Orientador: Cristiane Duque / Coorientador: Célio Percinoto / Banca: Sandra Maria Herondina Coelho Avila de Aguiar / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Solange de Paula Ramos / Banca: Cássia Cilene Dezan Garbelini / Resumo: O sistema imune tem diversas formas de defesa contra microrganismos patogênicos. As membranas da mucosa são uma fonte de peptídeos catiônicos antimicrobianos contra uma ampla variedade de bactérias, fungos e vírus encapsulados. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e atividade antimicrobiana em condições planctônicas e de biofilme de fragmentos derivados de peptídeos catiônicos (PC): LL-37 (originário de hCAP-18), D6-17 e D1-23 (originários de ortólogo da β-defensina-3 humana) contra bactérias cariogênicas. Para análise citotóxica, duas linhagens de células epiteliais foram expostas a diluições seriadas de fragmentos de PC. Ensaios de MTT e coloração de DAPI foram realizados para avaliar o metabolismo e a morfologia celular, respectivamente. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para fragmentos de PC e controle (digluconato de clorexidina - CHX) contra Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum e Actinomyces israelii. A concentração inibitória fracionada (FIC) foi obtida pelas combinações de fragmentos de CP para S. mutans. O ensaio de biofilme foi conduzido com CHX e o melhor fragmento de CP contra cepas de S. mutans. Microscopia confocal a laser foi realizada para avaliar a quantidade de células mortas em relação as células vivas e também a espessura do biofilme. Os resultados indicaram que ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The immune system has several forms of defense against pathogenic microorganisms. The mucous membranes are a source of potent antimicrobial cationic peptides against a broad range of bacteria, fungi and envelope d viruses. The aim of study was evaluated the cytotoxicity and antimicrobial activity under planktonic and biofilm conditions of fragments derived from cationic peptides (CP): LL-37 (from hCAP-18), D6-17 and D1-23 (from β -defensin-3 derivative) against cariogenic bacteria. For cytotoxicity analysis, two lines of epithelial cells were exposed to serial dilutions of the CP fragments. MTT assays and DAPI staining were perfor med to evaluate cell metabolism and morphology, respectively. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were dete rmined for the CP fragments and control (Chlorhexidine digluconate-CHX) against Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidoph ilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum and Actinomyces israelii . Fractional inhibitory concentration (FIC) was obtained for the combinations of CP fragments on S. mutans. Biofilm assays were conducted with CHX and the best antimicrobial CP fragment against S. mutans strains. Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) was used to analyze the Live/Dead cells and biofilm thickness. The results indicated that D6-17 did not affect the metabolism of either cell line. D1-23, LL-37 and CHX were not toxic for both cells, in concentrations below 0.2, 0.02 and 0.01mM, respectively . DAPI-staining cells demonstrated nuclei fragmentation for LL-37 group and cells with the aspect of apoptosis in the CHX group. Cells treated with D1-23 and D6-17 presente d morphology similar to the control group (culture medium). D1-23 presented the best bactericidal activity ... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Cristiane Duque / Banca: Ana Cláudia Okamoto / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Thaís Marchini de Oliveira / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Resumo: O tratamento endodôntico de dentes permanentes jovens representa um grande desafio clínico devido a presença de paredes dentinárias finas, divergentes ou paralelas e ápice aberto, o que dificulta a desinfecção e a execução dos procedimentos convencionais. Terapias de regeneração endodôntica envolvem o uso de materiais capazes de promover uma desinfecção eficaz sem causar citotoxicidade, além de induzir a diferenciação de células-tronco ou bioestimular células remanescentes do tecido pulpar mesmo após a injúria. Nesse contexto, os flavonoides, polifenóis presentes em frutas e vegetais, poderiam ser agentes interessantes para o tratamento endodôntico de dentes imaturos devido a sua amplitude terapêutica. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano, citotóxico e indutor de mineralização de flavonoides com finalidade de aplicação endodôntica. Este trabalho de tese foi dividido em três capítulos. O capítulo 1 avaliou a toxicidade dos flavonoides taxifolina, crisina, pinocembrina e galangina sobre fibroblastos pelo ensaio de MTT, a atividade antimicrobiana pela determinação da concentração inibitória e bactericida mínima, e a ação antibiofilme do flavonoide com melhor efeito antimicrobiano, por meio de ensaios em placas de poliestireno e em dentina radicular bovina por meio da análise por microscopia confocal. Os resultados mostraram que o flavonoide taxifolina não foi tóxico para os fibroblastos em nenhuma das concentrações analisadas, enquanto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The endodontic treatment of young permanent teeth represents a great clinical challenge due to the presence of thin, divergent or parallel dentin walls and the open apex that makes it difficult to disinfect and perform conventional en dodontic procedures. Endodontic regeneration therapies involve the use of materials capable of promoting effective disinfection without causing cytotoxicity, in addition to inducing differentiation of stem cells or biostimulating remaining pulp tissue cell s even after injury. In this context, the flavonoids, polyphenols present in fruits and vegetables, could be interesting agents for the endodontic treatment of immature teeth due to the wide therapeutic use. Thus, the objective of the present study was to evaluate the antimicrobial, cytotoxic effects and capacity of mineralization induction of flavonoids for endodontic application. This thesis was divided into three chapters. The chapter 1 evaluated the toxicity of taxifolin, chrysin, pinocembrin and galang in flavonoids on fibroblasts by the MTT method, antimicrobial activity by determining the minimum inhibitory and bactericidal concentrations and analyzed the antibiofilm action of the flavonoid with the best antimicrobial effect, by means of the biofilm as says in polystyrene plates and in bovine root dentin and confocal microscopy analysis. The results showed that the flavonoid taxifolin was not toxic on fibrobla sts in any tested concentration, while chrysin, pinocembrin and galangin flav... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T11:24:32Z No. of bitstreams: 1 Alessandra de Lima Garcial.pdf: 600161 bytes, checksum: ea17d29c4e5e21f8284154d25994db6d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T11:24:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alessandra de Lima Garcial.pdf: 600161 bytes, checksum: ea17d29c4e5e21f8284154d25994db6d (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum is important worldwide mainly due to the great losses it causes in a large and diverse host range and its difficult control. In Brazil, bacterial wilt in solanaceous mainly occurs in Northeastern, North and Southeastern regions and may cause 100% losses. In the state of Pernambuco, bacterial wilt may be destructive to bell pepper in the producing counties of Mesorregiões Agreste and Mata. This work aimed: (i) to analyze 78 bacterial strains obtained from wilted bell pepper plants at producing counties of the state of Pernambuco, Brasil identified as R. solanacearum by multiplex PCR with reference to biochemical, virulence, molecular and genotypic diversity, and (ii) to evaluated the commercial disinfectant product Kilol- L® and its components, the ascorbic, citric and lactic acids for disease control. In the first paper the biochemical analysis characterized biovars and biotypes. The virulence studies included analysis of disease severity, area under disease progress curve and incubation period after inoculation of bell pepper, tomato, eggplant and tobacco plants by root wounding and inoculum drenching. The molecular characterization was performed by multiplex PCR, Rep-PCR and ISSR. The genotypic diversity was studied considering the number of observed genotypes and how they distributed by population differing in richness, evenness and diversity. There was predominance (97. 44%) of strains belonging to biovar 3, biotype 8 and phylotype I, but also were found biovar 1, biotypes 3 and 6, and phylotype II. The multivariate analysis performed with UPGMA and using the pool of the virulence data permitted the separation of R. solanacearum strains in 12 similarity groups, pointing out high variability, with strains of different areas in the same group. The Rep-PCR with REP and BOX markers and ISSR showed similarity among most of the R. solanacearum strains, although they did not separate strains belonging to biovars, biotypes, phylotypes, or from distinct areas. The genotypic diversity analysis evidenced moderate diversity in the total population but high variability among strains from the same county. In the second paper, initially it was evaluated in vitro the sensitivity of R. solanacearum to Kilol-L® (0.4, 0.8, 2.5, 5, 10 and 100%) and its components the ascorbic, citric and lactic acids (0.25, 0.5, 1, 2.5, 5 and 10%). After the phytotoxicity test in bell pepper cv. Atlantis, the concentrations Kilol-L® 0.8% and ascorbic, citric and lactic acids 1% were selected and tested for bacterial wilt severity reduction, by spraying of shoots or immersion of roots both using 21days-old plants. Ralstonia solanacearum strain CGH41 was inoculated by wounding roots and pouring inoculum. According to the analysis of the inhibition halos R. solanacearum showed high sensitivity to lactic acid 10% and medium sensitivity to lactic acid 5 and 2.5 %, ascorbic and citric acids 10% and Kilol-L® 100%. The immersion of roots in lactic acid 1% controlled bell pepper bacterial wilt by 100% however without difference from ascorbic and citric acids 1%. The method of root immersion differed from the shoot spray for most of the treatments. The unique significant effect of Kilol-L® was to elevate de incubation period when applied by shoot spraying. / A murcha bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum tem importância mundial devido aos grandes prejuízos causados, à variada e extensa gama de hospedeiros e ao difícil controle. No Brasil, a murcha bacteriana das solanáceas ocorre principalmente nas Regiões Nordeste, Norte e Sudeste, podendo causar 100% de perdas. Em Pernambuco, a murcha bacteriana causa grandes prejuízos à cultura do pimentão nos municípios produtores das Mesorregiões do Agreste e Mata. Os objetivos deste trabalho foram: (i) analisar a diversidade bioquímica, da virulência, molecular e genotípica de 78 isolados obtidos de plantas de pimentão com murcha, em municípios produtores de Pernambuco, Brasil, identificados como R. solanacearum por PCR multiplex e (ii) avaliar o efeito do produto comercial Kilol-L® e seus componentes, ácidos ascórbico, cítrico e láctico, no controle da doença. No primeiro trabalho, na caracterização bioquímica foram determinados a biovar e o biotipo. Para o estudo da virulência, plantas de pimentão, tomate, berinjela e fumo foram inoculadas por ferimento de raízes e deposição do inóculo, analisando-se severidade, área abaixo da curva de progresso da doença e período de incubação. A caracterização molecular dos isolados foi realizada utilizando-se as técnicas de PCR-multiplex, Rep-PCR e ISSR. A diversidade genotípica foi estudada considerando o número de genótipos observados e como eles se distribuíam pela população, diferindo em riqueza, igualdade e diversidade. Nas populações estudadas foi observada a predominância (97,44%) de isolados da biovar 3, biotipo 8 e filotipo I, mas foram encontrados também a biovar 1, biotipos 3 e 6 e filotipo II. A análise multivariada por UPGMA, utilizando o conjunto dos dados de virulência,permitiu a separação dos isolados em 12 grupos de similaridade, indicando alta variabilidade, com isolados de diferentes áreas em um mesmo grupo. As análises de Rep-PCR, utilizando os marcadores REP e BOX, e ISSR, mostraram a existência de similaridade entre a maioria dos isolados de R. solanacearum. No entanto, esses marcadores não permitiram separar os isolados por biovares, biotipos, filotipos, nem por áreas diferentes. A análise da diversidade genotípica evidenciou diversidade moderada na população total, porém alta variabilidade dos isolados de um mesmo município. No segundo trabalho, inicialmente foi avaliada a sensibilidade in vitro de R. solanacearum ao Kilol-L® (0,4; 0,8; 2,5; 5; 10 e 100%) e seus componentes, os ácidos ascórbico, cítrico e láctico (0,25; 0,5; 1; 2,5; 5 e 10%). Após teste de fitotoxidez em plantas de pimentão ‘Atlantis’, as concentrações Kilol-L® 0,8% e ácidos ascórbico, cítrico e láctico a 1% foram selecionadas e testadas para redução da severidade da murcha bacteriana, aplicadas por pulverização da parte aérea ou pela imersão de raízes de plantas com 21 dias. Ralstonia solanacearum isolado CGH41 foi inoculado por ferimento de raízes e deposição do inóculo. A análise dos halos de inibição mostrou alta sensibilidade do patógeno ao ácido láctico 10% e média sensibilidade ao ácido láctico 5 e 2,5 %, ácidos ascórbico e cítrico 10% e Kilol-L® 100%. A imersão de raízes em ácido láctico 1% proporcionou 100% de controle da murcha bacteriana em pimentão, embora sem diferir estatisticamente dos ácidos ascórbico e cítrico 1%. O método de aplicação pela imersão de raízes diferiu da pulverização da parte aérea para a maioria dos tratamentos. O único efeito do Kilol-L® foi elevar o período de incubação, no método de pulverização.

Orientador: Silvana Artioli Schellini / Banca: Erika Hoyama / Banca: Roberta Lilian Fernandes de Souza Meneghim / Banca: Patricia Mitiko Santello Araishi / Banca: Ana Estela Besteti Pires Ponce Sant'Anna / Resumo: A Nanoskin® é uma película de celulose bacteriana produzida pela bactéria Acetobacter xylinum,por meio de um processo biotecnológico. É composta por uma rede de nanofibrilas cuja estrutura cria uma extensa superfície, a qual permite a retenção de grande quantidade de água e importantes modificações em seu formato, sem perder suas características estruturais. Objetivo: visando acrescentar novas possibilidades para a reconstrução da pálpebra, em seus folhetos profundo ou superficial, o presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar se a película de Nanoskin® poderia ser uma opção. Método: foram utilizadas 40 cobaias, do sexo masculino, que receberam fragmentos de Nanoskin® na região dorsal, em dois estudos, um direcionado para a utilização da Nanoskin nos tecidos profundos, quando o biomaterial foi colocado no subcutâneo e outro no qual a Nanoskin foi colocada na superfície da pele. Em ambos os estudos foram utilizados dois tipos de Nanoskin: grupo 1 (G1), no qual foi utilizada película de Nanoskin® (2X2 cm) sem recobrimento de gelatina no subcutâneo ou na superfície da pele e o grupo 2 (G2), que recebeu implante de Nanoskin® (2X2 cm) com revestimento de gelatina no subcutâneo e na superfície da pele. O grupo controle foi obtido com colocação de enxerto de pele de espessura total no tamanho de 2X2 cm, contíguo ao implante de Nanoskin®, em todos os animais de G1 e de G2 do experimento que estudou o biomaterial na superfície da pele. Cinco animais de cada grupo foram eutanasiados em quatro momentos experimentais: 7 dias (M1), 30 dias (M2), 90 dias (M3) e 180 dias (M4). Foram realizadas avaliações morfométricas do implante das lâminas histológicas, exame histológico e exame ultraestrutural. Resultados: a Nanoskin® quando implantada no subcutâneo não foi encontrada em um animal de M3 e em cinco animais de M4. Nos momentos M3, M4 e M5, houve separação entre as suas lamelas. Houve... / Abstract: The Nanoskin® is a bacterial cellulose film produced by the bacteria Acetobacter xylinum by means of a biotechnological process. It is composed by a network of nanofibrils whose structure creates a large surface area, which allows the retention of a large amount of water and significant changes in its shape without losing its structural characteristics. Purpose: aiming to add new possibilities for the reconstruction of the eyelid, in its superficial or deep lamellae, this study was developed in order to assess whether the Nanoskin® film could be an option. Method: 40 male guinea pig were used, that received Nanoskin® fragments in the dorsal region, in two studies, one directed to the use of Nanoskin® in deep tissue when the biomaterial was placed subcutaneously and another in which the Nanoskin® was placed on skin surface. In both studies we used two types of Nanoskin: group 1 (G1), which was used Nanoskin® film (2x2 cm) without gelatin coating on the subcutaneous or on the skin surface, and Group 2 (G2), which received Nanoskin® implant (2X2 cm) with gelatin coating on the subcutaneous and on the skin surface. The control group was obtained with full-thickness skin graft placement on the size of 2X2 cm Nanoskin® adjacent to the implant in all animals in G1 and G2 experiment that studied the biomaterial on the surface of the skin. Five animals from each group were euthanized at four experimental times: 7 days (M1), 30 days (M2), 90 days (M3) and 180 days (M4). Morphometric assessments of the implant and the histological slides were held, histological and ultrastructural examination. Results: the Nanoskin® when implanted subcutaneously was not found in one animal from M3 and in five animals from M4. In moments M3, M4 and M5, there was separation between their lamellae . There was a significant inflammation at the beginning of the experiment which reduced the following times, and formation of a pseudocapsule around the ... / Doutor

O estabelecimento de biofilmes microbianos em superfícies é responsável por inúmeros problemas, já que estes podem constituir uma fonte de microrganismos patogênicos e deteriorantes. A formação dos biofilmes é precedida pela adesão dos microrganismos, assim, medidas que inibem ou reduzem essa adesão contribuem para a redução da formação de biofilmes. Uma alternativa para reduzir a adesão é o tratamento prévio das superfícies com biossurfatantes, agentes tensoativos de origem microbiana que apresentam baixa toxicidade, a vantagem de serem biodegradáveis, possuindo ainda atividade antimicrobiana e antiadesiva. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade dos biossurfatantes surfactina e ramnolipídeo como agentes inibidores da adesão de Listeria monocytogenes ATCC 19112, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Micrococcus luteus ATCC 4698 e Serratia marcescens ATCC 8100 em superfícies de poliestireno. Também foi estudada a influência de diferentes meios de cultura (TSYEA, ágar lactosado e ágar peptonado) e temperaturas (35ºC, 25ºC e 4ºC) sobre a adesão bacteriana. A surfactina apresentou maior capacidade em reduzir a adesão das bactérias em estudo, quando comparada ao ramnolipídeo. O meio TSYEA foi o que promoveu maior adesão ao poliestireno para maioria das bactérias. O condicionamento da superfície com surfactina reduziu entre 63% e 66% a adesão de L. monocytogenes, S. aureus e M. luteus (cultivadas em TSYEA). As melhores respostas antiadesivas foram obtidas quando o condicionamento da superfície e o ensaio de adesão foram realizados a 4ºC. A caracterização das superfícies de poliestireno (medidas de AC) e das superfícies bacterianas (teste MATS) forneceram informações que nos permitiram propor explicações sobre os fatores que influenciam o processo de adesão dos microrganismos nesta superfície, assim como o efeito antiadesivo exibido pela surfactina. Os resultados evidenciam a potencialidade do uso de surfactina como agente antiadesivo em superfícies de poliestireno, podendo atuar na inibição da adesão de vários patógenos. / Development of microbial biofilms on surfaces leads to various problems, since then can be a source of pathogenic microorganisms. Biofilms development are preceded by microbial adhesion, thus, procedures that inhibit or reduce adhesion contribute to reduce biofilm formation. An alternative to decrease bacterial attachment is the preconditioning of surfaces with biosurfactants, surface active products of microbial origin. This group of compounds has low toxicity, are biodegradable and present antimicrobial and anti-adhesive properties. The main goal of this study was to evaluate the potencial use of surfactin and rhamnolipid biossurfactants in the reduction of the adhesion of Listeria monocytogenes ATCC 19112, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Micrococcus luteus ATCC 4698 and Serratia marcescens ATCC 8100 on polystyrene surfaces. The research was carried out using three different nutritive media (TSYEA, lactose agar and peptone agar) and three different temperatures (35ºC, 25ºC e 4ºC). Surfactin showed a higher capacity to reduce bacterial adhesion than rhamnolipid. When cultivation was performed in TSYEA, most of the bacterial species showed the highest values of adhesion to polystyrene. Surface preconditioning with surfactin reduces 63% to 66% the adhesion of L. monocytogenes, S. aureus e M. luteus (culture media TSYEA). The most significant anti-adhesive results were obtained when both, preconditioning and adhesion assay were carried out at 4ºC. Polystyrene surfaces characterization (contact angle measurements) and bacterial cells characterization (MATS test) provided information that allowed some explanation about the factors that influence microbial adhesion process on this surface and the anti-adhesive effect caused by surfactin. The results showed that surfactin has a great potencial to be used as anti-adhesive compound on polystyrene surfaces, reducing the attachment of several pathogenic bacteria.

A Doença Periodontal é causada pelo acúmulo de placa bacteriana sobre os dentes e estruturas adjacentes. As plantas medicinais são utilizadas como um meio de tratamento há muitos anos, sendo o resultado do acúmulo do conhecimento popular. No entanto, elas são utilizadas com pouco critério. Do ponto de vista da odontologia, as plantas medicinais ainda têm sido pouco estudadas. A comprovação clínica dos efeitos do sumo de Kalanchoe gastonis-bonnieri (KGB) a 10% sobre o desenvolvimento do biofilme bacteriano e cálculo dentário em cães pode oferecer alternativa valiosa para o tratamento e prevenção da doença periodontal, ou o prolongamento dos efeitos do tratamento cirúrgico clássico. Desta forma, seriam reduzidos os riscos do tratamento cirúrgico, o custo terapêutico, o surgimento de cepas bacterianas resistentes, e a ocorrência de efeitos colaterais, além de serem fornecidos subsídios para uso em outras espécies, inclusive a humana, com aproveitamento de recursos naturais amplamente disponíveis e ainda pouco conhecidos e utilizados, propiciando a transferência tecnológica para o setor produtivo. O presente estudo objetivou utilizar o método de análise computadorizada, para medição de área de placa bacteriana e cálculo dentário nos dentes de cães, por meio da comparação entre os grupos tratado (sumo de KGB a 10%), controle negativo (solução fisiológica a 0,9%) e controle positivo (gluconato de clorexidina a 0,12%). Foram utilizados 34 cães da raça Beagle com similares características e mantidos sob o mesmo manejo e dieta alimentar. As avaliações da cavidade oral após o tratamento periodontal sob anestesia geral inalatória, dia zero, ocorreram para placa bacteriana, no dia sete, e para cálculo dentário, no dia. O sumo de Kalanchoe gastonis-bonnieri a 10% apresentou eficácia no controle da formação da placa bacteriana em relação ao grupo controle negativo, e do cálculo dentário em relação aos grupos controles negativo e positivo, obtendo-se diferença significante para estes três julgamentos. Então, este poderia ser utilizado como um coadjuvante na prevenção da doença periodontal. São necessários estudos complementares a longo prazo para comprovação da ausência efeitos colaterais, além da descoberta do mecanismo de ação do sumo de Kalanchoe gastonis-bonnieri a 10% sobre o biofilme bacteriano e o cálculo dentário. / The Periodontal Disease is caused by dental plaque accumulation on teeth and adjacent structures. Medicinal plants are used as a means treatment for many years, being the result of the accumulation of popular knowledge. However, they are used with little criterion. From the standpoint of Dentistry, the medicinal plants still has been little studied. The clinical proof of the effects of the extract of the plant Kalanchoe gastonis-bonnieri (KGB) on biofilm and calculus in dogs can offer valuable alternative for the treatment and prevention of periodontal disease, or even a continuation of treatment effects surgical classic. Thus, the risks would be reduced from surgical treatment, the cost of therapy, the emergence of resistant bacterial strains, and the occurrence of side effects, and subsidies are provided for use in other species, including humans, with use of natural resources widely available and still little known and used, providing, including technology transfer to the productive sector. This study aims to evaluate the computerized analysis method for measurement of dental plaque and calculus areas on the teeth of dogs, by comparison between the traded (10% of KGB juice), negative control group (0,9% of saline solution) and positive control group (chlorhexidine 0.12% sprayed in the oral cavity daily). 34 Beagle dogs with similar characteristics and kept under the same management and diet were used. Evaluations of oral cavity after the periodontal treatment (performed under general inhalation anesthesia) and after seven days for dental plaque, and 28 for calculus. The 10% of Kalanchoe gastonis-bonnieri juice showed efficacy in controlling the formation of plaque compared to the negative control group, and dental calculus in relation to negative and positive control groups, obtaining significant difference for these three trials. Thus, this could be used as an adjunct in the prevention of periodontal disease. Nevertheless, further studies are needed to prove the long-term absence of side effects, in addition, the discovery of the mechanism of action of to 10% Kalanchoe gastonis-bonnieri juice on the bacterial biofilm and dental calculus formation.

A quitosana é um polisacarídeo obtido pela desacetilação das moléculas de quitina, principal constituinte de alguns fungos e do exoesqueleto de crustáceos e insetos. Os grupos amino presentes na quitosana conferem-lhe importantes propriedades biológicas, como a biodegradação, biocompatibilidade, atividade/efeitos imunológicos e atividade antibacteriana. A desacetilação da quitina é um processo cuja conversão é agressiva, já que exige o ataque da quitina em solução de álcalis em alta concentração e à quente, com duração de 6 a 8 horas. Neste trabalho, carapaças de siri da espécie Charybdis hellerii foi fragmentada e pré-tratada para a obtenção da quitosana e cada etapa, desde o pré-tratamento do material in natura à sua conversão em quitosana, foi investigada detalhadamente. Observou-se que dose e taxa de dose não influenciaram no pré-tratamento ou na etapa de desacetilação da quitina; na dose de 20 kGy (gama ou feixe de elétrons), o processo de conversão teve duração de 60 minutos. A quitosana obtida teve baixa massa molar e grau de desacetilação comparável á quitosana padrão (SA), dependendo das condições de irradiação. Além disso, apresentou inibição da atividade bacteriana tanto livre como imobilizada em substratos poliméricos de polipropileno e de polietileno processados também por radiação ionizante. / Chitosan is a polysaccharide obtained from chitins molecule deacetylation, which is the main composition of certain fungi species and crustaceans and insects exoskeleton. The amino groups present in chitosan give it important biological properties such as biodegradability and biocompatibility, activity/immunological effects and antibacterial healing. The deacetylation of chitin is an aggressive process, which reaction processes in 6 to 8 hours under hot concentrated alkali solution. In this work, Charybdis hellerii crab shells was fragmented and pre-treated for chitosan obtention and each conversion step, from in natura material pre-treatment to final chitosan, were investigated in deteails. It was observed dose and dose rate have not influence neither pre-treatment nor chitin deacetylation steps; at 20 kGy (from gamma or electron beam sources), the conversion process was performed in 60 minutes. The obtained chitosan presented low weight and deacetylation degree compared to standard chitosan, considering specific irradiation conditions. Also, obtained chitosan presented bacterial inactivity as a free compoud as immobilized onto polymeric substrates such polypropylene and polyethylene, also processed by ionizing radiation.

Plantas de batata (Solanum tuberosum L.) com sintomas de murcha bacteriana (MB) foram coletadas em 25 lavouras de 10 municípios de quatro regiões produtoras do Rio Grande do Sul (RS), de setembro a dezembro de 1999. Quatrocentos e noventa isolados de Ralstonia solanacearum foram obtidos e 96 e 4% identificados como biovares 1 e 2, respectivamente. A análise dos resultados da PCR-ERIC e BOX de 13 estirpes da biovar 1 e 72 da biovar 2 demonstrou baixa variabilidade genética. Através de RAPD foi possível associar local de origem do isolado com perfil eletroforético. Em outro experimento avaliou-se o comportamento de 14 cultivares e clones de batata cultivados nos períodos das safras de primavera de 1999 e 2000, em uma área naturalmente infestada com a biovar 2, em Caxias do Sul, RS. O número de plantas com sintomas foi registrado semanalmente. Os tubérculos produzidos por plantas assintomáticas foram coletados e submetidos a testes para detectar a presença de R. solanacearum. A área sob a curva de progresso da doença foi utilizada para comparar a resistência dos genótipos de batata à MB e o modelo logístico foi o que melhor se ajustou. A cultivar cruza 148 e o clone MB 03 mostraram-se como os mais resistentes, apresentando, no entanto, tubérculos com infecções latentes. As implicações da incidência de R. solanacearum em lavouras de batata e de sua variabilidade genética, assim como da resistência dos genótipos acompanhada de infecções latentes, no manejo integrado da MB no RS foram discutidas.

Pectobactérias (Pectobacterium spp. e Dickeya spp.) são os agentes causais da canela-preta e podridão-mole, e Ralstonia solanacearum da murcha bacteriana. A principal fonte de inóculo dessas doenças é o tubérculo-semente assintomático. As importações brasileiras de tubérculo-semente podem representar um risco à cultura. Tubérculos-semente livres de patógenos é considerada a melhor estratégia para manejar essas doenças. Entrentanto, métodos sensíveis para detecção desses patógenos são necessários. Sendo assim, o principal objetivo dessa pesquisa foi desenvolver e validar um método para detecção de pectobactérias e R. solanacearum presentes em baixa densidade populacional em tubérculos de batata, através de qPCR. A qPCR foi realizada com sondas de hidrólise (sondas TaqMan® MGB) e fluoróforo intercalante de DNA fita-dupla (SYBR Green I). Esse método poderá ser utilizado como uma ferramenta em estudos epidemiológicos, programas de certificação e inspeção quarentenária. O uso de cartões FTA para a coleta e extração do DNA dos tubérculos foi testado, utilizando três métodos de transferência de amostras: pressão direta; cone triturado em PBS; e fragmentos retirados com seringa e triturados em PBS. O primeiro método foi o mais sensível, proporcionando um limite de detecção por PCR de 1x102 UFC.mL-1. Oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados para as bactérias-alvo, exceto para R. solanacearum, na qual se usou os oligonucleotídeos iniciadores OLI1/Y2 em PCR e qPCR. Dickeya spp. (54,9%) e R. solanacearum (52,9%) apresentaram a maior incidência nas 206 amostras analisadas por qPCR, seguidas por P. brasiliensis (16,5%), P. atrosepticum (9,2%), P. carotovorum (6,3%) e P. betavasculorum (1,9%). Esta última trata-se do primeiro registro em batata no Brasil. Associações entre as espécies bacterianas nos tubérculos também foram verificadas, onde Dickeya spp. e R. solanacearum foram encontradas em associação (24,8%) nos tubérculos, mas estavam presentes isoladamente em 20,8 e 13,4%, respectivamente. Dentro desse contexto, a presença de uma população bacteriana heterogênea nos tecidos vasculares dos tubérculos foi demonstrada. / Pectobacteria (Pectobacterium spp. and Dickeya spp.) are the causal agent of blackleg and soft rot, and R. solanacearum of bacterial wilt, in potato crop. The main source of inocula is symptomless seed potato tuber. The Brazilian imports of seed potato may pose a risk to the crop. Pathogen-free seed is the best strategy to manage these diseases. Therefore high-sensitive methods for detection of these bacteria are mandatory. Thus, the main objective of this study was to develop and validate a method for detection of pectobacteria and R. solanacearum present in low population density in potato tubers, by qPCR (absolute quantification) in assay with hydrolysis probes (TaqMan® MGB probes) and double-stranded DNA binding dye (SYBR Green I). This method can be used as a tool in epidemiological studies, certification programs, and quarantine inspection. The use of FTA cards to collection, and DNA extraction was tested using three methods: direct pressure, cone crushed in PBS, and small pieces removed with syringe and crushed in PBS. The first method was the most sensitive, providing a limit of detection by PCR of 1x102 CFU.mL-1. Primers were designed for target bacterial species, except for R. solanacearum, in which was used OLI1/Y2 primers for PCR and qPCR. Dickeya spp. (54.9%) and R. solanacearum (52.9%) had the highest incidence in the 206 samples analyzed by qPCR, followed by P. brasiliensis (16.5%), P. atrosepticum (9.2%), P. carotovorum (6.3%) and P. betavasculorum (1.9%). The occurrence of P. betavasculorum in potato is the first record of potato in Brazil. Associations between bacterial species in the tubers were also found, where Dickeya spp. and R. solanacearum were found in association (24.8%) in the tubers, but were present alone in 20.8 and 13.4%, respectively. Within this context, the presence of a heterogeneous bacterial population in the vascular tissues of the tubers was demonstrated.

A contaminação das águas naturais representa um dos principais riscos à saúde pública, sendo conhecida a estreita relação entre a qualidade da água e inúmeras enfermidades. Enterococcus são habitantes da microbiota intestinal humana, podendo ser encontrados em praticamente todos os animais e ambientes. A importância crescente dos enterococos como patógenos oportunistas e a emergência e disseminação de cepas multiresistentes contribuiu para um maior interesse na epidemiologia desses micro-organismos. Os objetivos desse trabalho são caracterizar fenotipicamente e determinar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de Enterococcus isolados das águas do arroio Dilúvio, em Porto Alegre. Foram coletadas amostras de água em cinco diferentes pontos do arroio, em quatro períodos do ano. Dos 348 isolados, 62,07% foram identificados como E. faecium, 13,50% como E. faecalis, 12,07% como E. casseliflavus e 12,36% como Enterococcus sp. Noventa e quatro por cento dos isolados demontraram resistência a pelo menos uma classe de antimicrobianos e 44,25% a duas classes. E. faecium foi a espécie com maior frequência de cepas resistentes (74,07%) a pelo menos duas classes de antimicrobianos, seguida de E. casseliflavus (66,67%) e E. faecalis (36,17%). No ponto 1, que corresponde a nascente do arroio, foi observado a menor incidência de cepas de Enterococcus e de cepas resistentes, quando comparados com os demais pontos de coleta. Os resultados demonstram a presença de cepas de Enterococcus resistentes isoladas em todos os pontos do arroio Dilúvio. Estes resultados mostram a necessidade de medidas sanitárias urgentes que busquem a melhoria da qualidade de suas águas a fim de evitar a contaminação e a disseminação de micro-organismos resistentes à antimicrobianos. / The contamination of natural resources of water is a major risk to public health, due to the tight relation between water quality and countless diseases. Enterococcus is ainhabit of human intestinal microbiota, and can be isolated from animals and environments. The increasing importance of enterococci as opportunistic pathogens, as well as the emergence and dissemination of multiresistant strains, contribute for a greater interest in epidemiology study of these microorganisms. The aim of this study was to characterize phenotypic and to determine the antimicrobial susceptibility of Enterococcus isolated from Dilúvio stream, in Porto Alegre. Water samples were collected in five different locations of the stream, throughout four periods of the year. Among the 348 isolates obtained 62.07% were identified as E. faecium, 13.50% as E. faecalis, 12.07% as E. casseliflavus, and 12.36% as Enterococcus sp. Ninty-four percent of the isolates were resistant to at least one antimicrobial class, and 44.25% to two classes. E. faecium was the most frequently species resistant to at least two antimicrobial classes (74,07%), followed by E. casseliflavus (66.67%) and E. faecalis (36.17%). In all locations was isolated Enterococcus resistant the results indicate the urgent sanity initiative, in order to improve the water quality of Dilúvio’s to avoid the contamination and of antimicrobial-resistant microorganisms.