Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Talita Dayane Pereira e Silva.pdf: 3126915 bytes, checksum: 570135c97ada384da1836d9ed08ac153 (MD5) Previous issue date: 2011-05-31 / The neotropical felids are represented by ten species, having been Brazil eight host of these. These animals are constant victims of running over in highways and still they suffer with intense infestation for parasites, what it can result in intense anemia, being necessary the accomplishment of blood transfusion. In the present study blood samples were used of eight jaguarundies (Puma yagouaroundi), eight ocelots (Leopardus pardalis), seven pampas cats (Leopardus colocolo), seven domestic cats (Felis catus) of the Persian race and eight domestic cats (Felis catus) without definite race (SRD), whose aim was: a) to carry through blood typing and tests of compatibility between corresponding blood types in the different species; b) to carry through count blood cells (CBC), comparing the technique automatized by means of device BC - 2800 vet (software for domestic cats), with the manual technique for the wild species; and c) to carry through the profile biochemist and electrophoretic of serum proteins. In the typing, the occurrence of the blood type A was of 100% between ocelots, pampas cats and domestic cats Persian and of 85,72% between domestic cats SRD. 100% of the jaguarundies were type B and 14,28% of domestic cats SRD. To the tests of blood compatibility, 87,5% (n=4) of the ocelots were incompatible with domestic cats and 12,5% (n=1) were compatible; 100% (n= 6) of the pampas cats were compatible with domestic cats and 100% (n= 4) of the jaguarundies were incompatible with domestic cat of type B. It is concluded that in accordance with tests of blood compatibility the transfusion between domestic and pampas cats is possible, it is impossible the transfusion between domestic and jaguarundies and that more studies must be carried through for ocelots. In the comparison enters the techniques for the accomplishment of the CBC the automatized technique demonstrated statistical results equal for the majority of the parameters, also inside of the values of reference for the species, except in the counting of leukocytes of jaguarundies, whose resulted gotten for automation were bigger. It had good correlation between the techniques, mainly in the ocelot species. Concludes that device BC 2800 vet with the configuration for domestic cats is a technique fast and trustworthy in the accomplishment of blood cells count for species pampas cat and ocelot. The manual counting of leukocytes must be preferred for jaguarundies. The results gotten for many of the evaluated parameters biochemistries were similar to the described as values of reference for the studied species. However, the values found for ALT and AST were above of the values of reference for jaguarundies and ocelots. The value of glucose was above for the species pampas cat. The urea was above of the values of reference for the three species. The electrophoretic race for the analyzed species was similar to the described one for domestic cats contends albumen, alpha globulins (alpha 1 and 2), beta globulins (beta 1 and 2) and gamma globulins, however, in all the species had individuals that they had not presented beta globulin of the type beta 2. The gotten results can be used as normality parameters for the species pampas cat, ocelots and jaguarundies from Cerrado biome. / Os felídeos neotropicais são representados por dez espécies, sendo o Brasil hospedeiro de oito destas. Estes animais são constantes vítimas de atropelamentos em rodovias e sofrem com infestação intensa por parasitas, o que pode resultar em quadros de anemia intensa, necessitando transfusão sanguínea. No presente estudo foram utilizadas amostras sanguíneas de oito gatos mouriscos (Puma yagouaroundi), oito jaguatiricas (Leopardus pardalis), sete gatos palheiros (Leopardus colocolo), sete gatos domésticos (Felis catus) da raça Persa e de oito gatos domésticos (Felis catus) sem raça definida (SRD), cujo objetivo foi: a) realizar tipagens sanguíneas e testes de compatibilidade entre tipos sanguíneos correspondentes nas diferentes espécies; b) realizar hemogramas, comparando a técnica automatizada por meio do contador automático BC 2800 vet, com software para gatos domésticos, com a técnica manual para as espécies selvagens; e c) realizar o perfil bioquímico e eletroforético de proteínas séricas. Nas tipagens, a ocorrência do tipo sanguíneo tipo A foi de 100% entre as jaguatiricas, gatos palheiro e gatos domésticos Persa e de 85,72% entre os gatos domésticos SRD. 100% dos gatos mouriscos foi tipo B e 14,28% dos gatos domésticos SRD. Aos testes de compatibilidade sanguínea, 87,5% (n=4) das jaguatiricas foram incompatíveis com gatos domésticos e 12,5% (n=1) foram compatíveis; 100% (n= 6) dos gatos palheiros foi compatível com gatos domésticos e 100% (n= 4) dos gatos mouriscos foi incompatível com gato doméstico do tipo B. Conclui-se que, de acordo com testes de compatibilidade sanguínea, é possível não reação transfusional aguda entre gatos domésticos e palheiros, é impossível a transfusão entre gatos domésticos e mouriscos e que mais estudos devem ser realizados para jaguatiricas. Na comparação entre as técnicas para a realização do hemograma a técnica automatizada demonstrou resultados estatisticamente iguais para a maioria dos parâmetros, inclusive dentro dos valores de referência para as espécies, exceto na contagem de leucócitos de gatos mouriscos, cujos resultados obtidos por automação foram maiores. Houve boa correlação entre as técnicas, principalmente na espécie jaguatirica. Conclui-se que o aparelho BC 2800 vet com a configuração para gatos domésticos é uma maneira rápida e confiável na realização de hemogramas para as espécies gato palheiro e jaguatirica e que a contagem manual de leucócitos deve ser preferida para gatos mouriscos. Os resultados obtidos para muitos dos parâmetros bioquímicos avaliados foram semelhantes aos descritos como valores de referência para as espécies estudadas. No entanto, os valores encontrados para ALT e AST estavam acima dos valores de referência para gatos mouriscos e jaguatiricas e o valor de glicose estava acima para a espécie gato palheiro. A uréia estava acima dos valores de referência para as três espécies. A corrida eletroforética para as espécies analisadas foi semelhante à descrita para gatos domésticos contendo albumina, alfaglobulinas alfa 1 e alfa 2, betaglobulinas beta 1 e beta 2 e gamaglobulina, no entanto, em todas as espécies houveram indivíduos que não apresentaram betaglobulina do tipo beta 2. Os resultados obtidos podem ser utilizados como parâmetros de normalidade para as espécies gato palheiro, gato mourisco e jaguatirica do bioma Cerrado.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Debora Vieira Lopes.pdf: 3694828 bytes, checksum: 3e94381bb182e551bbc0c29ed0f62ba5 (MD5) Previous issue date: 2009-08-14 / The urinary acidifiers as ammonium chloride and citric acid have been used in the treatment of urinary tract diseases. These illnesses lead to important losses to the brazilian and worldwide swine production. In the present work the hematological and biochemical parameters of sows getting citric acid and ammonium chloride in the food were evaluated. In the present study 48 animals were distributed into 6 groups: group sc-positive control, group nc-negative control, group sac-sows with urinary infection getting citric acid in the food, group sca-sows with urinary infection getting ammonium chloride in the food, nac-sows without urinary infection getting citric acid in the food and group ncasows without urinary infection getting chloride ammonium in the food. Significant differences were observed between the group of animals with urinary infection and the group of animals without urinary infection regarding the medium values of serum creatinine, hemoglobin, hematocrit and MCHC. The medium values of creatinine, hemoglobin and hematrocit were higher in the group of animals with urinary infection. The value of MCHC was higher in the group of animals without urinary infection. Regarding the different treatments, it was observed that the citric acid was able to increase the values of serum albumin in animals without urinary infection, to reduce the value of MCV and the white blood cells counting as well as it increased the value of MCHC in the group of animals with urinary infection and only the value of MCHC in this group was not according to the reference values. The ammonium chloride reduced significantly the values of hemoglobin and hematocrit in animals with and without urinary infection, as well as it reduced the MCV of animals with urinary infection, where the values were according to the reference values. The conclusion is that the presence of urinary infection changed the values of serum creatinine and that the use of citric acid and ammonium chloride didn t change significantly the hematological and biochemical parameters of sows with and without urinary infection. / Os acidificantes urinários tais como o cloreto de amônio e ácido cítrico vêm sendo largamente utilizados no controle de doenças do trato urinário. Estas enfermidades levam a prejuízos relevantes para a suinocultura brasileira e mundial. No presente trabalho foram estudados os parâmetros hematológicos e bioquímicos de matrizes suínas sem infecção urinária e com infecção urinária recebendo ácido cítrico ou cloreto de amônio. Foram utilizados 48 animais distribuídos em seis grupos: grupo sc-controle positivo, grupo nc-controle negativo grupo sac-matrizes com infecção urinária recebendo ácido cítrico, grupo scamatrizes com infecção urinária recebendo cloreto de amônio, grupo nac-matrizes sem infecção urinária recebendo ácido cítrico e grupo nca-matrizes sem infecção urinária recebendo cloreto de amônio. Comparando-se os grupos de animais com infecção e sem infecção urinária, foram observadas diferenças estatísticas significativas quanto aos valores médios de creatinina sérica, hemoglobina, hematócrito e concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM). Os valores médios de creatinina, hemoglobina, hematócrito e CHCM foram superiores no grupo de animais com infecção urinária. Com relação aos ratamentos, verificou-se que o ácido cítrico fornecido na ração aumentou significativamente o valor da albumina sérica, reduziu significativamente o valor do volume corpuscular médio (VCM) e a contagem de leucócitos totais no grupo de animais sem infecção urinária, bem como aumentou significativamente o valor do CHCM no grupo de animais com infecção urinária, sendo que apenas o último estava fora dos valores de referência. O cloreto de amônio reduziu significativamente os valores de hemoglobina e hematócrito em animais com e sem infecção urinária, bem como reduziu o VCM de animais com infecção urinária, sendo que todos os valores permaneceram dentro dos valores de referência. Conclui-se que a presença de infecção urinária elevou os valores de creatinina sérica e que a utilização de ácido cítrico e cloreto de amônio não alterou significativamente os valores bioquímicos e hematológicos de matrizes suínas em produção com e sem infecção urinária.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-21T08:12:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Garcia Vila - 2015.pdf: 2794084 bytes, checksum: ded55da11b6147f4147cce56cf18ec53 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-21T08:16:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Garcia Vila - 2015.pdf: 2794084 bytes, checksum: ded55da11b6147f4147cce56cf18ec53 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-21T08:16:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Garcia Vila - 2015.pdf: 2794084 bytes, checksum: ded55da11b6147f4147cce56cf18ec53 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-09-18 / Restraint induced stress in wild birds can be life threatening. Research for alternatives that minimize those risks iswell justified, sedation beinga suitable option. In the present study midazolam sedation was tested in two species of wild birds. Twenty-one blue-and-yellow macaws were randomly assigned in two groups, one receiving saline solution (control group) and the other approximately 7.5 mg/kg of midazolam (midazolam group) via an intranasal spray, in two different moments with a washout period of two months. Fourteen greater rheas were submitted to a similar protocol; however, the midazolam dosage was 1 mg/kg via an intramuscular route. After 10 min following sedative/saline application, physical exam (heart rate, respiratory rate and temperature) and venous blood collectionwere performed. Blood samples were processed for hemogasometry (only with macaws), hematology and biochemistry analyses. In macaws, midazolam application produced sedation; lower values for physical exam parameters and significantly (p<0.05) lower lactate, base excess and chloride concentrations, while pCO2, ctCO2 and HCO3 values were higher when compared with control group. In rheas, the only significant difference was the respiratory rate, being higher in the midazolam group. In macaws midazolam attenuated metabolic acidosis derived from restraint, showing a positive effect on stress reduction, proving an effective and safe alternative. In response to midazolam rheas showed inconstant reaction depending among individuals, with no reliable effect on stress restraint reduction. / O estresse produzido pela contenção em aves silvestres pode resultar em graves complicações. A procura por alternativas que minimizem tais riscos está plenamente justificada, sendo uma delas, a sedação. No presente estudo a sedação com midazolam foi testada em duas espécies de aves silvestres. Vinte e uma araras canindé foram randomizadas e divididas em dois grupos, um recebeu solução salina (grupo controle) e o outro aproximadamente 7,5 mg/kg de midazolam (grupo midazolam) via spray intranasal, em dois períodos de tempo diferentes, separados por dois meses. Catorze emas foram submetidas a um protocolo semelhante, porém a dose do midazolam foi 1 mg/kg,via intramuscular. Após 10 min do momento da aplicação do sedativo/salina foi feita a avaliação física (frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura) e a colheitado sangue por punção venosa. Foi realizada hemogasometria (somente nas araras), hematologia e bioquímica das amostras sanguíneas. Nas araras, a aplicação do midazolam produziu sedação, valores mais baixos para os parâmetros de avaliação física e concentrações significativamente (p<0.05) mais baixas de lactato, excesso de base e cloro enquanto que os valores de pCO2, ctCO2 e HCO3 foram mais elevados em comparação ao grupo controle. Nas emas, a única diferença significativa observada foi na frequência respiratória, sendo maior no grupo midazolam. Nas araras, o midazolam atenuou a acidose metabólica derivada da contenção, apresentando efeito na redução do estresse, mostrando-se uma alternativa segura e efetiva. A resposta ao midazolam nas emas variou em função do indivíduo,sem efeito consistente na redução do estresse.

Em estudos anteriores, mostramos que uma nanoemulsão artificial (NEm) de composição semelhante à da lipoproteína de baixa densidade se liga a receptores de lipoproteínas de baixa densidade após sua injeção na corrente sanguínea. Como tais receptores estão superexpressos em células com altas taxas de proliferação, como ocorre no cancer e na aterosclerose, a NEm pode ser utilizada como veículo para direcionar drogas a estas células, diminuindo sua toxicidade e aumentando sua ação farmacológica. Recentemente, reportamos que a associação de um derivado do agente antiproliferativo paclitaxel, o oleato de paclitaxel (OPTX) à NEm reduziu em 60% a área lesionada de aortas de coelhos submetidos à dieta rica em colesterol. Neste estudo, testamos o efeito sinérgico da terapia combinada do OPTX-NEm com um derivado do metotrexato, o di-dodecil metotrexato (DMTX), também associado à NEm. O MTX, além de sua ação antiproliferativa, também possui propriedades imunossupressoras. Coelhos machos da raça Nova Zelândia foram submetidos à dieta enriquecida com 1% de colesterol durante 8 semanas. A partir da quinta semana de consumo da dieta, 8 animais foram injetados semanalmente com solução salina por via endovenosa (grupo controle) e 8 receberam o tratamento combinado de OPTX-NEm (4mg/Kg) com DMTX-NEm (4mg/Kg), por 4 semanas. Ao final das 8 semanas, os animais foram sacrificados. As aortas dos animais foram retiradas, abertas longitudinalmente, fixadas em formalina tamponada a 10% e coradas com Escarlate R para a análise macroscópica da lesão. Os arcos aórticos foram seccionados em fragmentos de 5mm, embebidos em parafina e os cortes realizados foram corados com hematoxilina-eosina, para a determinação da área das camadas íntima e média. O tratamento combinado de OPTX-NEm com DMTX-NEm reduziu a área das lesões em 82%, em comparação ao grupo controle, e a razão da área da lesão/área total diminuiu de 0,82±0,08 para 0,08±0,06 (p<0,01). Por meio das avaliações da variação do consumo de ração, peso corporal e contagem de leucócitos totais (p>0,05), pode-se afirmar que os tratamentos não apresentaram toxicidade significativa, exceto pela queda na contagem de eritrócitos (p<0,05). Como conclusão, a quimioterapia combinada de OPTX e DMTX associados à NEm como veículo mostrou-se eficaz na redução da área de lesão aterosclerótica em coelhos e a toxicidade relacionada aos fármacos foi nitidamente reduzida. / In previous studies we have shown that an artificial nanoemulsion (NEm) that resemble LDL composition are taken-up by LDL receptors after injection into the bloodstream. As those receptors are upregulated in cells with higher proliferation rates, as occurs in cancer and atherosclerosis, NEm can be used as vehicle to direct drugs against those cells, diminishing toxicity and increasing pharmacological action. Recently, we reported that association of antiproliferative agent paclitaxel derivative, paclitaxel oleate (OPTX) to NEm reduced by 60% the lesion area of cholesterol-fed rabbits. In this study, the combined chemotherapy of OPTX-NEm with a methotrexate derivative, di-dodecil methotrexate (DMTX), also associated with NEm, was tested for synergistic effects. MTX, besides antiproliferative action, has also immunosuppressant properties. Male New Zealand rabbits were fed a 1% cholesterol diet for 60 days. Starting from day 30, 8 animals were treated with 4 weekly I.V. saline solution injections (control group) and 8 with combined OPTX-NEm (4 mg/kg) plus DMTX-NEm (4 mg/kg) for additional 30 days. On day 60, the animals were sacrificed for analysis. Aorta was excised, open longitudinally, placed in 10% buffered formalin and stained in Scarlet R for lesion macroscopic analysis. Segments of 5mm of the aortic arch were embedded in paraffin and sections were taken and stained in hematoxylin-eosin for intima and media area measurement. In comparison with controls, treatment with combined OPTX-NEm plus DMTX-NEm reduced the lesion area by 82% and the lesion/total area ratio was decreased from 0,82±0,08 to 0,08±0,06 (p<0.01). Except for decrease in erythrocyte count (p<0.05), treatments were devoid of significant toxicity, as evaluated by food intake, body weight and leucocyte count (p>0.05). In conclusion, this novel approach consisting in combined chemotherapy of OPTX and DMTX using NEm as a drug-targeting vehicle showed effective lesion area regression in rabbits and marked toxicity reduction.

INTRODUÇÃO: O uso da laserterapia concernente ao estímulo da formação óssea e da revascularização tem tornado objeto de estudo na área de saúde. OBJETIVO: O presente trabalho in vivo teve como objetivo avaliar quantitativamente os efeitos do laser de baixa potência (LBP) na remodelação óssea após a expansão rápida da maxila (ERM) em ratos jovens, através da expressão do RNAm dos genes RANK, RANK-L, Osteoprotegerina (OPG), e o Fator do Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) bem como a análise histológica. MATERIAL E MÉTODO: Utilizou-se 105 ratos Wistar (Rattus norvegicus, albinus), machos, divididos em 4 grupos: Grupo Controle (n=10) animais não tratados (sem ERM e sem aplicação do LBP; Grupo Experimental I (n=40) animais que tiveram apenas a ERM; sendo 25 animais sacrificados nos dias 1, 2, 3, 7, e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting e 15 animais foram sacrificados nos dias 0, 7 e 10 dias para análise histológica; Grupo Experimental II (n=40) animais que tiveram ERM + LBP com diodo de Ga-Al-As (Gálio-Alumínio-Arsênio:160J/cm2) no primeiro dia do experimento; os animais foram sacrificados nos mesmos períodos que o Grupo Experimental I; Experimental III (n=15) animais que receberam 3 aplicações de LBP após ERM, totalizando 480J/cm2. Os animais foram sacrificados nos dias 3, 7 e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting. A extração do RNAt da maxila foi feita com trizol. A síntese da fita de DNA complementar (cDNA) foi feita a partir de 1&#181;g de RNA, por meio de uma reação de transcrição reversa, com a utilização da enzima transcriptase reversa, e a análise da expressão gênica foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase em tempo real (qRT-PCR) no sistema TaqMan®. A análise protéica do VEGF, RANK, RANK-L e OPG foi realizada por meio da técnica western blotting. O teste de variância (ANOVA) foi usado comparando os grupos entre si e inter-grupos seguida pelo teste complementar de Tukey, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: A separação dos incisivos induzida pela ERM foi semelhante nos grupos experimentais I e II, o espaço entre os incisivos foi mantido durante toda a fase experimental, e não houve diferença significativa entre os grupos laser e não-laser (p<0,05), demostramdo a eficiência da metodologia usada para abertura da sutura palatina mediana. Para o grau de abertura da sutura, foi quantificada, a área de abertura sutural em todos os grupos após a ERM, e observou-se aumentou significativo comparado com o grupo controle, sendo que no grupo de laser o grau de abertura final foi significativamente menor no grupo laser do que não-laser aos 7 e 14 dias, mostrando que a formação óssea no grupo laser foi mais acelerada, o que pode ser comprovado com os dados histológicos, demonstrando que o laser acelerou o processo de formação óssea. Em relação à expressão relativa dos genes RANK/RANK-L/OPG tanto o grupo com laser quanto o sem-laser mostraram um aumento significativo da expressão comparado ao grupo controle (p < 0,05), principalmente nos períodos iniciais e quando comparou-se o grupo irradiado com o não irradiado observou-se que no grupo com laser houve uma maior expressão desses genes do que no grupo sem laser. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a formação óssea após a ERM foi observada dentro da sutura palatina e o uso do LBP influenciou a formação óssea acelerando o processo de osteogênese durante a fase inicial do experimento. / BACKGROUND: The use of low-level laser terapy with bone stimulation has been studied in the health science field. OBJECTIVE: The aim of the present in vivo study was to quantitatively evaluate the effects of low-level laser therapy (LLLT) on bone healing after rapid maxillary expansion (RME) in young rats, and the RANK, RANK-L, OPG and VEGF gene expressions; and histological analyses. MATERIALS and METHODS: A total of 105 rats Wistar (Rattus norvegicus, albinus), male were assigned tofour groups: Control Group (n=10) with no treatment (no RME and no LLLT); Experimental I (n=40) with RME without LLLT: 25 animals were euthanized at days 1, 2, 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis and 15 animals were euthanized at days 0, 7 and 10 after RME for histological evaluation; Experimental II (n=40) with RME and LLLT (160J/cm2): animals were euthanized at the same periods described for Experimental I. Experimental III (n=15) with RME and 3 aplication of LLLT (480J/cm2): animals were euthanized at days 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis. Part of the sample was kept at -80&#176;C for genes expression and protein production, and another for histological analysis. The total RNA was extracted using trizol. Complementary DNA (cDNA) was synthesized using 1&#181;g of RNA in a reverse transcription reaction and for genes expression we used RT-PCR in the TaqMan® system. The RANK, RANK-L, OPG, and VEGF and proteins analysis was made using western blotting. The ANOVA and Tukey tests were used and significance level was set at 5%. RESULTS: The expansion-induced opening of the incisors was similar among the groups, the space between the incisors was kept during all the experimental phase and there was no difference between laser and no laser therapy groups (p<0,05) showing that this methodology was efficient to open the palatine suture. The the opened along the suture was quantified, the area in all RME groups significantly increased compared with control group. Following laser therapy, the palatal suture opening decreased at 7 and 14 days, showing that bone formation in laser group was accelerate, and it was proved with histological analysis, that showed that LLLT accelerated bone formation. Regarding RANK/RANK-L/OPG gene expression, both laser and no-laser therapy groups showed a significant increased in these genes expression, compared to the control group, mainly at the initial periods of healing. Laser therapy group showed a higher expression of these genes than no laser group. CONCLUSIONS: The results suggest that bone formation after RME was observed within palatal suture and the application of the LLLT influenced bone formation accelerating the process of bone mineralization during the initial experimental phase.

A nifedipina atua como bloqueador de canais de cálcio inibindo o fluxo transmembrânico de ions Ca2+ no interior das células do músculo cardíaco e células do músculo liso vascular, o qual induz ao relaxamento do músculo liso e diminuição da resistência vascular periférica. É utilizado no Brasil no tratamento de hipertensão arterial sistêmica (HAS), faz parte da Relação Nacional de Medicamentos Essenciais do Ministério da Saúde e vem sendo distribuída pela Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo. Uma vez que a determinação plasmática do fármaco contribui para maior segurança de seu uso, o objetivo deste trabalho se prendeu em padronizar e validar um método analítico em cromatografia em fase gasosa com detecção por captura de elétrons, sensível, específico e reprodutível para a quantificação das concentrações plasmáticas com a finalidade de avaliar a relação entre a dose diária de 60mg e a concentração plasmática versus a resposta da pressão arterial sistêmica, observando a ocorrência de possíveis reações adversas, alterações bioquímicas e hematológicas, em pacientes portadores de HAS, submetidos à farmacoterapia. O método apresentou linearidade na faixa de 10 a 200 ng.mL-1 , com coeficiente de correlação (r) igual a 0,9977. Coeficientes de variação de precisão intra e interensaio menor que 10% e recuperação absoluta da nifedipina de 74,47 a 75,97%. Os limites de detecção e quantificação do método foram de 1,0 e 2,0 ng.mL-1, respectivamente e o fármaco demonstrou ser estável por 90 dias quando armazenado a -70°C ao abrigo da luz. Os dados observados no presente estudo permitiram evidenciar que os pacientes apresentaram concentrações plasmáticas no intervalo terapêutico preconizado, as quais foram efetivas na redução da pressão arterial sistólica e diastólica. Estas concentrações não acarretaram efeitos adversos em nível do sistema hematológico e bioquímico estatisticamente significativos e em relação às reações adversas relacionadas ao medicamento, tais como: cefaléia, edema periférico vascular, tontura, hipotensão arterial, rubor, tosse e cãibras, apesar de relatadas de forma significativa pelos pacientes no inicio do tratamento, foram ao longo do mesmo minimizadas e pouco relatadas. / Nifedipine, a compound of dihydropyridine class, is a calcium-channel antagonists drug that inhibits the transmembrane influx of Ca+2 into cardiac muscle cells and vasculas smooth muscle cells throught specific ion channels. It induces smooth muscle relaxation and decreases peripheral vascular resistance. It is widely used for the treatment of high blood pressure, and is considered as a essencial medicine by the Brazilian government. In Sao Paulo state, this drug has been distributed to hypertensive patients in treatment. Since the drug quantification in plasma contributes for a drug safety use, the objective of the present study was to develop and validate a accurate, specific and reproducible method for the determination of nifedipine in plasma by gas chromatography with eletron capture detection. The validated method was applied in samples of hipertensive patients on 60 mg daily dose of nifedipine with the purpose to evaluate the relation between drug plasma concentration and it\'s daily dose versus the hemodymamic effects, possible side effects and biochemical and hematologic alterations. The method was linear over a concentration range of 10 -200 ng.mL-1 (r2>0,99). The coefficient of variation of intra- and inter-assay precision less than 10% and the recovery was higher than 74%. The limit of detection and quantification were 1,0 and 2,0 ng.mL-1, respectively. Nifedipine was found to be stable in samples stored at -70ºC for 90 days and protect from light. The result showed that patients with drug plasma concentration within therapeutics levels also showed systolic and diastolic blood pressure succesfully controled. Therefore, these patients do not manifested any adverse effects specially in biochemical and hematologic systems. Other adverse efects of nifedipine such as headache, peripheral edema, hypotension, redness, cramp and cough reported by the patients at the beggining of thetreatment, were gradually diminishing and rarely related.

Com o intuito de avaliar os polimorfismos de mtDNA e a diversidade genética na população brasileira, foram estudados 84 indivíduos não aparentados: 49 caucasóides e 35 negróides da região sudeste do Brasil. As amostras de sangue obtidas por punção da polpa digital foram colocadas em papel de filtro e o mtDNA extraído pelo método orgânico. Foram amplificadas as regiões hipervariáveis HV1 a partir do nucleotídeo 16.051 até 16.365 e HV2 entre os nucleotídeos 71 e 340. O fragmento foi purificado e após a reação de seqüenciamento, as fitas sense e anti-sense foram alinhadas com a seqüência de Anderson e sobrepostas para confirmação. Foram encontradas 108 posições contendo transições, 15 transversões, 11 deleções e 4 inserções. Nove regiões apresentaram duas variantes de seqüência polimórfica. A maioria das seqüências foi observada uma única vez e em 84 indivíduos foram observados 80 haplótipos distintos. O índice de diversidade genética e a probabilidade de semelhança entre duas seqüências escolhidas ao acaso foram respectivamente de 0,9714 e 0,0286 para os negróides e de 0,9788 e 0,0212 para os caucasóides. Ao realizar análise pareada dos haplótipos, a média de nucleotídeos diferentes entre as seqüências foi de 14,36 &#177; 5,68 bases em um total de 3.486 pares comparados, indicando uma alta diversidade entre haplótipos nesta população. Os resultados demonstraram que o mtDNA é informativo para identificação humana e o conhecimento da freqüência dos haplótipos na população de interesse tem utilidade significativa na aplicação Forense, principalmente para se avaliar estatisticamente os resultados, fornecendo maior precisão, exatidão e dados contundentes nas investigações. / In order to evaluate the mtDNA polymorphism and demonstrate the sequence diversity in Brazilians, we established a database of 84 unrelated individuals, 49 Caucasians and 35 negroids from the southeast of Brazil. The samples were collected on a whatman paper by finger punction, the mtDNA was extracted by organic method and hipervariable regions, HV1 from 16.051 to 16.365 bp and HV2 from 71 to 340 bp were amplified. Both sense and anti-sense strands were sequenced. When compared to Anderson sequence, 108 transitions, 15 transversions, 11 deletions and 4 insertions were found. Nine positions exhibited two variants of polymorphic sequence. The majority of the sequences were observed once, and in 84 sequences, 80 haplotypes were observed. The sequence diversity and the probability for two individuals randomly matching over two hypervariable regions were 0.9714 and 0.0286 for persons of color and 0.9788 and 0.0212 for Caucasians. In pair wise comparison, the mean sequence difference of 14,36 &#177; 5,68 nucleotides over 3,486 pairs compared, indicates a high diversity in this population. The data demonstrates that mtDNA sequencing can be informative in forensic cases, but it is of crucial importance to know the frequency of the mtDNA haplotypes to statistically evaluate the results.

A aterosclerose é um processo complexo, multifatorial que ainda não está totalmente esclarecido. Foi proposto que a resposta imune mediada por processos infecciosos e/ou inflamatórios influencia na patogênese de lesões ateroscleróticas. Os receptores TolI-likes (TLRs) estão envolvidos na resposta inata e em outros eventos fisiológicos através da interação com seus ligantes endógenos e exógenos e talvez envolvidos no processo aterogênico. Tem por objetivo analisar a expressão dos receptores Toll-like 2 e 4 (TLR2 e TLR4) associando o processo de sinalização com a presença de agentes infecciosos tais como a Chlamydia pneumoniae (CP) e Mycoplasma pneumoniae (MP), em pacientes com infarto do miocárdio (MI) e em aneurismas aórticos. Foram obtidos fragmentos de aortas ascendentes de pacientes submetidos à cirurgia de revascularização do miocárdio (G1, n=13) e de fragmentos de pacientes submetidos à cirurgia de correção de aneurisma aórtico (G2, n=14). Amostras congeladas e parafinadas foram analisadas por Imunohistoquímica (lHO) e Hibridização in situ (HIS) para detecção e localização da presença dos patógenos e TLRs. Realizou-se uma semiquantificação em microscópio (O, ausente; 1, discreto e focal; 2, moderado e focal e 3, intenso e difuso). Observou-se o grau de inflamação e de acúmulo de gordura. Outrossim, realizou-se PCR em tempo real (SYBR Green) para pesquisa de DNA de CP e MP, como também análise da expressão de mRNA de TLR2 e de TLR4. Na lHQ, constatou-se presença de MP, CP, TLR2 e TLR4 (G1 e G2), maior quantidade de MP (p=0,012) e de TLR4 (p=0,017) no G2. Houve correlação de CP com MP (r=0,810 e p=0,003) e de TLR2 com TLR4 (r=0,569 e p=0,034). Na HIS, constatou-se presença de MP, CP, TLR2 e TLR4 (G1 e G2), não houve diferenças significativas comparando-se os grupos (G1 x G2), porém houve correlação, no G1, de CP com TLR4 (r=0,730 e p=0,040) e de infiltrado inflamatório com células adiposas (r=0,700 e p=0,036). No G2, houve várias correlações: MP com CP (r=0,620 e p=0,016), MP com TLR4 (r=0,662 e p=0,010), CP com TLR2 (r=O,733 e p=0,003), CP com TLR4 (r=0,589 e p=0,027) e de TLR2 com TLR4 (r=0,714 e p=0,004). A PCR em tempo real mostrou presença de CP, pela segunda extração de DNA realizada (G2). Não houve diferença de expressão dos TLRs entre os grupos. A expressão de TLR2 foi maior do que de TLR4 no G1 (p=0,006). O grau de inflamação e o acúmulo de gordura foram maiores no G2 do que no G1(p=0,001). Estes dados sugerem uma relação da co-infecção CP e MP, na gravidade do processo inflamatório presente em placas ateroscleróticas e em pacientes com infarto do miocádio, como também, participação dos receptores Toll-like 2 e 4. / The atherosclerosis is a complex and multifactorial process that is not still completely elucidated. It has been proposed that immune-mediate response to inflammatory and/or infectious processes is implicated in the pathogenesis of the atherosclerotic lesions. Toll-like receptors (TLRs) are involved in the innate response and other physiological events through binding to endogenous and exogenous ligands and it may be involved in the atherogenic process To investigate the Toll-like receptor 2 (TLR2) and Toll-like receptor 4 (TLR4) expression in atheroma plaques and its association with the presence of infectious agents such as Chlamydia pneumoniae (CP) and Mycoplasma pneumoniae (MP) in patients with myocardial infarction (MI) and aortic aneurysms. Fragments of ascending aorta were obtained from MI patients submitted to surgeries of revascularization of the myocardium (G1, n=13) and correction of aortic aneurism (G2, n=14). Frozen and paraffined samples slices were analyzed by Immunohistochemistry (lHQ) and in situ Hybridization for detection and localization of TLR2 and TLR4 expression and CP and MP antigens. There was semiquantification in microscope (0, absent; 1, discreet and focal; 2, moderate and focal; and 3, intense and diffuse). Histopathology was also carried out to investigate the inflammation degree and fat accumulation in these tissues. Real time PCR using SYBR Green System detection was used to stydy DNA CP and MP, also to analyze expression of mRNA TLR2 and TLR4. Using lHQ, it was verified presence of MP, CP, TLR2 and TLR4 (G1 and G2), larger amount of MP (p=0.012) and TLR4 (p=0.017) in G2. In G1 group, MP was positively correlated with CP (r=0.810, p=0.003), in G2, TLR2 with TLR4 (r=0.569, p=0.034). Using HIS, it was verified presence of MP, CP, TLR2 and TLR4 (G1 and G2), there were not significant differences between groups (G1 x G2), however, It was shown correlation between in G1, CP with TLR4 (r=0.730, p=0.040) and also inflammation with fat accumulation (r=0.700, p=0.036). In G2, there were several correlations: presence of MP with CP (r=0.620, p=0.016), MP with TLR4 (r=0.662, p=0.010), CP with TLR2 (r=0.733 p=0,003), CP with TLR4 (r=0.589, p=0.027) and TLR2 with TLR4 (r=0.714, p=0.004). Real time PCR showed presence of CP DNA using second purification accomplished (G2). There was not difference of expression TLRs among the groups. The expression of TLR2 was higher than TLR4 in G1 (p=0.006). Increased degree of inflammation and fat accumulation was also find in G2 than in G1 (p=0.001). These results are suggesting that the gravity of the inflammatory process in atherosclerotic plaques strongly are related to the presence of MP and CP co infection and expression of TLR2 and TLR4, as well in MI patients under myocardial revascularization.

No presente estudo, foi investigado o efeito do polimorfismo do gene da apolipoproteína E (APOE) sobre a expressão de RNAm e a resposta a terapia de reposição hormonal combinada ou não com atorvastatina, em 87 mulheres brancas sem vínculo genético em pós-menopausa com hipercolesterolemia. O polimorfismo Hhal (exon 4) do gene APOE foi analisado por PCR-RFLP e a quantificação do RNAm do gene APOE foi medida em células mononucleares do sangue periférico por RT-PCR duplex. As pacientes foram divididas em cinco grupos e tratadas pelo período de três meses com atorvastatina (10 mg/d); estradiol (2 mg/d); atorvastatina e estradiol; e estradiol e acetato de noretisterona (1 mg/d); e atorvastatina, estradiol e acetato de noretisterona. O polimorfismo do gene APOE não foi associado com variações no perfil lipídico sérico e na expressão de RNAm basais. Todos tratamentos reduziram significativamente as concentrações séricas de colesterol total e LDL-colesterol, independentemente do polimorfismo do gene APOE. A expressão do RNAm do gene APOE foi reduzida após os tratamentos com atorvastatina e com atorvastatina e estradiol. Esse efeito foi significativo nas mulheres portadoras de genótipo E3/E3 (p=0,025). Foi observada correlação positiva entre as variações de expressão do RNAm do gene APOE e de concentrações de colesterol total e LDL-colesterol após o tratamento com estradiol. Em conclusão, a expressão de RNAm do gene APOE em células mononucleares do sangue periférico foi reduzida pelo tratamento com atorvastatina e/ou estradiol. Esse efeito foi associado ao polimorfismo do gene APOE e à diminuição do colesterol sérico durante a terapia de reposição hormonal. / In the present study, the effect of the polymorphism at the apolipoprotein E gene (APOE) on mRNA expression and response to hormone replacement therapy (HTR) and atorvastatin was investigated in 87 unrelated postmenopausal women with hypercholesterolemia. The APOE Hhal (exon 4) polymorphism was analyzed by PCR-RFLP and mRNA expression was evaluated in mononuclear leukocytes by duplex RT-PCR. The patients were divided into five groups and treated during three months with atorvastatin (10 mg/day); estradiol (2 mg/day); atorvastatin and estradiol; estradiol and norethisterone acetate (1 mg/day); e atorvastatin, estradiol and norethisterone acetate. The APOE polymorphism was not associated with variations on basal lipids and mRNA expression levels. The treatments reduced significantly serum total and LDL cholesterol levels, without relation to the APOE polymorphism. The APOE mRNA expression was reduced after treatment with atorvastatin and atorvastatin combined with estradiol. This effect was significant in women carrying E3/E3 genotype (p=0,025). There was a positive correlation between the APOE mRNA expression and serum total and LDL cholesterol levels after treatment with estradiol. In conclusion, APOE mRNA expression on mononuclear leukocytes was reduced by atorvastatin and/or estradiol treatments. This effect was associated with the APOE polymorphism and with the reduction of the serum cholesterol during the HRT.

Com o intuito de avaliar os polimorfismos de mtDNA e a diversidade genética na população brasileira, foram estudados 84 indivíduos não aparentados: 49 caucasóides e 35 negróides da região sudeste do Brasil. As amostras de sangue obtidas por punção da polpa digital foram colocadas em papel de filtro e o mtDNA extraído pelo método orgânico. Foram amplificadas as regiões hipervariáveis HV1 a partir do nucleotídeo 16.051 até 16.365 e HV2 entre os nucleotídeos 71 e 340. O fragmento foi purificado e após a reação de seqüenciamento, as fitas sense e anti-sense foram alinhadas com a seqüência de Anderson e sobrepostas para confirmação. Foram encontradas 108 posições contendo transições, 15 transversões, 11 deleções e 4 inserções. Nove regiões apresentaram duas variantes de seqüência polimórfica. A maioria das seqüências foi observada uma única vez e em 84 indivíduos foram observados 80 haplótipos distintos. O índice de diversidade genética e a probabilidade de semelhança entre duas seqüências escolhidas ao acaso foram respectivamente de 0,9714 e 0,0286 para os negróides e de 0,9788 e 0,0212 para os caucasóides. Ao realizar análise pareada dos haplótipos, a média de nucleotídeos diferentes entre as seqüências foi de 14,36 &#177; 5,68 bases em um total de 3.486 pares comparados, indicando uma alta diversidade entre haplótipos nesta população. Os resultados demonstraram que o mtDNA é informativo para identificação humana e o conhecimento da freqüência dos haplótipos na população de interesse tem utilidade significativa na aplicação Forense, principalmente para se avaliar estatisticamente os resultados, fornecendo maior precisão, exatidão e dados contundentes nas investigações. / In order to evaluate the mtDNA polymorphism and demonstrate the sequence diversity in Brazilians, we established a database of 84 unrelated individuals, 49 Caucasians and 35 negroids from the southeast of Brazil. The samples were collected on a whatman paper by finger punction, the mtDNA was extracted by organic method and hipervariable regions, HV1 from 16.051 to 16.365 bp and HV2 from 71 to 340 bp were amplified. Both sense and anti-sense strands were sequenced. When compared to Anderson sequence, 108 transitions, 15 transversions, 11 deletions and 4 insertions were found. Nine positions exhibited two variants of polymorphic sequence. The majority of the sequences were observed once, and in 84 sequences, 80 haplotypes were observed. The sequence diversity and the probability for two individuals randomly matching over two hypervariable regions were 0.9714 and 0.0286 for persons of color and 0.9788 and 0.0212 for Caucasians. In pair wise comparison, the mean sequence difference of 14,36 &#177; 5,68 nucleotides over 3,486 pairs compared, indicates a high diversity in this population. The data demonstrates that mtDNA sequencing can be informative in forensic cases, but it is of crucial importance to know the frequency of the mtDNA haplotypes to statistically evaluate the results.