq4 são alternativas viáveis para o controle do carrapato R. (B). microplus, pela sua eficácia, segurança ambiental e baixo custo. / Recombinant peptides rBmseq1 and RBmseq4 were evaluated as immunogenic for the control of ticks R. (B. ) microplus in test of stable. We used 17 bovine animals of the half-breed average degree of blood of 7/8 (H/Z), which were kept under the management routine in the Sector of isolation of bovine animals in the Department of Veterinary – UFV. The animals were separated into four groups: group vaccine rBmseq1,group rBmseq4 vaccine, control group and group P. pastoralist, being immunized vaccine groups on days 0, 30 and 60 with 2 mg peptide recombinant associated with adjuvant saponin. The animals of the control group were inoculated with saline solution and the group Pichia pastoris with 2 mg of crude extract of P. pastoralist not processed. Collections were made serial blood and weekly until the 14TH week of the study. After 21 days of the third inoculation, the animals were submitted to artificial infestation with a total of 4,500 larvae/animal of R. (B). microplus (sample "Viçosa"). From the 19th day after the infestation animals were observed daily to the larval development. From the 21TH day was performed washing twice a day of the stalls and collections of manuals teleóginas detached, which were counted, weighed, identified and incubated in greenhouse B. O. D. by fifteen days, when their eggs were weighed. Numbers were analyzed teleóginas detached, egg weight, relation weight larvae/gram of eggs and its viability. The kinetics of production of antibodies was accompanied by ELISA, getting-securities greater for vaccine groups, statistically different groups controlling and Pichia pastorais (p 0,05) The biological parameters were analyzed taking‐account of the number of teleóginas, weight and fertility of eggs. Efficacy was 52.72% for group rBmseq1 vaccine and 72.40% for group rBmseq4 vaccine . Regarding the assessment of the number of ticks, there was statistical x difference between the groups, between themselves and when compared to the control group, markedly marked in the group rBmseq4. The parameters weight of teleóginas to detachment and average weight of oviposition of vaccine groups, did not differ statistically when compared to the control group. The results obtained show that the peptides recombinant rBmseq4 rBmseq1 and are viable alternatives for the control of ticks R. (B). microplus, its efficiency, environmental safety and low cost.

PASSOS, M.J. Efeito da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre o desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos. 2012. 239 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T12:13:07Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) Previous issue date: 2012 / This study aims to 1) evaluate the effect of BMP-15 and FSH, alone or in different combinations on the in vitro development, survival and antrum formation of bovine secondary follicles and 2) quantify the levels of mRNA expression for BMP-15 receptors (BMPR-IB and BMPR-II), FSH receptor and Kit Ligand in follicles grown in vivo and in vitro. With regard to culture, secondary follicles were microdissected and cultured for twelve days in α-MEM+ alone, or supplemented with BMP-15 and/or FSH, alone or in various associations. After culture, follicular diameter were evaluated, viability and rate of antrum formation. For the analyzes gene expression, by real time PCR, were used follicles cultured in the different treatments for comparisons of the levels of mRNA. After the culture period it was found that the association of BMP+FSH (0-12) stimulated a significant increase in follicular diameter in relation to other treatments (p<0.05), as well as stimulated the formation of antral cavity more effectively the control (MEM) and BMP-15 alone (p<0.05). However, for survival, after 12 days treatment BMP+FSH (0-12) significantly reduced follicular viability when compared to other treatments (p<0.05). The results showed that the levels of mRNA for BMP receptor type I (BMPR-IB) were significantly higher in follicles cultured with MEM when compared to other treatments, while levels of mRNA for the receptor type II (BMPR-II) did not differ between treatments. The highest levels of mRNA for the FSH receptor were detected in follicles cultured with BMP-15 alone. In conclusion, this study demonstrated that combination of BMP-15+FSH (D0-D12) accelerates the growth of bovine preantral follicles cultured for 12 days, but this effect reduces the follicular viability, affecting the ultrastructural integrity of the follicles. Furthermore, the addition of BMP alone increased expression levels of RNAm for FSHR after 12 days of culture , showing that BMP-15 and FSH may contribute significantly to the in vitro development of preantral follicles cultured for 12 days in this specie. / Este trabalho tem como objetivo 1) avaliar o efeito da BMP-15 e do FSH, sozinhos ou em diferentes associações sobre o crescimento, sobrevivência e formação de antro em folículos secundários bovinos e 2) avaliar os níveis de expressão do RNAm para os receptores de BMP-15 (BMPR-IB e BMPR-II) em folículos crescidos in vitro. Com relação ao cultivo, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por doze dias em α-MEM+ sozinho, ou suplementado com BMP-15 e/ou FSH, sozinhos ou em diferentes associações. Após o cultivo, foram avaliados o diâmetro folicular, a viabilidade e a taxa de formação de antro. A análise de expressão gênica foi realizada por PCR em tempo real, utilizando folículos cultivados nos diferentes tratamentos, para comparações dos níveis de RNAm. Após o período de cultivo verificou-se que a utilização da BMP+FSH (0-12) estimulou um aumento significativo no diâmetro folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05), bem como estimulou a formação da cavidade antral de forma mais efetiva que o controle (MEM) e a BMP-15 sozinha (p<0,05). No entanto, em relação à sobrevivência, após12 dias o tratamento BMP+FSH (0-12) reduziu significativamente a viabilidade folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para o receptor de BMP-15 do tipo I (BMPR-IB) foram significativamente maiores nos folículos cultivados com MEM quando comparado aos demais tratamentos, enquanto que os níveis de RNAm para o receptor do tipo II (BMPR-II) não diferiram entre os tratamentos. Os maiores níveis de RNAm para o receptor de FSH foram detectados em folículos cultivados com BMP-15 sozinha. Em conclusão, este estudo demonstrou que a combinação de BMP-15 + FSH durante todo o período de cultivo (D0-D12) acelera o crescimento de folículos pré-antrais bovinos cultivados por 12 dias, mas este efeito reduz a viabilidade folicular, afetando a integridade ultra-estrutural dos folículos. Além disso, a adição de BMP isoladamente aumentou os níveis de expressão de RNAm para FSHR após 12 dias de cultivo,mostrando que BMP-15 e FSH podem contribuir significativamente para o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais cultivados por 12 dias nesta espécie.

Submitted by MARCOS HENRIQUE COLOMBO PEREIRA null (marcoshpereira@hotmail.com) on 2016-01-22T17:38:21Z No. of bitstreams: 1 Tese final com ficha.pdf: 458776 bytes, checksum: f3a256e391692425ab75175c2b86546a (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-01-25T16:21:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_mhc_dr_botu.pdf: 458776 bytes, checksum: f3a256e391692425ab75175c2b86546a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T16:21:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_mhc_dr_botu.pdf: 458776 bytes, checksum: f3a256e391692425ab75175c2b86546a (MD5) Previous issue date: 2016-01-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Study 01- Our hypothesis was that fertility could be increased in a timed AI (TAI) protocol based on estradiol (E2) and progesterone (P4) by combining GnRH with E2-benzoate at the start of the protocol to increase circulating P4 concentration during preovulatory follicle development and by using two prostaglandin (PGF) treatments at the end to decrease circulating P4 concentration near TAI. Lactating Holstein cows (n = 1,808) were randomly assigned during the cool or hot seasons of the year to receive TAI (d0) following one of three treatments: I. Control: CIDR + 2 mg of E2-benzoate on d -11, PGF on d -4, CIDR withdrawal + 1.0 mg of E2-cypionate on d -2, and TAI on d 0; II. 2PGF: Identical to Control protocol with addition of a second PGF treatment on d -2; III. GnRH: Identical to 2PGF protocol with addition of 100 μg GnRH treatment on d -11. Pregnancy diagnoses were performed d32 and d60 after TAI. The GnRH protocol increased percentage of cows with CL (Control = 56.9%; 2PGF = 55.8%; GnRH = 70.5%) and circulating P4 concentration at PGF (Control = 3.28 ± 0.22; 2PGF = 3.35 ± 0.22; GnRH = 3.70 ± 0.21 ng/mL), compared to Control and 2PGF protocols. The positive effects of GnRH treatment on P/AI were only detected during the cool season (GnRH = 50.9%; 2PGF = 44.2%; Control = 41.0%) and not during the hot season. In addition, the effect of GnRH was only observed in cows with low circulating P4 concentration (<3ng/mL) at the start of the protocol and not in cows that began the protocol with high P4. Further, there was an interaction for presence of CL at PGF with follicle diameter such that cows with a CL at PGF had greater P/AI if they ovulated larger rather than smaller follicles near TAI.Season had major effects on many reproductive measures with cool season greater than hot season in percentage of cows with CL at PGF (62.9 vs. 56.2%), ovulatory follicle diameter (15.7 vs. 14.8 mm), expression of estrus (86.7 vs. 79.9%), ovulation following the protocol (89.7 vs. 84.3%), and pregnancies per AI (P/AI; 45.4 vs. 21.4%). Thus, fertility to TAI can be improved by inducing ovulation at the 27 beginning of an E2/P4-based protocol using GnRH treatment, particularly during the cool season of the year and in cows with low P4 at the start of the protocol. Study 02- We hypothesized that the 2 CIDR protocol would have similar results on circulating P4 concentration at PGF, ovulation to ECP, P/AI, and pregnancy losses. Lactating Holstein cows (n = 1,638) were randomly assigned to receive TAI (d0) following one of two treatments: (I. GnRH treatment) CIDR+ 2 mg of E2-benzoate + 100 μg GnRH on d -11, PGF on d -4, CIDR withdrawal + 1.0 mg of E2-cypionate + PGF on d -2, and TAI on d 0; (II. 2CIDR treatment) Two CIDR + 2mg of E2-benzoate on d -11, one CIDR withdraw + PGF on d -4, second CIDR withdrawal + 1.0 mg of E2-cypionate + PGF on d -2, and TAI on d 0. Pregnancy diagnoses were performed d32 and d60 after TAI. There was no effect of treatments (P > 0.10) on fertility regardless of cow temperature, BCS, parity, milk yield and presence or absence of a CL on d -11 or d -4. Some physiological measurements associated with greater fertility were reduced in cows with elevated temperature (≥ 39.1ºC) as percentage of cows with CL at PGF decreased 5.4%, ovulatory follicle diameter decreased 0.51 mm, expression of estrus decreased 4.7%, and ovulation to the ECP decreased 2.5% compared to cows with reduced temperature (< 39.0ºC), with result in 13.4% decrease (P < 0.01) in P/AI and tended to increase (P = 0.09) the pregnancy loss between 32 and 60d. There were more (P < 0.01 ) cows with a CL at PGF in the GnRH (< 39.0ºC = 78.1% [314/402]; ≥ 39.1ºC = 70.9% [256/361]) protocol than in 2CIDR protocol (< 39.0ºC = 58.8% [244/415]; ≥ 39.1ºC = 54.6% [190/348], however, circulating P4 concentration was greater (P = 0.05) at the time of PGF treatment (d -4) for cows treated 2CIDR (< 39.0ºC = 4.34 ± 0.13; ≥ 39.1ºC = 4.17 ± 0.14 ng/mL) than GnRH (< 39.0ºC = 4.12 ± 0.14; ≥ 39.1ºC = 3.84 ± 0.14 ng/mL), independent of cow temperature. The result of this study shows that the protocols have similar results on circulating P4 concentration at PGF, ovulation to ECP and P/AI. / FAPESP: 2012/19059-2

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-02Bitstream added on 2014-06-13T19:45:12Z : No. of bitstreams: 1 perini_ap_dr_jabo.pdf: 421844 bytes, checksum: 8711bc62b0ce38924a7b61b38ef31cf7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Foram estudadas modificações feitas no tempo de maturação in vitro de oócitos bovinos, incubação dos espermatozóides e separação dos mesmos por gradiente de densidade de PercollTM, bem como a associação dessas técnicas antes da fecundação para que se consiga desviar a proporção sexual dos embriões para fêmeas. O controle de qualidade foi feito em cada etapa dos procedimentos avaliando-se os parâmetros de motilidade, vigor e concentração dos espermatozóides, bem como taxa de clivagem e produção in vitro dos embriões. A proporção sexual foi avaliada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e por transferências de embriões em receptoras. Pela técnica da PCR concluiu-se que a incubação dos espermatozóides em meio FIV sem heparina por 12 horas, desviou 59% o sexo dos embriões para fêmeas, a diminuição do tempo de maturação não desviou e essas duas técnicas associadas a centrifugação em gradiente não aumentaram o desvio da proporção sexual, porém o gradiente de sexagem foi eficaz em sexar 64% dos espermatozóides para fêmeas. Obteve-se uma taxa média de prenhez de 36,73% e uma proporção de fêmeas de 88,88% com embriões produzidos a partir da associação da redução no tempo de maturação dos oócitos ao gradiente de sexagem / Were studied modifications made at the time of in vitro maturation of oocytes, sperm incubation and separation thereof by density gradient PercollTM as well as the combination of these techniques prior to fertilization to be able to divert the sex ratio of embryos females. Quality control was done at each stage of the procedures by evaluating the parameters of motility, vigor and concentration of spermatozoa and rate of cleavage and in vitro production of embryos. The sex ratio was assessed by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) and embryo transfer into recipients. By the technique of PCR it was found that incubation of spermatozoa in IVF medium without heparin for 12 hours, 59% deviated sex of embryos for females, the reduction time of maturation is not shifted and associated with these two techniques do not increase the deviation of the sex ratio by gradient centrifugation, but the gradient was effective in sexing 64% of sperm to females. We obtained a mean pregnancy rate of 36.73% and a ratio of 88.88% of females with embryos produced from the combination of the reduction in the time of oocyte maturation to the gradient of sexing