Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-14T18:56:25Z No. of bitstreams: 1 DissPCM.pdf: 1199490 bytes, checksum: ce413a58ac43f0ce63471355055da9b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:22:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissPCM.pdf: 1199490 bytes, checksum: ce413a58ac43f0ce63471355055da9b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:22:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissPCM.pdf: 1199490 bytes, checksum: ce413a58ac43f0ce63471355055da9b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T19:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissPCM.pdf: 1199490 bytes, checksum: ce413a58ac43f0ce63471355055da9b5 (MD5) Previous issue date: 2015-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The Jatropha (Jatropha curcas L.), which belongs to the the family of Euphorbia is a plant genetically close to the Castor Plant (Ricinus communis l.), coming from Central America and being currently distributed in all tropical regions of the globe. In Brazil, this crop has received special attention as an alternative for the supply of vegetable oil as a raw material for biodiesel manufacturing, due to the biotechnological potential of its seeds. Several studies aimed at climatic adaptations and productivity have been developed on genetic variability of J. curcas; but few studies have been developed focusing on the analysis of the microbial community associated with this species. The interior of the plant is inhabited by endophyte microorganisms, which can be isolated from disinfected surface and do not put on risk the plant tissues of the host plant. This group of microorganisms has the ability to stimulate the growth of plants by direct mechanisms, such as/biological fixation of nitrogen, solubilization of inorganic phosphate indole acetic acid production (AIA) and indirect mechanisms, such as the antagonism towards phytopathogens. Moreover, endophytic microorganisms are considered promising for bioprospecting of enzymes. The aim of this study was to perform the characterization of seventy-two endophytic bacteria associated with the J. curcas plants, with potential for promoting plant growth and enzyme production. Of this total of tested isolates 40% showed positive results for fixation of atmospheric nitrogen, 43% solubilized inorganic phosphate, 69% have produced AIA, 36% showed some antagonistic activity to phytopathogenic fungi Alternaria alternata, 12% for Ceratocystis paradoxa, 22% for Fusarium proliferatum and 23% for Fusarium verticillioides. Regarding enzymatic activity, 16% of the isolates evaluated showed amyloid activity, 29% endoglycolytic, 29% lipolytic, 20% esterase, 46% pectinolytic (18% poligalacturonase and 43% pectato lyase) 37% proteolytic. From a collection of seventy two bacterial isolates, twenty-five were identified by means of the partial 16S rDNA gene embracing seven different genres: Bacillus, Citrobacter, Curtobacterium, Enterococcus, Microbacterium, Promicromonosporaceae and Sanguibacter were isolated as endophytic bacteria of Jatropha. / O pinhão-manso (Jatropha curcas L.), pertencente à família das Euforbiáceas é uma planta geneticamente próxima a mamona (Ricinus communis, L.), originária da América Central e atualmente está distribuída em todas as regiões tropicais do globo. No Brasil esta cultura tem recebido especial atenção como uma alternativa para o fornecimento de óleo vegetal como matéria-prima para fabricação do biodiesel, devido ao potencial biotecnológico de suas sementes. Vários estudos foram desenvolvidos sobre variabilidade genética do J. curcas visando adaptações climáticas e produtividade; porém poucos estudos foram dedicados a análise da comunidade microbiana associada a essa espécie vegetal. O interior da planta é habitado por micro-organismos endófitos que podem ser isolados dos tecidos vegetais desinfectados superficialmente e que não causam danos aparentes a planta hospedeira. Este grupo de micro-organismos apresenta a capacidade de estimular o crescimento das plantas por mecanismos diretos, tais como fixação biológica de nitrogênio, solubilização de fosfato inorgânico e produção do ácido indol acético (AIA) e por mecanismos indiretos, como antagonismo a fitopatógenos. Além disso, os micro-organismos endofíticos são considerados promissores para a bioprospecção de enzimas. O presente trabalho teve como objetivo, a caracterização de setenta e duas bactérias endofíticas, associadoas à cultura do pinhão-manso, com potencial para promoção de crescimento vegetal e produção de enzimas. Desse total de isolados testados 40% apresentaram resultados positivos para fixação biológica de nitrogênio atmosférico, 43% solubilizaram fosfato inorgânico, 69% produziram AIA, para o teste de antagonismo 36% dos isolados apresentaram alguma atividade antagônica para os fungos fitopatogênicos Alternaria alternata, 12% Ceratocystis paradoxa, 22% Fusarium proliferatum e (24%) e F. Verticillioides. Com relação atividade enzimática 16% dos isolados avaliados apresentaram atividade amilolítica, 29% celulolítica, 29% lipolítica, 20% esterolítica, 46% pectinolítica (18% poligalacturonase e 43% pectato liase) e 37% proteolítica. De uma coleção de setenta e dois isolados bacterianos, vinte e cinco foram identificados por meio do sequenciamento parcial do gene 16S rDNA, abrangendo sete diferentes gêneros: Bacillus, Citrobacter, Curtobacterium, Enterococcus, Microbacterium, Promicromonosporaceae e Sanguibacter foram isolados como bactérias endofíticas de pinhão-manso.

A prospecção biológica (i.e. bioprospecção) é uma atividade, relativamente recente, que ocorre de forma desregulada na região austral, área de vigência do Sistema do Tratado da Antártida (STA). A normatização desta atividade no âmbito do STA é o principal tema em discussão na agenda do Regime Antártico. Este Regime Internacional, constituído pelo Tratado Antártico (de 1959), pela Convenção para Preservação das Focas Antárticas (de 1972), pela Convenção para Conservação dos Recursos Vivos Marinhos Antárticos (de 1980) e pelo Protocolo de Proteção Ambiental do Tratado da Antártida (de 1991), tem cumprido, ao longo de sua história, a missão de preservar a região austral e ordenar as atividades antárticas. Os Estados que o integram, enfrentam os novos desafios, criando instrumentos jurídicos para regulamentar atividades específicas. Todavia, eles encontram dificuldades de repetir este comportamento com relação à bioprospeccão. A razão disso é a complexidade desta atividade, associada à problemática da região austral, uma área sem soberanias reconhecidas. Existe imensa dificuldade de desenvolver uma legislação para contemplar diferentes interesses nacionais, disputas entre empresas e organizações ambientalistas, razões de ordem comercial e desacordos entre os interesses de pesquisa científica e do mercado, respeitando as normas e os princípios formalizados no Tratado Antártico. A bioprospecção na Antártida é um problema cuja solução, provavelmente, demandará longas e difíceis negociações. / Biological prospecting (i.e. bioprospecting) is a relatively recent activity that occurs unregulated in the austral region, area covered by the Antarctic Treaty System (ATS). The normatization of this activity is the main subject being discussed in the agenda of the Antarctic Regime. This International Regime, comprised by the Antarctic Treaty (1959), the Convention on the Conservation of Antarctic Seals (1972), the Convention on the Conservation of Antarctic Marine Living Resources (1980) and the Madrid Protocol to the Antarctic Treaty (1991), fulfills the mission to preserve the austral region and regulate international relations with respect to Antarctica. The nation-states, participants in this regime, have a tendency to face new challenges, by creating aditional agreements to regulate specific activities. Bioprospecting, however, has proven dificult to regulate. This is due to the complexity of the activity and the ambiguous territorial status of Antarctica. It is dificult to develop legislation that satifies interests of nation-states, private companies, environmental NGO’s, scientists and universities, while respecting norms and principles formalized in the Antarctic Treaty. Bioprospecting in Antarctica, therefore, is a problem that demands carefull and thoughtfull considerations, yet to be resolved.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-13T15:12:46Z No. of bitstreams: 1 Joao Tiago Correia Oliveira.pdf: 2100029 bytes, checksum: 18f980542ee8d080c1ef8dc66665d64f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-13T15:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joao Tiago Correia Oliveira.pdf: 2100029 bytes, checksum: 18f980542ee8d080c1ef8dc66665d64f (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The genus Brachiaria grasses are widely used throughout Brazil, enduring a series of restrictive limits and conditions of use, which corrobora para that is widely cultivated throughout the country. The changes in agricultural systems, mostly aiming at the improvement of environmental quality, in order to know the microbial diversity associated with these systems has been useful for ecosystem sustainability and improvement of production, where the combination of grasses with diazotrophs can provide plant growth and represents a promising alternative for the better development and plant performance. Given the above, the objective of this study was to isolate diazotrophic bacteria potentially associated grasses B. decumbens and B. humidicola cultivated in Agreste region of Pernambuco State, niches in the rhizosphere and endophytic root, evaluating functional and genetic variability. After isolation on semi selective fixation of atmospheric nitrogen (NFB semisolid medium) and in a non-functional selection was the selection of bacterial isolates for characteristics involved with the promotion of plant growth and genetic variability, using the technique of BOX-PCR and PCR-DGGE of nifH. The phenotypic characteristics were analyzed: biological nitrogen fixation (BNF), production of indole acetic acid (IAA) by different biochemical pathways, inorganic phosphate solubilization, production of extracellular enzymes and the quorum sensing molecule. The results obtained evidenced the high and variable functionality of the bacteria associated with these grasses in both media (especially the ones from the middle NFB, with the highest frequency of positive isolates for the evaluated tests), plant species and niches evaluated. In bacteria associated with the grass was observed fixation of atmospheric nitrogen in different salt concentrations in the culture medium, producing different biochemical pathways by EIA with and without the presence of precursor L-tryptophan, solubilization of inorganic phosphate in the presence of different sources of carbon production of extracellular enzymes (cellulase, pectinase and amylase) and quorum sensing molecule. Regardless of the technique used to study the genetic variability was observed high genetic diversity for isolates from both the root and the rhizoplane of grasses B. decumbens and B. humidicola. Thus we conclude that this association bacteria-plant-soil can provide several benefits to the plant, not just the biological nitrogen fixation. Therefore, investments in research using the association grasses/bacteria are essential for the high value they represent in animal feed. / As gramíneas do gênero Brachiaria são largamente utilizadas por todo o Brasil, tolerando uma série de limites e condições restritivas de utilização, o que corrobora para que seja largamente cultivada em todo território nacional. As mudanças ocorridas nos sistemas agrícolas, em sua maioria, têm por finalidade a melhoria da qualidade ambiental, neste sentido conhecer a diversidade microbiana associada a estes sistemas tem sido útil para sustentabilidade dos ecossistemas e o aperfeiçoamento da produção, onde a associação de gramíneas com bactérias diazotróficas pode proporcionar crescimento vegetal e representa uma alternativa promissora para o melhor desenvolvimento e desempenho vegetal. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi isolar bactérias potencialmente diazotróficas associadas as gramíneas B. decumbens e B. humidicola cultivadas na Região Agreste do Estado de Pernambuco, nos nichos rizosfera e endofítico de raiz, avaliando-se características funcionais e variabilidade genética. Após o isolamento em meio semi seletivo para fixação de nitrogênio atmosférico (meio NFb semi-sólido) e em meio não seletivo ocorreu a seleção funcional dos isolados bacterianos quanto a características envolvidas com a promoção de crescimento vegetal, e a variabilidade genética, através da técnica de BOX-PCR e PCR-DGGE do gene nifH. As características fenotípicas analisadas foram: fixação biológica de nitrogênio (FBN), produção de ácido indol acético (AIA) por diferentes rotas bioquímicas, solubilização de fosfato inorgânico, produção de enzimas extracelulares e da molécula quorum sensing. Nos resultados obtidos ficou evidente a elevada e variável funcionalidade das bactérias associadas a estas gramíneas em ambos os meios (com destaque para os isolados provenientes do meio NFb, que apresentou maior frequência de isolados positivos para os testes avaliados), espécies vegetais e nichos avaliados. Nas bactérias associadas as gramíneas se observou fixação de nitrogênio atmosférico em diferentes concentrações de sal no meio de cultura, produção de AIA por diferentes rotas bioquímicas com e sem a presença do precursor L-triptofano, solubilização de fosfato inorgânico com a presença de diferentes fontes de carbono, produção de enzimas extracelulares (celulase, pectinase e amilase) e molécula quorum sensing. Independente da técnica utilizada para o estudo da variabilidade genética foi observado elevada diversidade genética para os isolados tanto da raiz como do rizoplano das gramíneas B. decumbens e B. humidicola. Desta forma é possível concluir que tal associação bactéria-planta-solo pode proporcionar vários benefícios à planta, não apenas a fixação biológica do nitrogênio. Portanto, investimentos em pesquisas utilizando a associação gramíneas forrageiras/bactérias são de fundamental importância pelo elevado valor que estas representam na alimentação animal.

Actinobactérias ocorrem em diversos ambientes e possuem grande potencial na produção de enzimas, antibióticos e fármacos. O presente trabalho teve como objetivo o isolamento, a identificação e a bioprospecção de actinobactérias da rizosfera de milho. Foram isoladas 60 linhagens de actinobactérias de plantas sadias de milho, cultivadas em diferentes regiões do Estado de São Paulo. Os isolados com maior atividade, CCMA30 e CCMA33, foram identificados por meio do seqüenciamento parcial do gene 16S rRNA como pertencentes à espécie Streptomyces griseorubiginosus, nestes isolados foi também detectada a presença de genes PKS.O fracionamento do extrato bruto da linhagem CCMA 33 revelou que a fração 7 (m/z 719-768) com atividade antifúngica, foi submetida a fragmentação (MS/MS), onde pelas buscas no dicionário de produtos naturais confirmou-se a presença de Julichromes Q 6-6, substância sintetizada por policetídeos e de mais duas Julichromes (Q 1-3 e Q 3-3). Estes resultados evidenciam a produção de biocompostos de interesse biotecnológico por actinobactérias da rizosfera. / Actinobacteria occur in different environments and have a great potential in producing enzymes, antibiotics and medical molecules. The present work aimed the isolation, identification and the bioprospection by rhizosphere actinobactérias. Sixty strains were isolated from healthy plants of maize, cultivated in different regions Socorro, Serra Negra and Ribeirão Preto. The two isolates with higher activity CCMA30 and CCMA33 were identified by the partial sequencing of the 16S rDNA gene as belonging to the species Streptomyces griseorubiginosus. In these isolates it was detected the presence of PKS genes. The fractioning of the crude extract of the strain CCMA 33 has revealed that fraction 7 (m/z 719-768) displayed antifungal activity and it was submitted to fragmentation (MS/MS), where by searches in the dictionary of natural products detected the presence of Julichromes Q6-6 and the presence of two other Julichromes (Q1-3 and Q3-3). These results highlight the production of secondary metabolites of biotechnological interest by rhizosphere actinobacteria.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_claudio_fernando_oliveira.pdf: 4911756 bytes, checksum: 14504fcb4c0f3469413049df6651ec64 (MD5) Previous issue date: 2010-07-22 / Factors like the frequent worry with the environmental impact cause by the discard of petrochemical plastic waste in the environment due to its low degradability and the constant increase of petrol price took to a world search for innovations with the production of bioplastics. They are the polymers produced by microorganisms from the renewable raw material with properties similar plastic derived from petrol, such as polypropylene and polyethylene. The more promising bioplastics are the polyhydorxyalkanoates, which comprehend a great polyester family accumulated in the form of intracellular granules by microorganisms like bacteria. The most common type is the poli(3 hydroxybutyrate) P(3HB); this polymer brings great interest for being biocompatible, biodegradable and thermoplastic. The objective of this study was to realize a bioprospecting between Beijerinckia sp. strains from the collection of microorganism culture from CDTec UFPel for the selection of possible producer strains of P (3HB). Initially, 7 strains were cultivated in solid mean, YM and YDC, and colored cell with Sudan Black for Optic Microscopy visualization, when 3 strain were selected for further analysis through Transmission Electronic Transmission; the data revealed a strong evidence of granules P(3HB) production by strain C31 in the cellular multiplication phase. The biopolymer production was evaluated in 3 means, the best result was obtained with F4 mean, being a concentration of 0,93 gl of polymer and content of 34%. The polymer was identified, and measured, by Gas Chromatography as P(3HB). The polymer identity was confirmed for Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR). The spectra revealed characteristic bands of P(3HB), confirming the production of this polymer by C31 strain, which was considered with great power for the industrial production / Fatores como a crescente preocupação com o impacto ambiental causado pelo descarte dos resíduos plásticos petroquímicos no meio ambiente devido sua baixa degradabilidade e o constante aumento do preço do petróleo levaram a uma busca mundial por inovações como a produção dos bioplásticos. Os bioplásticos são polímeros produzidos por microrganismos a partir de matérias-primas renováveis com propriedades semelhantes aos plásticos derivados do petróleo, como polipropileno e polietileno. Os bioplásticos mais promissores são os polihidroxialcanoatos, que compreendem uma grande família de poliésteres acumulados na forma de grânulos intracelulares por microrganismos como as bactérias. O tipo mais comum é o poli(3-hidroxibutirato) (P(3HB); este polímero desperta grande interesse por ser biocompatível, biodegradável e termoplástico. O objetivo deste trabalho foi realizar uma bioprospecção entre cepas de Beijerinckia sp. da coleção de cultura de microrganismos do CDTec UFPel para seleção de cepas possivelmente produtoras de P(3HB). Inicialmente, foram cultivadas 7 cepas em meio sólido, YM e YDC, e as células coradas com Negro de Sudão B para visualização por Microscopia Óptica, sendo selecionadas 3 cepas para posterior análise por Microscopia Eletrônica de Transmissão; os dados revelaram um forte indício da produção de grânulos de P(3HB) pela cepa C31 já na fase de multiplicação celular. Foi avaliada a produção de biopolímero em 3 meios; o melhor resultado foi obtido com o meio F4, sendo uma concentração de 0,93gL-1 de polímero e conteúdo de 34 %. O polímero foi identificado, e dosado, por Cromatografia Gasosa como P(3HB). A identidade do polímero foi confirmada por espectroscopia na região do infravermelho com transformada de Fourier (FT-IR). Os espectros revelaram bandas características de P(3HB), confirmando a produção deste polímero pela cepa C31, que foi considerada com potencialidade para produção industrial.

Por meio do processo conhecido como bioprospecção, propõe-se a aplicação dos lucros obtidos com a comercialização de produtos, como fármacos, em ações para conservação biológica. O objetivo deste trabalho é verificar a importância deste instrumento para a conservação a partir de estudo de caso focado na experiência do Instituto Nacional de Biodiversidade (INBio), na Costa Rica. Os procedimentos metodológicos estão baseados nas estratégias de pesquisa de: a) estudo de caso; b) documental e c) pesquisa bibliográfica. O INBio, uma associação sem fins lucrativos, se empenhou na elaboração do inventário nacional da biodiversidade e firmou diversos contratos de bioprospecção, entre eles o comentado acordo com a indústria farmacêutica Merck. Alguns pontos positivos devem ser destacados a partir dessa experiência: geração de conhecimento sobre os recursos biológicos locais em função do inventário; criação de sistema de controle ao acesso e identificação dos materiais coletados; o aparato jurídico desenvolvido; aprimoramento da capacidade de negociação; disseminação de informação em publicações científicas; atividades voltadas à Educação Ambiental e apoio a pequenas e médias empresas nacionais no desenvolvimento de produtos baseados em recursos biológicos do país. Por outro lado, os dados analisados mostram que tem sido baixo o retorno financeiro do Instituto; os pagamentos não têm sido suficientes para cobrir os gastos. Esta questão está ligada ao fato de que, ainda que tenha começado o recebimento pela comercialização de alguns produtos desenvolvidos internamente, ainda não há produtos desenvolvidos resultantes de contratos com grandes companhias e, portanto, ainda não foram correspondidas as expectativas com relação ao recebimento de royalties. Há deficiência com relação ao controle administrativo dessas atividades por parte do Estado, o que reflete na falta de transparência das fontes disponíveis de informações. A análise dos recursos financeiros obtidos versus repasse de verbas para fins de conservação fica comprometida em razão de informações incompletas ou pela falta de padronização na apresentação dos dados no decorrer dos anos. O desmatamento tem apresentado queda contínua, mas não é possível relacionar este fato com os contratos de bioprospecção, devido ao sistema variado de fontes de contribuições e pagamentos por serviços destinados à conservação biológica naquele país. Ademais, os conhecimentos tradicionais das populações locais estão sendo ignoradas em todo esse processo conduzido pelo INBio. Portanto, até o momento, o que acontece na Costa Rica está mais próximo de representar uma evolução no sentido de empreender medidas em direção ao uso e conservação dos recursos biológicos, porém ainda não representa a solução ou ajuda significativa à conservação biológica naquele país. / Using the process known as bioprospecting, it is proposed the use of the profits obtained with the commercialization of products, such as pharmaceuticals, in biological conservation activities. The objective of this work is to verify the importance of this instrument for conservation, by means of a case study focused in the experience of the National Biodiversity Institute (Instituto Nacional de Biodiversidade) (INBio), in Costa Rica. The methodology is based in the strategies of researching: a) case study; b) documents and c) bibliography research. The National Biodiversity Institute (INBio), a non-profit association which has endeavored to elaborate a national biodiversity inventory and signed various bioprospecting contracts, among them the renowned agreement with Merck pharmaceutical company. Some positive points should be emphasized from this experience: generation of knowledge about local biological resources through inventory; creation of a control system for accessing and identifying the collected materials; the development of a legal apparatus; the improvement of negotiation skills; the dissemination of information through scientific publications, activities oriented to Environmental Education and supporting national small and medium firms in the development of products based on the country\'s biological resources. On the other hand, the data analyzed show low financial return, in spite of the fact that the income for the commercialization of some internally-developed products has begun. Payments have not been enough to cover the Institute\'s expenditures and there are still no developed products resulting from contracts with big companies and, therefore, the expectations relative to the receiving of royalties were still not fulfilled. There is a deficiency relative to the administrative control of these activities by the State, which reflects the lack of transparency of the available sources of information. The analysis of the obtained resources versus the transfer of funds for conservation is jeopardized due to incomplete information or lack of standardization in the presentation of data through the years. Deforestation has declined continuously, but it is impossible to relate this fact to the bioprospecting contracts, due to the diverse system of contribution and payment sources for services destined to the conservation of that country\'s natural resources. Besides, the traditional knowledge of the local population has been ignored in the entire process conducted by INBio. Therefore, for the moment, what happens in Costa Rica is closer to represent an evolution in the sense of taking steps in the direction of using and conserving biological resources, but it still does not represent the solution or significant aid to the biological conservation in Costa Rica.

Os micro-organismos que habitam o interior das plantas (endofíticos ou endófitos) tornaram-se foco de interesse por estarem envolvidos na produção de compostos químicos como enzimas, alcalóides, antibióticos, anticancerígenas e diferentes metabólitos. Os ecossistemas de regiões tropicais tem sido alvo de busca de compostos naturais por causa da riqueza de espécies e nichos ecológicos presentes nestas comunidades. O objetivo deste trabalho o isolamento, identificação e a bioprospecção de fungos endofíticos obtidos de Combretum leprosum e a detecção nos extratos de planta e micro-organismos da presença do composto combretastatin (CA4). Folhas, galhos, frutos e raízes de C. leprosum foram coletados de cinco estados dentro da zona de semiárido brasileiro: Bahia, Piauí, Ceará, Paraíba, Rio Grande do Norte. Partes das amostras foram triturados e submetidos à maceração primeiramente em diclorometano, seguidos de tetrahidrofurano e acetona de acordo com Pettit et al.(1987) para possível extração da CA4. Além disso, para avaliação in vitro da atividade citotóxica e antimicrobiana foram realizadas extrações em acetato de etila, clorofórmio e metanol. Foram detectados a possível presença da CA4 em todos os órgãos das plantas extraídos com tetrahidrofurano e as maiores concentrações foram observadas nas folhas. A atividade antitumoral dos extratos vegetais apresentaram as maiores inibições contra carcinoma (ovário IC50 10µg/mL-1, rim IC50 8,7µg/mL-1 e mama IC50 14,1µg/mL-1) e glioma.IC50 13,5µg/mL-1. A outra parte das amostras (folhas, caules e raízes) foram desinfetadas, fragmentadas e colocadas em meios de cultivo (Martin, BDA, Agar água) por 60 dias, 28°C. Foram isolados 405 fungos endofíticos e 159 apresentaram atividade contra fitopatogênicos, 72% para Rhizoctonia solani e 28% para Pythium aphanidermatum. As vinte e três linhagens que apresentaram as melhores atividades antifitopatogênicas foram submetidas a crescimento em Czapec em cultura estacionaria, por 30 dias, a 28°C, os respectivos metabólitos foram obtidos em múltiplo (3.0 e 11.0) e avaliados a atividade antimicrobiana contra bactérias patogênicas e fungos. Quatro linhagens foram selecionadas, identificadas pelo sequenciamento da região 18S, CFE177 como Fusarium oxysporum, CFE03 como Hypocrea koningii, linhagem CFE108 como Aspesgillus oryzae e CFE391 como Fusarium solani e avaliadas in vitro pelos testes biológicos: atividade antitumoral, antioxidante e antimicobactéria. Os compostos produzidos por A. oryzae CFE108 apresentaram potencial para bioprospecção, e de acordo com as atividade citotóxicas as maiores ações foram contra as linhagens linfoma histiocística (J744), mieloma murino (B16F10) e baixa citotóxidade para carcinoma de bexiga (ECV304) e leucemia eritroblástica humana (k562) na concentração de 1mg/mL-1. Foram isolados dois compostos: SS-XL-32-01 identificado como bis-(2-etilhexil) ftalato (DEHP) e SS-XL-20-1 identificado como fenol, 2.2 metilenobis[6-(1,1-dimetiletil)-4- etil], ambos com atividade anticâncer para células HeLa com percentual de ate 98% e 71%, de morte, respectivamente. Alem disso, a modificação através da reação de metilação do composto SS-XL-32-1 resultou na quebra do anel aromático, formação de 4 subprodutos e perda da atividade, sendo um indicativo do sitio ativo da molécula responsável pela atividade observada. Portanto, fungos endofíticos de 18 plantas do semiárido brasileiro podem ser considerados fonte de bioprospecção para novas moléculas bioativas com atividade antitumoral. / The micro-organisms that reside in the aerial tissues and roots of plants (endophytic or endophyte) became the focus of interest for being involved in the chemical production such as enzymes, alkaloids, antibiotics, anticancer and different metabolites. The ecosystems of tropical region have been targeted search of natural compounds because of the richness of species and ecological niches present in these communities. The aim of this work was the isolation, identification and bioprospection for endophytic fungi from Combretum leprosum and detection in extracts of the plant and micro-organisms for the presence of the combretastatin (CA4). Leaves, stems, fruits and roots of C. leprosum were collected from five states within the semi-arid zone of Brazil: Bahia, Piaui, Ceara, Paraiba, Rio Grande do Norte. Part of the samples were crushed and subjected to maceration in dichloromethane, followed by tetrahydrofuran and acetone according to Pettit et al. (1987) for extracting the possible CA4. Moreover, for in vitro evaluation of the cytotoxic and antimicrobial activity extractions were carried out in ethyl acetate, chloroform and methanol. Were detected the possible presence of CA4 all plant organs extracted with tetrahydrofuran and the highest concentrations were observed on the leaves. The antitumor activity of plant extracts showed the highest inhibition against carcinoma (ovary IC50 10µg/mL-1, kidney IC50 8.7 µg/mL-1 and breast IC50 14.1 µg/mL-1) glioma IC50 and 13.5 mg-/mL-1. The other part of the samples (leaves, stems and roots) were disinfected, fragmented and placed in culture media (Martin, PDA, water agar) for 60 days, 28°C. 405 Endophytic fungi were isolated and 159 showed activity against phytopathogenic, 72% for Rhizoctonia solani and 28% for Pythium aphanidermatum. Twenty-three strains that showed good activities antiphytopathogenic, were grow on medium Czapec in static culture, for 30 days at 28°C, the respective metabolites were obtained in multiples pH (3.0 and 11.0) and evaluated the antimicrobial activity against pathogenic bacteria and fungi. Four strains were selected, identified by sequencing the 18S region, CFE177 as Fusarium oxysporum, CFE03 as Hypocrea koningii, strain CFE108 as Aspesgillus oryzae and CFE391 Fusarium solani, and evaluated by in vitro biological tests: antitumor, antioxidant and antimicobactérium activity. The compounds produced by A. oryzae CFE108 had biological potential and in accordance with the cytotoxic activity, showed the highest activities against lymphoma lines (J744), murine myeloma (B16F10) and low cytotoxicity for carcinoma of the bladder (ECV304) and leukemia erythroblastic human (K562) in 1mg/mL-1 concentration. Two compounds were isolated: SS-XL-32- 01 identified as bis-(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP), and SS-XL-20-1 as phenol 2.2methylenobis [6-(1,1-dimethylethyl) - 4-ethyl], both with anticancer activity for HeLa cells with a percentage of up to 98% and 71%, of death, respectively. In addition, modified by methylation reaction of the compound SS-XL-32-1 resulted in the breaking of the aromatic ring and result in formation of four product and loss of activity being indicative of the active site of the molecule can be the aromatic ring. Therefore, endophytic fungi in semiarid Brazil plant can be considered a source of bioprospection for new bioactive molecules with anticancer activity.

Os micro-organismos que habitam o interior das plantas (endofíticos ou endófitos) tornaram-se foco de interesse por estarem envolvidos na produção de compostos químicos como enzimas, alcalóides, antibióticos, anticancerígenas e diferentes metabólitos. Os ecossistemas de regiões tropicais tem sido alvo de busca de compostos naturais por causa da riqueza de espécies e nichos ecológicos presentes nestas comunidades. O objetivo deste trabalho o isolamento, identificação e a bioprospecção de fungos endofíticos obtidos de Combretum leprosum e a detecção nos extratos de planta e micro-organismos da presença do composto combretastatin (CA4). Folhas, galhos, frutos e raízes de C. leprosum foram coletados de cinco estados dentro da zona de semiárido brasileiro: Bahia, Piauí, Ceará, Paraíba, Rio Grande do Norte. Partes das amostras foram triturados e submetidos à maceração primeiramente em diclorometano, seguidos de tetrahidrofurano e acetona de acordo com Pettit et al.(1987) para possível extração da CA4. Além disso, para avaliação in vitro da atividade citotóxica e antimicrobiana foram realizadas extrações em acetato de etila, clorofórmio e metanol. Foram detectados a possível presença da CA4 em todos os órgãos das plantas extraídos com tetrahidrofurano e as maiores concentrações foram observadas nas folhas. A atividade antitumoral dos extratos vegetais apresentaram as maiores inibições contra carcinoma (ovário IC50 10µg/mL-1, rim IC50 8,7µg/mL-1 e mama IC50 14,1µg/mL-1) e glioma.IC50 13,5µg/mL-1. A outra parte das amostras (folhas, caules e raízes) foram desinfetadas, fragmentadas e colocadas em meios de cultivo (Martin, BDA, Agar água) por 60 dias, 28°C. Foram isolados 405 fungos endofíticos e 159 apresentaram atividade contra fitopatogênicos, 72% para Rhizoctonia solani e 28% para Pythium aphanidermatum. As vinte e três linhagens que apresentaram as melhores atividades antifitopatogênicas foram submetidas a crescimento em Czapec em cultura estacionaria, por 30 dias, a 28°C, os respectivos metabólitos foram obtidos em múltiplo (3.0 e 11.0) e avaliados a atividade antimicrobiana contra bactérias patogênicas e fungos. Quatro linhagens foram selecionadas, identificadas pelo sequenciamento da região 18S, CFE177 como Fusarium oxysporum, CFE03 como Hypocrea koningii, linhagem CFE108 como Aspesgillus oryzae e CFE391 como Fusarium solani e avaliadas in vitro pelos testes biológicos: atividade antitumoral, antioxidante e antimicobactéria. Os compostos produzidos por A. oryzae CFE108 apresentaram potencial para bioprospecção, e de acordo com as atividade citotóxicas as maiores ações foram contra as linhagens linfoma histiocística (J744), mieloma murino (B16F10) e baixa citotóxidade para carcinoma de bexiga (ECV304) e leucemia eritroblástica humana (k562) na concentração de 1mg/mL-1. Foram isolados dois compostos: SS-XL-32-01 identificado como bis-(2-etilhexil) ftalato (DEHP) e SS-XL-20-1 identificado como fenol, 2.2 metilenobis[6-(1,1-dimetiletil)-4- etil], ambos com atividade anticâncer para células HeLa com percentual de ate 98% e 71%, de morte, respectivamente. Alem disso, a modificação através da reação de metilação do composto SS-XL-32-1 resultou na quebra do anel aromático, formação de 4 subprodutos e perda da atividade, sendo um indicativo do sitio ativo da molécula responsável pela atividade observada. Portanto, fungos endofíticos de 18 plantas do semiárido brasileiro podem ser considerados fonte de bioprospecção para novas moléculas bioativas com atividade antitumoral. / The micro-organisms that reside in the aerial tissues and roots of plants (endophytic or endophyte) became the focus of interest for being involved in the chemical production such as enzymes, alkaloids, antibiotics, anticancer and different metabolites. The ecosystems of tropical region have been targeted search of natural compounds because of the richness of species and ecological niches present in these communities. The aim of this work was the isolation, identification and bioprospection for endophytic fungi from Combretum leprosum and detection in extracts of the plant and micro-organisms for the presence of the combretastatin (CA4). Leaves, stems, fruits and roots of C. leprosum were collected from five states within the semi-arid zone of Brazil: Bahia, Piaui, Ceara, Paraiba, Rio Grande do Norte. Part of the samples were crushed and subjected to maceration in dichloromethane, followed by tetrahydrofuran and acetone according to Pettit et al. (1987) for extracting the possible CA4. Moreover, for in vitro evaluation of the cytotoxic and antimicrobial activity extractions were carried out in ethyl acetate, chloroform and methanol. Were detected the possible presence of CA4 all plant organs extracted with tetrahydrofuran and the highest concentrations were observed on the leaves. The antitumor activity of plant extracts showed the highest inhibition against carcinoma (ovary IC50 10µg/mL-1, kidney IC50 8.7 µg/mL-1 and breast IC50 14.1 µg/mL-1) glioma IC50 and 13.5 mg-/mL-1. The other part of the samples (leaves, stems and roots) were disinfected, fragmented and placed in culture media (Martin, PDA, water agar) for 60 days, 28°C. 405 Endophytic fungi were isolated and 159 showed activity against phytopathogenic, 72% for Rhizoctonia solani and 28% for Pythium aphanidermatum. Twenty-three strains that showed good activities antiphytopathogenic, were grow on medium Czapec in static culture, for 30 days at 28°C, the respective metabolites were obtained in multiples pH (3.0 and 11.0) and evaluated the antimicrobial activity against pathogenic bacteria and fungi. Four strains were selected, identified by sequencing the 18S region, CFE177 as Fusarium oxysporum, CFE03 as Hypocrea koningii, strain CFE108 as Aspesgillus oryzae and CFE391 Fusarium solani, and evaluated by in vitro biological tests: antitumor, antioxidant and antimicobactérium activity. The compounds produced by A. oryzae CFE108 had biological potential and in accordance with the cytotoxic activity, showed the highest activities against lymphoma lines (J744), murine myeloma (B16F10) and low cytotoxicity for carcinoma of the bladder (ECV304) and leukemia erythroblastic human (K562) in 1mg/mL-1 concentration. Two compounds were isolated: SS-XL-32- 01 identified as bis-(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP), and SS-XL-20-1 as phenol 2.2methylenobis [6-(1,1-dimethylethyl) - 4-ethyl], both with anticancer activity for HeLa cells with a percentage of up to 98% and 71%, of death, respectively. In addition, modified by methylation reaction of the compound SS-XL-32-1 resulted in the breaking of the aromatic ring and result in formation of four product and loss of activity being indicative of the active site of the molecule can be the aromatic ring. Therefore, endophytic fungi in semiarid Brazil plant can be considered a source of bioprospection for new bioactive molecules with anticancer activity.

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Cellulases correspond to the complex consisting of three enzymes endoglucanases, exoglucanases and beta-glucosidases, with diverse applications, being the microbial biotechnological processes responsible for a great part of the world economy, yet the costs of production are still very high. In this context, 25 strains of filamentous fungi (Ascomycetes) isolated from mangrove sediments of Rio Formoso, PE, Brazil, were investigated to investigate the production potential of the enzymes of the cellulolytic complex. The initial studies were carried out by selecting the fungi with the highest enzymatic activity, through the detection of cellulolytic activity in solid synthetic medium, with carboxymethylcellulose (CMC) as the substrate. The results indicated the presence of the cellulase enzyme through the formation of halo in 3 strains of the genus Trichoderma, 3 strains of the genus Aspergillus and 1 strain of the genus Penicillium. The most representative enzymatic indices were those of Penicillium sp. UCP 0279 with Index of 2,2, followed by Aspergillus flavus UCP 1413 with enzymatic index of 1,7. Submerged fermentations were carried out to evaluate the endoglucanase activity, exoglucanase and β-glycosidase, using agroindustrial residues, tangerine peel, pineapple peel, pineapple crown, wheat bran and corn bran as substrate. The results indicated a CMCase activity of 20.2 IU / mL for Penicillium sp. UCP 0279, with wheat bran as substrate in 72 h of fermentation and an activity of 18.3 IU / mL in 24 h with the pineapple crown. For the Aspergillus flavus UCP 1413, the yield was 14.9 IU / mL and 14.5 IU / mL with the residues of corn bran and pineapple peel respectively, and both results were obtained with 24 h of fermentation. The FPase activity for Penicillium sp. UCP 0279, using pineapple peel as substrate had 45.5 IU / mL and the tangerine peel 42.8 IU / mL, both in fermentation at 48 h. For A. flavus UCP 1413 the pineapple crown presented 25.0 IU / mL enzymatic activity in 24 h and the pineapple peel 14.4 U / mL at the same time. In the activity of the enzyme β-glycosidase, Penicillium sp. UCP 0279 showed a production of 18.2 IU / mL in 24 h, with the pineapple crown residue and the pineapple peel had 9.1 IU / mL in 48 h. The A. flavus UCP 1413 presented with 96 h of fermentation an activity of 16.9 U / mL and 14.5 U / mL, with wheat bran and corn bran, respectively. / As celulases (E.C. 3.2.1.4) são enzimas responsáveis pela degradação da celulose, são moléculas capazes de acelerar reações químicas e realizar a quebra das ligações químicas existentes entre as unidades de glicose. As celulases correspondem ao complexo constituído por três enzimas endoglucanases, exoglucanases e beta-glicosidases, com diversas aplicações, sendo os processos biotecnológicos microbianos responsáveis por uma grande parcela da economia mundial, contudo os custos de produção ainda são muito elevados. Neste contexto, foi realizada a bioprospecção de 25 linhagens de fungos filamentosos (Ascomycetes) isolados de sedimentos de mangue do município Rio Formoso, PE, Brasil, investigando o potencial de produção das enzimas do complexo celulolítico. Os estudos iniciais foram realizados selecionando os fungos com maior atividade enzimática, através da detecção da atividade celulolítica em meio sintético sólido, tendo como substrato a carboximetilcelulose (CMC). Os resultados indicaram a presença da enzima celulase através da formação do halo em 3 linhagens do gênero Trichoderma, 3 linhagens do gênero Aspergillus e 1 linhagem do gênero Penicillium. Os índices enzimáticos mais representativos foram os de Penicillium sp. UCP 0279 com Índice de 2,2, seguido de Aspergillus flavus UCP 1413 com índice enzimático de 1,7. Em seguida, foram realizadas fermentações submersas para avaliação da atividade endoglucanase, exoglucanase e β-glicosidase, utilizando resíduos agroindustriais, casca de tangerina, casca de abacaxi, coroa de abacaxi, farelo de trigo e farelo de milho como substrato. Os resultados indicaram uma atividade para CMCase de 20,2 UI/mL para Penicillium sp. UCP 0279, com farelo de trigo como substrato em 72 h de fermentação e com a coroa de abacaxi observou-se uma atividade de 18,3 UI/mL em 24 h. Para o Aspergillus flavus UCP 1413, a produção foi de 14,9 UI/mL e 14,5 UI/mL com os resíduos de farelo de milho e de casca de abacaxi respectivamente, e ambos os resultados foram obtidos com 24 h de fermentação. A atividade FPase para Penicillium sp. UCP 0279, usando casca de abacaxi como substrato apresentou 45,5 UI/mL e a casca de tangerina 42,8 UI/mL, ambos em fermentação a 48 h. Para A. flavus UCP 1413 a coroa de abacaxi apresentou 25,0 UI/mL de atividade enzimática em 24 h e a casca de abacaxi 14,4 U/mL no mesmo tempo. Na atividade da enzima β-glicosidase o Penicillium sp. UCP 0279 apresentou uma produção de 18,2 UI/mL em 24 h, com o resíduo da coroa de abacaxi e com a casca de abacaxi apresentou 9,1 UI/mL em 48 h. O A. flavus UCP 1413 apresentou com 96 h de fermentação uma atividade de 16,9 U/mL e 14,5 U/mL, com farelo de trigo e farelo de milho respectivamente.

Por meio do processo conhecido como bioprospecção, propõe-se a aplicação dos lucros obtidos com a comercialização de produtos, como fármacos, em ações para conservação biológica. O objetivo deste trabalho é verificar a importância deste instrumento para a conservação a partir de estudo de caso focado na experiência do Instituto Nacional de Biodiversidade (INBio), na Costa Rica. Os procedimentos metodológicos estão baseados nas estratégias de pesquisa de: a) estudo de caso; b) documental e c) pesquisa bibliográfica. O INBio, uma associação sem fins lucrativos, se empenhou na elaboração do inventário nacional da biodiversidade e firmou diversos contratos de bioprospecção, entre eles o comentado acordo com a indústria farmacêutica Merck. Alguns pontos positivos devem ser destacados a partir dessa experiência: geração de conhecimento sobre os recursos biológicos locais em função do inventário; criação de sistema de controle ao acesso e identificação dos materiais coletados; o aparato jurídico desenvolvido; aprimoramento da capacidade de negociação; disseminação de informação em publicações científicas; atividades voltadas à Educação Ambiental e apoio a pequenas e médias empresas nacionais no desenvolvimento de produtos baseados em recursos biológicos do país. Por outro lado, os dados analisados mostram que tem sido baixo o retorno financeiro do Instituto; os pagamentos não têm sido suficientes para cobrir os gastos. Esta questão está ligada ao fato de que, ainda que tenha começado o recebimento pela comercialização de alguns produtos desenvolvidos internamente, ainda não há produtos desenvolvidos resultantes de contratos com grandes companhias e, portanto, ainda não foram correspondidas as expectativas com relação ao recebimento de royalties. Há deficiência com relação ao controle administrativo dessas atividades por parte do Estado, o que reflete na falta de transparência das fontes disponíveis de informações. A análise dos recursos financeiros obtidos versus repasse de verbas para fins de conservação fica comprometida em razão de informações incompletas ou pela falta de padronização na apresentação dos dados no decorrer dos anos. O desmatamento tem apresentado queda contínua, mas não é possível relacionar este fato com os contratos de bioprospecção, devido ao sistema variado de fontes de contribuições e pagamentos por serviços destinados à conservação biológica naquele país. Ademais, os conhecimentos tradicionais das populações locais estão sendo ignoradas em todo esse processo conduzido pelo INBio. Portanto, até o momento, o que acontece na Costa Rica está mais próximo de representar uma evolução no sentido de empreender medidas em direção ao uso e conservação dos recursos biológicos, porém ainda não representa a solução ou ajuda significativa à conservação biológica naquele país. / Using the process known as bioprospecting, it is proposed the use of the profits obtained with the commercialization of products, such as pharmaceuticals, in biological conservation activities. The objective of this work is to verify the importance of this instrument for conservation, by means of a case study focused in the experience of the National Biodiversity Institute (Instituto Nacional de Biodiversidade) (INBio), in Costa Rica. The methodology is based in the strategies of researching: a) case study; b) documents and c) bibliography research. The National Biodiversity Institute (INBio), a non-profit association which has endeavored to elaborate a national biodiversity inventory and signed various bioprospecting contracts, among them the renowned agreement with Merck pharmaceutical company. Some positive points should be emphasized from this experience: generation of knowledge about local biological resources through inventory; creation of a control system for accessing and identifying the collected materials; the development of a legal apparatus; the improvement of negotiation skills; the dissemination of information through scientific publications, activities oriented to Environmental Education and supporting national small and medium firms in the development of products based on the country\'s biological resources. On the other hand, the data analyzed show low financial return, in spite of the fact that the income for the commercialization of some internally-developed products has begun. Payments have not been enough to cover the Institute\'s expenditures and there are still no developed products resulting from contracts with big companies and, therefore, the expectations relative to the receiving of royalties were still not fulfilled. There is a deficiency relative to the administrative control of these activities by the State, which reflects the lack of transparency of the available sources of information. The analysis of the obtained resources versus the transfer of funds for conservation is jeopardized due to incomplete information or lack of standardization in the presentation of data through the years. Deforestation has declined continuously, but it is impossible to relate this fact to the bioprospecting contracts, due to the diverse system of contribution and payment sources for services destined to the conservation of that country\'s natural resources. Besides, the traditional knowledge of the local population has been ignored in the entire process conducted by INBio. Therefore, for the moment, what happens in Costa Rica is closer to represent an evolution in the sense of taking steps in the direction of using and conserving biological resources, but it still does not represent the solution or significant aid to the biological conservation in Costa Rica.